RU2379684C2 - Способ определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты - Google Patents
Способ определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты Download PDFInfo
- Publication number
- RU2379684C2 RU2379684C2 RU2007144412/15A RU2007144412A RU2379684C2 RU 2379684 C2 RU2379684 C2 RU 2379684C2 RU 2007144412/15 A RU2007144412/15 A RU 2007144412/15A RU 2007144412 A RU2007144412 A RU 2007144412A RU 2379684 C2 RU2379684 C2 RU 2379684C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- asa
- effect
- incubation
- acid
- aggregation
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к аналитической химии, а именно к контролю за эффективностью антиагрегантной терапии при лечении сердечно-сосудистых заболеваний. Основным антитромботическим препаратом в лечении обострений ишемиической болезни сердца до настоящего времени остается ацетилсалициловая кислота (АСК). Вместе с тем, от 4 до 45% пациентов оказываются биохимически резистентными к ее действию. Предлагаемый способ количественного определения антитромботического эффекта АСК in vitro основан на измерении параметров индуцированной агрегации тромбоцитов непосредственно в цельной крови импедансным методом до и после инкубации проб с АСК. Способ позволяет повысить чувствительность, точность, воспроизводимость, сократить временя анализа. 1 ил.
Description
Изобретение относится к актуальной проблеме современной клинической и профилактической медицины - контролю за эффективностью антиагрегантной терапии при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, в частности острого коронарного синдрома (ОКС) и инфаркта миокарда (ИМ).
Основным антитромботическим препаратом в лечении обострений ишемиической болезни сердца (ИБС) до настоящего времени остается ацетисалициловая кислота (АСК), имеющая чрезвычайно выгодное соотношение «пользы и стоимости» лечения [3]. Независимая от других вмешательств способность АСК снижать смертность больных ИМ была убедительно продемонстрирована в многочисленных международных исследованиях (ISIS-2, IST, CAST).
Вместе с тем, в последние годы установлено, что существует большая категория больных, у которых АСК неспособна в должной мере подавлять функциональную активность тромбоцитов и у которых, несмотря на прием препарата, возникают ишемические осложнения. По данным разных авторов от 4 до 45% пациентов оказываются биохимически резистентными к действию АСК [5, 7, 9].
Рутинное исследование антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты в значительной мере тормозится отсутствием в клинике методов ее адекватной лабораторной диагностики. Известные способы оценки индивидуальной чувствительности больных к АСК (по времени капиллярного кровотечения, по уровню экскреции 11-дегидро-тромбоксана В2) малоспецифичны и имеют недостаточную воспроизводимость [5].
Наиболее близким аналогом (прототипом) данного изобретения является способ оценки эффективности приема АСК [1] по ее влиянию на параметры индуцированной различными агонистами агрегации кровяных пластинок в богатой тромбоцитами плазме (метод оптической агрегатометрии Борна [6]). Метод позволяет количественно оценивать скорость и амплитуду процесса агрегации in vitro. Для изучения антиагрегационных свойств в пробирку с обогащенной тромбоцитами плазмой предварительно вносили раствор АСК в конечной концентрации в кювете 25 мМ и инкубировали в течение 10 минут. Затем вносился индуктор (АДФ или адреналин) и регистрировалась агрегация в течение 10 минут. Результаты сравнивались с показателями агрегации, вызванной индукторами без предварительного воздействия АСК, с вычислением суммарного индекса агрегации тромбоцитов (СИАТ).
Основными недостатками указанного способа являются: 1) низкие чувствительность и точность метода, что обусловливает необходимость использования высоких концентраций АСК и объясняет отсутствие положительных результатов при использовании в качестве агониста АДФ; 2) длительность, трудоемкость и критичность [4, 8] процесса приготовления богатой тромбоцитами плазмы (БТП); 3) в ходе центрифугирования кровяные пластинки подвергаются значительным механическим воздействиям, которые существенно изменяют их функциональную состоятельность и приводят к потере фракции наиболее крупных и активных клеток; 4) на этапе пробоподготовки нарушается естественное окружение тромбоцитов, что не позволяет учитывать влияние на них других форменных элементов крови, специфически модулирующих функции тромбоцитов; 5) увеличивается вероятность значительного снижения концентрации лабильных медиаторов к моменту измерения [8]. Все это не позволяет создать оптимальные стандартные условия, необходимые для обеспечения полной реализации функций тромбоцитов после стимулирования индуктором. Существенным недостатком оптической агрегатометрии является невозможность исследовать кровь больных с выраженной гиперлипидемией, часто встречающейся в кардиологической практике [8].
Предложенный способ отличается тем, что определение антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты (АСК) проводят in vitro путем исследования функциональной активности тромбоцитов до и после инкубации образца биологического материала с ацетилсалициловой кислотой, а агрегационную активность тромбоцитов определяют в цельной крови импедансным методом, инкубацию образцов с ацетилсалициловой кислотой в конечной концентрации 108 мкмоль/л проводят в течение 15 минут, индукцию тромбоцитов вызывают аденозиндифосфатом в конечной концентрации 1,0-5,0 мкмоль/л.
Технический результат предложенного изобретения заключается в повышении чувствительности, точности, воспроизводимости способа, сокращении времени анализа.
При этом достигается следующий положительный эффект: 1) измерения проводятся при физиологических концентрациях АСК и аденозиндифосфата; 2) воспроизводимость определений соответствует требованиям, предъявляемым к медицинским методикам; 3) время анализа сокращается до 20 минут; 4) проводятся исследования в крови больных с гиперлипидемией.
Способ осуществляется следующим образом.
Образцы крови получают из антекубитальной вены и стабилизируются 3,8% раствором цитрата натрия в объемном отношении 9:1. В процессе исследования кровь сохраняют в закрытых пластиковых пробирках при комнатной температуре, с соблюдением общепринятых мер предосторожности при работе с клетками крови.
Анализ функциональной активности тромбоцитов осуществляют не ранее чем через 15 минут и не позднее чем через 2 часа после получения крови, с помощью импедансного агрегометра АИ-300, при 37°С и перемешивании содержимого кювет со скоростью 1000 об/мин. Соотношение объемов крови и агониста при этом составляет 11:1.
Для индуцирования агрегации используют раствор АДФ из диагностических наборов фирмы «Sigma» (Sigma diagnostics, platelet aggregation reagent, США) в конечной концентрации 1,0-5,0 мкмоль/л, приготовленный в соответствии с рекомендациями фирмы.
Исследования агрегационного статуса тромбоцитов каждого пациента проводят дважды: до и после инкубирования крови с АСК.
Время инкубирования составляет 15 минут при температуре 37°С. Физиологическая конечная концентрация АСК, соотношение объемов кровь-раствор АСК на этапе инкубации определялись из условия ингибирования агрегации аспирином в крови здоровых доноров (мужчин в возрасте 25-45 лет, n=26) на 50% и составляют 108 мкмоль/л и 50:1 соответственно. При этих условиях сохраняется возможность выявлять сдвиги, в обоих направлениях при возникновении дополнительных стимулов, а также получить оптимальную воспроизводимость результатов.
Обработка агрегатограмм производится по общепринятым характерным точкам кривых агрегации [2] с определением амплитуды процесса в омах к 5-й минуте от момента ввода АДФ, когда уже ясно видны чувствительность к дозе и интенсивность агрегации.
Ингибирующая (антитромботическая) способность АСК в процентах (С) рассчитывается по формуле
где Ан и Ак - амплитуды агрегации до и после инкубирования с АСК соответственно.
Пример обработки получаемых агрегатограмм и расчета по ним антитромботической способности АСК приведены на чертеже.
Апробацию метода осуществляли в клинике ФГУ Федеральный центр сердца, крови и эндокринологии им. В.А.Алмазова Росмедтехнологии. Обследовано 25 пациентов с ревматическими пороками сердца, контрольную группу составили 26 практически здоровых доноров (мужчины в возрасте 25-45 лет). Средняя величина ингибирующего эффекта АСК в контрольной группе составила 46,7%. В параллельной группе пациентов с ревматическими пороками сердца (n=25) 8,0% больных были абсолютно не чувствительны к АСК. Более низкий ингибирующий эффект АСК в этой группе наблюдался у больных (n=12) с тромбоэмболическими осложнениями (34,2% против 57,6%, p<0,05). Полученный результат свидетельствует о высоких диагностических возможностях способа и клинической необходимости определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты при профилактике тромбозов и тромбоэмболии, являющихся ключевым моментом в развитии сердечно-сосудистых патологий.
Для оценки воспроизводимости и надежности предлагаемого способа мы осуществили параллельные измерения ингибирующей способности АСК в крови 28 пациентов. Коэффициент вариации теста составил 8,6% и соответствует требованиям, предъявляемым к медицинским лабораторным тестам.
Список использованной литературы
1. Волков В.И., Рябуха В.В., Запровальная О.Е., Ладный А.И. Диагностика резистентности к аспирину у больных ишемической болезнью сердца. Укр.кардиол.журн., 1: http://rql.net.ua/cardio_j/2006/3/IMAG306/volkkov.gif.
2. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. Учеб. пособие. - СПб, 1999. - С.56.
3. Остроумова О.Д. Ацетилсалициловая кислота - препарат номер один для лечния сердечно-сосудистых заболеваний. Рус.Мед.Журнал. 2003. т.11, №5. - с.253-255.
4. Попов Ю.Г., Иванов В.И., Гуревич B.C. Взаимосвязь уровня фибриногена и функциональной активности тромбоцитов в группах пациентов с различным содержанием общего холестерина в крови // Липопротеиды и атеросклероз. Материалы симпозиума, посвященного 110-летию со дня рождения акад. Н.Н.Аничкова. - СПб., 1995. - 88.
5. Ушкалова Е.А. Аспиринорезистентность: механизмы развития, методы определения и клиническое значение. Фарматека. 2006. №13 (128). - с.35-41.
6. Born G.V.R. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and it's reversal // Nature 1962; 194: p.927-929.
7. Cambia-Kiely J.A., Gandhi P.J. Possible mechanism of aspirin resistance // J. Thromb. Thrombolysis. - 2002. - Vol.13. - P. 49-56.
8. Cardinal D.C., Flower R.J. The electronic aggregometer: a novel device for assessing platelet behavior in blood // J Pharm Meth 1980; 3: p.135-158.
9. Eikelboom J.W., Hirsh J., Weitz J.I. et al. Aspirin-resistant thromboxane biosynthesis and risk of myocardial infarction, stroke, or cardiovascular death in patients at high risk for cardiovascular events // Circulation. - 2002. - Vol.105. - P.1650-1655.
Claims (1)
- Способ определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты (АСК) in vitro путем исследования функциональной активности тромбоцитов до и после инкубации образца биологического материала с АСК, отличающийся тем, что инкубацию образцов с АСК в конечной концентрации 108 мкмоль/л проводят в течение 15 мин при температуре 37°С, индукцию тромбоцитов вызывают аденозиндифосфатом в конечной концентрации 1,0-5,0 мкмоль/л, агрегационную активность тромбоцитов определяют в цельной крови импедансным методом и по полученным агрегатограммам определяют амплитуды процесса агрегации в Омах к 5-й минуте от момента ввода аденозиндифосфата и рассчитывают антитромботическую способность АСК в процентах (С) по формуле
С=(Ан-Ак)/Ан·100,
где Ан и Ак - амплитуды агрегации до и после инкубирования с АСК.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2007144412/15A RU2379684C2 (ru) | 2007-11-29 | 2007-11-29 | Способ определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2007144412/15A RU2379684C2 (ru) | 2007-11-29 | 2007-11-29 | Способ определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2007144412A RU2007144412A (ru) | 2009-06-10 |
RU2379684C2 true RU2379684C2 (ru) | 2010-01-20 |
Family
ID=41024179
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2007144412/15A RU2379684C2 (ru) | 2007-11-29 | 2007-11-29 | Способ определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2379684C2 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2478965C1 (ru) * | 2012-02-24 | 2013-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр неврологии" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦН" РАМН) | Способ выявления резистентности к антиагрегантным препаратам у больных с прогрессирующим церебральным атеросклерозом |
RU2486523C1 (ru) * | 2011-11-23 | 2013-06-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Саратовский научно-исследовательский институт кардиологии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Способ оценки клинической эффективности антиагрегантной терапии у больных острым коронарным синдромом |
RU2538219C2 (ru) * | 2013-04-11 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Гематологический научный центр" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения резистентности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте |
RU2578428C1 (ru) * | 2015-04-20 | 2016-03-27 | Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Красноярский Государственный Медицинский Университет Имени Профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства Здравоохранения Российской Федерации" | Способ экспресс-диагностики резистентности и чувствительности к ацетилсалициловой кислоте |
-
2007
- 2007-11-29 RU RU2007144412/15A patent/RU2379684C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Hübl W, Assadian A, Lax J, Meixner U, Fang IF, Hagmüller G, Panzer S. Bayer PM. Assessing aspirin-induced attenuation of platelet reactivity by flow cytometry. Thromb Res. 2007; 121(1): 135-43. Epub 2007 Apr 30. PMID: 17467777 [PubMed - indexed for MEDLINE]. Beving H. Tedner B, Eriksson LE. Study of the electrical impedance of blood from house painters. Int Arch Occup Environ Health. 1992; 63(6): 383-6 PMID: 1544685 [PubMed - indexed for MEDLINE]. * |
Волков В.И., Рябуха В.В., Запровальная О.Е., Ладный А.И. Диагностика резистентности к аспирину у больных ишемической болезнью сердца. Укр. кардиол. журн., найдено в интернет: http://www.rql.kiev.ua/cardio_j/2006/3/volkov.htm. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2486523C1 (ru) * | 2011-11-23 | 2013-06-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Саратовский научно-исследовательский институт кардиологии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Способ оценки клинической эффективности антиагрегантной терапии у больных острым коронарным синдромом |
RU2478965C1 (ru) * | 2012-02-24 | 2013-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр неврологии" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦН" РАМН) | Способ выявления резистентности к антиагрегантным препаратам у больных с прогрессирующим церебральным атеросклерозом |
RU2538219C2 (ru) * | 2013-04-11 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Гематологический научный центр" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения резистентности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте |
RU2578428C1 (ru) * | 2015-04-20 | 2016-03-27 | Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Красноярский Государственный Медицинский Университет Имени Профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства Здравоохранения Российской Федерации" | Способ экспресс-диагностики резистентности и чувствительности к ацетилсалициловой кислоте |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2007144412A (ru) | 2009-06-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Artang et al. | Fully automated thromboelastograph TEG 6s to measure anticoagulant effects of direct oral anticoagulants in healthy male volunteers | |
Herring et al. | Diagnostic approach to small animal bleeding disorders | |
JP6461125B2 (ja) | 抗第Xa因子試験のユニバーサル較正のための手段および方法 | |
RU2379684C2 (ru) | Способ определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты | |
Kahraman et al. | The effect of the acute submaximal exercise on thrombin activatable fibrinolysis inhibitor levels in young sedentary males | |
CN104049089B (zh) | 一种检测纤维蛋白原的方法及试剂盒 | |
RU2486523C1 (ru) | Способ оценки клинической эффективности антиагрегантной терапии у больных острым коронарным синдромом | |
RU2538219C2 (ru) | Способ определения резистентности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте | |
Andersen et al. | Preanalytical handling of samples for measurement of plasma lactate in HIV patients | |
Lordkipanidzé et al. | Clinical tests of platelet function | |
Milić et al. | Serum level of HMGB1 protein and inflammatory markers in patients with secondary peritonitis: time course and the association with clinical status | |
Kaye et al. | Hemostatic testing in companion exotic mammals | |
RU2061953C1 (ru) | Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов | |
Majoy et al. | Platelet activation in a population of critically ill dogs as measured with whole blood flow cytometry and thromboelastography | |
EP0259463A1 (en) | HEPARIN TEST PROCEDURE. | |
WO2010058412A1 (en) | A new rapid thrombochek test kit based on whole blood screening test to detect platelet hyperaggregation at a temparature of 37°c in the clinical laboratory | |
RU2419800C1 (ru) | Способ оценки риска повторных тромботических событий у больных острым коронарным синдромом | |
Haines et al. | Establishment of reference ranges and evaluation of in vitro concentration‐dependent platelet inhibition by acetylsalicylic acid for multiple electrode impedance aggregometry in healthy dogs | |
RU2699569C1 (ru) | Способ определения чувствительности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте | |
Barratclough et al. | Proposal and application of a novel disseminated intravascular coagulation scoring system in the Florida manatee (Trichechus manatus latirostris) | |
Nash et al. | In vitro effect of blood cell counts on multiple-electrode impedance aggregometry in dogs | |
Wang et al. | Changes of Plasma Blood Ammonia Levels of Chinese Healthy People and the Establishment of Reference Intervals. | |
Gessner-Knepel et al. | Select Venous Analytes and Fibrinogen Determination Using Two Methods in Brown Pelicans | |
Martín-Cuervo et al. | Usefulness of a point-of-care analyzer to measure cardiac troponin i and d-dimer concentrations in critically ill horses with gastrointestinal diseases | |
Machackova et al. | Evaluation of kaolin-activated thromboelastography and sample stability in healthy horses. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20131130 |