SK284881B6 - Syntetické polysacharidy, spôsob ich prípravy a farmaceutické kompozície s ich obsahom - Google Patents

Abstract

Je opísaný syntetický polysacharid, zahŕňajúci väzbovú oblasť antitrombínu III, založený na zreťazení piatich monosacharidov s najmenej dvoma karboxylovými skupinami a najmenej štyrmi sulfoskupinami tak, že táto oblasť je priamo viazaná na neredukujúci koniec trombínovej oblasti, zahŕňajúci zreťazenie 10 až 25 monosacharidov zvolených z hexóz, pentóz alebo dezoxycukrov, v ktorých sú všetky hydroxylové skupiny éterifikované alkylovými skupinami s jedným až šiestimi atómami uhlíka alebo esterifikované formou sulfoskupín, ďalej sú opísané ich farmaceuticky použiteľné soli.

Description

Oblasť techniky

Vynález sa dotýka nových syntetických polysacharidov s antikoagulačnými a antitrombotickými farmakologickými vlastnosťami heparínu. Heparin patrí do skupiny glykozaminoglykánov (GAG) a sú to heterogénne prírodné polysacharidy s naviazaným zvyškom kyseliny sírovej.

Doterajší stav techniky

Heparínové prípravky sú zmesi reťazcov, obsahujúce počet jednotiek monosacharidv od 10 až do 100 aj viacej. A táto heterogenita v celej zostave sa vzťahuje k heterogenite na úrovni povahy monosacharidov, ktoré ju tvoria, ale práve tak je vo vzťahu k substituentom, ktoré obsahuje, pozri Rodén L. v „The Biochemistry of Glycoproteins and Glycosaminoglycans“, vyd. Lennarz W. J., Plénum Press, New York a London, 267-37 L (1980).

Každá skupina prírodných glykozaminoglykánov je spojená zvyčajne s celým vejárom farmakologických vlastností. Všetky sú spojené v prípravkoch, ktoré je možné získať z prírodných látok. Tak napríklad heparíny a heparány ako estery kyseliny sírovej sa vyznačujú antitrombotickou účinnosťou, ktorá je spojená so spoločným pôsobením viacerých faktorov na koaguláciu.

Heparin katalyzuje, najmä pôsobením antitrombínu III (AT III) inhibíciu dvoch enzýmov, ktoré zasahujú do tejto koagulačnej kaskády krvi, t. j. faktor Xa a faktor Ha (teda trombín). Heparínové prípravky s nízkou molekulovou hmotnosťou (HBPM héparines de bas poids moléculaire) obsahujú reťazce, tvorené štyrmi až tridsiatimi monosacharidmi a ich vlastnosťou je to, že reagujú selektívnejšie s faktorom Xa ako s trombínom. Niektoré syntetické oligosacharidy, najmä tie, ktoré boli opísané v EP 84 999, sa vyznačujú vlastnosťou, že inhibujú selektívne cestou antitrombínu III faktor Xa bez akejkoľvek účinnosti na trombín.

Je známe, že inhibícia faktora Xa vyžaduje fixáciu heparínu na antitrombín III v oblasti väzby antitrombínu (DLA, domaine de liaison a ľantithrombine), a že inhibícia faktora 11a (trombín) vyžaduje fixáciu na antitrombín III cestou DLa (pozri skôr), rovnako aj na trombín použitím väzbovej oblasti, ktorá je menej dobre definovaná (DLT, liaison moins bien défini).

Syntetické oligosacharidy, zodpovedajúce oblasti DLA heparínu, sú známe a vyznačujú sa antitrombotickou účinnosťou pri venóznej trombóze. Tieto látky sú opísané v EP 529 715, 621 282 a v kanadskom patentovom spise 2 040 905.

Účinnosť týchto oligosacharidov na prevenciu arteriálnej trombózy je obmedzená ich neschopnosťou inhibovať trombín.

Syntéza glykozaminoglykánov typu heparínu schopných inhibovať trombín cestou aktivátora antitrombínu III je spojená s veľkými problémami a v skutočnosti nikdy nebola vykonaná.

S cieľom dosiahnuť aktivitu produktov ako inhibítorov trombinu a faktora Xa bolo navrhnuté spojiť navzájom dva oligosacharidy s malým reťazcom (jeden DLA a jeden DLT) vhodnou jednotkou (dištančná jednotka, „spaccr“), nezasahujúcou vôbec do biologických aktivít.

Podstata vynálezu

Teraz bolo zistené, že je možné syntetizovať nové deriváty polysacharidov pomerne jednoduchým postupom s tým, že sú biologicky aktívne a najmä potom sú antikoagulačnými a antitrombotickými činidlami. Navyše so zreteľom na vykonávanie syntézy takých polysacharidov je možné modifikovať selektívne ich štruktúru najmä potom eliminovať substitúcie zvyškom kyseliny sírovej, zasahujúcej nežiaducim spôsobom do interakcií s niektorými proteínmi. Práve tak je možné pripraviť polysacharidy, ktoré sú účinnými antitrombotickými a antikoagulačnými činidlami, a ktoré navyše môžu uniknúť účinkom takých proteínov ako je doštičkový faktor 4 (FP4, facteur plaquetaire 4), ktoré rušia účinok heparínu, najmä na trombín.

Preto bolo s prekvapením zistené, že polysacharidy so zvyškami kyseliny sírovej a alkylované môžu byť silnými antitrombotickými a antikoagulačnými činidlami podľa rozloženia alkylových skupín a zvyškov kyseliny sírovej, ako sú na glukózovom základnom reťazci.

Všeobecne povedané bolo zistené, že usporiadaním polysacharidických sekvencii je možné modulovať veľmi presne aktivity typu glykozaminoglykánov, aby sa tak získali produkty, a to veľmi aktívne, majúce vlastnosti heparínu. Preto podľa jedného z predmetov tohto vynálezu sa to dotýka nového syntetického polysacharidu, obsahujúceho väzbovú oblasť na antitrombín III, ktorú predstavuje reťazenie piatich monosacharidov, na ktorých sú spolu dve funkcie karboxylových kyselín a najmenej 4 skupiny kyseliny sírovej s tým, že táto oblasť je priamo viazaná neredukčnou koncovkou na oblasť väzby na trombín, obsahujúci reťazenie 10 až 25 monosacharidických jednotiek, zvolených medzi hexózami, pentózami a dezoxycukrami, ktorých všetky hydroxylové skupiny sú nezávisle éterifikované alkylovou skupinou s jedným až šiestimi atómami uhlíka alebo esterifikované vo forme esteru kyseliny sírovej. To sa dotýka aj ich soli, najmä tých, ktoré sú farmaceutický prijateľné.

Výhodne sa vynález dotýka polysacharidu, ako bol definovaný, charakterizovaný tým, že všetky jeho hydroxylové skupiny sú metylované alebo esterifikované kyselinou sírovou a ich solí, najmä farmaceutický prijateľných.

Produkty podľa tohto vynálezu sú najmä polysacharidy, ktorých štruktúra je vyjadrená nasledujúcim všeobecným vzorcom (I)

Pe kde vlnovkou je vyznačená väzba, situovaná nad alebo pod pyranózovým cyklom, s tým, že vzorec vyjadruje polysacharid Po, obsahujúci n-počet monosacharidických jednotiek rovnakých alebo rôznych, viazaných anomémym atómom na Pe

a je to schematicky vyjadrenie monosacharidickej jednotky pyranózovej štruktúry, zvolenej medzi hexózami, pentózami a dezoxycukrami s tým, že táto jednotka je viazaná svojim anomémym atómom na inú monosacharidickú jednotku s tým, že hydroxylové skupiny tejto jednotky sú substituované skupinami X, rovnakými alebo rôznymi a zvolenými medzi skupinami alkylovými s jedným až šiestimi uhlíkmi a skupinami sulfónovými, n znamená celé číslo od 10 do 25, Pe znamená pentasacharid štruktúry

v ktorej

R] znamená alkylovú skupinu sjedným až šiestimi atómami uhlíka alebo sulfoskupinu,

Ria znamená R] alebo predstavuje s kyslíkovým atómom, na ktorom je viazaná a nosným atómom uhlíka karboxylovú funkciu na rovnakom cykle, teda skupinu

C-CHj-O,

R znamená alkylovú skupinu sjedným až šiestimi atómami uhlíka,

W znamená kyslík alebo metylénovú skupinu, rovnako sa to dotýka zodpovedajúcich solí, najmä farmaceutický prijateľných.

Je nutné poznamenať, že všeobecne v tomto opise vlnovka znamená väzbu, situovanú nad alebo pod rovinu pyranózového cyklu.

Monosacharidy, obsiahnuté v Po môžu byť totožné alebo sa môžu líšiť jeden od druhého, medziglykozidické väzby môžu byť typu a alebo β.

Monosacharidy sú výhodne zvolené z hexóz radu D alebo L, teda alózy, altrózy, glukózy, manózy, gulózy, idózy, galaktózy a talózy (v prípade, že h = 2), z pentóz radu D alebo L, teda ribózy, arabinózy, xylózy a lyxózy (v prípade, že h = 2) a môžu sa použiť aj iné monosacharidy, ako sú napríklad dezoxycukry (h = 1 a/alebo -CH₂OX = CH₃).

Keď v pentasacharidoch Pe znamená W kyslík a R,a má význam, ako bol uvedený pre R_b sú takéto pentasacharidy známymi látkami, opísanými najmä v patentových spisoch EP 300 099, EP 529 715, EP 621 282 a EP 649 854, ako aj v literatúre. Získavajú sa zo syntónov opísaných tiež v literatúre, pozri Van Boeckel C., Petitou M., Angew. Chem, Intem. Ed. (V. Brit), 32, 1671 - 1690 (1993).

Keď sa v pentasacharidoch Pe R^ líši od R| a/alebo W znamená atóm uhlíka, potom sa takéto pentasacharidy pripravujú použitím nových syntónov, ktoré predstavujú ďalší predmet tohto vynálezu.

Keď v pentasacharidoch Pe je jednotka typu kyseliny L-idurónovej nahradená jednotkou, ktorej konformácia je daná premostením, potom takéto pentasacharidy sa pripravujú použitím nových syntónov, prestavujúcich ďalší predmet tohto vynálezu.

Aj podľa ďalšieho z týchto predmetov sa tento vynález dotýka nových medziproduktov, použiteľných na prípravu zlúčenín vzorca (I).

Polysacharidická časť Po môže byť predstavovaná 10 až 25 jednotkami monosacharidov, alkylovanými alebo dialebo trisubstituovanými zvyškom kyseliny sírovej.

Polysacharidická časť Po môže byť predstavovaná 10 až 25 jednotkami monosacharidov, alkylovanými alebo mono- alebo trisubstituovanými zvyškom kyseliny sírovej.

Polysacharidická časť Po môže byť predstavovaná 10 až 25 jednotkami monosacharidov alkylovanými plne substituovanými a/alebo čiastočne substituovanými a/alebo nesubstituovanými.

Jednotky substituované alebo nesubstituované môžu byť rozptýlené po celej dĺžke reťazca, alebo môžu byť naopak zoskupené v sacharidických oblastiach substituovaných alebo nesubstituovaných.

Väzby môžu byť povahy 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6 a typu a alebo β.

V tomto opise bolo zvolené používať konformácie ’C₄ pre kyselinu L-idurónovú, ⁴C[ pre kyselinu D-glukurónovú, aleje bežne známe, že všeobecne je konformácia jednotiek monosacharidických v roztokoch premenná.

Preto kyselina L-idurónová môže mať konformáciu 'C₄,²S₀ alebo ⁴C,.

Výhodnými zlúčeninami podľa tohto vynálezu sú látky vzorca (I.A.)

kde

vyznačuje príslušnú zvláštnu skupinu polysacharidov Po, viazaných anomémym uhlíkovým atómom na Pe, ako to bolo definované pri vzorci (I).

(I) má významy, ako bolo uvedené pre vzorec (I), skupiny OX majú význam, ako to bolo uvedené pri vzorci (I) a pri rovnakom monosacharide môžu byť totožné alebo rôzne, monosacharidy, obsiahnuté v [ ]_m, tvoria disacharid opakovaný m-krát, monosacharidy obsiahnuté v [ ]_t, tvoria trisacharid, opakovaný t-krát, m môže byť 1 až 8, t môže byť 0 až 5 a p znamená nulu alebo 1 za predpokladu že 5 < m + t < 12 a ich soli, najmä farmaceutický prijateľné.

Výhodnými zlúčeninami sú soli, ktorých anión zodpovedá vzorcu (1.1).

kde t znamená 5, 6 alebo 7 a katiónom je jednoväzbový katión, farmaceutický prijateľný, rovnako aj zodpovedajúce kyseliny.

Práve tak výhodnými sú soli, ktorých anión zodpovedá vzorcu (1.2):

(1-2), kde t znamená 5, 6 alebo 7 a katiónom je jednoväzbový katión, farmaceutický prijateľný, rovnako aj zodpovedajúce kyseliny.

Najmä výhodné sú soli, ktorých anión má vzorec (1.3)

(1-3), kde m znamená 1, 2 alebo 3 a t znamená 2, 3, 4 alebo 5 a katiónom je jednoväzbový katión, farmaceutický prijateľný, rovnako aj zodpovedajúce soli.

Ďalšími výhodnými zlúčeninami podľa tohto vynálezu sú tie vzorce (II.A)

znamená špeciálne skupinu polysacharidov Po, viazaných anomémym uhlíkovým atómom na Pe, ako to bolo uvedené pri vzorci (I).

má významy, ako bolo uvedené pri vzorci (I), skupiny OX majú významy, ako to bolo uvedené pri vzorci (I) a v prípade rovnakého monosacharidu môžu byť totožné alebo rôzne, monosacharid, obsiahnutý v [ ]_m· sa opakuje m’-krát, monosacharid obsiahnutý v [ ], sa opakuje ť-krát a monosacharid obsiahnutý v [ ]_p· sa opakuje p'-krát, m' sa mení od 1 do 5, ť kolíše od nuly do 24 a p' kolíše od nuly do 24 za predpokladu, že 10 < m' + ť + p' < 25, rovnako aj ich soli, najmä farmaceutický prijateľné.

Medzi výhodné soli podľa tohto vynálezu patria tie, ktorých katiónom je katión alkalického kovu, najmä potom sodíka alebo draslíka.

Najmä výhodnými polysacharidmi sú tieto látky:

sodná soľ metyl-O-(3-O-metyl-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-3-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —»4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₄-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-O-(2,3-di-O-metyl-3-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l->4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-[O-(3-O-metyl-2.6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₅-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-suifo-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2,3-di-(9-metyl-[!-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-C-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-O-sufo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -~>4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)]„-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-«-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( 1 -»4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-<9-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( l->4)-2,3,6-tri-O-sulfo-ct-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-sulfo-a-D-glykopyranozyl)-(l ->4)-[O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-] ] _rO-(2,3-di-0-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( l->4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 ->4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-[0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₁₃-0-(2,3-di-0-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 ->4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu.

sodná soľ metyl-0-(2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranozy l)-( 1 ->4)-[0-(2,3-di-0-metyI-6-0-suIfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₁₅-0-(2,3-di-0-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-ct-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 ->4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6,-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyi)-( 1 ->4)-0-(3-0-meťyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l—>4)]₂-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l ^4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)J₂-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-cc-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3-di-(9-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(1 —>4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l->4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu,

Schéma 1

Štruktúra pentasacharidu Pe, ak W znamená kyslík alebo uhlík (písmená „DEFGH“ sú použité v texte na označenie príslušných monosacharidov) sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(3-0-metyl-2,6-di-(9-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₂-[C*-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -»4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₃-<9-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -»4)-O-(2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1 —>4)-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 ->4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6-tri-<9-sulfo-ot-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-<9-(3-t9-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(3-<9-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1 —^jJ^-O-^^-di-Cl-metyl-ó-O-sulfo-a-D-glukopyranozylXl-^-O-^S-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(1—»4)-<9-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-<9-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-(9-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-P-D-glukopyranozyl-(l->4)-[O-(2,3,6-tri-<9-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1—^J^-O-P^-di-O-metyl-ó-O-sulfo-a-D-glukopyranozylXl-^-O-^S-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(1—>4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l —>4)-(2,3 -di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 —>4)-2,3,6-tri-O-sulfo-ct-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-O-(3-O-metyl-2,4,6-tri-O-sulfo-cc-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1—>4)]₄-O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -^4)-(9-(2,3 -di-(9-metyl-|3-D-gl ukopyranurozyl j-(1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-sul fo-a-D-gl ukopyranozyl)-(1 ->4)-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-<9-(3-O-metyl-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-( 1 -^4)-(0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₅-O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranurozyl)-(1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 —>4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu.

Tento vynález zahŕňa aj spôsob prípravy zlúčenín vzorca (í), vyznačujúci sa tým, že sa v prvom stupni predĺži dokonale chránený prekurzor polysacharidu I, obsahujúci chránený prekurzor oblasti Pe (táto oblasť je zachytená na schéme 1), a to na svojom neredukujúcom konci chráneným prekurzorom so síranovými skupinami polysacharidu Po a potom sa v druhom stupni zavedú a/alebo demaskujú skupiny v negatívnom náboji.

Podľa prvej z možných ciest sa môže použiť prekurzor dokonale chránený v časti DFGH tetrasachadriu zodpovedajúceho pentasacharidu. Potom sa pridá polysacharid Po, obsahujúci na svojom redukujúcom konci chýbajúcu časť Pe, aby sa po spojení získal celok DLA, ktorý je takto zostavený.

Podľa druhej z možných ciest sa dá použiť dokonale chránený prekurzor diasacharidickej časti GH pentasacharidu. Potom sa pridá prekurzor polysacharidu Po DLT, obsahujúci na svojom redukujúcom konci chýbajúcu časť DEF z Pe, a tak sa získa po spojení celok DLA, ktorý je takto zostavený.

Syntéza týchto prekurzorov látky Pe sa vykoná, ako bolo už uvedené, použitím syntónov opísaných v literatúre alebo tvoriacich časť tohto vynálezu. Syntéza časti polysacharidového prekurzora látky Po sa vykoná použitím reakcii, ktoré sú odborníkom dobre známe, použitím spôsobov syntézy oligosacharidov, pozri Boons G. J., Tetrahedron 52, 1095 -1121, alebo niektorého oligosacharidu, ak sa oligosacharid, použitý na vytvorenie glykozidickej väzby spája s oligosacharidom ako akceptorom glykozidickej väzby na získanie iného oligosacharidu, ktorého zostava sa rovná niektorej zo zostáv týchto dvoch reaktívnych celkov.

Tento sekvenčný postup sa opakuje, kým sa získa potrebná látka vzorca (I). Povaha a profil náboja konečnej žiaducej zlúčeniny sú rozhodujúce pre povahu chemických zložiek, použitých v rôznych etapách syntézy, to všetko podľa pravidiel, ako sú odborníkom na tomto úseku známe.

Výhodný postup prípravy prekurzora látky Po podľa tohto vynálezu je zachytený na nasledujúcej schéme 2.

Schéma 2

Syntéza chráneného prekurzora pre DLT

OTn

HO-^I

OTn ‘

Z času na čas je uvažovaný substituent, ktorý ostáva zachovaný počas istého počtu reakčných stupňov, ako semipermanentný sa označuje substituent, ktorý je zachovávaný počas väčšieho počtu reakčných stupňov a ako permanentný je taký substituent, ktorý je zachovaný až do konca. Tieto permanentné substituenty sa odstránia počas posledného stupňa úplne. Niektoré z permanentných skupín môžu byť zachované v konečnej molekule.

V schéme 2 znamená (a) monosacharid, ktorý je pôvodcom glykozidickej väzby, kde Z znamená dočasnú chrániacu skupinu hydroxylovej skupiny a Y je aktivátorom anomémeho uhlíka. T„ vo významoch totožných alebo rôznych sú dočasné substituenty, semipermanentné alebo permanentné všetkých ďalších hydroxylových skupín.

Zlúčenina (B) s nesubstituovanou hydroxylovou skupinou predstavuje monosacharid ako akceptor glykozidickej väzby, kde Th, totožné alebo rôzne, sú substituenty dočasné, semipermanentné alebo permanentné hydroxylových skupín. T! znamená ochrannú skupinu, dočasnú, semipermanentnú alebo permanentnú anomémej polohy. Táto skupina sa eliminuje, ak sa aktivuje anomémy uhlíkový atóm.

Ako cieľ získania zlúčenín podľa tohto vynálezu reagujú spoločne pôvodca glykozidickej väzby (a) a akceptor glykozidickej väzby (b) pri vzniku disacharidov (c).

Takto získaný disacharid (c) sa prevedie špecifickým spôsobom na disacharid (d) s obnažením jeho glykozidickej väzby odstránením ochrannej skupiny T, a zavedením Y a/alebo prijatím akceptora glykozidickej väzby (e) eliminovaním Z.

Konečne pôvodca glykozidickej väzby (d) a akceptor glykozidickej väzby (e) reagujú spoločne pri vzniku tetrasacharidu (f), kde t znamená 1. Opakovaním tejto reťazovej reakcie sa pripraví oligo- alebo polysacharid (f), v ktorom t znamená číslo väčšie ako 1.

Tiež je možné použitím postupu zo schémy 2 získať veľké množstvo oligo- alebo polysacharidov dokonale chránených ako (g), v ktorom oligosacharidy [ ]_m a [ J, znamenajú prekurzory dokonale chránené v oblastiach, líšiacich sa nábojom zlúčenín podľa tohto vynálezu.

V nasledujúcom stupni celého postupu sa zlúčeniny ako (f) a (g) prevádzajú na darcov glykozidickej väzby a spájajú sa potom s neredukujúcou koncovkou prekurzora Pe, dokonale chráneného.

Ako už bolo poznamenané, môžu oligosacharidy neredukujúce koncovky polysacharidu ako darcovia glykozidickej väzby (g) predstavovať časť Pe, a to v prípade, keď sa (g) nadväzuje na neredukujúcu koncovku dokonale chráneného oligosacharidu, ktorý je prekurzorom zvyšku štruktúry Pe.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa získavajú z ich polysacharidických prekurzorov dokonale chránených použitím reťazenia podľa týchto reakcií: alkoholické funkcie sa prevedú na skupinu O-sulfo, a karboxylové kyseliny sa odkryjú odstránením T_n, použitých na ich ochranu počas vypracovávania celej zostavy, potom sa zavedú sulfo-skupiny.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa môžu pochopiteľne pripravovať použitím ďalších postupov, ktoré sú známe odborníkom v odbore syntézy oligosacharidov.

Tu opisovaný postup je výhodným postupom podľa tohto vynálezu. V každom prípade je možné zlúčeniny vzorca (I) pripravovať inými postupmi, dobre známymi z chémie cukrov, ako sú opísané napríklad v knihe „Monosaccharides“. Chémia týchto látok a ich úlohy v prírodných produktoch pozri Collins P. M., Ferrier R. J., J. Wiley and Sons, 1995, ďalej Boons G. J., Tetrahcdron 52. 1095 - 1121.

Prekurzor časti pentasacharidu Pe, ak W znamená kyslík a R,a znamená R,, sa pripravuje podľa postupov syntézy oligosacharidov a najmä potom podľa postupov, opisovaných v pat. spisoch EP 84 899 301 618, 454 200 a 529 715 a v pat. prihl. EP 930 4769 a 942 02470. Ak sa ukončí kompletná ochrana, jc možné použitím vhodných ochranných skupín získať voľnú hydroxylovú skupinu v polohe 4 koncovej neredukujúcej časti (D). Dokonale chránený prekurzor Pe sa potom spoji v tejto polohe použitím postupov, známych z chémie oligosacharidov.

Pentasacharid Pe, kde W znamená atóm uhlíka a Rja znamená R, vzorca:

kde R a R! majú významy, ako bolo uvedené pri vzorci (I), sa získa zo syntónu vzorca

COOTn o /

Tn kde T| aT„, totožné alebo rôzne, znamenajú dočasný substituent, alebo semipermanentný, alebo permanentný, Z znamená skupinu, chrániacu hydroxylovú funkciu, ktorá bola získaná syntézou použitím radikálovej reakcie medzi monosacharidom ako zdrojom voľných radikálov a monosacharidom s dvojitou väzbou, a C-disacharid, takto pripravený, bol prevedený na syntón (II. 1) použitím klasických postupov, ako ich opísali už zmieňovaní Van Boeckel C. A Petitou M.

Syntón vzorca (II.1), ktorý je vhodný najmä na syntézu zlúčenín vzorca (II), má vzorec

(II.l) alebo zlúčenina 90.

Tento syntón sa pripravuje podľa reakčnej schémy, opísanej v schéme 22.

Pentasacharid Pe, ktorý obsahuje substituent R|a, a ktorý predstavuje jednotku kyseliny L-idurónovej konfigurácie podľa ďalej uvedeného vzorca

kde R a Rj majú významy, ako boli uvedené pri vzorci (I) a W znamená kyslík, pripravujú sa zo syntónu vzorca

TnOQC

kde T, a T_n, totožné alebo rôzne, znamenajú substituent dočasný, semipermanentný alebo permanentný, Z znamená skupinu, chrániacu hydroxylovú funkciu, ktorá bola získaná synteticky podľa opísaných postupov, pozri Gurjar M. K. a kol., Tetrahdr. Letters 36, 11, 1933 - 1936, 1937 - 1940 a 1994(1995),35, 14, 2241 -2244(1994).

Syntón vzorca (III.1) je vhodný najmä na syntézu zlúčenín III vzorca

BnOOC

Tento syntón sa pripravuje podľa reakčnej schémy, zachytenej v uvedenej schéme 34.

Medziprodukty II. 1 a III. 1 sú látky nové a sú najmä vhodné na prípravu zlúčenín vzorca (I) podľa tohto vynálezu.

Pentasacharidy Pe je teda možné pripraviť z týchto dvoch disacharidických syntónov II. 1 alebo III. 1 podľa postupu, ktorý opísal Van Boeckel C. A. A. a Petitou M., Angew. Chem., ang. vydanie, citované už skoršie.

Semipermanentnými skupinami, použiteľnými tu vyššie, je možno rozumieť skupiny eliminovateľné na prvom mieste po glykozylačnej reakcii, keď glucidická zostava má už počet žiadaných motívov, bez toho, aby sa odstránili alebo menili ostatné prítomné skupiny, umožňujúce vstavanie funkčných skupín, predpokladaných v postaveniach, ktoré zaujmú.

Permanentnými skupinami sú skupiny schopné trvalé chrániť hydroxylové funkcie počas zavádzania funkčných skupín namiesto zoskupení semipermanentných.

Tieto skupiny sa volia z tých, ktoré sú kompatibilné s funkčnými skupinami, zavedenými po eliminácii skupín semipermanentných. Okrem iných faktorov ide o skupiny, ktoré sú inertnými pri reakčných podmienkach, potrebných na zavedenie týchto funkčných skupín, a ktoré sú eliminovateľné, bez toho, aby také funkčné skupiny dosiahli zmeny.

Podľa tohto vynálezu sú výhodnými permanentnými skupinami skupiny alkylové s jedným až šiestimi atómami uhlíka.

Ako príklad semipermanentných skupín a/alebo dočasných je možné citovať skupinu benzylovú, acetylovú, levulinylovú, p-metoxybenzylovú atď.

Substituenty v polohe 3 zložky uránovej kyseliny cieľovej zlúčeniny môžu byť už prítomné vo východiskových syntónoch, rovnako ako substituent Rj.

Ochrannými skupinami, používanými na prípravu zlúčenín vzorca (I), sú tie, ktoré sú inak bežne používané v chémii cukrov, pozri napríklad „Protective Groups in Organic synthese, TW Green, John Willey and Sond, New York 1981. Ochranné skupiny sú zvolené výhodne z tých, ako sú skupiny acetylové, halogénmetylové, benzoylové, levulinylové, benzylové, prípadne substituované benzylové, tritylové, tiež prípadne substituované, tetrahydropyranylové, alylové, pentenylové, Zerc-butyldimctylsilylové (tBDMS) alebo trimetylsilyletylové.

Aktivačnými skupinami sú tiež tie, ktoré sa klasicky používajú v chémii cukrov, pozri napríklad Boons G. J., Tetrahedron 52, 1095 - 1121 (1996). Tieto aktivujúce skupiny sa zvolia napríklad z imidátov, tioglykozidov, pentynylglykozidov, xantátov, fosfitov alebo halogénových derivátov.

Ďalej opisovaný spôsob umožňuje prípravu solí podľa tohto vynálezu zlúčením podľa tohto vynálezu. Ak sa majú získať zodpovedajúce kyseliny, potom sa zlúčeniny podľa tohto vynálezu vo forme solí uvedú do styku s výmennou živicou typu katexu vo forme kyseliny.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu vo forme kyselín je potom možné neutralizovať vhodnou bázou so zreteľom na získanie vhodnej soli.

Pri príprave solí zlúčenín podľa tohto vynálezu vzorca (I) je možné použiť bázy anorganické alebo organické, poskytujúce so zlúčeninami vzorca (I) farmaceutický prijateľné soli.

Výhodne sa použije ako báza roztok hydroxidu sodného, draselného, vápenatého alebo horečnatého s tým, že sodné a vápenaté soli zlúčenín vzorca (I) sú pokladané za výhodné.

Pri stupni (a) tohto postupu sú použiteľnými ochrannými skupinami tie, ktoré zvyčajne použije odborník na tomto úseku chémie cukrov, napríklad podľa EP 84 999 alebo podľa „Protective Groups in Organic Syntheses, ZW Greene, J. Wiley and Sons, 1995.

Takto získané zlúčeniny vzorca (I) môžu byť prípadne zmydelnené.

Zlúčeniny uvedeného vzorca (I) zahŕňajú tiež tie, keď jeden alebo viacej atómov vodíka alebo uhlíka boli nahradené zodpovedajúcim rádioaktívnym izotopom, napríklad trítiom alebo použitím ¹⁴C. Takto označené zlúčeniny sú vhodné pri výskumných prácach, ďalej pri prácach týkajúcich sa metabolizmu alebo farmakokinetiky, pri biochemických testoch ako je problém ligandov.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sú určené ako predmet biochemických a farmakologických štúdií s tým, že bolo zistené, že majú v tomto smere veľmi zaujímavé vlastnosti. Zlúčeniny podľa tohto vynálezu, ktoré sa viažu selektívne na AT II s afinitou rovnakou alebo vyššou ako v prípade heparínu, majú antikoagulačné a antitrombotické vlastnosti heparínu.

Globálna antitrombotická účinnosť produktov vzorca (1) bola vyhodnotená intravenóznym alebo subkutánnym podávaním krysám na modeli venóznej stáze a indukovaním tromboplastínom podľa postupu, ktorý opísali Reyers a kol., Thrombosis Research J_8, 669 - 674 (1980), ako aj na modeli arteriálnej trombózy, vyvolanej implantovaným zhlukom medzi arteriálnu karotídu a jugulárnu vénu krysy, ako to opísali Umetsu a kol., Thromb. Haumost. 39, 74 - 83 (1978). Pri týchto dvoch experimentálnych modeloch je hodnota DE₅₀ zlúčenín podľa tohto vynálezu najmenej rovnaká alebo nižšia v porovnaní s ostatnými dosiaľ známymi syntetickými heparinoidmi (DE₅₀ sa pohybuje medzi 5 až 500 pg/kg). Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sú teda charakterizované špecifickou účinnosťou a najmä zaujímavým antikoagulačným a antitrombotickým pôsobením.

V dôsledku ich účinností biochemických a farmaceutických sú zlúčeniny podľa tohto vynálezu veľmi zaujímavými liečivami. Ich toxicita je dokonale kompatibilná s využitím v tomto zmysle. Tiež sú to látky veľmi stále a preto sú vhodné najmä na použitie ako hlavná účinná zložka farmaceutických špecialít.

Navyše zlúčeniny podľa tohto vynálezu nie sú neutralizované silnými dávkami doštičkových katiónových proteínov, ako je doštičkový faktor R (FP4, facteur 4 plaquetaire), uvoľňovaný pri aktivovaní uvedených doštičiek počas postupu trombózy. Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa preto zdajú byť veľmi zaujímavými na liečenie a prevenciu trombóz arteriálneho alebo venózneho pôvodu.

Môžu sa využiť pri rôznych patologických stavoch v dôsledku modifikácie hemostázy sústavy krvnej a jej koagulácie, ktoré sa prejavujú najmä počas problémov sústavy kardiovaskulárnej a cerebrovaskulámej ako trombotické problémy, spojené s arterosklerózou alebo cukrovkou, ako je tomu v prípade nestabilnej angíny, mozgovej príhody, restenózy po angioplastike, endarterektómii, zavedení endovaskulámych protéz, alebo ako je tomu v prípade tromboembolytických problémoch v spojitosti s retrombózou po trombolýze, infarkte, demcntných stavoch ischemického pôvodu, periférnych arteriálnych ochoreniach, hemodialýze, aurikulámej fibrilácii alebo počas využitia vaskulámych protéz premostenia aorto-koronárnych. Tieto produkty je možne okrem iného využiť na liečbu alebo prevenciu patologických tromboembolických stavov venózneho pôvodu, ako sú pľúcna embólia. Môžu sa použiť alebo nimi predchádzať, alebo liečiť trombotické komplikácie, ak sa prejavujú počas chirurgických zákrokov alebo v spojitosti s inými patologickými stavmi, ako je rakovina a infekcie tak bakteriálne, ako aj vírusové. V prípade ich využitia pri zavádzaní protéz môžu byť zlúčeniny podľa tohto vynálezu použité pri zavádzaní protéz a upravujúc tak ich hemokompatibilitu. Najmä potom môžu byť fixované na intravaskuláme protézy („stents“). V takom prípade môžu byť prípadne chemicky modifikované zavedením na koncovke neredukuiúcei alebo redukujúcej vhodné vetvenie, pozri EP 649 854.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa rovnako môžu využiť ako adjuvanty pri endarterektómii, realizovanej poréznymi vzduchovými mechmi.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sú veľmi stále látky a sú vhodné preto najmä na to, aby predstavovali aktívny princíp liečiv.

Podľa ďalšieho svojho predmetu sa vynález tiež týka farmaceutickej kompozície, obsahujúcej ako hlavný podiel syntetický polysacharid, ako bolo už definované.

Vynález sa výhodne týka farmaceutických kompozícií, obsahujúcich aktívnu zložku zlúčenín vzorca (I), (1.1), (1.2), (1.3), alebo niektorú z jej solí, farmaceutický prijateľných, prípadne spoločne s jedným alebo viacerými inertnými a vhodnými excipientmi.

V každej dávkovanej jednotke je účinná látka obsiahnutá v množstvách prispôsobených predpokladaným denným dávkam. Všeobecne je každá dávková jednotka vhodne upravená so zreteľom na dávkovanie a typ predpokladaného podávania, napríklad vo forme lisovanej, kapsúl a pod., vrecúšok, ampuliek, sirupov a pod., kvapiek, mastí transdermálnych alebo transmuskulámych takým spôsobom, že takáto jednotka dávky obsahuje 0,1 až 100 mg účinnej zložky, výhodne 0,5 až 50 mg. Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa môžu rovnako použiť s inou účinnou látkou, vhodnou na predpokladané terapeutické využitie, ako sú napríklad antitrombotické a antikoagulačné činidlá, antiagregačné doštičkové činidlá, ako je napríklad dipyridamol, aspirín, ticlopidín, clopidogrel alebo antagonisty komplexu glykoproteínu Ilb/IIIa.

Farmaceutické kompozície sú upravené na podávanie cicavcom, vrátane ľudí, a to na liečbu uvedených chorôb. Takto pripravené farmaceutické kompozície sú v rôznych formách, ako napríklad injekčné roztoky alebo kompozície na pitie, dražé, lisované produkty alebo pastilky. Výhodnými formami sú injikovateľné farmaceutické roztoky. Farmaceutické kompozície podľa tohto vynálezu sú vhodné najmä na podávanie, preventívne alebo liečebné, pri problémoch vaskulámeho ústrojenstva, ako je ateroskleróza, stavy hyperkoagulability, pozorované napríklad v dôsledku chirurgických zákrokov, vývoja tumorov alebo deregulácic koagulovania, spôsobenej aktivátormi bakteriálnymi, vírusovými alebo enzýmovými. Dávkovanie je možné meniť v závislosti od veku, hmotnosti a zdravotného stavu pacienta, povahy a obtiažnosti afekcie, ako aj so zreteľom na spôsob podávania. Takéto dávkovanie zahrnuje podávanie jednej alebo viacerých dávok denne od 0,1 mg až do 100 mg, výhodne medzi 0,5 až 50 mg denne, a to intramuskuláme alebo subkutánne s tým, že podávanie sa vykonáva v stanovených časových odstupoch.

Tento vynález sa tiež týka farmaceutických kompozícií, obsahujúcich hlavnú účinnú zložku jednej z uvedených zlúčenín, prípadne spoločne s ďalšou účinnou látkou. Takéto prípravky sa pripravujú tak, že sa môžu podávať cestou zažívacieho ústrojenstva alebo parenterálne.

Vo farmaceutických kompozíciách podľa tohto vynálezu na orálne, sublinguálne, subkutánne, intramuskuláme, intravenózne, transdermálne, lokálne alebo rektálne podávanie môžu byť aktívne zložky podávané v jednotlivých dávkach v zmesi s klasickými farmaceutickými podkladmi tak zvieratám, ako aj ľuďom. Jednotky na podávanie môžu mať zvyčajné formy, napr. lisované tablety, kapsuly, prášky, granulky, roztoky alebo suspenzie na orálne podávanie, môžu sa podávať sublinguálne alebo subkutánne, intramuskulárne, intravenózne, intranazálne alebo intraokuláme, alebo môže ísť o formy podávania cestou rektálnou.

Ak sa pripravuje kompozícia pevná na podávanie v zlisovanej forme, zmieša sa účinná zložka s farmaceutickým vehikulom, ako je želatína, škrob, laktóza, horečnatá soľ kyseliny stearovej, mastenec, arabská guma a pod., môžeme zapracovať do zmesi sacharózu alebo iné vhodné zložky, alebo zmes upraviť tak, že sa docieli predĺžená alebo oneskorená aktivita zložky, ako sa uvoľňuje vo vopred určenom množstve tejto hlavnej zložky.

Prípravok v kapsuliach sa získa tak, že sa zmieša účinná zložka s rozpúšťadlom a získaná zmes sa vnesie do mäkkých alebo tvrdých kapsúl.

Prášky alebo granuly, dispergovateľné vo vode, je možné získať zmiešaním účinnej zložky so zmesou disperzných činidiel alebo činidiel, určených na mletie alebo činidiel na udržanie aktívnej látky v suspenzii, ako je pyrolidón a rovnako tak je možné pridať farbivá alebo látky upravujúce chuť.

Na rektálne podávanie sa pripravujú čapíky, ktoré sa topia pri teplote v rektu, ako je napríklad kakaové maslo alcbo polyetylénglykoly.

Na parenterálne podávanie, intranazálne alebo intraokuláme sa používajú vodné suspenzie, izotonické roztoky v soľanke, alebo iné sterilné roztoky s tým, že injikovateľné roztoky obsahujú dispergujúce činidlá a/alebo zmáčadlá, farmakologicky kompatibilné, ako je napríklad propylénglykol alebo butylénglykol.

Na podávanie cestou slizníc sa môže účinná látka spracovať v prítomnosti promotóra, ako je soľ niektorej zo žlčových kyselín, hydrofilný polymér, ako jc napríklad hydroxypropylcelulóza, hydroxypropylmetylcelulóza, hydroxyetylcelulóza, etylcelulóza, karboxymetylcelulóza, dextrán, polyvinylpyrolidón, pektíny, škroby, želatína, kazeín, akrylovc kyseliny a ich estery aj kopolyméry, vinylové polyméry alebo kopolyméry, vinylalkoholy, alkoxylované polyméry, polyméry polyetylénoxidu, polyétery alebo ich zmesi.

Účinnú látku je možné tiež zapracovať do formy mikrokapsúl, prípadne s jedným alebo viacerými podkladmi alebo prísadami.

Účinná látka sa môže prezentovať práve tak vo forme komplexu s cyklodextrínom, napríklad a, [3 alebo γ-cyklodextrínom, 2-hydroxypropyl-P-cyklodextrínom alebo metyl-P-cyklodextrínom.

Účinnú látku je tiež možné uvoľniť z balónika, ktorý ju obsahuje, alebo endovaskulámym zariadením, ktoré ju zavedie do krvného obehu. Farmakologická účinnosť hlavnej účinnej látky tým nie je ovplyvnená.

Výhodnou formou podávania je istotne forma subkutánna.

Spôsoby, príprava a nasledujúce schémy opisujú syntézu rôznych medziproduktov, vhodných na prípravu polysacharidov podľa tohto vynálezu. Príklady bližšie opisujú vynález, bez toho, aby jeho rozsah akokoľvek obmedzovali. Sú používané tieto skratky: TBDMS: Zerc-butyldimetylsilyl,

Lev: levulinyl Bn: benzyl Bz: benzoyl, CCM: chromatografia na tenkej vrstve Olm: trichlóracetimidyl.

LSIMS: je skratkou anglického výrazu „Liquid Secondary lon Mass Spectrometry“

ESIMS: je skratkou anglického výrazu „Electron Spray Ionisation Mass Spectrometry

TMS: trimetylsilyl

TSP: sodná soľ trimetylsilyltetradeuteriopropiónovej kyseliny

Tf: triflát, teda derivát kys. trifluóroctovej,

MS: molekulárne sito

All: alyl

PMB: p-metoxybenzyl SE: trimetylsilyletyl.

Dowex®, Sephadex®, Chelex® a Toyopcarl® sú ochranné obchodné známky.

Pri všetkých spôsoboch, prípravách a vo všetkých tu opisovaných príkladoch sa môžu všetky uvedené pracovné postupy, týkajúce sa katalytického zdvojenia imidátov, štiepenia esterov levulovej kyseliny, katalytického zdvojenia tioglykozidov, zmydelnenia, metylácie a selektívneho odstránenia ochrannou skupinou p-metoxybenzylovou, selektívneho odstránenia a sulfatácie oligosacharidov a polysacharidov hydrogenolýzou esterov alebo benzyléterov, zmydelnenia esterov alebo dokonca sulfátaniónov vykonať použitím všeobecných postupov, opísaných ďalej použitím vhodných medziproduktov.

Všeobecné spôsoby

Spôsob 1: Katalytické spojenie imidátov použitím terc-butyldimetyltriflátu

Pod argónom a pri chladení na -20 °C sa pridáva roztok Zerc-butyldimetylsilyltriflátu v dichlórmetáne (IM, 0,2 mol/mol imidátu) k roztoku imidátu a glykozylového akceptora v dichlórmetáne (17,5 ml/mmol) v prítomnosti molekulárneho sita 4 Á. Po 10 až 20 minútach sledovania chromatografie na tenkej vrstve sa pridá pevný hydrogenuhličitan sodný, roztok sa filtruje, prepláchne sa vodou, vysuší a zahustí do sucha.

Spôsob 2: Odštiepenie skupiny kyseliny levulovej

Zlúčenina, ktorá sa má zbaviť ochrannej skupiny, sa rozpustí v zmesi etanolu a toluénu 2 : 1 (42 ml/mmol) a pridá sa octan hydrazínu (5 mol/mol). Zmes sa nechá reagovať 15 až 30 minút (kontrola chromatografiou na tenkej vrstve) a zahustí sa.

Spôsob 3: Naviazanie na tioglykozidy pri katalýze N-jódimidom kyseliny jantárovej (zložka A) striebornou soľou kyseliny trifluóroctovej (zložka B).

V sklenenej nádobke sa rozpustí tioglykozid a glykozylový akceptor vbezvodom toluéne (18 ml/mmol tioglykozidu) v prítomnosti mol. sita 4 Ä. Po pretrepávaní hodinu pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes schladí na 0 °C, pridá sa zložka A (3 mol/mol tioglykozidu) a potom zložka B (0,28 mol/mol tioglykozidu). Za 10 až 15 minút (kontrola chromatografiou na tenkej vrstve) sa pridá pevný hydrogenuhličitan sodný, po filtrácii sa roztok prepláchne 1 M vodným roztokom tiosíranu sodného, vodou, vysuší sa a zahustí.

Spôsob 4: Zmydelnenie, metylácia a selektívne odstránenie p-metoxybenzylovej skupiny:

Zmydelnenie esteru: Zlúčenina, ktorá sa má zmydelniť, sa rozpustí v zmesi dichlórmetánu a metanolu 1 : 1 (4 ml/mmol), pridá sa nátriummetoxid, zmes a pretrepáva 20 minút a potom sa neutralizuje pomocou živice Dowex 50 H⁺. Po zahustení sa získaná látka použije v ďalšom stupni bez akéhokoľvek čistenia.

Metylácia: V malých množstvách sa pridáva hydrid sodíka pri 0 °C k zmesi surového produktu z predchádzajúceho stupňa a metyljodidu v Ν,Ν-dimetylformamidu (7 ml/mmol). Po ukončení reakcie sa reakčná zmes vleje do vody, po extrakcii etylesterom kyseliny octovej sa organický roztok prepláchne vodou, vysuší sa a zahustí do sucha.

Odštiepenie p-metoxybenzylovej skupiny: Predchádzajúci surový produkt sa rozpusti v zmesi acetonitrilu a vody 9 : 1 (20 ml/mmol). Pri ochladení na 0 °C sa pridáva dusičnan ceričito-amónny (0,5 mol/mol), reakčná zmes sa mieša 2 hodiny pri kontrole chromatografiou na tenkej vrstve, pridá sa nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného, organická látka sa extrahuje do etylesteru kyseliny octovej, roztok sa vysuší a zahustí.

Spôsob 5: Odstránenie ochranných skupín a sulfatácia oligo- aj polysacharidov

Hydrogenolýza benzyléterov a benzylesterov: Pri kontrole chromatografiou na tenkej vrstve reaguje 6 až 12 hodín roztok práve uvedenej látky v ľadovej kyseline octovej v prítomnosti katalyzátora, teda paládía na uhlie 5 % (dvojnásobok hmotnosti zlúčeniny) s vodíkom pri tlaku 400.10⁵ Pa. Po filtrácii sa produkt použije priamo v ďalšom stupni.

Zmydelnenie esterov: K roztoku esteru v metanole (50 ml/mmol) sa pridá 5 M vodný roztok hydroxidu sodného (v takom množstve, že po ukončení pridávania má zodpovedať koncentrácia hydroxidu sodného 0,5 M). Za 2 až 5 hodín sa všetko vyleje do vody a prepláchne kolónou sephadexového G-25 gélu (1,6 na 115 cm), eluovanou vodou. Po zahustení sa všetko prepláchne kolónou Dowex 50 H⁺ (2 m) a lyofilizuje. V tomto štádiu sa overí použitím 'H NMR, že došlo k odstráneniu všetkých ochranných skupín. Ak je to potrebné, potom sa produkt znovu hydrogenuje a/alebo zmydelňuje.

Sulfatácia: K roztoku látky, ktorá sa má sulfátovať, v dimetylformamide (5 mg/ml) sa pridá komplex trietylamínu a oxidu sírového (5 mol/mol hydroxylovej funkcie) a po jednodňovom státí pri 55 °C sa roztok nanesie na kolónu Sephadexu G-25 (1,6 na 115 cm) eluovanou 0,2 M chloridom sodným. Frakcia, obsahujúca produkt sa zahustí a zbaví soli na rovnakej kolóne eluovaním vodou. Lyofilizovaním sa získa výsledný produkt.

Schéma 3: Syntéza monosacharidov 6 a 9

G

Príprava 1 Etyl-2,4-6-tri-O-acetyl-3-O-metyl-l-tio-p-D-glukopyranozid (2)

V 580 ml toluénu sa rozpustí 69 g (0,19 mmol) 1,2,4,6-tetra-O-acetyl-3-O-metyl-P-D-glukopyranózy 1, pozri Helferich B. a kol., J. prakt. Chem. 132, 321 (1932), pridá sa 28 ml (0,38 mmol) etántiolu a potom sa prikvapkáva roztok dietyleterátu trifluórboránu v toluéne (190 ml, 1 M). Všetko sa nechá reagovať a kontroluje sa chromatografíou na tenkej vrstve 1,5 hodiny, pridá sa pevný hydrogenuhličitan sodný, po filtrácii a prcpláchnutí vodou sa roztok vysuší a zahustí. Chromatografovaním sa na kolóne oxidu kremičitého (cyklohexán a etylester kyseliny octovej 3 : 1) sa získa 37 g (54 %) zlúčeniny vzorca 2, [a]_D -26 (c = 1, dichlórmetán).

’H NMR (CDClj): δ 5,05 - 4,96 (m, 2H, H-2, H-4), 4,39 (d, IH, J = 9,5 Hz, H-l), 4,18 - 4,12 (m, 2H, H-6, H-6'), 3,60 (m, IH, H-5, 3,50 (dd, IH, J = 9,3 Hz, H-3), 3,41 (s, 3H, OCHj), 2,65 - 2,53 (m, 2H, SCH₂CH₃), 2,12, 2,11,2,09 (3s, 9H, 3Ac), 1,25 (t, IH, SCH₂CH₃).

Príprava 2 Etyl-4,6-0-benzylidén-3-0-metyl-l-tio-P-D-glukopyranozid: (3)

V zmesi metanolu a dichlórmetánu 1 : 2 (1,5 1) sa rozpustí 37 g (0,1 mmol) látky 2, pridá sa 150 ml 2 M roztoku nátriummetoxidu, po tridsiatich minútach státia pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes neutralizuje živicou Dowex 50 (H⁺), filtruje a zahustí sa. Táto surová látka sa rozpustí v litri bezvodého acetonitrilu, pridá sa 30 ml (0,2 mol) α,α-dimetoxytoluénu a 2,3 g (10 mmol) kyseliny gáforsulfónovej, reakčná zmes sa ponechá 1,5 hodiny miešať a kontroluje sa chromatografíou na tenkej vrstve, po pridaní 1,4 ml trietylamínu sa reakčná zmes zahustí. Zo získaných zvyškov sa vyzrážaním éterom získa 27 g (81 %) látky 3 [cc]d -60 (^c = 1,63, dichlórmetán).

‘H NMR (CDClj) δ 7,51 - 7,34 (m, 3H, C₆H₅), 5,55 (s, IH, C₆H₅CH), 4,56 (d, IH, J = 9,2 Hz, H-l), 2,75 (m, 2H, SCHjCHj), 1,32 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₁₆H₂₂O₅S (326, 41) vypočítané: 58,58 % C, 6,79 % H, 9,82 % S nájdené: 58,99 % C, 6,74 % H, 9,75 % S

Príprava 3 Etyl-2-0-benzyl-4,6-0-benzylidén-3-0-metyl-1 -tio-P-D-glukopyranozid (4)

Pri teplote 0 “C sa pridáva 2,0 g (83,3 mmol) hydridu sodného do roztoku 23 g (71,0 mmol) látky 3 a 11 ml (93,0 mmol) benzylbromidu v 200 ml Ν,Ν-dimetylformamidu. Reakčná zmes sa mieša 2 hodiny pri kontrole CCM, pridá sa metanol a reakčná zmes sa vleje do vody. Všetko sa extrahuje do etylesteru kyseliny octovej, extrakt sa prepláchne vodou, vysuší a zahustí sa. Vyzrážaním zvyšku éterom sa takto pripraví 18,8 g (63 %) látky 4, t. t. 123 °C, [cc]_D - 35 (c % 0,63, dichlórmetán).

’H NMR (CDClj): δ 7,50 - 7,25 (m, 10H, 2x C₆H₅), 5,55 (s, IH, C₆H₅CH), 4,54 (d, IH, J = 9,7 Hz, H-l), 4,34 (m, IH, H-6), 3,75 (T, IH, J = 10,2 Hz, H-6'), 3,65 (s, 3H, OCHj), 3,60 - 3,33 (m, 4H, H-5, H-4, H-3, H-2), 2,75 (m, 2H, SCH₂CH₃), 1,32 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₂3H₂₈O₅S (416,54) vypočítané: 66,32 % C, 6,78 % H, 7,70 % S nájdené: 66,25 % C, 7,28 % II, 7,54 % S

Príprava 4 Etyl-2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-1 -tio-P-D-glukopyranozid (5)

Pod argónom sa pridáva 0,65 ml (4,50 mmol) roztoku anhydridu kyseliny trifluóroctovej v 16 ml (0,21 mmol) kyseliny trifluóroctovej k roztoku 28,8 g (69,0 mmol) látky 4 a 33 ml (0,21 mol) trietylsilánu v 120 ml dichlórmetánu. Po dvojhodinovom miešaní sa reakčná zmes zriedi etylesterom kyseliny octovej a pridáva sa 1 M roztok hydroxidu sodného až do dosiahnutia hodnoty pH 9. Po extrakcii do etylesteru kyseliny octovej sa získaný extrakt prepláchne vodou, vysuší a zahustí do sucha. Čistením na kolóne oxidu kremičitého (cyklohexán a etylester kyseliny octovej 3:1, potom : 1) sa získa 17,4 g (60 %) látky 5, [a]_D -47 (c = 1, dichlórmetán).

‘H NMR (CDClj): δ 7,45 - 7,25 (m, 10H, 2x C₆H₅), 4,47 (d, 1H, J = 9,3 Hz, H-l), 3,66 (s, 3H, OCH,), 3,61 - 3,40 (m, 2H, H-4 a H-5), 3,38 - 3,19 (m, 2H, H-2 a H-3), 2,73 (m, 2H, SCHjCHj), 1,3 k (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₂₃H₃₀O₅S (418,55) vypočítané: 66,00 % C, 7,22 % H, 7,66 % S nájdené: 65,62 % C, 7,28 % H, 7,21 % S

Príprava 5 Etyl-2,6-di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-l-tio-P-D-glukopyranozid (6)

V 400 ml bezvodého dioxánu sa rozpustí 17,3 g (41,4 mmol) látky 5, pridá sa 9,60 g kyseliny levulovej (83,0 mmol), 16 g (88 mmol) hydrochloridu 1 -(3-dímetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu a 1 g (9,3 mmol) 4-dimetylaminopyridínu. Reakčná zmes sa mieša 4 hodiny, zriedi sa pridaním etylesteru kyseliny octovej, tento roztok sa prepláchne postupne 5 % vodným roztokom hydrogensíranu draselného, vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, znovu vodou, vysuší sa a zahustí. Čistením na kolóne oxidu kremičitého (toluén a etylester kyseliny octovej, 6 : 1) sa získa 19,9 g (93 %) čistej látky 6, [a]_D -5 (c = 1,46, dichlórmetán).

ES1MS, kladný modul: m/z tioglycerol + chlorid sodný 539 (M + Na)⁺, tioglycerol + fluorid draselný 555 (M + + K)⁺.

'H NMR (CDC1₃): δ 7,40 - 7,20 (m, 10H, 2x C₆H₅), 2,8 -

- 2,4 (m, 6H, SCH₂CH₃) a [O(CO)CH₂CH₂(CO)CH₃], 2,16 (s, 3H, [O,(CO)CH₂CH₂(CO)CHj], 1,32 (T, 1H, J = 7,3 Hz, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₂sH₃₆O₇S (516,65) vypočítané: 65,09 % C, 7,02 % H, 6,21 % S nájdené: 65,30 % C, 7,03 % H, 5,75 % S.

Príprava 6 Alyl-4,6-0-benzylidén-3-0-metyl-p-D-glukopyranozid (7)

Pridá sa 1,10 ml (0,012 mol) kyseliny trifluórmetánsulfónovej zo suspenzie 135 g (0,7 mol) bežnej 3-O-metyl-D-glukózy a litra alylalkoholu, reakčná zmes sa zahrieva 2 hodiny na 120 °C, po neutralizovaní pridaním trietylaminu (2 ml) sa všetko zahustí do sucha.

K tomuto surovému produktu, rozpustenému v 2 litroch Ν,Ν-dimetylfbrmamidu sa pridá 136 ml (0,9 mol a, a-dimetoxytoluénu a 25 g (0,13 mmol) kyseliny gáforsulfónovej. Reakčná zmes sa zahrieva hodinu na 80 °C vo vákuu, neutralizuje s pridaním 21 ml metylamínu a všetko sa extrahuje do etylesteru kyseliny octovej, extrakt sa prepláchne vodou, vysuší a zahustením sa získa pevný podiel, zmes α/β = 3/2. Výťažok celkom 144 g (57 %). Kryštalizáciou z etanolu sa získa 60 g (26 %) čistej látky 7-a. Chromatografovaním časti materských lúhov na kolóne oxidu kremičitého (cyklohexán a etylester kyseliny octovej 3 : 1) sa dá získať 7,8 g čistého anoméru 7-β, 6,8 g zmesi 7 α/β a 1,4 g čistej látky 7-a.

Zlúčenina 7-β: [a]_D -43 (c = 1, dichlórmetán), 1.1.131 °C. 'H NMR (CDCI₃): δ 7,50 - 7,26 (m, 5H, C₆H₅), 6,01 - 5,90 [m, 1H, OCH₂ (CHCH₂)J, 5,55 (s, 1H, C₆H₅CH), 5,38 -

- 5,32 [m, 2H, OCH₂(CH=CH₂)], 4,47(d, 1H, J=7,5Hz, H-1), 4,42 - 4,32 (m, 2H, H-6' a OCH₂(CH=CH₂)), 4,21

-4,15 [m, 1H, OCH₂ (CH=CH₂)], 3,80 (dd, 1 H, J = 10,2 Hz, H-6), 3,67 (s, 3H, OCH₃).

Analýza pre C₁₇H₂₂O₆ (322,36) vypočítané: 63,34 % C, 6,88 % H nájdené: 63,23 % C, 7,12 % H Príprava 7 Alyl-2-O-acetyl-4,6-<9-benzylidén-3<9metyl-p-D-glukopyranozid (8)

V 100 ml dichlórmetánu sa rozpustí 11,5 g (35,7 mmol) látky 7, pridá sa 4,0 ml (42,8 mmol) anhydridu kyseliny octovej, 6,40 ml (46,4 mmol) trietylaminu a 440 mg (3,80 mmol) 4-dimetylaminopyridínu, zmes sa nechá miešať 2 hodiny (kontrola pomocou CCM), prepláchne sa následne 5 % vodným roztokom hydrogensíranu draselného, vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, znovu vodou, a zahustí sa až do získania 12,3 g (95 %) pevnej látky 8,1.1. 115 °C, [a]_D -68 (c = 1, dichlórmetán). LSIMS, kladný modul: m/z tioglycerol + chlorid sodný 387 (M + Na)⁺, tioglycerol + fluorid draselný 403 (M + K)⁺.

’H NMR (CDClj): 8 7,51 - 7,34 (m, 5H, C₆H₅), 5,98 - 5,78 [m, 1H OCH₂ (CH=CH₂), 5,56 (s, 1H, C₆H₅CH), 5,32 -5,17 [m, 2H, OCH₂-(CH=CH₂)], 4,99 (dd, J = 8 Hz, 1H, H-2), 4,55 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H-l), 4,39 - 4,29 [m, 2H, H-6 a OCH₂(CH=CH₂)J, 4,14 - 4,04 [m, 1H, OCH₂(CH=CH₂], 3,82 (t, J = 10,2 Hz, 1H, H-6'), 3,80 (s, 3H, OCH₃), 2,12 (s, 3 H, Ac).

Analýza pre C₁₉H₂4O₇ (366,39) vypočítané: 62,83 % C, 6,64 % H nájdené: 62,63 % C, 6,64 % H

Príprava 8 Alyl-2-0-acetyl-6-0-bcnzyl-3-0-metyl-P-D-glukopyranozid (9)

Pri teplote 0 °C sa pridáva do roztoku 12,0 g (33,3 mmol) látky 8 a 21,3 ml (33 mmol) trietylsilánu v 50 ml bezvodého dichlórmetánu roztok 306 μΐ (2,10 mmol) anhydridu kyseliny trifluóroctovej v 10 ml kyseliny trifluóroctovej. Zmes sa nechá 4 hodiny miešať (kontrola CCM), zriedi sa etylesterom kyseliny octovej a až do dosiahnutia hodnoty pH 9 sa pridáva 1 M vodný roztok hydroxidu sodného. Zmes sa extrahuje do etylesteru kyseliny octovej, roztok sa po prepláchnutí vodou vysuší a zahustí. Čistením na kolóne oxidu kremičitého (cyklohexán a acetón, 8 : 5) sa získa 10,0 g (82 %) čistej látky 9 [a]_D -40 (c 1,06, dichlórmetán).

’H NMR (CDClj): 8 7,35 - 7,28 (m, 5H, C₆H₅), 5,87 - 5,79 [m, 1H, OCH₂(CH=CH₂)], 5,28 - 5,14 [m, 2H, OCH₂ (CH=CH₂)J, 4,43 (d, 1H, J = 7,9 Hz, H-l), 4,41 - 4,28 m, 1H, OCH₂(CH-CH₂), 4,10 - 4,02 [m, 1H, OCH₂(CH=CH₂)J, 3,77 - 3,75 (m, 2H, H-6 a H-6'), 3,51 (s, 3H, OCH₃, 3,30 (dd, 1H, J= 8,9 Hz, H-3), 2,8 (d, 1H, OH). Analýza pre C|₉H₂₆O₇ (366,39) vypočítané: 62,28 % C, 7,15 % H nájdené: 61,73 % C, 7,19 % H

Schéma4: Syntézadisacharidov 13 a 14

Príprava 9 Alyl-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-4-O-(2,6-di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-p-D-glukopyranozid (10).

V 150 ml dichlóretánu sa rozpustí 17,4 g (33,7 mmol) tioglykozidu 6 a glykozylový akceptor 9 v množstve 10,3 g (28,1 mmol). Po pridaní molekulárneho sita Ä sa reakčná zmes mieša hodinu pri -20 °C a pod argónom sa pridávaním roztok 8,30 g (33,7 mmol) N-jódimidu kyseliny jantárovej a 0,30 ml (3,30 mmol) kyseliny trifluórmetánsulfónovej v zmesi dichlóretánu a etyléteru (415 ml, 1 : 1). Reakčná zmes sa ďalej mieša 10 minút pri kontrole CCM, pridá sa hydrogenuhličitan sodný, a po filtrácii sa organický roztok preplachuje postupne 1 M vodným roztokom tiosiranu sodného, vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a znovu vodou, po vysušení sa zahustí. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na oxide kremičitom v kolóne použitím zmesi dichlórmetánu a etylesteru kyseliny octovej (11 : 1) a získa sa tak 11,7 g (52 %) ]0-a disacharidu v čistej forme, [a]_D + 38 (c = 1, dichlórmetán). 'H NMR (CDCIj): δ 7.35 - 7,23 (m, 15H, 3 x C₆H₅), 5,90 -

- 5,80 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 5,47 (d, IH, J = 3,6 Hz, H-ľ), 5,27 - 5,14 (m, 2H, OCH₂(CH=CH₂)), 5,05 - 4,90 (m, 2H, H-4' a H-2), 4,42 (d, IH, J = 7,6 Hz, H-1), 4,38 -

- 4,32 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 4,15 - 4,0 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 3,90 (dd, IH, J = 8,8 Hz, H-4), 3,54, 3,34 (2s, 6H, 2 OCH₃), 2,75 - 2,40 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,16, 2,10 (2s, 6H, Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃.

Analýza pre C₄5H₅₆O|₄ (820,94) vypočítané: 65,84 % C, 6,88 % H nájdené: 65,74 % C, 6,90 % H

Príprava 10 Prop-ľ-enyl-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-4-O-(2,6-di-0-benzy]-4-0levulinyl-3Omctyl-a-D-glukopyranozyl)-P-D-glukopyranozid (11).

Do roztoku 1,36 g (1,66 mmol) látky 10 v 4,30 ml tetrahydrofuránu, bez peroxidov, sa pridá 5,80 mg (0,70 pmol) hexafluórfosforečnanu 1,5-cyklooktadién-bis(metyldifenylfosfín)-irídia, roztok sa zbaví vzduchu, priestor sa naplní argónom a zavádza sa vodík. Všetko sa nechá miešať 10 minút (kontrola CCM), zahustí sa, zvyšok sa rozpustí v dichlórmetáne, roztok sa prepláchne nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vodou, vysuší sa a zahustí. Čistením na kolóne oxidu kremičitého s použitím zmesi toluénu a etylesteru kyseliny octovej (3:1) sa takto izoluje 1,04 g (76 %) čistej látky £1, [a]_D + 47 (c = = 1,1, dichlórmetán, LSIMS kladný modul: m/z tioglycerol + chlorid sodný, 951 (M + Na)⁺, tioglycerol + fluorid draselný, 967 (M + K)’.

’H RMN (CDCI,) δ 7,34 - 7,23 (m, 15H, 3 Ph), 6,21 - 6,16 (m, IH, O(CH=CH)CH₃, 5,45 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-l), 5,13 - 4,97 (m, 3H, H-4', H-2 a O(CH=CH)CH₃), 4,6 (d, IH, J = 7,55 Hz, H-l), 3,96 (dd, J = 8,9 Hz, H-4'), 3,34 (2 s, 6H, 2 OCH₃), 2,74 - 2,36 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,15, 2,08 (2s, 6H, Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,56-1,51 (dd, 3H, O(CH=CH)CH₃). Analýza pre C₄₅H₅₆O|₄ (820,94) vypočítané: 65,84 % C, 6,88 % H nájdené: 66,21 % C, 6,92 % H

Príprava 11

2-O-acetoJ-6-O-benzyl-3-O-mety]-4-0-(2,6-di-O-benzvl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-a,p-D-glukopyranóza (12).

Roztok 3,9 g (14,3 mmol) chloridu ortuťnatého v 26 ml zmesi acetónu a vody (5 : 1) sa vkvapkáva do roztoku 7,8 g (9,53 mmol) látky 11 a oxidu ortuťnatého v 80 ml rovnakej zmesi rozpúšťadiel. Po miešaní hodinu sa zmes filtruje a zahustí, extrahuje dichlórmetánom, roztok sa prepláchne nasýteným vodným roztokom jodidu draselného, vodou, vysuší sa a zahustí. Čistenie na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy dichlórmetán a acetón, 10:1, potom 4 : 1 sa získa 6,70 g (90 %) látky 12, [a] + 92 (c = 1,37, dichlórmetán).

Chromatografia na tenkej vrstve, dichlórmetán/acetón 14 : 1, R_f = 0,31.

'H NMR (CDCIj) δ 7,37 - 7,24 (m, 15H, 3x C₆H₅), 5,46 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-l), 5,37 (d, J = 3,6 Hz, H-la), 4,58 (d, J = 8 Hz, H-lβ), 3,54, 3,39, 3,36 (3s, 6H, 2 OCH₃), 2,75 -

- 2,4 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂), 2,16, 2,15 (2s, 6H, Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Analýza pre C₄₂H₅₂O₁₄ (780,83) vypočítané: 64,60 % C, 6,71 % H nájdené: 65,9 % C, 6,82 % H

Príprava 12 2-OMcetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-4-(9-(2,6-di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-(X-D-glukopyranozyl)-a,P-D-glukopyranozyl-trichlóracetimidát (13)

Rozpustí sa 5,00 g (6,4 mmol) látky 12 v 50 ml dichlórmetánu a pod argónom saprikvapkáva 3,9 ml (38,8 mmol) trichlóracetonitrilu a 1,6 g (11,5 mmol) uhličitanu draselného. Reakčná zmes sa nechá miešať 16 hodín (kontrola CCM), po filtrácii sa filtrát čistí na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy dichlórmetán/acetón, 8:1, potom 4:1a získa sa tak 5,22 g (87 %) zmesi imidátov 13 (α/β = 60/40). Chromatografia na tenkej vrstve, dichlórmetán/acetón 20 : 1

R_f 0,66 a 0,51.

’H NMR (CDCIj) δ 8,62 - 8,59 (2s, IH, N=H-a a β), 7,37 -

- 7,23 (m, 15H, 3x C₆H₅), 6,51 (d, J = 3,7 Hz, H-la), 5,81

Schéma 5: Syntéza oligosacharidu 19 (d, J = Hz, H-lβ), 5,50 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-ľ), 3,55, 3,41, 3,37 (3s, 9H, 3 OCH₃), 2,75 - 2,40 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,16, 2,07, 2,04 (3s, 6H, Ac a (C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Analýza pre C₄₄H₅₂C1₃NO_I4 (9925,26) vypočítané: 57,12 % C, 5,66 % H, 1,51 % N nájdené: 57,31 % C, 5,87 % H, 1,55 % N

Príprava 13

Alyl-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-(2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)^-D-glukopyranozid (14)

Spracovaním 3,11 g (3,80 mmol) zlúčeniny 10 podľa spôsobu 2 sa získa 2,70 g (97 %) zlúčeniny ]4, [a]_D + 25 (C = 1,7, dichlórmetán. LSIMS, kladný modul: m/z tioglycerol + chlorid sodný 745 (M + Na)⁺, tioglycerol + fluorid draselný, 761 (M + K)⁺.

’H RMN (CDCIj) δ 7,33 - 7,20 (m, 15H, 3x C₆H₅, 5,87 - 5,78 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 5,50 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-ľ), 5,30 - 5,17 (m, 2H, OCH₂(CH=CH₂)), 5,02 (dd, IH, H-2), 4,43 (d, IH, J = 7,6 Hz, H-l), 4,34 - 4,28 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 4,12 - 4,02 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂), 3,63, 3,36 (2s, 6H, 2 OCH₃), 2,10 (s, 3H, Ac).

Analýza pre C₄₀H₅₀O₁₂ (722,84) vypočítané: 66,47 %C, 6,97 % H nájdené: 66,31 % C, 7,24 % H

1»

Príprava 14 Alyl-O-(2,6-di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-(?-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2-O-acetyl-6-(?-benzyl-3-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-0-metyl^-D-glukopyranozid (15)

Zmes 4,22 g (4,56 mmol) imidátu 13 a 2,65 g (3,64 mmol) glykozylového akceptora 14 sa spracováva podľa spôsobu 1. Čistením na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy toluén/dietyléter, 3 : 2, potom 1 : 1 sa získa tetrasacharid 15 vo výťažku 4,31 g (80 %), [a]_D + 52 (c = 0,66, dichlórmetán).

’H NMR (CDCIj) δ 7,35 - 7,23 (m, 30H, 6x C₆H₅), 5,83 -

- 5,79 (m, IH, OCH,(CH=CH₂)), 5,47 (d, 2H, J = 3,5 Hz, H-ľ a H-ľ), 5,25 - 5,14 (m, 2H, OCH₂(CH=CH₂)), 4,38 (d, IH, J = 7,7 Hz, H-ľ'), 4,30 (d, IH, J = 8 Hz, H-I), 4,32

- 4,25 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 4,08 - 4,02 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 3,56, 3,53, 3,34, 3,27 (4s, 12H, 4 OCHj), 2,78 - 2,40 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,15, 2,09, 1,85 (3s, 9H, 2Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CHj).

Analýza pre C₈₂H₁₀₀O₂₅ (1485,7) vypočítané: 66,29 % C, 6,78 % H nájdené: 66,10% C, 6,79% H

Príprava 15

0-(2,6-di-0-Benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-O-(2-O-acctyl-6-O-benzyl-3-O-mctyi-[l-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-ct-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-a.P-D-glukopyranóza 16)

Spracuje sa 2,30 g (1,54 mmol) zlúčeniny 15 rovnako tak, ako to bolo opísané v príprave 10. Za 10 minút sa pridá do reakčnej zmesi roztok 0,30 g (1,70 mmol) N-bromimidu kyseliny jantárovej v 15 ml dichlórmetánu a 5,50 ml vody. Všetko sa mieša 5 minút (kontrola CCM), po zriedení zmesi dichlórmetánom sa organický roztok prepláchne nasýteným vodným roztokom hydrogensíranu draselného, potom vodu a po vysušení sa zahustí. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne oxidu kremičitého pri eluovaní zmesou toluénu a etylesteru kyseliny octovej (3 : 2) a získa sa tým 1,57 g (71 %, prepočítaného na obe etapy) čistej látky ]6, [a]_D + 69 (c = 0,87, dichlórmetán).

'H NMR (CDC1₃: δ 7,38 - 7,20 (m, 30H, 6x C₆H₅), 5,47 (d, IH, J = 3,5 Hz, N-ľ a H-ľ), 5,36 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-la), 4,55 (d, IH, J = 8 Hz, H-1), 4,36 (d, IH, J = 8 Hz, H-1”), 3,56, 3,54, 3,39, 3,36, 3,28 (5s, 9H, 3 OCH₃), 2,75 - 2,35 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,16, 2,12, 1,86 (4s, 9H, 2Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Príprava 16 0-(2,6-di-0-Benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-3-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-(2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl-(l-+4)-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-a,p-D-glukopyranozyltrichlóracetimidát (17).

Pri laboratórnej teplote sa 16 hodín mieša zmes 1,5 g (1,04 mmol) látky 16, 0,63 ml (8,22 mmol) trichlóracetonitrilu a 0,26 g (1,87 mmol) uhličitanu draselného v prostredí 15 ml dichlórmetánu, po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čisti na kolóne oxidu kremičitého s použitím sústavy toluén/acetón 4:1+ hmotnostné 1 %o trietylamínu. Získa sa tým 1,47 g (89,6 %) zlúčeniny 17, chromatografia na tenkej vrstve toluén/acetón 7 : 2, R_f 0,5.

pyr anozyl)-( 1-+4)-0-(2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—+4)-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-p-D-glukopyranozid (18)

Odstránenie zvyšku kyseliny levulovej z 15 sa vykoná použitím 1,3 g tejto látky (0,87 mmol) použitím spôsobu 2; získa sa tak 1,05 g (86 %) zlúčeniny 18, [a]_D + 40 (c = 0,6, dichlórmetán).

'H NMR (CDCI,) δ 7,36 - 7,23 (m, 30H, 6x C₆H₅), 5,83 -

- 5,78 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 5,50 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-ľ), 5,47 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-ľ), 5,25 - 5,21 (dd, IH, J = 1,6 Hz, J = 17 Hz, OCH₂(CH=CH₂)), 5,16 - 5,13 (dd, IH, J = 1,4 Hz, J = 10Hz, OCH₂(CH=CH₂)), 4,38 (d, IH, J = 6,5 Hz, H-ľ'), 4,31 (d, IH, J = 6,5 Hz, H-1), 4,08 -

- 4,02 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 3,59 (m, IH, H-4'), 3,67, 3,53, 3,39, 3,29 (4s, 12H, 4 OCH₃), 2,09, 1,86 (2s, 6H, 2Ac).

Príprava 18 Alyl-O-(2,6-di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-[0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-mctyl-[i-D-glukopyranozyl)-(l -+4)-0-(2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->)]₃-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-mctyl-[l-D-glukopyranozid (19)

Zmes 842 mg (0,53 mmol) látky 18 a 1,17 g (0,74 mmol) látky 17 sa spracuje podľa postupu spôsobu 1. Produkt s čistí na kolóne Toyopearl HW-50 (110 na 3,2 cm, sústava dichlórmetán/etanol, 1 : 1) a získa sa tak 1,44 g (85 %) látky 19, [a]_D +57 (c = 1,01 dichlórmetán Ή NMR (CDClj) δ 7,35 - 7,20 (m, 60H, 12 x CfiH,), 5,83 -

- 5,78 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 5,24 - 5,21 (dd, IH, OCH₂(CII=CH₂)), 5,16 - 5,13 (dd, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 3,59, 3,56, 3,51, 3,47, 3,33, 3,26 (6s, 24H, 8 OCH₃), 2,75 -

- 2,25 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH,), 2,15, 2,09, 1,85, 1,84 (4s, 15H, 4Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

δ hlavných anomémych protónov: 5,48, 4,37,4,29, 4,23 ppm

Analýza pre Ci₅₆O₄₇H₁₈₈ (2815,51) vypočítané: 66,56 % C, 6,73 % H nájdené: 66,22 % C, 6,75 % H

Príprava 17

Alyl-O-(2-6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-O-(2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-P-D-glukoSchéma 6: Syntéza polysacharidu 29

Príprava 19

0-(2,6-di-O-Benzyl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(2-O-acetyl-6-O-benzYl-3-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4 )-0-(2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)]₃-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-mety]-a,[l-D-glukopyranóza (20).

Postupom, ako bolo uvedené v príprave 15, sa spracuje 720 mg (0,25 mmol) zlúčeniny 19. Látka sa čistí na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy toluén a etylester kyseliny octovej 3 : 2, potom 4:3a získa sa tak 555 mg (78 %) látky 20, [a]_D + 70 (c = 0,94, dichlórmetán). Chromatografia na tenkej vrstve, toluén, etylester kyseliny octovej, R_f 0,43.

Príprava 20 0-(2,6-di-0-Benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)]₃-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-<?-metyl-a,P-D-glukopyranozyltrichlóracetimidát (21).

Postupom ako v príprave 16 sa spracuje 540 g (0,195 mmol) zlúčeniny 20. Produkt sa čistí na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy toluén/etylester kyseliny octovej 3 : 2 + 1 %o trietylamínu. Získa sa tým 455 mg (80 %) imidátovej zmesi 21 s pomerom anomérov α/β = = 27/73.

Chromatografia na tenkej vrstve, toluén/etylester kyseliny octovej 3 : 2, R_f = 0,48.

'H NMR (CDClj) δ 8,60, 8,59 (2s, IH, NH a a β), 7,35 - 7,21 (m, 60H, 12 x C_&H₅, 2,75 - 2,40 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,16, 2,06, 2,04, 1,85, 1,84 (5s, 15H, 4Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Schéma 7: Syntéza oligosacharidu 28 'H NMR (CDC1₃), δ hlavných anomémych protónov 6,50, 5,79,5,51, 5,48,4,29,4,25 ppm.

Príprava 21

Fenyl-2,4,6-tri-O-acetyl-3-O-metyl-1 -tio-a-D-glykopyranozid (22)

V 45 ml toluénu sa rozpustí 5,23 g (14,4 mmol) 1,2,4,6-tetra-O-acetyl-3-O-metyl^-D-glukopyranózy, a po pridaní 3,0 ml (28,8 mmol) tiofenolu sa prikvapkáva 1,77 ml (14,4 mmol) dietyleterátu trifluórboránu, pričom sa reakčná zmes zahrieva 30 minút na 50 °C. Po zriedení dichlórmetánom sa organický roztok prepláchne nasýteným vodným roztokom hydrogeuhličitanu sodného, vodou, vysuší sa a zahustí. Čistením na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy cyklohexán a etylester kyseliny octovej, 5 : 2 sa takto získa 1,00 g (17 %) 22-a a 2,71 g (46 %) 22-β.

22-α. R_f 0,44 cyklohexán/etylester kyseliny octovej 3 : 2, [a]_D + 230 (c = 1, dichlórmetán. ESIMS kladný modul: m/z + chlorid sodný, 435 (M + NA)⁺, + fluorid draselný 451 (M + K)⁺ 'H NMR (CDC1₃) δ 7,46 - 7,27 (m, 5H, C₆H₅), 5,89 (d, IH, J = 5,6 Hz, H-l), 5,05 - 4,97 (m, 2H, H-2 a H-4), 4,49 - 4,42 (m, IH, H-5), 4,25 - 4,18 (m, IH, H-6), 4,05 - 4,00 (m, IH, H-6'), 3,66 (dd, IH, J = 9,5 Hz, H-3), 3,51 (s, 3H, OCH₃), 2,16, 2,12, 2,00 (3s, 9H, 3Ac),

Analýza pre C₁₉H₂₄O₈S (412,46) vypočítané: 55,33 % C, 5,87 % H, 7,77 % S nájdené: 55,25 % C, 5,90 % H, 7,75 % S

OAe

·►

♦ 26

2·

Príprava 22

Fenyl-4,6-O-benzylidén-2,3-di-O-metyl-1 -tio-a-D-glukopyranozid (23)

V 18 ml zmesi metanolu a dichlórmetánu (2 : 1) sa rozpustí 970 mg (2,35 mmol) zlúčeniny 22, pridá sa 150 ml

M roztoku metoxidu sodného a po tridsiatich minútach státia pri laboratórnej teplote sa zmes neutralizuje živicou Dowex 50 (H⁺), filtruje a filtrát sa zahustí.

K roztoku tohto surového produktu v 22 ml acetonitrilu sa pridá 0,7 ml (4,0 mmol) α,α-dimetoxytoluénu a 51 mg kyseliny gáforsulfónovej (0,22 mmol), reakčná zmes sa mieša hodinu, neutralizuje sa pridaním trietylamínu (0,50 ml) a zahustí sa.

Pri chladení na 0 °C sa pridáva do roztoku predchádzajúcej surovej zlúčeniny a 163 μΙ (4,0 mmol) mctyljodidu v 9 ml N,N-dimetylformamidu 73,0 mg (2,80 mmol) hydridu sodného, po hodinovom miešaní reakčnej zmesi sa pridá metanol, produkt sa extrahuje do etylesteru kyseliny octovej, tento roztok sa prepláchne vodou, vysuší a zahusti. V pevnej forme sa takto získa 840 mg (94 %) zlúčeniny 23, 1.1. 178 °C, [a]_D + 330 (c = 1, dichlórmetán. ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 411,4 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 427,4 (M + K)⁺.

'H NMR (CDCIj) δ 7,50 - 7,24 (m, 10H, 2x C₆H₅), 5,71 (d, 1H, J = 3,4 Hz, H-l), 5,52 (s, 1H, C₆H₅CH), 3,62 (s, 3H, OCH₃).

Analýza pre C₂₁H₂₄O₅S (388,48) vypočítané: 64,92 % C, 6,23 % H, 8,25 % S nájdené: 64,87 % C, 6,17 % H, 7,85 % S

Príprava 23 Fenyl-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-1 -tio-a-D-glukopyranozid (24)

Ako to bolo opísané v príprave 4, spracuje sa 792 mg (0,47 mmol) zlúčeniny 23. Produkt sa čistí na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy cyklohexán/etylester kyseliny octovej 7 : 2, potom 2 : 1, a získa sa tak 318 mg (80 %) zlúčeniny 24.

[a]_D + 243 (c = 1, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný, 413 (M + Na)⁺, + fluorid draselný (M + K)⁺ 429.

'H NMR (CDCIj) S 7,52 - 7,22 (m, 10H, 2x C₆H₅), 5,71 (d, 1H, J = 5,3 Hz, H-l), 3,64 a 3,49 (2s, 6H, 2 OCH₃), 3,36 (dd, 1H, H-3).

Analýza pre C₂₁H₂₆O₅S (390,50) vypočítané: 64,59 % C, 6,71 % H, 8,21 % S nájdené: 64,05 % C, 6,88 % H, 7,74 % S.

Príprava 24 Fenyl-O-(2,6-di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 >4)-(9-(2-<9acetyl-6<9- bcnzyl-3-Ο-metyl-p-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-1 -tio-a-D-glukopyranozid (25)

Zmes 436 mg (0,47 mmol) zlúčeniny 13 a 153 mg (0,39 mmol) zlúčeniny 24 sa spracuje podľa spôsobu 1. Čistenie sa vykonáva na kolóne Sephadex LH20, sústava etanol/dichlórmetán, 1:1, získa sa tým 309 mg (68 %) čistej látky 25, [a]_D + 144 (c = 1, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 1175 (M + Na)⁺, + fluorid draselný (M + K)⁺ 1191.

'H NMR (CDCIj), δ 7,51 - 7,21 (m, 25H, 5x C₆H₅), 5,73 (d, 1H, J = 5,2 Hz, H-l), 5,48 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-l), 4,46 (d, 1H,J= 8 Hz, H-l), 3,7, 3,54, 3,5,3,31 (4s, 12H,4 OCH₃), 2,70-2,41 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,16, 2,01 (2s, 6H, lAc a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃). Analýza pre C₆₃H₇₆O₁₈S vypočítané: 65,61 % C, 6,64 % H, 2,78 % S nájdené 65,02 % C, 6,60 % H, 2,72 % S

Príprava 25 Metyl-O-(2,6-di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-(?-(6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranurozyl)-(l-»4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-0-benzyI-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(benzyl

-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-C>-benzyl-a-D-glukopyranozid (27)

Pod argónom a pri ochladení na -25 °C sa pridáva roztok 92 mg (0,38 mmol) N-jódimidu kyseliny jantárovej a 37,5 μΐ (0,38 mmol) kyseliny trifluóroctovej v 22 ml zmesi 1,2-dichlóretánu a dietyléteru (1 : 1) k zmesi 451 mg (0,39 mmol) zlúčeniny 25 a 434 mg (0,31 mmol) zlúčeniny 26 v 7,5 ml 1,2-dichlóretánu v prítomnosti 400 mg molekulárneho sita 4 A, pozri Westerduin a kol., BioOrg. Med. Chem. 2, 1267 (1994). Po 30 minútach sa pridá pevný hydrogenuhličitan sodný, roztok sa filtruje, prepláchne roztokom tiosíranu sodného, vodou, po vysušení sa zahustí. Zvyšok sa čistí na kolóne Sephadexu LH-20, dichlórmetán a etanol (1 : 1), potom na kolóne oxidu kremičitého, cyklohexán a etylester kyseliny octovej 1:1, potom 2 : 3. Získa sa tým 487 mg (64 %) čistej látky 27, [a]_D + 63 (c = 0,54 dichlórmetán). Chromatografia na tenkej vrstve, cyklohexán/etylester kyseliny octovej 2 : 1, Rf = 0,28. ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 2454 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 2469 (M + K)⁺.

‘H NMR (CDCI,) δ 7,38 - 7,2 (m, 50H, lOx C₆H₅), 3,65, 3,52, 3,48, 3,46, 3,44, 3,42, 3,39, 3,30, 3,17 (9s, 27H, 9 OCH₃), 2,75 - 2,4 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,15, 1,98, 1,97, 1,87 (4s, 12H, 3Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Hlavné anomérne protóny: 5,57, 5,47, 5,30, 5,15, 4,57, 4,29, 4,08.

Príprava 26 Metyl-O-(2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-<?-(6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( 1 ->4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -»4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 —>4)-2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranozid (28).

Na odstránenie kyseliny levulovej z 498 mg (0,2 mmol) zlúčeniny 27 sa použije postup podľa spôsobu 2, získa sa tak 402 mg (84 %) zlúčeniny 28, [a]_D + 64 (c = 1, metylénchlorid). ESIMS, kladný modul: m/z 2352,9 (M + amóniový katión)⁺.

'H NMR (CDCIj): δ 7,38 - 7,20 (m, 50H, lOx C₆H₅), 3,67, 3,52, 3,49, 3,46, 3,44, 3,41, 3,40, 3,28, 3,17 (9s, 27H, 9Ac), 2,65 (d, 1H, J = 2,14 Hz, OH), 1,98, 1,96, 1,87 (3s, 9H, 3Ac).

Hlavné anomérne protóny: 5,55, 5,49, 5,30, 5,18, 4,45, 4,31,4,08.

Analýza pre C₁₂₇H₁₅₂O₄| (2334,48) vypočítané: 65,34 % C, 6,56 % H nájdené: 65,40 % C, 6,62 % H

Príprava 27 Metyl-O-(2,6-di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-[O-(2,6-di-O-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2-0-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-3-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)]₄-O-(6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3-6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranozid (29).

Zmes 340 mg (1,16 mmol) zlúčeniny 21 a 256 mg (1,09 mmol) zlúčeniny 28 sa spracuje podľa spôsobu 1. Zvyšok sa čistí na kolóne Toyopearl HW-40 (3,2 na 70 cm, dichlórmetán a etanol, 1 : 1) a získa sa tak 421 mg (78 %) čistého 15-méru 29, [a] + 65 (c = 1, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + fluorid draselný 2584,3 (M + 2K)²⁺, 1736 (M + 3K)³⁺.

Schéma 8: Syntéza polysacharidu 91 (príklad 1) 'H NMR (CDClj δ 7,35 - 7,18 (m, 105H, 21 x C₆H₅), 2,75 - 2,4 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,15, 1,97,1,95, 1,87,1,83 (6s, 24H, 7Ac + O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃). Hlavné anoméme protóny: 5,55, 5,48, 5,30, 5,13, 4,56, 4,23,4,29, 4,22,4,08.

Príprava 28 Metyl-0-(2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-(2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-P-D-glykopyranozyl)-( 1 ->4)]₄-O-(6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1^4)-O-(benzyl-2,3di-0-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-0-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-O-benzyl-ct-D-glukopyranozid (30)

Použitím spôsobu 2 sa spracovaním 342 mg (0,067 mmol) zlúčeniny 29 získa 253 mg (75 %) zlúčeniny 30, M d + 59 (c = 0,92, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + fluorid draselný 2535,6 (M+2K)²⁺.

‘H NMR (CDClj) δ hlavných anomémych protónov: 5,55, 5,50, 5,48, 5,30,4,56, 4,30,4,22, 4,08.

Analýza pre Ο₂₇₅Η₃₂₈Ο₆₅ (4993,37) vypočítané: 65,57 % C, 6,60 % H nájdené: 65,09 % C, 6,57 % H

Príprava 29

Metyl-O-(2,6-di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l ->4)-O-(2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-3-D-(glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1->4)]₆-0-(6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l—>4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-(benzyl-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 ->4)-2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranozid (31).

Postupom podľa spôsobu 1 sa spracuje zmes 32,7 mg (20,8 mmol) zlúčeniny 17 a 80,7 mg (16,3 mmol) zlúčeniny 30. Čistenie na kolóne Toyopearl HW-40, dichlórmctán/etanol, 1:1: výťažok 19-méru zlúčeniny 31.: 60 mg (89 %), [a]_D + 61 (c = 0,82, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný, 2162,4 (M + 3Na)³⁺, + fluorid draselný, 2178,5 (M+3K)³⁺.

‘H NMR (CDClj) δ hlavných anomémych protónov: 5,55, 5,48, 5,30,5,17,4,56,4,28,4,22,4,08.

Schéma 9: Syntéza disacharidu 37

Stl

OAC

Príprava 30

Etyl-<9-(4.6 O benzylidén-p-D-glukopyranozyl)-(1 —>4)-6-O-trityl-l-tio-p-D-glukopyranozid (33).

K suspenzii 50,0 g (0,105 mmol) zlúčeniny 32, pozri Westman J. a Nilsson M., J. Carbohydr. Chem. 14, 949 - 960 (1965) v 520 ml dichlórmetánu sa pod argónom pridá: 35 ml (0,252 mmol) trietylamínu, 29,3 g (0,105 mol) tritylchloridu a 1,28 g (10 mmol) 4-dimetylaminopyridínu. Reakčná zmes sa zahrieva 2 hodiny do varu pod spätným chladičom pri kontrole CCM, po ochladení na laboratórnu teplotu a zriedení pridaním 500 ml dichlórmetánu sa organický roztok preplachuje postupne 10 % vodným roztokom hydrogensíranu draselného, vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného. Po vysušení a zahustení sa filtrovaním na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy toluén/acetón, 65 : 35, neskôr 50 : 50, získa surový produkt 33, dostatočne čistý na použitie v tomto stave v nasledujúcom stupni. Analytická vzorka sa chromatografuje, [ct]_D +53 (c = 0,74, dichlórmetán) - ESIMS, negatívny modul: m/z 715 (m-H). 'H NMR (CD₂C1₂) δ 7,52 - 7,25 (m, 20H, 4x C₆H₅), 5,42 (s, C₆H₅CH), 4,97 (d, J = 3,5 Hz, H-ľ), 4,40 (d, J = 9,6 Hz, H-l), 3,82 (t, J = 9,3 Hz, H-R'), 3,70, 3,68 (m, 2H, H-3, H-4), 3,60 (dd, J = 2,0, 11,0 Hz, H-6a), 3,55 (td, J = 5,2, 9,7, 9,7 Hz, H-5'), 3,49 - 3,45 (m, 3H, H-2, H-2', H-5), 3,38 (dd, J = 10,5 Hz, H-6'), 3,33 (dd, Η-6'b), 3,30 - 3,27 (m, 2H, H-4'-, H-6, 2,90-2,77 (m, 2H, SCH₂CH₃), 1,40 - 1,37 (t, 3H, CH₂CH₃).

Analýza pre C₄₀H₄4O_l0S vypočítané: 67,02 % C, 6,19 % H, 4,47 % S nájdené: 66,83 % C, 6,19 % H, 4,19 % S.

Príprava 31 Etyl-O-(4,6-O-benzylidén-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-2,3-di-č)-mctyl-6-(9-trityl-1 -tio-P-glukopyranozid (34)

Pod argónom sa pridáva po kvapkách 34 ml (0,537 mol) metyljodidu do roztoku 64,1 g zlúčeniny 33 v 600 ml dimetylformamidu, po ochladení na 0 °C sa pridáva

3S pomaly 13,5 g (0,536 mol) hydridu sodného, reakčná zmes alebo lepšie suspenzia sa mieša pri laboratórnej teplote 2 hodiny, ochladí sa na 0 °C, prikvapkáva sa 35 ml metanolu a po dvojhodinovom miešaní sa reakčná zmes zriedi pridaním 500 ml etylesteru kyseliny octovej, potom 600 ml vody. Vodný podiel sa extrahuje do etylesteru kyseliny octovej, organický roztok sa prepláchne vodou, vysuší sa a zahustí. Zvyšok 34 je dostatočne čistý na použitie v ďalšom stupni. Analyticky čistá vzorka sa získa chromatografovaním na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy cyklohexán a acetón, 70 : 30, [a]_D + 45 (c = 0,83, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný, 795 (M + + Na)⁺, + fluorid draselný 811 (M + K)⁺.

’H NMR (CDClj): δ 7,52 - 7,19 (m, 20H, 4x C₆H₅), 5,51 (d, J = 3,3 Hz, H-l), 5,43 (s, C₆H₅CH), 4,45 (d, J = 9,8 Hz, H-l), 3,60, 3,59, 3,49, 3,51 (4s, 12,4, OCH₃), 2,86 (q, 2H, J= 7,5 Hz, SCH₂CH₃), 1,40 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₄₄H₅₂Oi₀S vypočítané: 68,37 % C, 6,78 % H, 4,15 % S nájdené: 68,28 % C, 6,98 % H, 4,09 % S

Príprava 32

Etyl-O-(2,3-di-O-metyl-cc-D-glukopyranozyl)-(l->4)-2,3-di-O-metyl-1 -tio-p-D-glukopyranozid (35)

Dve hodiny sa zahrieva 67,4 g surového produktu 34 v suspenzii v 470 ml 60 % vodného roztoku kyseliny octovej na 80 °C, po ochladení a filtrácii sa reakčná zmes zahustí. K zvyšku sa pridá roztok 940 mg nátriummetoxidu v 200 ml metanolu počas hodiny, roztok sa potom neutralizuje živicou Dowex 50WX4 (H⁺), filtruje, filtrát sa zahusti a čistí na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy toluén/acetón, 60 : 40. Získa sa tak látka 35 vo výťažku 27,9 g, t. j. 60 %, a to v troch etapách. [a]_D + 26 (c = 1,07, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný, 465 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 481 (M + K)⁺.

'H NMR (CDClj) δ 5,62 (d, J = 3,9 Hz, H-l), 4,35 (d, J = = 9,8 Hz, H-l), 3,64, 3,64, 3,59, 3,58 (4s, 12H, 4 OCH₃), 1,29 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₁₈H₃₄O₁₀S . H₂0 vypočítané: 46,94 % C, 7,87 % H, 6,96 % S nájdené: 47,19 % C, 7,72 % H, 6,70 % S

Príprava 33 Etyl-0-(6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-1 -tio-P-D-glukopyranozid (36)

Roztok 5,86 g (13,2 mmol) triolu 35 a 3,21 g (29,1 mmol) N-acetylimidazolu v 120 ml dichlóretánu sa zahrieva 16 hodín do varu pod spätných chladičom. Po pridaní 440 mg (3,96 mmol) N-acctylimidazolu sa zmes mieša 4 hodiny, nechá sa ochladiť na laboratórnu teplotu, po pridaní 2 ml metanolu sa znova mieša hodinu a zriedi sa pridávaním litra dichlórmetánu. Organický roztok sa prepláchne postupne 1 M vodným studeným roztokom kyseliny chlorovodíkovej, studenou vodou, nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, znovu vodou a po vysušení sa zahustí. Chromatografovaním zvyšku použitím sústavy toluén/acetón 3,5 : 1 sa získa diacetylderivát 36 vo výťažku 3,97 g (57 %), [a]_D + 33 (c = 1,90, dichlórmetán). ES1MS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 549 (M + + Na)⁺, + fluorid draselný 565 (M + K)⁺.

‘H NMR(CDC1₃) δ 5,51 (d, J = 3,9, Hz, H-ľ), 4,34 (d, J '= = 9,8 Hz, H-l), 3,64, 3,63, 3,59, 3,56 (4s, 12H, 4OCH₃), 2,11, 2,06 (2s, 6H, 2Ac), 1,31 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₂2H₃₈O₁₂ vypočítané: 50,17 % C, 7,27 % H, 6,09 % S nájdené: 50,15 % C, 7,49 % H, 5,89 % S

Príprava 34 Etyl-O-(6-O-acetyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-1 -tio-β-D-glukopyranozid (37).

Do roztoku 19,4 g (36,8 mmol) diacetylderivátu 36 v 400 ml dioxánu sa pridá pod argónom 7,53 ml (73,5 mmol) kyseliny levulovej, 14,1 g (73,5 mmol) hydrochloridu l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu a 900 g (7,35 mmol) 4-dimetylaminopyridínu, reakčná zmes sa mieša 3,5 hodiny, zriedi sa potom pridaním 1,5 1 dichlórmetánu, roztok sa prepláchne postupne vodou, 10 % vodným roztokom hydrogensíranu draselného, znovu vodou, vodným roztokom (2 %) hydrogenuhličitanu sodného, znovu vodou, a po vysušení sa zahustí. Chromatografovaním zvyšku použitím sústavy dichlórmetán/acetón 97 : 3, potom 79 : 21 sa izoluje takto 21,8 g (95 %) derivátu 37. [a]_D +40 (c = 0,72 dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 647 (N + Na)⁺, + fluorid draselný 663 (M + K)⁺.

'H NMR (CDClj) δ 5,56 (d, J = 3,9 Hz, H-l), 4,35 (d, J = = 9,8 Hz, H-l), 3,64, 3,60, 3,58, 3,55 (4s, 12H, 4OCH₃), 2,76 - 2,71 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,19, 2,08, 2,07 (3s, 9H, 2Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,31 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₂₇H₄₄O₁₄S vypočítané: 51,91 % C, 7,10 % H, 5,13 % S nájdené: 51,88 % C, 7,05 % H, 4,96 % S.

Schéma 10

Syntéza disacharidov 38 a 40

Príprava 35 O-(6-O-Acetyl-4-CMevulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a,fl-D-glukopyranozyl-trichlóracetimidát (38)

Do roztoku 9,53 g (15,3 mmol) tioglykozidu 37 v zmesi 180 ml dichlórmetánu a dietyléteru (1 : 1), 1,4 ml (76,3 mmol) vody, 6,84 g (30,5 mmol) N-jódimidu kyseliny jantárovej sa pridá 0,51 g (1,98 mmol) striebornej soli kyseliny trifluóroctovej. Po pätnástich minútach (kontrola CCM) sa pridá 5 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, reakčná zmes sa zriedi pridaním 1,5 litra dichlórmetánu, všetko sa prepláchne vodou, 1 M vodným roztokom tiosíranu sodného a 2 % vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Po vysušení a zahustení sa zvyšok chromatografuje na kolóne oxidu kremičitého (etylester kyseliny octovej/cyklohexán, 80 : 40, potom (100 : 0), získaný pevný zvyšok sa hneď použije v ďalšom stupni bez charakterizovania. K roztoku 7,88 g (13,6 mmol) práve opísanej látky v 150 ml dichlórmetánu sa pod argónom pridá 7,08 g (21,7 mmol) uhličitanu cézneho a 6,81 ml (67,9 mmol) trichlóracetonitrilu, po 40-tich minútach (kontrola CCM) sa zmes filtruje, zahustí a čistí: toluén/acetón 85 : 15, získa sa tak 9,16 g imidátu 38 (83 % v dvoch stupňoch). [a]_D + 118 (c = 1,00, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 746 (M + Na)⁺, 741 (M + + NH₄)⁺.

'h NMR (CDClj): δ 8,66, 8,65 (2s, IH, a a β: N=H), 6,52 (d, J = 3,6 Hz, H-la), 5,70 (d, J = 7,5 Hz, H-lβ), 5,58 (d,

J = 3,7 Hz, H-l), 2,78 - 2,57 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,18, 2,07, 2,06 (3s, 9H, 2Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Analýza pre C₂7H₄₀C1₃NO|₅.0,5 H₂O vypočítané: 44,18 % C, 5,63 % H, 1,98 % N nájdené: 44,14 % C, 5,61 % H, 1,97 % N

Príprava 36 2-(Trimetylsilyl)etyl-O-(6-O-acetyl-4-O-levulinyl-2,3-di-<7-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-6-<9-acetyl-2,3-di-O-metyl-a,P-D-glukopyranozid (39)

Podľa spôsobu 3 sa vykoná reakcia 10,6 g (16,94 mmol) tioglykozidu 37 s 4,8 ml (33,90 mmol) 2-(trimetylsilylj-etanolu v 105 ml zmesi dichlórmetánu a dietyléteru 1 : 2. Zvyšok sa čistí chromatograficky použitím sústavy acetón/dichlórmetán, 1:1a týmto spôsobom sa získa 9,80 g (85 %) zlúčeniny 39 vo forme zmesi oboch možných anomérov, α/β 65 : 35. ES1MS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 703 (M + Na)⁺.

'H NMR (CDClj): δ 5,58 (d, J = 3,9 Hz, H-ľ), 4,94 (d, J = = 3,5 Hz, H-la), 4,26 (d, J = 7,7 Hz, Η-1β), 2,76 - 2,56 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,08, 2,05 (3s, 9H, 2Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,18 - 0,88 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,02 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃). Analýza C₃oH₅₂0₁₅Si vypočítané: 52,92 % C, 7,69 % H nájdené: 53,29 % C, 7,75 % H.

Príprava 37 2-(Trimetylsilyl)etyl-O-(6-O-acetyl-2,3-di-(?-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a^-D-glukopyranozid (40)

Podľa spôsobu 2 sa pôsobí na 9,41 g (13,82 mmol) zlúčeniny 39 octanom hydrazínu (10 mol/mol v zmesi toluénu a etanolu 1 : 2 (21 ml/mmol). Chromatografovaním zvyšku v sústave acetón/toluén 60 : 40 sa takto pripraví 4,81 g (60 %) zlúčeniny 40a. ako aj 3,06 g (37 %) zmesi 40 α/β, 40α : [a]_D + 132 (c = 0,61, dichlórmctán), ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 605 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 621 (M + K)⁺ ’H NMR (CDC1₃) δ 5,5 (D, J = 3,8 Hz, H-ľ), 4,95 (d, J = = 3,6 Hz, H-l), 2,10, 2,08 (2s, 6H, 2Ac), 1,16 - 0,89 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,02 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃). Analýza pre C₂5H₄₈O|₃Si vypočítané: 51,53 % C, 7,96 % H nájdené: 51,37 % C, 8,06 % H

Schéma 11

Syntéza tetrasacharidu 41

Príprava 38 2-(Trimetylsilyl)etyl-O-(6-O-acetyl-4-O-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4-[O-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-]₂-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozidu (4Ί).

Podľa spôsobu 3 sa spracuje 4,21 g (6,74 mmol) tioglykozidu 37 a 3,57 g (6,13 mmol) glykozylového akceptora v zmesi 105 ml dichlórmetánu a dietyléteru (1 : 2). Reakčný zvyškový produkt sa čistí chromatografovaním na oxide kremičitom použitím sústavy acetón/cyklohexán 3 : 1, potom 9:1a získa sa tak 4,81 g (69 %) zlúčeniny 4JL, [a]_D + + 143 (c = 0,56, dichlórmetán). LSIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 1167 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 1183 (M + K)⁺.

‘H NMR (CDClj) δ 5,57 (d, J = 3,9 Hz, H-ľ”), 5,44, 5,41 (2d, J = 3,8 Hz, H-l”, H-ľ), 4,96 (d, J = 3,6 Hz, H-l), 2,78 - 2,58 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,18, 2,12, 2,12, 2,09, 2,06 (5s, 15H, 4Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,21 - 0,97 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,03 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pre CsoH^C^Si vypočítané: 52,44 % C, 7,39 % H nájdené: 52,29 % C, 7,48 % H

Schéma 12

Syntéza tetrasacharidu 42

CJe

CAc

Príprava 39 Etyl-O-(6-O-acetyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(6-O-acety 1-2,3 -di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl-( 1 ->4)]₂-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-1 -tio-P-D-glukopyranozid (42)

Podľa spôsobu 1 sa vykoná reakcia roztoku 1,10 g (1,52 mmol) imidátu 38 a 806 mg (1,38 mmol) glykozylového akceptora 36 v 22 ml zmesi dichlórmetánu a dietyléteru. Čistenie chromatografovaním na oxide kremičitom, sústava etylester kyseliny octovej a cyklohexán 2,5 : 1, potom 3:1. Získa sa tak 1,12 g (71 %) zlúčeniny 42, [a]_D + 95 (c = 1,00, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul:

m/z + chlorid sodný 1111 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 1127(M + K)⁺.

'H NMR (CDClj) δ 5,55 (d, J = 3,9 Hz, H-ľ), 5,39, 5,37 (2d, J = 3,8 a 3,9 Hz, H-l a H-ľ), 4,34 (d, J = 9,7 Hz, H-1), 2,84 - 2,51 (m, 6H, SCH₂CH_3j O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CHj), 2,17, 2,10, 2,09, 2,08, 2,04 (5s, 15H, 4Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,30 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH₂CHj).

Analýza pre C₄7H7₆O₂₆S vypočítané: 51,83 % C, 7,03 % H, 2,94 % S nájdené: 51,66 % C, 7,02 % H, 2,94 % S

Schéma 13: Syntéza polysacharidu 47

Príprava 40 2-(Trimetylsilyl)etyl-[O-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl-(l—>4)-]₃-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (43).

Obdobným spôsobom sa spracuje, ako bolo opísané v príprave 37, 4,71 g (4,11 mmol) zlúčeniny 44, aby sa tak získal po chromatografovaní na kolóne použitím sústavy cyklohexán/acetón, 3 : 2, derivát vzorca 43 vo výťažku 4,11 g (95 %). [a]_D +154 (c = 0,63, dichlórmetán). ESIMS kladný modul: m/z + chlorid sodný 1069 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 1085 (M + K)'.

'H NMR (CDClj) δ 5,46, 5,45, 5,41 (2d, 3H, J = 3,9 Hz, H-ľ, H-l, H-ľ), 4,95 (d, J= 3,5 Hz, H-l), 2,81 (d, J = 4,4 Hz, OH), 2,11, 2,09, 2,08 (3s, 12H, 4Ac), 1,19 - 0,97 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,03 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃). Analýza pre C₄₅H₇₈O25Si vypočítané: 51,61 % C, 7,51 % H nájdené: 51,39% C, 7,54 % H

Príprava 41 2-(Trimetylsilyl)etyl-O-(6-O-acctyl-4-(9-lcvulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-[0-(6-0-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -»4)-]₆-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (44)

Podľa postupu 38 sa vykoná reakcia 3,86 g (3,54 mmol) tioglykozidu 42 a glykozylového akceptora 43 v množstve 3,60 g (3,44 mmol). Chromatografovaním s použitím sústavy dichlórmetán/acetón 7 : 2, potom 2: 1, sa získa 5,71 g látky 44 (80 %), [a]_D +161 (c = 0, 65, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 2072,8, hmotnosť chemická = 2074,2, hmotnosť experimentálna = 2074 + 1 u. m. a.

’H NMR (CDClj) δ 5,54 (d, J = 3,8 Hz, H-l, jednotka NR), 5,47 - 5,40 (m, 6H, H-l), 4,95 (d, J = 3,7 Hz, H-l, jednotka R), 2,84 - 2,51 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,13 , 2,12, 2,11, 2,11, 2,08, 2,05 (7s, 27H, 8Ac a O(C=O)CH,CH₂(C=O)CH₃), 1,18 - 0,97 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,03 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pre C9oH₁₄₆O_slSÍ vypočítané: 52,12 % C, 7,19 % H nájdené: 51,98% C, 7,25 % H

Príprava 42 2-(Trimetylsilyl)etyl-[O-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-]₇-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (45)

Pri ochladení na 0 °C sa pridáva 7,3 ml 1 M roztoku hydrazínhydrátu v zmesi kyseliny octovej a pyridínu (3 : 2) k roztoku 3,00 g (1,45 mmol) zlúčeniny 44 v 5 ml pyridínu. Reakčná zmes sa mieša 20 minút, zahustí sa, zvyšok sa zriedi pridaním 400 ml dichlórmetánu, tento roztok sa prepláchne 10 % vodným roztokom hydrogensíranu draselného, vodou, 2 % vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, znovu vodou, vysuší sa, zahustí a chromatografovaním zvyšku sa takto získa 2,43 g (85 %) zlúčeniny 45, [a]_D + 167 (c = 0,57, dichlórmetán), ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 1974,8, hmotnosť chemická = 1976,1, hmotnosť experimentálna = 1975,4 ± ± 2 u. m. a.

’H NMR (CDClj) δ 5,47 - 5,40 (m, 7H, H-l), 4,95 (d, J = = 3,7, H-l, jednotka R), 2,80 (d, J = 4,4 Hz, OH), 2,13, 2.11, 2,10, 2,08, 2,07 (5s, 24H, 8Ac), 1,18 - 0,97 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,03 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH,)₃). Analýza pre C₈5H₁₄₂O₄₉Si vypočítané: 51,66 % C, 7,24 % H nájdené: 51,32% C, 7,26% H

Príprava 43 2-(Trimetylsilyl)etyl-O-(6-O-acetyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-ct-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)] _]0-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (46)

Obdobne ako v príprave 38 sa vykoná reakcia 1,35 g (1,24 mmol) zlúčeniny 42 s 2,38 g (1,20 mmol) zlúčeniny 45. Chromatografovaním reakčného zvyšku použitím sústavy cyklohexán/acetón (4 : 3) sa získa 2,56 g (71 % zlúčeniny 46, [a]_D + 166 (c = 0,88, dichlórmetán), ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 3001,3, hmotnosť chemická = 3003, 2, hmotnosť experimentálna = 3004 ± ± 1 u. m. a.

’H NMR (CDClj) δ 5,54 (d, J = 3,8 Hz, H-l, jednotka NR), 5,47 - 5,40 (m, 10H, H-l), 4,95 (d, J = 3,7 Hz, H-l jednotka NR), 2,81 - 2,51 (m, 4Η, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,13, 2,12, 2,11, 2,11, 2,08, 2,05 (7s, 39H, 12Ac a 0(C=0)CH₂CH₂(CO)CHj), 1,17 - 0,96 (m, 2H, OCH₂CH₂Sí(CH₃)j), 0,03 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CHj)₃).

Analýza pre Ci₃₀H₂₁₂O7₅Si vypočítané: 51,99 % C, 7,12 % H nájdené: 51,63% C, 7,12% H

Príprava 44 (6-O-Acetyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-]₁₀-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a,P-D-glukopyranozyl-trichlóracetimidát (47).

(a) Počas i ,5 hodiny sa mieša pri kontrole CCM roztok 400 mg (0,1333 mmol) glykozidu 46 v 2 ml zmesi kyseliny trifluóroctovej a dichlórmetánu 2:1. Zmes sa riedi pridaním 12 ml zmesi toluénu a n-propylesteru kyseliny octovej 2:1, zahustí sa a znovu odparí pridaním 10 ml toluénu a to sa opakuje celkom 5x. Chromatografíckým čistením zvyšku použitím sústavy acetón/cyklohexán 4 : 3 sa získa 364 mg pevnej látky.

(b) Takto získaná pevná látka sa rozpustí v 2,5 ml dichlórmetánu, pridá sa 65 mg (0,200 mmol) uhličitanu cézneho a 63 ml (0,620 mmol) trichlóracetonitrilu, reakčná zmes sa mieša 2,5 hodiny, po filtrácii celitom sa zahustí a zvyšok sa čistí na kolóne oxidu kremičitého použitím sústavy cyklohexán/acetón/trietylamín 50 : 50 : 0,1. Pripraví sa tak 348 mg (86 %) imidátu 47 [ct]_D + 185 (c = 0,91, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 3044,1, hmotnosť chemická 3047,3, hmotnosť experimentálna 3046,9 ± 0,2 u. m. a.

’H NMR (CD₂C1₂) δ 8,61, 8,58 (2s, IH, a a β N=H), 6,35 (d, ] = 3,7 Hz, H-l a jednotky R), 5,59 (d, J = 7,5 Hz, H-l β jednotky R), 5,38 (d, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR), 5,32 - 5,25 (m, 10H, H-l), 2,64 - 2,40 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,02, 1,96, 1,95, 1,94, 1,93, 1,89 (6s, 39H, 12Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CHj). Analýza pre C₁₂₇H₂₀₀CljNO₂₅ vypočítané: 50,06 % C, 6,61 % H, 0,46 % N nájdené: 49,93 % C, 6,52 % H, 0,42 % N

Schéma 14: Syntéza oligosacharidu 50

Príprava 45 (6-<9-Acetyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -»4)-[0-(6-(9-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₂-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a,3-D-glukopyranozyl-trichlóracetimidát (48)

Obdobne ako pri postupe 44 sa spracuje 200 mg (0,174 mmol) zlúčeniny 41. Reakčná zmes sa čistí chromatografovaním na kolóne oxidu kremičitého s použitím sústavy toluén-acetón 3:2a získa sa tak 230 mg (77 %) imidátu 48. ESIMS, kladný modul: m/z chlorid sodný 1210 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 1226 (M + K)⁺.

'H NMR (CDClj) δ 8,66 - 8,64 (2s, IH, <x a β N=H), 6,51 (d, J = 3,6 Hz, H-la), 5,71 (d, J = 7,5 Hz, Η-1β), 2,90 - 2,52 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,11, 2,11,2,09, 2,04 (5s, 4Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₂).

Príprava 46 Metyl-O-(6-O-acetyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[O-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl-( 1 ->4)]₃-O-(benzy 1-2,3 -di-O-metyl-β-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-(?-(3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(benzyl-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 ->4)-2,3,6-tri-O-benzyl-<x-D-glukopyranozid (49).

Obdobne ako to bolo opísané v príprave 39 sa spracuje 73 mg (0,061 mmol) imidátu 48 a 82 mg (0,059 mmol) glykozylového akceptora, produkt sa čistí na kolóne Sephadexu LH-20 chromatografovaním s použitím sústavy dichlórmetán/etanol/ 1:1, potom na kolóne oxidu kremičitého s použitím sústavy tolucn/acetón 3:1a získa sa tak mg (69 %) zlúčeniny 49. [a]_D + 95 (c = 1,01, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 2414,97, hmotnosť chemická = 2416,54, hmotnosť experimentálna = 2416,2.

‘H NMR (CDClj) δ 7,43 - 7,20 (m, 30H, 6x C₆H₅), 5,55 (d, J = 3,9 Hz, H-l-jednotky NR), 5,50 (d, J = 3,9 Hz, H-l jednotky NR-3), 5,44, 5,38 (2d, J = 3,7 a 3,9 Hz, H-l-jednotky NR-l, jednotky NR-2), 5,29 (d, J = 6,8 Hz, H-l jednotky R-1), 5,17 (d, J = 3,5 Hz, H-l jednotky R-2), 4,56 (d, J = = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,10 (d, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-3), 2,81 - 2,50 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,15, 2,11, 2,09, 2,05, 2,00 (7s, 21H, 6Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Analýza pre C₁₂₀H_15SO₅₁ vypočítané: 59,63 % C, 6,59 % N nájdené 59,23 % C, 6,58 % H

Príprava 47 Mctyl-[O-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)]₄-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl^-D-glukopyranurozyl)-( 1 ->4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-(benzyl-2,3-di-(?-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l->4)-2,3,6,-tri-0-benzyl-a-D-glukopyranozid (50).

Postupom ako v príprave 37 sa spracuje 120 mg (0,050 mmol) oktasacharidu 49. Čistením na kolóne oxidu kremičitého v sústave toluén/acetón 3 : 1 sa získa takto 95 mg (83 %) zlúčeniny 50, [a]_D + 80 (c = 0,62, dichlórmetán), ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 2316,9, hmotnosť chemická = 2318,4, hmotnosť experimentálna = 2318,2 ± 0,4 u. m. a.

’H NMR (CDCIj) δ 7,42 - 7,12 (m, 30H, 6x C₆H₅), 5,50, 5,46, 5,43, 5,40 (4d, J = 3,9, 3,9, 3,7, 3,7 Hz, H-l-jednotky NR, jednotky NR-1, jednotky NR-2, jednotky NR-3), 2,14, 2,10, 2,09, 2,08, 2,00, 1,88 (6s, 18H, 6Ac).

Analýza pre CnsH^O^ vypočítané: 59,57 % C, 6,60 % H nájdené: 59,49% C, 6,61 %H

Schéma 15

Syntéza polysacharidu 97 (príklad 4)

SI

Príprava 48

Metyl-O-(6-O-acetyl-4-CMevulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1^4)]₁₅-O-(benzyl-2,3-di-(?-metyl-3-D-glukopyranurozyl)-(l—>4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —»4)-<9-(benzyl-2,3-di-C*-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l ->4)-2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranozid (51)

Podľa prípravy 39 sa spracuje 84 mg (0,027 mmol) imidátu 47 s 62 mg (0,027 mmol) glykozylového akceptora 50. Zvyšok sa čistí najskôr na kolóne Toyopearl HW-40, potom na kolóne oxidu kremičitého v sústave cyklohexán/acetón 1:1a získa sa tak 71 mg (51 %) derivátu 51, [a]_D + 136 (c = 0,95, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 5200,11, hmotnosť chemická = 5203,39, hmotnosť experimentálna = 5203,5.

'H NMR (CDClj) δ 7,42 - 7,18 (m, 30H, 6x C₆H₅), 5,54 (d, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR), 5,51 - 5,40 (m, 15 H-l), 5,30 (d, J = 6,8 Hz, H-l jednotky R-l), 5,17 (d, J = 3,5 Hz, H-l jednotky R-2), 4,56 (d, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,09 (d, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-3), 2,85 - 2,53 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,16, 2,13, 2,11, 2,08, 2,05, 2,00, 1,88 (8s, 57H, 18Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)-CH₃).

Analýza pre C₂₄oH₃₅₀0₁₂₃.4 H₂O vypočítané: 54,64 % C, 6,84 % H nájdené: 54,51 % C, 6,79 % H

Schéma 16 Syntéza disacharidu 57

$7

Príprava 49 Etyl-0-(4,6-0-p-metoxybenzylidén-a-D-glukopyranozyl-(1 ->4)-1 -tio-P-D-gl ukopyranozid

Pod argónom sa pridáva pri teplote +5 °C 35,8 ml (0,21 mol) dimetylacetálu anizaldehydu a 4,44 g (19,1 mmol kyseliny gáforsulfónovej do roztoku 73,89 g (0,19 mol) zlúčeniny 52, pozri Diek. W. E. Jr a Hodge J. E., Methods in Carbohydrate Chemistry 7, 15 - 18 (1976), v zmesi 990 ml acetonitrilu a N,N-dimetylformamidu 3,5 : 1. Pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes mieša 1,5 hodiny, neutralizuje sa pridaním 2,96 ml (21,0 ekv) trietylamínu, zahustí sa a získaný sirup sa čistí chromatografovaním na kolóne oxidu kremičitého v sústave dichlórmetán/metanol 100 : 0, potom 50 : 50 a získa sa tak 58,6 g (61 %) zlúčeniny 53, [ot]_D + 47 (c = 1,03, metanol). ESIMS, negatívny modul: m/z 503 (M + H)⁺.

'H NMR (CDjOD) δ 7,41, 6,89 (2d, 4H, CH₃OC₆H₄), 5,51 (s, CHC₆H₄), 5,20 (d, J = 3,6 Hz, H-ľ), 4,39 (d, J = 7,1 Hz, H-l), 3,78 (s, 3H, CH₃OC₆H₄), 2,75 (q, 2H, J = 7,0 Hz, SCH₂CH₃), 1,29 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₂2H₃2O_nS vypočítané: 52,37 % C, 6,39 % H, 6,35 % S nájdené: 52,15 % C, 6,61 % H, 5,84 % S

Príprava 50 Etyl-0-(2,3-di-0-acety-4,6-p-metoxybenzylidén-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-2,3,6-tri-O-acetyl-1 -tio-3-D-glukopyranozid (54)

Do suspenzie 47,22 g (93,6 mmol) látky 53 v 450 ml dichlórmetánu sa prikvapkáva pri ochladení na 0 °C 65 ml (0,47 mol) trietylamínu a 89 ml (0,94 mol) anhydridu kyseliny octovej. Ďalej sa pridá 5,71 g (46,8 mmol) 4-dimetylaminopyridínu a reakčná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote 90 minút. Preruší sa pridaním 45 ml (1,12 mol) metanolu, nasleduje prepláchnutie s použitím postupne 10 % vodného roztoku hydrogensíranu draselného, vodou, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a znovu vodou. Po vysušení sa zmes zahustí a kryštalizovaním zvyšku zo zmesi cyklohexán a etylester kyseliny octovej sa izoluje 64,9 g (97 %) zlúčeniny 54, [a]_D + 21 (c = 1,00, dichlórmetán), 1.1. 213 - 215 °C. ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 737 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 753 (M + K)⁺ ’H NMR (CDClj) δ 7,34, 6,86 (2d, 4H, CH₃OC₆H₄), 5,43 (s, CHC₆H₄), 5,34 (d, J = 4,1 Hz, H-ľ), 4,54 (d, J = 9,9 Hz, H-l), 3,78 (s, 3H, CH₃OC₆H₄), 2,74 - 2,60 (m, 2H, SCH₂CH₃), 2,10, 2,06, 2,03, 2,01 (4s, 15H, 5Ac), 1,26 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₃₂H₄₂O|₆S vypočítané: 53,78 % C, 5,92 % H, 4,49 % D nájdené: 53,74 % C, 6,08 % H, 4,40 % S

Príprava 51 Etyl-O-(2,3-di-O-acetyl-4-p-metoxybenz.yl-cc-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-2,3,6-tri-O-acctyľ 1 -tio- β-D-glukopyranozid (55) a etyl-O-(2,3-di-O-acetyl-4-p-metoxybenzyl-a-D-glukopyranozyI)-(l->4)-2,3-di-O-acetyl-l-tio-P-D-glukopyranozid (56).

Hodinu sa pod argónom v prostredí 810 ml toluénu pretrepáva suspenzia 25,0 g (35,0 mmol) látky 54, 20,4 g (0,28 mol) komplexu boránu s trimetylamínom a 33 g molekulárneho sita 4 Ä. Po ochladení na 0 °C sa pomaly pridáva 14,0 g (0,11 mol) chloridu hlinitého, pri kontrole pomocou CCM sa všetko mieša 25 minút, potom sa reakčná zmes preleje do studeného vodného 20 % roztoku hydrogensíranu draselného, všetko sa mieša pri ochladení na 0 °C hodinu, filtruje ďalej cez celit. Organická fáza sa prepláchne vodou, vodným 2 % ným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, znovu vodou, vysuší sa a roztok sa zahustí. Čiste nim zvyšku na kolóne oxidu kremičitého sa takto získa 7,37 g (29 %) látky 55 a 1,36 g (6 %) látky 56. Analyticky čistá vzorka látky 55 sa získa kryštalizovaním zo zmesi cyklohexánu a etylesteru kyseliny octovej, [a]_D + 30 (c = =' 1,00, dichlórmetán), t. t. 151 - 153 °C. ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 739 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 755 (M + K)'.

'H NMR (CDClj) δ 7,19, 6,87 (2d, 4H, CH₃OC₆H₄), 5,36 (d, J = 3,5 Hz, H-ľ), 4,54 (s, 2H, C₆H₄CH₂), 4,53 (d, J = = 9,0 Hz, H-l), 2,70 - 2,65 (m, 2H, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₃₂H₄₂O|(,S vypočítané: 53,62 % C, 6,19 % H, 4,47 % S nájdené 53,57 % C, 6,21 % H, 4,43 % S zlúčenina 56, [a]_D + 19 (c = 1,11, dichlórmetán), ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 697 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 713 (M + K)⁺.

'H NMR (CDC1₃) δ 7,17, 6,84 (2d, 4H, CH₃ OC₆ H₄), 5,36 (d, J = 4,5 Hz, H-ľ), 4,54 (D, J = 10,1 Hz, H-l), 4,49 (s, 2H, C₆H₄CH₂), 2,69 - 2,64 (m, 2H, SCH₂CH₃), 2,02, 2,01, 2,00,1,96 (4s, 12H, 4Ac), 1,25 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₃₀H₄₂O|jS vypočítané: 53,40 % C, 6,27 % H, 4,75 % S nájdené: 53,29 % C, 6,39 % H, 4,53 % S

Príprava 52

Schéma 17 - Syntéza trisacharidu 62

Etyl-<?-(2,3-tri-O-acctyl-4-p-metoxybenzyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-2,3,6-tri-O-acetyl-1 - ti o-(!-D-gl u kopyranozid (57)

Pri teplote 0 °C sa pridáva 1,47 ml (15,5 mmol) anhydridu kyseliny octovej do zmesi 5,6 g (7,77 mmol) látky 55, 1,19 ml (8,54 mmol) trietylamínu a 190 mg (1,55 mmol) 4-dimetylaminopyridínu v 40 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa mieša 40 minút (kontrola CCM) pri laboratórnej teplote, zriedi sa pridaním 50 ml dichlórmetánu a prepláchne sa studeným vodným 10 % roztokom hydrogensíranu draselného, vodou, nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a znovu vodou. Po vysušení a zahustení sa čistením na kolóne oxidu kremičitého (etylester kyseliny octovej a cyklohexán, 35 : 65) získa 5,66 g (96 %) látky 57 [a]_D + 44 (c = 1,03, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 781 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 797 (M + K)⁺.

'H NMR (CDC1₃) δ 7,15, 6,85 (2d, 4H, CH₃OC₆H₄), 5,30 (d, J = 4,2 Hz, H-ľ), 4,53 (d, J = 10,0 Hz, H-l), 2,69 - 2,64 (m, 2H, SCH₂CHj), 2,09, 2,07, 2,04, 2,01, 2,00, 1,98 (6s, 18H, 6Ac), 1,25 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pre C₃₄H₄₆O₁₇S vypočítané: 53,82 % C, 6,11 % H, 4,22 % S nájdené: 53,77 % C, 6,24 % H, 4,09 % S

C8n

Príprava 53 Etyl-4,6-O-benzylidén-2,3-di-O-metyl-1 -tio-p-D-glukopyranozid (59).

Pri teplote 0 °C sa vloží 500 mg (19,9 mmol) hydridu sodného do zmesi 2,59 g (8,29 mmol) zlúčeniny 58, pozri Bočkov A. F., Izvest. Akad. Náuk SSSR, Ser. Chim. 1968, č. 1, 179, a 1,70 ml (19,9 mmol) metyljodidu v 25 ml N,N-dimetylformamidu, teplota reakčnej zmesi sa nechá vystúpiť na 20 °C, zmes sa mieša pri kontrole CCM 30 minút, pridá sa metanol a všetko sa vleje do vody. Po extrakcii do etylesteru kyseliny octovej sa organický roztok prepláchne postupne 1 M vodným roztokom tiosíranu sodného, vodou, vysuší sa a zahustí. Triturovaním zvyšku s dietyléterom sa takto získa 0,42 g (15 %) zlúčeniny 59. Látka sa čisti chromatografovaním na stĺpci oxidu kremičitého s použitím zmesi toluénu a acetónu (12 : 1) s tým, že materské lúhy po kryštalizácii umožňujú získanie ešte jednej frakcie látky 59 v množstve 1,6 g, čo zodpovedá celkovému výťažku 71 %, t. t. 108 °C, [a]_D -78 (c = 1,00 dichlórmetán). LSIMS, kladný modul: m/z tioglycerol + chlorid sodný 363 (M + + Na)⁺, tioglycerol + fluorid draselný 379 (M + K)⁺.

'H NMR (CDClj) δ 7,51 - 7,33 (m, 5H, C₆H₅) 5,52 (s, IH, C₆H₅CH), 4,45 (d, IH, J = 9,8 Hz, H-l), 3,64 (s, 3H, OCHj), 3,62 (s, 3H, OCHj), 2,78 - 2,88 (m, 2H, SCH₂CH₃), 1,31 (t, 3H, J = 2,7 Hz, SCH₂CH₃).

Analýza pre Ci₇H₂₄O₅S (340,44) vypočítané: 59,98 % C, 7,11 % H, 9,42 % S nájdené: 59,91 % C, 7,15 % H, 8,96 % S

Príprava 54 2-(Trimetylsilyl)etyl-4,6-O-benzylidén-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (60).

V zmesi dietyléteru a dichlórmetánu, 345 ml (2 : 1) sa rozpustí 23,0 g (67,5 mmol) zlúčeniny 59 a 19,4 ml (135 mmol) 2-(trimetylsilyl)etanolu; po pridaní molekulárneho sita 4 Ä sa reakčná zmes mieša hodinu pri 25 °C, pridá sa 49,7 g (220 mmol) N-jódimidu kyseliny jantárovej, potom pri 0 °C 2,20 g (8,78 mmol) striebornej soli kyseliny trifluóroctovej a zmes sa nechá miešať 20 minút (kontrola CCM). Po pridaní hydrogenuhličitanu sodného a zriedení dichlórmetánom sa zmes filtruje cez celit, filtrát sa prepláchne postupne 1 M vodným roztokom tiosíranu sodného, vodou, vysuší sa a zahustí. Čistením na kolóne oxidu kremičitého s použitím sústavy cyklohexán a etylester kyseliny octovej 15:1, potom 5 : 1, sa takto pripraví 4,20 g (15 %) 60 β a 8,40 g (31 %) 60 a.

Zlúčenina 60 a: [a]_D + 96 (c = 0,4, dichlórmetán), ESIMS, kladný modul: m/z 419 (M + Na)⁺, 435 (M + K)⁺ ’H NMR (CDClj) 7,52 - 7,35 (m, 5H, C₆H₅), 5,54 (s, IH, C₆H₅CH), 4,98 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l), 3,64 (s, 3H, OCHj), 3,62 (s, 3H, OCHj), 1,24 - 0,06 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CHj)₃), 0,00 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)j). Analýza pre C₂₀H₃₂O₆S (396,56) vypočítané: 60,58 % C, 8,13 % H nájdené: 60,26 % C, 8,39 % H

Príprava 55 2-(Trimetylsilyl)-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (61)

V 154 ml dichlórmetánu sa rozpustí 21,1 g zlúčeniny 60. a pri laboratórnej teplote sa pridá 34 ml (213 mmol) trimetylsilánu, pričom sa prikvapkáva zmes 16,3 ml (213 mmol) kyseliny trifluóroctovej a 0,49 ml (3,47 mmol) anhydridu kyseliny trifluóroctovej. Po dvoch hodinách státia sa pridá 1 M vodný roztok hydroxidu sodného až do dosiahnutia alkalickej oblasti pH; po dekantovani sa extrahuje vodná fáza do etylesteru kyseliny octovej, organické roztoky sa spoja, celok sa vysuší a zahustí. Zvyšok sa čistí na kolóne oxidu kremičitého s použitím sústavy dichlórmetán a acetón, 14:1, potom 12:1a získa sa tak 12,5 g (59 %) zlúčeniny 61, [a]_D + 100 (c = 1,45, dichlórmetán).

¹ H NMR δ 7,40 - 7,20 (m, 5H, C₆H₃), 4,98 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-l), 3,63 (s, 3H, OCHj), 3,49 (s, 3H, OCHj), 1,14 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CHj)₃), 0,00 (s, 9H. CH₂CH₂Si(CHj)j).

Analýza pre C₂₀H₃₀O₆Si (398,58) vypočítané: 60,27 % C, 8,80 % H nájdené 60,15 % C, 8,61 % H

Príprava 56 2-(Trimetylsilyl)etyl-O(2,3,6-triO-acetyl-4-O-p-metoxybenzyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-(?-acetyl-(l-D-glukopyranozyl)-(l->4)-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (62).

Zo zmesi 19,1 g (25,1 mmol) tioglykozidu 57 a 7,5 g (18,7 mmol) glykozylového akceptora 61 sa získa podľa spôsobu 3 po prečistení na kolóne oxidu kremičitého (dichlórmetán a acetón, 20 : 1, potom 10 : 1) 19,7 g (95 %) zlúčeniny 62, [ot]_D + 90 (c = 1,15 (dichlórmetán).

Analýza pre C₅₂H₇₄O₂₃Si (1095,24) vypočítané: 57,03 % C, 6,81 % H nájdené: 57,38 % C, 6,85 % H

Schéma 18 - Syntéza oligosacharidu 66

Príprava 57 2-(Trimetylsilyl)etyl-O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozid (63).

Podľa spôsobu 4 sa získa z 19,7 g (18,0 mmol) zlúčeniny 62 po čistení na kolóne oxidu kremičitého (toluén/acetón 3:1, potom 2:1) zlúčenina 63, výťažok 11,2 g (79 %, rátané na 3 postupné stupne), [a]_D + 95 (c = 1,15, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul, m/z + chlorid sodný 829 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 845 (M + K)⁺.

‘H NMR (CDClj) δ 7,34 - 7,25 (m, 5H, C₆H₅), 5,60 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l), 4,96 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l), 4,29 (d, IH, J = 8,0 Hz, H-ľ), 1,08 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Príprava 58 2-(Trimetylsilyl)etyl-O-(2,3,6-tri-O-acetyl-4-O-p-metoxybenzyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-acetyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( I ->4)-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (64)

Postupom podľa spôsobu 3 sa spracuje zmes 6,87 g (9,10 mmol) tioglykozidu 57 a 6,67 g (8,30 mmol) glykozylového akceptora 63. Produkt sa čistí chromatografovaním na kolóne oxidu kremičitého v sústave toluén/acetón, 2:5a získa sa tak 10,7 g (86 %) zlúčeniny 64, [a]_D + 90 (c = 0,83, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: m/z + + chlorid sodný 1525 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 1541 (M + K)'.

'H NMR (CDCIj) δ 7,33 - 7,25 (m, 5H, C₆H₅), 7,15 - 6,84 (m, 4H, C₆H₄OCH₃), 5,56 (d, IH, J = 3,9 Hz, H-l), 5,29 (d, IH, J = 4,0 Hz, H-ľ), 4,97 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l), 4,71 (d, IH, J = 8,1 Hz, H-ľ), 4,27 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-ľ), 1,08 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH,Si(CH₃)₃).

Analýza pre C₇oH₁₀₆ 0₃₃Si (1503,69) vypočítané. 55,91 % C, 7,11 % H nájdené: 56,05 % C, 7,24 % H

Príprava 59 2-(Trimetylsilyl)etyl-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)

-(1 ->4)]₂-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (65)

Podľa spôsobu 4 sa spracuje 10,7 g (7,2 mmol) zlúčeniny 64, produkt sa čistí chromatografovaním na stĺpci oxidu kremičitého v sústave toluén/acetón, 2:1, potom 6:5a získa sa tak 6,50 g (74 %, v troch etapách) zlúčeniny 65. [a]_D + 102 (c = 0,68, dichlórmetán).

'H NMR (CDClj) δ 7,33 - 7,25 (m, 5H, C₆H₅), 5,65 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-ľ), 5,62 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l), 4,98 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l), 4,31 (d, IH, J = 8,1 Hz, H-ľ”), 4,29 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-ľ), 1,08 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pre C₅₆H₉₈O₂₆Si (1215,48) vypočítané: 55,34 % C, 8,13 % H nájdené: 55,31 % C, 8,19% H

Príprava 60 2-(Trimetylsilyl)etyl-O-(2,3,6-tri-O-acetyl-4-O-p-metoxyben/yl-a-D-glukopyranozyl)-(l—»4)-O-(2,3,6-tri-O-acetyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[O-(2,3,6-tri-O-mety[-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₂-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (66).

Podľa spôsobu 3 sa spracuje zmes 4,03 g (5,31 mmol) tioglykozidu 57 a 5,78 g (4,75 mmol) glykozylového akceptora 65, produkt sa čistí chromatografovaním na kolóne oxidu kremičitého v sústave toluén/acetón, 2:5a získa sa tým 8,63 g (95 %) zlúčeniny 66, [a]_n + 94 (c = 0,74, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 1910,83, chemická hmotnosť = 1912,14, experimentálna hmotnosť = 1911,61 + 0,12 u. m. a.

'H NMR (CDCIj) δ 7,33 - 7,25 (m, 5H, C₆H₅), 7,15 - 6,83 (m, 4H, C₆H₄OCH₃), 5,62 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,60 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l-jednotky R-2), 5,30 (d, IH, J = 4,0 Hz, H-l jednotky NR), 4,98 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,71 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-I), 4,30 (d, 1 H, J = 8,1 Hz, H-l jednotky C), 4,29 (d, IH, J = 8,4 Hz, H-l jednotky R-l), 2,08 (s, 3H, Ac), 2,07 (s, 3H, Ac), 2,03 (s, 3H, Ac), 1,99 (s, 3H, Ac), 1,98 (s, 3H, Ac), 1,96 (s, 3H, Ac), 1,08 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH,Si(CH₃)₃).

Analýza pre C_8gH|₃₈O₄₃Si (1912,14) vypočítané: 55,28 % C, 7,27 % H nájdené: 55,61 % C, 7,35 % H

Schéma 19

Syntéza oligosacharidu 72

Olh*

Príprava 61 2-(Trimetylsilyl)etyl-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-O-(2,3,6-tri-(?-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)]₃-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-ct-D-glukopyranozid (67)

Podľa spôsobu 4 sa spracuje 8,63 g (4,50 mmol) zlúčeniny 66 a produkt sa čistí na kolóne oxidu kremičitého s eluovaním v sústave toluén/acetón 3 : 2, potom 4:3a získa sa tým v troch etapách 5,67 g (77 %) látky 67, [a]_D + 102 (c = 0,70, dichlórmetán). LSIMS, kladný modul: m/z tioglycerol + chlorid sodný 1645,9 (M + Na)⁺.

'H NMR (CDCIj) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 5,65 (d, 2H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR a H-l jednotky NR-2), 5,62 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 4,98 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,31 (d, IH, J = 8,1 Hz, H-l jednotky NR-1), 4,30 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky C), 4,29 (D, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 1,08 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CHj)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CHj)j).

Analýza pre C₇₄H₁₃₀Oj₆SÍ (912,14) vypočítané: 54,73 % C, 8,07 % H nájdené: 54,61% C, 8,07 % H

Príprava 62 2-(Trimetylsilyl)etyl-O-(2,3,6-tri-O-acetyl-4-<?-p-metoxybenzyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-acetyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4 )-0-(2,3,6-tri-O-mctyl-p-D-glukopyranozyl)-( 1 -»4)]₃-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (68)

Podľa spôsobu 3 sa spracuje zmes 1,47 g (1,96 mmol) tioglykozidu 57 a 2,89 g (1,77 mmol) glykozylového akceptora 67. Chromatografovaním na kolóne oxidu kremičitého v sústave cyklohexán/acetón 3 : 2 sa získa 3,71 g (0,2 %) zlúčeniny 68. Analyticky čistená vzorka na kolóne oxidu kremičitého (toluén/acctón, 3 : 2). [cc]_D + 99 (c = = 0,58, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 2319,03, chemická hmotnosť = 2320,59, experimentálna hmotnosť = 2319,03 ± 0,12 u. m. a.

’H NMR (CDCIj) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 7,15 - 6,83 (m, 4H, C₆H₄OCH₃), 5,62 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,60 (d, 2H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR-2 a jednotky C), 5,29 (d, IH, J = 4,0 Hz, H-l jednotky NR), 4,97 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,70 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1), 4,30 (d, 2H, J = 8,1 Hz, H-l jednotky NR-3 a jednotky R-3), 4,29 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 2,08 (s, 3H, Ac), 2,06 (s, 3H, Ac), 2,02 (s, 3H, Ac), 1,99 (s, 3H, Ac), 1,98 (s, 3H, Ac), 1,96 (s, 3H, Ac), 1,08-0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)j).

Analýza pre C|₀6H|₇o0₅₃Si (2320,59) vypočítané: 54,86 % C, 7,38 % H nájdené: 54,76 % C, 7,45 % H

Príprava 63 2-(Trimetylsilyl)etyl-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)- C>-(2,3,6-1 r i - 0-me ty 1 - (3 - D-gl ukopyranozyl )(l->4)]₄-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (69)

Podľa spôsobu 4 sa spracuje 3,61 g (1,55 mmol) zlúčeniny 68 a získa sa tak 2,22 g (70 % v troch etapách) látky 69 po chromatografickom čistení na kolóne oxidu kremičitého (toluén-acetón, 4: 5). [a]_D + 103 (c = 0,80, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 2031,01, chemická hmotnosť = 2032,38, experimentálna hmotnosť = 2032,38 u. m. a.

’H NMR (CDCIj) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 5,65 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR), 5,64 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR-2), 5,62 (d, 2H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky C jednotky R-2), 4,97 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R),

4,30 (d, IH, J - 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1), 4,29 (d, 3H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l, jednotky R-3 a jednotky NR-3), 1,08 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)j).

Analýza pre C₉₂H|₆₂O₄₈Si (2032,38) vypočítané: 54,37 % C, 8,03 % H nájdené: 54,51 % C, 8,04 % H

Príprava 64 2-(Trimetylsilyl)etyl-O-(4-O-levulinyl-2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-[O(2,3,6-triOmetyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-(?-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₃-6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozid (70)

Roztok 855 mg (0,42 mmol) látky 69 v 8 ml dichlórmetánu sa zahreje na 25 °C a pridá sa: 83 μΐ (0,59 mmol) trietylamínu, 5,14 g (0,04 mmol) 4-dimetylaminopyridinu a 117 mg (0,55 mmol) anhydridu kyseliny levulovej, zmes sa mieša 2 hodiny pri kontrole CCM, zriedi sa pridaním dichlórmetánu, roztok sa prepláchne 10 % vodným roztokom hydrogenuhličitanu draselného, vodou, vysuší sa a zahustí do sucha. Látku je možné použiť v tomto surovom stave pre ďalší stupeň bez akéhokoľvek čistenia. Analyticky čistá vzorka sa získa na kolóne oxidu kremičitého, cyklohexán/acetón, 5 : 4; čistá látka 70 má [cc]_D + 101 (c = 0,89, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 2129,05, chemická hmotnosť = 2130,48, experimentálna hmotnosť = 2130,00 u. m. a.

'H NMR (CDClj) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 5,65 (d, 3H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR, jednotky NR-2 a jednotky C),

5,63 (d, 2H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,02 (t, IH, J = = 10,1 Hz, H-4 jednotky NR), 4,98 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,32 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1),

4,30 (d, 2H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-3 a jednotky R-3), 4,29 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 2,80 - 2,50 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,18 (s, 3H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,08 - 0,91 (m, 2H,

CH₂CH₂Si(ČH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pre C₉₇H_]66O_4SSí (2032,38) vypočítané: 54,69 % C, 7,95 % H nájdené: 54,55 % C, 8,07 % H

Príprava 65 O-(4-O-Levulinyl-2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 ^4)-0-(2,3,6-tri-č?-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-<x-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl-(l—>4)]₃-6-O-benzyl-(2,3,-di-0-metyl-a,P-D-glukopyranóza(7L).

Spracuje sa 876 mg (0,41 mmol) zlúčeniny 70, ako to bolo opísané v príprave 44(a). Zvyšok sa čistí na kolóne oxidu kremičitého a získa sa tým zmes anomérov a/p = = 60/40 látky 71 vo výťažku 600 mg (80 %) v dvoch etapách); [a]_D + 89 (c = 0,74, dichlórmetán). ESIMS kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 2028,97, chemická hmotnosť = 2030,24, experimentálna hmotnosť = 2030,19 ± u. m. a.

'H NMR (CDClj) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 5,65 (d, 3H,

J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR, jednotky NR-2 a jednotky C),

5.63 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,33 (d, IH, J = = 3,2 Hz, H-lcc jednotky R), 5,02 (t, IH, J=10,l Hz, H-4 jednotky NR), 4,59 (d, IH, J = 5,3 Hz, H-lp jednotky R), 4,32 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1), 4,30 (d, 2H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-3 a jednotky R-3), 4,29 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 2,80-2,50 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CHj), 2,18 (s, 3H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Príprava 66 O-(4-O-Levulinyl-2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-í?-metyl-p-D-glukopyranozyl)(l->4)]₃-6-O-benzyl-2,3-di-O-mctyl-a,P-D-glukopyranozyl-trichlóracetamidát (72).

Do roztoku 593 mg (0,29 mmol) zlúčeniny 71 v 7 ml dichlórmetánu sa pridá 72,2 mg (0,52 mmol) uhličitanu draselného a 176 μΐ (1,75 mmol) trichlóracetonitrilu, reakčná zmes sa mieša 16 hodín, po filtrácii sa filtrát zahustí. Filtráciou na géli z oxidu kremičitého s použitím sústavy cyklohexán/acetón, 5 : 4 pre 1 %o trietylamínu sa získa 414 mg (46 %) zmesi anomérov a/p = 47/53, teda zlúčeniny 72, [a]_D + 86 (c = 0,54, dichlórmetán).

'H NMR (CDClj) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 6,50 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-Ια jednotky R), 5,64 (d, IH, J = 8,2 Hz, H-l-P jednotky R), 5,65 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR),

5.64 (d, 2H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR-2 a jednotky C), 5,61 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,02 (t, IH, J = = 10,1 Hz, H-4 jednotky NR), 4,37 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 4,30 (d, 3H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1, jednotky NR-3 a jednotky R-3), 2,80 - 2,50 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,18 (s, 3H, C(C=O)CH₂CH₂(C=O)CHj).

Schéma 20

Syntéza polysachariu 73

MtO

Príprava 67 Metyl-0-(4-0-levulinyl-2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-3-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-3-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)]₃-O-(6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( 1 ->4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—»4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l->4)-2,3,6-tri-0-benzyl-a-D-glukopyranozid (73).

V 5 ml zmesi dichlórmetánu a dietyléteru (1 : 2) sa rozpustí 220 mg (0,18 mmol) glykozylového akceptora 26 a 344 mg (0,16 mmol) imidátu 72, a po pridaní 750 mg/mmol molekulárneho sita 4 Ä sa reakčná zmes pri teplote 25 °C mieša hodinu. Po ochladení na -25 °C sa pridáva roztok 1 M /erc-butyldimetylsilyltrifluóracetátu v dichlórmetáne (0,20 mol/mol imidátu), zmes sa mieša 15 minút, pridá sa pevný hydrogenuhličitan sodný, zmes sa filtruje a filtrát zahustí. Nanesie sa na kolónu Toyopearl HW-50, použije sa ďalej zmes dichlórmetánu a etanolu 1:1, frakcie obsahujúSchéma 21

Syntéza polysacharidov 74 a 75 ce glykozylový akceptor sa vrátia do reakcie a pracuje sa ako predtým. Nasledujúcim čistením na kolóne oxidu kremičitého s použitím sústavy toluén/acetón 5 : 4, potom 1:1, sa takto získa 107 mg frakcie 73 α/β = 7/3 a frakcie 201 mg α/β = 9/1 s celkový výťažkom 308 mg (57 %).

'H NMR (CDClj) δ 7,33 - 7,25 (m, 35H, 7x C₆H₅), 5,65 (d, 3H, J = 3,5 Hz, H-l jednotky A, jednotky C a jednotky E), 5,57 (d, 1H, J = 3,9 Hz, H-l jednotky G), 5,52 (d, 1H, J = = 3,3 Hz, H-l jednotky I), 5,29 (d, 1H, J = 8,8 Hz, H-l jednotky L), 5,17 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-l jednotky K), 4,56 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-l jednotky M), 4,31 (d, 3H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky B, jednotky D a jednotky F), 4,27 (d, 1H, J = = 8,0 Hz, H-l jednotky H), 4,08 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-l jednotky J), 2,80 - 2,50 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CHj), 2,18 (s, 3H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,97 (s, 3H, Ac), 1,81 (s, 3H, AC).

Príprava 68 Metyl-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-3-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₄-O-(6-O-benzyl-2,3 -di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( 1 ->4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-(benzyl-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 ->4)-2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranozid (74~)

Postupom podľa spôsobu 2 sa spracuje 130 mg (38,2 mmol) zlúčeniny 73 a čistením surového produktu na kolóne oxidu kremičitého sa takto získa 118 mg (93 %) zlúčeniny 74, [cc]_D + 78 (c = 0,48, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 3301,49, chemická hmotnosť = 3303,65, experimentálna hmotnosť = = 3302 u. m. a.

'H NMR (CDC1₃) δ 7,33 - 7,25 (m, 35H, 7x C₆H₅), 5,64 (d, 3H, J = 3,5 Hz, H-l jednotky A, jednotky C a jednotky E), 5,57 (d, 1H, J = 3,9 Hz, H-l, H-l jednotky G), 5,52 (d, 1H, J = 3,3 Hz, H-l jednotky 1), 5,29 (d, 1H, J = 6,8 Hz, H-l jednotky L), 5,17 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-l jednotky K), 4,56 (d, 1H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky M, 4,31 (d, 3H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky B, jednotky D a jednotky F), 4,27 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-l jednotky H) 4,08 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-l jednotky J), 1,97 (s, 3H, Ac), 1,81 (s, 3H, Ac).

Príprava 69

Metyl-O-(2,6-di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl^-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,6-di-0-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl^-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[(?-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-3-D-glukopyranozyl)-(l—>4)]₄-O-(6-O-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(benzyl-2,3-di-0-metyl^-D-glukopyranurozyl)-( 1 ->4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(benzyl-2,3-di-O-mctyľa-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranozid (75).

V 2 ml toluénu sa rozpustí 112 mg (33,9 pmol) glykozylového akceptora 74 a 59,1 mg (37,2 pmol) imidátu 17, pozri príprava 16, a po pridaní 42 mg molekulárneho sita 4 Ä sa reakčná zmes mieša pri 25 °C hodinu. Po ochladení na -20 °C sa pridá 1 M roztok /erc-butyldimetylsilyltrifluóracetátu v toluéne (0,20 mg/mol imidátu), zmes sa mieša 15 minút, ďalej sa pridá hydrogenuhličitan sodný v pevnom stave, zmes sa filtruje a filtrát sa zahustí. Nanesie sa na kolónu Toyopearl HW-50 s použitím sústavy dichlórmetán/etanol, 1:1, frakcie obsahujúce glykozylový akceptor sa vrátia späť do reakcie so 17-mérom, všetko sa spracuje ako predtým. Potom sa všetko čistí postupne na kolóne Toyopearl HW-50 a na kolóne oxidu kremičitého, získa sa tak 71 mg (44 %) zlúčeniny 75, [ot]_D + 80 (c = = 0,26, dichlórmetán). ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 4728,10, chemická hmotnosť = 4731,26, experimentálna hmotnosť = 4731,27 + 0,39 u. m. a.

’H NMR (CDClj) δ hlavných anomémych protónov: 5,64, 5,57, 5,52, 5,48,’ 5,47, 5,29, 5,17, 4,56, 4,50, 4,29, 4,27, 4,08 ppm.

Schéma 22

Príprava syntónu, použiteľného na syntézu pentasacharidu Pe s jednou C-interglykozidovou väzbou, zlúčenina (II. 1.)

OR OltlOMS

z 76: R = II

77: R => tBOMS

78: R = 0 '* 79: R = Cll₂

_ 81: R=a,p-OAc 62: R»a-Br

- 83: R-pR2»R₃ ^eAc

V 84: Rf,R₂₍R₃«n

Príprava 70 Metyl-2,3-di-O-metyl-6-O-ŕerc-butyldimetylsilyl-a-D-glukopyranozid (77)

Pod argónom sa pridáva 14,0 g (92,9 mmol) terc-butyldimetylsilylchloridu, 15 ml (108 mmol) trietylamínu a 260 mg 4-dimetylaminopyridínu (2,10 mmol) do roztoku 15,84 g (71,3 mmol) zlúčeniny 76 - pozri Trimell D., Doane W. M. a Russel C. R., Carbohydr. Research _H, 497 (1969) v 300 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa mieša pri normálnej teplote 15 hodín, zriedi sa dichlórmetánom, roztok sa prepláchne nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí okamžitou chromatografiou (cyklohexán a etylester kyseliny octovej, 1,3 : 1) a získa sa tak 22,79 g (95 %) zlúčeniny 77 vo forme bezfarebného sirupu, [a]_D + 87 (c = 1,2, chloroform).

Príprava 71 Metyl-2,3-di-O-mctyl-6-O-terc-butyldimetylsilyl-a-D-xylo-4-hexulopyranozid (78)

Pod argónom a pri ochladení na -70 °C sa pridá roztok 8,7 ml (123 mmol) dimetylsulfoxidu v 20 ml dichlórmetánu k roztoku 5,4 ml (61,9 mmol) dichloridu kyseliny oxalovej v 120 ml dichlórmetánu. Po pätnástich minútach sa prikvapkáva ďalej roztok 18,78 g (55,8 mmol) zlúčeniny 77 v dichlórmetáne, po pätnásť minútovom magnetickom miešaní sa pridá 37 ml (265 mmol) trietylamínu a za 15 minút sa nechá reakčná teplota vystúpiť na normálnu. Po zriedení pridaním 150 ml vody sa oddelený vodný podiel extrahuje do 150 ml dichlórmetánu, organické roztoky sa spoja, celok sa prepláchne nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, a po vysušení bezvodým síranom sodným sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí okamžitou chromatografiou (cyklohexán a etylester kyseliny octovej 9:1, potom 4 : 1 a vo forme bezfarebného oleja sa takto pripraví 17,3 g (93 %) zlúčeniny 78, [a]_D + 98 (c = 1,0 chloroform).

Príprava 72 Mctyl-4-dczoxy-2,3-di-O-metyl-4-C-metylén-6-O-/erc-butyldimetylsilyl-a-D-xylo-hexopyranozid (79).

Pod argónom sa prikvapkáva 1,6 M roztok n-butyllítia v n-hexáne (75 mol) k suspenzii 43,3 g (127 mmol) metyltrifenylfosfóniumbromidu v 250 ml tetrahydrofuránu. Za 30 minút státia pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes ochladí na -70 °C a pridá sa roztok 13,97 g (41,0 mmol) zlúčeniny 78 v 60 ml tetrahydrofuránu. Po tridsať minútovom státí pri -70 °C sa teplota nechá vystúpiť na normálnu, po hodine sa pridá 300 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho a vodný podiel sa extrahuje do éteru. Roztok v éteri sa po vysušený bezvodým síranom horečnatým filtruje, filtrát sa zahustí a zvyšok sa čistí okamžitou chromatografiou, cyklohexán a etylester kyseliny octovej 7:1, potom 4:1. Zlúčenina 79 sa získa v množstve 8,30 g (60 %) vo forme bezfarebného oleja, [a]_D + 151 (c = 1,3, chloroform).

Príprava 73 Metyl-4-dezoxy-2,3-di-O-metyl-4-C-metylén-Cí-D-xylo-hexopyranozid (80)

Do roztoku 8,50 g (25,6 mmol) zlúčeniny 79 v 250 ml zmesi dichlórmetánu a metanolu 5 : 1 sa pridáva kyselina gáforsulfónová až sa dosiahne hodnota pH 1. Keď úplne zmizne použitá východisková zlúčenina (kontrola CCM, cyklohexán a etylester kyseliny octovej 1:1), neutralizuje sa reakčná zmes pridávaním trietylamínu. Zvyšok, získaný zahustením, sa čistí okamžitou chromatografiou s použitím zmesi cyklohexánu a etylesteru kyseliny octovej 1 : 1, potom 1:2a získa sa tak 5,32 g (95 % ) zlúčeniny 80 vo forme bezfarebného sirupu, [a]_D + 239 (c = 1,0, chloroform).

Príprava 74 Fenyl-2,4,6-tri-(7-acetyl-3-(2-metyl-l-seleno-p-D-glukopyranozid (83)

Spôsob 1: Pod argónom sa pridáva 5,7 ml (53,7 mmol) selénofenolu k roztoku zlúčeniny 81, pozri Hirst E. L., Percival E., Methods Carbohydr. Chem. 2, 145 (1963 v 120 ml dichlórmetánu tejto látky, čo je zmes anomérov 1 : 1, sa použije 13,05 g (36,0 mmol). Po ochladení reakčnej zmesi na 0 °C sa prikvapkáva pomaly 8,8 ml (71,9 mmol) 48 % roztoku dietyleterátu trifluórbóranu. Po 3 hodinách státia pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes zriedi pridaním 100 ml dichlórmetánu, roztok sa prepláchne nasýteným vodným roztok hydrogenuhličitanu sodného, a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtrácii sa filtrát zahustí. Použije sa priamo získaná surová zlúčenina 83 (8,17 g, 68 %, prepočítané na 81) pri deacetylačnej reakcii.

Spôsob 2: Pod argónom a pri teplote 0 °C sa pridáva 510 mg (14,6 mmol) hydridu boritosodného k suspenzii 2,27 g (7,27 mmol) difenylselenidu v etanole. Ak farba reakčného prostredia, žltá, sa nezmení počas 15 minút, pridá sa ďalší podiel dietyleterátu trifluórboránu a roztok sa potom premiestni pod argónom do roztoku 4,22 g (11,0 mmol zlúčeniny 82 v 25 ml dichlórmetánu, pozri Sen A. K., Sakar K. K., Bancrji N., J. Carbohydr. Chem. 7 645 (1988), v 25 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa zahrieva 3 hodiny do varu pod spätným chladičom, po ochladení na laboratórnu teplotu sa odfiltruje bromid sodný, filtrát sa zahustí, zvyšok sa rozpusti v dichlórmetáne (100 ml) a tento roztok sa prepláchne s použitím 50 ml 1 M vodného roztoku hydroxidu sodného, 50 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho, organické podiely sa extrahujú do 20 ml dichlórmetánu, potom sa organická fáza vysuší bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí okamžitou chromatografiou s použitím zmesi cyklohexánu a etylesteru kyseliny octovej 1,7 : 1, a potom sa kryštalizáciou z etylesteru kyseliny octovej získa 4,35 g (86 %) látky 83,1.1. 101 - 102 °C, [a]_D -20 (c = 1,0, chloroform).

Príprava 75

Fenyl-3-O-metyl-1 -selcno-p-D-glukopyranozid (84)

Surová zlúčenina 83, keď bola získaná z 32,3 g (84,3 mmol) látky 82 sa rozpustí v 500 ml metanolu a do roztoku sa pomaly pridáva 1,2 g sodíka. Za hodinu sa roztok neutralizuje živicou IR-120 (H⁴) a po filtrácii sa zahustí. Takto pripravený zvyšok sa čistí okamžitou chromatografiou s použitím zmesi cyklohexán, etylester kyseliny octovej a acetón 1,4 : 1 : 1 a vo výťažku 22,7 g (t. j. 81 % ), prepočítané na 82 sa získa sirupovitá látka 84, [cc]d -58 (c = 1,0, metanol).

Príprava 76

Fenyl-4,6-O-benzylidén-3-O-metyl-1 -seleno-P-D-glukopyranozid (85)

Do roztoku 7,65 g (23,0 mmol) zlúčeniny 84 v 150 ml acetonitrilu sa pridáva pod argónom 45 g kyseliny p-toluénsulfónovej a 5,4 g (36,0 mmol) dimetylacetalu benzaldehydu. Po dvojhodinovom miešaní pri laboratórnej teplote sa pridá 1,5 g uhličitanu draselného, po 30 minútach sa roztok filtruje a filtrát zahustí. Zvyšok sa čistí okamžitou chromatografiou v sústave cyklohexán a etylester kyseliny octovej 3,5 : 1 a získa sa tým 8,55 g (88 %) zlúčeniny 85 vo forme bielych kryštálov, 1.1. 123 až 124 °C po kryštalizácii z etylesteru kyseliny octovej, [a]_D - 38 (c = 1,0, chloroform).

Príprava 77 Fenyl-4,6-O-benzylidén-3-O-metyl-2-O-(metyl-4-dezoxy-6-0-dimetylsilyl-2,3-di-0-metyl-4-C-metylén-a-D-xylo-hexopyranozid)-1 -seleno^-glukopyranozid (86)

Pod argónom a pri ochladení na -70 °C sa pridáva 7,0 ml (11,2 mmol) 1,6 M roztoku n-butyllítia k roztoku

4,30 g (10,2 mmol) zlúčeniny 85 v 30 ml tetrahydrofuránu, umiestneného v zariadení podľa Schlencka. Po 10 minútach sa pridá 5,0 ml (41,2 mmol) dichlórdimetylsilánu a teplota reakčnej zmesi sa nechá vystúpiť na laboratórnu teplotu. Po 3 hodinách a zahustení sa pridá roztok 2,10 g (9,62 mmol) zlúčeniny 80 a 985 mg (14,4 mmol) imidazolu v 20 ml tetrahydrofuránu. Po tridsať minútovom státí pri laboratórnej teplote sa roztok zahustí, pridá sa 50 ml vody s následnou extrakciou do dichlórmetánu. Organický roztok sa vysuší bezvodým síranom horečnatým, po filtrácii sa filtrát zahustí. Analyticky čistá vzorka 86 sa získa čistením okamžitou chromatografiou s použitím zmesi toluénu a acetónu 25 : 1 s obsahom 0,5 % trietylamínu. Vo výťažku 90 % sa takto pripraví bezfarebný sirup.

'H NMR (400 M Hz, C₆D₆) d 7,77 - 6,99 (m, 10H, aromatické) 5,51 (m, IH, C=CH₂), 5,24 (m, IH, C=CH₂), 5,16 (s, IH, CHC₆H₅), 4,85 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l), 4,81 (d, IH, J= 9,8 Hz, H-ľ), 4,45 (m, IH, H-5), 4,38 (dd, IH, J = 10,8 Hz, 4,8 Hz, H-6a), 4,33 (dd, IH, J = 6,2 Hz, H-6b), 4,20 (m, IH, J = 9,2 Hz, H-3), 4,05 (dd, IH, J = 10,3 Hz, 4,9 Hz, H-6a’), 3,87 (dd, IH, J = 8,1, Hz, H-2'), 3,52, 3,38, 3,31 a 3,27 (s, 3H, OCH₃), 3,37 (t, IH, J = 10,3 Hz, H-6b'), 3,35 (t, IH, H-4'), 3,32 (dd, IH, H-2), 3,22 (dd, IH, J = 9,3 Hz, H-R'), 3,05 (dd, IH, J = 9,3 Hz, H-5'), 0,38 a 0,37 (s, 3H, S1(CH₃)₂). MS (m/z): 714 (M + NH₄ ⁺).

Príprava 78

Cyklizačná radikálová reakcia (príprava 87) a odštiepenie tetéru (88)

Počas osem hodín sa pomaly pridáva roztok 6,1 ml (22,7 ml) hydridu tributyleínu a 200 mg (1,22 mmol) 2,2'-azobisizobutyronitrilu v 14 ml odplyneného toluénu k roztoku surovej látky 86 v 850 ml toluénu pri doplnení 10,2 mmol látky 85 a 9,62 mmol látky 80.

Po priebehu radikálovej reakcie sa reakčná zmes zahustí a zvyšok sa rozpustí v tetrahydrofuráne. Pridá sa nadbytok (20 ekvivalentov 40 %-ného vodného roztoku fluorovodíka a po dokonalom priebehu desilylovania (kontrola CCM, toluén/acetón, 4 : 1) sa roztok neutralizuje pridávaním pevného hydrogenuhličitanu sodného, filtruje sa a zahustí. Prevládajúcu látku 88 je možné vyčistiť kryštalizovaním, 1.1. 105 °C, [a]_D + 119 (c = 1,1, chloroform).

^I3C NMR (62,894M Hz, CDC1₃) d 137,29 (kvárt, aróm, uhlíky), 128,88 - 125,96 (aromatické uhlíky), 101,11 (CHC₆H₅), 97,64 (C-l), 83,52 (C-2), 82,76, 81,95, 80,84,

72,01, 71,92 a 64,31 (C-3, C-5, C-2', C-3', C-4', C-5'), 75,19 (C-ľ), 69,41 (C-6'), 62,69 (C-6), 60,93, 60,70, 5á,31 a 55,20 (OCH₃), 38,80 (C-4), 25,58 (uhlík metylénovej skupiny).

Analýza pre C₂4H₃₆O₁₍). H₂O (502,558) vypočítané: 57,36 % C, 7,62 % H nájdené: 57,31 %C, 7,54% H

Príprava 79 Metyl-6-0-acetyl-4-0-(2-O-acetyl-4,6-(9-benzylidén-3-O-metyl-a-D-glukopyranozylmetyl)-4-dezoxy-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozid (89)

Zlúčenina 88 sa kvantitatívne acetyluje v zmesi anhydridu kyseliny octovej a pyridínu 1 : 1 v prítomnosti katalytického množstva 4-dimetylaminopyridínu. Produkt sa získa zahustením reakčnej zmesi a chromatografovaním, [a]_D + 87 (c = 1,0, chloroform).

’H NMR (500M Hz, CDCI₃), pozri tabuľka 1.

¹³C NMR (62,896M Hz, CDClj), d 170,81, 169,80 (C=O), 137,18 (kvartéme aromatické uhlíky), 128,92 - 125,95 (aromatické uhlíky), 101,31 (CHC₆H₅), 97,51 (C-l), 83,22 (C-2), 81,94, 69,25 a 63,83 (C-5, C-4', C-5'), 81,81 (C-3), 78,78 (C-3'), 72,74 (C-2’), 71,97 (C-ľ), 69,49 (C-6'), 64,17 (C-6), 60,64, 59,82, 58,30 a 55,19 (OCHj), 39,00 (C-4), 26,47 (uhlík metylénovej skupiny), 20,91, 20,76 (OCOCH₃).

Hmotnostné spektrum (m/z): 586 (M + NH₄)⁺, 569 (M + + H)⁺, 554 (M-OMe + NH₃)⁺, 537 (M-OMe)⁺.

Analýza pre C₂₈H₄₀O|₂. H₂O (586,632) vypočítané: 57,33 % Č, 7,22 % H nájdené: 57,28 % C, 7,07 % H

Prvá časť syntézy záleží na premene 89 na imidát 90. Na tento účel sa benzylidénová skupina otvorí použitím nátriumkyanoborohydridu a kyseliny chlorovodíkovej. Takto obnažená hydroxylová skupina je dočasne chránená tvorbou p-metoxybenzyléteru. Po deacetylovani je primárna alkoholická funkcia chránená selektívnou tvorbou éteru s íerc-butyldimetylsilylovou skupinou a takto získaná zlúčenina sa metyluje. Oxidácia v podmienkach podľa Jonesa vedie k uránovej kyseline, tá sa benzyluje. p-metoxybenzyléter sa takto rozruší a do tejto polohy sa zavedie ester levulovej kyseliny. Sústava použitím zmesi kyseliny sírovej, kyseliny octovej a anhydridu kyseliny octovej vedie k acetolýze anomémej metylovej skupiny, rovnako aj benzyléteru v polohe 6' a vznikne tak zmes dvoch acetylovaných monomérov. Selektívna deacetylácia v polohe 1 sa vykoná použitím hydrazínu v dimetylformamide a zmes anomérov, rozpustená v dichlórmetáne, sa prevedie na látku 90 trichlóracetonitrilom v prítomnosti 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-énu.

Schéma 23

Syntéza pcntasacharidu 99

Οβι om. “Μ*

Príprava 80 Etyl-O-(2,3-di-O-benzoyl-4,6-O-benzylidén-a-D-glukopyranozvl)-(l >4)-2,3,6-tri O-benzoyl-l-tio-p-D-glukopyranozyl (92).

Do roztoku 16,7 g (35,3 mmol) zlúčeniny, ktorú pripravili Westmand J. a Nilsson M., J. Carbohydr. Chem. Γ4, 949 - 960 (1995) v 202 ml pyridínu, ochladeného na 0 °C, sa prikvapkáva počas dvadsiatich minút 24,5 ml (211 mmol) benzoylchloridu. Reakčná zmes sa potom mieša pri laboratórnej teplote 20 hodín, chrormatografiou na tenkej vrstve sa ukáže, že reakcia prebehla asi z 50 %. Zmes sa zriedi pridaním vody a dichlórmetánu, po extrakcii do rozpúšťadla sa organická fáza prepláchne 10 % roztokom hydrogenuhličitan sodného, vodou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Podľa uvedeného pochodu sa na zvyšok pôsobí znova benzoylcholoridom. Surový produkt sa čistí chromatografovaním na géli oxidu kremičitého a získa sa tak 22 g zlúčeniny 92, CCM: Rf = 0,80, silikagél, toluén/etanol 9/1 obj.

Príprava 81 0-(2,3-di-0-Benzoyl-4,6-0-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-benzoyl-P-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-l,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranóza (94).

Zmes 1,05 g (1,05 mmol) tioglykozidu 92, 200 mg (1,08 mmol) zlúčeniny 93, pozri Jeanloz a kol., J. Org. Chem. 26, 3939 - 3944 (1961) a 1,1 g práškového molekulárneho sita 4 Ä sa mieša v prostredí 18 ml toluénu pod dusíkom 15 minút, potom sa ochladí na -20 °C a pridá sa čerstvo pripravený roztok 1,11 mmol N-jódimidu kyseliny jantárovej a 0,125 mmol kyseliny trifluórmetánsulfónovej v zmesi dichlórmetánu a dioxánu, 1/1, obj., celkom 6 ml. Po desiatich minútach sa červená zmes filtruje, zriedi dichlórmetánom, po extrakcii sa organický roztok postupne prepláchne 10 % vodným roztokom tiosíranu sodného, 10 % vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a vodou, a po vysušení bezvodým síranom horečnatým a filtrácii sa filtrát zahustí vo vákuu. Zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu a získa sa tak 1,25 g zlúčeniny 94.

CCM: Rf = 0,55, silikagél, heptán a etylester kyseliny octovej, 4/6 obj.

Príprava 82 0-(4,6-0-Benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-Ο-(β-D-g[ukopyranozyl)-(l->4)-l,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-|J-D-glukopyranóza (95).

Do roztoku 1,24 g (1,11 mmol) zlúčeniny 94 v 7 ml zmesi metanolu a dioxánu, 1/1 obj. sa pridá asi 50 mg kálium-íerc-butoxidu, reakčná zmes sa mieša hodinu, pridá sa ďalšia dávka 50 mg kálium-Zerc-butoxidu a v miešaní sa pokračuje ešte 60 minút. Reakčná zmes sa neutralizuje živicou Dowex 50WX8 H⁺, filtruje sa a zahustí vo vákuu. Chromatografovaním na kolóne silikagélu sa takto získa 665 mg zlúčeniny 95 vo forme oleja.

CCM: Rf = 0,50, silikagél, dichlórmetán/metanol, 85/15 obj.

Príprava 83 O-(4,6-O-Benzylidén-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-glukopyranozyl)-(1 —>4)-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-P-D-glukopyranóza (96).

Do roztoku 660 mg (1 mmol) zlúčeniny 95 v 8 ml suchého tetrahydrofuránu sa po ochladení na 5 °C pridá pod dusíkom 387 mg (9,65 mmol) hydridu sodného, potom sa prikvapkáva 0,51 ml (0,22 mmol) metyljodidu a pri laboratórnej teplote sa reakčná zmes mieša 20 hodín. Nadbytok hydridu sodného sa rozruší pridaním metanolu, všetko sa vleje do 50 ml ľadovej vody, zmes sa extrahuje trikrát vždy do 20 ml etylesteru kyseliny octovej, organický roztok sa prepláchne roztokom chloridu sodného a po vysušení síranom horečnatým sa zahustením filtrátu získa 690 mg čistej látky 96.

CCM: Rf = 0,25, silikagél, dichlórmetán/metanol 95/5 obj.

Príprava 84 O-(2,3-di-O-Metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-l,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranóza (97)

V 7,3 ml 80 % kyseliny octovej sa rozpustí 690 mg (1,03 mmol) čistej zlúčeniny 96 a pri teplote 40 °C sa zmes mieša 20 hodín, ďalej sa zahustí vo vákuu a znovu sa zahustí po zriedení toluénom. Chromatografovaním na kolóne silikagélu v prostredí dichlórmetánu/octanu etylnatého a metanolu 8/1/1 sa takto získa 569 mg zlúčeniny 97. CCM: Rf = 0,40, silikagél, dichlórmetán/metanol 9/1 obj.

Príprava 85 O-(6-<?-Benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-P-glukopyranóza (98).

Do roztoku 560 mg (0,96 mmol) zlúčeniny 97 v dichlórmetáne sa pridá 227 mg (1,05 mmol) 1-benzoyloxy-lH-benzotriazolu a 1,15 mmol trietylamínu, reakčná zmes sa mieša 20 hodín pri normálnej teplote, potom sa zriedi dichlórmetánom, roztok sa prepláchne 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného a vodou, organická fáza sa vysuší bezvodým síranom horečnatým, a po filtrácii sa filtrát zahustí do sucha. Produkt sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu s výsledkom: 600 mg zlúčeniny 98.

Príprava 86 0-(2,3-di-0-Benzoyl-4,6-0-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-benzoyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-l,6-anhydro-2,3-di-(9-metyl-P-D-glukopyranóza (99).

Zlúčenina vzorca 98 sa prevedie na látku vzorca 99 postupom, ako bol opísaný pri príprave látky 94. Kopulačná reakcia sa vykonáva pri teplote 5 °C.

CCM: Rf = 0,50, silikagél, heptán/etylester kyseliny octovej, 2/8, obj.

Schéma 24

Syntéza heptasacharidu 104

103

T

104

Príprava 87

O-(4,6-O-Bnzylidcn-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-Ο-(β-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -^4)-0-ŕ2,3,6-tri-0-metyl-3-D-glukopyranozyl)-(l ^-4)-l,6-anhydro-2,3-diOmctyl-p-D-glukopvranóza (100).

Zlúčenina 99 sa prevedie na zlúčeninu 100 rovnakým spôsobom, ako bolo opísané pri príprave zlúčeniny 95. CCM: Rf = 0,38, silikagél, dichlórmetán/metanol 9/1 obj.

Príprava 88

0-(4,6-0-Benzylidén-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyI)-( I ->4)-O-(2,3,6-trí-0-metyl-3-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D

-glukopyranozyl)-(l -^4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranóza (101)

Zlúčenina 100 sa prevedie na zlúčeninu 101 rovnakým spôsobom, ako to bolo opísané pri príprave látky 96. CCM: Rf= 0,50, silikagél, dichlórmetán/metanol 9/1, obj.

Príprava 89 0-(2,3-di-0-Metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l ->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-3-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozylJ-íl—>4)-l,6-anhydro-2,3-di-(9-metyl-β-D-glukopyranóza (102).

Zlúčenina 101 sa prevedie na zlúčeninu 102 rovnakým spôsobom, ako to bolo opísané pri príprave zlúčeniny 97. CCM: Rf = 0,35, silikagél, dichlórmetán/metanol 9/1 obj.

Príprava 90 0-(6-0-Benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l-+4)~ -0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-0-metyl-3-D-glukopyranozyl)-(l -+4)-1,6-anhvdro-2.3-di-O-metvl-B-D-glukopvranóza 103.

Zlúčenina 102 sa prevedie na zlúčeninu 103 podľa postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 98.

CCM: Rf = 0,40, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol 7,0/1,5/1,5 obj.

0-(2,3-di-0-Benzoyl-4,6-0-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-benzoyl-p-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-O-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-gl ukopyranozyl)-( 1 -+4)-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranóza (104).

Reakcia spojovania zlúčeniny 103 s disacharidom 2 sa vykoná použitím postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 99.

CCM: Rf = 0,40, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol, 7,0/1,5/1,5 obj.

Príprava 91

Schéma 25

Syntéza oligosacharidu 109.

1U4

Príprava 92 0-(4,6-0-Benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(P-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 -+4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-1.6-anhvdro-2.3-di-O-metyl-B-D-glukopvranóza(105).

Zlúčenina 104 sa prevedie na zlúčeninu 105 rovnakým spôsobom, ako bolo opísané na prípravu zlúčeniny 95. CCM: Rf= 0,60, silikagél, dichlórmetán/metanol 9/1 obj.

Príprava 93 0-(4,6-0-Benzylidén-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranozyl)

-(1-+4)-((9-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyI)-(1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-mctyl-f-D-glukopyranoz.yl-(1—>4)]₂-l,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranóza (106).

Zlúčenina 105 sa prevedie na zlúčeninu 106 použitím postupu opísaného na prípravu zlúčeniny 96.

CCM: Rf = 0,70, silikagél, dichlórmetán/metanol, 9/1 obj.

Príprava 94 O-(2,3-di-O-Metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-(0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)]₂-1,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranóza (107).

Roztok 5,05 g (2,0 mmol) zlúčeniny 106 v 50 ml 80 % kyseliny octovej sa mieša 20 hodín pri teplote 40 °C. Po zahustení vo vákuu a novom zahustení po pridaní toluénu sa zvyšok rozpustí v etylesteri kyseliny octovej a roztok sa extrahuje vodou. Vodný podiel sa vytrepáva do dichlórmetánu a spojené organické roztoky sa vysušia bezvodým síranom horečnatým. Zahustením po filtrácii do sucha sa takto pripraví 2,68 g zlúčeniny 107.

CCM: Rf = 0,50, silikagél, trichlórmetán/etanol 9/1, obj.

Príprava 95 0-(6-0-Benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1-+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—+4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-+4)]₂-l,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranóza (108).

Zlúčenina 107 sa prevedie na zlúčeninu 108 použitím rovnakého postupu, ako bol opísaný na prípravu zlúčeniny 98.

CCM: Rf = 0,80, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol 7,0/1,5/1,5 obj.

Príprava 96 0-(2,3-di-0-Benzoyl-4,6-0-benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-benzoyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(6-0-benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1-+4)-(0-(2,3,6,-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1 —>4)]₂-1,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranóza (109).

Zmes 1,97 g (2,0 mmol, 3,5 ekv.) tioglykozidu 92, 0,86 g (0,57 mmol) heptasacharidu 108 a práškového molekulárneho sita 4 Ä sa v prostredí 22 ml toluénu mieša pod dusíkom 15 minút. Pri laboratórnej teplote sa potom prikvapkáva čerstvo pripravený roztok 496 mg (2,2 mmol) N-jódimidu kyseliny jantárovej a 0,808 mmol kyseliny trifluórmetánsulfónovej v 12 ml zmesi dichlórmetánu a dioxánu, 1/1, obj. Po desiatich minútach sa reakčná zmes filtruje, filtrát sa zriedi dichlórmetánom, extrahuje, prepláchne 10 % roztokom tiosíranu sodného a 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného a po vysušení bezvodým síranom horečnatým sa filtrát zahustí vo vákuu. Surový produkt sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu a získa sa tak 1,09 g zlúčeniny 109

CCM: Rf = 0,80, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol 6/2/2 obj.

Schéma 26

Syntéza oligosacharidu 115

110

113

114

115

Príprava 97

0-(4,6-O-Benzylidén-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(β-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)O(2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl^-D-glukopyranozyl)-[(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)]₂-(1—>4)-i,6-anhydiO-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranóza (HO)

Zlúčenina 109 sa prevedie na zlúčeninu 110 rovnakým spôsobom, ako to bolo opísané pri príprave látky 95. CCM: Rf = 0,25, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol 5,0/2,5/2,5 obj.

Príprava 98

O-(4,6-O-Benzylidén-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl^-D-glukopyranozyl)-(1 —>4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3,6-tri-O-mety!-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₃-l,6-anhydro-2,3-di-O-metyl^-D-glukopyranóza (111)

Zlúčenina 110 sa prevedie na zlúčeninu 111 rovnakým postupom ako to bolo opísané na prípravu zlúčeniny 96 CCM: Rf = 0,50, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol 6/2/2 obj.

Príprava 99

0-(2,3-di-<9-Metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tn-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)]₃-1,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranóza (112)

Zlúčenina 111 sa prevedie na zlúčeninu 112 rovnakým pracovným postupom ako bolo opísané pri príprave zlúčeniny 97

CCM: Rf = 0,20, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol 6/2/2, obj.

Príprava 100

0-(6-0-Benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-O-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(2,3,6-tri-O-mctyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)]₃-1,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranóza (113).

Schéma 27

Príprava oligosachariu H7

11S

Zlúčenina 112 sa prevedie na zlúčeninu 113 rovnakým postupom ako to bolo opísané pri príprave zlúčeniny 98. CCM: Rf = 0,20, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol 6/2/2

Príprava 101 O-(6-0-Benzoyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-»4)]₃-l,6-anhydro-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranóza (114)

Do roztoku 320 mg (0,167 mmol) zlúčeniny 113 v 1 ml dioxánu sa pridá 48 mg (0,25 mmol) hydrochloridu 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu, 29 mg (0,25 mmol) kyseliny levulovej a 4 mg (0,033 mmol) dimetylaminopyridínu, reakčná zmes sa mieša pri normálnej teplote 3 hodiny pod dusíkom, zriedi sa pridaním dichlórmetánu a vody, po extrakcii sa organický roztok prepláchne vodou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Surový produkt sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu s výsledkom 312 mg zlúčeniny 114. CCM: Rf = 0,50, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol 6/2/2 obj.

Príprava 102 0-(6-0-Benzoyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3.6-tri-0-metyl-[j-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4 )-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1 —>4)]₃ -1,6-di-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a^-D-glukopyranóza (115).

Pri laboratórnej teplote sa 4 hodiny mieša roztok 312 mg (0,155 mmol) zlúčeniny 114 v zmesi 2,25 ml anhydridu kyseliny octovej, 50 μΐ kyseliny octovej a 0,14 ml kyseliny trifluóroctovej, po pridaní 10 ml toluénu sa zmes odparí a tri razy sa ešte destiluje po pridaní vždy 10 ml toluénu. Po chromatografovaní na kolóne silikagélu sa izoluje 324 mg zlúčeniny 115.

CCM: Rf = 0,65, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej a etanol 6/2/2 obj.

«y

Príprava 103 0-(6-C^,-Benzoyl-4-t9-levulinyl-2,3-di-í?-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(1->4)]₃-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a.p-D-glukopyranóza (116)

Roztok 324 mg (0,153 mmol) látky 115 a 22,3 μΐ morfolínu sa mieša 4 hodiny pri teplote 35 °C. Po pridaní ďalšej dávky 22,3 pl morfolínu sa pokračuje v miešaní reakčnej zmesi 20 hodín pri 35 °C. Ďalej sa reakčná zmes prudko ochladí vodou, extrahuje dichlórmetánom, organický roztok sa postupne prepláchne 0,1 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej a vodou, po vysušení sa zahustí do sucha. Po chromatografovaní na kolóne silikagélu sa takto pripraví 280 mg zlúčeniny 116.

CCM: Rf = 0,45, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol 6/2/2 obj.

Príprava 104 Schéma 28 Syntéza disacharidu 128

O-(6-O-Benzoyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-0-(2,3,6-tri-(9-metvl-p-D-gl ukopyranozyl)-(l->4)]₃-6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a,P-D-glukopyranozyltrichlóracetimidát (117)

Do roztoku 138 mg (0,066 mmol) zlúčeniny 116 v

1,5 ml dichlórmetánu sa pridá 39 μΐ (0,39 mmol) trichlóracetonitrilu, ďalej 4,7 mg uhličitanu cézneho, reakčná zmes sa mieša 2 hodiny, filtruje, filtrát sa zahustí a zvyšok sa chromatografuje na kolóne silikagélu. Získa sa tak 152 mg imidátu 117.

CCM: Rf - 0,35, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej/etanol, 8/1/1, obj.

118

119

120

Meno CBn

OAc

123

V

T

CAä

O M·

OK

Príprava 105 Metyl-2-O-benzyl-4,6-O-benzylidén-a-D-glukopyranozid (119)

V 858 ml dimetylformamidu sa rozpustí spoločne 60 g zlúčeniny 118. ktorá je bežne obchodne dostupná a 50,5 ml benzylbromidu. Po ochladení na 10 °C sa prikvapkáva pomaly 20 % vodný roztok hydroxidu sodného, reakčná zmes sa mieša hodinu, teplota sa nechá vystúpiť na 20 °C s následným miešaním počas 20 hodín. Roztok sa vleje na zmes vody a ľadu a po extrakcii toluénom sa organický roztok zahustí; kryštalizovaním surového produktu sa takto pripraví 30,0 g zlúčeniny 119.

CCM: Rf= 0,60, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej 7/3 obj.

Príprava 106 Metyl-2-O-benzyl-4,6-O-benzylidén-3-O-p-metoxybenzyla-D-glukopyranozid (120).

V 211 ml dimetylformamidu sa rozpustí 26,4 g zlúčeniny 119. a po ochladení roztoku na 5 °C sa pod dusíkom pridáva 2,5 g hydridu sodného. Potom sa prikvapkáva do reakčnej zmesi 13,3 g 4-metoxybenzylchloridu, zmes sa ďalej mieša pri laboratórnej teplote hodinu, zriedi sa etylesterom kyseliny octovej, roztok sa prepláchne dva razy vodou a zahustením sa takto pripraví 40,7 g zlúčeniny 120. CCM: Rf = 0,80, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej 7/3 obj.

Príprava 107 Metyl-2-0-benzyl-3-0-p-metoxybenzyl-a-D-glukopyranozid (121)

V 60 % vodnej kyseline octovej sa rozpustí 34,9 g zlúčeniny 120 a roztok sa mieša 4 hodiny pri 60 °C. Ďalej sa zriedi toluénom, zahusti a ďalším čistením chromatografiou na silikagéli sa pripraví týmto spôsobom 26,4 g zlúčeniny 121.

CCM: Rf = 0,07, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej 7/3 obj.

Príprava 108 Metyl-2-0-benzyl-3-0-p-metoxybenzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (122).

Pod dusíkom sa rozpustí 26,4 g zlúčeniny 121 v 263 ml dichlórmetánu a pri laboratórnej teplote sa pridá 11,6 g trimetyloxóniumtetrafluórborátu a 17,4 g 2,6-di-/erc-butyl-4-metylpyridínu. Po 4 hodinách sa reakčná zmes vleje do ľadovej vody, po extrakcii do dichlórmetánu sa organický roztok prepláchne roztokom hydrogenuhličitanu sodného a zahustí sa. Čistením surového produktu chromatografovanim na kolóne silikagélu sa pripraví 18,5 g zlúčeniny 122. CCM: Rf = 0,25, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej 7/3, obj.

Príprava 109

Etyl-2,4,6-tri-O-acetyl-3-O-metyl-1 -tio-a-L-idopyranozid (124)

V 175 ml toluénu sa rozpustí 48,4 g zlúčeniny 123, t. j. 1,2,4,6-tetra-O-acetyl-3-(?-metyl-a-L-idopyranózy), pozri Juarand a kol., Bio. Med. Chem. Lett. 2, 897 - 900 (1992); ďalej sa pod dusíkom pridáva 20 ml etántiolu a 134 ml eterátu fluoridu boritého (v toluéne). Po hodinovom miešaní a pridaní 400 ml vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného sa zmes mieša ešte ďalšiu hodinu. Po naliatí do etyleste ru kyseliny octovej sa oddelená organická fáza prepláchne dva razy vodou, zahustí sa a ďalším čistením na kolóne silikagélu sa získa 29,6 g zlúčeniny 124

CCM: Rf = 0,45, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej, 6/4, obj.

Príprava 110 Metyl-0-(2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-metyl-a-L-idopyranozyl)-(1 ->4)-2-0-benzyl-3-0-p-metoxybenzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (125).

Pod dusíkom sa rozpustí v 525 ml toluénu 17,5 g zlúčeniny 122 a 28,2 g zlúčeniny 124, pridá sa molekulárne sito 4 Ä a reakčná zmes sa ochladí na -20 °C. Prikvapkáva sa pod neustálym prúdom dusíka čerstvo pripravený roztok 17,4 g 0,1 M N-jódimidu kyseliny jantárovej a 1,38 ml kyseliny trifluórmetánsulfónovej v zmesi dioxánu a dichlórmetánu, 1/1, obj. Po desiatich minútach sa červená reakčná zmes filtruje, filtrát sa prepláchne postupne vodným roztokom tiosíranu sodného a vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, zahustením vysušeného filtrátu sa získa 30,0 g zlúčeniny 125.

CCM: Rf = 0,45, silikagél, dichlórmetán/etylester kyseliny octovej, 8/2, obj.

Príprava 111

Metyl-0-(3-0-metyl-a-L-idopyranozyl)-( 1 ->4)-2-O-benzyl-3-O-p-metoxybenzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (126).

V 460 ml zmesi metanolu a dioxánu 1/1 obj. sa rozpusti 30,0 g zlúčeniny 128 a pridá sa kálium-/erc-butoxid. Za 15 minút sa reakčná zmes neutralizuje na živici Dowex 50WXU H⁺, zahustí sa vo vákuu a zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu s výsledkom 17,4 g zlúčeniny 126.

CCM: Rf = 0,25, silikagél, dichlórmetán/metanol 95/5 obj.

Príprava 112 Metyl-(?-(4,6-0-izopropylidén-3-0-metyl-a-L-idopyranozyl)-(l—>4)-2-O-benzyl-3-O-p-metoxybenzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (127).

Pod dusíkom sa rozpustí 17,4 g zlúčeniny 126 v 77 ml dimetylformamidu a po pridaní 26 ml 2,2-dimetoxypropánu a kyseliny p-toluénsulfónovej sa reakčná zmes mieša 30 minút. Nasleduje zriedenie reakčnej zmesi vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného s nasledujúcou extrakciou do etylesteru kyseliny octovej. Po oddestilovaní rozpúšťadla sa takto získa 19,7 g zlúčeniny 127.

CCM: Rf = 0,45, silikagél, dichlórmetán/Metanol, 95/5 obj.

Príprava 113 Metyl-0-(4,6-0-izopropylidén-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranozyl)-( 1 ->4)-2-0-benzyl-3-0-p-metoxybenzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (128).

Roztok 18,5 g zlúčeniny 127 v 24,4 ml dimetylformamidu sa ochladí na 0 °C a pod dusíkom sa pridá 1,47 g hydridu sodného, (disperzia v oleji, 60 %) a 2,36 ml metyljodidu. Po hodine sa prebytok hydridu sodného rozruší metanolom a extrakciou do dichlórmetánu a zvyčajným spracovaním sa získa 20,0 g zlúčeniny 128.

CCM, Rf = 0,85, silikagél, dichlórmetán/metanol, 95/5, obj.

Schéma 29

Syntéza disacharidu 138

128

129

OM·

132

131

T

CM*

133

M«O O**»

LevO

136

135 v

137

Μ·Ο ^0Μ·

COOBn A;O^ OBn ^C:I>

138

Príprava 114 Metyl-0-(4,6-0-izopropylidén-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranozyl)-(l->4)-2-0-benzyl-6-(?-metyl-a-D-glukopyranozid ]29

V zmesi 838 ml dichlórmetánu a 168 ml vody sa rozpustí 18,4 g zlúčeniny 128, pridá sa 7,1 g 2,3-dichlór-5,6-dikyano-l,4-benzochinónu a reakčná zmes sa mieša pri teplote 4 °C 18 hodín, vleje sa ďalej do vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a zmes sa extrahuje do dichlórmetánu. Zahustením organického vysušeného roztoku sa takto získa 12,7 g zlúčeniny 129.

CCM: Rf = 0,40, silikagél, dichlórmctán/mctanol 95/5 obj.

Príprava 115 Metyl-0-(4,6-izopropylidén-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranozyl)-(l->4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-mctyl-a-D-glukopyranozid (130).

V 178 ml suchého dimetylformamidu sa rozpustí 10,5 g zlúčeniny 129 a po ochladení na 0 °C sa pridá pod dusíkom

1,91 g hydridu sodného (60 % disperzia voleji) s následným prikvapkávaním 3,3 ml benzylbromidu. Za 30 minút je reakcia ukončená, nadbytok hydridu sodného sa rozruší metanolom, pridá sa voda a zmes sa extrahuje dvakrát do etylesteru kyseliny octovej. Po zahustení roztoku sa takto pripraví 13,6 g zlúčeniny 130.

CCM: Rf = 0,50, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej 1/1, obj.

Príprava 116 Metyl-O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranozyl)-(l-»4)-2,3-dí-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (131)

V zmesi kyseliny octovej a vody 77/33 obj. sa rozpustí zlúčenina 130, reakčná zmes sa mieša počas noci, zahustí sa dva razy po pridaní toluénu a zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu: 11,5 g zlúčeniny 131. CCM: Rf = 0,09, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej, 1/1, obj.

CCM: Rf = 0,68, silikagél, dichlórmetán/metanol 9/1, obj.

Príprava 117 Metyl-<7-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l->4)-2,3-di-O-bcnzyl-6-O-metyl-ct-D-glukopyranozid (132).

K roztoku 116 g zlúčeniny 131 v 60 ml dichlórmetánu sa pridá 33 mg 2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidinyloxy 40 ml roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 218 mg bromidu sodného a 289 mg tetrabutylamóniumchloridu, zmes sa ochladí na 0 °C a počas 15 minút sa pridá 44 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, 21,8 ml nasýteného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 50 ml 1,3 M roztoku chlómanu sodného. Po hodinovom miešaní sa reakčná zmes zriedi vodou a všetko sa extrahuje tri razy do dichlórmetánu. Spojený organický roztok sa prepláchne vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a filtrát sa zahustí. Získa sa tak 13,4 g surového produktu

132.

CCM: Rf= 0,14, silikagél, dichlórmetán/metanol 9/1, obj.

Príprava 118 Metyl-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(1 ->4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (133) .

Pod dusíkom sa rozpustí zlúčenina 132 v 110 ml dimetylformamidu, pridá sa 6,7 g hydrogenuhličitanu draselného, 10,7 ml benzylbromidu a reakčná zmes sa 90 minút mieša. Po pridaní etylesteru kyseliny octovej a vody sa oddelená organická fáza po extrakcii zahustí. Čistením chromatograflou na silikagéli sa takto pripraví 9,9 g zlúčeniny

133.

CCM: Rf = 0,43, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej, 4/6, obj.

Príprava 119 Metyl-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (134)

Roztok 9,9 g zlúčeniny 133 v 300 ml metanolu sa zahreje pod dusíkom do varu pod spätným chladičom, prikvapkáva sa 1 M roztok nátriummetoxidu v metanole (65,2 ml) a reakčná zmes sa pri miešaní zahrieva 3 hodiny do varu pod spätných chladičom. Po ochladení na laboratórnu teplotu sa pridá 22,2 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného a reakčná zmes sa mieša ďalších 90 minút. Po neutralizovaní na živici Dowex 50WX8H⁺ a filtrácii sa zmes zahustí, produkt sa rozpustí v dimetylformamide (192 ml) a pod dusíkom sa pridá molekulárne sito. K zmesi sa pridá ďalej 3,2 g hydrogenuhličitanu draselného a 4,8 ml benzylbromidu, zmes sa mieša 5 hodín, pridá sa etylester kyseliny octovej a voda, po extrakcii sa obidve fázy oddelia a organický roztok sa zahustí. Surový produkt sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu: 6,19 g zlúčeniny 134 a 1,88 g východiskovej látky 133.

CCM: Rf = 0,55, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej 4/6, obj.

Príprava 120 Metyl-O-(benzyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (135)

V 40 ml dioxánu sa rozpustí 6,2 g zlúčeniny 134, pridá sa 2,1 g kyseliny levulovej, 3,75 g dicyklohexylkarbodiimidu a 0,2 g 4-dimetylaminopyridínu, pričom sa reakčná zmes mieša pod dusíkom 2 hodiny. Pridaním 95 ml dietyléteru sa vylúči zrazenina, ktorá sa odfiltruje, filtrát sa prepláchne vodným roztokom hydrogensíranu sodného, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa filtrát zahustí. Kryštalizovaním zo zmesi éteru a heptánu sa izoluje 6,2 g zlúčeniny 135.

CCM: Rf = 0,26, silikagél, dichlórmetán/acetón 95/5 obj.

Príprava 121

0-(Benzyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l ->4)-1,3-dí-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-metyl-a,p-D-glukopyranóza (136).

Pod dusíkom sa rozpustí 6,1 g zlúčeniny 135 v 256 ml anhydridu kyseliny octovej a po ochladení na -20 °C sa prikvapkáva počas 30 minút zmes 4,9 ml kyseliny sírovej a 49 ml anhydridu kyseliny octovej. Po 60 minútach sa pridáva octan sodný tak dlho, kým má zmes neutrálnu hodnotu pH. Potom sa pridá voda a etylester kyseliny octovej, oddelená organická fáza sa zahustí. Čistením na kolóne silikagélu sa chromatografovaním izoluje zlúčenina 138 vo výške 4,2 g.

CCM: Rf = 0,24, silikagél, dichlórmetán/etylester kyseliny octovej 8/2, obj.

Príprava 122 0-(Benzyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranurozyl)-( I ->4)-3-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-metyl-a,3-D-glukopyranóza (137).

Do roztoku 4,2 g zlúčeniny 136 v 42 ml tetrahydrofuránu sa pridá 4,1 ml piperidínu a zmes sa mieša pri laboratórnej teplote počas noci. Po zriedení etylesterom kyseliny octovej sa roztok prepláchne pridaním 0,5 N kyseliny chlorovodíkovej, organický roztok sa zahustí a zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu: 3,2 g zlúčeniny 137.

CCM: Rf = 0,33, silikagél, dichlórmetán/etylester kyseliny octovej 1/1, obj.

Príprava 123 O-(Benzyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-3-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-metyl-a-Dglu-kopyranozyl-trichlóracetimidát (138).

Pod dusíkom sa rozpustí v dichlórmetáne 1,59 g zlúčeniny 137. pridá sa 1,1 ml trichlóracetonitrilu a 72 mg uhličitanu cézneho, zmes sa potom mieša hodinu. Po odfiltrovaní uhličitanu cézneho sa filtrát zahustí a čistí sa chromatografovaním na kolóne silikagélu, takto sa pripraví 1,57 g zlúčeniny 138.

CCM: Rf = 0,60, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej, 3/7, obj.

Schéma 30

Syntéza tetrasacharidu 140

1«

Príprava 124 Metyl-O-(benzyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l-+4)-0-(3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l-+4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (139).

Zmes 300 mg zlúčeniny 133 a 455,6 mg zlúčeniny 138 sa spoločne zahustí po pridaní toluénu a zvyšok sa rozpustí pod dusíkom v 6 ml dichlórmetánu. Po pridaní molekulárneho sita 4 Ä sa zmes ochladí na -20 °C, mieša sa takto 20 minút a v množstve 15 mol, prepočítané na zlúčeninu 138, sa pridá trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát. Po 10 minútach sa reakcia preruší pridaním vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, molekulárne sito sa odfiltruje, filtrát sa zriedi dichlórmetánom, roztok sa prepláchne vodou a po zahustení sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu: 560 mg zlúčeniny 139.

CCM: Rf = 0,50, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej 3/7 obj.

Schéma 31

Syntéza polysacharidu 142

117 ·

140

Príprava 125 Metyl-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranurozyl)-(1 -+4)-O-(3-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l-+4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozid (140).

V 1,9 ml pyridínu sa rozpustí 532,6 mg zlúčeniny 139 a pri laboratórnej teplote sa pridá zmes 2,4 ml kyseliny octovej a 0,3 ml hydrazínhydrátu v 1,9 ml pyridínu. Po miešaní 9 minút sa pridá dichlórmetán a voda, organická fáza sa po oddelení prepláchne postupne 0,1 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej, vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a vodou, po vysušení sa zahustí a zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu: 451 mg zlúčeniny 140.

CCM: Rf = 0,45, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej 3/7, obj.

142

Príprava 126 Metyl-O-(6-O-benzoyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l -+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1^>4)],O(6Oacetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-P-D-gluk.opyranurozyl)-( 1 -+4)-O-(3-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1-+4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid í 141).

Zmes 144 mg (0,086 mmol) zlúčeniny 117 a 76 mg (0,058 mmol) sa spoločne oddestiluje po pridaní toluénu a zvyšok sa rozpustí v 3,0 ml zmesi dichlórmetánu a éteru 1/2 obj./obj. Po pridaní 140 mg molekulárneho sita 4 Ä sa pod dusíkom zmes ochladí na 0 °C, pridá sa 128 μΐ 0,1 M roztoku terc-butyl-dimetylsilyltrifluórmetánsulfonátu v dichlórmetáne a za 15 minút sa reakcia preruší pridaním roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po extrakcii vodou a dichlórmetánom sa oddelená organická fáza po vysušení zahusti. Zvyšok sa najskôr čistí chromatografovaním na

Sephadexe LH 20, dichlórmetán a metanol, 1/1 obj., potom chromatografovaním na kolóne oxidu kremičitého: 124 mg zlúčeniny 141, pomer anomérov α/β = 8/2.

CCM: Rf = 0,80, silikagél, toluén/acetón, 1/1 obj.

Príprava 127 Metyl-O-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1 -+4)-(0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1-+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-+4)]₃-0-(6-0-acetyl-2,3-di-0-mctyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-0-(benzyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranurozyl)-(l-+4)-0-(3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—+4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l-+4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (142).

Zlúčenina 141 sa prevedie na 142 podľa postupu prípravy látky 140. Zlúčenina 142 je zmes α/β anomérov 8/2 CCM: Rf= 0,45, silikagél, toluén/acetón 1/1, obj.

Schéma 32

Syntéza trisacharidu 147

147

Príprava 128

0-(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(2,3,6-tri-O-acetyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-1,2,3,6-tetra-O-acetyl-P-D-glukopyranóza (144)

V malých dávkach sa pridáva 7 g (13,9 mmol) maltotriózy (obchodne dostupná látka) do suspenzie 7 g (85 mmol) octanu sodného v 70 ml anhydridu kyseliny octovej pri teplote 155 °C. Po pätnástich minútach sa číry roztok ochladí, reakcia sa preruší pridaním 700 ml ľadovej vody, a po extrakcii do etylesteru kyseliny octovej sa orga nický roztok prepláchne vodou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a po filtrácii sa zahustením filtrátu získa 13,1 g zlúčeniny 144

CCM: Rf = 0,53, silikagél, dichlórmetán/etylester kyseliny octovej 7/3, obj.

Príprava 129 Etyl-0-(2,3,4,6-tetra-0-acetyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-acetyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-2,3,6-tri-O-acetyl-l -tio-P-D-glukopyranozid (145).

V 80 ml toluénu sa rozpustí 13 g (13,5 mmol) zlúčeniny 144. pod dusíkom sa pridáva do roztoku 1,97 ml (26,9 mmol) etántiolu a 3,7 ml molámeho roztoku dietyleterátu fluoridu boritého v toluéne. Reakčná zmes sa 60 hodín mieša, zriedi sa vodou a dichlórmetánom, organická fáza sa po oddelení prepláchne 10 % roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vodou, vysuší, filtruje a zahustí. Surový produkt reakcie sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu: 8,6 g zlúčeniny 145

CCM: Rf = 0,60, silikagél, dichlórmetán/etylester kyseliny octovej 7/3 obj.

Príprava 130

Etyl-O-(a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-1 -tio-p-D-glukopyranozid (146).

Zlúčenina vzorca 145 sa prevedie na látku 146 postupom, ktorý bol opísaný na prípravu zlúčeniny 95.

CCM: Rf = 0,80, silikagél, etylester kyseliny octovej/pyridin/kyselinaoctová/voda 13/7/1,6/4 obj.

Príprava 131 Etyl-0-(2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-a-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-2,3,6-tri-0-benzoyl-l-tio-p-D-glukopyranozid (147).

Zlúčenina vzorca (146) sa prevedie na látku 147 postupom opísaným na prípravu zlúčeniny 92.

CCM: Rf = 0,50, silikagél, toluén/etylester kyseliny octovej 9/1, obj.

Schéma 33

Syntéza polysacharidu 150

147 » 142

118

I

149 l

15D

Príprava 132

Metyl-0-(2,3,4,6-tetra-0-acetyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-a-D-glukopyranozyl)-(1^-4)-0-(2,3, ó-tri-Obenzoyl-p-D-gliikopyranozyl)-(l->4)-O-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyTanozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-«-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₃-O-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(benzyl-2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-O-(3-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(benzyl-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l->4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (148).

Podľa postupu, opísaného pri príprave zlúčeniny 109, sa spojí spolu 105 mg (0,066 mmol) tioglykozidu 147 a 55 mg (0,017 mmol) glykozylového akceptora 142, pomer α/β = 8/2. Surový reakčný produkt sa vyčistí najskôr chromatografovaním na Sephadexe LH 20 použitím sústavy dichlórmetán a metanol, 1/1, potom chromatografovaním na kolóne silikagél so sústavou dietyléter/etylester kyseliny octovej/etanol 0/0,5/0,5 obj. Zlúčenina 148 sa získa vo výťažku 49 mg.

CCM: Rf = 0,30, silikagél, dietylester/etylester kyseliny octovej/etanol, 85/7,5/7,5, obj.

Príprava 133

Metyl-0-(2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-O-(2,3, ó-tri-O-benzoyl-p-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₃-O-(6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-(2,3-di-O-metyl-3-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-O-(3-O-acetyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l->4)-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (149).

Roztok 47 mg (0,01 mmol) zlúčeniny 148 v 10 ml etylesteru kyseliny octovej sa pretrepáva v atmosfére dusíka 3 hodiny s 10 % paládia na uhlí (90 % hmotnostné so zreteľom na látku 148). Zahustením filtrátu sa získa 42 mg zlúčeniny 149

CCM: Rf = 0,35, silikagél, etylester kyseliny octovej/pyridín/kyselina octová/voda 20/7/1,6/4, obj.

Príprava 134

Metyl-0-(a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(a-D-glukopyranozyl)-(l ->4)-(P-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(1->4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₃-0-(2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l->4)-0-(6-0-metyl-a-D-g1ukopyranozyl)-(l-»4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l-»4)-6-O-metyl-a-D-glukopyranozid (150).

Zmes 0,22 ml metanolu a 0,66 ml 0,66 N roztoku hydroxidu sodného sa vleje na 41 mg (0,01 mmol) zlúčeniny 149 a zmes sa mieša 20 hodín pri laboratórnej teplote. Potom sa zriedi vodou a okyslí pridávaním 0,5 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej až do dosiahnutia hodnoty pH 6,5. Po zahustení sa roztok zbaví solí na kolóne Sephadexu G-25 použitím sústavy vody a acetonitrilu 9/1 obj. Frakcia s obsahom hexadekasacharidu sa spoji a lyofilizovaním sa takto získa 26 mg zlúčeniny 150 vo forme amorfného bieleho prášku.

CCM: Rf = 0,35, silikagél, etylester kyseliny octovej/pyridín/kyselina octová/voda: 8/7/1,6/4 oj.

Príprava 135 6-O-/erc-Butyldimetylsi I yl-1,2-O-izopropylidén-3-O-metyl-a-D-glukofuranóza (152)

V 100 ml bezvodého dichlórmetánu sa rozpustí 10 g (42,7 mmol) diolu 151, pridá sa 7,1 g (47,3 mmol) terc-butyldimetylsilylchloridu a 5,8 g (85,3 mmol) imidazolu, reakčná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote, po dvoch hodinách sa zriedi pridaním dichlórmetánu, roztok a prepláchne vodou, organická fáza sa vysuší bezvodým síranom horečnatým, filtrát sa zahustí a zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu použitím sústavy etylester kyseliny octovej a cyklohexán 1/9 obj. Vo forme sirupu sa získa očakávaný produkt 152 vo výťažku 11,9 g (80 %). [oc]_D -34 (c = 1,9, chloroform).

Príprava 136 6-O-terc-Butyldimetylsilyl-l,2-O-izopropylidén-3-O-metyl-5-C-vinyl-a-D-glukofuranóza (154).

Pri ochladení na -78 °C sa pridá do 40 ml bezvodého dichlórmetánu 3,2 ml (36,8 mmol) dichloridu kyseliny oxalovej a 5,2 ml (73,4 mmol) dimetylsulfoxidu, zmes sa mieša 30 minút, pridá sa ešte 8,4 g (18,4 mmol) zlúčeniny 152 a v miešaní reakčnej zmesi sa pokračuje ešte hodinu. Potom sa pridá 15,3 ml (110,0 mmol) trietylamínu a po 30 minútach sa reakčná zmes zriedi dichlórmetánom. Klasickým postupom sa potom získa 5-ulóza (153), ktorá sa priamo použije pri ďalšej reakcii. Surový ketón 153 sa rozpustí v 100 ml bezvodého tetrahydrofuránu a pridá sa 1 M roztok vinylmagnéziumbromidu v tetrahydrofuráne, 28 ml (27,6 mmol) pri ochladení na 0 °C. Po hodine sa zmes zriedi chloridom amónnym, prepláchne sa vodou, organický roztok sa vysuší bezvodým síranom horečnatým, filtrát sa zahusti a zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu použitím sústavy etylester kyseliny octovej a cyklohexán, 1(9 obj. Vo forme sirupu sa takto pripraví 4,8 g (70 %) zlúčeniny 154. [a]_D 40, (c = 1,3, chloroform). Analýza vypočítané: 57,72 % C, 9,15 H nájdené: 57,77 % C, 9,23 % H

Príprava 137 l,2,4,6-Tetra-O-acetyl-3-O-metyl-5-C-vinyl^-Dglukopyra-nóza (156)

Vo vode (50 ml) sa rozpustí 3,5 g (9,4 mmol) zlúčeniny 154 a po pridaní 1 g živice IR-120 sa všetko zahrieva 6 hodín na 80 °C. Živica sa odfiltruje a filtrát sa zahustí; produkt 155 sa acetyluje použitím 12 ml anhydridu kyseliny octovej a 13 ml pyridínu. Nadbytok anhydridu kyseliny octovej sa rozruší pridaním metanolu, rozpúšťadlá sa oddestilujú, zvyšok sa extrahuje do zmesi vody a dichlórmetánu, oddelená organická fáza sa vysuší bezvodým síranom horečnatým, filtrát sa zahustí a po prečistení na kolóne oxidu kremičitého chromatografovaním v sústave etylester kyseliny octovej/cyklohexán, 3/2 obj. sa získa vo výťažku 2,7 g (75 %) tetraacetylderivát 156 vo forme pevnej látky, 1.1. 50 °C.

[a]_D -84, (c = 1,6, chloroform) Analýza vypočítané: 52,47 % C, 6,19 % H nájdené: 52,51 % C, 6,19 % H CI-MS: 406 (M + NH₄), 389 (M + 1).

Príprava 138 Metyl-2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(2,4,6-tri-O-acetyl-3-O-metyl-5-C-vinyl-P-D-glukopyranozyl)-a-D-glukopyranozid (158)

V 50 ml bezvodého dichlórmetánu sa rozpustí 1,6 g (4,1 mmol) zlúčeniny 156 a 2,1 g (4,5 mmol) zlúčeniny 157, pozri Garegg P. J. a Hultberg H., Carbohydr. Res. 93, C10 (1981). Po pridaní 4,0 g molekulárneho sita sa reakčná zmes mieša hodinu pri laboratórnej teplote, potom sa po ochladení na -78 °C pridá 0,95 ml (5,2 mmol) TMSOTf.

Teplota reakčnej zmesi sa nechá vystúpiť pomaly na laboratórnu teplotu a o 2 hodiny sa reakčná zmes neutralizuje trietylamínom, filtruje cez celit, filtrát sa prepláchne vodou, organická fáza sa potom vysuší bezvodým síranom horečnatým a zahustením filtrátu sa získa zvyšok. Ten chromatografickým čistením na oxide kremičitom v sústave etylester kyseliny octovej/cyklohexán, 4/1, obj. poskytne 2,77 g (85 %) zlúčeniny 158 v pevnej forme, t. t. 47 °C. [a]_D -36°, (c - 0,6, chloroform).

Príprava 139 Metyl-2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(4,6-O-izopropylidén-3-O-metyl-5-C-vinyl-P-D-glukopyranozyl)-a-D-glukopyranozid (160).

V 40 ml metanolu sa rozpustí 2,7 g (3,4 mmol) zlúčeniny 158. Pri teplote 0 °C sa pridá katalytické množstvo sodíka a všetko sa potom mieša pri laboratórnej teplote 3 hodiny. Po oddestilovaní rozpúšťadla sa zvyšok 159 rozpusti v 40 ml bezvodého acetónu, pridá sa množstvo 2 ml 2,2-dimetoxypropánu a katalytické množstvo kyseliny p-toluénsulfónovej. Reakčná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote cez noc, rozpúšťadlo sa oddestiluje, zvyšok sa rozpustí v chloroforme a roztok sa prepláchne vodou. Organická fáza sa vysuší bezvodým síranom horečnatým, zahustí sa a zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne oxidu kremičitého v sústave etylester kyseliny octovej/cyklohexán, 1/1, obj. a získa sa tak 1,7 g (700) 4',6'-izopropylidénového derivátu, pevná látka, t. t. 55 °C. [a]o + + 13 , (c = 0,8, chloroform

Analýza vypočítané: 67,97 % C, 7,13 % H nájdené: 67,87 % C, 7,16 % H

CI-MS: 707 (M + 1), 724 (M + NH₄)

Príprava 140 Metyl-2,3,6-tri-0-benzyl-4-0-(4,6-0-izopropylidén-3-0-metyl-5-C-vinyl-p-D-manopyranozyl)-a-D-glukopyranozid (162)

V prostredí 10 ml bezvodého dichlórmetánu sa pretrepáva 30 minút pri ochladení na -78 °C zmes 0,35 ml (4,0 mmol) dichloridu kyseliny oxalovej a 0,57 ml (8,0 mmol) bezvodého dimetylsulfoxidu. Pridá sa 1,4 g (2,0 mmol) zlúčeniny 160, rozpustené v 10 ml bezvodého dichlórmetánu a všetko sa mieša ďalších 45 minút. Reakčná zmes sa neutralizuje pridaním 1,7 ml (12,0 mmol) bezvodého trietylamínu, zriedi sa dichlórmetánom, roztok sa prepláchne vodou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a filtrát sa zahustí. Zvyšok, látka 161 sa použije priamo pre ďalšiu reakciu bez čistenia. Ketón 161 sa rozpustí v 15 ml bezvodého tetrahydrofuránu, pridá sa 1 N roztok superhydridu v tetrahydrofuráne (4 ml, 4,0 mmol) pri ochladení na -78 °C, potom sa reakčná zmes mieša hodinu pri laboratórnej teplote a zriedi sa pridaním 2 ml 5 % roztoku hydroxidu sodného a 1 ml peroxidu vodíku. Po oddestilovaní rozpúšťadiel sa zvyšok rozpustí v etylesteri kyseliny octovej, tento roztok sa prepláchne vodou, vysuší sa bezvodým síranom horečnatým a filtrát sa zahustí. Zvyšok sa čistí chromatografovaním použitím sústavy etylester kyseliny octovej a cyklohexán, 2/1, obj. Takto sa pripraví 1,0 g (70 %) zlúčeniny 162.

[a]_D = 1Γ, (c = 0,5, chloroform) CI-MS: 724 (M + 18), 707 (M + l).

Príprava 141 Metyl-2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(2-O-acetyl-3-O-metyl-5-C-vinyl-P-D-manopyranozyl)-a-D-glukopyranozid (164)

V 3 ml pyridínu sa rozpusti 940 mg (1,3 mmol) zlúčeniny 162, pridá sa 0,3 ml anhydridu kyseliny octovej a reakčná zmes sa mieša pri normálnej teplote 3 hodiny. Nadbytok pyridínu aj anhydridu kyseliny octovej sa oddestiluje, zvyšok, látka 163 sa použije priamo pri odstraňovaní izopropylidénovej skupiny použitím 5 ml 80 % kyseliny octovej, 2 hodiny, 60 °C. Nadbytok kyseliny octovej sa oddestiluje a zvyšok sa čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu v sústave etylester kyseliny octovej a cyklohexán, 4/1 obj. Získa sa tak 660 mg (70 %) diolu 164 vo forme pevnej látky, 1.1. 53 “C.

[a]_D -10°, (c = 0,8, chloroform) CI-MS 709 (M+l), 726 (M + 18)

Príprava 142 Metyl-2,3,6-tri-0-benzyl-4-(2-0-acetyl-3-0-metyl-6-0-tosyl-5-C-vinyl-3-D-manopyranozyl)-a-D-glukopyranóza (165)

V 3 ml pyridínu sa rozpustí 600 mg (0,9 mmol) látky 164 a pridá sa 240 mg (1,2 mmol) p-toluénsulfonylchloridu; reakčná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote 3 hodiny, rozpúšťadlo sa oddestiluje, zvyšok sa zriedi chloroformom a roztok sa po prepláchnutí vodou vysuší bezvodým síranom horečnatým. Zvyšok sa po zahustení filtrátu čisti chromatografovaním na kolóne silikagélu v sústave etylester kyseliny octovej a cyklohexán, 1/1, obj. Získa sa tak tosyl-derivát 165 vo výťažku 297 mg (80 %) vo forme sirupu.

[a]_D -26 , (c = 0,8, chloroform).

Príprava 143 Metyl-2,3,6-tri-O-benzyl-4-(2,6-anhydro-3-O-metyl-5-C-vinyl-P-D-manopyranozyl)-a-D-glukopyranozid (166).

V 3 ml etanolu sa rozpustí 550 mg (0,8 mmol) zlúčeniny 165, pridá sa 5 ml 0,1 N etanolického roztoku hydroxidu sodného, reakčná zmes sa zahrieva 3 hodiny na 70 °C, potom sa neutralizuje na živicu IR-120 vo vodíkovom cykle a filtruje sa cez celit. Zvyšok sa po zahustení čistí chromatografovaním na kolóne silikagélu v sústave etylester kyseliny octovej/cyklohexán 1/1 obj. a získa sa tak 292 mg (70 %) zlúčeniny 166 vo forme sirupu. [a]_D + 13°, (c = 0,5, chloroform).

CI-MS: 666 (M+ 18)

Príprava 144 Mctyl-2,3,6-tri-O-bezyl-4-(benzyl-3-O-metyl-2-O-5-C-metylidén-a-L-idopyranurozyl)-a-D-glukopyranozid (167).

V 20 ml dichlórmetánu sa rozpustí 260 mg (0,4 mmol) zlúčeniny 166, roztok s mieša pri ochladení na -78 °C a potom sa 30 sekúnd roztok prebubláva ozónom, farba roztoku sa zmení na bledožltú. Do roztoku sa pridá dimetylsulfid, potom sa reakčná zmes prepláchne vodou, organická fáza sa vysuší bezvodým síranom horečnatým, zahusti sa a priamo bez akéhokoľvek čistenia sa použije v ďalšej reakcii. Surový aldehyd sa rozpustí v 16 ml íerc-butylalkoholu, pridá sa 5 ml 2-metyl-2-buténu a 16 ml vody. Do zmesi sa ďalej postupne pridáva 700 mg dihydrogenfosforečnanu sodného a 700 ml chloritanu sodného. Suspenzia sa energicky mieša pri zvyčajnej teplote počas noci, zriedi sa vo dou a produkt sa extrahuje do etylesteru kyseliny octovej. Organický roztok po vysušený bezvodým síranom horečnatým sa použije priamo v ďalšej reakcii. Surová kyselina sa rozpustí v 25 ml dimetylformamidu, pridá sa 0,7 g (2,0 mmol) tetrabutylamóniumjodídu, 0,25 g (2,5 mmol) hydrogenuhličitanu draselného a 0,250 ml (2,1 mmol) benzylbromidu. Reakčná zmes sa mieša pri laboratórnej teplote hodín, extrahuje sa vodou a éterom, roztok éteru sa vysuší bezvodým síranom horečnatým, filtrát sa zahustí a zvyšok sa chromatografuje na kolóne silikagélu v sústave etylester kyseliny octovej a cyklohexán 2/1 obj. Získa sa tým 236 mg (80 %) derivátu 167 vo forme sirupu, CI-MS: 774 (M + 18)

Schéma 34

Príprava syntónu použiteľného na syntézu pentasacharidu Pe, ktorého konfigurácia kyseliny L-idurónovej je uzatvorená (III. 1.) Príprava východiskového monosacharidu

HO---- HO----	O, ο-^<		1USO-~ 110---	0 oxidace	TDSO—- o—
			SWERN O-Y	/	o-Y
151		152	153

Clt₂= CIIMgBr

TUF, 0C, 10 min

B5%

OAc anh.kys.ootové pyridin

on

155

IR-120, l^O

80° C, 6 hod

-

154

156

75% ve dvou etapách

Schéma 34, 1. pokračovanie

Príprava a prvé premeny disacharidu

l'MSOTf mol.sito 4λ

UUft cHjCaij

-78° C *4' Λ 20°C

CHjONa

CH^OH

20° C .

hoď '

oxidace SWERN

------------->

Schéma 34. 2. pokračovanie

3. Konštruovanie bicyklického systému

p-TosCl pyridín 2o°a

Me 3 hod

80%

164

70%

166

Oj, CUjClg, -78° C NeClOg, methylbuten tarc.-BuOH 3) BnBr, KHCO

75%

165

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad l

Sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-3-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-[O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-( 1 ->)]₆-O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l -+4)-0-(2,3 -di-O-metvI-p-D-glukopyranurozyl)-( 1 —>4)-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu (168).

Zo zlúčeniny 31 spracovaním podľa spôsobu 5 sa získa látka 168 (80 % v 3 etapách) [a]_D + 41, (c = 0,8, voda). ESIMS, záporný modul: monoizotopická hmotnosť = = 7133,28, chemická hmotnosť = 7138,90, experimentálna hmotnosť = 7137,26 ± 0,0 u. m. a.

’H NMR (D₂O) δ hlavných anomémych protónov: 5,71, 5,48, 5,46, 5,44, 5,17, 5,08, 4,81, 4,78,4,67 ppm.

Rovnakým spôsobom je možné pripraviť zlúčeniny 169 a 170.

Tabuľka I

číslo príkladu	t	Md
2. zlúčenina 169	5	+ 39
3. zlúčenina 170	6	+ 38

Príklad 4

Sodná soľ metyl-O-(2,3-di-O-metyl-4,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)] 15-0-(2,3-di-O-mctyl-[)-D-glukopyranurozyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-0-(2,3 -di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(1 -+4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu (171)

Podľa spôsobu 5 sa spracuje 55 mg (10,5 mmol) zlúčeniny 51 a po lyofilizovaní sa pripraví 50 mg (77 % v 3 eta pách) produktu typu esteru kyseliny sírovej, [a]_D + 107 (c = 0,52, voda).

ESIMS, kladný modul: hmotnosť monoizotopická = = 6194,16, hmotnosť chemická = 6198,83, hmotnosť experimentálna = 6195,33 ± 1,79 ‘H NMR (D₂O) δ hlavných anomémych protónov: 5,71, 5,67, 5,48, 5,43, 5,17, 5,10,4,68 ppm.

Obdobným spôsobom je možné pripraviť zlúčeniny 172 a 173.

Tabuľka II

[<x]» číslo príkladov t

5. zlúčenina 172 5 + 119

6. zlúčenina 173 6 + 124

Príklad 7

Sodná soľ metyl-O-(3-O-metyl-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl-(l->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyI)-(l-+4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-<?-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-P-D-gIukopyranozyl)-(l->4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)]₄-<?-(2,3-di-C>-metyl-6-O-sulfb-cz-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3-di-O-metyl-3-D-glukopyranurozyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-ť?-sulfo-a.-D-glukopyranozyl)-(1—>4)-O-(2,3-di-<9-mctyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu (174).

Spracovaním zlúčeniny 75 podľa spôsobu 5 sa získa vo výťažku 84 % (v troch etapách) zlúčeniny 174, [a]_D + 62, (c = 0,46, voda).

ESIMS, kladný modul: monoizotopická hmotnosť = 4966, 39, chemická hmotnosť = 4970,04, experimentálna hmotnosť = 4969,63 + 0,78 u. m. a.

’H NMR (D₂O) δ hlavných anomémych protónov: 5,69, 5,63, 5,46, 5,44, 5,41, 5,15, 5,06, 4,79, 3,66, 4,62, 4,41 ppm.

Postupom podľa príkladu 7 a použitím vhodných medziproduktov je možné pripraviť látky z príkladov 8 až 12, opísané v ďalšej tabuľke III.

Tabuľka III

číslo príkladu	m	t	[o]d
8. zlúčenina 175	3	3	+ 51
9. zlúčenina 176	1	5	+ 65
10. zlúčenina 177	1	4	+ 59
11. zlúčenina 178	2	3	+ 47
12. zlúčenina 179	3	2	+ 36

Príklad 13

Metyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-O-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-3-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-»4)-[0-(2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranozyl)-( 1-+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₃-O-(2,3-di-O-metyI-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3-di-0-metyl-3-D-glukopyranurozyl)-(l—>4)-O-(6-O-metyl-2,3-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-0-(2,3-di-O-metyl-cc-L-idopyranurozyl)-( 1 ->4)-6-0-metyl-2,3-di-0-sulfo-a-D-glukopyranozid (180).

V 0,87 ml dimetylformamidu sa rozpustí 26 mg (0,0084 mmol) hexadekasacharidu 150, dokonale zbaveného ochranných skupín a pod dusíkom sa pridáva 125 mg (0,67 mmol, 80 ekv) komplexu oxidu sírového s trietylamí nom. Reakčná zmes sa mieša 16 hodín pri teplote 50 °C, po ochladení na 0 °C sa pridá 227 mg (2,6 mmol) vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, zmes sa zahustí na malý objem a ten sa nanesie na kolónu Sephadexu G-25 pri eluovaní zmesou vody a acetonitrilu 9/1, obj. Vhodné frakcie sa oddelia, zahustí na malý objem, ten sa nanesie na kolónu Dowex XW4 Na⁺ charakteru výmenných iónov s použitím malého objemu vody a eluát sa lyofilizuje, získa sa tým 37 mg zlúčeniny 151 vo forme bieleho prášku, [a]_D ²⁰ ~ ⁺ 67,7,(c = 1, voda). MS ESI: molekulárna hmotnosť 4370,6 (forma H⁺)

C_]2gH₂₂₂0₁|₃S₁₆ (vypočítaná mol. hmotnosť = 4370,14). NMR anoméme protóny (ppm), poloha

1. jednotka: 5,17, 2. jednotka 5,03, 3. jednotka 5,41,4. jednotka 4,42, 5. jednotka 5,49, 6. jednotka 4,66, 7,, 9. a 11. jednotka 5,67, 8., 10. a 12. jednotka: 4,46, 13. jednotka: 5,61, 14. jednotka: 4,94, 15. jednotka 5,59, 16. jednotka 5,69.

Schéma 35 - štruktúra polysacharidu 180 (príklad 13)

Claims (15)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1, Syntetický polysacharid, obsahujúci oblasť viažucu sa na antitrombín III, predstavovanú reťazenim piatich monosacharidov, obsahujúcich celkovo dve karboxylové funkcie a najmenej štyri sulfónové skupiny s tým, že táto oblasť je priamo viazaná neredukujúcou koncovkou na oblasť väzby na trombín, obsahujúcou reťazenie 10 až 25 jednotiek monosacharidov, zvolených z hexóz, pentóz a dezoxycukrov, ktorých hydroxylové skupiny sú nezávisle éterifikované alkylovými skupinami s jedným až šiestimi atómami uhlíka alebo esterifikované do formy sulfónových skupín, rovnako aj ich soli, najmä farmaceutický prijateľné.
2. 2. Polysacharid podľa nároku 1 vzorca

   XO (OX)_h

   R_la znamená R_b alebo znamená s atómom kyslíka, na ktorom je uvedená skupina viazaná a s uhlíkovým atómom, na ktorom je skupina karboxylová na rovnakom cykle skupinu C-CH₂O,

   R znamená alkylovú skupinu s jedným až šiestimi atómami uhlíka,

   W znamená kyslík alebo metylénová skupinu, alebo niektorú zo solí, najmä farmaceutický prijateľnú.
3. 3. Soľ polysacharidu podľa nároku 2, kde katión je zvolený z katiónov alkalických kovov, najmä sodíka alebo draslíka.
4. 4. Polysacharid podľa nároku 2 alebo 3 vzorca

   _ťox Ab -OX Αχ; O**\ 01 - -°Χθ (0*)h (QX)_h (°*!h (QX)_ň m Jt

   kde (I), v ktorom vlnovka znamená väzbu nad alebo pod rovinou pyranózového cyklu m

   znamená zvláštnu skupinu polysacharidov Po, viazaných anomémym uhlíkovým atómom na Pe, ako je to uvedené pre (I) uvedený vzorec znamená polysacharid Po, obsahujúci n jednotiek monosacharidických, totožných alebo rôznych, viazaných anomémym atómom na Pe je príkladnou schémou monosacharidickej jednoty pyranózovej štruktúry, zvolenej medzi hcxózami, pentózami a dezoxycukrami s tým, že takáto jednotka je viazaná anomérnym uhlíkovým atómom na inú monosacharidickú jednotku a hydroxylové skupiny tejto jednotky sú substituované skupinami X, rovnakými alebo rôznymi s tým, že skupiny X sú zvolené z alkylových skupín s jedn,ým až šiestimi atómami uhlíka a sulfoskupin, n znamená číslo od 10 až do 25,

   Pe znamená pentasacharid štruktúry kde

   Rj znamená alkylovú skupinu s jedným až šiestimi atómami uhlíka alebo sulfoskupinu, má význam, ako to bolo uvedené pre vzorec (I),

   OX majú význam, ako to bolo uvedené pre (I) a v prípade rovnakého monosacharidu môžu byť totožné alebo rôzne monosacharidy, obsiahnuté v [ ]_m tvoria disacharid, opakujúci sa m-krát, monosacharidy, obsiahnuté [ ], tvoria disacharid, opakujúci sa t-krát, m znamená 1 až 8, t znamená 0 až 5, p znamená 0 až 1 za predpokladu, že 5 < m + t < 12, a ich soli, najmä farmaceutický prijateľné.
5. 5. Polysacharid podľa nároku 2 alebo 3 vzorca kde

   M .°x (OX>_h I <3X)„ (CX)„ - Jp L JL J r

   (II. A),

   .OX (□X)_h (OX)_h IOX)_h - ť

   znamená zvláštnu skupinu polysacharidov Po, viazaných anomémym uhlíkovým atómom na Pe, ako to bolo uvedené pre(I) ox má význam, ako to bolo uvedené pre (I),

   OX majú významy, ako to bolo uvedené pre (I) a v prípade jedného monosacharidu môžu byť totožné alebo rôzne, monosacharid, obsiahnutý v [ ]_m- sa opakuje m'-krát, monosacharid obsiahnutý v [ ]_t- sa opakuje ť-krát, monosacharid obsiahnutý v [ ]_p· sa opakuje p', m' sa mení od 1 do 5, ť sa mení od 0 do 24 a p' sa pohybuje od 0 do 24 za predpokladu, že 10 < m' + ť + p' < 25, rovnako aj ich soli, najmä farmaceutický prijateľné.
6. 6. Soľ podľa nároku 2 alebo 3, ktorej anión má vzorec kde t znamená 5, 6 alebo 7, katiónom je jednoväzbový katión, farmaceutický prijateľný, rovnako aj ich zodpovedajúce soli kyselín.
7. 7. Soľ podľa nároku 2 alebo 3, ktorej anión má vzorec kde t znamená 5, 6 alebo 7, a kde katiónom je jednoväzbový katión, farmaceutický prijateľný, rovnako aj ich zodpovedajúce soli kyselín.
8. 8. Soľ podľa nároku 2 alebo 3, ktorej anión má vzorec kde m znamená 1, 2 alebo 3 a t znamená 2, 3, 4 alebo 5 a kde katiónom je jednoväzbový katión, farmaceutický prijateľný, rovnako aj ich zodpovedajúce soli kyselín.
9. 9. Polysacharidy, zvolené z týchto ďalej uvedených sodná soľ metyl-O-(3-O-metyl-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l—+4)-[O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)]₄-O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-O-(2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l-+4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(1 -»4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-O-(3-O-metyl-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4}-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfb-[J-D-glukopyranozyl)-(l—+4)-[O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l^-4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-|j-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)]₅-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( 1 ->4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)

   -(1-+4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—+4)-2,3,6-tri-O-sufo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-Cí-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-(0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-3-D-glukopyranozyl)-(l—>4)]₆-O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3-di-0-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( 1-+4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(1 -+4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-O-(2,3-di-O-metyl-4,6-di-O-sulfo-a-D-glykopyranozyl)-( 1 -+4)-(0-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-] j,-0-(2,3-di-O-metyl-3-D-gl ukopyranurozyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1 -+4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l -+4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-O-(2,3-di-O-metyl-4,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-(0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)]i₃-O-(2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1 -+4)-0-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-O-sulfo-ct-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-[0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)]₁5-0-(2,3-di-0-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l-+4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(1 ->4)-0-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1 -+4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-O-(3-O-metyl-2,4,6,-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-O-(3-O-metyI-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-[O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)]₂-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l—+4)]₃-O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1-+4)-0-(2,3-di-0-metyl-3-D-glukopyranurozyl)-(1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1-+4)-0-(2,3-dí-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( 1-+4)-2,3,6-tri-O-sulfo-ot-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-O-(3-O-metyl-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l—+4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyI)-(l-+4)-[0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-|í-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)]₂-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l-+4)]₃-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l—+4)-O-(2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l-+4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l—+4)-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l-+4)-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-O-(3-O-metyl-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-(0-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyra nozyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₄-ť?-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(1 -+4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfb-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranozyl-( 1 ->4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranozyl)-(l-+4)]₃-O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-0-(2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(1 -+4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 ->4)-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l—>4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-0-( 3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranozyl)-( 1 —>4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(1-+4)-0-(2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyr anozyl)-(1—>4)]₄-0-(’2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-0-(2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranurozyl)-(1 -+4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-( l->4)-2,3,6-tn-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu, sodná soľ metyl-0-(3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-( 1 -+4)-0-(3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-[O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranozyl)-(l-+4)-O-(2,3,6-tri-O-metyl-P-D-glukopyranozyl)-(l->4)]₅-O-(2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l->4)-O-(2,3-di-O-metyl-P-D-glukopyranurozyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozyl)-(l—>4)-(2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranurozyl)-(l-+4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranozidu.
10. 10. Spôsob prípravy zlúčenín všeobecného vzorca (I), vyznačujúci sa tým, že sa v prvom stupni syntetizuje dokonale chránený prekurzor polysacharidu (I), s obsahom chráneného prekurzoru predĺženej oblasti Pe na svojej neredukujúcej koncovke chráneným prekurzorom sulfonátového polysacharidu Po a potom sa v druhom stupni zavedú a/alebo odkryjú negatívne nabité skupiny.
11. 11. Zlúčenina vzorca kde T, a T_n, rovnaké alebo rôzne, znamenajú substituent dočasný, semipermanentný alebo permanentný, Zje skupina, chrániaca hydroxylovú funkciu.
12. 13. Farmaceutické kompozície, obsahujúce ako účinnú zložku polysacharid podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 9 vo forme soli s farmaceutický prijateľnou bázou, alebo vo forme kyseliny, spoločne alebo v zmesi s inertným netoxickým excipiens, farmaceutický prijateľným.
13. 14. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 13 vo forme dávkovanej jednotky, v ktorej je účinná zložka zmiešaná najmenej s jedným farmaceutickým excipiens.
14. 15. Kompozícia podľa nároku 14, keď každá dávkovaná jednotka obsahuje 0,1 až 100 mg účinnej zložky.
15. 16. Kompozícia podľa nároku 15, v ktorej každá dávkovaná jednotka obsahuje 0,5 až 50 mg účinnej zložky.

    Koniec dokumentu kde T] a T_n, rovnaké alebo rôzne, znamenajú dočasný substituent alebo substituent semipermanentný alebo permanentný a Z je skupina chrániaca hydroxylovú skupinu.