CZ294674B6 - Antitrombotické přípravky - Google Patents

Abstract

Je popsán trombin inhibující peptidový derivát obecného vzorce I, farmaceutický prostředek obsahující tuto sloučeninu a způsob přípravy tohoto peptidového derivátu.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká trombinových inhibitorů, které jsou vhodné jako antikoagulanty u savců. Vynález se zvláště týká peptidových derivátů, které mají vysokou antitrombotickou aktivitu, antikoagulační aktivitu a orální biologickou dostupnost.

Dosavadní stav techniky

Proces koagulace krve, trombóza, je spouštěn komplexní proteolytickou kaskádou, která vede k tvorbě trombinu. Trombin proteolyticky odstraňuje aktivované peptidy z Αα-řetězců a Ββřetězců fibrinogenu, který je rozpustný v krevní plazmě, přičemž se vyvolává vznik nerozpustného fibrinu.

Antikoagulace se v současné době dosahuje podáváním heparinů a kumarinů.

Parenterální farmakologické řízení koagulace a trombózy je založeno na inhibici trombinu za použití heparinů. Hepariny působí nepřímo na trombin urychlováním inhibičních účinků endogenního antitrombinu III (hlavní fyziologický inhibitor trombinu). Protože se úrovně antitrombinu III v plazmě mění a protože trombin vázaný k povrchu se zdá rezistentní k tomuto nepřímému mechanizmu, hepariny mohou být neúčinným ošetřením. Vzhledem ktomu, že koagulační testy se považují za spojené se sledováním účinnosti a bezpečnosti, musí se sledovat hladiny heparinů pomocí testů koagulace (zvláště testem doby částečně aktivovaného tromboplastinu (APTT - active partial thromboplastin time). Kumariny brání vzniku trombinu blokováním posttranslační τ-karboxylace při syntéze protrombinu a jiných proteinů tohoto typu. Pro jejich mechanizmus účinku se účinek kumarinů může vyvinout pouze pomalu, za 6 až 24 hodiny po podání. Kromě toho nejde o selektivní antikoagulanty. Kumariny také vyžadují sledování testováním koagulace (zvláště testováním protrombinové doby (PT - prothrombin time)).

Nedávno se ukázal zájem o malé syntetické peptidy, které jsou uznávány jako proteolytickými enzymy způsobem podobným způsobu, kterým rostou přírodní substráty. Tripeptidaldehydy, jako je D-Phe-Pro-Arg-H, Boc-D-Phe—Pro—Arg—H a D-Me-Phe-Pro-Arg-H (viz Bajusz a kol., J. Med. Chem., 33, 1729-1735 /1990/) projevují silnou přímou inhibici trombinu. Jsou popsány dřívější klinické studie, které ukazují, že D-MePhe-Pro-Arg-H sulfát působí jako antikoagulant u člověka (viz Simoons a kol., Circulation, 90, 1-231, Abstr. 1241 /1994/. Rada vynálezců syntetizovala analogy ve snaze vyvinout farmaceutické přípravky, například Shuman a kol., J. Med. Chem., 36, 314-319 /1993/. US 4 346 078 uvádí řadu antikoagulačně působících peptidů, které obsahují agmatinovou (l-amino-4-guanidinobutanovou) skupinu. Agmatinové deriváty a příbuzné sloučeniny jsou uvedeny v PCT přihlášce, zveřejněné v mezinárodní publikaci číslo WO 93/11152, stejně jako v evropské patentové přihlášce, publikované pod číslem 601 459, zveřejněné dne 15. června 1994. Takové sloučeniny se liší od dřívějších řad v tom, že agmatinové sloučeniny postrádají karbonylovou část nacházející se v podobných sloučeninách, které obsahují Arg skupinu.

I když hepariny a kumariny jsou účinné antikoagulanty, žádné léčivo dosud nevyšlo z těchto známých tripeptidaldehydů, a navzdory pokračujícím nadějím vážícím se ktéto skupině sloučenin, existuje potřeba antikoagulantů, které působí selektivně na trombin a jsou nezávislé na antitrombinu III, projevují inhibiční účinek krátce po podání, výhodně orální cestou, a nejsou na překážku lýze krevní sraženiny, jak je vyžadováno pro dosažení hemostasy.

Tento vynález se zaměřuje na zjištění, že sloučeniny podle tohoto vynálezu, jak jsou definovány dále, jsou silné trombinové inhibitory, které mohou mít vysokou biologickou dostupnost po

-1 CZ 294674 B6 orálním podání. Kromě toho určité sloučeniny podle tohoto vynálezu také projevují inhibici faktoru Xa, který je zapojen do koagulační kaskády.

Podstata vynálezu

První předmět tohoto vynálezu poskytuje nové peptidové deriváty, které jsou silnými trombinovými inhibitory, vhodnými jako antikoagulanty.

Další předměty, znaky a výhody budou zřejmé odborníkovi v oboru z dále uvedeného popisu a patentových nároků.

Tento vynález skýtá trombin inhibující peptidový derivát obecného vzorce I

X-Y-NH-(CH₂)_r-G (I), ve kterém

X znamená prolinyl, homoprolinyl, skupinu vzorce

R¹- (CH₂) g-NH-CH₂-C (0)

kde

R^d znamená karboxyskupinu nebo methylsulfonyl,

R^e znamená skupinu vzorce NHR^C, NHCOR^C nebo NHCOOR^C, kde

R^c znamená alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo cykloalkylalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku v cykloalkylové části a 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, přičemž celkový počet atomů uhlíku je 4 až 10,

T znamená cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, skupinu vzorce

-2CZ 294674 B6

a znamená číslo 0, 1 nebo 2 a

Q znamená hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -NH-A, kde

A znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce RSO₂ROC(O)-, RC(O)~, RⁿC(O)_ nebo -(CH₂)_g-R^m, g znamená číslo 1, 2, nebo 3,

B znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R' znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, perfluoralkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)_d-R^m, nesubstituovanou nebo substituovanou arylovou skupinu, kde ary lem je fenyl nebo naftyl, 5- nebo 6-členný nesubstituovaný nebo substituovaný aromatický heterocyklický kruh, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku a dusíku, nebo 9- nebo 10-člennou nesubstituovanou nebo substituovanou kondenzovanou bicyklickou aromatickou heterocyklickou skupinu, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku a dusíku, přičemž počet případných substituentů arylové skupiny, aromatického heterocyklického kruhu a kondenzované bicyklické aromatické heterocyklické skupiny je roven 1 nebo 2 a tyto substituenty jsou nezávisle na sobě vybrané ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)jCOOH, merkaptoskupinu, skupinu vzorce -S(O)h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHS(O)h_alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHC(O)-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -S(O)hNH₂, skupinu vzorce -S(O)hNH-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -S(O)_hN(alkyl)₂ s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená číslo 0, 1,2,3 nebo 4, s tou podmínkou, že daná substituce vede ke vzniku stabilní struktury,

R^m znamená skupinu vzorce -COOR^b, -SO2-alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, -SO3H, -P(O)(OR^b)2 nebo tetrazol-5-ylovou skupinu,

Rⁿ znamená skupinu vzorce -COOR^b nebo tetrazol-5-ylovou skupinu, každý z R^b znamená nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, d znamená číslo 1, 2 nebo 3, m znamená číslo 0, 1 nebo 2, n znamená číslo 0, 1 nebo 2 a

Z znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až atomy uhlíku, hydroxyskupinu, atom halogenu nebo skupinu vzorce R^aSO₂NH-, kde

R^a znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

Y znamená skupinu vzorce

O

II

-nr³-ch₂-c-

kde

R^s znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH₂)_q-T,

R^p znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH₂)_q-T', kde p znamená číslo 0, 1,2,3 nebo 4,

L znamená vazbu, -O-, -S- nebo -NH-, q znamená číslo 0,1,2 nebo 3 a

Τ' znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se až 8 atomy uhlíku, skupinu vzorce -COOH, -CONH₂ nebo Ar, kde

Ar znamená nesubstituovanou nebo substituovanou arylovou skupinu, kde aryl znamená fenyl, naftyl, 5- nebo 6-členný nesubstituovaný nebo substituovaný aromatický heterocyklický kruh, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku nebo dusíku, nebo 9- nebo 10-člennou nesubstituovanou nebo substituovanou kondenzovanou bicyklickou aromatickou heterocyklickou skupinu, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku nebo dusíku, přičemž počet případných substituentů arylové skupiny, aromatického heterocyklického kruhu a kondenzované bicyklické aromatické heterocyklické skupiny je roven 1 nebo 2 a tyto substituenty jsou nezávisle na sobě vybrané ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu s 1 až atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)jCOOH, merkaptoskupinu, skupinu vzorce -S(O)_halkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHS(O)h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHC(O)-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -S(O)hNH₂, skupinu vzorce -S(O)hNH-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -S(O)hN(alkyl)₂ s 1 až 4 atomy

-4CZ 294674 B6 uhlíku v každé alky love části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená číslo 0, 1,2, nebo 4, s tou podmínkou, že daná substituce vede ke vzniku stabilní struktury,

R^y znamená skupinu vzorce -CH2-, -0-, -S- nebo -NH- a

R^z znamená vazbu nebo dohromady sR^y a třemi připojenými atomy uhlíku tvoří nasycený karbocyklický kruh o 5 až 8 atomech, jehož jedním atomem může být -O-, -S- nebo -NH-, r znamená číslo 1, 2 nebo 3 a

G znamená skupinu vzorce

kde

D a E znamenají vždy nezávisle na sobě N nebo skupinu vzorce CH, k znamená číslo 0 nebo 1, b znamená číslo 0 nebo 1,

M znamená atom síry, kyslíku nebo skupinu vzorce NH, každý z W znamená nezávisle na sobě atom dusíku nebo skupinu vzorce CH a

R představuje skupinu vzorce

NOH

II

-c-nh₂ nebo G znamená skupinu vzorce

a kde jeden až všechny jinak nesubstituované atomy uhlíku aromatických nebo heteroaromatických kruhů vzorce

může nebo mohou nést atom fluoru jako substituent, * označuje chirální atom uhlíku,

-- označuje absolutní konfiguraci R nebo S nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl nebo farmaceuticky přijatelný solvát tohoto derivátu nebo jeho soli.

Zvláštní skupina výše popsaných peptidových derivátů vzorce I sestává z takových sloučenin obecného vzorce I, kde

X znamená prolinyl, homoprolinyl, skupinu vzorce

T znamená cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce

-6CZ 294674 B6

a znamená číslo 0 nebo 1,

Q znamená hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -NH-A,

A znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce RSO₂-, ROC(O)-, RC(O)- nebo -(CH₂)_q-COOH, g znamená číslo 1, 2 nebo 3,

B znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R' znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, perfluoralkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)_d-COOH, nesubstituovanou nebo substituovanou arylovou skupinu, kde arylovou skupinou je fenyl, naftyl, 5- nebo 6-členný nesubstituovaný nebo substituovaný aromatický heterocyklický kruh, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou zvoleny z atomu síry, kyslíku a dusíku, nebo 9- nebo 10-člennou nesubstituovanou nebo substituovanou kondenzovanou bicyklickou aromatickou heterocyklickou skupinu, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku a dusíku, přičemž počet případných substituentů arylové skupiny, aromatického heterocyklického kruhu a kondenzované bicyklické aromatické heterocyklické skupiny je roven 1 nebo 2 a tyto substituenty jsou nezávisle na sobě vybrané ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)jCOOH, merkaptoskupinu, skupinu vzorce -S(O)h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHS(O)h~alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce NHC(O)-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -S(O)hNH₂, skupinu vzorce -S(O)hNH-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -S(O)hN(alkyl)₂ s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, s tou podmínkou, že daná substituce vede ke vzniku stabilní struktury, d znamená číslo 1, 2 nebo 3, m znamená číslo 0, 1 nebo 2, n znamená číslo 0, 1 nebo 2 a

Z znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, atom halogenu nebo skupinu vzorce R^aSO₂NHkde

R^a znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

Y znamená skupinu vzorce

R^g znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH2)q-T^ř,

R^p znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH₂)_q-T', kde p znamená číslo 0, 1,2,3 nebo 4,

L znamená vazbu, -O-, -S- nebo -NH-, q znamená číslo 0, 1, 2 nebo 3 a

T znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se až 8 atomy uhlíku, skupinu vzorce COOH, -CONH₂ nebo Ar, kde

Ar znamená nesubstituovanou nebo substituovanou arylovou skupinu, kde arylovou skupinou je fenyl, nafityl, 5- nebo 6-členný nesubstituovaný nebo substituovaný aromatický heterocyklický kruh, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou zvoleny z atomu síry, kyslíku a dusíku, nebo 9- nebo 10-člennou nesubstituovanou nebo substituovanou kondenzovanou bicyklickou aromatickou heterocyklickou skupinu, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku a dusíku, přičemž počet případných substituentů arylové skupiny, aromatického heterocyklického kruhu a kondenzované bicyklické aromatické heterocyklické skupiny je roven 1 nebo 2 a tyto substituenty jsou nezávisle na sobě vybrané ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až atomy uhlíku, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)jCOOH, merkaptoskupinu, skupinu vzorce -S(O)h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHS(O)h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHC(O)alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -S(O)hNH₂, skupinu vzorce -S(O)hNH-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -S(O)hN(alkyl)₂ s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, s tou podmínkou, že daná substituce vede ke vzniku stabilní struktury,

R^y znamená skupinu vzorce -CH₂-, -O-, -S- nebo -NH-,

R^z znamená vazbu nebo, dohromady s R^y a třemi sousedícími atomy uhlíku, tvoří nasycený karbocyklický kruh o 5 až 8 atomech, z nichž jedním atomem může být -O-, -S- nebo -NH-, r znamená číslo 1 nebo 2,

-8CZ 294674 B6

G znamená skupinu vzorce

kde

D a E znamenají nezávisle na sobě vždy atom dusíku nebo skupinu vzorce CH, k znamená číslo 0 nebo 1, b znamená číslo 0 nebo 1,

M znamená atom síry, kyslíku nebo NH, každý W znamená nezávisle na sobě atom dusíku nebo skupinu vzorce CH a

R znamená skupinu vzorce

NOH li

-c-nh₂ f

* označuje chirální atom uhlíku,

-- označuje absolutní konfiguraci R nebo S nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo farmaceuticky přijatelný solvát této sloučeniny nebo jeho sůl.

Kromě sloučenin obecného vzorce I tento vynález skýtá farmaceutické prostředky, které obsahují sloučeninu obecného vzorce I dohromady s farmaceuticky přijatelnou nosnou látkou, ředidlem nebo pomocnou látkou.

Tento vynález se týká nových inhibitorů trombinu a farmaceutických prostředků obsahujících předmětné sloučeniny jako aktivní složky. Tyto sloučeniny nacházejí použití jako antikoagulanty k profylaxi a ošetřování tromboembolických chorob, jako žilní trombózy, plicní embolie, arteriální trombózy, zvláště ischemie myokardu a cerebrální trombózy, obecných hyperkoagulačních stavů a lokálních hyperkoagulačních stavů, stejně jako stavů po angioplastice a operačním zavedení koronárního bypassu, a při obecném poškození tkáně, jaké se týkají zánětlivých procesů.

-9CZ 294674 B6

Výraz „alkyl“, samotný nebo jako část jiného substituentu, znamená alkylový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem, která obsahuje uvedený počet atomů uhlíku, jako je methyl, ethyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, terc-butyl, izobutyl a sek-butyl. Výraz „perfluoralkyl“, samotný nebo jako část jiného substituentu, znamená alkylový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem, který obsahuje uvedený počet atomů uhlíku a ve kterém je každý atom vodíku nahrazen atomem fluoru, jako je trifluormethyl, perfluor, ethyl, perfluor-n-propyl, perfluorizopropyl, perfluor-n-butyl, perfluor-terc-butyl, perfluorizobutyl a perfluor-sek-butyl.

Výraz „cykloalkyl“ se 3 až 8 atomy uhlíku“ se týká nasycených alicyklických kruhů o 3 až 8 atomech uhlíku, jako je cyklopropyl, methylcyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl,

4- methylcyklohexyl, cyklooktyl a podobně.

Výraz „alkoxyskupina“ znamená alkylový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem, který obsahuje uvedený počet atomů uhlíku, vázaný na základní část atomem kyslíku.

Výraz „halogen“ znamená atom chloru, fluoru, bromu nebo jodu.

Výraz „acetyl“ znamená skupinu vzorce CH₃-C(O)-. Výraz „terc-butoxykarbonyl“ znamená skupinu vzorce (CH₃)₃C-O-C(O)- a je zkracován jako „Boc“. Výraz „benzyloxykarbonyl“ znamená skupinu vzorce C₆H₅CH₂-O-C(O)- a je zkracován jako „Cbz“.

Výraz „5- nebo 6-členný heterocyklický kruh“ znamená libovolný 5- nebo 6-členný kruh, který poskytuje stabilní strukturu a obsahuje jeden nebo dva atomy dusíku, jeden atom síry, jeden atom kyslíku, dále jeden atom dusíku a jeden atom síry nebo jeden atom dusíku a jeden atom kyslíku.

5- členný kruh obsahuje jednu nebo dvě dvojné vazby a 6-členný kruh obsahuje dvě nebo tři dvojné vazby. Takové heterocyklické systémy zahrnují furyl, thienyl, pyrrolyl, pyrazolyl, oxazolyl, izoxazolyl, thiazolyl, izothiazolyl, pyranyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, oxazinyl a thiazinyl.

Výraz „9- nebo 10-členný heterocyklický kruh“ znamená libovolnou bicyklickou skupinu, ve které je libovolný z výše uvedených 5- nebo 6-členných kruhů kondenzován k benzenovému kruhu nebo jinému 6-člennému heterocyklickému kruhu definovanému výše, který bude poskytovat stabilní strukturu. Tyto heterocyklické systémy zahrnují indolyl, benzothienyl, benzofuryl, benzoxazolyl, benzoizoxazolyl, benzopyrazolyl, chinolyl, izochinolyl, benzimidazolyl abenzothiazolyl.

Je třeba vzít v úvahu, že libovolný z výše uvedených heterocyklů se může vyskytovat v tautomerních formách. Všechny takové formy jsou zahrnuty do rozsahu tohoto vynálezu.

Všechny aromatické a heteroaromatické skupiny zvolené při definování Ar nebo R jsou nezávisle na sobě nesubstituovány nebo substituovány jedním nebo dvěma substituenty, které skýtají stabilní strukturu a které jsou navzájem nezávisle vybrány z atomu halogenu, hydroxyskupiny, alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupiny (-NH₂), monoalkylaminoskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, skupiny vzorce -(CH₂)jCOOH, merkaptoskupiny, skupiny vzorce -S(O)h~alkylové s 1 až 4 atomy uhlíku, -NHS(O)h-alkylové s 1 až 4 atomy uhlíku, -NHC(O)-alkylové s 1 až 4 atomy uhlíku, -S(O)_hNH₂, -S(O)hNHalkylové s 1 až 4 atomy uhlíku nebo -S(O)_hN(alkylové)₂ s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4. Obzvláště výhodným významem pro substituent R(C)O-je l-methylindol-2-oyl.

U reprezentativních sloučenin obecného vzorce I je karbonylová funkční část skupiny X připojena k aminové funkční části skupiny Y. Karbonylová funkční skupina Y je potom připojena k aminoskupině, jak je znázorněno v obecném vzorci I.

- 10CZ 294674 B6

Skupina vzorce

O * II CH-CZ

NH-A ve kterém Z a A znamenají vždy atom vodíku, se zde někdy označuje jako fenylglycyl a zkracuje jako Phg. Sloučeniny, kde A znamená například methyl, pak obsahují N“-methylfenylglycylovou skupinu, která se zkracuje jako MePhg. Substituované sloučeniny, kde Z má jiný význam než atom vodíku, se zařazují podle typu a polohy substituentové skupiny, například 3'-chlorfenylglycylu nebo zkrácené Phg(3-Cl).

Skupina vzorce

O * 1/

Z ch₂-ch-cI NH-A ve kterém Z a A znamenají vždy atom vodíku, se zde někdy označuje jako fenylalanyl a zkracuje jako Phe. Sloučeniny, kde A znamená například methyl, pak obsahují N“-methylfenylalanylovou skupinu, která se zkracuje jako MePhe. Substituované sloučeniny, kde Z má jiný význam než atom vodíku, se zařazují podle typu a polohy substituentové skupiny, například 3'-chlorfenylalanylu nebo zkrácené Phe(3-Cl).

Skupiny vzorce

když R' znamená atom vodíku, se zde občas uvádějí jako 1- a 3-tetrahydroizochinolinkarbonyl a jsou označovány zkratkami 1-Tiq a 3-Tiq.

Skupiny vzorce

-11 CZ 294674 B6 pokud R' znamená atom vodíku, se zde občas uvádějí jako 1- a 3-perhydroizochinolinkarbonyl ajsou zkracovány symboly 1-Piq a 3-Piq. Jak je uvedeno zakřivenými čárami, vyskytují se různé kruhově kondenzované izomery těchto substituentů a tento vynález předpokládá libovolné jednotlivé izomery a jejich kombinace.

Skupiny vzorce

se týkají prolinylu a azetidin-2-karbonylu ajsou označovány zkratkou Pro a Azt.

Skupina vzorce

představuje nasycený bicyklický systém typu 4,5, 5,5, 6,5, 7,5 nebo 8,5. Stereochemie na 3a je cis ke karbonylové skupině, jiné koncové můstkové vazby mohou být buď v cis, nebo trans konfiguraci s výjimkou systémů 4,5 a 5,5, které musí být v cis konfiguraci ke koncové můstkové vazbě. Definice R^y a R^z tak skýtá proměnný kruh, který včetně uvedených tří atomů uhlíku tvoří nasycený karbocyklický systém o 4 až 8 atomech. Všechny atomy kruhu mohou být atomy uhlíku nebo jeden z atomů na kruhu může být heteroatom zvolený z -0-, -S a -NH-. Tato definice zahrnuje výhodou část odvozenou od kyseliny oktahydroindol-2-karboxylové, zkráceně označované jako „Ohi“, kterou vyjadřuje vzorec

Tento vynález předpokládá různé cis a trans formy této části.

Kromě toho diastereomery mohou existovat v závislosti na rozvětvení alkylových substituentů. Sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnují směsi dvou nebo většího počtu diastereomerů, stejně jako každý jednotlivý izomer.

Mezi výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu se zahrnují takové sloučeniny obecného vzorce I, kde X znamená skupinu vzorce

- 12CZ 294674 B6

homoprolinyl, 1- nebo 3-Tiq nebo 1- nebo 3-Piq, a Y znamená prolinyl, a jejich farmaceuticky přijatelné soli a solváty. Zvláště výhodné jsou všechny sloučeniny, kde Q znamená skupinu vzorce NHA a A znamená atom vodíku nebo zbytek sulfonamidu (například A znamená skupinu vzorce RSO₂-), R' znamená atom vodíku, Z znamená atom vodíku a B znamená atom vodíku. Také takové sloučeniny, kde R znamená guanidinoskupinu nebo obzvláště amidinoskupinu, jsou výhodné.

Jednou zvláště výhodnou kombinací substituentů je, pokud G znamená R-substituovanou fenylovou skupinu (to znamená, že D = E = CH a k = 0), a obzvláště výhodné je, pokud G znamená 4-amidinofenylovou skupinu.

Výhodná skupina těchto sloučenin, ve které jeden až všechny jinak nesubstituované atomy uhlíku aromatického nebo heteroaromatického kruhu vzorce

CH₂)_k-R

nesou atom fluoru jako substituent, je skupina sloučenin, ve kterých žádný atom fluoru není substituentem v poloze a nebo vzhledem k D nebo E, pokud D nebo E představuje atom dusíku.

Jiná skupina výhodných sloučenin podle tohoto vynálezu zahrnuje takové sloučeniny obecného vzorce I, které jsou definovány výše, kde X znamená skupinu vzorce

R· O

I II

T-(CH₂)_a-C—CQ kde T představuje cyklohexyl, a znamená číslo 1, R' znamená atom vodíku a Q znamená skupinu vzorce -NH-A. Jednu zvláštní podskupinu tvoří případy, kde A znamená atom vodíku. Druhou zvláštní podskupinu tvoří případy, kde A znamená skupinu vzorce RSO₂-, obzvláště pokud R” představuje ethyl. Třetí zvláštní podskupinou jsou případy, kdy A znamená -(CH₂)_g-COOH, kde g znamená výhodně číslo 1.

Zvláštní významy Y pro sloučeniny obecného vzorce I, kde X, r a G mají významy uvedené výše, zahrnují (L)-prolinyl (Pro), (S)-cis-oktahydro-lH-indol-2-karbonyl (Ohi) aN-(2-fenylethyl)glycyl [N(PhCH₂CH₂)Gly].

Jak bylo zmíněno výše, tento vynález zahrnuje farmaceuticky přijatelné soli sloučenin vymezených výše uvedeným obecným vzorcem I. Zvláštní sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou obsahovat alespoň jednu dostatečně bazickou funkční skupinu, a proto reagují s libovolnou z řady

- 13 CZ 294674 B6 anorganických nebo organických kyselin, za vzniku farmaceuticky přijatelné soli. Kyseliny obecně používané pro přípravu adiěních solí s kyselinami zahrnují anorganické kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina jodovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná a podobné kyseliny, a organické kyseliny, jako je kyselina p-toluensulfonová, kyselina methansulfonová, kyselina oxalová, kyselina p-bromfenylsulfonová, kyselina uhličitá, kyselina jantarová, kyselina citrónová, kyselina benzoová, kyselina octová a podobné kyseliny. Příklady takových farmaceuticky přijatelných solí tak jsou sulfát, pyrosulfát, hydrogensulfát, sulfít, hydrogensulfít, fosfát, monohydrogenfosfát, dihydrogenfosfát, metafosfát, pyrofosfát, chlorid, bromid, jodid, acetát, propionát, dekanoát, kapry lát, akrylát, formiát, izobutyrát, kaproát, heptanoát, propiolát, oxalát, malonát, sukcinát, suberát, sebakát, fumarát, maleát, butin1,4-dioát, hexin-l,6-dioát, benzoát, chlorbenzoát, methylbenzoát, dinitrobenzoát, hydroxybenzoát, methoxybenzoát, ftalát, sulfonát, xylensulfonát, fenylacetát, fenylpropionát, fenylbutyrát, citrát, laktát, -hydroxybutyrát, glykolát, tartrát, methansulfonát, propansulfonát, naftalen-l-sulfonát, naftalen-2-sulfonát, mandlát a podobně. Výhodné farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou jsou soli vytvořené s minerálními kyselinami, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková a kyselina sírová.

O sloučeninách obecného vzorce I je známo, že tvoří hydráty a solváty s příslušnými rozpouštědly. Mezi výhodná rozpouštědla pro přípravu solvátových forem se zahrnuje voda, alkoholy, tetrahydrofuran, dimethylformamid a dimethylsulfoxid. Výhodnými alkoholy jsou methanol a ethanol. Jiná vhodná rozpouštědla mohou být zvolena na základě velikosti molekuly rozpouštědla. Malé molekuly rozpouštědla jsou výhodné, protože usnadňují tvorbu odpovídající solvátové formy. Solváty nebo hydráty se obvykle tvoří v průběhu rekrystalizace nebo v průběhu přípravy soli. Vhodné odkazy týkající se solvátů uvádí Peter Syker v A Guidebook to Mechanism in Organic Chemistry, 6. vyd. /1986/, John Wiley & Sons, New York. Pokud se zde používá výrazu „solvát“, tento výraz zahrnuje hydrátové formy, jako jsou monohydráty a dihydráty.

Sloučeniny obecného vzorce I se připravují známými způsoby. Podle jedné takové metody se kyselina obecného vzorce

P-X'-COOH, kde

-X'-C(O)- znamená -X-, který má stejný význam, jako je definován pod obecným vzorcem I, a

P představuje chránící skupinu, pokud je zapotřebí, kondenzuje se sloučeninou s chráněnou karboxyskupinou Y za vzniku dipeptidu (a). Karboxyskupina chráněná ester-skupinou z části Y se potom odstraní (odstranění chránící skupiny nebo deesterifikace) a forma volné kyseliny dipeptidu (b) se kondenzuje s chráněným reakčním činidlem (d). Výše uvedené reakční kroky jsou ilustrovány dále zařazeným schématem 1.

- 14CZ 294674 B6

Ρ-Χ'-COOH * HN-Y’-COO-alk

(a)

O

I

Ρ-Χ'-Ο-Ν-Υ'-ΟΟΟΗ deesterifikace (b) + H₂N- (CH₂)_r-G’ (d) (b)

O

Ρ-Χ'-C-N-Y’ -CONH- (CH₂)_r-G' (cl

P-X-Y-NH- (CH₂) _r-G' kde

G' má stejný význam jako G s tím rozdílem, že R znamená

NH

I

-C-NHP skupinu vzorce -CN, každé P představuje skupinu chránící aminoskupinu, pokud je zapotřebí,

P' znamená atom vodíku nebo P, alk znamená nižší alkylovou skupinu nebo nějakou podobnou skupinu chránící karboxylovou kyselinu a

-Y - má stejný význam jako Y s patrnou amino- a karboxy- funkční skupinou, například -Y-je stejný jako skupina vzorce -N-Y'-C(O)-.

Pokud je přítomna kyanoskupina v G', zpracuje se na substituent R a chránící skupiny v (c) se potom odstraní způsoby známými odborníkovi v oboru, jako hydrogenací v přítomnosti kovového katalyzátoru, aby se dostala sloučenina obecného vzorce I.

Kondenzace sloučeniny obecného vzorce

P-X-COOH se sloučeninou obecného vzorce

HN-Y'-COO-alk se provádí tak, že se nejprve chrání aminoskupina aminokyseliny, pokud je přítomna. Běžně se používají obvyklé skupiny chránící aminoskupinu pro přechodnou ochranu neboli blokování použité aminoskupiny.

Skupina chránící aminoskupinu se vztahuje k substituentům aminoskupiny, běžně používaným k blokování neboli ochraně aminové funkční skupiny, zatímco reagují jiné funkční skupiny na sloučenině. Příklady takových skupin chránících aminoskupinu zahrnují formylovou skupinu,

- 15CZ 294674 B6 tritylovou skupinu, ftalimidoskupinu, trichloracetylovou skupinu, chloracetylovou skupinu, bromacetylovou skupinu a jodacetylovou skupinu, blokující skupiny urethanového typu, jako je benzyloxykarbonyl, terc-butoxykarbonyl, 4-fenylbenzyloxykarbonyl, 2-methylbenzyloxykarbonyl, 4-chlorbenzyloxykarbonyl, 3-chlorbenzyloxykarbonyl, 2-chlorbenzyloxykarbonyl, 2,4-dichlorbenzyloxykarbonyl, 4-brombenzyloxykarbonyl, 3-brombenzyloxykarbonyl, 4-nitrobenzyloxykarbonyl, 4-kyanbenzyloxykarbonyl, 2-(4-xenyl)izopropoxykarbonyl, 1,1-difenyleth-l-oxykarbonyl, 1,1-difenylprop-l-oxykarbonyl, 2-fenylprop-2-oxykarbonyl, 2-(p-toluyl)prop-2-oxykarbonyl, cyklopentyloxykarbonyl, 1-methylcyklopentyloxykarbonyl, cyklohexyloxykarbonyl, 1-methylcyklohexyloxykarbonyl, 2-methylcyklohexyloxykarbonyl, 2^(4-toluylsulfonyl)ethoxykarbonyl, 2-(methylsulfonyl)ethoxykarbonyl, 2-(trifenylfosfíno)ethoxykarbonyl, 9-fluorenylmethoxykarbonyl („FMOC“), 2-(trimethylsilyl)ethoxykarbonyl, allyloxykarbonyl, l-(trimethylsilylmethyl)prop-l-enyloxykarbonyl, 5-benzizoxazolylmethoxykarbonyl,

4-acetoxybenzyloxykarbonyl, 2,2,2-trichlorethoxykarbonyl, 2-ethynyl-2-propoxykarbonyl, cyklopropylmethoxykarbonyl, 4-(decyloxy)benzyloxykarbonyl, izobornyloxykarbonyl, 1-piperidyloxykarbonyl a podobné skupiny, benzoylmethylsulfonová skupina, 2-(nitro)fenylsulfenylová skupina, difenylfosfinoxidová skupina a podobné skupiny chránící aminoskupinu. Druh použité skupiny chránící aminoskupinu není rozhodující, pokud skupina odvozená od aminoskupiny je stabilní za podmínek následující reakce nebo následujících reakcí v jiných místech molekuly a může se odstranit ve vhodném okamžiku syntézy bez poškození zbývající části molekuly. Výhodné skupiny chránící aminoskupinu jsou benzyloxykarbonylová, allyloxykarbonylová, terc-butoxykarbonylová a tritylová skupina. Výše uvedené výrazy zahrnují rovněž podobné skupiny chránící aminoskupinu, jež se používají při výrobě cefalosporinu, penicilinu a při syntéze peptidů. Další příklady skupin vztahujících se k výše zmíněným výrazům jsou popsány v publikaci J. W. Bartoň, „Protective Groups in Organic Chemistry“, J. G. W. McOmie, Ed., Plenům Press, New York, NY, 1973, Kapitola 2 a v publikaci T. W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis“, John Wiley and Sons, New York, NY, 1981, Kapitola 7. Příbuzný výraz „chráněná aminoskupina“ definuje aminoskupinu substituovanou výše diskutovanou skupinou chránící aminoskupinu.

Při provádění kondenzační reakce se použije esterová chránící skupina pro sloučeninu obecného vzorce

HN-Y'-COOH, která je odstranitelná za podmínek, při kterých skupina chránící aminoskupinu zůstává neporušena. Skupina chránící aminoskupinu acylující kyseliny obecného vzorce

P-X'-COOH tak zůstává v místě pro chránění aminoskupiny během následující kondenzace s aminem (d), za vzniku (c).

Ester-skupina chránící karboxyskupinu, jak je užívána ve zvláštní souvislosti s některými esterovými deriváty skupiny karboxylové kyseliny, se obecně používá k blokování neboli chránění skupiny karboxylové kyseliny, zatímco se provádí reakce na jiných funkčních skupinách sloučeniny. Příklady takových skupin chránících karboxylovou kyselinu zahrnují alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, benzyl, 4-nitrobenzyl, 4-methoxybenzyl, 3,4-dimethoxybenzyl, 2,4-dimethoxybenzyl, 2,4,6-trimethoxybenzyl, 2,4,6-trimethylbenzyl, pentamethylbenzyl, 3,4methylendioxybenzyl, benzhydryl, 4,4'-dimethoxybenzhydryl, 2,2',4,4'-tetramethoxybenzhydryl, terc-butyl, terc-amyl, trityl, 4-methoxytrityl, 4,4'-dimethoxytrityl, 4,4',4''-trimethoxytrityl, 2-fenylprop-2-yl, trimethylsilyl, terc-butyldimethylsilyl, fenacyl, 2,2,2-trichlorethyl, P~(trimethylsilyl)ethyl, 3-/di(n-butyl)methylsilyl/ethyl, p-toluensulfonylethyl, 4-nitrobenzylsulfonylethyl, allyl, cinnamyl, l-(trimethylsilylmethyl)-prop-l-en-3-yl a podobné skupiny. Druh použité skupiny chránící karboxyskupinu není rozhodující, pokud derivovaná karboxylová kyselina je stabilní za podmínek následující reakce nebo následujících reakcí v jiných místech

-16CZ 294674 B6 molekuly a může se odstranit ve vhodném okamžiku syntézy, bez poškození zbývající části molekuly. Obzvláště je důležité nepodřídit molekulu s chráněnou karboxyskupinou působení silných nukleofílních bází nebo reduktivním podmínkám, které používají vysoce aktivované kovové katalyzátory, jako je Raneyův nikl. (Takovým drsným odštěpujícím podmínkám se také dá vyhnout, pokud se použijí skupiny chránící aminoskupinu určené k odstranění, jak diskutováno dále). Další příklady těchto skupin lze najít v publikacích E. Haslam, „Protective Groups in Organic Chemistry“, J. G. W. McOmie, Ed., Plenům Press, New York, N.Y. 1973, Kapitola 5, a T. W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis“, John Wiley and Sons, New York,

N.Y. 1981, Kapitola 5.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou také připravit nejprve syntézou amidového prekurzoru obecného vzorce

HN-Y'-CONH(CH₂)-G' a potom reakcí s chráněnou částí X. Podle jednoho takového způsobu se připraví sloučenina obecného vzorce (d) a tato kondenzuje se sloučeninou obecného vzorce (g)

ΡΝ-Υ'-COOH (g), jak je znázorněno dále, čímž se získá amid obecného vzorce (h).

P«-Y'-COOH + H₂N-(CH₂)^G' ---PN-Y’-CONH-(CH₂)_X-G· (g) (h) kde

P představuje skupinu chránící aminoskupinu, jako je benzyloxykarbonylová (Cbz) skupina, terc-butoxykarbonylová (Boc) skupina, p-toluensulfonylová skupina a podobně.

Výhodně se používá chránící skupina aminoskupiny, která je odstranitelná hydrogenací nebo zpracováním se středně silnou kyselinou (například kyselinou trifluoroctovou) nebo se silnou kyselinou (například kyselinou chlorovodíkovou). Příklady jiných vhodných skupin chránících aminoskupinu skýtá publikace „Protective Groups in Organic Synthesis“, 2. vyd., T. W. Greene a Peter G. M. Wuts, kapitola 7, str. 309 až 405 /1991/, John Wiley & Sons, lne., vyd. Boc nebo jiná vhodná chránící skupina se odstraňuje z dusíku aminoskupiny zbytku Y, který se potom acyluje požadovanou acylovou skupinou aminokyseliny, aby se dostal dipeptid, jak je uvedeno dále.

Ρ-Χ'-COOH + HN-Y'-CONH-(CH₂)-G'->P-X'-CO-N-Y'-CONH-(CH₂)_r-G' (c)

Kyanoskupina, pokud je přítomna v G', se zpracuje a chránící skupiny na (c) se odstraní, jak již bylo popsáno dříve.

Kondenzace sloučeniny obecného vzorce

P-X'-COOH se provádí tím, že se nejprve chrání aminoskupina aminokyseliny, pokud je přítomna. Obvyklé skupiny chránící aminoskupinu se běžně používají pro přechodnou ochranu neboli blokování použité aminoskupiny. Příklady takových chránících skupin jsou popsány výše.

Kondenzační reakce popsané výše se provádějí za studená, výhodně za teploty od přibližně -20 °C do zhruba 15 °C. Kondenzační reakce se provádí v inertním organickém rozpouštědle,

- 17CZ 294674 B6 jako je dimethylformamid, dimethylacetamid, tetrahydrofuran, methylenchlorid, chloroform a v podobných běžných rozpouštědlech nebo směsích takových rozpouštědel. Obvykle se používají bezvodé podmínky, pokud se při kondenzační reakci používá aktivního esteru acylující kyseliny.

Meziprodukty (d) a (g) se připravují normalizovaným technickým postupem známým z organické chemie a jejich přípravu shrnuje schéma:

H₂N-K-CN

NOH

II h₂n-k-c-nh₂ kde

-K-R znamená -(CtEj-G.

Hydroxyamidiny podle tohoto vynálezu se připravují tak, že se zahřívá nitril s hydrochloridem hydroxylaminu a bází, jako je Ν,Ν-diizopropylethylamin, v rozpouštědle s hydroxylovými skupinami, jako je ethanol. Tento způsob tedy poskytuje

NOH

-c-nh₂ hydroxyamidiny (R znamená skupinu vzorce ).

Jiné sloučeniny, používané jako původní výchozí látky při syntéze sloučenin podle tohoto vynálezu, jsou dobře známé a pokud nejsou komerčně dostupné, snadno se připraví syntézou prováděnou normalizovanými způsoby, běžně používanými odborníkem v oboru.

4-Substituované proliny (R^p znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH2)_p-L-(CH2)q-T'), používané pro přípravu sloučenin podle tohoto vynálezu, mají všechny cis konfiguraci substituentu v poloze 4 vzhledem ke karbonylové části. Meziprodukty pro zavedení této funkční skupiny do sloučenin obecného vzorce I se připravují normalizovanými technickými postupy.

Například 4-substituovaný prolinový derivát, ve kterém R^p znamená skupinu obsahující methylenovou skupinu v místě připojeném na prolinový kruh, se mohou připravit podle zde dále uvedeného reakčního schématu.

'«mi COOH

- 18 CZ 294674 B6

Cbz

ve kterém

R⁴ = R³CH₂ = R^p skupina, obsahující methylenovou skupinu v místě připojeném na prolinový kruh.

4-Hydroxyprolin (jak cis, tak trans forma jsou komerčně dostupné) se nejprve chrání skupinou chránící aminoskupinu, přičemž Cbz skupina je zvláště vhodná k tomto reakčním kroku. Výsledný meziprodukt se potom esterifíkuje (methylester nebo obzvláště ethylester jsou zvláště běžné) a potom oxiduje, aby se dostal odpovídající keton. Tato oxidace se provádí za libovolné oxidačních podmínek z řady možností, jako za použití Jonesova oxidačního činidla nebo pyridiniumchlorchromátu, přičemž obzvláště vhodné pro toto převedení je použití pyridiniumchlorchromátu v suchém nereaktivním rozpouštědle, jako je dichlormethan. Pokud se reakční směs nechá reagovat po dobu 8 až 16 hodin, tato reakce z obecného hlediska proběhne kvantitativně, jestliže se ponechá probíhat za teploty místnosti. Tento univerzální ketonový meziprodukt se potom nechá reagovat s příslušným Wittigovým činidlem, aby se dostal požadovaný olefín. Obvykle se příslušný R^p-substituovaný trifenylfosfoniumhalogenid přidá k suchému inertnímu rozpouštědlu (například tetrahydrofuranu), které obsahuje silnou bázi (například tercbutoxid draselný). Keton se zavede a po přibližně 3 hodinách za teploty místnosti se může izolovat požadovaný olefínový meziprodukt. Za účelem dosažení dobrých výtěžků olefínu je výhodné, aby se použil 0,4 až 0,6-molámí přebytek Wittigova činidla vzhledem ke ketonu. Olefín se potom redukuje na požadovaný R^p-substituovaný prolin normalizovaným redukčním technickým postupem. Katalytická hydrogenace je nejsnadnějším způsobem pro provedení této konverze v laboratoři. Hydrogenace olefínu v přítomnosti katalyzátoru (například 5% palladia na uhlí) v inertním rozpouštědle, jako je ethanol, se bude provádět za atmosférického tlaku. V případě takových meziproduktů, ve kterých je skupinou chránící aminoskupinu Cbz, hydrogenací se také odstraní chránící skupinu a dostane se sloučenina, která se může použít ke kondenzaci na sloučeninu obecného vzorce

P-X'-COOH.

Jak bude zřejmé odborníkovi v oboru, tento způsob nebude účinný pro přípravu sloučenin, kde skupina R^p je připojena k prolinovému kruhu přes heteroatom nebo kde znamená aromatický kruh. Tak ve výše uvedeném schématu R³ znamená alkylovou skupinu, aralkylovou skupinu (například benzyl), (cykloalkyl)alkylovou skupinu a podobné skupiny.

Příbuzný způsob pro přípravu těchto meziproduktů je shrnut do dále uvedeného schématu.

Cbz

I

//

••iilCOOEt

- 19CZ 294674 B6

Výše uvedené reakční schéma představuje alternativu k Wittigově reakci popsané dříve a je vhodné pro přípravu sloučenin, pro které Wittigovo reakční činidlo se nemůže připravit. Tak pro přípravu meziproduktů, ve kterých R^a znamená alkyíovou, fenylovou nebo podobnou skupinu, se pyrrolidinonový meziprodukt nechá reagovat s příslušným Grignardovým činidlem. Běžně se používá slabý molární přebytek Grignardova činidla, obvykle při nízkých teplotách (například od -80 do -60 °C) v inertním rozpouštědle, které má teplotu tuhnutá při nízké teplotě, například v tetrahydrofuranu. Po přidání reakčních činidel se reakční směs může nechat ohřát na teplotu místnosti, a při této teplotě je reakce obvykle úplná během několika hodin. Přitom získaný meziprodukt se dehydratuje, například zpracováním s kyselinou trifluoroctovou. 3,4-Dehydromeziprodukt se potom redukuje na požadovaný cis meziprodukt za použití stejných redukčních podmínek, jako jsou popsány výše pro redukci olefmového meziproduktu.

Meziprodukty, ve kterých hetero „L“- skupina je kyslík a je připojena přímo na prolinový kruh (to znamená, že p značí nulu) se mohou připravit za použití Mitsunobuovy reakce (Mitsunobu, Synthesis, 1 /1981/), vyjádřené vztahem

ni COOEt

Při této reakci se trans-ester kyseliny hydroxypyrrolidinkarboxylové zpracuje s trifenylfosfínem v přítomnosti rozpouštědla, jako je tetrahydrofuran, a v přítomnosti sloučeniny obecného vzorce

Ar-O-H.

Směs se ochladí na teplotu přibližně 0 °C a uvede do styku s diethylazodikarboxylátem. Po ohřátí na teplotu místnosti se reakční směs zpracuje, aby se dostal požadovaný cis meziprodukt. I když schéma znázorněné výše popisuje reakci sloučenin, kde L znamená -O-, p = q = 0 a T značí Ar, tento reakční stupeň je vhodný pro přípravu jiných sloučenin, kde p představuje nulu a L znamená -O-.

Meziprodukty, kde L znamená atom síry a je připojen přímo ke kruhu, se mohou připravit nejprve konvertováním hydroxyskupiny na tosylát nebo jinou podobnou odštěpitelnou skupinu a potom náhradou thiolátovým anionem (viz například Krapcho a kol., J. Med. Chem., 31, 1148-1160 /1988/, Smith a kol., J. Med. Chem., 31, 875-855 /1988/).

Meziprodukty, kde L znamená atom dusíku a je připojen přímo ke kruhu, se mohou připravit nejprve konvertováním hydroxyskupiny na tosylát nebo jinou podobnou odštěpitelnou skupinu a potom náhradou azidem. Azid se může redukovat za použití známých způsobů a potom alkylovat, aby se dosáhlo požadované funkční skupiny (viz například Smith a kol., J. Med. Chem., 31, 875-855 /1988/).

Sloučeniny podle tohoto vynálezu obsahující cis-Ohi funkční skupinu se mohou připravit tím, že se připraví ethylester kyseliny (S)-indolinkarboxylové z odpovídající kyseliny (viz Vincent a kol., Drug Design and Discovery, sv. 9, str. 11 až 28 /1992/) a tohoto meziprodukt se redukuje hydrogenací nad 5% palladiem na uhlí v ethanolu, aby se dostal ester kyseliny oktahydroindol-2karboxylové, obecně označovaný jako Ohi-ester, jak je shrnuto dále.

-20CZ 294674 B6

'Ί COOEt

Sloučenina podle tohoto vynálezu obsahující trans-Ohi funkční skupinu se připravuje způsobem, který popsal Vincent a kol., Drug Design and Discovery, sv. 9, str. 11 až 28 /1992/. To je shrnuto ve schématu znázorněném dále.

Favorského reakce

štěpeni ——->

několik stupňů

Sloučenina podle tohoto vynálezu obsahující bicyklícký systém (s nebo bez heteroatomu) se může připravit způsobem, který popsal Teetz a kol., Tetrahedron Letters, 25, 4479 /1984/, jako obecně vyjadřuje vztah:

-21 CZ 294674 B6

OR^X kde

P představuje chránící skupinu a

R^x znamená alkylovou skupinu.

Meziprodukty pro zavedení N-substituované glycinové funkční skupiny (Y), používané pro přípravu sloučenin podle tohoto vynálezu, se připravují normalizovanými technickými postupy.

Například ester, halogenacetát, jako terc-butylbromacetát, se může konvertovat na požadovanou substituovanou sloučeninu zpracováním s příslušným primárním aminem podle vztahu:

BrCH₂COO-t-butyl + R^SNH2---->HNR^gCH2COO-t-butyl terc-Butylbromacetát se nechá reagovat s vhodným aminem buď v čistém stavu, nebo výhodně v rozpouštědle nereagujícím za použitých reakčních podmínek, jako v alkoholu. Je výhodné, aby se použil molární přebytek aminu k urychlení reakce vedoucímu k jejímu ukončení. Výhodně reakční směs také obsahuje nereaktivní zachycovač kyseliny, jako je přinejmenším molární ekvivalent triethylaminu. I když se reakční složky obvykle nechají reagovat za chlazení (například při teplotě 0 °C), reakční směs se běžně nechává ohřát na teplotu místnosti, přičemž po tomto ohřátí se reakce obvykle dokončí během 24 hodin. Třebaže je výhodný bromacetát, pro tuto konverzi se mohou použít také jiné halogenacetáty, jako jodacetáty a chloracetáty. Jiné esterové skupiny se mohou používat podobně. terc-Butylester je výhodný, protože se později může odstranit po zpracování s anisolem a kyselinou trifluoroctovou.

Druhý způsob přípravy těchto meziproduktů je shrnut do dále uvedeného schématu.

R-CHO + H₂NCH₂COOEt—>R°-CH-NCH₂COOEt—>R°-CEl₂-NHCH₂COOEt kde

R°-CH₂ znamená skupinu R^s, která obsahuje nesubstituovanou methylenovou skupinu sousedící v místě připojení s glycinovou částí.

-22CZ 294674 B6

Při provedení výše uvedeného reakčního schématu se příslušný aldehyd smíchá s glycinesterem v rozpouštědle nereaktivním za reakčních podmínek, jako v methanolu nebo ethanolu. Pokud se použije forma soli glycinesteru, může být přidán molámí ekvivalent báze, jako hydroxidu draselného, aby se umožnil vznik volné báze aminesteru. Reakce aldehydu a glycinesteru vede ke vzniku intermediární Schiffovy báze, která se potom může redukovat v šitu, po zpracování s redukčním činidlem, jako je natriumkyanborhydrid. Vznikl Schiffovy báze proběhne obvykle za méně než jednu hodinu a redukce je obvykle ukončena po 10 až 15 hodinách. Methylester nebo ethylester jsou zvláště vhodné, protože tyto skupiny se mohou odstranit (deblokovat) po zpracování s hydroxidem lithným ve vodném dioxanu. Použití vhodného ketonu na místo aldehydu vzorce

R°-CHO má za výsledek přípravu meziproduktů, ve kterých methylenová skupina připojená ke glycinamin je substituována.

Podle jiného provedení a obzvláště pro takové sloučeniny, kde R^s znamená Ar (to znamená s intervenující alkylovou skupinou) je výhodné připravit meziprodukt obecného vzorce

P-X'-CONHAr normalizovanými technickými postupy, (například reakcí aktivované formy sloučeniny obecného vzorce

P-X-COOH se sloučeninou obecného vzorce

ArNH₂) a potom reakcí tohoto meziproduktu s alkylhalogenacetátem, jak je popsáno výše, aby se dostala sloučenina obecného vzorce

P-X'-CONHAr-CH₂-COO-alk, která se může potom dále konvertovat obvyklým způsobem.

Řada konečných sloučenin podle tohoto vynálezu nebo meziproduktů pro jejich přípravu se může navzájem konvertovat normalizovanými technickými způsoby. Například arylové sloučeniny, které jsou substituovány nitroskupinou, se mohou redukovat (například v přítomnosti hydrogensulfítu sodného v rozpouštědle nereaktivním za reakčních podmínek, jako v ethanolu, ve vodě nebo v jejich směsi). Když se nitrosloučenina vaří pod zpětným chladičem ve směsi vody s ethanolem v přítomnosti hydrogensulfítu sodného, redukce je obvykle dokončena během několika hodin. Výsledný amin může být přítomen v konečném produktu a pokud amin je přítomen v meziproduktu, může být žádoucí provést jeho konverzi na konečnou požadovanou formu (například acylace poskytne acylovaný amin) nebo ho chránit, aby se vyhnulo vedlejším reakcím během následujícího chemického zpracování. Pokud volným aminem je požadovaná sloučenina, Cbz chránící skupina je zvláště vhodná v tomto ohledu. Jiné transformace a intrakonverze tohoto typu budou zřejmé odborníkovi v oboru organické chemie.

Jak si bude vědom odborník v tomto oboru, svrchu popsané transformace se mohou provádět, pokud se bude vycházet z látek uvedených výše, nebo ve většině případů se transformace mohou také uskutečnit na dipeptidových nebo tripeptidových meziproduktech, které obsahují stejné příslušné funkční skupiny. Tento naposledy jmenovaný případ, který může být potřebný nebo může také chybět, nemusí být vyloučen z ochrany různých skupin. Proto pořadí a typ zahrnuté

-23 CZ 294674 B6 chemické reakce bude rozhodovat o potřebě a typu chránících skupin, stejně jako o stupních pro uskutečnění syntézy. Odborník v oboru také vezme v úvahu, že se mohou zvolit jiné chránící skupiny, pokud slouží k účelům ochrany funkční skupiny během následujícího chemického zpracování, ale také se mohou odstranit za vhodných podmínek a ve vhodném pořadí, aby se dovolily následující transformace. Například ve schématu 1 uvedeném výše, G' zahrnuje substituenty, kde R znamená kyanoskupinu, a tak nitrilová skupina se může převést na amidin nebo redukovat na amin, který může být popřípadě dále zpracován na guanidiny podle tohoto vynálezu.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu se nejlépe izolují ve formě adičních solí s kyselinou. Soli sloučenin obecného vzorce I vzniklé s kyselinami, jako s kyselinami uvedenými výše, jsou vhodné jako farmaceuticky přijatelné soli pro podávání antitrombotických přípravků a pro přípravu prostředků s jejich obsahem. Jiné adiční soli s kyselinami se mohou připravovat a používat pro izolaci a čištění peptidů. Například soli vytvořené se sulfonovými kyselinami, jako je kyselina methansulfonová, kyselina n-butansulfonová, kyselina p-toluensulfonová a kyselina naftalensulfonová, se mohou také použít.

Sloučenina obecného vzorce I se připravuje tím, že se

a) odstraní současně nebo postupně chránící skupina nebo chránící skupiny P z odpovídající sloučeniny obecného vzorce II (P)X-Y-NH-(CH₂)_r-G(P) (II), ve kterém (P)X představuje zbytek X, který může nést alespoň jednu chránící skupinu P, nezávisle na sobě zvolenou ze skupiny P chránící aminoskupinu, pro sloučeninu obecného vzorce I, kde X obsahuje bazickou NH část, a skupiny P chránící karboxyskupinu, pro sloučeninu obecného vzorce I, kde X obsahuje karboxylový zbytek a

G(P) představuje zbytek G, který může nést alespoň jednu chránící skupinu P, nezávisle na sobě zvolenou ze skupiny chránící aminoskupinu P a potom, pokud se vyžaduje sůl sloučeniny obecného vzorce I, připraví sůl s farmaceuticky přijatelnou kyselinou.

Pro sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých skupinou chránící kyselinu je terc-butylester a/nebo skupinami chránícími aminoskupinu je terc-butoxykarbonyl, chránící skupina nebo chránící skupiny se odstraní zpracováním se silnou kyselinou, jako je kyselina trifluoroctová nebo bezvodý chlorovodík, v inertním rozpouštědle, jako je dioxan nebo dichlormethan, v přítomnosti anisolu. Pro sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých skupinou chránící kyselinu je benzylester a/nebo skupinou chránící aminoskupinu je benzyloxykarbonyl, chránící skupina nebo chránící skupiny se mohou odstranit hydrogenolýzou, která se obvykle provádí v ethanolickém chlorovodíku v přítomnosti palladia na uhlí jako katalyzátoru.

Výhodný způsob čištění sloučenin obecného vzorce I, zatímco se současně připravuje požadovaná stabilní forma soli, je popsán v US 5 250 660. Podle tohoto způsobu se stabilní sulfáty nebo hydrochloridy připravují preparativním čištěním chromatografií na reverzní fázi Cis, při kterém vodná složka obsahuje kyselinu sírovou nebo kyselinu chlorovodíkovou, při hodnotě pH 2,5, a acetonitril je organickou složkou. Hodnota pH kyselého eluátu se upraví na pH mezi přibližně 4 a zhruba 6 aniontoměničovou pryskyřicí v kyselé formě, například pomocí Bio-Rad AG-1X8. Po

-24CZ 294674 B6 úpravě hodnoty pH se roztok tripeptid-sulfátu nebo -hydrochloridu lyofilizuje, aby se dostala čistá sůl ve formě suchého prášku. Například při tomto způsobu se surový D-Phe-Pro-pNHCH₂C6H₄C(NH)NH2 sulfát může rozpustit ve vodě a roztok se vloží na kolonu naplněnou Vydac Cis RP HPLC, 5 cm X 50 cm. Přitom se použije gradient 2 až 10% B (A - 0,01% kyselina sírová, B = acetonitril) během 10 hodin. Násobné frakce se zachycují a ty frakce, které obsahují požadovanou sloučeninu, podle stanovení analytickou vysoko účinnou kapalinovou chromatografíí s reverzní fází, se jímají. Hodnota pH zachycených frakcí se upraví na 4,0 až 4,5 pomocí pryskyřice AG-1X8 v hydroxidové formě (Bio-Rad, 3300 Ragatta Blvd., Richmond, CA 94804, USA). Roztok se filtruje a filtrát se lyofilizuje, aby se dostal čistý D-, L-diamid ve formě sulfátové soli.

Opticky aktivní izomery diastereomerů na zbytku X jsou také součástí tohoto vynálezu. Takové opticky aktivní izomery se mohou připravovat ze svých příslušných opticky aktivních prekurzorů způsoby popsanými výše nebo rozštěpením racemických směsí. Toto štěpení se může provádět derivatizací s chirálním činidlem a následující chromatografií nebo opakovanou krystalizací. Odstranění chirálních pomocných látek normalizovanými způsoby poskytuje v podstatě opticky čisté izomery sloučenin podle tohoto vynálezu nebo jejich prekurzorů. Další podrobnosti týkající se štěpení se mohou najít v publikaci Jacques a kol., Enantiomers, Racemates and Resolutions, John Wiley & Sons /1981/.

Sloučeniny používané jako výchozí látky při syntéze sloučenin podle tohoto vynálezu jsou dobře známé a pokud nepatří do rozsahu, který je komerčně dostupný, snadno se syntetizují normalizovanými postupy obecně používanými odborníkům v oboru.

Příklady provedení vynálezu

Dále uvedené příklady obsahují další popis tohoto vynálezu a také poskytují příklady určené ke srovnávání. Příklady takto uvedené nejsou míněny jako omezení tohoto vynálezu.

Zkratky používané v této části popisu mají dále uvedené významy.

Aminokyseliny zbytky: Arg = arginyl, Glu = glutamyl, Gly = glycyl, Pro = prolinyl, hPro = homoprolyl, Azt = azetidin-2-karbonyl, Phg = fenylglycyl, Phe = fenylalanyl, hPhe = homofenylalanyl, 1-Tiq = 1,2,3,4-tetrahydroizochinolin-l-karbony 1, 3-Tiq= 1,2,3,4-tetrahydroizochinolin-3-karbonyl, Cha = β-cyklohexylalanyl, hCha = a-amino-x-cyklohexylbutyryl, NMI = N-methylindol-2-oyl, Ohi = cis-oktahydroindol-l-oyl, 1-Piq = perhydroizochinolin-l-karbonyl, 3-Piq = perhydroizochinolin-3-karbonyl, Met = methionyl, Met(O)₂ = S,S-dioxomethionyl.

Agm	= agmatin
Boc	= terc-butoxykarbonyl
Bn	= benzyl
Cbz	= benzyloxykarbonyl
DCC	= dicyklohexylkarbodiimid
DMF	= dimethylformamid
Et	= ethyl
DMSO	= dimethylsulfoxid
EtOAc	= ethylacetát
Et2O	= diethylether
EtOH	= ethanol
Fmoc	= 9-fluorenylmethoxykarbonyl
FAB-MS	= hmotnostní spektrum s bombardováním rychlými atomy
FD-MS	= hmotnostní spektrum s desorpční oblasti
IS-MS	= hmotnostní spektrum s iontovým postřikem

-25CZ 294674 B6

HRMS = hmotnostní spektrum s vysokým rozlišením

HOBT = 1-hydroxybenzotriazolhydrát

IR = infračervené spektrum

RPHLC = vysokoúčinná kapalinová chromatografíe s reverzní fází

Ph = fenyl

TFA = kyselina trifluoroctová

THF = tetrahydrofuran

TLC = chromatografíe na tenké vrstvě

Pro vysokoúčinnou kapalinovou chromatografíí s reverzní fází se používají tyto parametry:

rozpouštědlo A: 0,05% vodná kyselina chlorovodíková (1,5 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové ve 3 litrech vody), rozpouštědlo B: acetonitril, gradient: jak je definován v každém příkladu, metoda 1: kolona: Vydac Ci₈ - 2,5 cm x 25 cm, průtoková rychlost: 5 ml/min, metoda 2: kolona: Vydac Ci₈ - 5 cm x 25 cm, průtoková rychlost: 10 ml/min, metoda 3: kolona: Vydac Ci₈ - 2,5 cm x 50 cm, průtoková rychlost: 10 ml/min.

Pokud není uvedeno jinak, úprava hodnoty pH a zpracování se provádějí svodnými roztoky kyseliny nebo báze.

V příkladech, kde je uvedeno ^]H NMR spektrum, byla látka získaná reakcí charakterizována protonovým NMR spektrem k potvrzení, že byla získána uvedená sloučenina. IC spektrum bez údajů podobně označuje, že bylo získáno uspokojivé infračervené spektrum. HRMS se používá k potvrzení exaktního hmotnostního spektra sloučeniny, pro kterou se nedostala uspokojivá elementární analýza, přičemž jde o produkt získaný popsaným způsobem. Udává se elementární složení sledovaného ionu (například MH¹).

Příklad 1

EtS0₂-D-Phe-Pro-Agm.HCl

A) Způsob přípravy Boc-D-Phe-Pro-OBn

K roztoku Boc-D-Phe-OH (89,1 g, 336 mmol), Pro-OBn-hydrochloridu (81,2 g, 336 mmol), HOBT (50 g, 370 mmol) a N,N-diizopropylethylaminu (176 ml, 1,008 mmol) se za teploty 0 °C v dichlormethanu (600 ml) přidá l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid (71 g, 370 mmol). Po míchání během 18 hodin se směs zředí diethyletherem (1 litr) a postupně promyje třikrát 1-normální kyselinou citrónovou (250 ml), jednou vodou (250 ml), třikrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (250 ml) jednou nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (250 ml). Organická fáze se vysuší síranem sodným, filtruje a odpaří za sníženého tlaku. Tak se dostane 140 g (92,5 %) světle žluté pěny.

-26CZ 294674 B6

FD-MS, m/e 452 (M⁺) ’H NMR spektrum

B) Způsob přípravy D-Phe-Pro-OBn.TFA

K míchanému roztoku Boc-D-Phe-Pro-OBn (68 g, 150 mmol) v dichlormethanu (50 ml) se za teploty 0 °C přidá anisol (20 ml) a poté kyselina trifluoroctová (400 ml). Vše se míchá po dobu hodin, rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku a viskózní olejovitý odparek se zředí diethyletherem (1,5 litr) a chladí (během 72 hodin). Bílá sraženina se odfiltruje, promyje diethyletherem (300 ml) a vysuší. Dostane se 59,4 g (85 %) bílého prášku.

’H NMR spektrum

C) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-OBn

K míchanému roztoku D-Phe-Pro-OBn.TFA (12 g, 25,7 mmol) a triethylaminu (7 ml, 50,2 mmol) v dichlormethanu (200 ml) se za teploty -78 °C přikape ethansulfonylchlorid (2,65 ml, 28,3 mmol) z přikapávací nálevky. Reakční směs se zahřeje na teplotu 0 °C a po hodinách míchání se přidá voda (10 ml). Organická fáze se promyje třikrát 1-normální kyselinou chlorovodíkovou (100 ml), jednou nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (100 ml) a potom se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku. Látka se čistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu, při eluování ethylacetátem a hexany (6:4). Frakce obsahující připravovanou sloučeninu (hodnoceno chromatografií na tenké vrstvě) se spojí a odpaří. Získá se 6,62 g (58 %) žlutého oleje, který tuhne.

’H NMR spektrum FD-MS, m/e 445 (M⁺)

Analýza pro C₂₃H₂8N₂O₅S:

vypočteno (%): C 62,14, H 6,35, N 6,30, nalezeno (%): C 61,87, H 6,37, N 6,18.

D) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-OH

K míchanému roztoku EtSO₂-D-Phe-Pro-OBn (4,5 g, 10,1 mmol) vp-dioxanu (150 ml) se přidá roztok monohydrátu hydroxidu lithného (2,1 g, 50,5 mmol) ve vodě (75 ml). Po míchání během 16 hodin se roztok odpaří na poloviční objem za sníženého tlaku a vzniklý roztok se zředí vodou (300 ml) a 0,1-normálním roztokem hydroxidu sodného (100 ml). Vodná fáze se potom dvakrát promyje diethyletherem (250 ml), okyselí tuhou kyselinou citrónovou a potom třikrát extrahuje ethylacetátem (150 ml). Spojené ethylacetátové extrakty se promyjí nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (200 ml), vysuší síranem hořečnatým, filtrují a odpaří, aby se dostalo 3,6 g (90 %) bílé tuhé látky.

FD-MS, m/e 355 (M⁺)

Analýza pro C]₆H₂₂N₂O₅S:

vypočteno (%): C 54,22, H 6,26, N 7,90, nalezeno (%): C 54,40, H 6,42, N 7,85.

-27CZ 294674 B6

E) Způsob přípravy N,N'-di-Boc-S-methylizothiomočoviny

K míchanému roztoku di-terc-butyldikarbonátu (100 g, 458 mmol) v terc-butanolu (300 ml) se přidá roztok sulfátu bis-S-methylizothiomočoviny (32,7 g, 117 mmol) ve vodě (150 ml) a potom roztok hydroxidu sodného (19,2 g, 480 mmol) ve vodě (150 ml). Reakční směs se míchá po dobu 48 hodin, směs se odpaří na přibližně třetinu původního objemu za sníženého tlaku a zředí diethyletherem (500 ml). Organická fáze se promyje jednou vodou (250 ml), třikrát 1-normální kyselinou citrónovou (250 ml) a znovu jednou vodou (250 ml). Organická fáze se potom vysuší síranem hořečnatým, filtruje a odpaří za sníženého tlaku. Tak se dostane 42 g (62 %) bílé tuhé látky.

’H NMR spektrum

F) Způsob přípravy N⁸,N^g-di-Boc-agmatinu

K míchanému roztoku 1,4-butandiaminu (23 g, 258 mmol) ve směsi dimethylformamidu a vody v poměru 2:1 (300 ml) se přidá roztok N,N'-di-Boc-S-methylizothiomočoviny (15 g, 52 mmol) v dimethylformamidu (100 ml) přikapávací nálevkou. Vše se míchá po dobu 2 hodin, rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a odparek se rozpustí v 1-normální kyselině citrónové (250 ml), zředí vodou (250 ml) a promyje ethylacetátem (250 ml). Ethylacetátová fáze se zpětně extrahuje 1-normální kyselinou citrónovou (100 ml) a spojené vodné fáze se zalkalizují uhličitanem sodným, nasyceným tuhým chloridem sodným, a extrahují dvakrát ethylacetátem (250 ml). Spojené ethylacetátové extrakty se promyjí nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (200 ml), vysuší síranem hořečnatým, filtrují a odpaří. Tak se dostane 12,5 g (73 %) hustého sirupu.

*H NMR spektrum

G) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-Agm(Boc)₂

K míchanému roztoku N⁸,N^g-di-Boc-agmatinu (2 g, 6 mmol) v dichlormethanu (30 ml) se přidá EtSO₂-D-Phe-Pro-OH (2,1 g, 6 mmol), HOBT 810 mg, 6 mmol) a N,N-diizopropylethylamin (1,6 g, 12 mmol) a potom l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid-hydrochlorid (1,4 g, 73 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 20 hodin, roztok se zředí ethylacetátem (300 ml) a promyje třikrát 1-normální kyselinou citrónovou (150 ml), jednou vodou (150 ml) a dvakrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se potom vysuší síranem hořečnatým, filtruje a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se chromatografuje na silikagelu, při eluování stupňovitým gradientem směsi ethylacetátu a hexanů (v poměru 1:4) až ethylacetátem. Frakce obsahující připravovanou sloučeninu (stanoveno na základě chromatografie na tenké vrstvě) se spojí a odpaří, aby se dostalo 2,4 g (60 %) viskózního oleje.

’H NMR spektrum FD-MS, m/e 668 (MH⁺)

H) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-Agm.HCl

Míchaná suspenze EtSO₂-D-Phe-Pro-Agm(Boc)₂ (1,6 g, 2,4 mmol) v anisolu (1 ml) se rozpustí v kyselině trifluoroctové (20 ml) a nechá míchat po dobu 1 hodiny za teploty místnosti. Rozpouštědlo se potom odpaří za sníženého tlaku a odparek se rozdělí mezi vodu (100 ml) a diethylether (50 ml). Vodná fáze se promyje znovu diethyletherem (50 ml) a potom částečně odpaří a lyofilizuje. Dostane se 1,4 g soli, surového trifluoracetátu. Polovina této látky se potom rozpustí ve vodě a čistí vysoko účinnou kapalinovou chromatografií s reverzní fází (metoda 1, 98/2 (A/B), rampa k (stoupání nebo klesání na) 50/50 (A/B), 60 minut), aby se dostalo 490 mg (81 %) bílého prášku.

-28CZ 294674 B6 ‘Η NMR spektrum

FD-MS, m/e 467 (M⁺)

Analýza pro C21H34N6O4S.HCl.H2O:

vypočteno (%): C 48,41, H 7,16, N 16,13, Cl 6,80, nalezeno (%): C 48,01, H 6,81, N 16,15, Cl 6,97.

Příklad 2

EtŠO₂N-H

EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂C₆H₄C(NH)NH₂.HCl (hydrochloridN-(ethylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[4-(aminoiminomethyl)fenyl]methyl]-Lprolinamidu)

A) Způsob přípravy p-NH₂CH₂-C₆H₄CN.HCl

Plynný chlorovodík se probublává míchaným roztokem N-Boc-p-aminomethylbenzonitrilu (15 g, 64,6 mmol) v ethylacetátu (400 ml) za teploty 0 °C po dobu 10 minut. Chladicí lázeň se odstraní a vše se míchá po dobu 1,5 hodiny. Potom se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku a odparek se suspenduje v diethyletheru, filtruje, promyje diethyletherem a vysuší, aby se dostalo 10,1 g (93 %) bílé tuhé látky.

IČ spektrum ’H NMR spektrum

FD-MS, m/e 132 (M⁺)

Analýza pro C₈H₉N₂C1:

vypočteno (%): C 56,98, H 5,38, N 16,61, Cl 21,02, nalezeno (%): C 56,36, H 5,46, N 16,22, Cl 21,31.

B) Způsob přípravy EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH₂-C6H₄CN

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 1-G se připraví 1,5 g (80 %) EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂-C₆H₄CN z EtSO₂-D-Phe-Pro-OH a p-NH₂CH₂C₆H₄CN.HCl.

IČ spektrum 'H NMR spektrum

FD-MS, m/e 468 (M⁺)

-29CZ 294674 B6

Analýza pro C24H28N4O4S:

vypočteno (%): C 61,52, H 6,02, N 11,90, nalezeno (%): C 61,23, H 6,13, N 11,80.

C) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂C₆H₄C(=NOH)NH₂.HCl

K roztoku EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂C₆H₄CN (1 g, 2,1 mmol) v absolutním ethanolu (35 ml) se přidá N,N-diizopropylethylamin (0,47 ml, 2,7 mmol), potom hydroxylamin-hydrochlorid (185 mg, 2,7 mmol) a roztok se přivede k varu pod zpětným chladičem. Po 16 hodinách se roztok ochladí a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. 250 mg této látky se použije v následujícím stupni a zbývající látka se čistí vysoko účinnou kapalinovou chromatografií s reverzní fází (metoda 1, 90/10 (A/B), rampa k 60/40 (A/B), 200 minut).

IC spektrum ’H NMR spektrum

FD-MS, m/e 501 (M⁺)

Analýza pro C₂₄H₃iN₅O₅S.l,2HCl.H₂O:

vypočteno (%): C 51,17, H 6,12, N 12,42, Cl 7,55, nalezeno (%): C 51,04, H 5,81, N 12,39, Cl 7,18.

D) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl

K roztoku EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂C₆H₄C(=NOH)NH₂.HCl (250 mg, 0,52 mmol) v ethanolu (40 ml) a vodě (19 ml) se přidá 1-normální kyselina chlorovodíková (1 ml) a potom 5% palladium na uhlí (250 mg). Míchaná suspenze se umístí pod vodíkovou atmosféru na dobu 18 hodin a potom se filtruje, odpaří a čistí vysoko účinnou kapalinovou chromatografií s reverzní fází (metoda 1, 90/10 (A/B), rampa k 60/40 (A/B), 200 minut), aby se dostalo 140 mg (52 %) EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂-C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl.

IC spektrum ^!H NMR spektrum

FD-MS, m/e 486 (M⁺)

Analýza pro C₂₄H_3]N₅O₄S.HC1.1,5H₂O:

vypočteno (%): C 52,50, H 6,42, N 12,75, nalezeno (%): C 52,56, H 6,19, N 12,59.

-30CZ 294674 B6

Příklad 3

EtSOgN-H

NH₂ * ^HCÍ

NH

EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂-C₆H₄C(=NH)NH₂HCl

A) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂C₆H₄C(=NOH)NH₂

Způsoby v podstatě ekvivalentním jako jsou popsány v příkladu 2 se připraví EtSO₂-D-PhePro-m-NHCH₂C₆H₄C(=NOH)NH₂, za použití m-BrCH₂C₆H₄CN na místo p-BrCH₂C₆H₄CN. 140 mg (13 %) tohoto krystalického meziproduktu se zadrží a zbytek sloučeniny se vezme do stupně B.

'H NMR spektrum

FD-MS, m/e 502 (M⁺)

Analýza pro C₂₄H₃iN₅O₅S:

vypočteno (%): C 57,47, H 6,23, N 13,96, nalezeno (%): C 57,28, H 6,21, N 13,66.

B) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl

Způsoby v podstatě ekvivalentními jako jsou popsány v příkladech 2-C a 2-D se připraví 0,27 g (28 %, 2 stupně) EtS0₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl.

*H NMR spektrum

FD-MS, m/e 486 (M⁺)

Analýza pro C₂₄H₃₁N₅O₄S.1,1HC1.2H₂O:

vypočteno (%): C 51,32, H 6,48, N 12,47, Cl 6,94, nalezeno (%): C 51,33, H 6,09, N 12,20, Cl, 6,66.

-31 CZ 294674 B6

Příklad 4

• 2 HCI

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 2 se připraví 0,86 g D-l-Piq-Prom-NHCH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl z Cbz-D-l-Piq-Pro-OH a m-NH₂CH₂C₆H₄CN.HCl.

^]H NMR spektrum

FD-MS, m/z 412 (M⁺)

Analýza pro C₂3H33N₅O₂.2,5HC1.0,5H₂O:

vypočteno (%): C 53,99, H 7,19, N 13,69, nalezeno (%): C 54,19, H 7,02, N 13,81.

Příklad 5

• HCI

EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂CH₂-C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl

A) Způsob přípravy methyl-[p-kyan-trans-cinnamátu]

K míchané suspenzi natriumhydridu (6,1 g, 60% olejové suspenze, 153 mmol) a p-kyanbenzaldehydu (20 g, 153 mmol) v tetrahydrofuranu (250 ml) se za teploty 0 °C pomocí přikapávací nálevky přidá roztok trimethylfosfonoacetátu (28 g, 153 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml). Reakční směs se míchá po dobu 48 hodin, rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a surový odparek se rozpustí v ethylacetátu (500 ml). Ethylacetátový roztok se promyje jednou vodou, třikrát nasyceným vodným roztokem hydrogensiřičitanu sodného a jednou vodným roztokem chloridu sodného. Organická fáze se potom se vysuší síranem hořečnatým, filtruje a odpaří za sníženého tlaku, aby se dostalo 28 g (98 %) bílé tuhé látky.

IC spektrum 'H NMR spektrum

FD-MS, m/z 187 (M⁺)

-32CZ 294674 B6

B) Způsob přípravy methyl-[p-kyandihydrocinnamátu]

K roztoku methyl-[p-kyan-trans-cinnamátu] (13,6 g, 73 mmol) v toluenu (485 ml) se přidá 5% palladium na síranu barnatém (2,7 g). Po 9 hodinách pod plynným vodíkem za tlaku 400 kPa se roztok filtruje, odpaří za sníženého tlaku a chromatografuje na silikagelu, při elutování stupňovitým gradientem hexanů až 30% ethylacetátem v hexanech. Frakce obsahující připravovanou sloučeninu se spojí a odpaří. Dostane se 10,6 g (77 %) bezbarvého oleje.

IC spektrum *H NMR spektrum

FD-MS, m/z 189 (M⁺)

C) Způsob přípravy kyselinou p-kyandihydroskořicové

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 1-D se za použití 1,1 ekvivalentu hydrátu hydroxidu lithného připraví 5,1 g (58 %) kyseliny p-kyandihydroskořicové z methyl-[pkyandihydrocinnamátu].

IC spektrum 'H NMR spektrum FD-MS, m/z 175 (M⁺)

D) Způsob přípravy Boc-p-NHCH₂CH₂C₆H4CN

K roztoku kyseliny p-kyandihydroskořicové (6,7 g, 38,2 mmol) a triethylaminu (5,9 ml, 42 mmol) v terc-butanolu (150 ml) se přidá difenylfosforylazid (11,6 g, 42 mmol) a roztok se přivede kvaru pod zpětným chladičem. Reakční směs se míchá přes noc, roztok se ochladí a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí v ethylacetátu a promyje třikrát 1-normální kyselinou citrónovou, jednou vodným roztokem chloridu sodného, dvakrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom se vysuší síranem hořečnatým, filtruje a odpaří za sníženého tlaku. Odparek se potom chromatografuje na silikagelu, při eluování 10% ethylacetátem v hexanech až 50% ethylacetátem v hexanech. Frakce obsahující připravovanou sloučeninu (hodnoceno chromatografií na tenké vrstvě) se spojí a odpaří, aby se dostalo 5,4 g (57 %) bílé tuhé látky.

IC spektrum *H NMR spektrum

FD-MS, m/z 246 (M⁺)

Analýza pro Ci4Hi8N₂O₂:

vypočteno (%): C 68,27, H 7,37, N 11,37, nalezeno (%): C 68,39, H 7,50, N 11,40.

E) Způsob přípravy p-NH₂CH₂CH2C₆H₄CN.HCl

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 2-A se připraví 3,6 g (98 %) p-NH₂CH2CH₂C₆H₄CN.HCl.

’H NMR spektrum FD-MS, m/z 147 (M⁺)

-33 CZ 294674 B6

Analýza pro C9H11N2CI:

vypočteno (%): C 59,18, H 6,07, N 15,34, Cl 19,41, nalezeno (%): C 58,90, H 6,16, N 15,20, Cl 19,30.

F) Způsob přípravy EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH₂CH₂C₆H₄CN

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 1-G se připraví 1,5 g EtSO₂-DPhe-Pro-p-NHCH₂CH₂-C₆H₄CN z EtSO₂-D-Phe-Pro-OH a p-NH₂CH₂CH₂C₆H₄CN.HCl.

IC spektrum *Η NMR spektrum FD-MS, m/z 482 (M⁺)

G) Způsob přípravy EtSO₂-D-PhePro-p-NHCH₂CH₂C₆H₄C(=NOH)NH₂.HCl

K míchanému roztoku of EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂CH₂-C₆H₄CN (1 g, 2,07 mmol) a N,Ndiizopropylethylaminu (0,45 ml, 2,59 mmol) se přidá hydroxylamin-hydrochlorid (180 mg, 2,59 mmol) a roztok se přivede k varu pod zpětným chladičem. Po 18 hodinách se roztok ochladí, rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a odparek se rozpustí v kyselině octové (15 ml) a čistí vysoko účinnou kapalinovou chromatografíí s reverzní fází (metoda 2, 90/10 (A/B), rampa k 60/40 (A/B), 200 minut). Frakce obsahující čistý EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂CH₂C6H₄C(=NOH)NH₂.HC1, podle stanovení analytickou vysoko účinnou kapalinovou chromatografií s reverzní fází, se spojí, hodnota pH se upraví jak je uvedeno výše, a lyofílizují, aby se dostalo 0,35 g (31 %) EtSO₂-D-PhePro-p-NHCH₂CH₂C₆H₄C-(=NOH)NH₂.HCl.

’H NMR spektrum FD-MS, m/z 516 (M⁺)

Analýza pro C25H33N5O5S.HCl.H2O:

vypočteno (%): C 52,67, H 6,36, N 12,28, Cl 6,22, nalezeno (%): C 52,40, H 6,10, N 12,25, Cl 6,51.

H) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂CH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 2-D se připraví 0,098 g (50 %) EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂CH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl z EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂CH₂C₆H₄C(=NOH)NH₂.HC1.

*H NMR spektrum FD-MS, m/z 500 (M⁺)

Analýza pro C₂₅H33N₅O₄S.2,6HC1.H₂O:

vypočteno (%): C 49,03, H 6,19, N 11,44, nalezeno (%): C 48,87, H 5,79, N 11,15.

-34CZ 294674 B6

Příklad 6

EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH₂-C₆H4C(=NH)NH₂.HCl

A) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH₂C₆H₄C(=NOH)NH₂

Způsoby v podstatě ekvivalentními jako jsou popsány v příkladech 5-A až 5-E a 3-A se připraví 0,15 g EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH₂C₆H₄C(=NOH)NH₂ z m-kyanbenzaldehydu.

’H NMR spektrum

FD-MS, m/z 516 (M⁺)

Analýza pro C₂₅H3₃N₅O5S·.

vypočteno (%): C 58,23, H 6,45, N 13,50, nalezeno (%): C 57,99, H 6,57, N 13,28.

B) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 3-B se připraví 0,21 g (20%) EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl z EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH₂C₆H₄C(=NOH)NH₂.

*H NMR spektrum

FD-MS, m/z 500 (M⁺)

Analýza pro C₂₅H₃₃N₅O₄S.2,lHC1.0,7H₂O:

vypočteno (%): C 51,00, H 6,25, N 11,89, nalezeno (%): C 50,79, H 5,86, N 11,54.

-35 CZ 294674 B6

Příklad 7

• 2 HO!

D-l-Piq-Pro-p-NHCH₂CH₂-C₆H₄C(=NH)NH₂.2HCl

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 2 se připraví 0,85 g 1-Piq-Pro-pNHCH₂CH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.2HC1 z Cbz-D-l-Piq-Pro-OH ap-NH₂CH₂CH₂C₆H4CN.HCl.

'H NMR spektrum

FD-MS, m/z 426 (M⁺)

Analýza pro C₂₄H3₅N₅O₂.2HC1.2H₂O:

vypočteno (%): C 53,93, H 7,73, N 13,10, nalezeno (%): C 53,94, H 7,60, N 13,06.

Příklad 8

•2 HCI

D-l-Piq-Pro-m-NHCH₂CH₂-C₆H₄C(=NH)NH₂.2HCl

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 2 se připraví 0,8 g 1-Piq-Pro-mNHCH₂CH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.2HC1 z Cbz-D-l-Piq-Pro-OH a m-NH₂CH₂CH₂C₆H₄CN.HCl.

'H NMR spektrum

FD-MS, m/z 426 (M⁺)

Analýza pro C24H35N5O2.2HCl.2H2O: vypočteno (%): C 53,93, H 7,73, N 13,10, nalezeno (%): C 53,62, H 7,57, N 13,18.

-36CZ 294674 B6

Příklad 9

EtSO₂-D-Phe-Pro-p-NHCH₂CH₂CH₂-C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl

A) Způsob přípravy p-HOCH₂CH₂CH₂C₆H₄CN

K míchanému roztoku methyl-[p-kyandihydrocinnamátu] (10 g, 53 mmol) v tetrahydrofuranu (150 ml) se přidá lithiumborhydrid (1,15 g, 53 mmol) a roztok se vaří pod zpětným chladičem. Po 2 hodinách se roztok ochladí a přikape se k němu natriumfosfátový pufr (hodnota pH 7). Poté co je vývoj plynu ukončen, k roztoku se přidá ethylacetát a voda a vrstvy se oddělí. Vodná fáze se jednou extrahuje ethylacetátem a spojené ethylacetátové fáze se promyjí vodným roztokem chloridu sodného, potom se vysuší síranem hořečnatým, filtrují a odpaří, aby se dostalo 8,1 g (95 %) viskózního bezbarvého oleje.

IC spektrum 'H NMR spektrum

FD-MS, m/z 161 (M⁺)

B) Způsob přípravy p-BrCH₂CH₂CH₂C₆H₄CN

K míchanému roztoku p-HOCH₂CH2CH₂C6H₄CN (8,1 g, 50 mmol) v tetrahydrofuranu (100 ml) se přidá trifenylfosfín (14,4 g, 55 mmol) a potom bromid uhličitý (18,2 g, 55 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 18 hodin, rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a odparek se chromatografuje na silikagelu, při eluování stupňovitým gradientem hexanů až 20% ethylacetátem v hexanech. Frakce obsahující připravovanou sloučeninu (hodnoceno chromatografií na tenké vrstvě) se spojí a odpaří, aby se dostalo 7,3 g (65 %) viskózního bezbarvého oleje.

IČ spektrum ^]H NMR spektrum

FD-MS, m/z 223 (M⁺)

Analýza pro Ci₀H₁₀BrN:

vypočteno (%): C 53,60, H 4,50, N 6,25, nalezeno (%): C 53,90, H 4,67, N 6,24.

C) Způsob přípravy p-Boc₂NCH₂CH₂CH₂C6H₄CN

K míchané suspenzi natriumhydridu (1,4 g, 60% olejové disperze, 34 mmol) v dimethylformamidu (100 ml) se přikape roztok di-terc-butyliminodikarboxylátu (7,4 g, 34 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) pomocí přikapávací nálevky. Poté co vývoj plynu ustane, přidá se roztok p-BrCH₂CH₂CH₂C6H₄CN (7 g, 31 mmol) v dimethylformamidu pomocí přikapávací nálevky a roztok se zahřívá na teplotu 70 °C. Reakční směs se míchá po dobu 12 hodin, roztok se ochladí a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí v diethyletheru a třikrát promyje vodou. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým, filtruje, odpaří a odparek se chromatografuje na silikagelu, při eluování hexany až 20% ethylacetátem v hexanech. Frakce

-37CZ 294674 B6 obsahující připravovanou sloučeninu se spojí a odpaří, aby se dostalo 9,38 g (84 %) bílé tuhé látky.

IČ spektrum ’H NMR spektrum

FD-MS, m/z 361 (M⁺)

Analýza pro C20H28N2O4:

vypočteno (%): C 66,64, H 7,83, N 7,77, nalezeno (%): C 66,40, H 7,81, N 7,57.

D) Způsob přípravy P-NH2CH2CH2CH2C6H4CN.HCI

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 2-A se připraví 4,3 g (84 %) p-NH₂CH2CH2CH₂C₆H₄-CN.HCl.

IČ spektrum ^]H NMR spektrum

FD-MS, m/z 160 (M⁺)

E) Způsob přípravy EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH₂CH2CH₂C₆H4C(=NOH)-NH2.HCl

Způsoby v podstatě ekvivalentními jako jsou popsány v příkladech 1-G a 5-G se připraví 0,32 g EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH₂CH2C₆H₄C(=N0H)NH2.HCl z EtSO₂-D-Phe-Pro-OH a p-NH-CH₂CH₂CH₂C₆H4CN.HCl.

'Η NMR spektrum

FD-MS, m/z 530 (M⁺)

Analýza pro C26H₃₅N₅O5S.1,2HC1.H₂O:

vypočteno (%): C 52,88, H 6,51, N 11,84, nalezeno (%): C 52,71, H 6,26, N 11,76.

F) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pr&-p-NHCH₂CH2CH2C₆H₄C(=NH)-NH2.HCl

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 2-D se připraví 0,13 g (67 %) EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH₂CH2CH2C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl z EtSO₂-D-Phe-Pro-pNHCH₂CH₂CH₂C₆H4C(=NOH)NH2.HC1.

¹II NMR spektrum

FD-MS, m/z 514 (M⁺)

Analýza pro C26H₃₅N₅O4S.1,5HC1.2H₂O:

vypočteno (%): C 51,67, H 6,75, N 11,59, nalezeno (%): C 51,36, H 6,46, N 11,28.

-38 CZ 294674 B6

EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH₂CH₂-C₆H4C(=NH)NH₂.HCl

A) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH₂CH₂C₆H₄C(=NOH)-NH2.HCl

Způsoby v podstatě ekvivalentními jako jsou popsány v příkladech 1-G a 5-G se připraví 0,32 g EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH2CH₂C₆H4C(=NOH)NH2.HCl z kyseliny m-kyandihydroskořicové.

'Η NMR spektrum

FD-MS, m/z 530 (M⁺)

Analýza pro CzeHjsNjOsS.HCl.UIW:

vypočteno (%): C 53,30, H 6,57, N 11,95, Cl 6,05, nalezeno (%): C 52,97, H 6,19, N 11,96, Cl 6,13.

B) Způsob přípravy EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH₂CH₂C₆H₄C(=NH)-NH2.HCl

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 2-D se připraví 0,12 g (62 %) EtSO₂-D-Phe-Pro-m-NHCH₂CH₂CH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl z EtSO₂-D-Phe-Pro-mNHCH₂CH₂CH₂C₆H₄C(=NOH)NH₂.HC1.

’H NMR spektrum

FD-MS, m/z 514 (M⁺)

Analýza pro C₂₆H₃₅N₅O₄S.1,5HC1.H₂O:

vypočteno (%): C 53,26, H 6,62, N 11,94, nalezeno (%): C 53,19, H 6,25, N 12,00.

-39CZ 294674 B6

Příklad 11

•2 HCI l-Piq-Pro-p-NHCH₂CH₂CH₂-C₆H₄C(-NH)NH₂.2HCl

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 2 se připraví 0,66 g (48 %) l-Piq-Pro-p-NH-CH₂CH₂CH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl z 1-Piq-Pro-OH a p-NH₂CH₂CH₂CH₂C₆H₄CN.HC1.

*H NMR spektrum

FD-MS, m/z 440 (M⁺)

Analýza pro C₂5H37N₅O₂.2,1HC1.H₂O:

vypočteno (%): C 56,21, H 7,75, N 13,11, nalezeno (%): C 56,36, H 7,44, N 12,79.

l-Piq-Pro-m-NHCH₂CH₂CH₂-C₆H₄C(=NH)NH₂.2HCl

Způsobem v podstatě ekvivalentním jako je popsán v příkladu 2 se připraví 0,64 g (46 %) l-Piq-Pro-m-NH-CH₂CH₂CH₂C₆H₄C(=NH)NH₂.HCl z 1-Piq-Pro-OH a m-NH₂CH₂CH₂CH₂C₆H₄CN.HC1.

*H NMR spektrum

FD-MS, m/z 440 (M⁺)

Analýza pro C₂5H₃₇N5O₂.HC1.H₂O:

vypočteno (%): C 56,60, H 7,79, N 13,20, nalezeno (%): C 56,92, H 7,55, N 13,26.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu se považují za látky, které selektivně inhibují trombin v rozsahu větším než jiné proteinázy a neenzymové proteiny zapojené do koagulace krve bez znatelného bránění tomu, aby se projevila schopnost lýzy přirozené sraženiny v těle (sloučeniny

-40CZ 294674 B6 mají nízký inhibiční účinek k fíbrinolýze). Kromě toho se předpokládá, že taková selektivita dovoluje používat trombolytické přípravky bez podstatného vzájemného ovlivňování trombolýzou a fíbrinolýzou. Mimo to se sloučeniny podle tohoto vynálezu pokládají za orálně aktivní.

Inhibice trombinu, očekávaná při způsobu podle tohoto vynálezu, zahrnuje medicinální terapeutické a/nebo profylaktické ošetřování, jak je to přiměřené.

Další provedení tohoto vynálezu se týká ošetřování stavů u člověka nebo u zvířat, kdy se vyžaduje inhibice trombinu. U sloučenin podle tohoto vynálezu se předpokládá, že jsou vhodné pro živočichy včetně člověka, k ošetřování nebo profylaxi trombózy a hyperkoagulovatelnosti v krvi a tkáních. Chorobné stavy, při kterých sloučeniny nacházejí potenciální použití, jsou při ošetřování nebo profylaxi trombózy a hyperkoagulovatelnosti v krvi a ve tkáních.

Chorobné stavy, při kterých sloučeniny mají potenciální použití při ošetřování a/nebo profylaxi, zahrnují žilní trombózu, plicní embolie, arteriální trombózy, jako je ischemie myokardu, infarkt myokardu, nestabilní angína, mrtvice na bázi trombózy a periferní arteriální trombóza. Kromě toho sloučeniny mají očekávané použití při profylaxi aterosklerotických chorob, jako je koronární arteriální choroba, cerebrální arteriální choroba a periferní arteriální choroba. Mimo to se očekává, že sloučeniny jsou vhodné dohromady s trombolytiky při ošetřování infarktu myokardu. Dále se očekává, že sloučeniny najdou použití při ošetřování nebo profylaxi reokluze po trombolýze, perkutánní transluminální angioplastice (PTCA) a koronárních operacích bypassem. Kromě toho se očekává, že sloučeniny najdou použití při prevenci retrombózy po mikrochirurgickém zákroku. Dále se očekává, že sloučeniny budou vhodné pro antikoagulační ošetření v souvislosti s umělými orgány a srdečními chlopněmi. Ještě dále se předpokládá, že sloučeniny najdou použití při antikoagulačním ošetření při hemodialýze a roztroušené intravaskulámí koagulaci. Další očekávané použití spočívá v proplachování katétrů a mechanických přístrojů, používaných v pacientovi in vivo, a v použití jako antikoagulant pro ochranu krve, plazmy a jiných krevních produktů in vitro. Ještě dále se očekává, že sloučeniny mají neočekávané použití při jiných chorobách, kde koagulace krve by mohla být procesem, který zásadně přispívá nebo je zdrojem sekundární patologie, jako je rakovina, včetně metastáz, a jako jsou zánětlivá onemocnění, včetně artritidy a diabetes. Antikoagulačně účinné sloučeniny se podávají orálně nebo parenterálně, například intravenózní infuzí (i.v.), intramuskulámí injekcí (i.m.) nebo subkutánní injekcí (s.c.).

Zvláštní dávka sloučeniny podávané podle tohoto vynálezu k docílení terapeutických a/nebo profylaktických účinků bude, samozřejmě, určena zvláštními okolnostmi obklopujícími případ, včetně například podávané sloučeniny, rychlosti podávání a stavu určeného k ošetřování.

Obvyklá denní dávka pro každé zvýše uvedených použití je mezi přibližně 0,01 a zhruba 1000 mg/kg. Dávkový režim se může měnit a například k profylaktickému použití se může podávat jediná denní dávka nebo větší počet dávek, jako třikrát až pětkrát denně. V kritických situacích péče se sloučenina podle tohoto vynálezu podává intravenózní infuzí v množství od přibližně 0,01 mg/kg/h do zhruba 20 mg/kg/h a výhodně od přibližně 0,1 mg/kg/h do zhruba 5 mg/kg/h.

Způsob podle tohoto vynálezu se také provádí ve spojení s činidlem lýzujícím sraženinu, například s plazminogenním aktivátorem tkáně (t-PA), modifikovaným t-PA, streptokinázou nebo urokinázou. V případě, kdy nastane tvorba sraženiny a ucpe se žíla nebo céva, buď částečně, nebo úplně, obvykle se používá přípravek lýzující sraženinu. Sloučenina podle tohoto vynálezu se může podávat před nebo společně s lýzujícím přípravkem anebo následně po použití lýzujícího přípravku, samotná a výhodně podávaná společně s aspirinem, aby se zabránilo novému výskytu tvorby sraženiny.

Způsob podle tohoto vynálezu se také provádí v souvislosti s agonistou glykoproteinového receptoru (Ilb/IIIa) krevních destiček, který inhibuje agregaci krevních destiček. Sloučenina

-41 CZ 294674 B6 podle tohoto vynálezu se může podávat před nebo společně s antagonistou Ilb/IIIa nebo následně po jeho použití, aby se zabránilo novému výskytu tvorby sraženiny.

Způsob podle tohoto vynálezu se také v praxi provádí ve spojení s aspirinem. Sloučenina podle tohoto vynálezu se může podávat před nebo společně s aspirinem nebo následně po jeho použití, k prevenci nového výskytu tvorby sraženiny. Jak již bylo uvedeno výše, s výhodou se sloučenina podle tohoto vynálezu podává dohromady s přípravkem lýzujícím sraženinu a s aspirinem.

Tento vynález také poskytuje farmaceutické prostředky pro použití při výše popsaných terapeutických způsobech. Farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu obsahují sloučeninu obecného vzorce I, v množství účinně inhibujícím trombin, společně s farmaceuticky přijatelnou nosnou látkou, pomocnou látkou nebo ředidlem. Pro orální podávání se antitromboticky účinná sloučenina zpracovává na želatinové kapsle nebo tablety, které mohou obsahovat pomocné látky, jako jsou pojivá, maziva, látky napomáhající rozpadu a podobně. Pro parenterální podání se antitrombotikum zpracovává ve farmaceuticky přijatelném ředidle, například fyziologickém roztoku chloridu sodného (0,9 %), 5% dextróze, Ringerově roztoku a podobně.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu se mohou zpracovávat na prostředky ve formě dávkové jednotky, které obsahují dávku od přibližně 0,1 do zhruba 1000 mg. Výhodně je sloučenina ve formě farmaceuticky přijatelné soli, jakou je například sulfát, acetát nebo fosfát. Například prostředek v dávkové jednotce obsahuje 5 mg sloučeniny podle tohoto vynálezu, jako farmaceuticky přijatelné soli, ve sterilní skleněné ampuli o objemu 10 ml. Jiný příklad prostředku v dávkové jednotce tvoří přibližně 10 mg sloučeniny podle tohoto vynálezu, jako farmaceuticky přijatelné soli, ve 20 ml izotonického fyziologického roztoku, obsažené ve sterilní ampuli.

Sloučeniny se mohou podávat různými cestami, včetně orální, rektální, transdermální, subkutánní, intravenózní, intramuskulární a intranasální. Sloučeniny podle tohoto vynálezu se výhodně formulují před podáním. Proto jiným ztělesněním tohoto vynálezu je farmaceutický prostředek, který obsahuje účinné množství sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího solvátu, dohromady s farmaceuticky přijatelnou nosnou látkou, ředidlem nebo pomocnou látkou.

Účinná látka v takových prostředcích tvoří od 0,1 do 99,9 % hmotnostních prostředku. Výraz „farmaceuticky přijatelný“ znamená, že nosná látka, ředidlo nebo pomocná látka musí být kompatibilní s jinými složkami prostředku a nesmí mít zhoubný vliv na svého příjemce.

Farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu se připravují známými způsoby, které používají dobře známé a snadno dostupné složky. Při přípravě prostředků podle tohoto vynálezu se aktivní složka obvykle míchá s nosnou látkou nebo ředí nosnou látkou nebo uzavírá v nosné látce, která může být ve formě kapsle, sašety, papíru nebo jiného zásobníku. Pokud nosná látka slouží jako ředidlo, může jít o tuhý, polotuhý nebo kapalný materiál, který působí jako vehikulum, excipient nebo prostředí pro aktivní složku. Tak prostředky mohou být ve formě tablet, pilulek, prášků, pastilek, sašetů, kašetů, elixírů, suspenzí, emulzí, roztoků, sirupů, aerosolů (jako tuhé nebo kapalné prostředí), měkkých a tvrdých želatinových kapslí, čípků, sterilních injekčních roztoků, sterilních balených prášků a podobně. Prostředky podle tohoto vynálezu se mohou zpracovávat tak, že poskytují rychlé, trvalé nebo odložené uvolňování účinné složky po podání pacientovi, za použití způsobů, které jsou dobře známé v oboru.

Dále uvedené příklady jsou pouhou ilustrací a žádným způsobem nejsou zamýšleny jako omezení rozsahu tohoto vynálezu. „Aktivní složka“ samozřejmě znamená sloučeninu obecného vzorce 1 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její solvát.

-42CZ 294674 B6

Prostředek 1

Tvrdé želatinové kapsle se připravují za použití těchto složek:

Množství (mg/kapsle)

Aktivní složka	250
Škrob,sušený	200
Stearát hořečnatý	10
Celkem	460 mg
Prostředek 2
Tablety se připravují za použití těchto složek:
	Množství (mg/kapsle)
Aktivní složka	250
Celulóza, mikrokrystalická	400
Oxid křemičitý, odkouřený	10
Kyselina stearová	5
Celkem	665 mg
Složky se smíchají a slisují do formy tablet, z nichž každá má hmotnost 665 mg.
Prostředek 3
Připravuje se aerosolový roztok, který obsahuje tyto složky:
	Hmotnost
Aktivní složka	0,25
Ethanol	25,75
Propelen 22 (chlordifluormethan)	70,00
Celkem	100,00
Aktivní sloučenina se smíchá s ethanolem a směs se po částech uvede do styku s propelentem 22,
ochladí na teplotu -30 °C a přenese do plnicího zařízení. Požadované množství se potom dávkuje
do zásobníků z nerezavějící oceli a ředí zbytkem propelentu. Zásobník se potom opatří venti-
lovou jednotkou.
Prostředek 4
Tablety, z nichž každá obsahuje 60 mg aktivní složky, se připraví takto:
Aktivní složka	60 mg
Škrob	45 mg
Celulóza, mikrokrystalická	35 mg
Polyvinylpyrrolidon
(jako 10% roztok ve vodě)	4 mg
Natriumkarboxymethylovaný škrob	4,5 mg
Stearát hořečnatý	0,5 mg
Mastek	1 mg
Celkem	150 mg

Aktivní složka, škrob a celulóza se protlučou sítem s rozměrem částice 0,314 mm (No. 45 mesh U.S. sieve) a důkladně smíchají. K výslednému prášku se přimíchá vodný roztok, který obsahuje polyvinylpyrrolidon, a směs se potom protluče sítem s rozměrem částice 1,168 mm (No. 14 mesh

-43 CZ 294674 B6

U.S. sieve). Granule takto připravené se vysuší za teploty 50 °C a protlučou sítem s rozměrem částice 0,962 mm (No. 18 mesh U.S. sieve). Natriumkarboxymethylovaný škrob, stearát hořečnatý a mastek, dříve protlučené sítem s rozměrem částice 0,246 mm (No. 60 mesh U.S. sieve), se potom přidají ke granulím, které se po smíchání slisují na tabletovacím přístroji za vzniku tablet, z nichž každá má hmotnost 150 mg.

Prostředek 5

Kapsle, z nichž každá obsahuje 80 mg aktivní složky, se připraví takto:

Aktivní složka Škrob Celulóza, mikrokrystalická Stearát hořečnatý Celkem

80 mg 59 mg 59 mg 2 mg 200 mg

Aktivní složka, celulóza, škrob a stearát hořečnatý se smíchají, protlačí sítem s rozměrem částice 0,314 mm a plní do tvrdých želatinových kapslí v množství 200 mg.

Prostředek 6

Cípky, z nichž každý obsahuje 225 mg účinné složky, se připraví takto:

Aktivní složka Glyceridy nasycených mastných kyselin Celkem

225 mg 2000 mg 2225 mg

Aktivní složka se protluče sítem s rozměrem částice 0,246 mm a suspenduje v glyceridech nasycených mastných kyselin, předem roztavených za použití minimálně nezbytného tepla. Směs se potom vylije do čípkových forem o nominální kapacitě 2 g a nechá vychladnout.

Prostředek 7

Suspenze, obsahující vždy 50 mg aktivní složky na dávku o objemu 5 ml, se připraví takto:

Aktivní složka Natriumkarboxymethylcelulóza Sirup Roztok kyseliny benzoové Ochucovadlo Barvivo Čištěná voda do celkem

50 mg 50 mg 1,25 ml 0,10 ml podle potřeby podle potřeby 5 ml

Aktivní složka se protluče sítem s rozměrem částice 0,314 mm a míchá s natriumkarboxymethylcelulózou a sirupem, aby vznikla hladká pasta. Roztok kyseliny benzoové, ochucovadla a barviva se zředí částí vody a vzniklá směs se za míchání zavede do hmoty připravené jak uvedeno výše. K dosažení požadovaného objemu se potom přidá dostatek vody.

Prostředek 8

Intravenózní prostředek se může připravit jak je uvedeno dále:

Aktivní složka Izotonický roztok NaCl

100 mg 1000 ml

-44CZ 294674 B6

Roztok výše uvedených složek se obecně podává intravenózní cestou pacientovi v množství 1 ml za minutu.

Sloučeniny (obecného vzorce I) poskytnuté tímto vynálezem jsou orálně aktivní a selektivně inhibují účinek trombinu u savců.

Schopnost sloučenin podle tohoto vynálezu být účinným a orálně aktivním inhibitorem trombinu se hodnotí alespoň jedním z dále popsaných testů.

Inhibice trombinu je doložena inhibicí in vitro amidázové aktivity trombinu, jak se stanoví testem, při kterém trombin hydrolyzuje chromogenní substrát, N-benzoyl-L-fenylalanyl-Lvalyl-L-arginyl-p-nitroanilid.

Test se provádí tím, že se smíchá 50 μΐ pufru (0,03 M Tris, 0,15 M chloridu sodného, hodnota pH 7,4) s 25 μΐ roztoku hovězího nebo lidského trombinu (0,21 mg/ml trombostatového hovězího trombinu (Parke-Davis) nebo čištěného lidského trombinu (Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana, USA) s přibližně 8 NIH jednotkami na ml, ve stejném pufru) a 25 μΐ testované sloučeniny v rozpouštědle (v 50% vodném methanolu, uvedeno objemově). K této směsi se přidá 150 μΐ vodného roztoku chromogenního substrátu a rychlosti hydrolýzy substrátu se měří sledováním reakcí uvolňování p-nitroanilin při vlnové délce 405 nm. Vynesením koncentrace volného trombinu proti rychlosti hydrolýzy se sestrojí normalizované křivky. Rychlost hydrolýzy pozorovaná s testovanými sloučeninami potom konvertuje k hodnotám „volného trombinu“ u příslušných testů za použití normalizovaných křivek. Vázaný trombin (vázaný na testovanou sloučeninu) se vypočítá odečtením množství volného trombinu, pozorovaného při každém testu, od známého počátečního množství trombinu, použitého při testu. Množství volného inhibitoru při každém testu se vypočítá odečtením počtu mol vázaného trombinu od počtu mol přidaného inhibitoru (testované sloučeniny).

Hodnota Kass představuje konstantu hypotetické rovnováhy pro reakci mezi trombinem a testovanou sloučeninou obecného vzorce I.

trombin +1------> trombin — I <-(trombin -1)

Kass =------------[(trombin) x (I)]

Kass je vypočítán pro rozmezí koncentrací testovaných sloučenin a střední hodnota je uváděna v jednotkách litr na mol.

V podstatě způsoby popsanými výše pro lidský trombin a za použití jiného koagulačního systému lidské krve serin proteázy a proteázy fíbrinolytického systému s příslušnými chromogenními substráty identifikovanými jak uvedeno dále, se zjistí selektivita sloučenin podle tohoto vynálezu s ohledem na koagulační faktor serin proteázy a s ohledem na fibrinolytický systém serin proteázy, stejně jako jejich v podstatě chybějící rušivý vliv se serin proteázami fíbrinolytického systému. Inhibitory trombinu mají nahradit fybrinolýzu vyvolanou urokinázou, plazminogenním aktivátorem tkáně (t-PA) a streptokinázou. To je důležité pro terapeutické použití takových přípravků, jako doplňku ke streptokinázové, t-PA nebo urokinázové trombolytické terapii a k použití takových přípravků jako endogenního, fibrinolýzu omezujícího (s ohledem na t-PA a urokinázu) antitrombotického přípravku. Kromě toho při chybějícím rušivém vlivu s amidázovou aktivitou fibrinolytické proteázy se takový fybrinolytický systém může studovat za použití sraženin lidské plazmy a její lýzy příslušnými fibrinolytickými plazmogenními aktivátory.

-45CZ 294674 B6

Lidské faktory X, Xa, IXa, Xla a Xlla se dají zakoupit od Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana, USA, lidská urokináza od Leo Pharmaceuticals, Dánsko, a rekombinantní aktivovaný protein C (aPC) je připravován společností Eli Lilly and Co. v podstatě podle 5 US 4 981 952. Chromogenní substráty N-benzoyl-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilid (pro faktor

Xa), N-Cbz-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilid (pro faktorový IXa test jako faktorový Xa substrát), pyroglutamyl-Pro-Arg-p-nitroanilid (pro faktor Xla a pro aPC), H-D-Pro-Phe-Arg-pnitroanilid (pro faktor Xlla) a pyroglutamyl-Gly-Arg-p-nitroanilid (pro urokinázu) se dají zakoupit od Kabi Vitrum, Stockholm, Švédsko nebo od Midwest Biotech, Fishers, Indiana, USA.

Hovězí trypsin prodává Worthington Biochemicals, Freehold, New Jersey, USA a kalikrein z lidské plazmy se dá získat od Kabi Vitrum, Stockholm, Švédsko. Chromogenní substráty H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitroanilid pro plazmový kalikrein je dá zakoupit od Kabi Vitrum, Stockholm, Švédsko. N-Benzoyl-Phe-Val-Arg-p-nitroanilid, substrát pro lidský trombin a pro trypsin se syntetizuje způsoby popsanými výše pro sloučeniny podle tohoto vynálezu, za použití 15 způsobů pro kondenzaci peptidů z komerčně dostupných reakčních složek, nebo se dá zakoupit od Midwest Biotech, Fishers, Indiana, USA.

Lidský plazmin se dá zakoupit od firmy Boehringer Mannheim, Indianapolis, Indiana, USA, nt-PA je prodáván jako jednořetězcová aktivní látka od Američan Diagnostica, Greenwich, 20 Connecticut, USA, modifikovaný t-PA6 (mt-PA6) připravuje Eli Lilly and Company způsobem známým v oboru (viz Burek a kol., J. Biol. Chem., 265, 5120-5177 /1990/). Plazmidový chromogenní substrát H-D-Val-Leu-Lys-p-nitroanilid a tkáňový plazminogenní aktivátorový (t-PA) substrát H-D-Ile-Pro-Arg-p-nitroanilid je na prodej u firmy Kabi Vitrum, Stockholm, Švédsko.

V chromogenní substrátech popsaných výše se používají třípísmenové symboly Ile, Glu, Gly, Pro, Arg, Phe, Val, Leu a Lys k označení odpovídajících skupin odvozených od aminokyselin, a to izoleucinu, kyseliny glutamové, glycinu, prolinu, argininu, fenylalaninu, valinu, leucinu a lysinu.

V tabulce 1 zařazené dále jsou zaznamenány získané hodnoty Kass, které vykazují sloučeniny představované obecným vzorcem I.

Tabulka 1

Inhibiční vlastnosti

Kass x 10⁶ (1/mol)

Lidský

Příklad	trombin	Xa	Trypsin	Plazmin	t-PA
1	3,3	0,0017	0,38	0,010	0,082
2	770	0,14	21	0,44	0,31
3	0,78	<0,001	0,03	<0,001	<0,001
4	0,43	<0,001	0,01	<0,001	0,01
5	13,0	0,01	0,21	0,01	0,01
6	0,29	0,02	0,02	<0,001	0,02
7	0,95	0,01	0,11	<0,001	<0,001
8	0,76	0,02	0,02	<0,001	<0,001
9	0,55	0,02	0,03	<0,001	<0,001
10	0,07	0,14	0,05	<0,001	<0,001
11	0,13	0,03	0,04	<0,001	0,01
12	0,04	0,04	0,02	<0,001	<0,001
Je vhodné si povšimnout, že nečekaně sloučeniny, ve kterých alanylovou část, mají zlepšenou schopnost inhibice trombinu a	X obsahuje D-cyklohexylprojevují zvláště překvapivě

-46CZ 294674 B6 zvýšenou schopnost inhibice faktoru Xa, v porovnání například s odpovídajícími sloučeninami, ve kterých X obsahuje D-fenylalanylovou část.

Materiály

Psí plazma se získává z loveckých psů smíšeného chovu, kteří jsou udržováni při vědomí (obého pohlaví Hazelton-LRE, Kalamazoo, Michigan, USA) venepunkcí do 3,8% citrátu. Fibrinogen se připravuje z čerstvé psí plazmy a lidský fibrinogen se připravuje z čerstvé ACD lidské krve ve frakci 1-2 podle dřívějších postupů a technických podmínek (Smith, Biochem. J., 185, 1-11 /1980/ a Smith a kol., Biochemistry, 11, 2958-2967 /1972/). Lidský fibrinogen (98% čistota, zbaven plazminu) je od Američan Diagnostica, Greenwich, Connecticut, USA. Radioaktivní značení fíbrinogenových 1-2 přípravků se provádí jak již bylo popsáno (Smith a kol., Biochemistry, 11, 2958-2967 /1972/). Urokináza je zakoupena od Leo Pharmaceuticals, Dánsko, jako 2200 Ploug jednotek na skleničku. Streptokináza je zakoupena od Hoechst-Roussel Pharmaceutical, Somerville, New Jersey, USA.

Metody - účinky na lýzu lidských plazmových sraženina působením t-PA

Sraženina lidské plazmy se vytváří v mikrotestovacích zkumavkách přidáním 50 μΐ trombinu (73 NIH jednotek/ml) do 100 μΐ lidské plazmy, která obsahuje fibrinogen značený ¹²⁵I o aktivitě 874,3 s“¹. Lýza sraženiny se studuje tím, že se sraženina převrství 50 μΐ urokinázy nebo streptokinázy (50, 100 nebo 1000 jednotek/ml) a inkubuje po dobu 20 hodin za teploty místnosti. Po inkubaci se zkumavky odstřeďují na mikroodstředivce Beckman Microcentrifuge. 25 μΐ supernatantu se přidá do 1,0 ml 0,03 M Tris/0,15 M NaCl pufru pro τ čítání. Kontrolní čítání v úrovni 100 % lýzy se dostane při vypuštění trombinu (a nahrazujícího pufru). Trombinové inhibitory se hodnotí na možný vzájemný vliv s fibrinolýzou tím, že se zahrnou sloučeniny v převrstvujících roztocích při koncentracích 1, 5 a 10 pg/ml. Hrubá aproximace hodnot IC50 se stanoví lineární extrapolací z experimentálních bodů k hodnotě, která by představovala 50 % lýzy pro zvláštní koncentraci fybrinolytického přípravku.

Antikoagulační aktivita

Materiály

Psí plazma se získává z loveckých psů smíšeného chovu, kteří jsou udržováni při vědomí (obého pohlaví Hazelton-LRE, Kalamazoo, Michigan, USA) a krysí plazma se získává z anestetizovaných samčích krys kmene Sprague-Dawley (Harlan Sprague-Dawley, lne., Indianapolis, Indiana, USA) venepunkcí do 3,8% citrátu. Fibrinogen se připravuje z čerstvé ACD lidské krve jako frakce 1-2 podle dřívějších postupů a technických podmínek (Smith, Biochem. J., 185, 1-11 /1980/ a Smith a kol., Biochemistry, 11, 2958-2967 /1972/). Lidský fibrinogen je také ke koupi jako 98% čistý a zbavený plazminu od Američan Diagnostica, Greenwich, Connecticut, USA. Koagulační reagencie ACTIN, Tromboplastin, a lidská plazma jsou od Baxter Healthcare Corp., Dade Division, Miami, Florida, USA. Hovězí trombin od Parke-Davis (Ann Detroit, Michigan, USA) se používá pro koagulační testy v plazmě.

Metody

Stanovení antikoagulačního účinku

Postupy testování koagulace byly již dříve popsány (Smith a kol., Thrombosis Research, 50, 163-174 /1988/). Koagulační zařízení CoAScreener (Američan LABor, lne.) se používá na všechna měření při testu koagulace. Protrombinová doba (PT) se měří přidáním 0,05 ml fyziologického roztoku a 0,05 ml reakčního přípravku Tromboplastin-C k 0,05 ml testované plazmy. Doba částečně aktivovaného tromboplastinu (APTT) se stanovuje inkubací 0,05 ml

-47CZ 294674 B6 testované plazmy s 0,05 ml reagencie ACTIN po dobu 120 sekund a potom přidáním 0,05 ml chloridu vápenatého (0,02 M). Trombinová doba (TT) se měří přidáním 0,05 ml fyziologického roztoku a 0,05 ml trombinu (10 NIH jednotek/ml) k 0,05 ml testované plazmy. Sloučeniny obecného vzorce I se přidají k lidské nebo zvířecí plazmě v širokém rozmezí koncentrací, ke stanovení prodloužených účinků na APTT, PT a TT testy. Lineární extrapolace se provádějí ke stanovení koncentrací vyžadovaných pro zdvojení doby sraženiny pro každý test.

Zvířata

Samčí krysy kmene Sprague-Dawley (o hmotnosti 350 až 425 g, Harlan Sprague-Dawley lne., Indianapolis, Indiana, USA) se anestetizují xylazinem (20 mg/kg, subkutánně) a ketaminem (120 mg/kg, subkutánně) a udržují na desce vyhřívané teplou vodou (teplota 37 °C). Do jugulámí žíly nebo jugulárních žil se zavede kanyla, aby se umožnila infuze.

Arteriovenózní model odklonění

Do levé jugulární žíly a do pravé karotické tepny se zavede kanyla, s délkou 20 cm z polyethylenové (PE 60) trubice. 6-centimetrová středová sekce delší (PE 190) trubice s bavlněných vláknem (5 cm) v průchodu se třením umístí mezi delší úseky ke kompletaci arteriovenózního okruhu odklonění. Krev cirkuluje okruhem po dobu 15 minut předtím, než se vlákno pečlivě odstraní a stanoví se jeho hmotnost. Hmotnost mokrého vlákna se odečte od celkové hmotnosti vlákna a trombusu (viz J. R. Smith, Br. J. Pharmacol., 77, 29 /1982/).

Jestliže se sloučenina z příkladu 48 porovná s D-MePhe-Pro-Arg-H (diskutováno výše, na začátku popisné části) při arteriovenózním modelu odklonění, zjistí se, že antitrombotický účinek je devětkrát větší během nepřetržité intravenózní infuze. Ke snížení hmotnosti trombusu ve stejném rozsahu (na přibližně 20 % kontrolní hodnoty), sloučenina z příkladu 48 prodlužuje trombinovou dobu v plazmě přibližně třikrát, zatímco trombinová doba v plazmě je prodloužena více než dvacetkrát během infuze standardní sloučeniny. Protrombinová doba a APTT jsou rozšířeny pouze na přibližně 120 % kontrolního stanovení (na několik sekund) během infuze sloučeniny z příkladu 48.

Model arteriálního poškození chloridem železitým

Karotické tepny se izolují pomocí středové ventrální cervikální incize. Termočlánek se umístí pod každou tepnu a teplota v cévě se nepřetržitě zaznamenává liniovým zapisovačem. Manžeta trubice (0,058 vnitřní průměr x 0,077 vnější průměr x 4 mm, Baxter Med. Grade Silicone), naříznutá podélně, se umístí okolo každé karotidy a to přímo nad termočlánek. Hexahydrát chloridu železitého se rozpustí ve vodě, koncentrace (20 %) je vyjádřena pouze s ohledem na okamžitou hmotnost chloridu železitého. K poškození tepny a vyvolání trombózy se odpipetuje 2,85 μΐ roztoku do manžety, k vytvoření lázně tepny nad zkušebním místem termočlánku. Arteriální okluze se vyvolá rychlým poklesem teploty. Doba k okluzi se zaznamenává v minutách a představuje dobu, která uplyne mezi aplikací chloridu železitého a rychlým poklesem teploty v cévě (viz K. D. Kurz, Thromb. Res., 60, 269 /1990/).

Spontánní model trombolýzy

Údaje in vitro ukazují, že peptidové inhibitory trombinu inhibují trombin a jiné serinové proteázy, jako je plazmin a plazminogenní aktivátor tkáně. Ke stanovení, zda sloučeniny inhibují fibrinolýzu in vivo se stanoví rychlost spontánní trombolýzy implantací značených celých krevních sraženin do pulmonární cirkulace. Krysí krev (1 ml) se rychle smíchá s hovězím trombinem (4 mezinárodní jednotky, Parke Davis) a lidským fibrinogenem značeným ¹²⁵I (aktivita 185.10³ s“¹, ICN), bezprostředně nato se načerpá do silastické trubice a inkubuje za teploty 37 °C po dobu 1 hodiny. Zestárlé tromby se vyloučí z trubice, nařežou na segmenty 1 cm, třikrát promyjí normálním fyziologickým roztokem a pro každý segment se stanoví četnost impulzů τ

-48CZ 294674 B6 čítačem. Segment se známým počtem impulzů se odsaje do katétru, který se potom implantuje do juvulární žíly. Špička katétru se vsune do blízkosti pravého atria a sraženina se vypustí, aby protékala v pulmonámí cirkulaci. Jednu hodinu po implantaci se získá srdce a plíce a odděleně se stanoví četnost impulzů. Trombolýza se vyjádří jako procentuální hodnota, kde (injikovaný cpm - plicní cpm) % trombolýza =----------------------------x 100 injikovaný cpm

Fibrinolytické rozpouštění implantované sraženiny nastává v závislosti na čase (viz J. P. Clozel, Cardiovas. Pharmacol., 12, 520 /1988/).

Parametry koagulace

Trombinová doba (TT) v plazmě a doba částečně aktivovaného tromboplazminu (APTT) se měří fíbrometrem. Vzorky krve se odebírají zjugulárního katétru a zachycují v injekční stříkačce, která obsahuje citrát sodný (3,8 %, 1 díl na 9 dílů krve). K měření TT se krysí plazma (0,1 ml) smíchá s fyziologickým roztokem (0,1 ml) a hovězím trombinem (0,1 ml, 30 jednotek/ml v Tris pufru, Parke Davis) za teploty 37 °C. Pro stanovení doby částečně aktivovaného tromboplazminu se plazma (0,1 ml) a APTT roztok (0,1 ml, Organon Teknika) inkubuje po dobu 5 minut (za teploty 37 °C) a na začátku koagulace se přidá chlorid vápenatý (0,01 ml, 0,025 M). Test se provádí dvojmo a hodnoty se průměrují.

Index biologické dostupnosti

Při měření biologické dostupnosti trombinová doba (TT) v plazmě slouží jako náhrada pro testování základní sloučeniny za předpokladu, že zvýšení TT vyplývá pouze z trombinové inhibice dané základní sloučeninou. Doba průběhu účinku trombinového inhibitoru na TT se stanoví po intravenózním podání bolusu anestetizovaným krysám a po orálním ošetření bdících krys, kterým je odpírána potrava. V důsledku omezení objemu krve a počtu bodů vyžadovaných pro stanovení časového průběhu od doby ošetření k době, kdy odezva se vrací na hodnotu stanovenou před ošetřením, se použijí dvě skupiny krys. Každý vzorek populace představuje měnící se sekvenční časové okamžiky. Průměr TT nad časovým průběhem se použije pro výpočet plochy pod křivkou (AUC). Index biologické dostupnosti se vypočítá podle vzorce uvedeného dále a vyjadřuje se jako procento relativní aktivity.

Pro dávku se stanoví a upraví plocha pod křivkou (AUC) časového průběhu TT v plazmě. Tento index biologické dostupnosti se vyjadřuje v „% reaktivní aktivity“ a vypočítá se jako

AUC po dávka iv % reaktivní aktivity =-----------x-------------x 100

AUC iv dávka po

Sloučeniny

Roztoky sloučenin se připravují čerstvé denně v normálním fyziologickém roztoku a zavádějí se injekcí jako bolus nebo infuzí se začátkem 15 minut před experimentální perturbací a pokračují během této experimentální perturbace, která je 15 minut v arteriovenózním modelu odklonění a 60 minut v modelu chloridu železitého při arteriálním poškození, stejně jako při spontánním modelu trombózy. Objem bolus injekce je 1 ml/kg pro intravenózní podání a 5 ml/kg pro perorální podání, objem infuze činí 3 ml/h.

-49CZ 294674 B6

Statistické údaje

Výsledky se vyjadřují jako střední hodnota ± směrodatná odchylka. Ke zjištění statisticky významných odchylek se použije jednocestná analýza odchylek a potom se použije Dunettův test ke stanovení, které střední hodnoty jsou odlišné. Významnost úrovně pro odmítnutí nulové hypotézy stejných středních hodnot je P < 0,05.

Zvířata

Samčí psi (bígl, stáří 18 měsíců až 2 roky, hmotnost 12 až 13 kg, Marshall Farms, North Rose, New York, 14516, N.Y., USA) se nechají hladovět přes noc a 240 minut po podání dávky obdrží potravu Purina Cerfífíed Prescription Diet (Purina Mills, St. Louis, Missouri, USA). Zvířata dostávají vodu podle libosti. Teplota v místnosti se udržuje od 19 do 23 °C, relativní vlhkost je od 45 až do 50 % a osvětlování se provádí od 6.00 do 18.00 hodin.

Farmakokinetický model

Testovaná sloučenina se formuluje bezprostředně před dávkováním tím, že se rozpustí ve sterilním 0,9% fyziologickém roztoku na přípravek s obsahem 5 mg/ml. Psi obdrží jedinou dávku 2 mg/kg testované sloučeniny orální žaludeční sondou. Vzorky krve (o objemu 4,5 ml) se odebírají zcefalické žíly za dobu 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4 a 6 hodin po podání dávky. Vzorky se zachycují v citrátem zpracovaných Vacatuiner zkumavkách a udržují v ledu před snížením obsahu plazmy odstřeďováním. Vzorky plazmy se upravují dinitrofenylhydrazinem a analyzují vysoko účinnou kapalinovou chromatografíí (Zorbax SB-C8 kolona), při eluování methanolem s 500 mM octanu sodného, upraveno na hodnotu pH 7 kyselinou fosforečnou (poměr 60:40, objemově). Koncentrace testované sloučeniny v plazmě se sleduje a používá k výpočtu farmakokinetických parametrů a to rychlostní konstanty eliminace K_e, celkové clerance Cit, distribučního objemu V_D, doby maximální koncentrace testované sloučeniny v plazmě T_max, maximální koncentrace testované sloučeniny při T_max neboli C_max, poločasu v plazmě to,5, plochy pod křivkou AUC a absorbované frakce testované sloučeniny F.

Psí model trombózy koronární tepny

Chirurgická příprava a instrumentace psů se provádí, jak popsal Jackson a kol. v Circulation, 82, 930-940 /1990/. Lovečtí psi smíšeného chovu (věk 6 až 7 měsíců, obého pohlaví, Hazelton-LRE, Kalamazoo, Michigen, USA) se anestetizují natriumpentobarbitalem (30 mg/kg intravenózně, i.v.), intubují a ventilují vzduchem z místnosti. Střídavě stoupající a klesající objem a respirační rychlost se upraví k udržení hodnoty PO₂, PCO₂ a pH krve v normálních hranicích. Subdermální jehlové elektrody se zavedou pro zaznamenávání lead IIECG.

Levá jugulární žíla a běžná karotická tepna se izolují pomocí levé mediolaterální krční incize. Nepřetržitě se měří arteriální krevní tlak (ABP) na předem kalibrovaném převodníku Millar (model MPC-500, Millar Instruments, Houston, Texas, USA), který je zaveden do karotické tepny. Do jugulární žíly se zavede kanyla, po umožnění odběru vzorků během experimentu. Kromě toho se do femorální žíly na obou zadních končetinách zavede kanyla, která umožní podávání testované sloučeniny.

V pátém interkostálním prostoru se provede levá torakotomie a srdce se zavěsí do perikardiálního lůžka. 1- až 2-cm segmenty levé zakřivené koronární tepny (LCX) se izolují proximálně k první hlavní diagonální ventrikulární větvi. Drátová anodová elektroda s jehlovou špičkou o tloušťce 66 μιη (povlečena Teflon®ú_em, měděný drát povlečený stříbrem o tloušťce 76 μηι) o délce 3 až 4 mm se zavede do LCX a umístí tak, že je ve styku s vnitřním povrchem tepny (potvrzeno na konci experimentu). Stimulující obvod je doplněn umístěním katody na subkutánním (s.c.) místě. Přizpůsobený okluzor z plastické hmoty se umístí okolo LCX, nad oblastí elektrody. Předem kalibrované elektromagnetické průtokové čidlo (Carolina Medical Electronics, King, NC, USA)

-50CZ 294674 B6 se umístí okolo LCX proximálně k anodě pro měření koronárního průtoku krve (CBF). Okluzor se upraví tak, že se dosahuje 40 až 50% inhibice odezvy hyperemického průtoku krve, která je pozorována po 10-s mechanické okluzi LCX. Všechna hyperdynamická a ECG měření se zaznamenávají a analyzují snímacím systémem údajů (model M3000, Modular Instruments, Malvern, PA, USA).

Tvorba trombů a režim podávání sloučenin

Elektrolytického poškození intimy LCX se dosáhne aplikací stejnosměrného elektrického proudu 100 μΑ (DC) na anodu. Proud se udržuje po dobu 60 minut a potom se přeruší bez ohledu na to, zda céva je okludovaná nebo okludovaná není. Tvorba trombů probíhá spontánně až LCX je úplně okludována (stanoveno jako nulové CBF a zvýšení v S-T segmentu). Podávání sloučeniny se začne poté, co okludující tromby se ponechají zestárnout během 1 hodiny. Po infuzi sloučenin podle tohoto vynálezu, trvající po dobu 2 hodin, se začnou podávat dávky od 0,5 do 1 mg/kg/h, současně s infuzi trombolytického přípravku (například plazminogenního aktivátoru tkáně, streptokinázy, APSAC). Po podání testované sloučeniny následuje reperfuze prováděná během 3 hodin. Reokluze koronární tepny po úspěšné trombolýze je definována jako nulové CBF, které přetrvává po dobu rovnou nebo větší než 30 minut.

Hematologie a vzorové stanovení doby krvácení

Hodnoty celkového počtu krevních buněk, hemoglobinu a hematokritu se stanovují na 40-μ1 vzorku krve zpracované s citrátem (3,08 %) (1 díl citrátu na 9 dílů krve), pomocí hematologického analyzátoru (Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner, Mount View, Kalifornie, USA). Doba krvácení vzorové dásně se stanovuje pomocí přístrojové Simplate II bleeding time device (Organon Teknika Durham, N.C., USA). Přístroj se používá k provedení 2 horizontálních incizí v dásni, buď horní, nebo spodní levé čelisti psa. Každá incize je široká 3 mm a hluboká 2 mm. Vytvoří se incize a pomocí stopek se stanoví, jak dlouho probíhá krvácení. Bavlněný tampón se použije k odsávání krve, jak dochází ke krvácení z incize. Doba vzorového krvácení se určuje právě před podáním testované sloučeniny (0 minut), 60 minut po infuzi, při ukončení podávání testované sloučeniny (120 minut) a na konci experimentu.

Všechny hodnoty se analyzují jednosměrnou analýzou odchylek (ANOVA), s následujícím Student-Neuman-Kuels post hoc T testem ke stanovení úrovně významnosti. Opakované měření ANOVA se používá ke stanovení významných rozdílů mezi časovými body během experimentu. Hodnoty se stanovují tak, že mají být statisticky rozdílné přinejmenším v úrovni P < 0,05. Všechny hodnoty představují střední hodnotu ± směrodatnou odchylku. Veškeré studie se provádějí podle zásad obsažených v návodu Američan Physiological Society. Další podrobnosti ohledně použitých postupů popisuje Jackson a kol. v J. Cardiovasc. Pharmacol., 21, 587-599 /1993/.

Tabulka 2

Antikoagulace lidské plazmy

2x doba srážení (ng/ml)_________________ % orální/i.v.

Příklad	TT	APTT	PT	aktivity (krysa)
1	250	N	N	8
2	7	86	120	12
3	1000	25 900	25 000	N
4	1430	34 600	40 400	N
5	37	870	750	NC1
6	1940	27 800	27 000	N
7	520	8100	8300	N
8	750	9800	15 800	N

-51 CZ 294674 B6

Tabulka 2 - pokračování

Antikoagulace lidské plazmy

Příklad	2x doba srážení (ng/ml)	% orální/i.v. aktivity (krysa)
TT	APTT	PT
9	1000	14 000	14 400	N
10	10 800	34 500	30 000	N
11	3100	28 500	47 800	N
12	18 900	59 300	70 900	N

Poznámky k tabulce 2

NC¹ označuje, že sériové vyšetření nebylo úplné a pozorovaly se nízké nebo velmi nízké aktivity při orálním podání dávky 20 mg/kg.

N označuje, že nedošlo k testování, proto se uvádí slepý vstupní údaj.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (6)

1. Peptidový derivát obecného vzorce I

X-Y-NH-(CH2)-G (I), ve kterém

X znamená prolinyl, homoprolinyl, skupinu vzorce

R^m- (CH₂) g-NH-CH₂-C (0) nebo

O

R^d-(CH₂)₂-CH~C~ I R*

-52CZ 294674 B6 kde

R^d znamená karboxyskupinu nebo methylsulfonyl,

R^e znamená skupinu vzorce NHR^C, NHCOR^C nebo NHCOOR^C, kde

R^c znamená alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo cykloalkylalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku v cykloalkylové části a 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, přičemž celkový počet atomů uhlíku je 4 až 10,

T znamená cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, skupinu vzorce a znamená číslo 0, 1 nebo 2 a

Q znamená hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -NH-A, kde

A znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce RSO₂ROC(O)_, RC(O)-, RⁿC(O)- nebo -(CH₂)_g-R^m, g znamená číslo 1, 2, nebo 3,

B znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R' znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, perfluoralkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)_d-R^m, nesubstituovanou nebo substituovanou arylovou skupinu, kde arylem je fenyl nebo nafty 1, 5- nebo 6-členný nesubstituovaný nebo substituovaný aromatický heterocyklický kruh, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku a dusíku, nebo 9- nebo 10-člennou nesubstituovanou nebo substituovanou kondenzovanou bicyklickou aromatickou heterocyklickou skupinu, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku a dusíku, přičemž počet případných substituentů arylové skupiny, aromatického heterocyklického kruhu a kondenzované bicyklické aromatické heterocyklické skupiny je roven 1 nebo 2 a tyto substituenty jsou nezávisle na sobě vybrané ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)jCOOH, merkaptoskupinu, skupinu vzorce -S(O)h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHS(O)_h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHC(O)-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -S(O)hNH₂, skupinu vzorce -S(O)_hNH-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -S(O)hN(alkyl)₂ s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, s tou podmínkou, že daná substituce vede ke vzniku stabilní struktury,

-53 CZ 294674 B6

R^m znamená skupinu vzorce -COOR^b, -SO2-alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, -SO3H, -P(O)(OR^b)2 nebo tetrazol-5-ylovou skupinu,

Rⁿ znamená skupinu vzorce -COOR^b nebo tetrazol-5-ylovou skupinu, každý z R^b znamená nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, d znamená číslo 1, 2 nebo 3, m znamená číslo 0, 1 nebo 2, n znamená číslo 0, 1 nebo 2 a

Z znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, atom halogenu nebo skupinu vzorce R^aSO₂NH-, kde

R^a znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

Y znamená skupinu vzorce

II

-NR^a-CH₂-C- kde

R^s znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH₂)_q-T',

R^p znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH₂)q-T', kde p znamená číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4,

L znamená vazbu, -O-, -S- nebo -NH-, q znamená číslo 0, 1, 2 nebo 3 a

T' znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, skupinu vzorce -COOH, -CONH₂ nebo Ar, kde

Ar znamená nesubstituovanou nebo substituovanou arylovou skupinu, kde aryl znamená fenyl, naftyl, 5- nebo 6-členný nesubstituovaný nebo substituovaný aromatický heterocyklický

-54CZ 294674 B6 kruh, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku nebo dusíku, nebo 9- nebo 10-člennou nesubstituovanou nebo substituovanou kondenzovanou bicyklickou aromatickou heterocyklickou skupinu, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku nebo dusíku, přičemž počet případných substituentů arylové skupiny, aromatického heterocyklického kruhu a kondenzované bicyklické aromatické heterocyklické skupiny je roven 1 nebo 2 a tyto substituenty jsou nezávisle na sobě vybrané ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)jCOOH, merkaptoskupinu, skupinu vzorce -S(O)halkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHS(O)_h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHC(O)-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -S(O)_hNH₂, skupinu vzorce -S(O)hNH-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -S(O)hN(alkyl)₂ s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená Číslo 0, 1,2, 3 nebo 4, s tou podmínkou, že daná substituce vede ke vzniku stabilní struktury,

R^y znamená skupinu vzorce -CH₂-, -O-, -S- nebo -NH- a

R^z znamená vazbu nebo dohromady s R^y a třemi připojenými atomy uhlíku tvoří nasycený karbocyklický kruh o 5 až 8 atomech, jehož jedním atomem může být -O-, -S- nebo -NH-, r znamená číslo 1, 2 nebo 3 a

G znamená skupinu vzorce kde

D a E znamenají vždy nezávisle na sobě N nebo skupinu vzorce CH, k znamená číslo 0 nebo 1,

-55CZ 294674 B6 b znamená číslo 0 nebo 1,

M znamená atom síry, kyslíku nebo skupinu vzorce NH, každý z W znamená nezávisle na sobě atom dusíku nebo skupinu vzorce CH a

R představuje skupinu vzorce

NOH

I -c-nh₂ f nebo G znamená skupinu vzorce a kde jeden až všechny jinak nesubstituované atomy uhlíku aromatických nebo heteroaromatických kruhů vzorce může nebo mohou nést atom fluoru jako substituent, * označuje chirální atom uhlíku,

-- označuje absolutní konfiguraci R nebo S nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl nebo farmaceuticky přijatelný solvát tohoto derivátu nebo jeho soli.

-56CZ 294674 B6

2. Peptidový derivát podle nároku 1 obecného vzorce I, kde

X znamená prolinyl, homoprolinyl, skupinu vzorce

T znamená cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, alkyíovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce a znamená číslo 0 nebo 1,

Q znamená hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -NH-A,

A znamená atom vodíku, alkyíovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce RSO₂ROC(O)-, RC(O)~ nebo -<CH₂)_q-COOH, g znamená číslo 1, 2 nebo 3,

B znamená atom vodíku nebo alkyíovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R' znamená atom vodíku nebo alkyíovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R znamená alkyíovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, perfluoralkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)_d-COOH, nesubstituovanou nebo substituovanou arylovou skupinu, kde arylovou skupinou je fenyl, naftyl, 5- nebo 6-členný nesubstituovaný nebo substituovaný aromatický heterocyklický kruh, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou zvoleny z atomu síry, kyslíku a dusíku, nebo 9- nebo 10-člennou nesubstituovanou nebo substituovanou kondenzovanou bicyklickou aromatickou heterocyklickou skupinu, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku a dusíku, přičemž počet případných substituentů arylové skupiny, aromatického heterocyklického kruhu a kondenzované bicyklické aromatické heterocyklické skupiny je roven 1 nebo 2 a tyto substituenty jsou nezávisle na sobě vybrané

-57CZ 294674 B6 ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce (CH₂)jCOOH, merkaptoskupinu, skupinu vzorce -S(O)halkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHS(O)h~alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce NHC(O)-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -S(O)_hNH₂, skupinu vzorce -S(O)hNH-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -S(O)hN(alkyl)₂ s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená číslo 0, 1,2,

3 nebo 4, s tou podmínkou, že daná substituce vede ke vzniku stabilní struktury, d znamená číslo 1, 2 nebo 3, m znamená číslo 0, 1 nebo 2, n znamená číslo 0, 1 nebo 2 a

Z znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až

4 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, atom halogenu nebo skupinu vzorce R^aSO₂NH- kde

R^a znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

Y znamená skupinu vzorce

II

-nr³-ch₂-c-

R^g znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -~(CH₂)p-L-(CH2)q-T',

R^p znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH₂)_q-T', kde p znamená číslo 0, 1,2,3 nebo 4,

L znamená vazbu, -O-, -S- nebo -NH-, q znamená číslo 0, 1, 2 nebo 3 a

T' znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, skupinu vzorce COOH, -CONH₂ nebo Ar, kde

-58CZ 294674 B6

Ar znamená nesubstituovanou nebo substituovanou arylovou skupinu, kde arylovou skupinou je fenyl, naftyl, 5- nebo 6-členný nesubstituovaný nebo substituovaný aromatický heterocyklický kruh, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou zvoleny z atomu síry, kyslíku a dusíku, nebo 9- nebo 10-člennou nesubstituovanou nebo substituovanou kondenzovanou bicyklickou aromatickou heterocyklickou skupinu, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku a dusíku, přičemž počet případných substituentů arylové skupiny, aromatického heterocyklického kruhu a kondenzované bicyklické aromatické heterocyklické skupiny je roven 1 nebo 2 a tyto substituenty jsou nezávisle na sobě vybrané ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)jCOOH, merkaptoskupinu, skupinu vzorce -S(O)_h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHS(O)h~alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHC(O)-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -S(O)hNH2, skupinu vzorce -S(O)hNH-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -S(O)hN(alkyl)₂ s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4, s tou podmínkou, že daná substituce vede ke vzniku stabilní struktury,

R^y znamená skupinu vzorce -CH₂-, -O-, -S- nebo -NH-,

R^z znamená vazbu nebo, dohromady s R^y a třemi sousedícími atomy uhlíku, tvoří nasycený karbocyklický kruh o 5 až 8 atomech, z nichž jedním atomem může být -O-, -S- nebo -NH-, r znamená číslo 1 nebo 2,

G znamená skupinu vzorce kde

D a E znamenají nezávisle na sobě vždy atom dusíku nebo skupinu vzorce CH, k znamená číslo 0 nebo 1, b znamená číslo 0 nebo 1,

M znamená atom síry, kyslíku nebo NH, každý W znamená nezávisle na sobě atom dusíku nebo skupinu vzorce CH a

-59CZ 294674 B6

R znamená skupinu vzorce

NOH

I -C-NHj označuje chirální atom uhlíku, označuje absolutní konfiguraci R nebo S nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo farmaceuticky přijatelný solvát této sloučeniny nebo jeho sůl.

3. Peptidový derivát obecného vzorce I

X-Y-NH-(CH2)_r-G (I), ve kterém

X znamená prolinyl, homoprolinyl, skupinu vzorce

R^m- (CH₂) _g-NH-CH₂-C (O)

R^d-(CH₂) * II

2-CH-CI R* kde

R^d znamená karboxyskupinu nebo methylsulfonyl,

R^e znamená skupinu vzorce NHR^C, NHCOR^C nebo NHCOOR^C, kde

R^c znamená alkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo cykloalkylalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku v cykloalkylové části a 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, přičemž celkový počet atomů uhlíku je 4 až 10,

-60CZ 294674 B6

T znamená cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 8 atomy uhlíku, skupinu vzorce

O ΑΎ Ž nebo , a znamená číslo 0, 1 nebo 2 a

Q znamená skupinu vzorce -NH-A, kde

A znamená skupinu vzorce ROC(O)-, RⁿC(O)- nebo -(CH₂)_g-R^m, g znamená číslo 1, 2, nebo 3,

B znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R' znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R znamená skupinu vzorce -(CH₂)d-R^m,

R^m znamená skupinu vzorce -COOR^b, -SO2-alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, -SO3H, -P(O)(OR^b)2 nebo tetrazol-5-ylovou skupinu,

Rⁿ znamená skupinu vzorce -COOR^b nebo tetrazol-5-ylovou skupinu, každý zR^b znamená nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, d znamená číslo 1, 2 nebo 3, m znamená číslo 0, 1 nebo 2, n znamená číslo 0, 1 nebo 2 a

Z znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, atom halogenu nebo skupinu vzorce R^aSO₂NH-, kde

R^a znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

Y znamená skupinu vzorce

II

-NR8-CH2-C-

-61 CZ 294674 B6 kde

R⁶ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH₂)q-T',

R^p znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH₂)_q-T, kde p znamená číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4,

L znamená vazbu, -O-, -S- nebo -NH-, q znamená číslo 0,1,2 nebo 3 a

T znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se

3 až 8 atomy uhlíku, skupinu vzorce -COOH, -CONH₂ nebo Ar, kde

Ar znamená nesubstituovanou nebo substituovanou arylovou skupinu, kde aryl znamená fenyl, naftyl, 5- nebo 6-členný nesubstituovaný nebo substituovaný aromatický heterocyklický kruh, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné, a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku nebo dusíku, nebo 9- nebo 10-člennou nesubstituovanou nebo substituovanou kondenzovanou bicyklickou aromatickou heterocyklickou skupinu, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku nebo dusíku, přičemž počet případných substituentů arylové skupiny, aromatického heterocyklického kruhu a kondenzované bicyklické aromatické heterocyklické skupiny je roven 1 nebo 2 a tyto substituenty jsou nezávisle na sobě vybrané ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu s 1 až

4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)jCOOH, merkaptoskupinu, skupinu vzorce -S(O)halkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHS(O)h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHC(O)-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -S(O)_hNH₂, skupinu vzorce -S(O)hNH-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -S(O)hN(alkyl)₂ s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená číslo 0, 1,2, 3 nebo 4, s tou podmínkou, že daná substituce vede ke vzniku stabilní struktury,

R^y znamená skupinu vzorce -CH₂-, -O-, -S- nebo -NH- a

R^z znamená vazbu nebo dohromady s R^y a třemi připojenými atomy uhlíku tvoří nasycený karbocyklický kruh o 5 až 8 atomech uhlíku, jehož jedním atomem může být -O-, -S- nebo -NH-, r znamená číslo 1,2 nebo 3, a

-62CZ 294674 B6

G znamená skupinu vzorce kde

D a E znamenají vždy nezávisle na sobě N nebo skupinu vzorce CH, k znamená číslo 0 nebo 1, b znamená číslo 0 nebo 1,

M znamená atom síry, kyslíku nebo skupinu vzorce NH, každý z W znamená nezávisle na sobě atom dusíku nebo skupinu vzorce CH a

R představuje skupinu vzorce

NOH

I

-C-NH_S f

nebo G znamená skupinu vzorce a kde jeden až všechny jinak nesubstituované atomy uhlíku aromatických nebo heteroaromatických kruhů vzorce

-63 CZ 294674 B6 může nebo mohou nést atom fluoru jako substituent, * označuje chirální atom uhlíku,

--- označuje absolutní konfiguraci R nebo S nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl nebo farmaceuticky přijatelný solvát tohoto derivátu nebo jeho soli.

4. Peptidový derivát podle nároku 3 obecného vzorce I, kde a znamená číslo 0 nebo 1 a

Q znamená skupinu vzorce -NH-A, kde

A znamená skupinu vzorce ROC(O)- nebo -(CH₂)_g-COOH,

-64CZ 294674 B6 g znamená číslo 1, 2, nebo 3,

B znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R' znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

R znamená skupinu vzorce -(CH₂)d-R^m, d znamená číslo 1, 2 nebo 3, m znamená číslo 0, 1 nebo 2, n znamená číslo 0, 1 nebo 2 a

Z znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až

4 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, atom halogenu nebo skupinu vzorce R^aSO₂NH-, kde

R^a znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

Y znamená skupinu vzorce kde

R⁸ znamená alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH₂)g-T',

R^p znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -(CH₂)_p-L-(CH₂)_q-T', kde p znamená číslo 0, 1, 2, 3 nebo 4,

L znamená vazbu, -O-, -S- nebo -NH-, q znamená číslo 0,1,2 nebo 3 a

T' znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, skupinu vzorce -COOH, -CONH₂ nebo Ar, kde

-65 CZ 294674 B6

Ar znamená nesubstituovanou nebo substituovanou arylovou skupinu, kde aryl znamená fenyl, naftyl, 5- nebo 6-členný nesubstituovaný nebo substituovaný aromatický heterocyklický kruh, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku nebo dusíku, nebo 9- nebo 10-člennou nesubstituovanou nebo substituovanou kondenzovanou bicyklickou aromatickou heterocyklickou skupinu, obsahující jeden nebo dva heteroatomy, které jsou stejné nebo rozdílné a které jsou vybrány z atomu síry, kyslíku nebo dusíku, přičemž počet případných substituentů arylové skupiny, aromatického heterocyklického kruhu a kondenzované bicyklické aromatické heterocyklické skupiny je roven 1 nebo 2 a tyto substituenty jsou nezávisle na sobě vybrané ze souboru zahrnujícího atom halogenu, hydroxyskupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupinu, monoalkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -(CH₂)jCOOH, merkaptoskupinu, skupinu vzorce -S(O)_halkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHS(O)h-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -NHC(O)-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu vzorce -S(O)hNH₂, skupinu vzorce -S(O)_hNH-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo skupinu vzorce -S(O)_hN(alkyl)₂ s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části, přičemž h znamená číslo 0, 1 nebo 2 a j znamená číslo 0, 1,2, 3 nebo 4, s tou podmínkou, že daná substituce vede ke vzniku stabilní struktury,

R^y znamená skupinu vzorce -CH₂-, -O-, -S- nebo -NH- a

R^z znamená vazbu nebo dohromady sR^y a třemi připojenými atomy uhlíku tvoří nasycený karbocyklický kruh o 5 až 8 atomech, jehož jedním atomem může být -O-, -S- nebo -NH-, r znamená číslo 1 nebo 2 a

G znamená skupinu vzorce kde

D a E znamenají vždy nezávisle na sobě N nebo skupinu vzorce CH, k znamená číslo 0 nebo 1, b znamená číslo 0 nebo 1,

M znamená atom síry, kyslíku nebo skupinu vzorce NH, každý z W znamená nezávisle na sobě atom dusíku nebo skupinu vzorce CH a

-66CZ 294674 B6

R představuje skupinu vzorce

NOH

I

-c-nh₂ r

* označuje chirální atom uhlíku, ~~~ označuje absolutní konfiguraci R nebo S nebo její farmaceuticky přijatelná sůl nebo farmaceuticky přijatelný solvát této sloučeniny nebo jeho sůl.

5. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že společně s farmaceuticky přijatelnou nosnou látkou, ředidlem nebo pomocnou látkou obsahuje sloučeninu obecného vzorce I nebo farmaceuticky přijatelnou sůl nebo solvát takové sloučeniny, podle některého z nároků 1 až 4.

6. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I

X-Y-NH-(CH₂)-G (I), podle některého z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že se odstraní současně nebo postupně chránící skupina nebo chránící skupiny P z odpovídající sloučeniny obecného vzorce II (P)X-Y-NH-(CH₂)_r-G(P) (II), ve kterém (P)X představuje zbytek X, který může nést alespoň jednu chránící skupinu P, nezávisle na sobě zvolenou ze skupiny P chránící aminokyselinu, pro sloučeninu obecného vzorce I, kde X obsahuje bazickou NH část, a skupiny P chránící karboxyskupinu, pro sloučeninu obecného vzorce I, kde X obsahuje karboxylový zbytek a

G(P) představuje zbytek G, který může nést alespoň jednu chránící skupinu P, nezávisle na sobě zvolenou ze skupiny chránící aminoskupinu P.

a potom, pokud se vyžaduje sůl sloučeniny obecného vzorce I, připraví sůl s farmaceuticky přijatelnou kyselinou.