CZ298487B6 - Derivát alfa-hydroxykyseliny, jeho použití, farmaceutický prostredek s jeho obsahem a zpusoby prípravy tohoto derivátu - Google Patents

Abstract

Derivát .alfa.-hydroxykyseliny obecného vzorce I,jeho použití jako léciva pro lécení stavu, kde jepožadována inhibice trombinu (napríklad trombóz),nebo jeho použití jako antikoagulacní cinidla.

Description

Derivát α-hydroxykyseliny, jeho použití, farmaceutický prostředek sjeho obsahem a způsoby přípravy tohoto derivátu

Oblast techniky

Tento vynález se týká derivátu α-hydroxykyseliny, jeho použití jako léčiva, farmaceutického prostředku sjeho obsahem a způsobů přípravy tohoto derivátu.

Dosavadní stav techniky

Srážení krve je klíčovým procesem, který je zahrnut jak do hemostázy (to jest prevence ztráty krve z poškozených cév), tak trombóz (to jest tvorby krevní sraženiny v cévách nebo v srdci, která někdy vede k ucpávání cév).

Srážení je výsledkem celé řady enzymatických reakcí. Jedním z konečných kroků v těchto řadách reakcí je převedení proenzymu protrombinu na aktivní enzym trombinu.

Je známo, že trombin hraje hlavní roli při srážení. Aktivuje destičky, co vede k jejich shlukování, převede fibrinogen na fibrinové monomery, která spontánně polymerují na fíbrinové polymery a aktivuje faktor XIII, který naopak síťuje polymery za vzniku nerozpustného fibrinu. Kromě toho trombin aktivuje faktor V a faktor Vlil vede k vytvoření „kladné zpětné vazby“ trombinu z protrombinu.

Při inhibici shlukování destiček a tvorbě a sítění fibrinu by se proto mohly očekávat účinné inhibitory trombinu, které by projevovaly antitrombotickou účinnost. Kromě toho u antitrombotické účinnosti by se očekávalo, že zvýší účinnou inhibici mechanismu kladné zpětné vazby.

Vývoj inhibitorů s nízkou molekulovou hmotností popsal Claesson v Blood Coagul. Fibrinol. 5, 411 (1994).

Blombáck a kol. (J. Clin. Lab. Incest. 24, suppl. 107, 59 (1969)) uvádí inhibitory trombinu, které jsou založeny na aminokyselinových sekvencích, nacházející se v okolí štěpeného místa pro fíbrinogenový A alfa řetězec. Z těchto diskutovaných aminokyselinových sekvencí tito autoři navrhli sekvenci Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, zde dále označováno jako sekvence P3-P2-P1), která by mohla být nejúčinnějším inhibitorem (pro klasifikaci specificity substrátu; viz Schechten a Bergen, Biophys. Res. Commun. 27, 157 (1967) a 32, 898 (1967)).

Inhibitory trombinu založené na dipeptidylových derivátech s α,ω-aminoalkylguanidinem v PÍ poloze jsou známé z US patentu 4 346 078 a z dokumentu WO 93/11152. Podobné, strukturně příbuzné dipeptidylové deriváty byly také popsány. Například dokument WO 94/29336 popisuje sloučeniny, které mají například aminomethylbenzamidiny, cyklické aminoalkylamidiny a cyklické aminoalkylguanidiny v PÍ poloze; EP 0 648 780 popisuje sloučeniny, které mají například cyklické aminoalkylguanidiny v P1 poloze.

Inhibitory trombinu, založené na peptidylových derivátech, obsahující také cyklické aminoalkylguanidiny (například buď 3- nebo 4-aminomethyl-l-amidinopiperidin) v PÍ poloze, jsou známé z EP 0 468 231, 0 559 046 a 0 641 779.

Inhibitory trombinu, založené na tripeptidylových derivátech s argininaldehydem v PÍ poloze byly poprvé popsány v EP 0 185 390.

V poslední době byly popsány peptidylové deriváty založené na argininaldehydech, modifikované v P3 poloze. Například dokument WO 93/18060 popisuje hydroxykyseliny, EP 0 526 877 popisuje desaminokyseliny a EP 0 542 525 popisuje O-methylmandlové kyseliny v P3 poloze.

-1 CZ 298487 B6

Inhibitory serinproteázy (například trombin), založené na elektrofilních ketonech v Ρ1 poloze, jsou také známy. Například EP 0 195 212 popisuje peptidyl-a-ketoestery a -amidy, EP

362 002 popisuje fluoralkylamid-ketony, EP 0 364 344 popisuje α,β,δ-triketosloučeniny a EP

530 167 popisuje α-alkoxyketonové deriváty argininu v PÍ poloze.

Z EP 0 293 881 jsou známé jiné strukturálně odlišné inhibitory serinproteázy podobné trypsinu, založené na derivátech kyseliny borité s C-koncovým argininem a jejich izothiouroniových analogech.

V poslední době inhibitory trombinu založené na tripeptidylových derivátech byly popsány v EP 0 669 317, 0 686 642 a 0 648 780, a v dokumentech WO 95/35309, WO 95/23609, WO 96/25426, EP 0 672 658 a WO 94/29336.

Avšak zbývá potřeba vyvinout úěinné inhibitory trypsinu podobných serinových proteáz, jako trombinu. Jsou zvláště potřebné u sloučenin, které jsou jak orálně biologicky dostupné, tak selektivní pro inhibici trombinu a jiných serinových proteáz. U sloučenin, které vykazují soutěže schopnou inhibiční účinnost vůči trombinu, se dá očekávat, že jsou zvláště vhodné jako protisrážlivá činidla a proto jsou použitelné pro léčení trombóz a podobných nemocí.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je derivát α-hydroxykyseliny obecného vzorce I

(I)

ve kterém p a q představují nezávisle 0,

R¹ představuje vodík,

R² představuje vodík,

R³ představuje fenyl, který je substituován alespoň jedním alkylem s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenem, hydroxyskupinou, kyanoskupinou, nitroskupinou, methylendioxyskupinou, trifluormethylem, N(H)R²⁷ nebo C(O)OR²⁸,

R²⁷ představuje vodík, alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo C(O)R²⁹,

R²⁸ a R²⁹ představují nezávisle vodík nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku,

R⁴ představuje vodík nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku,

Y představuje alkylen s 1 až 3 atomy uhlíku popřípadě substituovaný alkylem s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, methylenem nebo oxoskupinou, n představuje 1 a

B představuje strukturní zbytek vzorce IVd

kde

R⁵ představuje vodík, halogen nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku a

D¹ a D² znamenají nezávisle vodík nebo benzyloxykarbonyl.

Výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, kde R⁴ představuje vodík.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, kde Y představuje CH₂, (CH₂)₂, (CH₂)₃, CH₂CH(CH₃)CH₂, CH₂C(=O)CH₂ nebo CH₂C(=CH₂)CH₂.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, kde Y představuje CH₂, (CH₂)₂ nebo CH₂C(=CH₂)CH₂.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, kdeYjeCH₂.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, kde uhlík a-aminokyseliny ve zbytku

je v S-konfiguraci.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, kde a-uhlík ve zbytku

je v R-konfíguraci.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce

I, kde R³ představuje fenyl substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným ze souboru zahrnujícího NHR²⁷ a halogen.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, kde R³ představuje fenyl substituovaný skupinou NHR²⁷ nebo halogenem.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, kde R³ představuje fenyl substituovaný skupinou NHR²⁷ nebo chlorem.

Předmětem tohoto vynálezu je dále farmaceutický prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje některý svrchu uvedený derivát α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, ve směsi s farmaceuticky přijatelným adjuvans, ředidlem nebo nosičem.

Předmětem tohoto vynálezu je také svrchu uvedený derivát α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, pro použití jako léčivo.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu a—hydroxykyseliny obecného vzorce I, pro použití pro léčení stavů, kde je požadována inhibice trombinu.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, pro použití pro léčení trombózy.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, pro použití jako antikoagulační prostředek.

Předmětem tohoto vynálezu je rovněž použití derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, jako účinné složky pro výrobu léčiva pro léčení stavů, kde je požadována inhibice trombinu.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití, kde uvedeným stavem je trombóza.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití derivátu α-hydroxykyselíny obecného vzorce I, pro výrobu antikoagulačního prostředku.

Jiné výhodné provedení tohoto vynálezu spočívá v použití derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, pro výrobu léčiva proti hyperkoagulabilitě krve a tkáně.

Předmětem tohoto vynálezu je konečně způsob přípravy derivátu α-hydroxykyseliny obecného vzorce I, jehož podstata je v tom, že zahrnuje krok spočívající v tom, že se (a) kondenzuje sloučenina obecného vzorce V

<^v>, ve kterém

3 * p, q, R , R aR mají význam definovaný výše,

-4CZ 298487 B6 se sloučeninou obecného vzorce VI

(VI), ve kterém (CH,)—B

R⁴, Y, n a B mají význam definovaný výše, nebo;

(b) kondenzuje sloučenina obecného vzorce VII

(VII)₁ ve kterém p, q, R¹, R², R³, R⁴ a Y mají význam definovaný výše, se sloučeninou obecného vzorce VIII

H₂N-(CH₂)_n-B (VIII), ve kterém n a B mají význam definovaný výše.

Předmětem tohoto vynálezu je také derivát α-hydroxykyseliny obecného vzorce I

(CH,)—B

ve kterém

B je strukturní zbytek vzorce IVd

-5CZ 298487 B6

kde

D¹ a D² jsou nezávisle vodík nebo benzyloxykarbonyl a p, q, R¹, R², R³, R⁴, Y, n a R⁵ mají význam definovaný výše, za předpokladu, že D¹ a D² nepředstavují oba vodík.

Výše je definován předmět, kteiý je selektivním vynálezem z širokého obecně popsaného řešení.

Svrchu popsané sloučeniny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné soli jsou dále označovány též jako „sloučeniny podle tohoto vynálezu“.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou projevovat tautomerii. Všechny tautomemí formy a jejich směsi jsou zahrnuty do rozsahu tohoto vynálezu.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou také obsahovat jeden nebo více asymetrických atomů uhlíku a mohou proto být opticky aktivní a/nebo projevovat diastereoizomerii. Všechny diastereoizomery mohou být děleny obvyklými postupy, například chromatografii nebo frakční krystalizaci. Různé stereoizomery mohou být izolovány dělením racemických nebo jiných směsí sloučenin za použití běžné, například frakční krystalizace, nebo HPLC technikami. Požadované optické izomery mohou být alternativně připraveny reakcí vhodných opticky aktivních výchozích materiálů za podmínek, které nemohou způsobit racemizaci nebo epimerizaci, nebo derivatizací, například s homochirální kyselinou s následným dělením diastereomemích esterů obecným postupem (to znamená pomocí HPLC, chromatografii na silikagelu). Do rozsahu tohoto vynálezu jsou zahrnuty všechny stereoizomery.

Alkylové skupiny, které mohou představovat R⁴, R⁵, R²⁷, R²⁸ a R²⁹, a kterými R³ a Y mohou být substituovány; a alkoxyskupiny, kterými R³ mohou být substituovány, mohou být přímé (lineární) nebo rozvětvené, nasycené, nebo nenasycené. Alkylenové skupiny, které mohou představovat Y, mohou být nasycené nebo nenasycené.

Halogenové skupiny, které R⁵ může představovat a kterými R³ může být substituován, zahrnují chlor, fluor, brom a jod.

Vlnovky na atomu uhlíku ve strukturním zbytku vzorce IVd znamenají pozici zbytku.

Zkratky jsou uvedeny na konci tohoto popisu.

Výhodnými sloučeninami podle tohoto vynálezu jsou sloučeniny, kde R⁵ představuje vodík.

Výhodné sloučeniny vzorce I zahrnují sloučeniny, kde Y představuje CH₂ (CH₂)₂, (CH₂)₃, CH₂CH(CH₃)CH₂, CH₂C(=O)CH₂ nebo CH₂C(=CH₂)CH₂ a

R⁴ představuje vodík.

Výhodnější sloučeniny vzorce I zahrnují sloučeniny, kde Y představuje CH₂, (CH₂)₂ nebo CH₂C(=CH₂)CH₂.

-6CZ 298487 B6

Výhodné substituenty na R³ zahrnují hydroxyskupinu, fluor, chlor, methyl, methoxyskupinu, aminoskupinu, nitroskupinu, trifluormethyl, methylendioxyskupinu, ethoxyskupinu a propoxyskupinu. Zvláštními substituenty jsou hydroxyskupina, mono- nebo difluor, chlor, methyl, methoxyskupina a methylendioxyskupina.

Zvláště výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou sloučeniny, ve kterých Y představuje CH₂.

Výhodné jsou sloučeniny podle tohoto vynálezu, ve kterých je uhlík alfa-aminokyseliny ve zbytku v S-konfíguraci. Vlnovky na atomu dusíku a uhlíku ve výše uvedeném zbytku značí pozici vazby fragmentu.

Výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou sloučeniny, ve kterých je alfa-uhlík ve zbytku

O

HO (CH^ v R-konfíguraci. Vlnovky na atomu uhlíku ve výše uvedeném zbytku značí pozici vazby fragmentu.

Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou:

Ph(3-Me)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab;

Ph(3-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab;

Ph(3,5-diOMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab;

Ph(3-OMe,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab;

Ph(3-OMe,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab;

Ph(3-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab;

Ph(3,5-diOMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab;

Ph(3,5-diMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab;

Ph(3-NH₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab;

Ph(3-NH₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab;

-7CZ 298487 B6

Ph(3-NO₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab;

Ph(3,4-(-O-CH₂-O-))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab;

Ph(3,5-diF)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab;

Ph(3,4-diF)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab; a

Ph(3-Cl)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab.

Příprava

Předmětem tohoto vynálezu jsou také svrchu popsané způsoby přípravy sloučenin obecného vzorce I.

Kondenzace popsaná pod b) se provádí například v přítomnosti kondenzačního systému (jako je například oxalylchlorid, vDMF, EDC, DCC nebo TBTU), vhodné báze (například pyridinu, DMAP nebo DIPEA) a vhodného organického rozpouštědla (například dichlormethanu, acetonitrilu nebo DMF).

Sloučeniny vzorce V jsou buď komerčně dostupné, jsou dobře známé z literatury, nebo jsou dostupné za použití známých technik.

Například sloučeniny vzorce V mohou být připraveny reakcí aldehydu vzorce IX

R^3aCHO (IX), kde R^3a je fenyl substituovaný alespoň jedním C|.₄ alkylem, Ci^ alkoxyskupinou, halogenem, hydroxyskupinou, kyanoskupinou, methylendioxyskupinou, nitroskupinou, trifluormethylem, N(H)R²⁷ nebo C(O)OR²⁸ a R²⁷ a R²⁸ jsou jak je definováno výše, (i) se sloučeninou vzorce X

RCN (X), kde R” představuje vodík nebo (CH₃)₃Si, například při zvýšené teplotě (například nad teplotou místnosti, ale pod 100 °C), v přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (například chloroformu) a jestliže je to nezbytné v přítomnosti vhodného katalytického systému (například benzylamoniumchloridu), s následnou hydrolýzou v přítomnosti vhodné báze (například NaOH);

(ii) s chloroformem, například při zvýšené teplotě (například nad teplotou místnosti, ale pod 100 °C), v přítomnosti vhodného organického rozpouštědla (například chloroformu) a jestliže je to nezbytné v přítomnosti vhodného katalytického systému (například benzylamoniumchloridu), s následnou hydrolýzou v přítomnosti vhodné báze (například NaOH);

(iii) se sloučeninou vzorce XI

M ^(X,)’ kde M je Mg nebo Li, s následujícím oxidačním štěpením (například ozonolýzou nebo katalýzou na osmiu nebo rutheniu), za podmínek, které jsou dobře známé odborníkovi v oboru, nebo (iv) s tris(methylthio)methanem za podmínek, které jsou dobře známé odborníkovi v oboru, s následnou hydrolýzou v přítomnosti vhodné báze.

Sloučeniny vzorce VI a VII jsou buď komerčně dostupné, jsou dobře známé z literatury, nebo jsou dostupné za použití známých technik. Například sloučeniny vzorce VI mohou být připraveny standardní peptidickou kondenzaci sloučeniny vzorce XIII

R⁴ λ

H—N Y (XIII),

X/

OH kde R⁴ a Y jsou jako je definováno výše, se sloučeninou vzorce VIII, jak je definována zde výše, například za podmínek, které jsou popsány zde výše, pro syntézu sloučenin vzorce I. Podobně sloučeniny vzorce VII mohou být také připraveny standardní peptidickou kondenzací sloučeniny vzorce XIII, jak je definována zde výše, se sloučeninou vzorce V, která je zde definována výše, například za podmínek, které jsou definovány zde výše, pro syntézu sloučenin vzorce I.

Sloučeniny vzorce VIII, IX, X, XI a XIII jsou buď komerčně dostupné, jsou dobře známé z literatury, nebojsou dostupné za použití známých technik. Substituenty na fenylové skupině ve sloučeninách vzorce V, VII a IX mohou být navzájem konvertovány pomocí technik, které jsou dobře známé odborníkovi v oboru.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být izolovány ze svých reakčních směsí pomocí běžných postupů.

Odborník v oboru si povšimne, že ve způsobu, který je popsán výše, funkční skupiny intermediálních sloučenin může být potřebné chránit pomocí chránících skupin.

Mezi funkční skupiny, u kterých se požaduje chránění, se zahrnují hydroxyskupina, aminoskupina, amidinoskupina, guanidinoskupina a karboxylová kyselina. Vhodnými chránícími skupinami pro hydroxyskupinu jsou trialkylsilylové a diarylalkylsilylové skupiny (například terc-butyldimethylsilyl, terc-butyldifenylsilyl nebo trimethylsilyl) a tetrahydro-pyranyl. Vhodnými chránícími skupinami pro hydroxyskupiny, které jsou připojeny k přilehlým atomům uhlíku jsou Ο,Ο'-izopropyliden. Vhodnými chránícími skupinami pro aminoskupinu, amidinoskupinu a guanidinoskupinu jsou terc-butyloxykarbonyl nebo benzyloxykarbony 1. Atomy dusíku amidinoskupiny a guanidinoskupiny mohou být mono- nebo dichráněné. Vhodnými chránícími skupinami pro karboxylové kyseliny jsou C^₆ alkylestery nebo benzylester.

Chránění, nebo odstranění funkčních skupin může být také provedeno před nebo po kondenzaci.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být připraveny zvláště způsoby, který zahrnují kondenzaci N-acylované aminokyseliny nebo N-chráněné aminokyseliny. Jestliže je použita N-chráněná aminokyselina, acylová skupina může být přidána po kondenzaci a odstranění chránící skupiny z atomu dusíku může být poté provedeno za použití obecných metod uvedených dále.

Chránící skupiny mohou být odstraněny technickými způsoby, které jsou známé odborníkovi v oboru, a jsou jak je popsáno dále.

Nové jsou jisté chráněné meziprodukty vzorce I, ve kterých amidinové a guanidinové atomy dusíku v B jsou chráněny, a které mohou být připraveny před konečným krokem odstranění chránící skupiny za vzniku sloučeniny podle tohoto vynálezu.

-9CZ 298487 B6

Podle dalšího aspektu vynález stýká sloučeniny vzorce XIV

(XIV) kde B' je strukturní zbytek vzorce IVd,

D¹ a D² jsou nezávisle vodík, nebo benzyloxykarbonyl, a p, q, R¹, R², R³, R⁴, Y, n a R⁵, X¹, a X² jsou definovány jako je uvedeno výše, za podmínky, že D¹ a D² nejsou oba vodík.

Vlnovky na atomu uhlíku ve zbytku vzorce IVd značí umístění vazby fragmentu.

Použití ochranných skupin je plně popsáno v „Protective Groups in Organic Chemistry“, vyd. J. W. F. McOmie, Plenům Press (1973), a „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vyd., T. W. Greene and P. G. M. Wutz, Wiley-Interscience (1991).

Odborníkem v oboru bud také oceněno, že ačkoli takovéto chráněné deriváty sloučenin vzorce I jako takové nemohou mít farmakologickou aktivitu, mohou být podávány parenterálně nebo orálně, a poté metabolizovány v těle za vzniku sloučenin podle tohoto vynálezu, které jsou v těle farmakologicky účinné. Takovéto deriváty mohou být popisovány jako proléčiva (prekurzory léčiva). Všechna proléčiva sloučenin vzorce I jsou zahrnuta do rozsahu tohoto vynálezu.

Chráněné deriváty sloučenin vzorce I, které jsou zvláště vhodné jako proléčiva, zahrnují sloučeniny vzorce XIV.

Medicinální a farmaceutické použití

Sloučeniny podle vynálezu jsou použitelné, protože vykazují farmaceutickou účinnost. Proto jsou označována jako farmaceutická činidla.

-10CZ 298487 B6

Proto dalším aspektem vynálezu je tak poskytnutí sloučenin podle tohoto vynálezu pro použití jako farmaceutická činidla.

Zvláště jsou sloučeniny podle vynálezu potencionálními inhibitory trombinu, například jak je uvedeno v testech, které jsou popsány dále.

U sloučenin podle vynálezu je tak očekáváno, že jsou vhodné za takových podmínek, kde je požadována inhibiee trombinu.

Sloučeniny podle vynálezu jsou tak určeny pro léčení trombózy a hypersrážlivosti krve a v tkáních živočichů, a zvláště lidí.

Sloučeniny podle vynálezu jsou dále určeny pro léčení stavů, kde je nežádoucí přebytek trombinu bez znaků hypersrážlivosti, například u neurodegenerativních nemocí, jako je Alzheimerova nemoc.

Zvláštní chorobné stavy, které se mohou zmínit, zahrnují léčení a/nebo profylaxi venózní trombózy a plicní embolie, arteriální trombózy, (například infarktu myokardu, nestabilní angíny, na trombóze založené mrtvice a periferní arteriální trombózy) a systémové embolie, obvykle z atria během arteriální fibrilace, nebo z levé srdeční komory po transmurálním infarktu myokardu.

Kromě toho se očekává, že sloučeniny podle vynálezu mají obecně využití v profylaxi reokluze (tzn. trombóz) po trombolýze, perkutánní trans-luminální angioplastice (PTCA), operacích koronárního bypassu, mikrochirurgii a vaskulámí chirurgii.

Další indikace zahrnují léčení a profylaxi šíření intravaskulámí koagulace způsobené bakteriemi, vícenásobným poraněním, intoxikací nebo něktefym jiným mechanizmem; antikoagulační terapie, pokud je krev v kontaktu s cizími povrchy v organizmu, jako například s cévními štěpy, cévními stenty, cévními katetry, mechanickými a biologickými protetickými chlopněmi nebo jinými lékařskými prostředky; a antikoagulační terapií, pokud je krev v kontaktu s lékařskými pomůckami mimo tělo, jako například během kardiovaskulární chirurgie za použití přístroje pro podporu srdce a plic, nebo přístroje pro hemodialýzu.

Kromě svého účinku na proces koagulace, trombin je znám tím, že aktivuje velké množství buněk (jako jsou neutrofily, fíbroplasty, endotheliální buňky a buňky hladkého svalstva). Proto sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být také použitelné pro léčení, nebo profylaxi idiopatického syndromu a jevu respirační úzkosti dospělých, plicní fibrózy následného léčení po radioterapii nebo chemoterapii, septického šoku, septikémie, zánětlivé odezvy, mezi které se zahrnují, aniž by na ně byly omezeny, edémy, akutní nebo chronická ateroskleróza, jako je choroba koronárních tepen, mozkových tepen, periferních tepen, poškození reperfůzí, a restenóza po perkutánní transluminámí angioplastice (PTCA).

Sloučeniny podle vynálezu, které inhibují tripsin a/nebo trombin, mohou být také vhodné pro léčení pankreatitidy.

Podle dalšího aspektu vynálezu je poskytnuto použití sloučenin podle tohoto vynálezu pro způsob léčení za podmínek, kde je požadována inhibiee trombinu, přičemž tento způsob zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I, jak je definována výše, nebo její farmaceuticky přijatelné soli osobě trpící nebo náchylné k takovému stavu.

Farmaceutické prostředky

Sloučeniny podle vynálezu budou obvykle podávány orálně, subkutánně, bukálně, rektálně, dermálně, nasálně, tracheálně, bronchiálně nebo některou parenterální cestou nebo inhalační cestou, ve formě farmaceutických prostředků, obsahujících aktivní složku buď jako volnou bázi nebo

-11 CZ 298487 B6 farmaceuticky přijatelnou netoxickou organickou nebo anorganickou adiční sůl s kyselinou ve farmaceuticky přijatelné dávkové formě. V závislosti na poruše a na pacientovi, který má být léčen a na cestě podání, může být kompozice podána v různých dávkách.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být kombinovány sjakýmikoliv antitrombotickými činidly s odlišným mechanizmem účinku, jako jsou antitrombocytická činidla acethylsalicylová kyselina, tiklopidin, klopidogrel, tromboxanový receptor a/nebo inhibitory syntetázy, antagonisty receptoru fibrinogenu, prostacyklinová mimetika a inhibitory fosfodiesterázy.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být dále kombinovány s trombolitiky, jako je aktivátor tkáňového plasminogenu (přírodní nebo rekombinantní), streptokináza, urokináza, prourokináza, komplex neizolované streptokinázy a aktivátoru plasminogenu (ASPAC), aktivátory plasminogenu slinné žlázy živočichů a podobné, pro léčení trombotických onemocnění a zvláště infarktu myokardu.

Podle dalšího aspektu vynálezu je poskytnuta farmaceutická formulace obsahující sloučeninu obecného vzorce I, jak je definována zde výše, nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, ve směsi s farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami, ředidly nebo nosiči.

Vhodná denní dávka sloučenin podle tohoto vynálezu pro terapeutické léčení lidí je okolo 0,001 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti při perorálním podávání a 0,001 až 50 mg/kg tělesné hmotnosti pro parenterální podávání.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mají výhodu vtom, že mohou být účinnější, méně toxické, mohou mít prodloužený účinek, mohou mít širší rozmezí účinnosti, mohou být silnější, způsobují méně vedlejších účinků, jsou snadněji absorbovatelné než sloučeniny známé z dosavadního stavu techniky, nebo mohou mít jiné použitelné farmakologické vlastnosti.

Biologické testy

Test A

Určení doby koagulace trombinu (TT)

Lidský trombin (T6769, Sigma Chem. Co.) v roztoku pufru, pH 7,4, 100 μΐ, a inhibiční roztok, 100 μΐ, byly inkubovány po dobu jedné minuty. Dále byla přidána zachycená normální lidská plazma po ošetření citrátem, 100 μΐ, a měřil se čas pro koagulaci na automatickém zařízení (KC 10, Amelung)0.

Doba koagulace v sekundách byla vynesena vůči koncentraci inhibitoru, a IC₅o TT byla stanovena interpolací.

IC₅o TT je koncentrace inhibitoru, která zdvojnásobuje dobu koagulace trombinu pro lidskou plazmu.

Test B

Stanovení doby pro parciální aktivaci tromboplasminu (APTT)

Doba pro parciální aktivaci tromboplasminu (APTT = Activated Partial Thromboplasmin Time) byla stanovena v zachycené normální lidské plazmě, po ošetření citrátem, s reagentem PTT Automated 5, vyrobeným firmou Stago. Inhibitory byly přidány k plazmě (10 μΐ inhibičního roztoku k 90 μΐ plazmy) s následným přidáním reagentu a roztoku chloridu vápenatého. APTT bylo stanoveno ve směsi za použití analyzátoru koagulace KC10 (Amelung) podle instrukci výrobce reagentu. Doba koagulace v sekundách byla vynesena proti koncentrací inhibitoru v plazmě a IC50 APTT byl stanoven interpolací.

- 12CZ 298487 B6

IC50 APTT je definován jako koncentrace inhibitoru v lidské plazmě, která zdvojnásobuje dobu pro parciální aktivaci tromboplasminu.

TestC

Stanovení doby trombinu ex vivo

Inhibice trombinu po orálním nebo parenterálním podávání sloučenin podle tohoto vynálezu byla zkoušena na krysách uchovávaných při vědomí, které jeden nebo dva dny před experimentem byly opatřeny katétrem pro odebírání vzorků krve z krční tepny. Vzorky krve ve dni experimentu byly odebrány v pevně stanoveném čase po podání sloučeniny do zkumavek z plastické hmoty obsahujících 1 díl roztoku citranu sodného (0,13 mol/1) a 9 dílů krve. Zkumavky byly centrifugovány pro získání plazmy s nízkým obsahem krevních destiček. Plazma byla použita pro stanovení doby trombinu, jak bude popsáno dále.

Citrátovaná krysí plazma, 100 μΐ, byla zředěna fyziologickým roztokem, 0,9%, 100 μΐ, a koagulace plazmy byla zahájena přidáním lidského trombinu (T 6769, Sigma Chem. Co., USA) v roztoku pufru, pH 7,4; 100 μΐ. Doba koagulace byla měřena v automatickém zařízení (KC 10, Amelumg, Německo).

Jestliže byla podávána sloučenina vzorce XIV, koncentrace příslušného inhibitoru aktivního trombinu vzorce I v plazmě krys byla stanovena za použití standardních křivek vyjadřujících doby trombinu v zachycené citrátové plazmě krys ke známým koncentracím odpovídajícího „aktivního“ inhibitoru trombinu, který je rozpuštěn ve fyziologickém roztoku.

Test D

Stanovení doby trombinu v moči ex vivo

Krysy, které byly udržovány při vědomí, byly umístěny do klecí pro sledování metabolizmu na 24 hodin po orálním podávání sloučenin podle tohoto vynálezu. Doba trombinu byla stanovena ve shromážděné moči, jak je popsáno dále.

Zachycená normální citrátová lidská plazma (100 μΐ) byla inkubována koncentrovanou krysí močí nebo po jejím zředění fyziologickým roztokem po dobu jedné minuty. Koagulace plazmy byla poté iniciována podáváním lidského trombinu (T 6769, Sigma Chem. Company) v roztoku pufru, (pH 7,4; 100 μΐ). Doba srážení byla měřena v automatickém zařízení (KC 10, Amelumg).

Jestliže byla podávána sloučenina vzorce XIV, koncentrace příslušného inhibitoru aktivního trombinu vzorce I v moči krys byla stanovena za použití standardních křivek vyjadřujících doby trombinu v zachycené citrátové plazmě krys ke známým koncentracím odpovídajícího „aktivního“ inhibitoru trombinu, který je rozpuštěn v koncentrované krysí moči (nebo po jejím zředění fyziologickým roztokem). Pomocí několikanásobné celkové produkce moči krys během 24 hodinové periody se stanovuje střední koncentrace výše zmíněného aktivního inhibitoru v moči, přičemž by se mohlo vypočítat množství vyloučeného aktivního inhibitoru.

Vynález je ilustrován následujícími příklady. Pokud jakýkoli z dále uvedených příkladů není pokryt rozsahem připojených patentových nároků, je třeba rozumět, že takový příklad je zde uveden pouze s ilustrativním záměrem.

Příklady provedení vynálezu

Obecný experimentální postup

Hmotnostní spektra byla zaznamenána na hmotnostním spektrometru Finnigan MAT TSQ 700 Triple Quadrupole Mass Spectrometer, který je opatřené s rozprašováním elektronů na fázovém

- 13CZ 298487 B6 rozhraní (FAB-MS) a hmotnostním spektrometru VG Platform II, který je opatřen rozprašováním elektronů na fázovém rozhraní (LC-MS).

*H NMR a ¹³C NMR měření byla provedena na spektrometrech BURKER ACP 300 a Varian UNITY plus 400 a 500 Spektrometers, které pracují při 'H frekvencích 300,13; 399,96 a 499,82 MHz, a při ¹³C frekvencích 75,46; 100,58; a 125,69 MHz.

Příklad 1

Ch-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1 (i) Boc-Aze-OH

Di-terc-butyldikarbonát (13,75 g; 63 mmol) byl přidán za míchání při teplotě místnosti ke směsi 5,777 g (57 mmol) L-azetidin-2-karboxylové kyseliny. (H-Aze-OH) a 6,04 g (57 mmol) uhličitanu sodného v 50 ml vody a 100 ml THF. Po 60 hodinách byl THF oddestilován za vakua a směs byla zředěna vodou a okyselena 2M hydrogensíranem draselným. Dále byla provedena extrakce methylenchloridem a poté bylo provedeno sušení (síran hořečnatý) a odpaření rozpouštědla. Dostal se odparek, který byl krystalizován z methylenchloridu a hexanu, aby se dosáhl výtěžek 10,87 g; (95 %) barevných krystalů.

'H-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 4,85 - 4,7 (brs, 1), 4,0- 3,75 (m, 2), 2,65- 2,35 (m, 2), l,4(s,9).

(ii) Boc-Aze-Pab(Z)

EDC (13,5 g; 70 mmol) bylo přidáno za teploty místnosti ke směsi Boc-Aze-OH (10,87 g; 54 mmol; z kroku (i) uvedeného výše), H-Pab(Z) x HC1 (18,31 g; 57 mmol; připraven způsobem popsaným v dokumentu WO 94/29336) a DMAP (9,9 g; 81 mmol) v acetonitrilu (270 ml). Po 16 hodinách bylo rozpouštědlo odpařeno za vakua a bylo nahrazeno ethylacetátem. Směs byla promyta vodou a vodným roztokem citrónové kyseliny. Organická vrstva byla vysušena (síran hořečnatý) a rozpouštědlo bylo odpařeno za vakua. Dostal se odparek, který poskytl Boc-AzePab(Z) (17,38 g), po krystalizací ze směsi methylenchloridu, toluenu, diizopropyletheru a petroletheru.

‘H-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 7,85 - 7,75 (d, 1), 7,45 - 7,2 (m, 7), 5,2 (s, 2), 4,7 (t, 1), 4,6 - 4,4 (m, 2), 3,95-3,8 („q“, 1), 3,8-3,7 (q, 1), 2,5-2,3 (m, 2), 1,4 (s, 9).

(iii) H-Aze-Pab(Z)

Boc-Aze-Pab(Z) (2,44 g; 5,2 mmol; z kroku (ii) uvedeného výše) byl rozpuštěn ve směsi 10 ml trifluoroctové kyseliny a 10 ml methylenchloridu. Po 30 minutách bylo rozpouštědlo a trifluoroctová kyselina odpařeny za vakua a odparek byl rozpuštěn v methylenchloridu. Organická fáze byla promyta 10% roztokem uhličitanu sodného a vysušena (uhličitan draselný). Odpaření rozpouštědla za vakua poskytlo odparek, ze kterého se dostal H-Aze-Pab(Z) (1,095 g; 57 %), jako bezbarvé krystaly, po krystalizací z methylenchloridu.

’Η-NMR (300 MHz; CD₃OD): δ 7,85 - 7,75 (d, 2), 7,45 - 7,25 (m, 7), 5,2 (s, 2), 4,5 (s, 2), 4,3 (d, 1), 3,65 (q, 1), 3,4 - 3,3 (m, 1), 2,7 - 2,5 (m, 1), 2,4 - 2,2 (m, 1).

(iv) Ch-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Tato sloučenina byla připravena způsobem, který popsal Kelly a LaCour (Synth. Comm. 22, 895 (1992)) a který je uveden dále. K roztoku (R,S)-hexahydromandlové kyseliny (0,30 g; 1,9 mmol), katalytického množství DMAP a pyridinu (0,31 g; 3,9 mmol) v methylenchloridu (5 ml) byl přikapán TMSC1 (0,42 g; 3,9 ml). Reakční směs se míchala za teploty místnosti po dobu 4 hodin. Reakční směs byla ochlazena na 0 °C a následně se přidalo katalytické množství DMF (3 kapky ze 2ml injekční stříkačky) k oxalylchloridu (0,25 g; 2,0 mmol). Reakční směs

- 14CZ 298487 B6 byla míchána po dobu jedné hodiny při 0 °C a dále byla přidána směs H-Aze-Pab(Z) (0,67 g; 1,8 mmol; z kroku (iii) uvedeného výše) a pyridinu (0,50 g; 6,3 mmol) a reakční směs byla ponechána, aby se ohřála na teplotu místnosti a míchala se přes noc. K reakční směsi byl přidán 10% roztok citrónové kyseliny v methanolu (6 ml). Po 30 minutách byla reakční směs vložena do dělicí nálevky a zředěna 30 ml ethylacetátu a vodná fáze byla extrahována ethylacetátem. Spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu a poté roztokem chloridu sodného a sušeny (Na2SO₄). Po odpaření a podrobení velmi rychlé chromatografii na silikagelu, za použití methylenchloridu a methanolu (99 : 1 až 92 : 8) jako elučního činidla byla získána další sloučenina pojmenovaná v subtitulku (60 mg; 6 %).

’H-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 1,0 - 1,9 (m, 11 H), 2,4 - 2,7 (m, 2 H), 3,80 (d, 1 H), 4,05 - 4,25 (m, 1 H), 4,3- 4,5 (m, 2 H), 4,85- 5,0 (m, 1 H), 5,18 (s, 2 H), 7,1 - 7,5 (m, 7 H),

7,65 - 7,8 (m, 2 H), 7,86 (bt, 1 H, minoritní diastereomer a/nebo rotamer), 8,33 (bt, 1 H, majoritní diastereomer a/nebo rotamer).

¹³C-NMR (75 MHz, CDCh) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 174,8, 170,6, 168,0 a 164,5.

(v) h-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1

Ch-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (60 mg; 12 mmol; z kroku (iv) uvedeného výše) byl rozpuštěn v ethanolu (5 ml) a bylo přidáno 5% Pd/C a HC1 (0,1 ml; koncentrovaná). Směs byla hydrogenována při atmosférickém tlaku po dobu 2 hodin. Po zfiltrování a odpaření byl produkt čištěn preparativní RPLC za použití (0,005M NEfiOAc, 0,005M HOAc) a CH₃CN 4 : 1 jako elučního činidla. Po lyofilizaci byla přidána HC1 (vodná) a roztok byl sušen vymrazením. Výtěžek titulní sloučeniny byl 15 mg (31 %).

'H-NMR (300 MHz; D₂O), spektrum je komplikováno dvěma diastereomery a/nebo rotamery): δ 0,7 - 2,0 (m, 11 H), 2,25 - 2,4 (m, 1 H), 2,65 - 2,9 (m, 1 H), 3,79 (d, 1 H, minoritní), 4,03 (d, 1 H, majoritní), 4,05 - 4,15 (m, 2 H, minoritní), 4,35 - 4,45 (m (bt), 2 H, majoritní), 4,5 - 4,6 (m, 2 H), 5,20 (m, 1 H, minoritní, majoritní signál se překrývá s HOD signálem), 7,5 - 7,65 (m, 2 H), 7,75 - 7,85 (m, 2 H).

¹³C NMR (75 MHz; CDC1₃) uhlíky amidinu a karbonylu (diastereomery a/nebo rotamery): δ 176,3, 175,4, 173,7, 173,3, 167,2 a 167,0.

Příklad 2

Ch-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1 (i) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-AZE-Pab(Z)

Sloučenina ze subtitulku byla připravena způsobem popsaným v příkladu 1 (iv) z (R)-hexahydromandlové kyseliny (z 0,60 g; 3,8 mmol) s výtěžkem 0,15 g (10 %).

(ii) Ch-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným v příkladu 1 (v) z Ch-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z).(0,12 g; 0,24 mmol; z kroku (i) uvedeného výše). Výtěžek: 52 mg (54 %).

*H-NMR (300 MHz; D₂O; spektrum je komplikované v důsledku rotamerů): δ 0,7 - 2,0 (m, 11 H); 2,25 - 2,4 (m, 1 H); 2,6 - 2,9 (m; 1 H); 3,79 (d; 1 H; minoritní); 4,02 (d; 1 H; majoritní); 4,5 - 4,15 (m, 2H, minoritní), 4,35 - 4,45 (m (bt), 2 H, majoritní); 4,5 - 4,6 (m, 2H);

5,19 (m; 1 H; minoritní; majoritní signál se překrývá s HOD signálem); 7,5- 7,65 (m; 2 H); 7,75 - 7,85 (m; 2 H).

¹³C-NMR (75 MHz; CDC1₃) uhlíky amidinu a karbonylu (rotamery): 171,9; 170,2; 169,8 a 163,8.

- 15 CZ 298487 B6

Příklad 3 (Et)₂C(OH)-C(O)-Aze-Pab x HCI (i) H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI

Sloučenina ze subtitulku byla připravena reakcí Boc-Aze-Pab(Z) (viz příklad 1 (ii) uvedený výše) s EtOAc nasyceným plynným HCI. Reakční směs byla odpařena po 1/2 hodině a byl získán H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI v kvantitativním výtěžku.

(ii) (Et)₂C(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Směs diethylglykolové kyseliny (0,13 g; 0,80 mmol); H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,39 g; 0,88 mmol; z kroku (i) uvedeného výše), TBTU (0,28 g; 0,88 mmol) v DMF (15 ml) byla ochlazena na ledové lázni. Byl přidán DIPEA (0,41 g; 3,2 mmol) a reakční směs byla míchána za teploty místnosti přes noc. Výsledná směs byla vylita do 500 ml vody a extrahována 3-krát ethylacetátem. Spojené organické fáze byly promyty vodným NaHCO₃ a vodou, vysušeny (Na₂SO₄) a odpařeny. Surový produkt byl podroben velmi rychlé chromatografií na silikagelu za použití methylenchloridu a THF jako elučního činidla. Výtěžek: 30 mg (8 %).

’H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 8,4 (bt, 1 H); 7,77 (d; 2 H); 7,40 (d; 2 H); 7,35 - 7,2 (m; 5 H); 5,17 (s; 2 H); 4,90 (m; 1 H); 4,46 (dd; 1 H); 4,39 (dd; 1 H); 4,3 - 4,2 (m; 2 H); 2,66 (m; 1 H); 2,44 (m; 1 H); 1,8-1,5 (m; 4 H); 0,9 - 0,75 (m; 6 H).

(iii) (Et)₂C(OH)-C(O)-Aze-Pab x HCI

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným v příkladu 1 (v) z (Et)₂C(OH)-C(O)Aze-Pab(Z) (30 mg; 0,063 mmol; z kroku (ii) popsaného výše). Výtěžek: 19 mg (79 %).

'H-NMR (300 MHz; D₂O; spektrum je komplikováno v důsledku rotamerů): δ 7,70 (d; 2 H);

7,65 - 7,5 (m; 2 H); 5,43 (m; 1 H; minoritní rotamer); 4,90 (m; 1 H; majoritní rotamer); 4,6 - 4,5 (m; 3 H); 4,11 (m; 1 H; rotamer); 3,70 (m; 1 H; rotamer); 2,8- 2,55 (m; 1 H); 2,35 - 2,15 (m; 1 H); 1,9-1,6 (m; 4 H); 1,0 - 0,75 (m; 6 H).

^,3C-NMR (75 MHz; D₂O) uhlíky amidinu a karbonylu (rotamery): δ 178,3; 177,4; 175,0; 173,5;

167,2.

Příklad 4 (Ph)₂C(OH)-C(O)-Aze-Pab x HCI (i) (Ph)₂C(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina pojmenovaná v subtitulku byla připravena způsobem popsaným v příkladu 3 (ii) z benzolové kyseliny (0,18 g; 0,80 mmol). Výtěžek: 0,16 g (35 %).

’Η-NMR (300 MHz; D₂O): δ 7,93 (bt; 1 H); 7,71 (d; 2 H); 7,54 - 7,15 (m; 17 H); 5,14 (s; 2 H); 4,89 (m; 1 H); 4,57 (m; 1 H); 4,48 (dd; 1 H); 4,35 (dd; 1 H); 3,60 (m; 1 H); 3,44 (m; 1 H); 2,44 (m; 1 H); 2,23 (m; 1 H).

(ii) (Ph)₂C(OH)-C(O)-Aze-Pab x HCI

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným v příkladu 1 (v) z (Ph)₂C(OH)-C(O)Aze-Pab(Z) (0,16 g; 0,28 mmol; z kroku (i) uvedeného výše). Výtěžek: 90 mg (68 %).

’Η-NMR (400 MHz; D₂O; spektrum je komplikováno v důsledku rotamerů): δ 7,65 - 7,55 (m; 2 H); 7,4 - 7,1 (m; 12 H); 5,13 (m; 1 H; minoritní rotamer); 4,77 (m; 1 H; majoritní rotamer; 4,43 (d; 1 H); 4,40 (d; 1 H); 4,12 (m; 1 H; majoritní rotamer); 4,05 - 3,9 (m; 1 H, plus 1 H minoritní rotamer); 2,55 (m; 1 H, minoritní rotamer); 2,39 (m, 1 H, majoritní rotamer); 2,08 (m; 1 H).

- 16CZ 298487 B6 ¹³C-NMR (75 MHz; D₂O) uhlíky amidinu a karbonylu (rotamery): δ 175,7; 174,9; 174,6; 173,4;

167,1.

Příklad 5 n-C₆H_í3-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1 (i) n-C₆Hi₃-(R,S)CH(OH)-C(O>-Aze-Pab(Z)

Sloučenina pojmenovaná v subtitulku byla připravena způsobem popsaným v příkladu 3 (ii) uvedeným výše, z (R,S)-2-hydroxyoktanové kyseliny (0,13 g; 0,80 mmol). Výtěžek: 0,25 g (61 %).

’Η-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 8,24 (bt, 1 H, jeden diastereomer); 7,89 (bt; 1 H, jeden diastereomer); 7,8- 7,75 (m; 2 H); 7,4 - 7,5 (m, 2 H); 7,35 - 7,25 (m; 5 H); 5,18 (s; 2 H); 4,95 - 4,85 (m; 1 H); 4,55 - 4,35 (m; 2 H); 4,2 - 4,0 (m; 3 H); 2,8 - 2,65 (m, 1 H); 2,6 - 2,4 (m; 1 H); 2,0 - 1,2 (m; 10 H); 0,9 - 0,8 (m; 3 H).

(ii) n-C₆Hi₃-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným v příkladu 1 (v) z n-C6H_]3-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,14 g; 0,28 mmol; z kroku (i) popsaného výše). Výtěžek: 88 mg (78 %).

’Η-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,7 - 7,6 (m, 2 H); 7,45 - 7,3 (m, 1 H, jeden diastereomer); 4,74 (m; 1 H; jeden diastereomer překrývající se se signálem vody); 4,45 - 4,35 (m; 2 H); 4,3 - 4,1 (m, 2H); 4,0- 3,8 (m, 1 H); 2,65-2,45 (m, 1 H); 2,3 - 2,1 (m, 1 H); 1,6- 0,9 (m, 10 H), 0,75 - 0,65 (m, 3 H).

¹³C-NMR (75 MHz; D₂O) uhlíky amidinu a karbonylu (diastereomery a rotamery): δ 176,8; 176,4; 176,0; 173,5; 173,3; 173,2; 167,2.

Příklad 6

Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab (i) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina pojmenovaná v subtitulku byla připravena způsobem popsaným v příkladu 3 (ii) z (R)-mandlové kyseliny (0,12 g; 0,80 mmol). Surový produkt (0,315 g) byl čištěn velmi rychlou chromatografíí (Si-gel; THF a EtOAc (6 : 4)). Výtěžek: 0,128 g (32 %) bílého prášku, o čistotě 91,2 % (HPLC).

'H-NMR (499,803 MHz; CDC1₃): δ 8,14 (t; 1 H); 7,72 (d; 2 H); 7,42 (d, 2 H); 7,33 (t, 4 H); 7,28 (m, 3 H); 7,22 (d, 2 H); 5,18 (s; 2 H); 4,92 (s; 1 H); 4,79 (dd, 1 H); 4,54 (široký s, 1 H); 4,39 (d; 2 H); 4,00 (q; 1 H); 3,53 (q; 1 H); 2,48 (m; 1 H); 2,24 (m; 1 H); 2,19 (široký s, 1 H).

¹³C-NMR (125,688 MHz; CDC1₃) (uhlíky karboxylu a amidinu): δ 173,1, 170,3 168,1, 164,5.

(ii) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab

Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (107 mg; 0,214 mmol; z kroku (i), který je uveden výše) byl rozpuštěn v THF a vodě (2:1), bylo přidáno 37 mg Pd/C (4 % mol Pd) a výsledný roztok byl hydrogenován po dobu 6 hodin. Roztok byl filtrován přes prostředek hyflo a odpařen do sucha. K výslednému bílému prášku bylo přidáno 20 ml vody okyselené 0,42 ml 1M HC1 (asi 2 ekvivalenty). Výsledný roztok byl promyt 5 ml EtOAc a 10 ml diethyletheru a dvakrát sušen vymrazením. Výtěžek: 72 mg (84 %) bílého prášku. Čistota: 91 % (HPLC).

’Η-NMR (399,968 MHz; D₂O): δ 7,57 (t, 2 H); 7,36 (d; 1 H); 7,32 (s; 3); 7,27 (s; 1 H); 7,25 (d, 1 H); 7,19 (m; 1 H); 5,17 (s; 1 H, majoritní); 5,09 (s; 1 H, minoritní); 5,00 (dd; 1, minoritní);

- 17CZ 298487 B6

4,38 (s, 2, majoritní); 4,20 (dd, 1 H, majoritní); 3,98 (dd, 2 H, minoritní); 3,97 (m, 1 H, majoritní); 3,75 (dd, 1 H); 2,68 (s, 1 H, minoritní); 2,65 (m, 1 H, minoritní); 2,35 (m,l H, majoritní); 2,12 (m, 1 H, majoritní); 2,03 (m, 1 H, minoritní).

¹³C-NMR (111,581 MHz; D₂O) (uhlíky karboxylu a amidinu): δ 174,5, 173,2, 172,5, 172,4.

Příklad 7

Ph(4-CF₃)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HCI (i) Ph(4-CF₃)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 3 (ii) z (R,S)-4-trifluormethylmandlové kyseliny (0,19 g, 0,88 mmol). Velmi rychlou chromatografii (Si-gel, CH₂C1₂, a THF (6 : 4)) se dostalo 0,13 g (26 %) bílého prášku.

’Η-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 9,6-9,2 (b, 1 H), 8,1 (bt, 1 H, diastereomer), 7,9 (bt, 1 H, diastereomer), 7,7- 7,1 (m, 13 H), 5,16 (s, 2 H), 5,07 (s, 1 H, diastereomer), 4,98 (s, 1 H, diastereomer), 4,80 (m, 1 H), 4,5 - 4,2 (m, 2 H), 4,1 - 3,5 (m, 2 H), 2,5 - 2,2 (m, 2 H).

¹³C-NMR (75 MHz; CDC1₃), uhlíky amidinu a karbonylu (diastereomery): δ 173,3, 172,4, 170,3,

168.3, 164,4.

(ii) Ph(4-CF₃)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HCI

Připraví se podle způsobu popsaného v příkladu 1 (v) ze Ph(4-CF₃)-(R,S)CH(OH)-C(O)-AzePab(Z) (133 mg, 0,23 mmol, z výše popsaného kroku (i)) tak, aby se dostala sloučenina popsaná v nadpisu jako bílý krystalický prášek. Výtěžek činí 77 mg (70 %).

'H-NMR (300 MHz; D₂O): δ 8,84 (m, 1 H, diastereomer/rotamer), 8,73 (m, 1 H, diastereomer/rotamer), 8,52 (m, 1 H, diastereomer/rotamer), 7,8 - 7,4 (m, 8 H), 5,46, 5,44, 5,30, 5,20 (singlety, 1 H, diastereomery/rotamery), 4,96 (m, 1 H, diastereomer/rotamer, jiné signály ze stejného protonu překrývající se s HDO signálem), 4,6- 4,0 (m, 4 H), 2,9- 2,5 (m, 1 H), 2,4- 2,1 (m, 1 H).

¹³C-NMR (75 MHz; D₂O), uhlíky amidinu a karbonylu (diastereomery a rotamery): δ 173,6,

173.3, 173,1, 173,0, 172,9, 167,0.

Příklad 8

Ph(4-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HCI (i) Ph(4-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu 3(ii) z (R,S)-4-methoxymandlové kyseliny (0,18 g, 1,0 mmol). Velmi rychlá chromatografie (Si-gel, EtOAc a MeOH (95 : 5) poskytla 27 mg (17 %) bílého prášku.

Diastereomemí poměr 85 : 15, signály z hlavního diastereomeru: ’Η-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 8,19 (m, 1 H), 7,80 (d, 2 H), 7,45 (d, 2 H), 7,4 - 7,2 (m, 7 H), 7,13 (d, 2 H, minoritní rotamer), 6,90 (d, 2 H, majoritní rotamer), 6,82 (d, 2 H, minoritní rotamer), 5,21 (s, 2 H), 4,9 - 4,85 (m, 2 H; jeho singlet při 4,89 (1 H)), 4,6- 4,4 (m, 2 H), 4,02 (m, 1 H), 3,81 (s, 3 H), 3,55 (m, 1 H), 2,62 (m, 1 H), 2,32 (m, 1 H).

¹³C-NMR (100 MHz; CDC1₃) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 173,6, 170,3, 167,8, 164,6.

(ii) Ph(4-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HCI

-18CZ 298487 B6

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (v) ze Ph(4-OMe)(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (27 mg; 0,05 mmol, z výše popsaného kroku (i)). Výtěžek činí mg (68 %) bílého prášku.

Diastereomemí poměr 85 : 15, signály z majoritního diastereomeru: 'H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,7 - 7,6 (m, 2 H), 7,5 - 7,3 (m, 4 H), 7,18 (d, 2 H, rotamer), 6,97 (d, 2 H, rotamer), 6,9 - 6,85 (m, 2 H, rotamer), 5,19 (s, 1 H, rotamer), 5,14 (s, 1 H, rotamer), 5,01 (m, 1 H, rotamer), 4,76 (m, 1 H, rotamer), 4,48 (s, 1 H), 4,3 - 3,7 (m, 7 H, jeho dva singlety při 3,78, 3,77 (3H)), 2,73 (m, 1 H, rotamer), 2,46 (m, 1 H, rotamer), 2,3 - 2,0 (m, 1 H).

^,3C-NMR (75 MHz, D₂O), uhlíky amidinu a karbonylu (rotamery): δ 175,5, 174,1, 173,3, 173,1, 167,1, 167,0.

Příklad 9

Ph(4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1 (i) Ph(4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 3 (ii) z (R,S)-4-hydroxymandlové kyseliny (0,34 g, 2,0 mmol). Velmi rychlou chromatografií (Si-gel, EtOAc a EtOH, 9:1) bylo získáno 0,18 g (17 %) sloučeniny.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,70 (d, 2 H, minoritní diastereomer/rotamer), 7,64 (d, 2 H, majoritní diastereomer/rotamer), 7,5 - 7,0 (m, 7 H), 6,82 (d, 2 H, majoritní diastereomer/rotamer), 6,67 (d, 2 H, minoritní diastereomer/rotamer), 6,43 (d, 2 H, majoritní diastereomer/rotamer), 5,30, 5,26, 5,22, 5,21 (singlety, 2 H, diastereomery/rotamery), 4,95 - 4,8 (m, 2 H), 4,15 - 4,05 (m, 2 H), 4,0 - 3,7 (m, 2 H), 2,7 - 2,5, (m, 2 H).

(ii) Ph(4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (v) ze Ph(4-OH)(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (94 mg; 0,18 mmol; z výše popsaného kroku (i)). Výtěžek činí 37 mg (49 %) bílého prášku.

'H-NMR (600 MHz; D₂O): δ 7,76, 7,72, 7,71, 7,68, 7,52, 7,47, 7,40, 7,35, 7,25, 7,19, 7,11, 6,97, 6,82, 6,76, 6,73, 6,71 (dublety, 8 H, diastereomery/rotamery), 5,19 (s, 1 H, diastereomer/rotamer), 5,17 (s, 1 H, diastereomer/rotamer), 5,14 (s, 1 H, diastereomer/rotamer), 5,01 (m, 1 H, diastereomer/rotamer), 4,88 (m, 1 H, diastereomer/rotamer; jiné signály ze stejného protonu překrývající se s HDO-signálem), 4,6 - 3,8 (m, 4 H), 2,77 (m, 1 H, diastereomer/rotamer), 2,62 (m, 1 H, diastereomer/rotamer), 2,49 (m, 1 H, diastereomer/rotamer), 2,3 -2,1 (m, 1 H).

¹³C-NMR (75 MHz, D₂O), uhlíky amidinu a karbonylu (diastereomery a rotamery): δ 175,9, 174,8, 174,3, 173,3, 173,2, 172,9, 167,1.

Příklad 10

Ph-CH₂-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1 (i) Ph-CH₂-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 3 (ii) z (R)-fenylmléčné kyseliny (0,25 g; 1,5 mmol). Velmi rychlou chromatografií (Si-gel, CH₂C1₂: THF (6 : 4) se získá 0,28 g (36 %).

’Η-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 8,19 (m, 1 H), 7,72 (d, 2 H), 7,43 (d, 2 H), 7,4 - 7,1 (m, 10 H),

5,19 (s, 2 H), 4,73 (m, 1 H), 4,45 - 4,25 (m, 2 H), 4,19 (m, 1 H), 3,86 (m, 1 H), 3,18 (m, 1 H), 3,0 - 2,9 (m, 2 H), 2,42 (m, 1 H), 2,14 (m, 1 H).

-19CZ 298487 B6 ¹³C-NMR (125 MHz; CDC1₃), uhlíky amidinu a karbonylu: δ 174,5, 170,2, 167,9, 164,3.

(ii) Ph-CH₂-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (v) ze Ph-CH₂-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,22 g; 0,43 mmol, zvýše popsaného kroku (i)) za zisku 101,5 mg (57 %) bílého prášku.

'H-NMR (600 MHz; D₂O): δ 7,73 (d, 2 H, majoritní rotamer), 7,62 (d, 2 H, minoritní rotamer), 7,5 - 7,4 (m, 2 H), 7,4 - 7,2 (m, 5 H), 7,10 (m, 2 H, minoritní rotamer), 4,71 (m, 1 H, majoritní rotamer), 4,5 - 4,4 (m, 2 H), 4,34 (m, 1 H, minoritní rotamer), 4,14 (m, 1 H), 4,03 (m, 1 H), 3,53 (m, 1 H), 3,05 - 3,95 (m, 2 H, majoritní rotamer), 2,9 - 2,7 (m, 2 H, minoritní rotamer),

2,65 - 2,5 (m, 1 H, minoritní rotamer), 2,5 - 2,3 (m, 1 H, majoritní rotamer), 2,3 - 2,1 (m, 1 H).

¹³C-NMR (75 MHz; D₂O), uhlíky amidinu a karbonylu (rotamery): δ 175,9, 175,0, 173,7, 173,2, 167,1, 166,8.

Příklad 11

Ch-(R)CH(OH)-C(O)-Pic-Pab (i) Boc-Pic-OH

Sloučenina byla připravena podle způsobu, který popsal M. Bodanszky a A. Bodanszky („The Practise of Peptide Synthessis“, Springer-Verlag), za použití THF jako rozpouštědla místo dioxanu.

'H-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 5,0 - 4,8 (br d, 1 H), 4,0 (br s, 1 H), 3,0 (br s, 1 H), 2,20 (d, 1 H),

1,65 (m, 2 H), 1,5 - 1,3 (s + m, 13 H).

(ii) Boc-Pic-Pab(Z)

Sloučenina popsaná v podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (ii) výše z Boc-Pic-OH (2,02 g; 8,8 mmol; z výše popsaného kroku (i)), za zisku 1,59 g (44 %).

FAB-MS m/z 495 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,83 (d, 2 H), 7,43 (d, 2 H), 7,36 - 7,11 (m, 5 H), 6,52 (bs, NH),

5,20 (s, 2 H), 4,81 - 4,72 (m, 1 H), 4,61 - 4,34 (m, 2 H), 4,10-3,90 (m, 1 H), 2,79 - 2,64 (m, 1 H), 2,36 - 2,25 (m, 1 H), 1,7 - 1,3 (m, 14 H).

(iii) H-Pic-Pab(Z) x 2 HC1

Boc-Pic-Pab(Z) (1,59 g, 3,25 mmol, zvýše popsaného kroku (ii)) byl rozpuštěn ve 100 ml EtOAc nasyceného HC1. Reakční směs byla odpařena po půl hodině a dostala se sloučenina uvedená v nadpisu v kvantitativním výtěžku.

FAB-MS m/z 395 (M + 1)⁺.

'H-NMR (300 MHz; D₂O): δ 7,82 (d, 2 H), 7,63 - 7,41 (m, 7 H), 5,47 (s, 2 H), 4,69 - 4,49 (AB-systém vycentrován při δ 4,59, 2 H), 4,03 (dd, 1 H), 3,52 (bd, 1 H), 3,10 (dt, 1 H), 2,29 (dd, 1 H), 2,08-1,61 (m, 5 H).

(iv) H-Pic-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena rozpuštěním dihydrochloridu z výše popsaného kroku (iii) ve 2M NaOH s následnou extrakcí pomocí CH₂C1₂ a odpařením organického rozpouštědla.

(v) Ch-(R)CH(OH)-C(O)-Pic-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 3 (ii) z (R)-hexahydromandlové kyseliny (0,152 g, 0,96 mmol) a H-Pic-Pab(Z) (0,417 g; 1,06 mmol; zvýše

-20CZ 298487 B6 popsaného kroku (iv)). Velmi rychlou chromatografíi (Si gel; nejprve EtOAc a toluen (3 : 2), potom EtOAc) se získalo 90 mg (18 %) sloučeniny.

‘H-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 7,82 (d, 2 H), 7,5 - 7,2 (m, 7 H), 6,63 (t, X část ABX systému, NH), 5,21 (s, 2 H), 5,14 (d, 1 H), 4,46 (ABX systém, 2 H), 4,26 (zřejmý s, 1 H), 3,61 (bd, 1 H), 3,52 (bd, 1 H), 3,06 (dt, 1 H), 2,30 (bd, 1 H), 1,92 - 1,0 (m, 14 H), 0,95 - 0,8 (m, 1 H).

¹³C-NMR (75 MHz; CDC1₃) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 174,8, 170,3, 167,8 a 164,6.

(vi) Ch-(R)CH(OH)-C(O)-Pic-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (v) z Ch-(R)CH(OH)C(O)-Pic-Pab(Z) (59 mg; 0,11 mmol; zvýše popsaného kroku (v)) za zisku 19 mg (40 %). FAB-MSm/z401 (M+ 1)⁺.

’Η-NMR (300 MHz; D₂O), spektrum je komplikováno v důsledku rotamerů: δ 7,91- 7,72 (m, majoritní a minoritní rotamer, 2 H), 7,58 (d, minoritní rotamer, 2 H), 7,53 (d, majoritní rotamer, 2 H), 5,17 (zřejmý bs, majoritní rotamer, 1 H), 4,66 - 4,28 (m, 3H), 3,96 (bd, majoritní rotamer, 1 H), 3,26 (bt, majoritní rotamer, 1 H), 3,05 - 2,88 (m, minoritní rotamer, 1 H), 2,39 - 2,20 (m, 1 H), 2,0 - 0,75 (m, 16 H).

¹³C-NMR (75 MHz; MeOD) uhlíky amidinu a karbonylu na δ 175,86, 173,20, 168,53.

Příklad 12

Ch-CH₂-(R)CH(OH)-C(O)-Pic-Pab x HC1 (i) Ch-CH₂-(R)CH(OH)-C(O)H

Roztok fenylmléčné kyseliny (2,57 g) a rhodia na oxidu hlinitém (alumině) (0,75 g) v MeOH (170 ml) byl hydrogenován vH₂ atmosféře při tlaku 3 atmosfér během 2 dnů. Směs byla filtrována přes prostředek hyflo a odpařena dosucha. Dostal se produkt v kvantitativním výtěžku.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 4,23 (bdd, 1 H), 3,24 (zřejmě s, OH), 1,68 (bd, 1 H), 1,63 - 1,43 (m, 6 H), 1,43-1,31 (m, 1 H), 1,21 - 1,0 (m, 3 H), 0,95 - 0,75 (m, 2 H; 157 mg (0,91 mmol)).

(ii) Ch-CH₂-(R)CH(OH)-C(O)-Pic-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (iv) z H-Pic-Pab(Z) x 2 HC1 (353 mg; 0,76 mmol; viz příklad 11 (iii) popsaný výše) a Ch-CH₂-(R)CH(OH)-COOH (157 mg; 0,91 mmol; zvýše popsaného kroku (i). Produkt byl velmi rychle chromatografován (Si gel; EtOAc a toluen (7:3)), výtěžek činí 92 mg (22 %).

^]H-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 7,72 (d, 2 H), 7,46 - 7,1 (m, 7 H), 6,90 (t, NH), 5,18 (s, 2 H), 5,07 (d, 1 H), 4,45 (bd, 1 H), 4,37 (d, 2 H), 3,73 - 3,47 (m, 2 H), 3,10 (bt, 1 H), 2,24 (bd, 1 H), 2,15- 2,0 (m, 1 Η), 1,90 (bd, 1 Η), 1,80 - 1,05 (m, 12 Η), 1,05 - 0,75 (m, 3H).

¹³C-NMR (75 MHz; CDC1₃) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 175,88, 170,43, 168,04 a 164,58.

(iii) Ch-CH₂-(R)CH(OH)-C(O)-Pic-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (v) výše z Ch-CH₂(R)CH(OH)-C(O)-Pic-Pab(Z) (62 mg; 0,113 mmol; zvýše popsaného kroku (ii)) s výtěžkem 47 mg (92 %).

FAB-MS m/z 415 (M + 1)⁺.

'H-NMR (300 MHz; D₂O) spektrum je komplikováno v důsledku rotamerů: δ 7,85 - 7,71 (m, majoritní a minoritní rotamer, 2 H), 7,56 (d, minoritní rotamer, 2 H), 7,50 (d, majoritní rotamer, 2 H), 5,12 (zřejmě bs, majoritní rotamer, 1 H), 4,68 - 4,25 (m, 3 H, částečně skrytý HDO), 3,80 (bd, majoritní rotamer 1 H), 2,24 (bt, majoritní rotamer 1 H), 2,89 (bt, minoritní rotamer, 1 H), 2,25 (m, 1 H), 1,92 - 0,82 (m, 17 H), 0,60 - 0,40 (m, majoritní rotamer, 1 H).

-21 CZ 298487 B6 ¹³C-NMR (75 MHz; D₂O) uhlíky amidinu a karbonylu (rotamery): δ 177,10, 173,88, 173,07,

167,24.

Příklad 13

Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-Pab x HC1 (i) H-Aze-OMe x HC1

MeOH (200 ml) byl ochlazen na -40 °C v argonové atmosféře. Thionylchlorid (47,1 g; 0,396 mol) byl přikapán a reakční směs byla míchána při -10 °C po dobu 35 minut. Byl přidán H-Aze-OH (10,0 g; 0,099 mol) a směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se částečně odpařila za zisku 16,1 g (100 %) titulní sloučeniny.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 5,12- 5,24 (m, 1 H), 4,08- 4,29 (m, 2 H), 3,84 (s, 3 H), 2,65-2,87 (m, 2H).

(ii) Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-Ome

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (ii) z R(-)-amethoxyfenyloctové kyseliny (0,60 g; 3,6 mmol) a H-Aze-OMe x HC1 (0,55 g; 3,6 mmol, z výše popsaného kroku (i)) za zisku 0,32 g (34 %).

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,29 - 7,48 (m, 5 H), 4,71 - 5,08 (m, 2 H), 3,92 - 4,31 (m, 2 H), 3,69 - 3,83 (m, 3 H), 3,19 - 3,46 (m, 3 H), 2,13 - 2,65 (m, 2 H).

(iii) Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-OH

Do roztoku Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-OMe (0,32 g; 1,2 mmol; zvýše popsaného kroku (ii)) v THF (10 ml) byl přidán roztok monohydrátu hydroxidu lithného (0,071 g; 1,7 mmol) ve vodě (6 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 3 hodiny a následně se odpařila. Odparek byl rozpuštěn ve vodě a extrahován toluenem. Hodnota pH vodné vrstvy byla nastavena na 3 pomocí vodné HC1 a následně byla (čtyřikrát) provedena extrakce ethylacetátem. Spojená organická vrstva se odpařila za zisku 0,28 g (92 %) sloučeniny uvedené v nadpisu.

'H-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 7,30 - 7,50 (m, 5 H), 4,95 - 5,10 (m, 1 H), 4,80 (s, 1 H), 4,10 - 4,35 (m, 2 H), 3,40 (s, 3 H), 2,40 - 2,80 (m, 2 H).

(iv) Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (ii) z H-Pab(Z) x HC1 (0,36 g; 1,0 mmol) a Ph-CH(OMe)-C(O)-Aze-OH (0,25 g; 1,0 mmol; z výše popsaného kroku (iii)) za zisku 0,39 g (76 %) bílého prášku.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 8,29 (m, 1 H), 7,77 (d, 2 H), 7,45 (d, 2 H), 7,4 - 7,2 (m, 10 H),

5,22 (s, 2 H), 4,93 (m, 1 H), 4,69 (s, 1 H), 4,44 (m, 2 H), 4,15 (m, 2 H), 3,35 (s, 3 H), 2,69 (m, 1 H), 2,42 (m, 1 H).

(v) Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (v) ze Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,15 g; 0,29 mmol; zvýše popsaného kroku (iv)) za zisku 50,4 mg (41 %) bílého prášku.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD; α-vodík z Aze a vodík benzylu z mandelátu byly nejasné kvůli signálu CD₃OH): δ 7,8 - 7,6 (m, 2 H), 7,6 - 7,4 (m, 2 H), 7,4 - 7,1 (m, 5 H), 4,6 - 4,4 (m, 2 H), 4,3 - 4,0 (m, 2 H), 3,29 (s, 3 H), 2,7 - 2,5 (m, 1 H), 2,4 - 2,1 (m, 1 H).

-22CZ 298487 B6

Příklad 14

Ph(3-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1 (i) Ph(3-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 3 (ii) z (R,S)-3methoxymandlové kyseliny (270 mg, 1,5 mmol) za zisku 340 mg (43 %); diastereomemí poměr 1:1.

FAB-MSm/z531 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 8,14 (m, 1 H, diastereomer), 7,87 (m, 1 H, diastereomer), 7,8 - 7,0 (m, 10 H), 6,9 - 6,7 (m, 3 H), 5,16 (s, 2 H), 4,96 (s, 1 H, diastereomer), 4,88 (s, 1 H, diastereomer), 4,85- 4,7 (m, 1 H), 4,4- 4,2 (m, 2 H), 4,05 - 3,9 (m, 1 H), 3,71 (s, 3 H, diastereomer), 3,71 (m, 1 H, diastereomer), 3,66 (s, 3 H, diastereomer), 3,58 (m, 1 H, diastereomer), 2,5 - 2,35 (m, 1 H), 2,32 (m, 1 H, diastereomer), 2,20 (m, 1 H, diastereomer).

¹³C-NMR (100 MHz; CDC1₃) uhlíky amidinu a karbonylu (diastereomery): δ 173,9, 173,0, 170,5, 170,4, 168,3, 168,2, 164,5.

(ii) Ph(3-OMeHR,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (v) ze Ph-(3-OMe)(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (230 mg; 0,43 mmol; z výše popsaného kroku (i)) za zisku 126 mg (67 %) produktu. Diastereomemí poměr je 1:1.

FAB-MS m/z 397 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů a určitých nečistot): δ 7,6 - 7,1 (m, 5 H), 6,9 - 6,6 (m, 3 H ), 5,2 - 4,7 (m, 1-2 H), 4,4 - 3,7 (m, 4-5 H), 3,63 (s, 3 H, diastereomer/rotamer), 3,55 (m, 3 H, diastereomer/rotamer), 2,5 - 2,3 (m, 1 H), 2,2-2,0 (m, 1 H).

¹³C-NMR (75 MHz; D₂O) uhlíky amidinu a karbonylu (diastereomery/rotamery): δ 175,8, 175,4, 174,8, 174,6, 168,5.

Příklad 15

Ph(3-Me)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-Methylmandlová kyselina

Směs 3-methylbenzaldehydu (12,0 g; 0,1 mol) a benzyltriethylamoniumchloridu (1,23 g; 0,005 mol) v CHC1₃ byla míchána při 56 °C. Roztok NaOH (25 g) v H₂O (25 ml) byl přikapán do směsi. Když bylo přidávání ukončeno, reakční směs byla míchána po dobu 1 h. Reakční směs byla zředěna vodou (aby se dostalo 400 ml) a extrahována diethyletherem (3x50 ml). Hodnota pH směsi byla upravena na 1 pomocí H₂SO₄ (konc.) s následující extrakcí diethyletherem (6 x 50 mi). Spojené organické vrstvy byly vysušeny (MgSO₄) a odpařeny. Surový produkt (11,6 g) byl rekrystalizován z toluenu za zisku 8,47 g (51 %) sloučeniny pojmenované v nadpisu.

LC-MS m/z 165 (Μ - 1), 331 (2M - 1)'.

‘H-NMR (600 MHz; CD₃OD): δ 7,10 - 7,28 (m, 4 H), 5,08 (s, 1 H), 2,32 (s, 3 H).

(ii) Ph(3-Me)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 3 (ii) z (R,S)-3methylmandlové kyseliny (0,22 g; 1,3 mmol; z výše popsaného kroku (i)) za zisku 0,37 g (54 %).

LC-MS m/z 515 (M + 1)⁺.

‘H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 8,11 - 8,21 (t, NH), 6,97 - 7,89 (m, 13 H), 5,18 - 5,24 (m, 2 H), 4,83 - 5,00 (m, 2 H), 4,37 - 4,58 (m, 2 H), 3,50 - 4,11 (m, 2 H), 2,39 - 2,71 (m, 2 H), 2,27 - 2,38 (m, 3H).

-23CZ 298487 B6 (iii) Ph(3-Me)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab.x HOAc

Směs Ph(3-Me)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,105 g; 0,20 mmol; z výše popsaného kroku (ii)), octové kyseliny (0,012 g, 0,20 mmol) a Pd/C (5 %, 0,14 g) v ethanolu (12 ml) byl hydrogenován při atmosférickém tlaku během 6 hodin. Reakění směs byla filtrována a filtrát byl odpařen. Surový produkt (97 mg) byl rozpuštěn ve vodě vysušen mrazen na lepkavý produkt. Tento produkt byl rozpuštěn v HOAc a znovu vysušen mrazem bez jakéhokoli zhodnocení. Produkt byl rozpuštěn ve vodě, filtrován přes HPLC-filtr a byl vysušen vymrazením. Získalo se 67 mg (76 %) sloučeniny popsané v nadpisu.

LC-MS m/z 381 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 6,89 - 7,72 (m, 8 H), 4,79 - 5,23 (m, 2 H), 3,76 - 4,51 (m, 4 H),

2,38 - 2,82 (m, 2 H), 2,15 - 2,27 (m, 3 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu akarbonylu: δ 181,21, 175,43, 174,38, 173,94, 173,23, 173,06, 172,16, 167,00.

Příklad 16

Ph-(3-OEt)-(R,S)CH(OH-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-Ethoxymandlová kyselina (R,S)-3-Hydroxymandlová kyselina (0,712 g; 4,236 mmol) byla rozpuštěna v acetonitrilu (15 ml). K₂CO₃ (2,34 g, 16,94 mmol) byl přidán a ethyljodid (1,03 ml, 12,71 mmol) byl přikapán. Reakční směs byla pod refluxem 2 hodiny a následně se odpařila. Odparek byl rozpuštěn ve vodě (25 ml) a acetonu (6 ml) a směs pak byla míchána při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. Reakční směs byla odpařena a výsledná vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem. Hodnota pH vodné vrstvy byla nastavena na 2 pomocí vodného KHSO₄ a přidáním většího množství vody k rozpuštění vytvořených solí. Vodný roztok byl extrahován ethylacetátem (třikrát). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou, vysušeny (Na₂SO₄) a odpařeny. Odparek byl podroben preparativní RPLC (25 % acetonitrilu : 75 % 0,lM HOAc) a frakce obsahující produkt byly odpařeny. Výsledná vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem (třikrát) a spojené organické vrstvy byly promyty vodou, vysušeny (Na₂SO₄) a odpařeny. Získalo se 182 mg (22 %) sloučeniny popsané v podtitulku.

LC-MS m/z 195 (Μ - 1)“, 391 (2M - 1), 587 (3M - 1)“.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 6,80- 7,27 (m, 4 H), 5,08 (s, 1 H), 3,99 - 4,13 (m, 2 H), 1,34- 1,40 (t, 3 H).

(ii) Ph-(3-OEt)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 3 (ii) z (R,S)-3ethoxymandlové kyseliny (0,178 g; 0,907 mmol; zvýše popsaného kroku (i)) za zisku 259 mg (52 %).

LC-MS m/z 545 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 6,77 - 7,77 (m, 13 H), 5,16 - 5,21 (d, 2 H), 4,78 - 4,99 (m, 2 H), 4,27-4,51 (m, 2 H), 3,53 - 4,07 (m, 4H), 2,21 - 2,60 (m, 2 H), 1,29-1,41 (m, 3 H).

(iii) Ph-(3-OEt)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 15 (iii) popsaného výše ze Ph-(3-OEt)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,182 g; 0,33 mmol; zvýše popsaného kroku (ii)) za zisku 157 mg (100 %) produktu.

LC-MS m/z 411 (M+ 1)⁺.

-24CZ 298487 B6 'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,71 - 7,79 (m, 2 H), 7,49 - 7,60 (m, 2 H), 7,19- 7,30 (m, 1 H), 6,94 - 7,02 (m, 2 H), 6,81 - 6,90 (m, 1 H), 5,09 - 5,18 (m, 1 H), 4,74 - 4,81 (m, 1 H),

4,39 - 4,62 (m, 2 H), 3,93 - 4,35 (m, 4 H), 2,10 - 2,61 (m, 2 H), 1,32 - 1,40 (m, 3 H).

¹³C-NMR (100,6 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 180,68, 174,30, 173,50, 173,07, 172,44, 172,26.

Příklad 17

Ph-(3-OPr(n))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-Allyloxymandlová kyselina (R,S)-3-Hydroxymandlová kyselina (0,504 g; 3,0 mmol) byla rozpuštěna v suchém acetonu (25 ml) v dusíkové atmosféře. Byl přidán allylbromid (0,007 g; 7,5 mmol) a suchý K₂CO₃ (1,037 g; 7,5 mmol). Reakční směs byla poté míchána v dusíkové atmosféře po dobu 16 hodin. Reakční směs se potom odpařila. Odparek byl rozpuštěn ve vodě (25 ml) a acetonu (6 ml) a směs byla po 2 hodiny míchána (reakce byla sledována pomocí HPLC). Směs se odpařila a vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem. Hodnota pH vodné vrstvy byla nastavena na 2 pomocí vodného KHSO4 a extrahována ethylacetátem (třikrát). Spojené organické vrstvy byly promyty vodou, vysušeny (Na₂SO₄) a odpařeny, aby se dostalo 0,175 g (28 %) sloučeniny popsané v podtitulku.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 6,87 - 7,30 (m, 4 H), 5,97 - 6,10 (m, 1 H), 5,26 - 5,44 (m, 2 H), 5,20 (s, 1 H), 4,51 -4,55(d,2H).

(ii) Ph-(3-OCH₂CH=CH₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 3 (ii) z (R,S)-3-allyloxymandlové kyseliny (0,167 g; 0,8 mmol; zvýše popsaného kroku (i)) za zisku 260 mg (58 %).

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 8,09 - 8,17 (t, NH), 6,79 - 7,87 (m, 13 H), 5,94 - 6,09 (m, 1 H), 5,20 - 5,44 (m, 4 H), 4,86 - 5,02 (m, 2 H), 4,32 - 4,62 (m, 4 H), 3,54 - 4,15 (m, 2 H), 2,30 - 2,74 (m, 2 H).

(iii) Ph-(3-OPr(n))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 15 (iii) ze Ph-(3-OCH₂CH=CH₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,06 g; 0,1 mmol; zvýše popsaného kroku (ii)) za zisku 47 mg (97 %) produktu.

LC-MS m/z 425 (M + 1)⁺, 423 (M - 1).

‘H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 6,70 - 7,71 (m, 8 H), 4,70 - 5,25 (m, 2 H), 3,78 - 4,53 (m, 6 H), 2,05 - 2,80 (m, 2 H), 1,56 - 1,75 (m, 2 H), 0,82 - 0,95 (m, 3 H).

Příklad 18

Ph-(3-OPr(iso))-(R,S)-CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-Izopropoxymandlová kyselina

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 16 (i) uvedeného výše z (R,S)-3-hydroxymandlové kyseliny (0,70 g; 4,16 mmol), Cs₂CO₃ (5,87 g; 16,65 mmol) a izopropyljodidu (1,25 ml; 12,49 mmol) za zisku 62 mg (7 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 209 (M-l)’.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 6,81 - 7,25 (m, 4 H), 5,08 (s, 1 H), 4,53 - 4,64 (m, 1 H), 1,28- 1,32 (d, 6 H).

-25CZ 298487 B6 (ii) Ph-(3-OPr(iso))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného výše v příkladu 3 (ii) z (R,S)-3-izopropoxymandlové kyseliny (0,063 g; 0,3 mmol; z výše popsaného kroku (i)) za zisku 60 mg (34 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 559 (M+ 1)⁺.

‘H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 6,75- 7,79 (m, 13 H), 5,18- 5,24 (m, 2 H), 4,81- 4,99 (m, 2 H), 4,31 - 4,58 (m, 3 H), 3,97 - 4,15 (m, 1 H), 3,55 - 3,77 (m, 1 H), 2,24 - 2,64 (m, 2 H),

1,23 - 1,33 (m, 6 H).

(iii) Ph-(3-OPr(iso))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph(3-OPr(iso))-(R,S)CH(OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,05 g; 0,090 mmol; zvýše popsaného kroku (ii)) za zisku 41 mg (94 %) produktu.

LC-MS m/z 425 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 6,81 - 7,80 (m, 8 H), 5,08 - 5,18 (m, 1 H), 4,74 - 4,80 (m, 1 H), 4,53-4,64 (m,2H), 4,41-4,51 (m, 1 H), 3,93 - 4,35 (m, 2 H), 2,23-2,60 (m, 2 H), 1,25-1,32 (m, 6 H).

¹³C-NMR (100,6 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 181,10, 173,60, 173,15, 172,48, 166,39.

Příklad 19

Ph(2-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph-(2-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-2-methoxymandlové kyseliny (0,18 g; 1,0 mmol) za zisku 80 mg (17 %) sloučeniny.

‘H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 8,16 - 8,22, (t, NH), 6,81 - 7,85 (m, 13 H), 5,16 - 5,20 (m, 2 H), 4,79 - 4,91 (m, 1 H), 4,35 - 4,49 (m, 2 H), 3,84 - 4,02 (m, 2 H), 3,63 - 3,80 (m, 3 H), 3,32 - 3,56 (m, 1 H), 2,21 -2,57(m,2H).

(ii) Ph-(2-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph(2-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,08 g; 0,15 mmol; zvýše popsaného kroku (i)) za zisku 45 mg (71 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 397 (M + 1)⁺.

‘H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 6,83 - 7,70 (m, 8 H), 4,71 - 4,97 (m, 1 H), 4,34 - 4,51 (m, 2 H), 3,87 - 4,22 (m, 3 H), 3,67 - 3,75 (m, 3 H), 2,00 - 2,74 (m, 2 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 179,96, 176,28, 174,97, 174,50, 173,44, 173,39, 173,29, 173,10, 167,12.

Příklad 20

Ph(3,5-diOMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph(3,5-diOMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného ve výše popsaném příkladu 3 (ii) z (R,S)-3,5-dimethoxymandlové kyseliny (0,21 g; 1,0 mmol; připravena podle způsobu popsaného v Synthesis (1974) 724) za zisku 0,31 g (62 %).

-26CZ 298487 B6

Ή-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 8,11 - 8,16 (t, NH), 7,17 - 7,86 (m, 9 H), 6,41 - 6,49 (m, 3 H),

5,21 - 5,24 (d, 2 H), 4,84 - 5,03 (m, 2 H), 4,29 - 4,66 (m, 2 H), 3,67 - 4,17 (m, 8 H), 2,32 - 2,72 (m, 2 H).

(ii) Ph(3,5-diOMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph(3,5-diOMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,15 g; 0,27 mmol; zvýše popsaného kroku (i)) za zisku 120 mg (100 %) sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz; D_2a0): δ 7,34 - 7,75 (m, 4 H), 6,44 - 6,66 (m, 3 H), 4,67 - 5,12 (m, 1 H), 3,97 - 4,55 (m, 5 H), 3,79 (s, 3 H), 3,71 - 3,74 (m, 3 H), 2,14 - 2,85 (m, 2 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotameru) uhlíky amidinu akarbonylu: δ 181,17, 174,85, 173,92, 173,53, 173,09, 172,98, 182,90, 166,77.

Příklad 21

Ph(3-OMe,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph(3-OMe,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného ve výše popsaném příkladu 3 (ii) z (R,S)-4-hydroxy-3-methoxymandlové kyseliny (0,20 g; 1,0 mmol) za zisku 89 mg (16 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 547 (M + 1)⁺, 545 (M - 1).

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 8,07 - 8,15 (m, NH), 6,64- 7,86 (m, 12 H), 5,20- 5,27 (m, 2 H), 3,57 - 5,00 (m, 9 H), 2,31 - 2,74 (m, 2 H).

(ii) Ph(3-OMe,4-OH>-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph(3-OMe,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,085 g; 0,16 mmol; z výše popsaného kroku (i)) za zisku 57 mg (78 %) sloučeniny.

FAB-MSm/z413 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů): δ 6,66 - 7,83 (m, 8 H), 4,80 - 5,25 (m, 2 H), 3,88 - 4,59 (m, 4 H), 3,68 - 3,88 (m, 3 H), 2,10 - 2,85 (m, 2 H).

¹³C NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu akarbonylu: δ 182,01, 175,56, 174,43, 174,04, 173,20, 173,05, 166,90, 166,85.

Příklad 22

Ph(2-F,5-CF₃)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph(2-F,5-CF₃)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného ve výše popsaném příkladu 3 (ii) z (R,S)-2-fluor-5-trifluormethylmandlové kyseliny (0,3 g; 1,2 mmol; připravena podle způsobu popsaného v Org. Synth. Coll. 1, 336) za zisku 0,32 g (51 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 587 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,15- 7,87 (m, 12 H), 5,19-5,30 (m, 2 H), 4,87- 5,00 (m, 1 H), 4,36 - 4,60 (m, 3 H), 4,05 - 4,20 (m, 1 H), 3,60 - 3,73 (m, 1 H), 2,32 - 2,72 (m, 2 H).

-27CZ 298487 B6 (ii) Ph(2-F,5-CF₃)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph(2-F,5-CF₃)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,15 g; 0,26 mmol; zvýše popsaného kroku (i)) za zisku 110 mg (90 %) produktu.

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,28 - 7,83 (m, 7 H), 5,43 - 5,65 (m, 1 H), 4,82 - 5,18 (m, 1 H), 3,97 - 4,56 (m, 4 H), 2,14 - 2,85 (m, 2 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu akarbonylu: δ 174,61, 173,33, 173,06, 172,83, 172,68, 172,62, 166,86, 164,27, 161,15, 160,92.

Příklad 23

Ph-(R,S)C(Et)(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph-(R,S)C(Et)(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-2-hydroxy-2-fenylbutanové kyseliny (0,18 g; 1,0 mmol) za zisku 79 mg (15 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 529 (Μ + 1)⁺, 527 (Μ - 1)’.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,27- 7,86 (m, 14 H), 5,22 (s, 2 H), 4,82 - 4,93 (m, 1 H),

4.39 - 4,57 (m, 2 H), 3,84 - 3,98 (m, 2 H), 2,02 - 2,64 (m, 4 H), 0,86 - 0,93 (m, 3 H).

(ii) Ph-(R,S)C(Et)(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph-(R,S)C(Et)(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,08 g; 0,15 mmol; zvýše zmíněného kroku (i)) za vzniku 62 mg (90 %) sloučeniny popsané v nadpisu.

FAB-MS m/z 395 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,27 - 7,84 (m, 9 H), 4,83 - 5,35 (m, 1 H), 3,89 - 4,60 (m, 4 H),

2.40 - 2,61 (m, 1 H), 1,95 - 2,30 (m, 3 H), 0,78 - 0,95 (m, 3 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu akarbonylu: δ 182,09, 175,79, 175,48, 173,53, 173,23, 167,05.

Příklad 24

Ph-(R,S)C(Me)(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph-(R,S)C(Me)(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (S)-(+)-2-hydroxy-2-fenylpropionové kyseliny (0,20 g; 1,2 mmol) za vzniku 0,17 g (31 %).

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 8,04- 8,14 (t, NH), 7,17- 7,80 (m, 14 H), 5,20 (s, 2 H), 4,76- 4,86 (m, 1 H), 4,31 - 4,50 (m, 2 H), 3,76- 3,94 (m, 2 H), 2,19-2,44 (m, 2 H), 1,70 (s, 3 H).

(ii) Ph-(R,S)C(Me)(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph-(R,S)C(Me)(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,08 g; 0,16 mmol; zvýše zmíněného kroku (i)) za zisku 48 mg (78 %) sloučeniny, diastereomemí poměr: 85 : 15.

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,30 - 7,79 (m, 9 H), 3,99 -4,82 (m, 5 H), 2,09 - 2,74 (m, 2 H), 1,70- 1,77 (m, 3 H).

-28CZ 298487 B6 ¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku rotamerů) uhličitany amidinů a karbonylů:

δ 176,90, 176,34, 173,89, 173,48, 167,00.

Příklad 25

-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pac x HOAc (i) Boc-Aze-OSu

Směs Boc-Aze-OH (5 g; 25 mmol) a HOSu (2,88 g; 25 mmol) v 25 ml THF byla ochlazena na ledovém loži. Byl přidán EDC (4,3 ml, 25 mmol) a roztok byl míchán přes noc. Roztok byl odpařen, rozpuštěn v ethylacetátu, promyt KHSO₄ (aq, 0,3 M), Na₂CO₃ (aq, 10 %), vysušen (MgSO₄) a odpařen. Krystalizace z ethylacetátu a petroletheru poskytla 3,78 g (51 %) sloučeniny popsané v podtitulku.

’Η-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 4,89 (m, 1 H), 4,07 (m, 1 H), 3,95 (m, 1 H), 2,85 (s, 4 H), 2,67 (m, 1 H), 2,45 (m, 1 H), 1,42 (s, 9 H).

(ii) Boc-Aze-Pac(Z)

Směs H-Pac(Z) x 2 HC1 (0,227 g, 0,63 mmol), Boc-Aze-OSu (0,194 g, 0,65 mmol) a triethylaminu (0,2 ml, 1,4 mmol) v 10 ml THF byla míchána při teplotě místnosti po dobu 18 hodin. Po odpaření byl odparek rozpuštěn v ethylacetátu, filtrován přes vrstvu Celíte a byl chromatografován na sloupci silikagelu s ethylacetátem a THF (2 : 1). Eluent byl odpařen, rozpuštěn v ethylacetátu, promyt vodou, vysušen (MgSO₄) a odpařen za zisku 0,250 g (81 %) sloučeniny pojmenované v podtitulu.

'H-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,4 - 7,2 (m, 5H), 5,05 (s, 2H), 4,55 (bt, 1 H), 3,85 (bq, 1 H), 3,72 (bq, 1 H), 3,2 - 3,0 (m, 2 H), 2,4 - 2,2 (m, 2 H), 2,10 (m, 1 H), 1,9 - 1,7 (m, 4 H), 1,5-1,3 (m, 11 H, z něho při 1,37 je 9 H), 1,0 - 0,8 (m, 2H).

(iii) H-Aze-Pac(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 3 (i) z Boc-Aze-Pac(Z) (z výše zmíněného kroku (ii)) a následným zpracováním alkalickou extrakcí.

(iv) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Aze-Pac(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky jako při způsobu popsaném ve výše uvedeném příkladu 1 (ii) ze Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)OH (0,236 g, 0,89 mmol, připraven jak popsal Hamada a kol., J. Am. Chem. Soc 111, 669 (1989)) a H-Aze-Pac(Z) (0,25 g; 0,53 mmol; z výše popsaného kroku (iii)); předchozí aktivace byla provedena mícháním v CH₂C1₂ a trifluoroctové kyselině (1 : 1; 10 ml) během 30 minut) za zisku 160 mg (48 %) sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 7,20- 7,44 (m, 10 H), 5,22 (s, 1 H), 5,06 - 5,16 (m, 2 H), 4,80-4,90 (m, 1 H), 3,92-4,43 (m, 2 H), 2,88 - 3,12 (m, 2 H), 2,35-2,60 (m, 2 H), 1,25-2,10 (m, 10 H), 0,84 - 0,94 (m, 9 H), 0,00 - 0,15 (m, 6 H).

(v) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pac x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 15 (iii) ze Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Aze-Pac(Z) (0,16 g; 0,25 mmol; zvýše zmíněného kroku (iv)) s čištěním pomocí RPLC, za vzniku 15 mg (14 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 373 (M + 1)⁺.

Příklad 26

Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pig x HOAc

-29CZ 298487 B6 (i) Boc-Aze-Pig(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky jako při způsobu popsaném v příkladu 1 (ii) z Boc-Aze-OH (1,03 g; 5,12 mmol; viz výše zmíněný příklad 1 (i)) a H-Pig(Z) x 2 HC1 (1,86 g, 5,12 mmol; připraven podle způsobu popsaného v dokumentu WO 94/29336) za zisku

1.24 g (51%).

‘H-NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,27 - 7,43 (m, 5 H), 5,12 (s, 2 H), 4,60- 4,67 (t, 1 H), 4,16 - 4,26 (d, 2 H), 3,86 - 3,95 (m, 1 H), 3,74 - 3,82 (m, 1 H), 3,11 - 3,30 (m, 2 H), 2,78 - 2,89 (m, 2 H), 2,33-2,52 (bs, 2 H), 1,71 - 1,83 (m, 3 H), 1,44 (s, 9 H), 1,15 - 1,29 (m, 2 H).

(ii) H-Aze-Pig(Z) x 2 HC1

Boc-Aze-Pig (Z) (1,2 g; 2,53 mmol; z výše zmíněného kroku (i)) v ethylacetátu nasyceném HC1 (75 ml) byl míchán při teplotě místnosti po dobu 1 hodinu. Reakční směs byla odpařena, zředěna vodou a extrahována toluenem. Vodná vrstva byla vysušena vymrazením za zisku 1,085 g (96 %) sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 7,32 - 7,46 (m, 5 H), 5,28 (s, 2 H), 4,99 - 5,05 (t, 1 H), 4,08 - 4,16 (m, 1 H), 3,91 - 3,99 (m, 3 H), 3,13 - 3,25 (m, 4 H), 2,79 - 2,88 (m, 1 H), 2,47 - 2,57 (m, 1 H), 1,82 - 1,96 (m, 3 H), 1,26 - 1,40 (m, 2 H).

(iii) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Aze-Pig(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky ke způsobu popsanému ve výše zmíněném příkladu 25 (iv) ze Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)OH (0,401 g; 1,5 mmol) a H-Aze-Pig(Z) x 2 HC1 (0,672 g; 1,5 mmol; z výše zmíněného kroku (iii) za zisku 350 mg (46 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 508 (Μ + 1)⁺, 530 (M + Na)⁺.

(iv) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pig x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Aze-Pig(Z) (0,1 g; 0,197 mmol; zvýše zmíněného kroku (iii)) za zisku 81 mg (95 %) sloučeniny jmenované v nadpisu.

LC-MS m/z 374 (M+ 1)⁺.

‘H-NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7,25- 7,50 (m, 5 H), 5,15 (s, 1 H), 4,65- 4,75 (m, 1 H),

4.25 - 4,35 (m, 1 H), 3,80 - 4,00 (m, 3 H), 2,95 - 3,50 (m, 4 H), 2,05 - 2,50 (m, 2 Η), 1,75 - 1,90 (m, 3 H), 1,15 - 1,30 (m, 2 H).

Příklad 27

Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-(R,S)Hig x HOAc (i) H-(R,S)Hig(Z) x 2 HC1

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 3 (i) z Boc-(R,S)Hig(Z) (připraven podle způsobu popsaného v dokumentu WO 94/29336).

(ii) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Pro-Obn

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného v příkladu 1 (ii) z hydrochloridu benzylesteru L-prolinu (2,0 g, 8,26 mmol) a Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)OH (2,0 g, 7,51 mmol, připraven podle způsobu, který popsal Hamada a kol. v J. Am. Chem. Soc. 111, 669 (1989)) za zisku 2,0 g (59 %) sloučeniny.

‘H-NMR (500 MHz, CDC1₃) δ 7,22 - 7,55 (m, 10 H), 5,45 (s, 1 H), 5,15 (s, 2 H), 4,45 - 4,55 (m, 1 H), 3,70-3,82 (m, 1 H), 3,05-3,15 (m, 1 H), 1,65-2,15 (m, 4 H), 0,85- 1,05 (m, 9 H), 0,00 - 0,22 (m, 6 H).

-30CZ 298487 B6 (iii) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Pro-OH

Směs Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Pro-OBn (1,9 g, 4,19 mmol, zvýše zmíněného kroku (ii)) a Pd/C (10%, 0,21 g) v ethanolu (80 ml) bylo hydrogenováno při atmosférickém tlaku po dobu 3 hodin. Reakční směs byla filtrována přes Celíte a filtrát byl odpařen. Získalo se 1,36 g (91 %) sloučeniny popsané v nadpisu.

LC-MS m/z 362 (M-l)’.

'H-NMR (500 MHz; CD₃OD): δ 7,20 - 7,50 (m, 5 H), 5,45 (s, 1 H), 4,30 - 4,40 (m, 1 H),

3,30 - 3,70 (m, 2 H), 1,75 - 2,30 (m, 4 H), 0,85 - 1,00 (m, 9 H), 0,00 - 0,20 (m, 6 H).

(iv) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky jako při způsobu popsaném ve výše zmíněném příkladu 25 (iv) ze Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Pro-OH (0,36 g, 1 mmol; z výše uvedeného kroku (iii)) a H-(R,S)Hig (Z) x 2 HC1 (0,36 g, 1 mmol; z výše uvedeného kroku (i)) za zisku 0,63 g surového produktu, který byl použit bez dalšího čistění v následujícím kroku.

LC-MS m/z 636 (M + 1)⁺.

¹³C-NMR (100,5 MHz; CDC1₃) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 171,57, 171,20, 163,79, 159,22.

(v) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-(R,S)-Hig(Z)

Směs Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Pro-(R,S)Hig(Z) (0,63 g; 1 mmol; z výše zmíněného kroku (iv)) a TFA 10 ml, 20% v CH2CI2) byla míchána při teplotě místnosti po dobu 3 hodin. pH reakční směsi bylo nastaveno na 9 vodným K₂CO₃ a reakční směs byla následně extrahována pomocí CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy byly vysušeny (Na₂SO₄) a odpařeny. Surový produkt byl čištěn velmi rychlou chromatografií v koloně se silikagelem (40 g), eluován pomocí CH₂C1₂ (100 ml), CH₂C1₂ a EtOH (95 : 5, 100 ml) a CH₂C1₂ a EtOH (9:1; 300 ml). Získalo se 138 mg (26 %) sloučeniny pojmenované v nadpisu.

LC-MS m/z 522 (M + 1)⁺.

¹³C-NMR (100,5 MHz; CDC1₃) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 172,21, 171,20, 163,64, 159,11.

(vi) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-(R,S)Hig x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 15 (iii) ze Ph-(R)CH(OH)-C(0)-Pro-(R,S)Hig(Z) (0,071 g; 0,14 mmol; z výše uvedeného kroku (v)) za zisku 49 mg (80 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 388 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů): δ 7,32 - 7,56 (m, 5 H), 5,37 - 5,52 (m, 1 H ), 4,32 - 4,64 (m, 1 H), 3,57 - 3,75 (m, 2 H ), 3,24 - 3,56 (m, 4 H), 2,89 - 3,15 (m, 2 H), 1,25 - 2,80 (m, 9 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu; 181,92, 174,92, 173,69, 173,03.

Příklad 28

Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Dig x HOAc (i) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Pro-Dig(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky jako při způsobu popsaném ve výše uvedeném příkladu 25 (iv) zH-Dig(Z) (0,14 g; 0,507 mmol; viz dokument WO 94/29336) a Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-Pro-OH (0,23 g; 0,0608 mmol; viz výše popsaný příkladu 27 (iii)) za zisku 316 mg surového produktu, který se použije bez dalšího čištění v následujícím kroku.

-31 CZ 298487 B6

LC-MS m/z 622 (M + 1)⁺.

(ii) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Dig(Z)

Trifluoroctová kyselina (6 ml; 20% v CH2CI2) byla přidána k Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-ProDig(Z) (0,315 g; 0,506 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) při 0 °C a směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. pH reakční směsi bylo nastaveno na 8 pomocí vodného K₂CO₃ a reakční směs byla extrahována pomocí CH₂C1₂. Organická vrstva byla promyta vodným NaCl, vysušena (Na₂SO4) a odpařena. Surový produkt (250 mg) byl čištěn velmi rychlou chromatografíí na sloupci silikagelu, za použití elučního činidla CH₂C1₂ a MeOH (9 : 1) za zisku 180 mg (70 %) sloučeniny pojmenované v nadpisu.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,25- 7,39 (m, 10 H), 5,32 - 5,37 (bs, 1 H), 5,08- 5,19 (m, 2 H), 4,40 - 4,49 (m, 1 H), 4,21 - 4,35 (m, 2 H), 3,87 - 4,03 (m, 2 H), 3,71 - 3,79 (m, 2 H),

3,18 - 3,32 (m, 2 H), 3,00-3,10 (m, 1 H), 2,61 -2,73 (m, 1 H), 2,14-2,24 (m, 1 H), 1,62-2,07 (m, 8 H).

(iii) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Dig x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Dig(Z) (0,14 g; 0,276 mmol; zvýše uvedeného kroku (ii)) za zisku 112 mg (94 %) sloučeniny.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,27 - 7,44 (m, 5 H), 5,34 (s, 1 H), 4,29 - 4,35 (m, 1 H), 4,17-4,25 (m, 2 H), 3,75 - 3,83 (m, 2 H), 3,63 - 3,73 (m, 1 H), 3,25 - 3,34 (m, 1 H), 3,08-3,23 (m, 2 H), 2,79-2,90 (m, 1 H), 1,71 -2,10 (m, 6 H).

^,3C-NMR (100,6 MHz; CD₃OD) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 174,79, 173,26; 158,16.

Příklad 29

Ph-(R,S)CH(OH)-C(O)-(R nebo S)Pic(cis-4-Me)Pab x HOAc a Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(S nebo R)Pic(cis^l-Me)Pab x HOAc (i) (R,S)-N-Boc-Pic(cis-4-Me)-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky ke způsobu popsanému ve výše uvedeném příkladu 1 (ii) z (R,S)-N-Boc-Pic(cis-4-Me)-OH (0,88 g; 4,1 mmol; připraven podle způsobu, který popsal Shuman a kol., J. Org. Chem. 55, 738 (1990)) za zisku 405 mg (19 %) produktu. FAB-MS m/z 509 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,25 - 7,90 (m, 9 H), 5,20 (s, 2 H), 4,45 - 4,50 (m, 2 H),

4,30 - 4,40 (m, 1 H), 3,15 - 3,70 (m, 2 H), 1,70- 2,00 (m, 4 H), 1,45 (s, 9 H), 1,15- 1,30 (m, IH), 0,90- 1,05 (m, 3 H).

(ii) H-(R,S)Pic(cis^-Me)-Pab(Z) (R,S)-N-Boc-Pic(cis-4-Me)-Pab(Z) (0,40 g; 0,79 mmol; z výše zmíněného kroku (i) byl rozpuštěn v CH₂C1₂ (5 ml). Byla přidána trifluoroctová kyselina (5 ml) a směs byla míchána po dobu 0,5 h. Reakční směs byla odpařena a odparek byl rozpuštěn v CH₂C1₂, promyt vodným Na₂CO₃, vysušen (MgSO₄) a odpařen. Surový produkt byl čištěn velmi rychlou chromatografíí na sloupci silikagelu, za eluování CH₂C1₂ a MeOH (95 : 5) a CH₂C1₂ : MeOH (9 : 1). Výtěžek činil 300 mg (94 %) sloučeniny popsané v podtitulku.

FAB-MS m/z 409 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; CD₃OD): δ 7,25 - 7,85 (m, 9 H), 5,15 (s, 2 H), 4,35 - 4,45 (m, 2 H), 2,55 - 3,60 (m, 3 H), 1,85 - 2,05 (m, 1 H), 1,35 - 1,65 (m, 2 H), 0,90 - 1,20 (m, 5 H).

-32CZ 298487 B6 (iii) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(cis-4-Me)-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) zH-(R,S)Pic(cis-4-Me)-Pab(Z) (0,290 g; 0,71 mmol; zvýše zmíněného kroku (ii)) a Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-OH (0,189 g; 0,71 mmol; připraven metodou, kterou popsal Hamada a kol., J. Am. Chem. 111, 669 (1989)) za zisku 0,40 g surového produktu, který se použil bez dalšího čištění v následujícím kroku.

(iv) H-(R)CH(0H)-C(0)-(R,S)Pic(cis-4-Me)-Pab(Z)

Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(cis-4-Me)-Pab(Z) (0,40 g, surový produkt z kroku (iii) uvedeného výše) byl zpracováván s trifluoroctovou kyselinou (20% v CH2CI2) po dobu 3 h. Reakční směs byla odpařena a odparek byl čištěn velmi rychlou chromatografií na sloupci silikagelu při eluování CH₂C1₂ a MeOH (98 : 2, 95 : 5 a 9 : 1). Výtěžek sloučeniny pojmenované v subtitulku činil 45 mg (11 %).

(v) Ph-(R,S)CH(OH)-C(O)-(R nebo S)Pic(cis^-Me)Pab x HOAc a Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(S nebo R)Pic(cis^t-Me)Pab x HOAc

Směs Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(R,S)Pic(cis-4-Me)-Pab(Z) (0,045 g; 0,083 mmol; z výše zmíněného kroku (iv)) a Pd/C (5 %; 0,06 g) v ethanolu (8 ml) byla hydrogenována při atmosférickém tlaku po dobu 2,5 hodiny. Reakční směs byla filtrována a filtrát byl odpařen. Surový produkt byl podroben preparativní RPLC (0,lM NH4OAC; 30 % acetonitrilu), přičemž diastereomery se oddělily. Výtěžek činil 7 g sloučeniny 29A s diastereomemím poměrem vyšším než 99 : 1 a 11 mg sloučeniny 29B s diastereomemím poměrem vyšším než 98 : 2.

Sloučenina 29A:

LC-MS m/z 409 (M + 1)⁺, 407 (Μ - 1)’.

‘H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,20 - 7,80 (m, 9 H), 5,65 (s, 1 H), 4,65 - 5,35 (m, 1 H), 4,40 - 4,55 (m, 2 H), 3,85-4,00 (m, 1 H), 3,65-3,75 (m, 1 H), 2,65 - 3,15 (m, 2 H), 2,05-2,20 (m, 1 H), 1,05 - 1,75 (m, 2 H), 0,70 - 0,90 (m, 3 H).

Sloučenina 29B:

LC-MS m/z 409 (M + 1)⁺, 407 (M - 1)'.

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,25 - 7,80 (m, 9 H), 4,55 - 5,75 (m, 2 H), 4,35 - 4,50 (m, 3 H), 3,75 - 3,85 (m, 1 H), 2,70 - 2,80 (m, 1 H), 1,80 - 2,20 (m, 1 H), 0,70 - 1,70 (m, 6 H).

Příklad 30

Ph-(CH₂)₂-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1 (i) Ph-(CH₂)₂-(R(CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky ke způsobu popsanému ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z H-Aze-Pab(Z) x 2 HC1 (0,434 g; 0,988 mmol) a (R)-(-)-2-hydroxy-4-fenylmáselné kyseliny (0,162 g; 0,898 mmol), TBTU (0,433 g, 1,348 mmol) a N-methylmorfolinu (0,363 g; 3,59 mmol) v DMF (15 ml) za zisku 105 mg (22 %).

LC-MS m/z 529 (M + 1)⁺, 527 (Μ - 1)’.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 8,17- 8,25 (m, NH), 7,05 - 7,72 (m, 14 H), 5,16 - 5,22 (m, 2 H), 4,71 - 4,88 (m, 1 H), 4,32 - 4,41 (m, 2 H), 3,92 - 4,04 (m, 2 H), 3,79 - 3,88 (m, 1 H), 2,62 - 2,86 (m, 2 H), 2,29 - 2,27 (m, 2 Η), 1,80 - 1,98 (m, 2 H).

-33CZ 298487 B6 (ii) Ph-(CH₂)₂-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 1 (v) ze Ph-(CH₂)₂-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,112 g; 0,212 mmol; zvýše zmíněného kroku (i)) za vzniku 77 mg (84 %).

LC-MS m/z 395 (M + 1)⁺, 393 (M - 1)’.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,77 - 7,77 (m, 9 H), 4,73 - 5,19 (m, 1 H), 4,0 - 4,62 (m, 2 H), 3,92 - 4,34 (m, 3 H), 2,48 - 2,84 (m, 2 H), 2,09 - 2,33 (m, 1 H), 1,83 - 2,05 (m, 2 H).

¹³C NMR (100,6 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 175,66, 174,80, 172,56, 172,49, 166,14, 165,87.

Příklad 31

2-Naftyl-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-(2-Naftyl)glykolová kyselina

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 15 (i) z naftaldehydu (15,6 g; 100 mmol) za zisku 12,37 g (61 %).

LC-MS m/z 201 (M - 1)⁺, 403 (2M - 1).

'H-NMR (500 MHz; CD₃OD): δ 7,43 - 7,98 (m, 7 H), 5,29 - 5,35 (m, 1 H).

(ii) 2-Naftyl-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-(2-nafiyl)glykolové kyseliny (0,162 g; 0,8 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) za zisku 266 mg (60 %).

LC-MS m/z 551 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,18- 7,91 (m, 16 H), 4,86- 5,26 (m, 3 H), 4,05- 4,60 (m, 3 H), 3,52 - 3,78 (m, 2 H), 2,24 - 2,73 (m, 2 H).

(iii) 2-Naftyl-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) z 2-naftyl-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,266 g; 0,48 mmol; z výše zmíněného kroku (ii)) za zisku 202 mg (88 %).

LC-MS m/z 417 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; CD₃OD): δ 7,28 - 7,96 (m, 11 H), 5,30 - 5,40 (m, 1 H), 3,95 - 4,82 (m, 5 H), 2,09 - 2,59 (m, 2 H).

Příklad 32

3-Indolyl-CH₂-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) 3-Indolyl-CH₂-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-(3-indolyl)mléčné kyseliny (0,21 g; 1,0 mmol) za zisku 0,22 g (45 %).

LC-MS m/z 551 (M+ 1)⁺.

‘H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 6,57- 7,80 (m, 14 H), 5,24 (s, 2 H), 4,59- 4,83 (m, 1 H),

4,19 - 4,51 (m, 3 H), 3,69 - 3,99 (m, 2 H), 3,03 - 3,36 (m, 2 H), 2,31 - 2,56 (m, 2 H).

-34CZ 298487 B6 (ii) 3-Indolyl-CH₂-(R,S)CH(OH)-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) z 3-indolyl-CH₂-(R,S)CH(OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,11 g; 0,20 mmol; z výše zmíněného kroku (i)) za zisku 75 mg (80 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 420 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,00 - 7,75 (m, 9 H), 4,61 - 4,71 (m, 1 H), 3,74 - 4,51 (m, 5 H), 3,00 - 3,28 (m, 2 H), 1,95 - 2,42 (m, 2 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 179,38, 176,19, 175,56, 173,06, 166,78.

Příklad 33 (CH₂)₂CH-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (CH₃)₂CH-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R)-2-hydroxy-izovalerové kyseliny (0,12 g; 1,0 mmol) za zisku 68 mg (16 %) sloučeniny. LC-MSm/z551 (M + 1)⁺.

'H-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 8,25- 8,40 (t, NH), 7,15- 7,90 (m, 9 H), 5,20 (s, 2 H), 4,85 - 4,95 (m, 1 H), 4,30 - 4,55 (m, 2 H), 4,05 - 4,25 (m, 2 H), 3,75 - 3,90 (m, 1 H), 1,65 - 2,75 (m, 3 H), 0,70- 1,05 (m, 6 H).

(ii) (CH₃)₂CH-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) z (CH₃)₂CH-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,068 g; 0,15 mmol; zvýše zmíněného kroku (i)) za zisku 13 mg (23 %) sloučeniny.

'H-NMR (300 MHz; D₂O): δ 7,45 - 7,80 (m, 4 H), 4,85 - 5,25 (m, 1 H), 4,45 - 4,65 (m, 2 H),

4,30 - 4,40 (m, 1 H), 3,80 - 4,10 (m, 2 H), 2,60 - 2,80 (m, 1 H), 2,20 - 2,35 (m, 1 H), 1,90 - 2,05 (m, 1 H), 0,70- 1,00 (m, 6 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku rotamerů): 182,37, 176,34, 175,38, 173,84, 173,26, 167,16.

Příklad 34 (CH₃)₂CH-(CH₂)₂-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (CH₃)₂CH-(CH₂)₂-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobu popsaného ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-izoleucinové kyseliny (izoleucic acid; 0,12 g; 0,88 mmol) za zisku 0,15 g (36 %) sloučeniny.

'H-NMR (300 MHz; CDC1₃): δ 7,15- 7,80 (m, 9 H), 5,20 (s, 2 H), 4,85- 4,95 (m, 1 H), 4,35 - 4,55 (m, 2 H), 3,85 - 4,20 (m, 3 H), 2,40 - 2,80 (m, 2 H), 1,75-2,10 (m, 1 H), 1,20 - 1,55 (m, 2 H), 0,75- 1,00 (m, 6 H).

(ii) (CH₃)₂CH-(CH₂)₂-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) z (CH₃)₂CH-(CH₂)₂(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,13 g; 0,27 mmol; zvýše zmíněného kroku (i)) za zisku 11 mg (100 %) sloučeniny.

-35CZ 298487 B6 'H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,63 - 7,69 (m, 2 H), 7,37 - 7,46 (m, 2 H), 4,72 - 5,12 (m, 1 H),

4,40 - 4,46 (m, 2 H), 4,17 - 4,31 (m, 2 H), 3,90 - 4,02 (m, 1 H), 2,50 - 2,69 (m, 1 H), 2,11 - 2,27 (m, 1 H), 1,12 - 1,72 (m, 3 H), 0,61 - 0,85 (m, 6 H).

^I3C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu akarbonylu: 176,97, 176,80, 176,61, 176,19, 173,38, 173,28, 173,17, 173,10, 166,78, 182,02.

Příklad 35

Ph(3-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) Boc-Pro-Pab(Z) x HCI

Sloučenina z podtitulku byla připravena podle způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 1 (ii) z Boc-Pro-OH (10,2 g; 47,4 mmol) a byl přidán H-Pab(Z) x HCI (15,9 g, 49,8 mmol) za zisku 21,74 g (95,5 %) sloučeniny.

FAB-MSm/z481 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 8,0 - 7,8 (m, 2 H), 7,5 - 7,25 (m, 7 H), 5,17 (s, 2 H), 4,6 - 4,15 (m, 3 H), 3,6-3,35 (m, 2 H), 2,3 - 2,1 (m, 1 H), 2,1 - 1,8 (m, 3 H), 1,5 - 1,3 (dva široké singlety, rotamery náležící Boc, 9 H).

(ii) H-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným v příkladu 3 (i) z Boc-Pro-Pab(Z) x HCI (z výše uvedeného kroku (i)) a následně zpracováním alkalickou extrakcí.

(iii) Ph(3-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným v příkladu 3 (ii) uvedeném výše z (R,S)-3-hydroxymandlové kyseliny (0,25 g; 1,5 mmol) a H-Pro-Pab(Z) (0,63 g, 1,65 mmol; z výše uvedeného kroku (ii)) za zisku 51 mg (6 %) sloučeniny pojmenované v nadpisu.

FAB-MSm/z531 (M+ 1)⁺.

(iv) Ph(3-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI

Titulní sloučenina byla připravena podle způsobu popsaného ve výše zmíněném příkladu 1 (v) ze Ph(3-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab (Z), (0,05 g; 0,094mmol; zvýše uvedeného kroku (iii)) za zisku 30 mg (74 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 397 (M + 1)⁺.

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu akarbonylu: δ 175,36, 175,13, 172,92, 167,13.

Příklad 36

Ph(3,5-di0Me)-(R,S)CH(0H)-C(0)-Pro-Pab x HOAc (i) Ph(3,5—diOMe)—(R,S)CH(OH)—C(O)—Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-3,5-dimethoxymandlové kyseliny (0,08 g; 0,38 mmol; připravena způsobem popsaným v Synthesis (1974), 724) a H-Pro-Pab(Z) (0,16 g, 0,42 mmol) za zisku 61 mg (28 %) sloučeniny. 'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,70 - 7,80 (t, NH), 7,08 - 7,50 (m, 9 H), 6,30 - 6,50 (m, 3 H),

5,20 (s, 2 H), 5,00 - 5,10 (m, 1 H), 4,25 - 4,70 (m, 3 H), 3,60- 3,80 (m, 6 H), 3,35 - 3,55 (m, 1 H), 2,95 - 3,25 (m, 1 H), 1,70 - 2,25 (m, 4 H).

-36CZ 298487 B6 (ii) Ph(3,5-diOMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným v příkladu 15 (iii) ze Ph(3,5-diOMe)(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z); zvýše uvedeného kroku (i)) za zisku 35 mg (72 %) sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,23 - 7,80 (m, 4 H), 6,41 - 6,65 (m, 3 H), 5,35 - 5,45 (m, 1 H), 4,35 - 4,60 (m, 3 H), 3,80 (s, 3 H), 3,10 - 3,75 (m, 5 H), 1,70 - 2,35 (m, 4 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu akarbonylu: δ 175,28, 175,05, 174,03, 173,46, 172,80, 172,73, 167,11, 166,95.

Příklad 37

Ph(3-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) Ph(3-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-3-methoxymandlové kyseliny (0,27 g; 1,5 mmol) a H-Pro-Pab(Z) (0,57 g, 1,5 mmol; viz výše uvedený příklad 35 (ii)) za zisku 158 mg (20 %).

FAB-MS m/z 545 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,77 - 7,84 (m, 2 H), 7,01 - 7,48 (m, 8 H), 6,80 - 6,91 (m, 3 H),

5,20 - 5,24 (m, 2 H), 5,06 - 5,11 (m, 1 H), 4,30 - 4,72 (m, 3 H), 3,68 - 3,79 (m, 3 H), 3,38 - 3,57 (m, 1 H), 2,91 -3,17 (m, 1 H), 1,68-2,31 (m, 4 H).

(ii) Ph(3-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zařazeném příkladu 15 (iii) ze Ph(3-OMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,06 g; 0,11 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) za zisku 39 mg (75 %).

LC-MS m/z 411 (M + 1)⁺. 409 (M - 1).

'H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 6,81 -7,84 (m, 8 H), 5,47 (s, 1 H), 4,35- 4,59 (m, 3 H), 3,60 - 3,88 (m, 4 H), 3,07 - 3,29 (m, 1 H), 1,74 - 2,37 (m, 4 H).

Příklad 38

Ph(3,4-(O-CH₂-O))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph(3,4-(O-CH₂-O))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-3,4-methylendioxymandlové kyseliny (0,20 g; 1,0 mmol, připravena způsobem popsaným v Synthesis (1974), 724)) za zisku 0,22 g (44 %) sloučeniny.

'H-NMR (400 MHz; aceton-d₆): δ 6,68 - 8,12 (m, 12 H), 5,94- 6,05 (m, 2 H), 5,18 (s, 2 H), 3,81 - 5,12 (m, 6 H), 2,30 - 2,54 (m, 2 H).

(ii) Ph(3,4-(O-CH₂-O))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph(3,4-(O-CH₂-O))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) 0,11 g; 0,20 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) za zisku 72 mg (76 %).

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 6,64 - 7,80 (m, 7 H), 5,91 - 6,01 (m, 2 H), 4,80 - 5,24 (m, 2 H), 3,88 - 4,57 (m, 4 H), 2,11 - 2,84 (m, 2 H).

^I3C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu akarbonylu: δ 176,03, 175,70, 175,07, 174,82, 168,86.

-37CZ 298487 B6

Příklad 39

Ph(3-OMe,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) Ph(3-OMe,4-OHHR,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-4-hydroxy-3-methoxymandlové kyseliny (0,40 g; 2,0 mmol) a H-Pro-Pab(Z) (0,76 g; 2,0 mmol; viz příklad 35 (ii)) za zisku 132 mg (12 %).

FAB-MS m/z 561 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 6,62 - 7,84 (m, 12 H), 5,20- 5,25 (m, 2 H), 4,15 - 5,08 (m, 3 H), 3,42 - 3,84 (m, 4 H), 2,91 - 3,25 (m, 1 H), 1,66 - 2,37 (m, 4 H).

(ii) Ph(3-OMe,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph(3-OMe,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(0)-Pro-Pab(Z) (0,048 g; 0,09 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) za zisku 23 mg (55 %).

FAB-MS m/z 427 (Μ + 1)⁺.

’Η-NMR (400 MHz; D₂O): δ 6,72 - 7,83 (m, 7 H), 5,42 (s, 1 H), 4,38- 4,68 (m, 3 H),

3,55 - 4,10 (m, 4 H), 3,09 - 3,29 (m, 1 H), 1,72 - 2,37 (m, 4 H).

’³C NMR (75,5 MHz; D₂O) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 175,12, 173,25, 167,09.

Příklad 40

Ph-(R,S)C(Et)(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) Ph-(R, S)C(Et)(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-2-hydroxy-2-fenylbutanové kyseliny (0,36 g; 2,0 mmol) a H-Pro-Pab(Z) (0,76 g; 2,0 mmol; viz výše zmíněný příklad 35 (ii)) za zisku 57 mg (5 %).

FAB-MS m/z 543 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,24- 7,88 (m, 14 H), 5,23 (s, 2 H), 4,44-4,81 (m, 3 H), 2,98 - 3,25 (m, 2 H), 1,49 - 2,32 (m, 6 H), 0,85 - 0,95 (m, 3 H).

(ii) Ph-(R,S)C(Et)(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph-(R,S)C(Et)(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,055 g; 0,1 mmol; z výše uvedeného kroku (i)) za zisku 34 mg (72 %).

FAB-MS m/z 409 (M + 1)⁺.

‘H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,33 - 7,82 (m, 9 H), 4,38 - 4,60 (m, 3 H), 3,19 - 3,71 (m, 2 H), 1,54 - 2,34 (m, 6 H), 0,73 - 0,90 (m, 3 H).

’³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky a amidinu a karbonylu: δ 182,05, 176,42, 175,73, 175,59, 174,70, 174,47, 167,18.

Příklad 41

Ph-(3,5-diMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3,5-Dimethylmandlová kyselina

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 15 (i) z 3,5-dimethyIbenzaldehydu (5,0 g; 37 mmol) za zisku 2,8 g (42 %) sloučeniny.

-38CZ 298487 B6 'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,05 (s, 2 H), 6,94 (s, 1 H), 5,04 (s, 1 H), 2,28 (s, 6 H).

(ii) Ph-(3,5-diMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným v příkladu 3 (ii) z (R,S)—3,5—dimethylmandlové kyseliny (0,27 g; 1,5 mmol; z výše uvedeného kroku (i)) za zisku 0,403 g (51 %) sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 6,85- 7,88 (m, 12 H), 5,22 - 5,26 (m, 2 H), 4,84- 5,03 (m, 2 H), 4,43 - 4,62 (m, 2 H), 3,57 - 4,13 (m, 2 H), 2,25 - 2,74 (m, 8 H).

(iii) Ph-(3,5-diMe)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným v příkladu 15 (iii) ze Ph-(3,5-diMe)(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,102 g; 0,194 mmol; zvýše uvedeného kroku (ii)) za zisku 74 mg (84 %).

FAB-MSm/z395 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 6,76 - 7,82 (m, 7 H), 4,80 - 5,27 (m, 2 H), 3,87 - 4,62 (m, 4 H),

2,20 - 2,87 (m, 8 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 182,07, 175,60, 174,49, 174,37, 173,96, 173,23, 173,09, 173,05, 172,93, 166,98, 166,90.

Příklad 42

Ph(3-NH₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph(3-NO₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným v příkladu 3 (ii) z (R,S)-3-nitromandlové kyseliny (0,30 g; 1,5 mmol) za zisku 0,40 g (48 %).

LC-MS m/z 545 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,16- 8,22 (m, 13 H), 5,18- 5,23 (m, 2 H), 4,85- 5,15 (m, 2 H), 4,08 - 4,80 (m, 3 H), 3,65 - 3,81 (m, 1 H), 2,31 - 2,71 (m, 2 H).

(ii) Ph(3-NH₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem v příkladu 15 (iii) ze Ph-(3-NO₂)-(R,S)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z) (0,102 g; 0,19 mmol; z výše uvedeného kroku (i) za zisku 0,074 g (89 %).

LC-MS m/z 382 (M + 1)⁺.

‘H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 6,58 - 7,82 (m, 8 H), 4,80 - 5,25 (m, 2 H), 3,60 - 4,60 (m, 4 H), 2,12-2,88 (m, 2H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 181,96, 175,27, 174,25, 173,84, 173,19, 173,01, 166,93.

Příklad 43

Ph(3-NO₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Anisol (0,030 g; 0,27 mmol) a trifluormethansulfonová kyselina (0,138 g; 0,92 mmol) byly přidány ke směsi Ph(3-NO₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,100 g; 0,18 mmol; viz výše zmíněný příklad 42 (i)) a CH₂C1₂ (10 ml). Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 10 minut. Byla přidána voda a pH bylo nastaveno na 9 pomocí Na₂CO₃/aq. CH₂C1₂ byl odpařen ve vakuu a zbývající vodná vrstva byla extrahována diethyletherem (3x5 ml) následně

-39CZ 298487 B6 byla vysušena vymrazením. Surový produkt byl podroben preparativní RPLC za zisku 62 mg (60 %) sloučeniny po sušení vymrazením.

‘H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,38 - 8,31 (m, 8 H), 4,83 - 5,50 (m, 2 H), 4,03 - 4,57 (m, 4 H), 2,17-2,86 (m,2H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu akarbonylu: δ 181,5, 173,84, 173,89, 173,15, 173,04, 172,96, 172,80, 166,85.

Příklad 44

Ph(3-NH₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) Ph(3-NO₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným v příkladu 3 (ii) z (R,S)-3-nitromandlové kyseliny (0,30 g; 1,5 mmol) a H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,75 g; 1,65 mmol; viz výše zmíněný příklad 35 (ii)) za zisku 0,61 g (73 %).

LC-MS m/z 560 (M + 1)⁺.

‘H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,26- 8,23 (m, 13 H), 5,20 - 5,28 (m, 3 H), 4,33 - 4,73 (m, 3 H), 3,46 - 3,68 (m, 1 H), 2,92 - 3,14 (m, 1 H), 1,79 - 2,23 (m, 4 H).

(ii) Ph(3-NH₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným v příkladu 15 (iii) ze Ph(3-NO₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,104; 0,19 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) za zisku 64 mg (76 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 396 (M+ 1)⁺.

‘H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 6,74 - 7,82 (m, 8 H), 5,34 - 5,40 (m, 1 H), 4,35 - 4,58 (m, 3 H), 3,09 - 3,78 (m, 2 H), 1,75 - 2,35 (m, 4 H).

^I3C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu akarbonylu: δ 182,04, 175,38, 175,18, 173,12, 173,04, 167,07.

Příklad 45

Ph(3-NO₂)-(R nebo S)CH(OH)-C(OfyPro-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným v příkladu 43 ze Ph(3-NO₂)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,117 g; 0,21 mmol; viz příklad 44 (i) uvedený výše). Některé frakce byly odpařeny, aby se dostalo 23 mg (45 %) sloučeniny s diastereomemím poměrem větším než 99 : 1.

LC-MS m/z 424 (Μ - 1 fy; 426 (Μ + 1)⁺.

‘H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,31 - 8,35 (m, 8 H), 5,50-5,71 (m, 1 H), 3,64-4,57 (m, 4 H), 3,24 - 3,32 (m, 1 H), 1,76 - 2,42 (m, 4 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 175,21, 173,98, 172,58, 172,18, 167,12, 166,82.

(Předchozí frakce byly odpařeny, aby se dostalo 22 mg (43 %) epimeru výše zmíněné sloučeniny s diastereomemím poměrem větším než 99 : 1).

Příklad 46

Ph(3,4-(0-CH₂-0))-(R,S)CH(OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI (i) Ph(3,4-(0-CH₂-0))-(R,S)CH(0H)-C(0)-Pro-Pab(Z)

-40CZ 298487 B6

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu3 (ii) z (R,S)-3,4-methylendioxymandlové kyseliny (0,20 g; 1,0 mmol, připravena způsobem popsaným v Synthesis (1974) 724) a H-Pro-Pab(Z) x 2 HC1 (0,35 g; 0,91 mmol; viz výše uvedený příklad 35 (ii)) za zisku 80 mg (16 %).

FAB-MS m/z 559 (M + 1)⁺.

’Η-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 6,69- 7,89 (m, 12 H), 5,91 -6,04 (m, 2 H), 4,30- 5,28 (m, 2 H), 3,00-3,61 (m, 6 H), 1,95 - 2,35 (m, 4 H).

(ii) Ph(3,4-(O-CH₂-O))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 1 (v) ze Ph(3,4-O-CH₂-O))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,08 g; 0,14 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) za zisku 48 mg (73 %).

FAB-MS m/z 425 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 6,81 - 7,85 (m, 7 H), 5,90 - 6,05 (m, 2 H), 5,33 - 5,44 (m, 1 H), 4,37 - 4,90 (m, 3 H), 3,62 - 3,77 (m, 1 H), 3,13 - 3,28 (m, 1 H), 1,80 - 2,36 (m, 4 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 175,37, 175,09, 173,66, 173,08, 173,00, 167,03.

Příklad 47

Ph(3,5-diF)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) Ph(3,5-diF)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-3,5-difluormandlové kyseliny (0,28 g; 1,5 mmol) a H-Pro-Pab(Z) x 2 HC1 (0,75 g; 1,65 mmol; viz výše uvedený příklad. 35 (ii)) za zisku 0,42 g (51 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 549 (Μ - 1)’; 551 (M + 1)⁺.

’Η-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 6,72 - 7,84 (m, 12 H), 5,22 (s, 2 H), 5,08 (s, 1 H), 4,34 - 4,73 (m, 3 H), 3,41 - 3,60 (m, 1 H), 2,96 - 3,19 (m, 1 H), 1,80 - 2,34 (m, 4 H).

(ii) Ph(3,5-diF)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph(3,5-diF)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,104 g; 0,19 mmol; z výše uvedeného kroku (i)) za zisku 79 mg (88 %).

LC-MS m/z 415 (M - 1)“; 417 (M + 1)⁺, ’Η-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 6,86- 7,80 (m, 7 H), 5,50 (s, 1 H), 3,58 - 4,72 (m, 4 H), 3,19-3,32 (m, 1 H), 1,80 - 2,37 (m, 4 H).

’³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 181,87, 175,21, 174,98, 174,12, 172,57, 172,12, 171,97, 167,10, 165,24.

Příklad 48

Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(OH)-CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph-(R)CH(OH)-C(O)OBn (R)-Mandlová kyselina (3,0 g, 19,7 mmol) byla rozpuštěna v DMF (50 ml) a byl přidán uhličitan česný (3,21 g; 9,86 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Směs byla zředěna vodou (200 ml) a vodná vrstva byla extrahována pomocí EtOAc. Po oddělení byla organická vrstva promyta NaCl/aq., vysušena (Na₂SO₄) a odpařena. Výtěžek sloučeniny pojmenované v nadpisu byl 4,2 g (88 %).

-41 CZ 298487 B6

LC-MS m/z 265 (M + Na)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,17 - 7,44 (m, 10 H), 5,12 - 5,27 (m, 3 H).

(ii) Ph-(R)CH(O-CH₂-CH=CH₂)-C(O)-OBn

Směs Ph-(R)CH(OH)-C(O)OBn (1,0 g, 4,13 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)), síranu hořečnatého (0,1 g; 0,83 mmol) a oxidu stříbrného (2,58 g; 11,2 mmol) v petroletheru (teplota varu 40 až 60 °C; 25 ml) byla míchána za teploty místnosti v dusíkové atmosféře a bez přístupu světla. Do směsi byl přikapán allylbromid (0,75 g; 6,19 mmol) a následně ve dvou podílech byl přidán oxid stříbrný (2,58 g; 11,2 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Směs byla následně filtrována přes prostředek Celíte a filtrát byl odpařen za zisku 1,143 g (98 %) sloučeniny z podtitulku.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,20- 7,50 (m, 10 H), 5,89- 5,99 (m, 1 H), 5,09- 5,31 (m, 4 H), 4,99 (s, 1 H), 4,03 - 4,11 (m, 2 H).

(iii) Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(OH)-CH₂OH)-C(O)OBn

Směs Ph-(R)CH(O-CH₂-CH=CH₂)-C(O)OBn (0,74 g; 2,62 mmol; z výše uvedeného kroku (ii)), N-methylmorfolin-N-oxidu (0,425 g; 3,15 mmol) a oxidu osmičelého (0,0027 g; 0,01 mmol) ve vodě a acetonu (2:1,10 ml) byla míchána při teplotě místnosti po dobu 2 dnů. Byl přidán disíran sodný (1,5 g; 7,89 mmol) a směs byla míchána během 1 hodiny. Reakční směs byla následně filtrována přes prostředek Celíte a filtrát byl odpařen. Získalo se 0,51 g (62 %) sloučeniny z podtitulku.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,16- 7,44 (m, 10 H), 5,09- 5,20 (m, 2 H), 4,96 (s, 1 H),

3,55 - 3,97 (m, 5 H) (iv) Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(-O-C(CH₃)₂-CH₂OH))-C(O)OBn

Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(OH)-CH₂OH))-C(O)OBn (0,51 g; 1,61 mmol; zvýše uvedeného kroku (iii)) byl rozpuštěn v acetonu (20 ml). Byla přidána p-toluensulfonová kyselina (0,007 g; 0,037 mmol) a směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Byl přidán uhličitan draselný (0,09 g) a reakční směs byla při teplotě místnosti míchána po dobu 1 hodiny. Směs byla následně filtrována přes prostředek Celíte a filtrát byl odpařen za zisku 0,559 g (97 %) sloučeniny z podtitulku.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,18- 7,48 (m, 10 H), 5,01 - 5,21 (m, 3 H), 4,27 - 4,40 (m, 1 H), 4,02 - 4,11 (m, 1 H), 3,76 - 3,90 (m, 1 H), 3,49 - 3,67 (m, 2 H), 1,34 - 1,41 (m, 6 H).

(v) Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(-O-C(CH₃)₂-CH₂OH))-C(O)OH

Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(O-C(CH₃)₂-O-CH₂))-C(O)OBn (0,183 g; 0,51 mmol; zvýše uvedeného kroku (iv)) byl rozpuštěn v ethanolu (10 ml). Byl přidán Pd/C (5 %; 0,09 g) a reakční směs byla hydrogenována při atmosférickém tlaku po dobu 1 hodiny. Směs byla následně filtrována přes prostředek Celíte a filtrát byl odpařen za zisku 0,137 g (100 %) sloučeniny z podtitulku.

LC-MS m/z 265 (M - 1)'.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,28- 7,48 (m, 5 H), 4,97 (s, 1 H), 4,25- 4,35 (m, 1 H), 4,01 - 4,09 (m, 1 H), 3,72 - 3,84 (m, 1 H), 3,43 - 3,65 (m, 2 H), 1,30 - 1,37 (m, 6 H).

(vi) Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂))-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) ze Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-))-C(O)OH (0,165 g; 0,62 mmol; zvýše uvedeného kroku (v)) za zisku 0,20 g (52 %).

LC-MS m/z 613 (M - 1)’; 615 (M + 1)⁺.

-42CZ 298487 B6 'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,22 - 7,88 (m, 14 H), 5,22 (s, 2 H), 4,87 - 4,95 (m, 2 H),

3,40 - 4,54 (m, 9 H), 2,36 - 2,76 (m, 2 H), 1,22 - 1,42 (m, 6 H).

(vii) Ph-(R)CH(O-CH2-(R,S)CH(-O-C(CH3)₂-O-CH₂-))-C(O)-Aze-Pab.x.HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-))-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,20 g; 0,325 mmol; z výše uvedeného kroku (vi)) za zisku 179 mg (100 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 479 (Μ - 1)’; 481 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,33 - 7,80 (m, 9 H), 4,81 - 5,31 (m, 2 H), 3,94 - 4,59 (m, 6 H),

3,25 - 3,80 (m, 3 H), 2,16 - 2,88 (m, 2 H), 1,29 - 1,44 (m, 6 H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 181,99, 173,12, 172,93, 172,18, 166,84.

(viii) Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(OH)-CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-))-C(O)-Aze-Pab x HOAc (0,094 g; 0,17 mmol; z výše uvedeného kroku (vii)) byl rozpuštěn v HOAc a vodě (4 : 1; 10 ml) a reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Směs byla odpařena a odparek byl rozpuštěn ve vodě a vymrazením vysušen. Výtěžek sloučeniny popsané v nadpisu byl 85 mg (100%).

LC-MS m/z 439 (Μ - 1)“; 441 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,32 - 7,78 (m, 9 H), 4,81 - 5,28 (m, 2 H), 3,28 - 4,56 (m, 9 H), 2,15-2,90 (m, 2 H).

¹³C-NMR (100,6 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 179,14, 172,93, 172,89, 172,51, 171,96, 166,54.

Příklad 49

Ph-(R)CH(0-CH₂-(R,S)CH(0H)-CH₂0H)-C(0)~Pro~Pab x HOAc (i) Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-))-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) ze Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-))-C(O)OH (0,108 g; 0,4 mmol; viz výše uvedený příklad 48 (v)) a H-Pro-Pab(Z) x 2 HC1 (0,202 g; 0,46 mmol; viz výše zmíněný příklad 35 (ii)) za zisku 0,10 g (40 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 627 (Μ - 1)’; 629 (Μ + 1)⁺; 651 (M + Na)⁺.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,23 - 7,87 (m, 14 H), 5,03- 5,27 (m, 3 H), 3,34- 4,64 (m, 10 H), 1,71-2,39 (m, 4 H), 1,23 - 1,41 (m, 6 H).

(ii) Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-))-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 15 (iii) ze Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-))-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,100 g;

0,159 mmol; z výše uvedeného kroku (i)) za zisku 85 mg (96 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 493 (M - 1); 495 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz, D₂O): 7,30 - 7,82 (m, 9 H), 5,22 - 5,38 (m, 1 H), 4,32 - 4,62 (m, 4 H), 4,01 - 4,11 (m, 1 H), 3,22 - 3,83 (m, 5 H), 1,78 - 2,22 (m, 4 H), 1,33 - 1,44 (m, 6 H)

C-NMR (100,6 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 181,47, 174,74, 173,53, 171,64, 171,50, 171,00, 170,94, 166,58.

-43CZ 298487 B6 (iii) Ph-(R)CH(O-CH₂-(R,S)CH(OH)-CH₂OH>-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 48 (viii) ze Ph-(R)CH(0-CH₂-(R,S)CH(-0-C(CH₃)2-0-CH2-))-C(0>-Pro-Pab x HOAc (0,038 g; 0,069 mmol; z výše uvedeného kroku (ii)) za zisku 35 mg (98 %).

LC-MS m/z 453 (Μ - 1)“; 455 (M + 1)⁺.

‘H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,30 - 7,82 (m, 9 H), 5,20 - 5,38 (m, 1 H), 3,18 - 4,60 (m, 10 H), 1,70 - 2,38 (m, 4 H).

¹³C-NMR (100,6 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 180,26, 174,74, 173,47, 171,80, 171,26, 166,61.

Příklad 50

Ph-(R nebo S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Aze-Pab x HOAc a Ph-(S nebo R)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Ph-(R,S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH2-)-C(O)OH

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky ke způsobu popsanému ve výše uvedeném příkladu 48 (iv) z α-hydroxytropové kyseliny (3,5 g; 20,35 mmol; připravené jak popsal Guthrieet a kol., Can. J. Chem. 69, 1904 (1991)) za zisku 3,37 g (74 %).

‘H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,30 - 7,65 (m, 5 H), 4,95 (d, 1 H), 4,10 (d, 1 H), 1,70 (s, 3 H), 1,50 (s,3 H).

(ii) Ph-(R,S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) ze Ph-(R,S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH2-)-C(O)OH (0,250 g; 1,12 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) za zisku 0,30 g (53 %).

‘H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,20- 7,90 (m, 14 H), 5,22 (s, 2 H), 3,70- 5,10 (m, 7 H), 2,15-2,75 (m, 2 Η), 1,40 - 1,65 (m, 6 H).

(iii) Ph-(R nebo S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Aze-Pab x HOAc a Ph-(S nebo R)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Směs Ph-(R,S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH2-)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,30 g; 0,53 mmol; zvýše uvedeného kroku (ii)), mravenčanu amonného (0,30 g; 4,76 mmol), mravenčí kyseliny (3 kapky) a Pd/C (5%, 0,30 g) v methanolu (10 ml) byla míchána při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Reakční směs byla filtrována přes Celíte a filtrát byl odpařen. Surový produkt (0,29 g) byl podroben preparativní RPLC. Některé frakce byly odpařeny, aby se dostalo 80 mg (35 %) sloučeniny 50A s diastereomemím poměrem větším než 99 : 1. Pozdější frakce byly odpařeny za zisku 80 mg (35 %) sloučeniny 50B s diastereomemím poměrem 98 : 2.

Sloučenina 50A:

LC-MS m/z 437 (M + 1)⁺.

‘H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,28- 7,85 (m, 9 H), 3,70-4,95 (m, 7 H), 2,10- 2,55 (m, 2 H), 1,55 (s, 3 H), 1,50 (s, 3 H).

Sloučenina 50B:

LC-MS m/z 437 (M + 1)⁺.

‘H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,25- 7,80 (m, 9 H), 3,70- 5,00 (m, 7 H), 2,25 - 2,45 (m, 2 H), 1,60 (s, 3H), 1,48 (s, 3 H).

-44CZ 298487 B6

Příklad 51

Ph-(R nebo S)C(OH)(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1 a Ph-(S nebo R)C(OH)-C(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1 (i) Ph-(R nebo S)C(OH)(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1

Ph-(R nebo S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (0,060 g, 0,12 mmol; sloučenina 50A z výše zařazeného příkladu 50) byla rozpuštěna v octové kyselině (4 ml) a byla přidána voda (1 ml). Směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc a poté při teplotě 90 °C po dobu 6 hodin. Byla přidána HC1 (konc.; 1 ml) a směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 5 minut. Octová kyselina a HC1 byly odpařeny za vakua v přítomnosti toluenu a EtOH a odparek byl rozpuštěn ve vodě (4 ml) a vysušen vymrazováním. Surový produkt byl podroben preparativní RPLC za zisku 9 mg (16 %) sloučeniny pojmenované v nadpisu.

LC-MS m/z 395 (Μ - 1)’; 397 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,20- 7,85 (m, 9 H), 3,90- 4,70 (m, 5 H), 3,30- 3,70 (m, 2 H), 2,00 - 2,65 (m, 2 H).

(ii) Ph-(S nebo R)C(OH)(CH₂OH)-C(O)-Aze-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném kroku (i) ze Ph-(S nebo R)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (0,060 g; 0,12 mmol; sloučenina 50B z výše zařazeného příkladu 50) za zisku 22 mg (40 %).

LC-MS m/z 397 (M+ 1)⁺.

Ή-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,20 - 7,85 (m, 9 H), 3,90 - 4,75 (m, 6 H), 3,50 - 3,60 (m, 1 H), 2,10-2,50 (m, 2 H).

Příklad 52

Ph-(R nebo S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Pro-Pab x HOAc a Ph-(S nebo R)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (i) Ph-(R,S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) ze Ph-(R,S)C(-O-(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)OH (0,25 g; 1,12 mmol; viz výše popsaný příklad 50 (i)) za zisku 0,19 g (32 %).

FAB-MS m/z 585 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,20- 7,95 (m, 14 H), 5,25 (s, 2 H), 5,10 - 5,20 (m, 1 H), 4,32 - 4,70 (m, 3 H), 3,65 - 3,95 (m, 2 H), 3,00 - 3,25 (m, 1 H), 1,30 - 2,35 (m, 10 H).

(ii) Ph-(R nebo S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Pro-Pab x HOAc a Ph-(S nebo R)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Pro-Pab x HOAc

Titulní sloučeniny byly připraveny způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 50 (iii) ze Ph-(R,S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,37 g; 0,63 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)). Některé frakce byly odpařeny za zisku 120 mg sloučeniny 52A s diastereomemím poměrem větším než 99 : 1. Pozdější frakce byly odpařeny, aby se dostalo 120 mg sloučeniny 52B s diastereomemím poměrem 98 : 2.

Sloučenina 52A:

LC-MS m/z 451 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,25- 7,80 (m, 9 H), 4,35- 5,05 (m, 4 H), 3,80- 3,95 (m, 1 H), 3,60 - 3,65 (m, 1 H), 3,00 - 3,10 (m, 1 H), 2,10 - 2,20 (m, 1 H), 1,75 - 1,90 (m, 3 H),

1,55 (s, 3 H), 1,45 (s, 3H).

-45CZ 298487 B6

Sloučenina 52B:

LC-MS m/z 451 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,25- 7,80 (m, 9 H), 4,40- 5,10 (m, 4 H), 3,30 - 3,80 (m, 3 H), 1,75 - 2,20 (m, 4 H), 1,50 - 1,55 (m, 6 H).

Příklad 53

Ph-(R nebo S)C(0H)(CH₂0H)-C(0)-Pro-Pab x HC1 a

Ph-(S nebo R)C(OH)(CH₂OH)-C(O)-Prc^Pab x HC1 (i) Ph-(R nebo S)C(OH)(CH₂OH)-C(0)-Pro-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 51 (i) ze Ph-(R nebo S)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(Ó)-Pro-Pab x HOAc (0,060 g; 0,12 mmol; sloučenina 52A z výše zmíněného příkladu 52) za zisku 2 mg (2 %).

LC-MS m/z 409 (Μ - 1)’; 411 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,20 - 7,85 (m, 9 H), 4,40 - 4,60 (m, 3 H), 4,05 - 4,30 (m, 1 H), 2,95 - 3,90 (m, 3 H), 1,60 - 2,20 (m, 4 H).

(ii) Ph-(S nebo R)C(OH)(CH₂OH)-C(O)-Pro-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připraveny způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 51 (i) ze Ph-(S nebo R)C(-O-C(CH₃)₂-O-CH₂-)-C(O)-Pro-Pab x HOAc (0,060 g; 0,12 mmol; sloučenina 52B z výše zmíněného příkladu 52) za zisku 1 mg (1 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 409 (M - 1)~; 411 (M + 1)⁺.

‘H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,25 - 7,85 (m, 9 H), 4,40 - 4,65 (m, 3 H), 4,05 - 4,20 (m, 1 H), 3,25 - 3,75 (m, 3 Η), 1,40 - 2,20 (m, 4 H).

Příklad 54

Ph-(R)C(Me)(OH)-C(O)-Pro-Pab x HC1 (i) Ph-(R)C(Me)(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z(R)-(-)-2-hydroxy-2-fenylpropionové kyseliny (0,20 g; 1,2 mmol) a H-Pro-Pab(Z) x 2 HC1 (0,50 g; 1,1 mmol; viz výše zmíněný příklad 35 (ii) za zisku 0,13 g (22 %) sloučeniny.

‘H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,18- 7,87 (m, 14 H), 5,25 (s, 2 H), 4,37 - 4,61 (m, 3 H), 3,03 - 3,19 (m, 2 H), 1,50 - 2,17 (m, 7 H).

(ii) Ph-(R)C(Me)(OH)-C(O)-Pro-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena analogicky ke způsobu popsanému ve výše uvedeném příkladu 1 (v) ze Ph-(R)C(Me)(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,13 g; 0,25 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) za zisku 94 mg (89 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 395 (M + 1)⁺.

‘H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,37 - 7,91 (m, 9 H), 4,33 - 4,61 (m, 3 H), 3,15 - 4,01 (m, 2 H), 1,72-2,33 (m, 7H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: 176,06, 175,49, 174,88, 166,90.

-46CZ 298487 B6

Příklad 55

Ph-(S)C(Me)(OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI (i) Ph-(S)C(Me)(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) ze (S)-(+)-2-hydroxy-2-fenylpropionové kyseliny (0,20 g; 1,2 mmol) a H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,50 g; 1,1 mmol; viz výše zařazený příklad 35 (ii)) za zisku 0,19 g (33 %) kyseliny.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,20 - 7,77 (m, 14 H), 5,22 (s, 2 H), 4,53 - 4,58 (m, 1 H), 4,32 - 4,44 (m, 2 H), 3,13 - 3,38 (m, 2 H), 1,53 - 2,04 (m, 7 H).

(ii) Ph-(S)C(Me)(OH)-C(O)-Pro-Pab.x.HCl

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 1 (v) ze Ph-(S)C(Me)(OH)-C(O)-Pro-Pab (Z) (0,12 g; 0,23 mmol; z výše uvedeného kroku (i)) za zisku 80 mg (82 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 395 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,35 - 7,84 (m, 9 H), 4,47 - 4,63 (m, 3 H), 3,30 - 3,70 (m, 2 H), 1,60-2,29 (m, 7H).

¹³C-NMR (75,5 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: 175,58, 175,23, 174,79, 167,07.

Příklad 56

Ph-(3,4-diF)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HCI (i) Ph-(3,4-diF)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-3,4-difluormandlové kyseliny (0,20 g; 1,06 mmol) a H-Pro-Pab(Z) x 2 HCI (0,53 g;

I, 17 mmol; viz výše zařazený příklad 35 (ii)) za zisku 445 mg (76 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 549 (M - 1)’; 551 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 6,98- 7,74 (m, 12 H), 5,16 - 5,21 (m, 2 H), 5,06-5,01 (m, 1 H), 4,22 - 4,56 (m, 3 H), 3,32-3,58 (m, 1 H), 2,88-3,12 (m, 1 H), 1,70-2,12 (m, 4 H).

(ii) Ph-(3,4-diF)-(R,S)CH(OH)-C(0)-Pro-Pab x HCI

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 1 (v) ze Ph-(3,4-diF)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,175 g; 0,31 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) za zisku 127 mg (88 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 417 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,11 - 7,86 (m, 7 H), 5,37 (s, 1 H), 4,36 - 5,00 (m, 4 H), 3,66 - 3,78 (m, 1 H), 1,80 - 2,31 (m, 4 H).

¹³C-NMR (100,6 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 174,66, 174,40, 171,96, 171,82, 166,48.

Příklad 57

Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(R,S)Pic(4-oxo)-Pab x HOAc (i) Boc-(R,S)Pic(4-oxo)-OCH₃

Směs Boc-(R,S)Pic(4-hydroxy)-OCH3 (l,lg, 4,25 mmol; připraven jak popsal Gillard a kol.,

J. Org. Chem. 61, 2226 (1996)), PCC (1,8 g; 8,5 mmol) a molekulárního síta (práškové; 3 A;

-47CZ 298487 B6

1,0 g) v CH₂C1₂ (20 ml) byla míchána při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Byl přidán diethylether (60 ml) a reakční směs byla filtrována přes krátkou kolonu s nízkou vrstvou silikagelu, při eluování EtOAc a hexanem (1 : 1). Filtrát byl odpařen za zisku 1,0 g (92 %) sloučeniny z podtitulku.

FAB-MS m/z 258 (M + 1)⁺.

’Η-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 4,75 - 5,20 (m, 1 H), 3,55 - 4,15 (m, 5 H), 2,40 - 2,90 (m, 4 H), 1,30- 1,65 (m,9H).

(ii) H-(R,S)Pic(4-oxo)-OCH₃

Boc-(R,S)Pic(4-oxo)-OCH₃ (0,48 g; 1,87 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) byl zpracován s trifluoroctovou kyselinou v CH₂C1₂ (50 %, 4 ml) při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Reakční směs byla odpařena a odparek byl rozpuštěn v CH₂C1₂, promyt pomocí Na₂CO₃/aq., vysušen pomocí (K₂CO₃) a odpařen. Získalo se 0,23 g (78 %) sloučeniny z podtitulku.

’Η-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 3,65 - 3,80 (m, 4 H), 3,30 - 3,40 (m, 1 H), 2,90 - 3,00 (m, 1 H), 2,30 - 2,70 (m, 4 H).

(iii) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(4-oxo)-OCH₃

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky ke způsobu popsanému ve výše uvedeném příkladu 2 (ii) z H-(R,S)Pic(4-oxo)-OCH₃ (0,22 g; 1,4 mmol; zvýše uvedeného kroku (ii)) a Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)OH (0,372 g; 1,4 mmol; připraven podle způsobu, který popsal Hamada a kol., J. Am. Chem. Soc. 111, 669 (1989)) za zisku 288 mg (51 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 406 (M + 1)⁺.

’Η-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,20 - 7,50 (m, 5 H), 5,25 - 5,70 (m, 2 H), 4,15 - 4,75 (m, 1 H), 3,20-3,80 (m, 4 H), 2,00-2,90 (m, 3 H), 1,30- 1,65 (m, 1 H), 0,85 - 1,15 (m, 9 H), 0,10-0,35 (m, 6 H).

(iv) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(4-oxo)-OH

Směs Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(4^xo)-OCH₃ (0,28 g, 0,69 mmol; z výše uvedeného kroku (iii)) a roztoku hydroxidu litného (2M, 10 ml) v THF (10 ml) byla míchána při teplotě místnosti po dobu 1,5 hodiny. THF byl odpařen za vakua, odparek byl okyselen (pH 2) pomocí KHSO4 (2M) a extrahován pomocí EtOAc. Organická vrstva byla promyta vodou, vysušena (pomocí MgSO₄) a odpařena. Získalo se 0,24 g (89 %) sloučeniny z podtitulku.

FAB-MS m/z 392 (M+ 1)⁺.

’H-NMR (400 MHz; CDC1₃): δ 7,20 - 7,55 (m, 5 H), 5,15 - 5,75 (m, 2 H), 4,10 - 4,30 (m, 1 H), 3,20-3,80 (m, 1 H), 2,05-3,00 (m, 4 H), 1,35 - 1,55 (m, 1 H), 0,90- 1,05 (m, 9 H), 0,10-0,25 (m, 6 H).

(v) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(4-oxo)-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky ke způsobu popsanému ve výše uvedeném příkladu 1 (ii) ze Ph(R)CH(OTBDMS)-C(0)-(R,S)Pic-(4-oxo)-OH (0,227 g; 0,58 mmol; z výše uvedeného kroku (iv)) za zisku 92 mg (24 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 657 (M + 1)⁺.

’Η-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 6,90- 7,90 (m, 14 H), 5,10- 5,80 (m, 4 H), 3,60 - 4,70 (m, 3 H), 2,10 - 3,20 (m, 4 Η), 1,40 - 1,70 (m, 1 H), 0,80 - 1,10 (m, 9 H), 0,00 - 0,25 (m, 6 H).

(vi) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(R,S)Pic(4-oxo)-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky jako při způsobu popsaném ve výše uvedeném kroku (ii) ze Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(4-oxo>-Pab(Z) (0,09 g; 0,14 mmol; z výše uvedeného kroku (v)) za zisku 61 mg (82 %) sloučeniny.

-48CZ 298487 B6

FAB-MS m/z 543 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 6,95-7,90 (m, 14 H), 5,00- 5,55 (m, 4 H), 3,95- 4,70 (m, 2 H), 3,20 - 3,70 (m, 2 H), 1,20 - 2,80 (m, 4 H).

(vii) Ph-(R)CH(OH)-C(0)-(R,S)Pic(4-oxo)-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 15 (iii) ze Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(R,S)Pic(4-oxo)-Pab(Z) (0,061 g; 0,11 mmol; zvýše uvedeného kroku (vi)) za zisku 46 mg (90 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 407 (M - 1)’; 409 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,20 - 7,85 (m, 9 H), 5,00 - 5,80 (m, 2 H), 4,35 - 4,55 (m, 2 H), 3,40 - 4,05 (m, 2 H), 1,80 - 3,10 (m, 4 H).

Příklad 58

Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(R nebo S)Pic(4-methylen)-Pab x HOAc a Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(S nebo R)Pic(4-methylen)-Pab x HOAc (i) Boc-(R,S)Pic(4-methylen)-OCH₃

Methyltrifenylfosfoniumbromid (2,68 g; 7,5 mmol) byl sušen pod vakuem po dobu 20 minut a suspendován v suchém THF (20 ml) při 0 °C. Butyllithium (1,6N v hexanu; 4,7 ml; 7,5 mmol) byl přikapán a směs byla míchána při teplotě místnosti po 30 minut. Reakční směs byla ochlazena na -78 °C a byl přidán Boc-(R,S)Pic(4-oxo)-OCH₃ (1,3 g; 5,0 mmol; viz výše zmíněný příklad 57 (i)). Reakční směs byla míchána při -78 °C po dobu 30 minut a poté při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Chlorid amonný byl přidán k reakční směsi a po oddělení vodné vrstvy byl dvakrát extrahován diethyletherem. Spojené organické vrstvy byly vysušeny a odpařeny za zisku surového produktu, který byl čištěn velmi rychlou chromatografií za eluování pomocí EtOAc a hexanu (30 : 70) za získání 480 mg (37 %) sloučeniny z podtitulku.

FAB-MS m/z 256 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 4,70-5,10 (m, 3 H), 3,95- 4,15 (m, 1 H), 3,70 (s, 3 H), 2,10 - 3,10 (m, 5 H), 1,35 - 1,60 (m, 9 H).

(ii) H-(R,S)Pic(4-methylen)-OCH₃

Boc-(R,S)Pic(4-methylen)-OCH₃ (0,48 g; 1,88 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)) byl zpracován s trifluoroctovou kyselinou (50% v CH₂C1₂, 6 ml) při teplotě místnosti během 40 minut. Reakční směs byla odpařena a odparek byl rozpuštěn v CH₂C1₂, promyt pomocí Na₂CO₃ (nasycen), vysušen pomocí (K₂CO₃) a odpařen. Získalo se 0,27 g (95 %) sloučeniny z podtitulku. 'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 4,70 - 4,85 (m, 2 H), 3,75 (m, 3 H), 3,35 - 3,45 (m, 1 H), 3,15-3,25 (m, 1 H), 2,55-2,70 (m, 2 H), 2,10-2,30 (m, 3 H).

(iii) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(0)-(R,S)Pic-(4-methylen)-OCH₃

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogicky ke způsobu popsanému ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) ze Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)OH (0,37 g; 1,4 mmol; připraven způsobem, který popsal Hamada a kol., J. Am. Chem. Soc. 111, 669 (1989)) a H-(R,S)Pic(4-methylen)-OCH₃ (0,21 g; 1,4 mmol; z kroku (ii) popsaného výše) za zisku 0,283 g (52 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 404 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,25 - 7,55 (m, 5 H), 5,15 - 5,70 (m, 2 H), 4,20 - 4,85 (m, 3 H), 3,65 - 3,75 (m, 3 H), 1,90 - 3,20 (m, 5 H), 0,90 - 1,10 (m, 9 H), 0,10 - 0,30 (m, 6 H).

-49CZ 298487 B6 (iv) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(4-methylen)-OH

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 57 (iv) ze Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(4-methylen)-OCH₃ (0,28 g; 0,69 mmol; zvýše uvedeného kroku (iii)) za zisku 0,24 g (89 %) sloučeniny.

FAB-MS m/z 390 (M + 1)⁺.

Ή-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,15 - 7,50 (m, 5 H), 5,15 - 5,95 (m, 2 H), 3,55 - 5,00 (m, 3 H), 1,75 - 3,25 (m, 5 H), 0,85 - 1,05 (m, 9 H), 0,10 - 0,25 (m, 6 H).

(v) Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(4-methylen)-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena analogickým způsobem, jako je popsán ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) ze Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(4-methylen)-OH (0,235 g; 0,6 mmol; z kroku (iv) popsaného výše) a H-Pab(Z) x HCI (0,211 g; 0,66 mmol) za zisku 0,124 g (35 %).

FAB-MS m/z 655 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,10- 7,90 (m, 14 H), 5,15- 5,70 (m, 4 H), 4,10- 5,05 (m, 4 H), 1,75 - 3,05 (m, 6 H), 0,80 - 1,10 (m, 9 H), 0,00 - 0,25 (m, 6 H).

(vi) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(R,S)Pic(4-methylen)-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 57 (vi) ze Ph-(R)CH(OTBDMS)-C(O)-(R,S)Pic(4-methylen) Pab(Z) (0,08 g; 0,12 mmol; zvýše uvedeného kroku (v)) za zisku 0,06 g (91 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 541 (M+ 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; CD₃OD): δ 7,15- 7,90 (m, 14 H), 5,20 - 5,80 (m, 4 H), 4,35 - 4,90 (m, 4 H), 3,70-4,15 (m, 1 H), 3,20-3,40 (m, 1 H), 1,10-2,90 (m, 4 H).

(vii) Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(R nebo S)Pic(4-methylen)-Pab x HOAc a Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(S nebo R)Pic(4-methylen)-Pab x HOAc

Směs Ph-(R)CH(OH)-C(O)-(R,S)Pic(4-methylen)-Pab(Z) (0,035 g; 0,065 mmol; z výše uvedeného kroku (vi)), octanu amonného (0,50 g, 7,4 mmol) a imidazolu (0,20 g; 3,0 mmol) v methanolu (5 ml) byla míchána při 60 °C přes noc. Reakční směs byla odpařena a odparek byl podroben preparativní RPLC. Některé frakce byly odpařeny za zisku 1,8 mg sloučeniny 58B. Pozdější frakce byly odpařeny, aby se získalo 7 mg sloučeniny 58A.

Sloučenina 58A:

LC-MS m/z 405 (Μ - 1)’; 407 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,15 - 7,80 (m, 9 H), 5,65 - 5,70 (m, 1 H), 4,80 - 5,25 (m, 1 H), 4,45 - 4,60 (m, 2 H), 3,60 - 4,00 (m, 2 H), 1,30 - 3,30 (m, 6 H).

Sloučenina 58B:

LC-MS m/z 407 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,30 - 7,80 (m, 9 H), 5,45 - 5,75 (m, 1 H), 4,80 - 5,20 (m, 1 H), 4,35 - 4,70 (m, 3 H), 3,75 - 3,90 (m, 1 H), 1,70 - 3,05 (m, 6 H).

Příklad 59

Ph(3-Cl)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) (R,S)-3-Chlormandlová kyselina

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 15 (i) z 3-chlorbenzaldehydu (7,03 g; 50 mmol) za zisku 2 g (21%) sloučeniny.

-50CZ 298487 B6

LC-MS m/z 185 (M - 1); 370 (2M - lf.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,28 - 7,51 (m, 4 H), 5,14 (s, 1 H).

(ii) Ph(3-Cl)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-3-chlormandlové kyseliny (0,149 g; 0,8 mmol; zvýše uvedeného kroku (i), za zisku 0,30 g (70 %) sloučeniny.

'H-NMR (500 MHz; CDC1₃): δ 7,08- 7,84 (m, 13 H), 5,18- 5,24 (m, 2 H), 4,86- 5,01 (m, 2 H), 4,02 - 4,56 (m, 3 H), 3,57 - 3,76 (m, 1 H), 2,30 - 2,72 (m, 2 H).

(iii) Ph(3-Cl)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulní sloučenina byla připravena způsobem popsaným ve výše zmíněném příkladu 43 ze Ph-(3-Cl)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,10 g; 0,19 mmol; zvýše uvedeného kroku (ii)) za zisku 55 mg (63 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 399 (Μ - 1) ; 401 (M + 1)⁺.

'H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,10 - 7,85 (m, 8 H), 4,82 - 5,37 (m, 2 H), 3,96 - 4,79 (m, 4 H), 2,14-2,85 (m, 2 H).

C-NMR (100,6 MHz; D₂O; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: 174,00, 173,17, 172,83, 172,61, 166,59.

Příklad 60

Ph(3-Cl,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HC1 (i) Ph(3-Cl,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z)

Sloučenina z podtitulku byla připravena způsobem popsaným ve výše uvedeném příkladu 3 (ii) z (R,S)-3-chlor-4—hydroxymandlové kyseliny (0,25 g; 1,23 mmol) a H-Pro-Pab(Z) x 2 HC1 (0,615 g; 1,35 mmol; viz výše uvedený příklad 35 (ii)) za zisku 382 mg (55 %) sloučeniny.

LC-MS m/z 564 (M-l)’.

'H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 6,80- 7,85 (m, 12 H), 5,16 - 5,25 (m, 3 H), 4,35 - 4,51 (m, 3 H), 3,45 - 3,75 (m, 1 H), 3,07 - 3,42 (m, 1 H), 1,72 - 2,18 (m, 4 H).

¹³C-NMR (100,6 MHz; CD₃OD; komplikováno v důsledku diastereomerů a rotamerů) uhlíky amidinu a karbonylu: δ 174,62, 174,27, 173,02, 172,88, 170,41, 165,04.

(ii) Ph-(3-Cl,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x HC1

Titulní sloučenina byla připravena analogicky ke způsobu popsanému ve výše zmíněném příkladu 43 ze Ph(3-Cl,4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Z) (0,10 g; 0,177 mmol; zvýše uvedeného kroku (i)), trifluoroctové kyseliny (3,7 ml; 48 mmol) a thioanisolu (1,04 ml; 8,55 mmol) za zisku 57 mg (70 %).

LC-MS m/z 431 (M + 1)⁺.

'H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 6,84 - 7,86 (m, 7 H), 5,29 - 5,42 (m, 1 H), 4,30 - 4,68 (m, 3 H), 3,05 - 4,05 (m, 2 Η), 1,70 - 2,37 (m, 4 H).

Příklad 61

Sloučeniny pojmenované v názvech příkladů 1 až 60 byly testovány výše zmíněném testu A a u všech bylo shledáno, že mají hodnotu IC₅₀ TT menší než 0,3 μΜ.

-51 CZ 298487 B6

Zkratky

aq Aze	= vodný = azetidin-2-karboxylová kyselina
Boc	= terc-butyloxykarbonyl
Bn	= benzyl
Bu	= butyl
Ch	= cyklohexyl
DCC	= dicyklohexylkarbodiimid
DIPEA	= diizopropylethylamin
DMAP	= N,N-dimethylaminopyridin
DMF	= dimethylformamid
EDC	= 1 -(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid
Et	= ethyl
EtOH	= ethanol
h	= hodina/hodiny
HC1	= kyselina chlorovodíková
HOAc	= kyselina octová
HOSu	= N-hydroxysukcinimid
H-Dig H-Dig(Z) H-Hig H-Hig(Z) H-Pac	= l-amidino-3-aminoethylazetidin = 3-aminoethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)azetidin - l-amidino-3-aminoethylpyrrolidin = 3-aminoethyl-l -(N-benzyloxykarbonylamidino)pyrrolidin = l-amidino-4-aminomethylcyklohexan
H-Pac(Z) H-Pic	= 4-aminomethyl-l -(N-benzyloxykarbonylamidino)cyklohexan = pipekolinová kyselina
H-Pig H-Pig(Z) H-Pab	= l-amidino-3-aminomethylpiperidin = 3-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)piperidin = l-amidino-4-aminomethylbenzen
H-Pab(Z) PCC	= 4-aminomethyl-l-(N-benzyloxykarbonylamidino)benzen = pyridiniumchlorchromát
HPLC	= vysokotlaká kapalinová chromatografie
Me	= methyl
Ph	= fenyl
RPLC	= vysokotlaká kapalinová chromatografie s reverzní fází
Su	= sukcinimid
TBMDS	= terc-butyldimethylsilyl
TBTU	= [N,N,N',N'-tetramethyl-O-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborát]
THF	= tetrahydrofuran
THP	= tetrahydropyranyl

-52CZ 298487 B6

Prefixy n, s, i a t mají své obvyklé významy: normální, iso, sekundární a terciární. Stereochemie pro aminokyseliny je (S), pokud není uvedeno jinak.

TMS	= trimethylsilyl
WSCI	= karbodiimid rozpustný ve vodě
Z	= benzyloxykarbonyl

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (21)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1.

   Derivát α-hydroxykyseliny obecného vzorce I (CH,) —B (I) ve kterém p a q představují nezávisle 0,

   R¹ představuje vodík,

   R² představuje vodík,

   R³ představuje fenyl, který je substituován alespoň jedním alkylem s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenem, hydroxyskupinou, kyanoskupinou, nitroskupinou, methylendioxyskupinou, trifluormethylem, N(H)R²⁷ nebo C(O)OR²⁸,

   R²⁷ představuje vodík, alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo C(O)R²⁹,

   R²⁸ a R²⁹ představují nezávisle vodík nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku,

   R⁴ představuje vodík nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku,

   Y představuje alkylen s 1 až 3 atomy uhlíku popřípadě substituovaný alkylem s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, methylenem nebo oxoskupinou, n představuje 1 a

   B představuje strukturní zbytek vzorce IVd (IVd^ kde

   R⁵ představuje vodík, halogen nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku a

   -53 CZ 298487 B6

   D¹ a D² znamenají nezávisle vodík nebo benzyloxykarbonyl.
2. 2. Derivát oc-hydroxykyseliny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R⁴ představuje vodík.
3. 3. Derivát α-hydroxykyseliny podle některého z nároků 1 a 2, obecného vzorce I, kde Y představuje CH₂, (CH₂)₂, (CH₂)₃, CH₂CH(CH₃)CH₂, CH₂C(=O)CH₂ nebo CH₂C(=CH₂)CH₂.
4. 4. Derivát α-hydroxykyseliny podle nároku 3, obecného vzorce I, kde Y představuje CH₂, (CH₂)₂ nebo CH₂C(=CH₂)CH₂.
5. 5. Derivát α-hydroxykyseliny podle některého z nároků 1 až 4, obecného vzorce I, kde Y je CH₂.
6. 6. Derivát α-hydroxykyseliny podle některého z nároků 1 až 5, obecného vzorce 1, kde uhlík a-aminokyseliny ve zbytku je v S-konfíguraci.
7. 7. Derivát α-hydroxykyseliny podle některého z nároků 1 až 5, obecného vzorce I, kde α-uhlík ve zbytku je v R-konfíguraci.
8. 8. Derivát α-hydroxykyseliny podle nároku 1, obecného vzorce I, kde R³ představuje fenyl substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným ze souboru zahrnujícího NHR²⁷ a halogen.
9. 9. Derivát α-hydroxykyseliny podle nároku 8, obecného vzorce I, kde R³ představuje fenyl substituovaný skupinou NHR²⁷ nebo halogenem.
10. 10. Derivát α-hydroxykyseliny podle nároku 9, obecného vzorce I, kde R³ představuje fenyl substituovaný skupinou NHR²⁷ nebo chlorem.
11. 11. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje derivát a-hydroxykyseliny podle některého z nároků 1 až 8, obecného vzorce I, ve směsi s farmaceuticky přijatelným adjuvans, ředidlem nebo nosičem.

    -54CZ 298487 B6
12. 12. Derivát α-hydroxykyseliny podle některého z nároků 1 až 8, obecného vzorce I, pro použití jako léčivo.
13. 13. Derivát α-hydroxykyseliny podle některého z nároků 1 až 8, obecného vzorce I, pro použití pro léčení stavů, kde je požadována inhibice trombinu.
14. 14. Derivát α-hydroxykyseliny podle některého z nároků 1 až 8, obecného vzorce I, pro použití pro léčení trombózy.
15. 15. Derivát α-hydroxykyseliny podle některého z nároků 1 až 8, obecného vzorce I, pro použití jako antikoagulační prostředek.
16. 16. Použití derivátu α-hydroxykyseliny podle některého z nároků 1 až 8, obecného vzorce I, jako účinné složky pro výrobu léčiva pro léčení stavů, kde je požadována inhibice trombinu.
17. 17. Použití podle nároku 16, kde uvedeným stavem je trombóza.
18. 18. Použití derivátu α-hydroxykyseliny podle některého nároku 1 až 8, obecného vzorce I, pro výrobu antikoagulačního prostředku.
19. 19. Použití derivátu α-hydroxykyseliny podle některého nároku 1 až 8, obecného vzorce I, pro výrobu léčiva proti hyperkoagulabilitě krve a tkáně.
20. 20. Způsob přípravy derivátu α-hydroxykyseliny podle vyznačující se tím, že se nároku 1, obecného vzorce 1, (a) kondenzuje sloučenina obecného vzorce V (V), ve kterém p, q, R¹, R² a R³ mají význam definovaný v nároku 1, se sloučeninou obecného vzorce VI (VI), ve kterém

    R⁴, Y, n a B mají význam definovaný v nároku 1, nebo;

    (b) kondenzuje sloučenina obecného vzorce VII

    -55 CZ 298487 B6 (νιι)₁ ve kterém p, q, R¹, R², R³, R⁴ a Y mají význam definovaný v nároku 1, se sloučeninou obecného vzorce VIII

    H₂N-(CH₂)_n-B ve kterém n a B mají význam definovaný v nároku 1.
21. 21. Derivát α-hydroxykyseliny podle nároku 1, obecného vzorce I ve kterém je strukturní zbytek vzorce IVd (IVd)

    D¹ a D² jsou nezávisle vodík nebo benzyloxykarbonyl a p, q, R¹, R², R³, R⁴, Y, n a R⁵ mají význam definovaný v nároku 1, za předpokladu, že D¹ a D² nepředstavují oba vodík.