RU2061953C1 - Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов - Google Patents
Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2061953C1 RU2061953C1 RU93012712A RU93012712A RU2061953C1 RU 2061953 C1 RU2061953 C1 RU 2061953C1 RU 93012712 A RU93012712 A RU 93012712A RU 93012712 A RU93012712 A RU 93012712A RU 2061953 C1 RU2061953 C1 RU 2061953C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- plasma
- platelet
- platelets
- poor
- blood platelets
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: биохимия, медицина для количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов. Сущность изобретения: получают бедную и богатую тромбоцитами плазму исследуемой крови, в качестве субстрата для определения активности тромбоцитов используют бедную тромбоцитами плазму, а в качестве исследуемого материала - богатую тромбоцитами плазму. Определяют активированное время рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы без каких-либо добавок, а затем активированное время рекальцификации той же плазмы, предварительно добавляя к ней равный объем богатой тромбоцитами плазмы. По разнице между результатами первого и второго определения с помощью калибровочного графика находят значение коагуляционной активности тромбоцитов.
Description
Изобретение относятся к биохимии и медицине, точнее: к способам контроля за состоянием тромбоцитарного звена гемостаза.
Известны способы оценки функциональной активности тромбоцитов, характеризующиеся тем, что для их осуществления используются достаточно сложные устройства, либо тем, что полученные с их помощью результаты отражают одно из свойств тромбоцитов и не дают информации об их общей гемокоагуляционной активности.
Так, известен способ измерения силы ретракции фибринового сгустка, характеризующей активность в них ретрактозима (А.С. Шитикова и соавт. Лабор. дело, 1975, N 4, с. 201).
Сущность способа заключается в том, что с помощью механоэлектрического преобразователя (механотрона 6Мх1С) измеряют силу ретракция фибринового сгустка плазмы или крови. Штырь механотрона, жестко соединенный с якорем, погружаемый в исследуемую жидкость до ее свертывания (в кювете с гидрофобной внутренней поверхностью) позволяет записать механическое сопротивление жидкости, нарастающее по мере наступления ретракции, следующей за свертыванием крови (плазмы), вызванным рекальцификацией или внесением тромбина.
Приведенный способ мы рассматриваем в качестве аналога заявляемого способа. Его недостатки использование комплекса аппаратуры (собственно механотрона, измерительной схемы, нестандартного термостатирующего устройства, кюветы с гидрофобными стенкам), а также то, что способ позволяет оценить лишь одно из свойств тромбоцитов, реализующееся на заключительном этапе свертывания способность вызывать ретракцию фибринового сгустка.
Существует способ определения ф. 4 тромбоцитов в плазме и реакцию высвобождения его в процессе агрегации (В.Г. Лычев. Лабор. дело, 1974, N 12, с. 730), выбранный нами в качестве прототипа по технической сущности.
Способ основан на учете свойства прогретой бедной тромбоцитами плазмы, являющейся источником ф. 4, влиять на тромбин-гепариновое время свертывания субстратной бедной тромбоцитами плазмы, являющейся источником фибриногена и плазменного кофактора гепарина (антитромбина Ш). Укорочение тромбин-гепаринового времени служит мерой активности ф. 4 тромбоцитов.
Для осуществления способа готовят рабочий раствор тромбина активностью 9-11 до 33-37 с, получают бедную тромбоцитами плазму (центрифугирование при 12 тыс. g, 20 мин), прогревают бедную тромбоцитами плазму 10 мин при 60oС и удаляют осадок центрифугированием, надосадок используют для определения ф. 4.
Проводят определения в четырех следующих системах:
1. Смесь бедной тромбоцитами плазмы, физиологического раствора и тромбина;
2. Смесь нормальной бедной тромбоцитами плазмы, физиологического раствора, раствора гепарина и тромбина;
3. Смесь нормальной бедной тромбоцитами плазмы, и такой же, но прогретой исследуемой плазмы, растворов гепарина и тромбина;
4. Смесь нормальной и исследуемой бедной тромбоцитами плазм, гепарина и тромбина. Во всех системах устанавливают время свертывания. По разнице времени свертывания в системах 2 и 3 оценивают активность свободного ф. 4 плазмы, по разнице между системами 3 и 4 судят о доле ф. 4 в общей антигепариновой активности плазмы.
1. Смесь бедной тромбоцитами плазмы, физиологического раствора и тромбина;
2. Смесь нормальной бедной тромбоцитами плазмы, физиологического раствора, раствора гепарина и тромбина;
3. Смесь нормальной бедной тромбоцитами плазмы, и такой же, но прогретой исследуемой плазмы, растворов гепарина и тромбина;
4. Смесь нормальной и исследуемой бедной тромбоцитами плазм, гепарина и тромбина. Во всех системах устанавливают время свертывания. По разнице времени свертывания в системах 2 и 3 оценивают активность свободного ф. 4 плазмы, по разнице между системами 3 и 4 судят о доле ф. 4 в общей антигепариновой активности плазмы.
Аналогичное определение проводят в плазме, оставшейся после определения АДФ- и коллагензависимой агрегации тромбоцитов. Сопоставляя полученные здесь результаты с найденными в опытах 1-4, судят о "реакции высвобождения".
Этот способ мы рассматриваем как прототип заявляемого изобретения. К его недостаткам относятся необходимость в чрезвычайно тщательной подгонке активности гепарина и тромбина, отсутствие этих препаратов со стандартной удельной активностью, многочисленность процедур при осуществлении способа, оценка полученной информации как указание только на одно из свойств тромбоцитов, обеспечивающих их участие в свертывании крови, в то время как в действительности результат отражает общую коагуляционную активность тромбоцитов, так как в используемых системах проявляется эффект не только ф. 4, но и других гемокоагуляционных свойств тромбоцитов.
Задача изобретения разработка способа, позволяющего оценить общую гемокоагуляционную активность тромбоцитов плазмы без использования каких-либо нестандартизированных препаратов, с сокращенной продолжительностью анализа и с меньшими трудозатратами
Технический результат изобретения заключается в следующем.
Технический результат изобретения заключается в следующем.
Способ позволяет за короткий срок количественно (в процентах к норме) оценить общую коагуляционную активность тромбоцитов без применения нестандартных реагентов, без предварительного тестирования коммерческих препаратов, без предварительного прогревания плазмы.
Существенные признаки заявляемого изобретения заключаются в следующем:
1. Получают богатую тромбоцитами плазму центрифугированием пробы исследуемой цитратной крови с ускорением 3000 g, 10 мин;
2. Половину объема богатой тромбоцитами плазмы используют для получения бедной тромбоцитами плазмы, центрифугируя ее с ускорением 12000 g, 20 мин;
3. Определяют активированное время рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы и смеси равных объемов бедной и богатой тромбоцитами плазмы, находят разницу между временем свертывания первой и второй проб, выражают ее в процентах к первой и находят значение общей коагуляционной активности тромбоцитов с помощью калибровочной кривой;
4. Калибровочную кривую строят, откладывая в полулогарифмической системе координат выраженное в процентах укорочение времени свертывания в присутствии разных разведений богатой тромбоцитами плазмы к времени свертывания бедной тромбоцитами плазмы.
1. Получают богатую тромбоцитами плазму центрифугированием пробы исследуемой цитратной крови с ускорением 3000 g, 10 мин;
2. Половину объема богатой тромбоцитами плазмы используют для получения бедной тромбоцитами плазмы, центрифугируя ее с ускорением 12000 g, 20 мин;
3. Определяют активированное время рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы и смеси равных объемов бедной и богатой тромбоцитами плазмы, находят разницу между временем свертывания первой и второй проб, выражают ее в процентах к первой и находят значение общей коагуляционной активности тромбоцитов с помощью калибровочной кривой;
4. Калибровочную кривую строят, откладывая в полулогарифмической системе координат выраженное в процентах укорочение времени свертывания в присутствии разных разведений богатой тромбоцитами плазмы к времени свертывания бедной тромбоцитами плазмы.
Существенный отличительный признак способа:
Определяется степень сокращения активированного времени рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы при добавлении к ней богатой тромбоцитами исследуемой плазмы.
Определяется степень сокращения активированного времени рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы при добавлении к ней богатой тромбоцитами исследуемой плазмы.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.
Для определения общей коагуляционной активности тромбоцитов предусмотрена такая последовательность операций:
1. 2 мл стабилизированной цитратом крови центрифугируют с ускорением 3000 g, 10 мин и переносят отделившуюся плазму в сухую пробирку получена богатая тромбоцитами плазма.
1. 2 мл стабилизированной цитратом крови центрифугируют с ускорением 3000 g, 10 мин и переносят отделившуюся плазму в сухую пробирку получена богатая тромбоцитами плазма.
2. 0,5 мл богатой тромбоцитами плазмы центрифугируют с ускорением 12000 g, 15 мин, собирают надосадок получена бедная тромбоцитами плазма.
3. В пробирку, установленную на водяной бане при 37oС вносят 0,2 мл бедной тромбоцитами плазмы и 0,1 мл взвеси каолина, после двухминутной инкубации добавляют 0,1 мл 0,277% раствора хлорида кальция и фиксируют время появления сгустка активированное время рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы.
4. В пробирку, установленную на водяной бане при 37oС, вносят 0,1 мл бедной и 0,1 мл богатой тромбоцитами плазмы, затем добавляют 0,1 мл 1% взвеси каолина и после двухминутной инкубации вносят 0,1 мл 0,277% раствора хлорида кальция, фиксируя момент появления сгустка активированное время рекальцификации смеси.
5. Рассчитывают степень укорочения активированного времени рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы при добавлении к ней разного объема богатой тромбоцитами плазмы по формуле:
100 x (Тк -То) /Тк,
где Тк и То активированное время рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы и той жe плазмы в присутствии богатой тромбоцитами плазмы. С помощью калибровочной кривой находят значение общей коагуляционной активности тромбоцитов.
100 x (Тк -То) /Тк,
где Тк и То активированное время рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы и той жe плазмы в присутствии богатой тромбоцитами плазмы. С помощью калибровочной кривой находят значение общей коагуляционной активности тромбоцитов.
Построение калибровочной кривой.
1. Смешивают равные объемы (по 0,5-1,0 мл) цитратной богатой тромбоцитами плазмы десяти здоровых доноров и половину смеси центрифугируют для получения бедной тромбоцитами плазмы, как указано в п. 2.
2. Из богатой тромбоцитами плазмы готовят разведения (разбавитель - бедная тромбоцитами плазма) таким образом, чтобы количество тромбоцитов, принимаемое в богатой плазме за 100% составляло 20 и 50%
3. Определяют активированное время рекальцификации смесей, содержащих равные объемы бедной тромбоцитами плазмы и плазмы, содержащей 100, 50 и 20% тромбоцитов, одновременно определяют активированное время рекальцификации 0,2 мл бедной тромбоцитами плазмы, не добавляя к ней богатой тромбоцитами плазмы. Рассчитывают по приведенной выше формуле (п. 5) степень укорочения активированного времени рекальцификации для каждой из трех смесей по сравнению с временем свертывания бедной тромбоцитами плазмы.
3. Определяют активированное время рекальцификации смесей, содержащих равные объемы бедной тромбоцитами плазмы и плазмы, содержащей 100, 50 и 20% тромбоцитов, одновременно определяют активированное время рекальцификации 0,2 мл бедной тромбоцитами плазмы, не добавляя к ней богатой тромбоцитами плазмы. Рассчитывают по приведенной выше формуле (п. 5) степень укорочения активированного времени рекальцификации для каждой из трех смесей по сравнению с временем свертывания бедной тромбоцитами плазмы.
Результаты наносят на ординату (линейный масштаб) против соответствующих значений концентрации тромбоцитов, представленных на абсциссе в виде десятичных логарифмов (рисунок).
Пример определения:
1. Исследуемую плазму разделили на 2 порции, одну из них подвергли центрифугированию для осаждения тромбоцитов, получив богатую и бедную тромбоцитами плазму.
1. Исследуемую плазму разделили на 2 порции, одну из них подвергли центрифугированию для осаждения тромбоцитов, получив богатую и бедную тромбоцитами плазму.
2. Определили активированное время рекальцификации бедной тромбоцитами плазмы 166 с, а также смеси бедная + богатая тромбоцитами плазма 103 с.
3. Рассчитали в процентах укорочение активированного времени рекальцификации при добавлении богатой тромбоцитами плазмы:
100 (166 103) /166 37,9
4. Нашли на калибровочном графике значение общей коагуляционной активности тромбоцитов, соответствующее величине 37,9 86%
Средняя ошибка средней (100 х 6/М) при определениях в одном образце плазмы 4,5% при n 5 или 2,7% при n 10.
100 (166 103) /166 37,9
4. Нашли на калибровочном графике значение общей коагуляционной активности тромбоцитов, соответствующее величине 37,9 86%
Средняя ошибка средней (100 х 6/М) при определениях в одном образце плазмы 4,5% при n 5 или 2,7% при n 10.
Средняя ошибка средней при определении в группе из 5 лиц 9,8%
Приведенная ниже таблица характеризует заявляемый способ в сопоставлении со способом-прототипом.
Приведенная ниже таблица характеризует заявляемый способ в сопоставлении со способом-прототипом.
Таким образом, заявляемый способ отличается отказом от использования нестандартизированных реагентов, меньшей трудоемкостью и сокращением в 4 раза времени для выполнения анализа, возможностью одновременного (параллельного) выполнения большего числа анализов.
Способ предназначен для научно-исследовательских лабораторий гемокоагулологического профиля и для клинико-диагностических лабораторий лечебных учреждений. Для его выполнения требуется минимальный набор лабораторного оборудования: водяной термостат, лабораторная центрифуга, секундомер и пробирки с диаметром от 4 до 100 мм. ТТТ1 ТТТ2
Claims (1)
- Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов, включающий получение богатой и бедной тромбоцитами плазмы, отличающийся тем, что устанавливают активированное время рекальцификации бедной тромбоцитами исследуемой плазмы и ее смеси с равным объемом богатой тромбоцитами плазмы из того же образца крови, по степени сокращения времени, выраженной в процентах, количественно оценивают суммарную гемокоагуляционную активность тромбоцитов, используя калибровочную кривую, построенную по данным определения суммарной коагуляционной активности тромбоцитов в пулированной донорской плазме различных разведений.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93012712A RU2061953C1 (ru) | 1993-03-10 | 1993-03-10 | Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93012712A RU2061953C1 (ru) | 1993-03-10 | 1993-03-10 | Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU93012712A RU93012712A (ru) | 1995-07-27 |
| RU2061953C1 true RU2061953C1 (ru) | 1996-06-10 |
Family
ID=20138369
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU93012712A RU2061953C1 (ru) | 1993-03-10 | 1993-03-10 | Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2061953C1 (ru) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6101449A (en) * | 1995-06-07 | 2000-08-08 | Akzo Nobel N.V. | Method for predicting the presence of congenital and therapeutic conditions from coagulation screening assays |
| US6321164B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-11-20 | Akzo Nobel N.V. | Method and apparatus for predicting the presence of an abnormal level of one or more proteins in the clotting cascade |
| US6429017B1 (en) | 1999-02-04 | 2002-08-06 | Biomerieux | Method for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
| US6502040B2 (en) | 1997-12-31 | 2002-12-31 | Biomerieux, Inc. | Method for presenting thrombosis and hemostasis assay data |
| US6898532B1 (en) | 1995-06-07 | 2005-05-24 | Biomerieux, Inc. | Method and apparatus for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
| US7179612B2 (en) | 2000-06-09 | 2007-02-20 | Biomerieux, Inc. | Method for detecting a lipoprotein-acute phase protein complex and predicting an increased risk of system failure or mortality |
| US7211438B2 (en) | 1999-02-04 | 2007-05-01 | Biomerieux, Inc. | Method and apparatus for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
-
1993
- 1993-03-10 RU RU93012712A patent/RU2061953C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Лаб. дело, 1974, N 12, с. 730. 2. Лаб. дело, 1975, N 4, с. 201. * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6101449A (en) * | 1995-06-07 | 2000-08-08 | Akzo Nobel N.V. | Method for predicting the presence of congenital and therapeutic conditions from coagulation screening assays |
| US6269313B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-07-31 | Akzo Nobel N.V. | Method for predicting the presence of congenital and therapeutic conditions from coagulation screening assays |
| US6321164B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-11-20 | Akzo Nobel N.V. | Method and apparatus for predicting the presence of an abnormal level of one or more proteins in the clotting cascade |
| US6564153B2 (en) | 1995-06-07 | 2003-05-13 | Biomerieux | Method and apparatus for predicting the presence of an abnormal level of one or more proteins in the clotting cascade |
| US6898532B1 (en) | 1995-06-07 | 2005-05-24 | Biomerieux, Inc. | Method and apparatus for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
| US6502040B2 (en) | 1997-12-31 | 2002-12-31 | Biomerieux, Inc. | Method for presenting thrombosis and hemostasis assay data |
| US6429017B1 (en) | 1999-02-04 | 2002-08-06 | Biomerieux | Method for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
| US7211438B2 (en) | 1999-02-04 | 2007-05-01 | Biomerieux, Inc. | Method and apparatus for predicting the presence of haemostatic dysfunction in a patient sample |
| US7179612B2 (en) | 2000-06-09 | 2007-02-20 | Biomerieux, Inc. | Method for detecting a lipoprotein-acute phase protein complex and predicting an increased risk of system failure or mortality |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20220082575A1 (en) | Nmr detection of coagulation time | |
| CA2032561C (en) | Method of determining levels of extrinsic and intrinsic clotting factors and protein c | |
| RU2061953C1 (ru) | Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов | |
| Chandler | Initial evaluation of hemostasis: reagent and method selection | |
| Hassouna | Laboratory evaluation of hemostatic disorders | |
| RU2703541C1 (ru) | Способ определения фибриногена при рекальцификации цитратной плазмы и оценка его функциональности | |
| Koepke | Point-of-care coagulation testing | |
| Yano et al. | Bedside monitoring of warfarin therapy by a whole blood capillary coagulation monitor | |
| RU2379684C2 (ru) | Способ определения антитромботического эффекта ацетилсалициловой кислоты | |
| Grann et al. | Polybrene neutralization as a rapid means of monitoring blood heparin levels | |
| Pan et al. | Modified microsample ACT test for heparin monitoring | |
| Sever et al. | Portable optical coagulation analyzer based on real-time image processing algorithm | |
| Bazaev et al. | Modern methods for measuring parameters of blood coagulation | |
| Lambert et al. | The tri-F titer: a rapid test for estimation of plasma fibrinogen and detection of fibrinolysis, fibrin (ogen) split products, and heparin | |
| RU2419800C1 (ru) | Способ оценки риска повторных тромботических событий у больных острым коронарным синдромом | |
| RU2601111C1 (ru) | Способ оценки гемостатической активности тромбоцитов | |
| Binzari et al. | Hemolysis has no influence on routine coagulation tests in subjects without anticoagulant therapy-a referral Romanian emergency hospital laboratory experience | |
| US20210260589A1 (en) | Method and Apparatus for Measuring Blood Coagulation | |
| JPH10332705A (ja) | 血液凝固時間の測定方法 | |
| Morse et al. | Determination of fibrinogen in plasma | |
| SU1767420A1 (ru) | Способ определени антигепариновой активности тромбоцитов | |
| SU1508169A1 (ru) | Способ определени активности антитромбина- @ в плазме крови | |
| RU2146366C1 (ru) | Способ измерения адгезии тромбоцитов | |
| RU2204141C2 (ru) | Способ определения активности фактора xiii | |
| RU2189590C2 (ru) | Способ определения плазминогена |