NO309034B1 - Trombinhemmende forbindelser og farmasøytisk formulering omfattende samme - Google Patents

Trombinhemmende forbindelser og farmasøytisk formulering omfattende samme Download PDF

Info

Publication number
NO309034B1
NO309034B1 NO963684A NO963684A NO309034B1 NO 309034 B1 NO309034 B1 NO 309034B1 NO 963684 A NO963684 A NO 963684A NO 963684 A NO963684 A NO 963684A NO 309034 B1 NO309034 B1 NO 309034B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
prolinamide
methyl
phenyl
aminoiminomethyl
alkyl
Prior art date
Application number
NO963684A
Other languages
English (en)
Other versions
NO963684D0 (no
NO963684L (no
Inventor
Gerald Floyd Smith
Michael Robert Wiley
Aaron Leigh Schacht
Robert Theodore Shuman
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of NO963684D0 publication Critical patent/NO963684D0/no
Publication of NO963684L publication Critical patent/NO963684L/no
Publication of NO309034B1 publication Critical patent/NO309034B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C07K5/06165—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Pro-amino acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/06—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D205/08—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with one oxygen atom directly attached in position 2, e.g. beta-lactams
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/022—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2
    • C07K5/0222—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2 with the first amino acid being heterocyclic, e.g. Pro, Trp
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0606—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing heteroatoms not provided for by C07K5/06086 - C07K5/06139, e.g. Ser, Met, Cys, Thr
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/582—Recycling of unreacted starting or intermediate materials

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår trombinhemmere som er nyttige som antikoagulanter hos pattedyr. Spesielt angår den peptidderivater som har høy antitrombotisk aktivitet, antikoagulantaktivitet og oral biotilgjengelighet, samt farmasøytisk formulering omfattende samme.
Blodkoaguleringsprosessen, trombosen, er utløst ved en kompleks proteolytisk kaskade som fører til dannelsen av trombin. Trombin fjerner proteolytiske aktiveringspeptider fra Aa-kjedene og Bp-kjedene av fibrinogen som er oppløselige i blodplasma for å initiere dannelsen av uoppløselig fibrin.
Antikoagulering blir for tiden oppnådd ved administrering av hepariner og koumariner.
Parenteral farmasøytisk kontroll av koagulering av tromboser basert på hemming av trombin gjennom anvendelse av hepariner. Hepariner virker direkte på trombin ved akselerering av inhibitoriske effekter av endogen antitrombin III (den viktigste fysiologiske inhibitoren for trombin). Da antitrombin III-nivåene varierer i plasma og da overflate-bundet trombin synes resistent for denne indirekte mekanismen, kan hepariner være en ineffektiv behandling. Da koaguleringsanalyser er antatt å være forbundet med effektivitet og sikkerhet, må heparin-nivåer blir overvåket med koaguleringsanalyser (spesielt aktivert partielt tromboplastintid (APTT)-analysen). Koumariner påvirker genereringen av trombin ved blokkering av posttranslasjonal "y-karboksylering i syntesen av protrombin og andre proteiner av denne typen. På grunn av deres virkningsmekanisme kan effekten av koumarin kunne utvikles sakte, 6-24 timer etter administrasjon. Dessuten er de ikke selektive antikoagulanter. Koumariner krever også overvåking med koaguleringsanalyser (spesielt med protrombintid (PT)-analyse).
I den senere tid har interessen for små syntetiske peptider som er kjent som proteolytiske enzymer på en måte tilsvarende det til naturlig substrater vokset. Tripeptidaldehyder slik som D-Phe-Pro-Arg-H, Boc-D-Phe-Pro-Arg-H og D-MePhe-Pro-Arg-H, Bajusz et al., J. Med. Chem., 33. 1729-1735 (1990) demonstrerer kraftig direkte hemming av trombin. Tidlig kliniske studier som illustrerer at D-MePhe-Pro-Arg-H-sulfat er en antikoagulant hos mennesker er blitt rapportert, se Simoons et al., Circulation, 90, 1-231, Abstr. 1241 (1994). Mange forskere har syntetisert analoger i et forsøk på å utvikle farmasøytiske midler, f.eks. se Shuman et al., J. Med. Chem., 36, 314-319 (1993). US patent nr. 4.346.078 lærer en serie antikoagulantpeptider inneholdende en agmatin (l-amino-4-guanidinobutan)gruppe. Agmatinderivater og relaterte forbindelser er også beskrevet i PCT søknad med internasjonal publiseringsnr. WO 93/11152, så vel som i europeisk patentsøknad nr. 601459, publisert 15. juni 1994. Slike forbindelser skiller seg fra den tidligere serien ved at agmatinforbindelsen mangler en karbonylgruppe funnet i tilsvarende forbindelser inneholdende en Arg-gruppe.
Selv om hepariner og koumariner er effektive antikoagulanter og ingen medikamenter enda har resultert fra kjente tripeptidaldehyder og på tross av fortsatte håp for denne klassen forbindelser, eksisterer det et behov for antikoagulanter som virker selektivt på trombin og uavhengig av antitrombin III viser inhibitorisk virkning kort etter administrasjon, fortrinnsvis ved en oral vei, og som ikke forstyrrer lysis av blodlevring slik som er nødvendig for å opprettholde hemostase.
Foreliggende oppfinnelse er rettet mot oppdagelsen at forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse som definert ovenfor, er kraftige trombinhemmere som har høy biotilgjengelighet etter oral administrasjon. I tillegg, viser visse forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse også hemming av faktor Xa som er involvert i koaguleringskaskaden.
Følgelig, er det et primært mål ved foreliggende oppfinnelse å fremskaffe nye peptidderivater som er kraftige trombin-inhibitorer nyttige som antikoagulanter.
Andre mål, egenskaper og fordeler vil være opplagt for fagmannen fra den følgende beskrivelse og krav.
Foreliggende oppfinnelse fremskaffer en trombininhibiterende forbindelse med formel I
hvor
X er prolinyl, homoprolinyl, R<m->(CH2)g-NH-CH2-C(0),
hvori
R" er karboksy eller metylsulfonyl;
R<c> er C-j-C10-alkyl eller et (C3-C8)-c<y>kloalkyl { C^ C^)-alkylradikal med 4-10 karboner;
T er C3-C8-cykloalkyl, C-j-C8-alkyl,
a er 0, 1 eller 2;
Q er -OH, C1-C4-alkoksy eller -NH-A; og
A er hydrogen, R<M>S02-, R"OC(0)-, R"C(0)- eller -(CH2)g-R<m>; g er 1, 2 eller 3;
R' er hydrogen eller C1-C4-alkyl;
R" er <C>1-C4-alkyl, -(CH2)d-R<m>, eller indolyl valgfritt
substituert med C^- C^ alkyl;
R<m> er -COOR<b> eller -S02(C1-C4-alkyl);
R<*> er hydrogen eller C^—C4-alkyl;
d er 1, 2, eller 3;
m er 0, 1 eller 2;
n er 0, 1 eller 2; og
Z er hydrogen, C1-C4-alkyl, C1-C4-alkoksy eller hydroksy;
hvori
R<g> er -(CH2)p-L-(CH2)q-T';
RP er hydrogen, C1-C6-alkyl, eller -(CH2)p-L-(CH2)q-T';
hvor
p er 0, 1, 2, 3, eller 4;
L er en binding eller -0-;
q er 0, 1, 2 eller 3; og
T' er usubstituert eller substituert fenyl;
Ry er -CH2-;
R<z> danner en mettet, karbocyklisk ring med 5-8 atomer når den
tas sammen med Rv og de tre sammenbundne karbonatomene;
r er 1, 2 eller 3; og
G er -(CH2)S-R, hvor s er 0-5, -CH=CH-(CH2 )t-R, hvor t er
0-3, eller G er
hvor
D og E hver uavhengig står for N eller CH;
k er 0 eller 1;
b er 0 eller 1; og
og hvori et til alle av de ellers usubstituerte karbonatomene av de aromatiske eller heteroaromatiske ringene av
kan bære en fluorsubstituent;
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav; eller en farmasøytisk akseptabel løsning av nevnte forbindelse eller salt derav;
forutsatt at A ikke er hydrogen, -(CH2)g-R<m> hvor R<m> er COOR<b>, eller t-butyloksykarbonyl når G er -(CH2)S-R eller -CH=CH-(CH2)t-R og
R er -C(NH)NH2 eller -NH-C(NH)NH2,
og videre forutsatt at R ikke er amino eller guanidino når r=l og s=0;
og videre forutsatt at A ikke er hydrogen, metylsulfonyl eller -(CH2)g-R<m> når G er
-(CH2)S-R, hvori
eller Y er
eller usubstituert prolinyl (RP er
hydrogen), R' er hydrogen, T er cykloheksyl og Q er -NH-A;
og videre forutsatt at A ikke er hydrogen,
R"S02- (hvor R" er C1-C4-alkyl), eller -(CH2)g-R<m> (hvor R<m> er
-C00R<b>) når
T er cykloheksyl eller
Y er er 1
i
2
eller usubstituert prolinyl (RP
G er -(C<H>2)S-R eller -CH=CH-(CH2)t-<R> og R er -C(NH)NH2 eller -NH-C(NH)NH2;
og videre forutsatt at A ikke er R"S02- når G er
NH
II
og videre forutsatt at R ikke er -NH-C-NH2
når X er
hvori Z er hydrogen, a er 1, R' er hydrogen og Q er -NHA, hvori A er hydrogen, Y er usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), r er 1 eller 2, og G er
(hvor D og E hver er CH, -(CH2)ij-R er para og k er 0);
og videre forutsatt at når:
Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert proluinyl (RP er hydrogen); og hvori i de to siste gruppene er R -C(NH)NH2 når k er 0 eller 1, eller R er -NH-C(NH)NH2 når k er 0; da: (a) når X er T-(CH2)a-CH(R')(Q)-C(0)-; og R' er H;
Q er -NH-A; og
A er H,
R<M>S02-, R"0C(0)- (hvori i de to siste gruppene er R" C-^- C^ alkyl),
R"C(0)- (hvori gruppen R" er C^-C^ alkyl eller -(CH2)d-COOR<13>, hvori d er 1 eller 2), eller -(CH2 )g-COORb;
da er ikke gruppen T-(CH2)a:
(i) Ci-Cg alkyl; (ii) -(CH2)a-<C>5-C6 cykloalkyl; (ili) -(CH2 )a-fenyl, hvori fenylgruppen er valgfritt substituert med en C1-C4 alkylgruppe; (iv) -(CH2 )a-fenyl, hvori a er 0 eller 1 og fenylgruppen er substituert med enten en hydroksy eller en C1-C4 alkoksygruppe; eller
(v) -(CH2)a-naftyl, hvori a er 0 eller 1; og
(b) X ikke er prolinyl, homoprolinyl eller
og videre forutsatt at når:
Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen);
r er 1; og
G er
da:
(a) når X er T-(CH2)a-<C>(R')(Q)-C(0)-; og
R' er H;
da er ikke Q OH, C^ C^ alkoksy eller -NH-A
hvori A er:
(i) H; (ii) R"C(0)- hvori R" er C±- C^ alkyl; (iii) R"OC(0)- hvori R" er C^ C^ alkyl eller -(CH2)d-COOR<b>; eller (iv) R"S02- hvori R" er C^ C^ alkyl, eller -(CH2)d-COOR<b>; og
(b) når X er Rd<->(CH2)2-CH(NHC(0)R<C>)-C(0)-; og
Rd er karboksy;
da er ikke R<c> C^ C^ alkyl;
(a) forutsatt at når:
Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert prolinyl (RP er H);
X er T-(CH2)a-C(R')(0)-C(0)-;
T er cykloheksyl;
R' er H;
G er -(CH2)S-R;
R er -NH-C(NH)-NH2; og
kjeden -(CH2 )r-(CH2 )g står for C2-C^, alkylen;
Q er -NH-A;
da er ikke A R"OC(0)- hvori R" er tert-butyl;
(b) og videre forutsatt at når:
Y er usubstituert prolinyl (RP er H);
X er T-(CH2)a-C(R<»>)(0)-C(0)-;
T er cykloheksyl;
a er 1;
R' er H;
G er -(CH2)S-R; og
Q er -NH-A;
da:
(i) når kjeden -(CH2)r-(CH2)s er C2 alkylen og R er -NH2, da er A ikke -CH2-C00R<b> hvori R<b> er etyl;
eller
(ii) når kjeden -(C<H>2)r-(C<H>2)s er C3 alkylen og R er -NH2, da er A Ikke -(CH2 )g-COOR13 hvori g er 1 eller 2 og R<b> er etyl; (iii) når kjeden -(CH2)r-(CH2)s er C4 alkylen og R er -NH-C(NH)-NH2, da er A ikke R"OC(0) hvori R" er tert-butyl, og videre forutsatt at forbindelsen ikke er N-[4-[( am i no im inometyl )amino]butyl]-1-[N-(metylsulfonyl)-D-fenylalanyl]-L-prolinamid; eller, uansett forutsetningene ovenfor, hvori forbindelsen med formel I er utvalgt fra: a. N - [ (metyl-lH-indol-2-yl)karbonyl]-D-fenylalanyl-N-[4-[(aminometyl)amino]butyl]-L-prolinamid; b. D-fenylalanyl-N-[4-[ (aminoiminometyl )aminometyl]-fenyl-metyl]-L-prolinamid; c. D-fenylalanyl-N-[4-(aminometyl)fenylmetyl]-L-prolinamid; d. D-fenylalanyl-N-[3-(aminometyl)fenylmetyl]-L-prolinamid; e. D-fenylalanyl-N-[trans-4-(aminometyl)-cykloheksylmetyl]-L-prolinamid; f. D-fenylalanyI-N-[4-(amino)fenyImetyl]-L-prolinamid; g. D-fenylalanyl-N-[2-[4-(amino)feny1]etyl]-L-prolinamid; i. D-fenylalanyl-N-[[3-( amimoiminometyl ) f enyl ] metyl] - L-prolinamid; j. D-homoprolyl-N-[ [4 -(aminoiminometyl )f enyl] metyl] - L-prolinamid; k. N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-l-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; 1. N-[[4-(aminoiminometyl)feny1]mety1]-3-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; m. (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-1-D-homoprolyl-oktrahydro-lH-indol-2-karboksamid; n. D-homoprolyl-N-(a )-(2-fenyletyl)-N-[[4-(aminoiminometyl)-fenyl]metyl]glyeinamid; o. D-homoprolyl-N-[ [4 -( aminoiminometyl )f enyl] metyl] - 4-fenoksy-L-prolinamid; p. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[4-[amino(hydroksyimino )-metyl]fenyImetyl]-L-prolinamid; q. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[4-(aminoiminometyl)-fenylmetyl]-L-prolinamid; r. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[3-[amino(hydroksyimino)- metyl]fenylmetyl]-L-prolinamid; s . N-(etyl sulfonyl)-D-f enylalanyl-N-[3-(aminoiminometyl)- fenylmetyl]-L-prolinamid; t. N-[ [3-[amino(hydroksyimino]metyl]fenyl]metyl]-l- [ [ ( 4aS , 8aS )-dekahydro-1 (R )-isokinolinyl]karbonyl] -L-prolinamid; u. N-[[3-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-l-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; v. N-(etylsulfonyl )-D-fenylalanyl-N-[2-[4-[amino(hydroksy-imino)metyl]fenyl]etyl]-L-prolinamid;
w. N-(etylsulfonyl )-D-fenylalanyl-N-[2-[4-(aminoiminometyl)-fenyl]etyl]-L-prolinamid;
x. N- ( etyl sulf onyl ) - D-f enylalanyl -N - [2 - [3-[amino(hydroksy-imino)metyl]fenyl]etyl]-L-prolinamid;
y. N-(etyl sulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[2-[3-(aminoiminometyl)-fenyl]etyl]-L-prolinamid;
z. N-[2-[4-(amino(hydroksyimino)metyl]fenyl]etyl]-l-[[(4aS,8aS)-dekahydro-l(R ) - i s ok i noi inyl] karbonyl] - L-prolinamid;
aa. N-[2-[4-(aminoiminometyl)f enyl]etyl]-l-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid;
ab. N-[2-[3-[amino(hydroksyimino)metyl] f enyl ]etyl]-l-[ [ ( 4aS ,8aS )-dekahydro-1 (R )-i sokinol inyl]karbonyl]-L-prolinamid; og
ac. N-[2-[3-(aminoiminometyl)fenyl]etyl]-1-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid.
En gruppe av forbindelsene ifølge oppfinnelsen med formel I omfatter de forbindelsene med formel I hvor
X er prolinyl, homoprolinyl,
eller T er C3-C8-cykloalkyl, C-j-Cg-alkyl,
a er 0 eller 1;
Q er -OH, C1-C4-alkoksy eller -NH-A;
A er hydrogen, R"S02-, R"0C(0)-, R"C(0)- eller -(CH2)g-COOH; g er 1, 2 eller 3;
R' er hydrogen eller C^-C^-alkyl;
R" er C1-C4-alkyl, -(CH2)d-COOH eller indolyl valgfritt
substituert med C^-C4 alkyl;
d er 1, 2 eller 3;
m er 0, 1 eller 2;
n er 0, 1 eller 2; og
Z er hydrogen, C^—C4-alkyl, Cj —C4-alkoksy eller hydroksy;
hvori
R<g> er -(CH2)p-L-(CH2)q-T<*>;
RP er hydrogen, C-i-C6-alkyl eller -(CH2 )p-L-(CH2 )q-T' ;
hvor
p er 0, 1 eller 2;
L er en binding eller -0-;
q er 0, 1 eller 2; og
T' er fenyl;
Ry er -CH2-;
R<z> danner en mettet karbocyklisk ring med 5-8 atomer når den tas sammen med Ry og de tre karbonatomene ved siden av;
r er 1 eller 2; og
G er -(<C>H2)S-R, hvor s er 0-5, -CH=CH-( CH2 )t-R, hvor t er
0-3,
hvor
D og E hver uavhengig står for N eller CH;
k er 0 eller 1;
b er 0 eller 1; og
forutsatt at A ikke er hydrogen eller t-butyloksykarbonyl når G er -(C<H>2)S-R eller -CH=CH-(CH2)t-<R>
og R er -C(NH)NH2 eller -NH-C(NH)NH2,
Y er
eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), og og videre forutsatt at R ikke er amino eller guanidino når r=l og s=0; og videre forutsatt at A ikke er hydrogen, metylsulfonyl eller -(CH2)g-C00H når G er -(CH2)S-R hvori Y er eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), R' er hydrogen, T er cykloheksyl og Q er -NH-A; og videre forutsatt at A ikke er hydrogen, R"S02- (hvor R" er C1-C4-alkyl), eller -(CH2)g-COOH når T er cykloheksyl eller Y er eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), G er -(CH2)S-R eller -CH=CH-(CH2 )t-R og R er -C(NH)NH2 eller -NH-C(NH)NH2;
og videre forutsatt at A ikke er R"S02- når G er
, T er C-L-Cg-alkyl, eller og Q er -NH-A; og videre forutsatt at R ikke er hvori Z er hydrogen, a er 1, R' er hydrogen og Q er -NHA hvor A er hydrogen, Y er usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), r er 1 eller 2, og G er
(hvor D og E hver er CH, -(CHg^-R er para og k er 0);
og videre forutsatt at når:
Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen); og
G er
hvori den siste gruppen R er -C(NH)NH2 når k er 0 eller 1, eller R er -NH-C(NH)NH2 når k er 0;
da:
(a) når X er T-(CH2)a-CH(R')(Q)-C(0)-; og
R' er H;
Q er -NH-A; og
A er H,
R"S02-, R"0C(0)- (hvori de to sistnevnte gruppene R" er C±- C^ alkyl),
R<M>C(0)- (hvori gruppen R" er C^ C^ alkyl eller -(CH2)d-C00H, hvori d er 1 eller 2) eller -(CH2)g-C00H;
da er ikke gruppen T-(CH2)a:
(i) Ci-Cg alkyl; (ii) -(CH2)a-<C>5-C6 cykloalkyl; (iii) -(CH2)a-fenyl, hvor fenylgruppen er valgfritt substituert med en C^-C4 alkylgruppe; (iv) -(CH2)a-fenyl, hvor fenylgruppen er substituert med enten en hydroksy eller en C1-C4 alkoksygruppe; eller
(v) -(CH2)a-naftyl; og
(b) X er ikke prolinyl, homoprolinyl eller
og videre gitt at når: Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert prolinyl (RP
er hydrogen);
r er 1; og
G er
da:
(a) når X er T-(CH2)a-C(R')(Q)-C(0)-; og
Rf er H;
da er ikke Q OH, C^- C^ alkoksy eller -NH-A hvori A er;
(i) H; (ii) R"C(0)- hvori R" er C^ C^ alkyl; (iii) R"OC(0)- hvori R" er C1-C4 alkyl eller -CH2)d-COOH; eller (iv) R"S02- hvori R" er C±- C^ alkyl, eller -(CH2)d-COOH;
(a) forutsatt at når:
Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert prolinyl (RP er H);
X er T-(CH2)a-C(R')(Q)-C(0)-;
T er cykloheksyl;
R' er H;
G er -(CH2)S-R;
R er -NH-C(NH)-NH2; og
kjeden -(CH2)r-(<CH>2)s står for C2-C5 alkylen;
Q er -NH-A;
da er ikke A R"OC(0)- hvori R" er tert-butyl;
(b) og videre forutsatt at når:
Y er usubstituert prolinyl (RP er H);
X er T-(CH2)a-C(R')(0)-C(0)-;
T er cykloheksyl;
a er 1;
R<*> er H;
G er -(CH2)S-R; og
Q er -NH-A;
da:
(iii) når kjeden -(CH2)r-(CH2)s er C4 alkylen og R er -NH-C(NH)-NH2, da er A Ikke R"OC(0) hvori R" er tert-butyl, eller, uansett forutsetningene ovenfor, hvori forbindelsen med formel I er valgt fra: a. N - [ (metyl-lH-indol-2-yl)karbonyl]-D-fenylalanyl-N-[4-[(aminometyl)amino]butyl]-L-prolinamid; b. D-f enylalanyl-N-[4-[( aminoiminometyl )aminometyl]-fenyl-metyl] -L-prolinamid; c. D-fenylalanyl-N-[4-(aminometyl)fenylmetyl]-L-prolinamid; d. D-fenylalanyl-N-[3-(aminometyl)fenylmetyl]-L-prolinamid; e. D-fenylalanyl-N-[trans-4-(aminometyl)-cykloheksylmetyl]-L-prolinamid; f. D-fenylalanyl-N-[4-(amino)fenylmetyl]-L-prolinamid; g. D-fenylalanyl-N-[2-[4-(amino)fenyl]etyl]-L-prolinamid; i. D-fenylalanyl-N-[[3-( amimoiminometyl )f enyl] me tyl] - L- prolinamid; j . D-homoprolyl-N-[[4-(aminoiminometyl )f enyl] metyl ] - L- prolinamid; k. N-[[4-(aminoiminometyl )fenyl]metyl]-l-[[(4aS , 8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; 1. N-[[4-(aminoiminometyl ) feny1]metyl]-3-[[(4aS , 8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; m. (S-cis )-N-[ [4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-1-D-homopropyl-oktrahydro-lH-indol-2-karboksamid;
n. D-homopropyl-N-(a)-(2-fenyletyl)-N-[[4-(aminoiminometyl)-fenyl]metyl]glyeinamid;
o. D-homopropyl-N-[ [4-(aminoiminometyl )f eny 1] metyl ] - 4 -
fenoksy-L-prolinamid;
p. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[4-[amino(hydroksyimino)-metyl]fenylmetyl]-L-prolinamid;
q. N-(etyl sul fonyl)-D-fenylalanyl-N-[4-(aminoiminometyl)-fenylmetyl]-L-prolinamid;
r. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[3-[amino(hydroksyimino)-metyl]fenylmetyl]-L-prolinamid;
s. N-(etyl sul fonyl)-D-fenylalanyl-N-[3-(aminoiminometyl )-fenylmetyl]-L-prolinamid;
t. N -[ [3 -[amino(hydroksyimino]metyl]fenyl]metyl]-l-[[(4aS,-8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; u. N-[[3-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-l-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid;
v . N - ( etyl sulf onyl )-D-f enylalanyl-N - [2- [4-[amino(hydroksy-imino)metyl]fenyl]etyl]-L-prolinamid;
w. N-(etyl sul fonyl)-D-fenylalanyl-N-[2-[4-(aminoiminometyl)-fenyl]etyl]-L-prolinamid;
x. N-(etylsulfonyl )-D-fenylalanyl-N-[2-[3-[amino(hydroksy-imino)metyl]fenyl]etyl]-L-prolinamid;
y. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[2-[3-(aminoiminometyl)-fenyl]etyl]-L-prolinamid;
z. N-[2-[4-( amino(hydroksyimino)metyl]fenyl]etyl]-l-[[(4aS,-8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; aa. N-[2-[4-(aminoiminometyl)fenyl]etyl]-1-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid;
ab. N-[2-[3-[amino(hydroksyimino)metyl]f enyl] etyl] -1 -
[ [ (4aS ,8aS )-dekahydro-1 (R )-i sokinol inyl]karbonyl]-L-prolinamid; og
ac. N-[2-[3-(aminoiminometyl)f enyl]etyl]-l-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid.
En ytterligere gruppe av forbindelser med formel I omfatter de forbindelsene med formel I hvor X er prolinyl, homoprolinyl, R<m->(CH2)g-NH-CH2-C(0),
hvori
Rd er karboksy eller metylsulfonyl;
R<c> er C-j-CiQ-alkyl eller et (C3-C8)-c<y>kloalkyl ( C1- Cb)-alkylradikal med 4-10 karboner;
T er C3-C8-cykloalkyl, C^-Cs-alkyl,
a er 0, 1 eller 2;
Q er _NH-A; og
A er R"0C(0)- eller -(CH2)g-R<m>;
g er 1, 2 eller 3;
R' er hydrogen eller C-j-C^alkyl;
R" er _(CH2)d-R<m>.
R<m> er -C00R<b> eller -S02(<C>1-C4-alkyl);
R<b> er hydrogen eller Cj-^-alkyl;
d er 1, 2, eller 3;
m er 0, 1 eller 2;
n er 0, 1 eller 2; og
Z er hydrogen, C^-^-alkyl, Cy- C4-alkoksy eller hydroksy;
hvori
R<g> er -(CH2)p-L-(CH2)q-T';
RP er hydrogen, C1-C6-alkyl, eller -(CH2)p-L-(CH2)q-T';
hvor
p er 0, 1, 2, 3, eller 4;
L er en binding eller -0-;
q er 0, 1, 2 eller 3; og
T' er usubstituert eller substituert fenyl;
Ry er -CH2-;
R<z>' sammen med Ry og de tre tilstøtende karbonatomene, danner en mettet, karbocyklisk ring med 5-8 atomer;
r er 1, 2 eller 3; og
eller
hvor
D og E hver er uavhengig N eller CH;
k er 0 eller 1;
b er 0 eller 1; og
R er
og hvori et eller alle av de ellers usubstituerte karbonatomene til de aromatiske eller heteroaromatiske ringene av
kan bære en fluorsubstituent;
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav; eller et farmasøytisk akseptabelt solvat av nevnte forbindelse eller salt derav.
I tillegg til forbindelsene med formel I fremskaffer foreliggende oppfinnelse farmasøytiske formuleringer omfattende en forbindelse med formel I sammen med en farmasøytisk akseptabel, fortynner eller hjelpestoff.
Uttrykket "alkyl" alene eller som del av andre substituenter betyr et rettkjedet eller forgrenet alkylradikal med det angitte antallet karbonatomer slik som metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, t-butyl, isobutyl og sek-butyl. Uttrykket "perfluoralkyl" alene eller som del av en annen substituent betyr et rettkjedet eller forgrenet alkylradikal med det angitte antallet karbonatomer hvor hvert hydrogenatom er erstattet med et fluoratom slik som trifluormetyl, perfluor-etyl, perfluor-n-propyl, perfluorisopropyl, perfluor-n-butyl, perfluor-t-butyl, perfluorisobutyl og perfluor-sek-butyl.
Uttrykket "C3-Cg-cykloalkyl" refererer til mettede ali-cykliske ringer med 3 til 8 karbonatomer slik som cyklopropyl, metylcyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cykloheksyl, 4-metylcykloheksyl, cyklooktyl og lignende.
Uttrykket "alkoksy" betyr et rettkjedet eller forgrenet alkylradikal som har det angitte antallet karbonatomer bundet til hoveddelen ved et oksygenatom. Uttrykket "halo" betyr klor, fluor, brom eller jod. Uttrykket "acetyl" betyr CH3-C(0)-. Uttrykket "t-butyloksykarbonyl" betyr (CH3)3C-0-C(0)- og er forkortet "Boe". Uttrykket "benzyloksykarbonyl" betyr C6H5CH2-0-C(0)- og er forkortet "Cbz".
Uttrykket "5- eller 6-ledds heterocyklisk ring" betyr en hvilken som helst 5- eller 6-ledds ring som vil gi en stabil struktur inneholdende et eller to nitrogenatomer; et svovelatom; et oksygenatom; et nitrogenatom og et svovelatom; eller et nitrogenatom og et oksygenatom. 5-leddsringen har en eller to dobbeltbindinger og 6-leddsringen har to eller tre dobbeltbindinger. Slike heterocykliske systemer omfatter furyl, tienyl, pyrrolyl, pyrazolyl, oksazolyl, isoksazolyl, tiazolyl, isotiazolyl, pyranyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, oksazinyl og tiazinyl.
Det må noteres at mange av de ovenfor nevnte heterocyklusene kan eksistere i tautomere former. Alle slike er inkludert innen rammen av oppfinnelsen.
Alle av de aromatiske eller heteroaromatiske gruppene opplistet definisjonenen av Ar og R" er uavhengig ikke-substituert eller substituert med en eller to substituenter som vil gi en stabil struktur uavhengig valgt blant halo, hydroksyl, C-j— C4-alkyl, C-j-C4-alkoksy, amino (-NH2), mono(C1-C4-alkyl)amino, -(CH2)jC00H, merkapto, -S(0 )h(C1-C4-alkyl), -NHS(0)h(C1-C4-alkyl), -NHC(0)(C1-C4-alkyl), -S(0)hNH2, -S(0)hNH(C1-C4-alkyl) eller -S(0)h(C1-C4-alkyl)2, h er 0, 1 eller 2, og j er 0, 1, 2, 3 eller 4. En spesielt foretrukket verdi for substituenten R"(C)0- er 1-metylindol-2-oyl.
I representasjonen av formel I er karbonylfunksjonaliteten til gruppe X bundet til aminfunksjonaliteten av gruppen Y. Karbonylfunksjonaliteten til Y er så forbundet til aminogruppen tegnet i formel I.
Gruppen
hvor Z og A begge er hydrogen, er til tider her referert til som fenylglycyl og forkortet Phg. Forbindelser hvor A er eksempelvis metyl, er referert til som Na<->metyl-fenylglycylgruppen og forkortet MePhg. Substituerte forbindelser hvor Z er forskjellig fra hydrogen er referert til ved typen og posisjonen til substituentgruppen, f.eks. 3'-klorfenylglycyl eller Phg(3-Cl). Gruppen
, hvor Z og A begge er hydrogen, er
til tider her referert til som fenylalanyl og forkortet Phe. Forbindelser hvor A er f.eks. metyl, er referert til som Na-metyl-fenylalanylgruppen og forkortet MePhe. Substituerte forbindelser hvor Z er forskjellig fra hydrogen er referert til ved typen og posisjonen til substituentgruppen, f.eks. 3'-klorfenylalanyl eller Phe(3-Cl).
Gruppene
når R' er hydrogen, er til tider referert til her som henholdsvis 1— og 3—tetrahydro-isokinolinkarbonyl og henholdsvis forkortet 1-Tiq og 3-Tiq. Gruppene når R' er hydrogen, er til tider referert til som henholdsvis 1— og 3—perhydro-isokinolinkarbonyl og er henholdsvis forkortet 1—Piq og 3—Piq. Som indikert ved de bølgede linjene eksisterer forskjellige fusjonsisomerer av disse substituentene, foreliggende oppfinnelse angår en hvilken som helst indi-viduell isomer eller kombinasjoner derav. Gruppene er referert til som henholdsvis prolinyl og azetidin-2-karbonyl og er henholdsvis referert til som Pro og Azt. Gruppen står for et mettet bicyklisk system av 4,5—; 5,5—; 6,5-; 7,5—; eller 8,5-typen. Stereo-kjemien ved 3a er cis til karbonyl; de andre brohode-bindingene kan enten være cis eller trans bortsett fra at 4,5- og 5,5-systemet må være cis ved brohodet. Definisjonene for Ry og R<z> sikrer at den variable ringen som omfatter de tre karbonatomene vist, er et mettet karbocyklisk system med 4-8 atomer. Alle ringatomene kan være karbon eller et av ringatomene kan være et heteroatom valgt blant -0-, -S- og —NH—. Denne definisjonen omfatter den foretrukne gruppen avledet fra oktahydroindol-2-karboksylsyre, forkortet "Ohi", som representert ved
Forskjellige
cis- og trans-former av denne gruppen er omfattet av oppf innelsen.
Stjernen i radikalet Y angir et chiralt senter som er (L). Stjernen i radikalet X angir et chiralt senter som er (D) eller (DL); # i radikalet X angir et chiralt senter som er
(L).
I tillegg, kan diastereomerer eksistere avhengig av for-grening av alkylsubstituenter. Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse angår blandinger av de to eller flere diastereomerer så vel som hver enkelt individuelle isomer.
Foretrukne forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter de forbindelsene med formel I hvor X er
, homoprolinyl 1- eller 3-Tiq eller 1-
eller 3-Piq, og Y er prolinyl og farmasøytisk akseptable salter og solvater derav. Spesielt, er forbindelser hvor Q er NHA og A er hydrogen eller et sulfonamid (f.eks. A = R"S02-), R' er hydrogen, Z er hydrogen og B er hydrogen, alle foretrukket. De forbindelsene hvor R er guanidino eller spesielt en amidinogruppe er også foretrukket.
En spesielt foretrukket kombinasjon av substituenter er hvor G er R-substituert fenyl (dvs. D=ECH, k=0); spesielt foretrukket er hvor G er en 4-amidinofenylgruppe.
En foretrukket gruppe av disse forbindelsene hvor en eller alle av de ellers ikke-substituerte karbonatomene i de aromatiske eller heteroaromatiske ringene i
bærer en fluorsubstituent, er en hvor ingen fluorsubstituent er a— eller til D eller E, når D eller E er N. En annen gruppe av foretrukne forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse er de forbindelsene med formel I som definert ovenfor, hvor X er
, hvor T er
cykloheksyl, a er 1, R' er hydrogen og Q er -NH-A. En spesielt foretrukket undergruppe er en hvor A er hydrogen. En annen spesiell foretrukket undergruppe er en hvor A er R"S02-, spesielt hvor R" er etyl. En tredje spesielt
foretrukket subgruppe er en hvor A er -(CH2)g-COOH; fortrinnsvis er g 1.
Foretrukne verdier for Y i forbindelsen med formel I hvor X, r og G er som definert ovenfor, omfatter (L)-prolinyl (Pro), (S)-cis-oktahydro-lH-indol-2-karbonyl (Ohi) og N-(2-fenyl-etyl)glycyl [N(PhCH2CH2)Gly].
For en forbindelse med formel I hvor R er -NH2 , er det foretrukket at verdiene for X og Y er valgt blant de definert ovenfor og verdien for r og G er valgt blant
a) r er 1 og G er
hvor anilinoringen kan bære en eller flere fluorsubstituenter; b) r er 1 og G er ; og c) r er 1 eller 2 og G er
En spesielt foretrukket gruppe av forbindelser med formel i
er en hvor Y er (L)-prolinyl, r er 1 og G har verdien
hvor hver av D og E er CH, k er 0 og R er amidino og som kan bli representert ved formel Ia
hvor benzamidinringen er ikke-substituert eller kan bære en eller to fluorsubstituenter, fortrinnsvis meta- for amidino-radikalet og X har en hvilken som helst av verdiene definert ovenfor.
En mer foretrukket verdi for en forbindelse med formel Ia er en hvor benzamidinringen er ikke-substituert.
En annen foretrukket gruppe av forbindelser med formel I er en hvor Y er (L)-prolinyl, r er 1 og G har verdien
hvor M er S, hver W er CH og R er amidino, og kan bli representert ved formel Ib hvor X har en hvilken som helst av verdiene definert ovenfor. En ytterligere foretrukket gruppe av forbindelser med formel I er en hvor Y er (L)-prolinyl, r er 1 og G har verdien hvor D er N eller CH, k er 0 og R er amidino, og som kan bli representert ved formel Ic hvor X kan ha en hvilken som helst av verdiene definert ovenfor og D er N eller CH. En foretrukket verdi for X for en forbindelse med formel Ia, Ib eller Ic er
, hvor R' er hydrogen, a er 1,
T er cykloheksyl eller fenyl og Q er -NH-A. Mer foretrukket er A hydrogen, etylsulfonyl eller karboksymetyl. En spesielt foretrukket verdi for X er N-karboksymetyl-D-cykloheksylalanyl. En annen foretrukket verdi for X er N-karboksymetyl-D-fenylalanyl.
Spesifikke forbindelser med formel I ifølge oppfinnelsen er beskrevet i eksemplene. Foretrukne eksempler som kan bli benyttet som farmasøytisk akseptable salter eller solvater kan bli valgt blant de beskrevet som eksemplene 15, 18, 23, 44, 45, 46, 48, 49, 51, 52, 56, 65, 66, 68, 69, 70, 71, 72, 80, 86, 87, 88 og 92. En mer foretrukket forbindelse kan bli valgt blant forbindelsene beskrevet i eksemplene 45, 46, 48, 51, 65, 70, 71 og 72. En mest foretrukket forbindelse basert på dets uventet overlegne egenskaper er eksempel 48. En annen meget foretrukket forbindelse er eksempel 65.
Som nevnt ovenfor, omfatter oppfinnelsen farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene definert ved formel I. En foretrukket forbindelse ifølge oppfinnelsen kan ha en eller flere tilstrekkelig basiske, funksjonelle gruppe og følgelig reagere med et hvilket som helst antall uorganiske og organiske syrer for å danne farmasøytisk akseptable salter. Syrer som vanligvis blir benyttet for å danne syreaddisjonssalter er uorganiske syrer slik som saltsyre, hydrogenbromid, hydrogenjodid, svovelsyre, fosforsyre og lignende og organiske syrer slik som p-toluensulfonsyre, metansulfonsyre, oksalsyre, p-bromfenylsulfonsyre, karbonsyre, ravsyre, sitronsyre, benzosyre, eddiksyre og lignende. Eksempler på farmasøytisk akseptable salter er således sulfat, pyrosulfat, bisulfat, sulfitt, bisulfitt, fosfat, monohydrogenfosfat, dihydrogenfosfat, metafosfat, pyrofosfat, klorid, bromid, jodid, acetat, propionat, decanoat, kaprylat, akrylat, format, isobutyrat, kaproat, heptanoat, propiolat, oksalat, malonat, succinat, suberat, sebacat, fumarat, maleat, butyn-1,4-dioat, heksyn-1,6-dioat, benzoat, klorbenzoat, metyl-benzoat, dinitrobenzoat, hydroksybenzoat, metoksybenzoat, ftalat, sulfonat, xylensulfonat, fenylacetat, fenylpropionat, f enylbutyrat, citrat, lactat, "Y-hydroksybutyrat, glykollat, tartrat, metansulfonat, propansulfonat, naftalen-l-sulfonat, naftalen-2-sulfonat, mandelat og lignende. Foretrukne farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter er de dannet med mineralsyrer slik som saltsyre, hydrogenbromid og svovelsyre.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse er kjent for å danne hydrater og solvater med passende oppløsningsmidler. Passende oppløsningsmidler for fremstilling av solvatformer omfatter vann, alkoholer, tetrahydrofuran, DMF og DMSO. Foretrukne alkoholer er metanol og etanol. Andre passende oppløsningsmidler kan bli valgt basert på størrelse av solventmolekylet. Mindre solventmolekyler er foretrukket for å lette tilsvarende solvatdannelse. Solvatet eller hydratet blir typisk dannet i løpet av rekrystalliseringen eller i løpet av saltdannelsen. En nyttig referanse hva angår solvater er Sykes, Peter, A Guidebook to Mechanism in Organic Chemistry, 6. utg. (1986, John V/iley & Sons, New York). Som benyttet her, inkluderer uttrykket "solvat" hydratformer, slik som monohyrater og dihydrater.
Forbindelsene med formel I blir fremstilt ved kjente fremgangsmåter for peptidkobling. Ifølge en fremgangsmåte hvor syren P-X'-COOH, hvor -X'-C(0)- er -X-, har samme betydning som definert for formel I og P er en aminobeskyttende gruppe, blir hvis nødvendig, koblet med en karboksybeskyttende Y-forbindelse for å danne et dipeptid (a). Den karboksybeskyttende estergruppen til Y-delen blir så fjernet
(deblokkering eller de-esterifisering) og den frie syreformen av dipeptidet (b) blir koblet med den beskyttede reagens (d). Reaksjonssekvensen ovenfor er illustrert ved følgende skjema 1:
hvor G' er den samme som G bortsett fra at R er -CN, -NHP, hver P står for en aminobeskyttende gruppe hvis nødvendig, P' er H eller P og alk er laverealkyl eller en tilsvarende karboksylsyre-beskyttende gruppe, og —Y'- er den samme som Y med amino- og karboksyfunksjonali-tetene tilgjengelige, dvs. -Y- er den samme som -N-Y'-C(0)-.
Hvis til stede, er cyanogruppen i G' bygget opp til en verdi på R; og de beskyttende gruppene i (c) blir så fjernet ved prosedyrer som er kjent for fagmannen, slik som hydrogenering over en metallkatalysator for å gi forbindelser med formel I.
Koblingen av en P-X•-COOH-forbindelse med HN-Y'-COO-alk blir utført ved først beskyttelse av aminogruppen på aminosyren, hvis noen. Konvensjonelle aminobeskyttende grupper vanligvis benyttet for temporær beskyttelse eller blokkering av aminogruppen blir benyttet.
Den aminobeskyttende gruppen refererer til substituenter av aminogruppen vanligvis benyttet for å blokkere eller beskytte aminofunksjonaliteten når reaksjon av andre funksjonelle grupper på forbindelsen. Eksempler på aminobeskyttende grupper omfatter formylgruppen, tritylgruppen, ftalimido-gruppen, trikloracetylgruppen, kloracetyl, bromacetyl- og jodacetylgruppene, uretan-type blokkerende grupper slik som benzyloksykarbonyl, t-butoksykarbonyl, 4-fenylbenzyloksy-karbonyl, 2-metylbenzyloksykarbonyl, 4-metoksybenzyloksy-karbonyl, 4-fluorbenzyloksykarbonyl, 4-klorbenzyloksykarbonyl, 3-klorbenzyloksykarbonyl, 2-klorbenzyloksykarbonyl, 2,4-diklorbenzyloksykarbonyl, 4-brombenzyloksykarbonyl, 3— brombenzyloksykarbonyl, 4-nitrobenzyloksykarbonyl, 4- cyanobenzyloksykarbonyl, 2-(4-xenyl)isopropoksykarbonyl, 1,1-difenylet-l-yloksykarbonyl, 1,1-difenylprop-l-yloksykarbonyl, 2-fenylprop-2-yloksykarbonyl, 2-(p-toluyl)prop-2-yloksykarbonyl, cyklopentanyloksykarbonyl, 1-metylcyklo-pentanyloksykarbonyl, cykloheksanyloksykarbonyl, 1-metylcykloheksanyloksykarbonyl, 2-metylcykloheksanyloksykarbonyl, 2-(4-toluylsulfonyl)etoksykarbonyl, 2-(metylsulfonyl )etoksy-karbonyl, 2-(trifenylfosfino)etoksykarbonyl, 9-fluorenylmetoksykarbonyl ("FMOC"), 2-(trimetylsilyl)etoksykarbonyl, allyloksykarbonyl, 1-(trimetylsilylmetyl)prop-l-enyloksy-karbonyl, 5-benzisoksalylmetoksykarbonyl, 4-acetoksy-benzyloksykarbonyl, 2,2,2-trikloretoksykarbonyl, 2-etynyl-2-propoksykarbonyl, cyklopropylmetoksykarbonyl, 4-(decyloksy)-benzyloksykarbonyl, isobornyloksykarbonyl, 1-piperidyloksy-karbonyl og lignende; benzoylmetylsulfonylgruppen, 2—(nitro)-fenylsulfenylgruppen, difenylfosfinoksydgruppen og lignende aminobeskyttende grupper. Typene av aminobeskyttende grupper benyttet er ikke kritiske så lenge den derivatiserte aminogruppen er stabil ved betingelsene ved de påfølgende reaksjonene på andre posisjoner av molekylet og kan bli fjernet ved passende tidspunkt uten å ødelegge resten av molekylet. Foretrukne aminobeskyttende grupper er benzyloksykarbonyl, allyloksykarbonyl, t-butoksykarbonyl og tritylgrupper. Tilsvarende aminobeskyttende grupper benyttet i cefalosporin-, penicillin- og peptidteknikken er også omfattet av uttrykkene ovenfor. Ytterligere eksempler på grupper referert til ved de ovenfor nevnte uttrykkene er beskrevet av J.W. Barton, "Protective Groups in Organic Chemistry", J.G.V. McOmie, utg. , Plenum Press, New York, N.Y., 1973, kapitel 2 og T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1981, kapitel 7. Beslektede uttrykk "beskyttet amino" definerer en aminogruppe substituert med en aminobeskyttende gruppe som diskutert ovenfor.
Ved utførelse av koblingsreaksjonen blir det benyttet en esterbeskyttende gruppe for HN-Y'-COOH som dannes ved betingelser under hvilke den aminobeskyttende gruppen forblir intakt. Den aminobeskyttende gruppen av den acylerende syren P-X'-COOH forblir således til stede for beskyttelse av aminogruppen under den påfølgende kobling med aminet (d) for å danne (c ).
Den karboksybeskyttende estergruppen som benyttet i be-skrivelsen refererer til en av esterderivatene av karboksylsyregruppen som vanligvis blir benyttet for å blokkere eller beskytte karboksylsyregruppen mens reaksjoner blir utført på andre funksjonelle grupper på forbindelsen. Eksempler på slike karboksylsyrebeskyttende grupper omfatter C^—C^j-alkyl, benzyl, 4-nitrobenzyl, 4-metoksybenzyl, 3,4-dimetoksybenzyl, 2,4-dimetoksybenzyl, 2,4,6-trimetoksybenzyl, 2,4,6-trimetyl-benzyl, pentametylbenzyl, 3,4-metylendioksybenzyl, benz-hydryl, 4,4'-dimetoksybenzhydryl, 2,2',3,3'-tetrametoksybenz-hydryl, t-butyl, t-amyl, trityl, 4-metoksytrityl, 4,4'-dimetoksytrityl, 4,4',4"-trimetoksytrityl, 2-fenylprop-2-yl, trimetylsilyl, t-butyldimetylsilyl, fenacyl, 2,2,-triklor-etyl, p<->(trimetylsilyl)etyl, e-(di-(n-butyl )metylsilyl)etyl, p-toluensulfonyletyl, 4-nitrobenzylsulfonyletyl, allyl, cinnamyl, l-(trimetylsilylmetyl)-prop-l-en-3-yl og lignende grupper. Typen karboksybeskyttende gruppe benyttet er ikke kritisk så lenge den derivatiserte karboksyl syren er stabil for betingelsene for de påfølgende reaksjoner på andre posisjoner enn molekylet og kan bli fjernet ved passende tidspunkt uten å ødelegge resten av molekylet. Spesielt, er det viktig ikke å utsette det karboksybeskyttende molekylet for sterke nukleofile baser eller reduktive betingelser ved anvendelse av høyt aktiverte metallkatalysatorer som Raney-nikkel. (Slike tøffe fjerningsbetingelser må også bli unngått ved fjerning av de aminobeskyttende grupper diskutert ovenfor.) Ytterligere eksempler på disse gruppene er funnet i E. Haslam, "protective Groups in Organic Chemistry", J.G.W. McOmie, utg., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, kapitel 5 og T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1981, kapitel 5.
Forbindelsene med formel I kan også bli fremstilt ved først syntetisering av HN-Y'-CONH(CH2)r-G'-amldforløperen og så reagere med en beskyttet X-gruppe. Ifølge en slik fremgangsmåte blir (d) fremstilt og koblet med PN-Y'-COOH (g) som vist nedenfor for å gi amidet (h).
hvor P står for en aminobeskyttende gruppe slik som benzyloksykarbonyl (Cbz)-gruppen, t-butoksykarbonyl (Boe), p-toluensulfonyl og lignende. Fortrinnsvis er den aminobeskyttende gruppen mulig å fjerne ved hydrogenering eller behandling med mild syre (f.eks. trifluoreddiksyre) eller en sterk syre (f.eks. HC1). Eksempler på andre passende aminobeskyttende grupper kan finnes i "Protective Groups in Organic Synthesis", 2. utgave, av T.W. Greene og Peter G.M. Wuts, kapitel 7, sidene 309-405 (1991), John Wiley & Sons, Inc. Boe eller andre passende beskyttende grupper blir fjernet fra aminonitrogenet på Y-resten som så blir acylert med den ønskede aminosyre-acylgruppen for å gi dipeptidet vist nedenfor.
P-X'-C00H + HN-Y'-CONH-(CH2)r-G' P-X'-CO-N-Y<*->C0NH-(CH2)r-G'
(c)
Cyanogruppen, hvis til stede i G', blir oppbygget og beskyttende grupper på (c) blir fjernet som beskrevet tidligere.
Koblingen av en P-X<*->COOH-forbindelse blir utført ved først beskyttelse av aminogruppen på aminosyren, hvis noen. Konvensjonelle aminobeskyttende grupper vanlig benyttet for temporær beskyttelse eller blokkering av aminogruppen, blir benyttet. Eksempler på slike beskyttende grupper er beskrevet ovenfor.
Koblingsreaksjoner beskrevet ovenfor blir utført i kaldt, fortrinnsvis ved en temperatur mellom omkring —20°C og omkring 15°C. Koblingsreaksjonene blir utført i et inert, organisk oppløsningsmiddel slik som dimetylformamid, dimetylacetamid, tetrahydrofuran, metylenklorid, kloroform og lignende vanlige oppløsningsmidler eller blandinger av slike oppløsningsmidler. Generelt, blir vannfrie betingelser benyttet når i koblingsreaksjonen, en aktiv ester av den acylerende syren blir benyttet.
Mellomproduktene (d) og (g) blir fremstilt ved standardteknikker innen organisk kjemi som oppsummert i de følgende skjemaer:
Ifølge sekvensen ovenfor kan beskyttede guanidiner bli fremstilt ved dobbel beskyttelse av S-metylisotiourea. En foretrukket blokkerende gruppe er t-butyloksykarbonyl(Boe)-gruppen som kan bli innført ved å la S-metylisotiourea reagere i nærvær av di-t-butyldikarbonat. Ofte blir en syresaltform av S-metylisotiourea benyttet, som kan bli spaltet ved den frie baseformen in situ ved oppløsning av saltet i vann og behandling med vandig base. Di-t-butyldi-karbonatet blir så innført i reaksjonen i et vannblandbart oppløsningsmiddel, slik som t-butanol, for å gi den dobbelt beskyttede S-metylisotiourea. Det ønskede dobbelt beskyttede guanidin blir så dannet etter behandling med passende diamin-H2N-K-NH2 i et ikke-reaktivt oppløsningsmiddel eller kombinasjon av oppløsningsmidler. Typiske vannblandbare oppløsningsmidler er slik som dimetylformamid, eller vann, eller blandinger derav, blir effektivt benyttet. Slike reaksjoner blir generelt fullført i løpet av omkring 3-72 timer. Det resulterende, beskyttede guanidin kan så bli koblet som tidligere beskrevet for å gi de beskyttede mellomproduktene til forbindelsene med formel I hvor R er
For forbindelsene med formel I hvor R= -NH2, er mellomproduktet et enkelt, beskyttet diamin. I de fleste tilfeller kan dette mellomproduktet bli fremstilt ved enkelt å la et ikke-beskyttet diamin reagere med en molar ekvivalent av beskyttelsesreagensen. Andre fremgangsmåter for innføring av det endelige amin (R= -NH2) vil være opplagt for den organiske kjemiker. F.eks., kan aminet bli oppnådd fra andre forløperfunksjonaliteter, f.eks. en nitrogruppe eller en cyanogruppe. For en nitrogruppe vil transformasjonen til en aminogruppe vanligvis bli utført på de substratene hvor nitrogruppen er direkte bundet til en aromatring, spesielt en fenylgruppe. I slike tilfeller, blir nitrofenylgruppen redusert til den tilsvarende anilinfunksjonalitet ved en hvilken som helst av et antall fremgangsmåter som er kjent i teknikken. En spesielt effektiv fremgangsmåte er behandling av nitroforbindelsen med natriumhydrosulfitt i et ikke-reaktivt oppløsningsmiddel, slik som etanol, vann eller en blanding derav. Når nitroforbindelsen blir oppvarmet ved tilbakeløpskjøling i en vann/etanol-blanding i nærvær av natriumhydrosulfitt, er reduksjonen vanligvis fullstendig innen flere timer. En cyanogruppe kan tilsvarende bli redusert, når passende, i nærvær av et reduksjonsmiddel slik som litiumaluminiumhydrid, boran i et oppløsningsmiddel slik som tetrahydrofuran, eller ved en metallfremmet natriumbor-hydridreduksjon.
Amidinene ifølge oppfinnelsen
kan også bli fremstilt fra en nitrilforløper. Et antall prosedyrer for utførelse av denne transformasjonen er kjent i teknikken. Spesielt, er anvendelsen av hydrogensulfid i en blanding av pyridin og trietylamin, fulgt av behandling med aceton og metyljodid, og endelig ammoniumacetat i metanol, en foretrukket og effektiv måte for å utføre denne omdanningen. Alternativt, kan oppvarming av nitrilet med hydroksylaminhydroklorid og en base slik som N,N-diisopropyletylamin i et hydrosylisk oppløsningsmiddel slik som etanol fulgt av katalytisk hydrogenering (f.eks. hydrogenolyse over palladium-på-karbon) også bli benyttet for å utføre denne transformasjonen. Denne prosessen gir hydroksyamidinet
som et mellomprodukt som kan bli isolert, hvis
ønsket.
De andre forbindelsene benyttet som initielle startmaterialer i syntesen av forbindelsene ifølge oppfinnelsen, er velkjente og i den grad de ikke er kommersielt tilgjengelige, blir de lett syntetisert ved standard prosedyrer som vanligvis blir benyttet av fagmannen.
De 4-substituerte prolinene (RP er Cj—CD-alkyl, C3—Cg-cykloalkyl eller -(CH2)p-L-(CH2)q-T') blir benyttet for fremstilling av forbindelsene ifølge oppfinnelsen er alle i cis-konfigurasjon i 4-substituenten i forhold til karbonyl-gruppen. Mellomproduktene for innføring av denne funksjonali-teten i forbindelsen med formel I blir gjort ved standard teknikker.
F.eks., kan 4-substituerte prolinderivater hvor RP-gruppen Inneholder en metylengruppe ved festepunktet for prolinringen, bli fremstilt på den følgende måte:
hvor R^ = R<r>CH2 = en RP-gruppen inneholdende en metylengruppe ved festepunktet for prolinringen.
Et 4-hydroksyprolin (både cis- og trans-formene er kommersielt tilgjengelige) blir først beskyttet med en aminobeskyttende gruppe - Cbz-gruppen er spesielt anvendelig for denne sekvensen. Det resulterende mellomprodukt blir så esteri-fisert (metyl— eller spesielt etylesterene er spesielt foretrukket) og så oksydert for å gi det tilsvarende keton. Denne oksydasjonen blir utført under hvilke som helst oksydasjonsbetingelser slik som Jones-oksydering eller pyridiniumklorkromat; spesielt nyttig for denne transformasjonen er anvendelsen av pyridiniumklorkromat i et tørt, ikke-reaktivt oppløsningsmiddel slik som dlklormetan. Når dette får reagere i 8-16 timer, er reaksjonen vanligvis fullstendig når utført ved omgivelsestemperatur. Keton-mellomproduktet blir så reagert med et passende Wittig-reagens for å gi det ønskede olefin. Typisk blir passende RP-substituert trifenylfosfoniumhalid tilsatt til et tørt, inert oppløsningsmiddel (f.eks. tetrahydrofuran) som inneholder en sterk base (f.eks. kalium-t-butoksyd). Ketonet blir Innført og etter omkring 3 timer ved omgivelsestemperatur kan det ønskede olefinmellomproduktet bli isolert. For å oppnå godt utbytte av olefin er det foretrukket at et 0,4-0,6 molart overskudd av Wittig-reagens blir benyttet i forhold til ketonet. Olefinet blir så redusert til det ønskede RP-substituerte prolinet ved standard reduksjonsteknikker. Katalytisk hydrogenering er den mest anvendelige metoden for utførelse av denne transformasjonen i laboratoriet. Eydroge-nering av olefinet i nærvær av en katalysator (f.eks. 5$ palladium-på-karbon) i et inert oppløsningsmiddel slik som etanol, vil være effektiv ved atmosfærisk trykk. For disse mellomproduktene hvor den aminobeskyttende gruppen er Cbz, fjerner hydrogeneringen også den beskyttende gruppen som gir en forbindelse som kan bli benyttet for kobling til P-X'-C00H. Fagmannen vil forstå at denne fremgangsmåten ikke blir effektiv for fremstilling av forbindelser hvor RP-gruppen er forbundet til prolinringen gjennom et heteroatom eller en aromatisk ring. Således, i skjemaet ovenfor, vil R<3 >være alkyl, aralkyl (f.eks. benzyl), (cykloalkyl)alkyl, osv.
En beslektet fremgangsmåte for fremstilling av disse mellomproduktene er oppsummert i det følgende skjema:
Reaksjonsskjemaet ovenfor er et alternativ for Wittig-reaksjonen beskrevet tidligere og er anvendelig for fremstilling av forbindelser hvor Wittig-reagenset ikke kan bli fremstilt. Således, for fremstilling av mellomprodukter hvor Ra er alkyl, fenyl og lignende, blir pyrrolidinonmellom-produktet reagert med et passende Grignard-reagens. Typisk, blir et svakt, molart overskudd av Grignard-reagensen benyttet, vanligvis ved lave temperaturer (f.eks. —80 til —60°C) i en inert oppløsning med lavt frysepunkt slik som tetrahydrofuran. Etter tilsetning av reagensene, kan reaksjonsblandingen bli oppvarmet til romtemperatur, hvoretter reaksjonen vanligvis blir fullstendig i løpet av en del timer. Det resulterende mellomproduktet blir så de-hydrert, f.eks. ved behandling med trifluoreddiksyre. 3,4-dehydro-mellomproduktet blir så redusert til det ønskede cis-mellomproduktet ved anvendelse av de samme reduktive betingelsene som beskrevet ovenfor for reduksjon av olefinmellomproduktet.
Mellomprodukter hvor hetero-"L"-gruppen er oksygen og er forbundet direkte til prolinringen (dvs. p=0) kan bli fremstilt ved anvendelse av Mitsunobu-reaksjonen (Mitsunobu, Synthesis, 1 (1981));
I denne reaksjonen, blir trans-hydroksypyrrolidinkarboksyl-syreesteren reagert med trifenylfosfin i et oppløsningsmiddel slik som tetrahydrofuran i nærvær av Ar-O-H. Blandingen blir avkjølt til omkring 0°C og dietylazodikarboksylat blir tilsatt. Etter oppvarming til romtemperatur blir reaksjonsblandingen opparbeidet for å gi det ønskede cis-mellomprodukt. Mens skjemaet ovenfor angir reaksjon for forbindelser hvor L = -0-, p=q=0 og T=Ar, er denne sekvensen anvendelig for fremstilling av andre forbindelser hvor p=0 og L er -0-.
Mellomprodukter hvor L er svovel og er forbundet direkte til ringen, kan bli fremstilt ved først omdanning av hydroksy-gruppen til tosylat eller andre annen tilsvarende avspaltbar gruppe og så erstatte med et tiolatanion (se f.eks. Krapcho et al., J. Med. Chem., 31, 1148-1160 (1988); Smith et al., J. Med. Chem., 31, 875-855 (1988)).
Mellomprodukter hvor L er nitrogen og er forbundet direkte til ringen kan bli fremstilt ved først omdanning av hydroksy-gruppen til et tosylat eller en annen tilsvarende avspaltbar gruppe, og så erstattes med azid. Azidet kan bli redusert ved anvendelse av kjente fremgangsmåter og så alkylert for å gi den ønskede funksjonalitet (se f.eks. Smith et al., J. Med. Chem., 31, 875-855 (1988)).
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen inneholdende en cis-Ohi-funksjonalitet blir fremstilt ved å fremstille (S)-indolin-karboksylsyreetylester fra den tilsvarende syre (se Vincent et al., Drug Design and Discovery, vol. 9, sidene 11-28
(1992)), og redusere dette mellomproduktet ved hydrogenering over 5$ Pd/C i etanol for å gi oktahydroindol-2-karboksyl-syreesteren, generelt referert til Ohi-ester som oppsummert nedenfor. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen som inneholder en trans-Ohi-funksjonalitet blir fremstilt ved fremgangsmåten ifølge Vincent et al., Drug Design and Discovery, vol. 9, sidene 11-28 (1992)). Dette er oppsummert i skjemaet vist nedenfor: .
Forbindelsen ifølge oppfinnelsen som inneholder et bicyklisk system (med eller uten heteroatom) kan bli fremstilt ved fremgangsmåten ifølge Teetz et al., Tetrahedron Letters, 25, 4479 (1984). Generelt:
hvor P er en beskyttende gruppe og Rx er alkyl.
Mellomproduktene for innføring av N-substituert glycin-funksjonalitet (Y) benyttet for fremstilling av forbindelsene ifølge oppfinnelsen, blir fremstilt ved standard teknikker.
F.eks., kan en haloacetatester slik som t-butylbromacetat, bli omdannet til den ønskede, substituerte forbindelsen ved behandling med det passende primære amin:
t-butylbromacetatet blir tillatt å reagere med et passende amin enten rent eller fortrinnsvis i et ikke-reaktivt oppløsningsmiddel, slik som en alkohol. Det er foretrukket at et molart overskudd av aminet blir benyttet for å tvinge reaksjonen til fullførelse. Fortrinnsvis inneholder reaksjonsblandingen også en ikke-reaktiv syrefanger, slik som minst en molarekvivalent trietylamin. Mens reaktantene vanligvis blir avkjølt, (f.eks. 0°C), får reaksjonsblandingen vanligvis oppvarmes til romtemperatur etter hvilket reaksjonen vanligvis er fullstendig i løpet av 24 timer. Selv om bromacetatet er foretrukket, kan andre haloacetater, slik som
jodacetater og kloracetater, bli benyttet for denne transformasjonen. Andre estergrupper kan bli benyttet tilsvarende, t—butylesteren er foretrukket da den senere enkelt kan bli fjernet etter behandling med anisol og trifluoreddiksyre.
En annen fremgangsmåte for fremstilling av disse mellomproduktene er oppsummert i det følgende skjema:
hvor RO<->CHg- er en R<r->gruppe som har en ikke-substituert metylengruppe naboliggende til tilknytningspunktet til glycingruppen.
I reaksjonsskjemaet ovenfor, blir det passende aldehydet blandet med glycinester i et ikke-reaktivt oppløsningsmiddel slik som metanol eller etanol. Dersom en saltform av glycinesteren blir benyttet, kan en molar ekvivalent av en base slik som kaliumhydroksyd, bli tilsatt for å tillate dannelsen av fri base av aminoesteren. Reaksjonen av aldehydet og glycinesteren danner den intermediate Schiffs basen som kan bli redusert in situ etter behandling med et reduksjonsmiddel slik som natriumcyanoborhydrid. Dannelsen av Schiffs base opptar vanligvis i løpet av mindre enn 1 time; reduksjonen er generelt fullstendig etter 10-15 timer. Metyl-eller etylestere er spesielt anvendelige da disse gruppene kan bli fjernet (avblokkert) etter behandling med litium-hydroksyd i vandig dioksan. Anvendelse av et passende keton istedenfor aldehyd R°-CH0 resulterer i fremstillingen av mellomprodukter hvor metylengruppen som er bundet til glycinaminet, er substituert.
Alternativt og spesielt for de forbindelsene hvor R§ er Ar (dvs. uten en mellomliggende alkylgruppe), er det foretrukket å fremstille mellomproduktet P-X'-C0NHAr ved standardteknikker (f.eks. reagering av en aktivert form av P-X'-C00H med ArNHg) og så reagere dette mellomproduktet med et alkylhaloacetat som beskrevet ovenfor for å gi P~X'-CONHAr-CB^-COO-alk som kan bli ytterligere transformert på vanlig måte.
Mange av de endelige forbindelsene ifølge oppfinnelsen eller mellomproduktene fra disse, kan bli overført ved vanlige standardteknikker. For eksempel, kan arylforbindelser som er substituert med nitro, bli redusert (f.eks. i nærvær av natriumhydrosulfitt i et ikke-reaktivt oppløsningsmiddel, slik som etanol, vann eller en blanding derav). Når nitroforbindelsen blir oppvarmet med tilbakeløpskjøling i en vann/etanol-blanding i nærvær av natriumhydrosulfitt, er reduksjonen vanligvis fullstendig innen en del timer. Det resulterende amin kan være til stede i det endelige produktet; dersom aminet er til stede i mellomproduktet, kan det være ønskelig å omdanne til dets endelige ønskede form (f.eks. acylering for å gi det acylerte amin) eller beskyttet for å unngå sidereaksjoner under den påfølgende kjemi. Dersom det frie aminet er den ønskede forbindelsen, er den Cbz-beskyttende gruppen spesielt anvendelig hva dette angår. Andre transformasjoner og omdanninger av denne typen vil være opplagte for fagmannen.
Som fagmannen vil forstå, kan transformasjonene ovenfor bli utført på startmaterialene angitt ovenfor, eller i de fleste tilfellene også bli oppnådd på di- eller tripeptidmellom-produktene inneholdende de samme respektive funksjonelle gruppene. I det siste tilfellet, vil behovet eller mangel på behov for å beskytte de forskjellige gruppene bli opphevet; følgelig, rekkefølgen og typen kjemi involvert vil diktere behovet og typen beskyttende grupper så vel som sekvensen for oppnåelse av syntesen. Det vil også være klart for fagmannen at man kan velge andre beskyttende grupper så lenge de tjener for formålet for beskyttelse av den funksjonelle gruppen under påfølgende kjemi, men kan også bli fjernet under passende betingelser og i en passende rekkefølge for å tillate påfølgende transformasjoner. For eksempel, i skjema 1 ovenfor, omfatter G' substituenter hvor R er -CN; denne nitrilgruppen kan bli omdannet til en amidin eller redusert til aminet som eventuelt kan bli ytterligere utviklet til guanidinene ifølge oppfinnelsen.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen blir best isolert i form av syreaddisjonssalter. Salter av forbindelsene med formel I dannet med syrer, slik som de nevnt ovenfor, er anvendelige som farmasøytisk akseptable salter for administrasjon av antitrombotiske midler og for fremstilling av formuleringer av disse midlene. Andre syreaddisjonssalter kan bli fremstilt og benyttet for isolering og rensing av peptidene. For eksempel, kan saltene dannet med sulfonsyrer slik som metansulfonsyre, n-butansulfonsyre, p-toluensulfonsyre og naftalensulfonsyre, bli benyttet.
En forbindelse med formel I blir fremstilt ved:
a) fjerning samtidig eller i rekkefølge av beskyttende grupper P av en tilsvarende forbindelse med formel II hvor (P)X står for et radikal X som kan bære en eller flere beskyttende grupper P uavhengig valgt blant en aminobeskyttende gruppe P for en forbindelse med formel I hvor X inkluderer en basisk NH-gruppe og en karboksybeskyttende gruppe P for en forbindelse med formel I hvor X omfatter en karboksyrest og G(P) står for et radikal G som kan bære en eller flere uavhengig valgt aminobeskyttende grupper P; eller b) for en forbindelse med formel I hvor R er
ved
hydrogenolyse av en tilsvarende forbindelse med f
ormel I
hvor R er
og hvoretter, når et salt av forbin-
delsen med I er ønsket, danner saltet med en farmasøytisk akseptabel syre.
Det er mer foretrukket å utføre prosess b) samtidig med prosess a). For en forbindelse med formel I hvor en syrebeskyttende gruppe er t-butylesteren og/eller en aminobeskyttende gruppe er t-butyloksykarbonyl, kan den beskyttende gruppen bli fjernet ved behandling med en sterk syre, slik som en trifluoreddiksyre eller vannfri hydrogenklorid i et inert oppløsningsmiddel, slik som dioksan eller diklormetan, i nærvær av anisol. For en forbindelse med formel I hvor en syrebeskyttende gruppe er benzylesteren og/eller en aminobeskyttende grupper er benzyloksykarbonyl, kan den beskyttende gruppen bli fjernet ved hydrogenolyse, fortrinnsvis utført i etanolisk hydrogenklorid over en palladium-på-karbon-katalysator.
Den foretrukne fremgangsmåten for rensing av forbindelsene med formel I samtidig med fremstilling av en ønsket stabil saltform, er den beskrevet i US patent 5.250.660. Ifølge fremgangsmåten, blir stabile sulfater eller hydroklorider fremskaffet ved preparativ rensing over C^g-reversfase kromatografi hvor den vandige komponenten omfatter svovelsyre eller saltsyre ved pH 2,5 og acetonitril i den organiske komponenten. pH til det sure elueringsmidlet ble justert mellom pH 4 og omkring 6 med en anionbytteresin i hydroksyl-form, f.eks. Bio-Rad AG-1X8. Etter justering av pH, blir oppløsningen av tripeptidsulfatet eller hydrokloridsaltet lyofilisert for å gi rent salt i tørr pulverform. I et eksempel av fremgangsmåten kan rå D-Phe-Pro-p-NHCZtøCfcB^CCNH)-NHg-sulfat bli oppløst i vann og oppløsningen blir satt på Vydac Clg RP HPLC 5 cm x 50 cm kolonne. En gradient av 2- 10% B (A = 0,01$ H2S04; B = acetonitril) over 10 timer ble benyttet. Multiple fraksjoner blir oppsamlet og de inneholdende produktet som bestemt ved analytisk RP HPLC blir oppsamlet. pH til de oppsamlede fraksjoner blir justert til pH 4,0 - 4,5 med AG-1X8 resin i hydroksydform (Bio-Rad, 3300 Ragatta Blvd., Richmond, CA 94804). Oppløsningen blir filtrert og filtratet blir lyofilisert for å gi det rene D-,L-diamid i form av sulfatsaltet.
Optisk aktive isomerer av diastereomerene ved radikalet X blir også ansett som en del av oppfinnelsen. Slike optisk aktive isomerer kan bli fremstilt fra deres respektive optisk aktive forløpere ved prosedyrer beskrevet ovenfor eller ved oppløsning av de racemiske blandingene. Denne oppløsningen blir utført ved derivatisering med et chiralt middel fulgt av kromatografi eller ved gjentatt krystallisering. Fjerning av det chirale hjelpestoff ved standard fremgangsmåter gir hovedsakelig optisk rene isomerer av forbindelsene ifølge oppfinnelsen eller deres forløpere. Ytterligere detaljer angående oppløsningene kan bli funnet i Jacques et al., Enantiomers, Racemates, and Resolutions, John Wiley & Sons, 1981.
Forbindelsene benyttet som initielle startmaterialer i syntesen av forbindelsene ifølge oppfinnelsen er velkjent og til den grad ikke kommersielt tilgjengelige, ble de lett syntetisert ved standard prosedyrer som vanlig blir benyttet av fagmannen i teknikken.
De følgende eksemplene er gitt for ytterligere å beskrive oppfinnelsen og for å gi eksempler på sammenligning og er ikke ment å begrense denne.
De benyttede forkortelsene har den følgende betydning.
Aminosyrerester: Arg = arginyl, Glu = glutamyl, Gly = glycyl, Pro = prolyl, hPro = homoprolyl, Azt = azetidin-2-karbonyl, Phg = fenylglycyl, Phe = fenylalanyl, hPhe = homofenylalanyl, 1-Tiq = 1,2 ,3,4-tetrahydroisokinolin-l-karbonyl,
3-Tiq = 1,2,3,4-tetrahydroisokinolin-3-karbonyl,
Cha = p<->cykloheksylalanyl, hCha = a-amino-'Y-cykloheksyl-butyryl, NMI = N-metylindol-2-oyl, Ohi = cis-oktahydroindol-2- oyl, 1-Piq = perhydro-isokinolin-l-karhonyl, 3- Piq = perhydroisokinolin-3-karbonyl, Met = metionyl, Met(0)2 = S,S-dioksometionyl.
Agm = agmatin
Boe = t-butyloksykarbonyl
Bn = benzyl
Cbz = benzyloksykarbonyl
DCC = dicykloheksylkarbodiimid
DMF = dimetylformamid
Et = etyl
DMSO = dimetylsulfoksyd
EtOAc = etylacetat
EtgO = dietyleter
EtOH = etanol
Fmoc = 9-fluorenylmetoksykarbonyl
FAB-MS = fast-atom-bombardement-massespektrum FD-MS = feltdesorpsjonsmassespektrum
IS-MS = ionspray-massespektrum
HRMS = høy-oppløsningsmassespektrum
HOBT = 1-hydroksybenzotriazolhydrat
IR = infrarødt spektrum
RP-HPLC = reversfase-ytelses-vaeskekromatograf i Ph = fenyl
TFA = trifluoreddiksyre
THF tetrahydrofuran
TLC = tynnsjiktskromatografi
De følgende parametrene for RP-HPLC ble benyttet: Oppløsningsmiddel A: 0,05$ vandig saltsyre (1,5 ml konsentrert saltsyre i 3 1 vann);
Oppløsningsmiddel B: acetonitril;
Gradient: som definert i hvert eksempel;
Metode 1: Kolonne: Vydac C^g - 2,5 cm x 25 cm;
Strømningshastighet: 5 ml/min.;
Metode 2: Kolonne: Vydac C^ q - 5 cm x 25 cm;
Strømningshastighet: 10 ml/min.;
Metode 3: Kolonne: Vydac C^g - 2,5 cm x 50 cm;
Strømningshastighet: 10 ml/min.
Evis ikke annet er angitt, ble pH-justeringer og opp-arbeidelse gjort med vandige syre— eller base-oppløsninger.
I eksemplene hvor <*>H-NMR er vist, ble produktet gitt ved reaksjon karakterisert ved proton-NMR for å bekrefte at den angitte forbindelsen var oppnådd; IR uten data indikerer tilsvarende at et tilfredsstillende infrarødt spektrum ble oppnådd. HRMS ble benyttet for å bekrefte eksakt masse av forbindelsene for hvilke en tilfredsstillende elementanalyse ikke ble oppnådd for produktet ved den beskrevne prosedyre; elementsammensetningen av det observerte ion (f.eks. MH<+>) er indikert.
Eksempel 1
Å) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-OBn.
Til en oppløsning av Boc-D-Phe-OH (89,1 g, 336 mmol), Pro-OBn.hydroklorid (81,2 g, 336 mmol), EOBT (50 g, 370 mmol) og N,N-diisopropyletylamin (176 ml, 1,008 mmol) ved 0"C i diklormetan (600 ml) ble det tilsatt l-(3-dimetylamino-propyl)-3-etylkarbodiimid.hydroklorid (71 g, 370 mmol). Etter omrøring i 18 timer ble blandingen fortynnet med dietyleter (1 1) og vasket i rekkefølge tre ganger med IN sitronsyre
(250 ml), en gang med vann (250 ml), tre ganger med mettet, vandig natriumbikarbonat (250 ml) og en gang til med mettet, vandig natriumklorid (250 ml). Den organiske fasen ble tørket (NagSC^), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 140 g (92,5$) av et blekgult skum.
FD-MS, m/e 452 (M<+>)
^H-NMR
B) Fremstilling av D-Phe-Pro-OBn*TFA.
Til en omrørt oppløsning av Boc-D-Phe-Pro-OBn (68 g, 150 mmol) i diklormetan (50 ml) ved 0°C ble det tilsatt anisol (20 ml) fulgt av trifluoreddiksyre (400 ml). Etter omrøring i 3 timer ble oppløsningsmidlene avdampet under vakuum og den tykke, oljeaktige resten ble oppløst i dietyleter (1,5 1) og avkjølt (72 timer). Den hvite utfellingen ble filtrert, vasket med dietyleter (300 ml) og tørket for å gi 59,4 g
(8556) hvitt pulver.
<1->H-NMR
C) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-OBn.
Til en omrørt oppløsning av D-Phe-Pro-OBn'TFA (12 g, 25,7 mmol) og trietylamin (7 ml, 50,2 mmol) i diklormetan (200 ml) ved -78°C ble det tilsatt etansulfonylklorid (2,65 ml, 28,3 mmol) dråpevis via en tilsetningstrakt. Reaksjonskaret ble oppvarmet til 0°C og etter omrøring i 4 timer ble vann (10 ml) tilsatt. Den organiske fasen ble vasket tre ganger med IN saltsyre (100 ml), en gang med mettet natriumkloridoppløsning (100 ml) og så ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum. Produktet ble renset ved flashkromatografi over silikagel, eluert med etylacetat/heksaner (6:4). Produktet inneholdende fraksjonene (bedømt ved TLC) ble kombinert og konsentrert for å gi 6,62 g (58$) av en gul olje som stivnet.
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 445 (M<+>)
Analyse for C^B^s^C^S:
D) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-OH.
Til en omrørt oppløsning av EtS02-D-Phe-Pro-OBn (4,5 g, 10,1 mmol) i p-dioksan (150 ml) ble det tilsatt en oppløsning av litiumhydroksydmonohydrat (2,1 g, 50,5 mmol) i vann (75 ml). Etter omrøring i 16 timer ble volumet i oppløsningen redusert til halvparten under vakuum, og oppløsningen ble fortynnet med vann (300 ml) og 0,1N NaOH (100 ml). Den vandige fasen ble så vasket to ganger med dietyleter (250 ml), surgjort med fast sitronsyre, og så ekstrahert tre ganger med etylacetat (150 ml). De sammenslåtte etylacetatlagene ble vasket med mettet, vandig natriumklorid (200 ml), tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert for å gi 3,6 g ( 9056) hvitt faststoff.
FD-MS, m/e 355 (M<+>)
Analyse for C25<H>22<N>2O5S:
E) Fremstilling av N,N'-di-Boc-S-metylisotiourea.
Til en omrørt oppløsning av di-t-butyldikarbonat (100 g, 458 mmol) i t-butanol (300 ml) ble det tilsatt en oppløsning av bis-S-metylisotioureasulfat (32,7 g, 117 mmol) i vann (150 ml), fulgt av en oppløsning av natriumhydroksyd (19,2 g, 480 mmol) i vann (150 ml). Etter omrøring i 48 timer ble blandingen konsentrert til omkring en tredjedel av det opprinnelige volum under vakuum og fortynnet med dietyleter (5 00 ml). Den organiske fasen ble vasket en gang med vann (250 ml), tre ganger med IN sitronsyre (250 ml) og igjen med vann (250 ml). Den organiske fasen ble tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 42 g (6256) av et hvitt faststoff.
1-H-NMR
F) Fremstilling av N6,NS<*->di-Boc-agamatin.
Til en omrørt oppløsning av 1,4-butandiamin (23 g, 258 mmol) i 2:1 dimetylformamid:vann (300 ml) ble det tilsatt en oppløsning av N,N'-di-Boc-S-metylisotiourea (15 g, 52 mmol) i dimetylformamid (100 ml) via en tilsetningstrakt. Etter omrøring i 2 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i IN sitronsyre (250 ml), fortynnet med vann (250 ml) og vasket med etylacetat (250 ml). Etylacetat-fasen ble tilbakeekstrahert med IN sitronsyre (100 ml) og de sammenslåtte, vandige fasene ble gjort basiske med natriumkarbonat, mettet med fast natriumklorid og ekstrahert to ganger med etylacetat (250 ml). De sammenslåtte etylacetatekstraktene ble vasket med mettet vandig natriumklorid (200 ml), tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert for å gi 12,5 g (73$) av en tykk sirup.
<1->H-NMR
G) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2.
Til en omrørt oppløsning av NS.NS'-di-Boc-agmatin (2 g, 6 mmol) i diklormetan (30 ml) ble det tilsatt EtS02-D-Phe-Pro-OH (2,1 g, 6 mmol), HOBT (810 mg, 6 mmol) og N.N-diisopropyletylamin (1,6 g, 12 mmol), fulgt av l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid.hydroklorid (1,4 g, 73 mmol). Etter omrøring i 20 timer ble oppløsningen fortynnet med etylacetat (300 ml) og vasket tre ganger med IN sitronsyre (150 ml), en gang med vann 8150 ml) og to ganger med mettet, vandig natriumbikarbonat. Den organiske fasen ble tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble kromatografert på silikagel, eluert med en trinngradient av etylacetat :heksaner (1:4) til etylacetat. De produktinneholdende fraksjonene (ifølge TLC) ble kombinert og konsentrert for å gi 2,4 g (60$) av en tykk olje.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 668 (MH<+>)
H) Fremstilling av EtSttø-D-Phe-Pro-Agm-HCl.
En omrørt suspensjon av EtSOg-D-Phe-Pro-AgmtBoc)2 (1,6 g, 2,4 mmol) i anisol (1 ml) ble oppløst i trifluoreddiksyre (20 ml) og omrørt 1 time ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble så fjernet under vakuum og resten ble skilt mellom vann (100 ml) og dietyleter (50 ml). Den vandige fasen ble vasket igjen med dietyleter (50 ml) og så delvis konsentrert og lyofilisert for å gi 1,4 g rå trif luoracetatsalt. Halvparten av materialet ble oppløst i vann og renset ved RP-HPLC (metode 1; 98/2 (A/B); stigning til 50/50 (A/B), 60 minutter) for å gi 490 mg ( 81%) av et hvitt pulver.
<!>h-NMR
FD-MS, m/e 467 (M<+>)
Analyse for C21<H>34N604S'HC1-H20:
Eksempel 2
A) Fremstilling av Boc-D-Cha-Pro-OBn.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-A ble Boc-D-Cha-Pro-OBn fremstilt fra Boc-D-Cha-OH og Pro-0Bn'HCl med 91$ utbytte (109 g).
FD-MS, m/e 458 (M<+>)
B) Fremstilling av D-Cha-Pro-Obn-TFA.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-B ble D-Cha-Pro-OBn * TFA fremstilt (116$ av teoretisk utbytte, 130 g).
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 359 (M<+>)
C) Fremstilling av EtS02-D-Cha-Pro-OBn.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-C ble EtS02-D-Cha-Pro-0Bn fremstilt ( 2056 utbytte, 2,3 g).
1-H-NMR
FD-MS, m/e 450 (M<+>)
Analyse for C23<H>34<N>2O5S:
D) Fremstilling av EtS02-D-Cha-Pro-OH.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-D ble EtS02-D-Cha-Pro-OH fremstilt (4856 utbytte , 0 ,78 g).
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 361 (M<+>)
E) Fremstilling av EtS02-D-Cha-Pro-Agm(Boc)2.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 400 mg ( 4056 ) EtS02-D-Cha-Pro-Agm(Boc)2 fremstilt fra EtS02-D-Cha-Pro-0H og NS-NS'-di-Boc-Agm.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 674 (MH<+>)
F) Fremstilling av EtS02-D-Cha-Pro-Ågm'HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-H ble EtS02-D-Cha-Pro-AgnrHCl fremstilt ( 4556 utbytte, 100 mg). Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 1, 98/2 (A/B), stigning til 50/50 (A/B), 60 minutter ).
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 473 (M<+>)
Analyse for C2iH40N6<0>4S•1,2HC1'H20:
Eksempel 3
A) Fremstilling av EtOCO-D-Phe-Pro-OH.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-C og 1-D ved anvendelse av etylklorformat istedenfor etansulfonylklorid, ble 6,59 g (9256) EtOCO-D-Phe-Pro-0H fremstilt.
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 335 (M<+>)
Analyse for C-^ 7^2^205:
B) Fremstilling av EtOCO-D-Phe-Pro-AgnrHCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 2,1 g (54$) EtOCO-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2 fremstilt fra EtOCO-D-Phe-Pro-OH og N6-N<g*->di-Boc-Agm. Så ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent med den beskrevet i eksempel 1-H ble 390 mg (7756) EtOCO-D-Phe-Pro-AgnrHCl fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 1, 98/2 (A/B), gradient til 50/50 (A/B), 60 minutter).
^H-NMR
FD-MS, m/e 447 (M<+>)
Analyse for C22<H>34<N>604•0,9HC1•0,2TFA'H20:
Eksempel 4
( N-[(l-metyl-lH-indol-2-yl)karbonyl]-D-fenylalanyl-N-[4-[(aminoiminometyl)amino]butyl]-L-prolinamid.monohydrokiorid)
Å) Fremstilling av NMI-D-Phe-Pro-OH.
Til en oppløsning av N-metylindol-2-karboksylsyre (2,6 g, 14,9 mmol) i tørr tetrahydrofuran (45 ml) ble det tilsatt pentafluorfenol (3 g, 16,5 mmol), fulgt av l-(3-dimetylamino-propyl)-3-etylkarbodiimid (3,2 g, 16,5 mmol). Blandingen ble så omrørt med tilbakeløpskjøling i 3,5 timer og så avkjølt til romtemperatur. Til denne blandingen ble det tilsatt en oppløsning av D-Phe-Pro-OBn•TFA (7 g, 14,9 mmol) og N,N-diisopropyletylamin (4 g, 30 mmol) i tetrahydrofuran (25 ml). Etter omrøring i ytterligere 2 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i etylacetat (500 ml), så vasket tre ganger med 0,1N vandig natriumbisulfat (250 ml) og tre ganger med IN vandig kaliumkarbonat (250 ml). Den organiske fasen ble tørket (Na2SC"4), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 6,5 g amorft faststoff (en blanding av det ønskede produkt, forurenset med pentafluorfenol). Dette råproduktet ble så hydrolysert ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-D for å gi 3,8 g ( b2%) av et nær hvitt faststoff.
^H-NMR
FD-MS, m/e 419 (M<+>)
B) Fremstilling av NMI-D-Phe-Pro-AgnrHCl.
En fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 900 mg ( 20%) NMI-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2 fremstilt.. Så, ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-H, ble 144 mg ( 31%) NMI-D-Phe-Pro-AgnrHCl fremstilt. Råproduktet ble oppløst i iseddik og renset ved RP-HPLC (metode 1, 90/10 (A/B), gradient til 40/60 (A/B), 80 minutter).
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 532 (M<+>)
Analyse for C29<H>37<N>703-0,9HC1•0,6TFA"0,5H20: Eksempel 5
A) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-OH.
Til en oppløsning av Boc-D-Phe-Pro-OBn (145 g, 320 mmol) i p—dioksan (660 ml) ble det tilsatt en oppløsning av litiumhydroksydmonohydrat (54 g, 1,280 mmol) i vann (330 ml) med kraftig omrøring. Etter 4 timer ble oppløsningen konsentrert under vakuum til omkring en fjerdedel av dets opprinnelige volum og fortynnet med vann (350 ml) og 0,1N natriumhydroksyd (100 ml). Den vandige fasen ble så vasket tre ganger med dietyleter (250 ml) og så surgjort til pH 3 med fast sitronsyre for å gi en utfelling. Faststoffet ble filtrert, vasket med vann og så tørket under høyvakuum for å gi 91 mg (78*) av et hvitt faststoff.
^H-NMR
FD-MS, m/e 363 (M<+>)
B) Fremstilling av N6,N6'-di-Boc-6-aminoheksylguanidin.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-F ble 4,7 g (66*) NS,NS'-di-Boc-6-aminoheksylguanidin fremstilt fra 1,6-heksandiamin. C) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NBoc )NH(Boc). Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 1,3 g (62*) Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NBoc)NH(Boc) fremstilt fra Boc-D-Phe-Pro-OH og N§,NS'-di-Boc-6-aminoheksylguanidin.
<!>h-NMR
FD-MS, m/e 703 (M<+>)
C) Fremstilling av D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NH)NH2-HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1—H ble omkring 100 mg D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NH)NH2-HC1 fremstilt.
FD-MS, m/e 389 (M<+>)
Analyse for C21H34N602* 0,9HC1'0,9TFA'0,5H20:
Eksempel 6
A) Fremstilling av NS,N6<*->di-Boc-5-aminopentylguanidin.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-F ble 1,73 g NS,NS'-di-Boc-5-amino-pentylguanidin fremstilt fra 1,5-pentandiamin.
FD-MS, m/e 345 (M<+>)
<1>H-NME
B) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NBoc)NH(Boc). Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 1,9 g (92*) Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NBoc)NH(Boc) fremstilt fra Boc-D-Phe-Pro-OH og NS,NS'-di-Boc-5-aminopentylguanidin.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 689 (M<+>)
C) Fremstilling av D-Phe-Pro-NH(CH2 )5NHC(NH)NH2'HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-H ble 100 mg D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC-(NH)NH2-HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 1, 98/2 (A/B), gradient til 40/60 (A/B), 40 minutter ).
FD-MS, m/e 389 (M<+>)
Analyse for C20H32<N>602•0,9HC1•0,9TFA•0,7H20:
Eksempel 7 A) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2>3NHC(NBoc)NH(Boc). Til en oppløsning av 1,3-diaminopropan (2,2 g, 30 mmol) i dimetylformamid (25 ml) ble det tilsatt en oppløsning av N,N'-di-Boc-S-metylisotiourea (2,9 g, 10 mmol) i dimetylformamid (25 ml). Etter omrøring i 1 time ble blandingen fortynnet med diklormetan (400 ml) og vasket med en blanding av mettet, vandig natriumbikarbonat og mettet, vandig natriumklorid (200 ml), og igjen med mettet, vandig natriumklorid (250 ml). Den organiske ble tørket (MgSC^), filtrert og delvis konsentrert under vakuum til et volum på omkring 200 ml.
Til denne oppløsningen ble det tilsatt Boc-D-Phe-Pro-OH (3,6 g, 10 mmol), HOBT (1,3 g, 10 mmol) og N,N-diisopropyletylamin (1,3 g, 10 mmol), fulgt av l-(3-dimetylaminopropyl )-3-etylkarbodiimid*HCl (2,1 g, 11 mmol). Etter omrøring i 16 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble tatt opp i etylacetat (250 ml). Den organiske fasen ble vasket tre ganger med IN sitronsyre (200 ml), en gang med vann (100 ml), to ganger med mettet, vandig natriumbikarbonat (200 ml) og en gang med mettet, vandig natriumklorid. Den organiske fasen ble så tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble så kromatografert over silikagel, eluert med en trinngradient av etylacetat/heksaner (1:4) til etylacetat. De produktinneholdende fraksjonene
(ifølge TLC) ble konsentrert for å gi 2,6 g (40*) av en tykk, fargeløs olje.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 661 (M<+>)
B) Fremstilling av D-Phe-Pro-NH(CH2 )3NHC(NH)NH2'HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-H ble 460 mg (71*) D-Phe-Pro-NH(CH2)3-NHC(NH)NH2-HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 1, 98/2 (A/B), gradient til 40/60 (A/B), 40 minutter ).
<!>h-NMR
FD-MS, m/e 361 (M<+>)
Analyse for C18H28N602'HC1•1,1TFA'1,1H20:
Eksempel 8 A) Fremstilling av N6,N6'-di-Boc-4-amino-trans-2-butenyl-guanidin.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-F ble 2,4 g (42*) NS,NS'-di-Boc-4-amino-trans-2-butenylguanidin fremstilt fra 1,4-diamino-trans-2-buten. B) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-trans-CH=CHCH2NHC-(NBoc)NHBoc.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 2,7 g (55*) Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-trans-CH=CHCH2NHC(NBoc)NHBoc fremstilt fra Boc-N-Phe-Pro-OH og N§,NS'-di-Boc-4-amino-trans-2-butenylguanidin.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 673 (M<+>)
C) Fremstilling av D-Phe-Pro-NHCH2-trans-CH=CHCH2NHC(NH)-NH2-HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1—H ble omkring 100 mg D-Phe-Pro-NHCH2-trans-CH=CHCH2NHC(NH)NH2'HCl fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 1, 98/2 (A/B), gradient til 40/60 (A/B), 40 minutter.
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 373 (M<+>)
Analyse for C19H28<N>602-HC1•0,5TFA-2,5H20:
Å) Fremstilling av p<->H2NCH2C6H4NHC(NBoc)NHBoc.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-F ble 2,3 g (42*) p-H2NCH2C6H4CH2NHC-(NBoc)NHBoc fremstilt fra p-xylendiamin.
<1->H-NMR
B) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CH2NHC(NBoc)NH-Boc.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 2,8 g (63*) Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 723 (M<+>)
C) Fremstilling av D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NHC(NH)NH2-2TFA. Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-H ble 725 mg (81*) av bis-TFA-saltet i tittelen fremstilt og ble ikke renset videre ved RP-HPLC.
3-H-NMR
FD-MS, m/e 423 (M<+>)
Analyse for C23H30N602* 2,1TFA'H20: Eksempel 10
A) Fremstilling av N-Boc-p-(aminometyl)benzylamin.
Til en omrørt oppløsning av p-xylendiamin (10 g, 73 mmol) i dimetylf ormamid/vann (1:1, 100 ml) ble det tilsatt di-t-butyldikarbonat (8 g, 37 mmol). Etter omrøring i 20 timer ble blandingen konsentrert under vakuum og resten ble skilt mellom dietyleter (200 ml) og IN sitronsyre (200 ml). Den vandige fasen ble igjen vasket med dietyleter (200 ml) og så gjort basisk med fast natriumbikarbonat og mettet med fast natriumklorid. Den vandige fasen ble ekstrahert fire ganger med etylacetat (200 ml). De kombinerte etylacetatekstraktene ble tørket (MgS04), filtrert og konsentrert for å gi 2,1 g
(2456) av en tykk olje.
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 237 (MH<+>)
Analyse for C13<H>2q<N>202:
B) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NHBoc.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 1,1 g (63*) Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NHBoc fremstilt fra Boc-D-Phe-Pro-OH og N-Boc-p-(aminometyl)benzylamin.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 581 (M<+>)
Analyse for 03^44^0^,:
C) Fremstilling av D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2-HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1—H ble omkring 100 mg D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2-HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (1, 98/2 (A/B), gradient til 40/60 (A/B), 40 minutter).
1-H-NMR
FD-MS, m/e 381 (M<+>)
Analyse for C22<H>28<N>402'HCl•1,1TFA-H20:
Eksempel 11
A) Fremstilling av N-Boc-m-(aminometylJbenzylamin.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 10-A ble 2,6 g (30*) N-Boc-m-(aminometyl )benzylamin fremstilt fra m-xylendiamin.
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 237 (MH<+>)
Analyse for Ci3H2qN2<0>2<:>
B) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-m-llffC^Cfc^CItøljHBoc.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1—G ble 1,6 g (95*) Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CH2NHBoc fremstilt fra Boc-D-Phe-Pro-OH og N-Boc-m-(aminometyl )benzylamin.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 581 (M<+>)
C) Fremstilling av D-Phe-Pro-m-NHC^Cfc^C^NHg^HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-H ble omkring 100 mg D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CH2NH2-HC1 fremstilt.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 381 (M<+>)
Analyse for C22<H>28<N>4°2'HC1'TFA'H2°: Eksempel 12
D-Phe-Pro-NHCH2-trans-4-(aminometyl)cykloheksan'HCl
A) Fremstilling av N-Boc-trans-4-(aminometylJcykloheksan-karboksy1syre.
Til en oppløsning av trans-4-(aminometyl)cykloheksan-karboksylsyre (50 g, 318 mmol) i IN natriumhydroksyd (334 ml, 334 mmol) og t-butanol (400 ml) ble det tilsatt en oppløsning av di-t-butyldikarbonat (73 g, 334 mmol) i tetrahydrofuran (50 ml). Etter omrøring i 20 timer ble oppløsningsmidlene fjernet under vakuum og resten ble skilt mellom vann (500 ml) og dietyleter (250 ml). Den vandige fasen ble igjen vasket med dietyleter (250 ml) og så surgjort med sitronsyre som resulterte i dannelsen av en hvit utfelling. Faststoffet ble filtrert fra, vasket to ganger med vann (100 ml) og tørket under vakuum for å gi 48 g (59*) hvitt pulver.
<1>H-NMR
B) Fremstilling av H0CH2-trans-4-(N-Boc-aminometyl)cyklo-heksan.
Til en omrørt oppløsning av N-Boc-trans-4-(aminometyl)cyklo-heksankarboksylsyre (15 g, 58 mmol) i tetrahydrofuran (150 ml) ved 0°C ble det tilsatt N-metylmorfolin (5,9 g, 58 mmol), fulgt av etylklorformat (6,3 g, 58 mmol). Etter omrøring i 30 minutter ble natriumborhydrid (6,5 g, 175 mmol) tilsatt og så ble metanol (300 ml) tilsatt via en tilsetningstrakt i løpet av 5 minutter. Blandingen ble omrørt i 1 time og så ble oppløsningsmidlene fjernet under vakuum. Resten ble oppløst i etylacetat (500 ml) og vasket to ganger med IN sitronsyre (250 ml), en gang med vann (100 ml), to ganger mettet, vandig natriumbikarbonat (250 ml) og en gang mettet, vandig natriumklorid (250 ml). Den organiske fasen ble tørket (MgS04), filtrert og konsentrert for å gi 13 g (91*) av forbindelsen i tittelen.
H-NMR
C) Fremstilling av NH2CH2-trans-4-(N-Boc-aminometyl)cyklo-heksan.
Til en omrørt oppløsning av H0CH2-trans-(N-Boc-aminometyl)-cykloheksan (13 g, 53 mmol) og trifenylfosfin (21 g, 80 mmol) i tetrahydrofuran (300 ml) ble det tilsatt dietylazodikarboksylat (13,9 g, 80 mmol), fulgt av en oppløsning av difenylfosforylazid (22 g, 80 mmol) i tetrahydrofuran (100 ml). Etter omrøring i 16 timer ble oppløsningsmidlene fjernet under vakuum og resten ble kromatografert over silikagel, eluert med en trinngradient av etylacetat/heksaner (1:3) til etylacetat/heksaner (3:1). De produktinneholdende fraksjoner (bedømt ved TLC) ble blandet og konsentrert for å gi 17,4 g rått produkt (forurenset med forbindelse med høyere Rf). Det rå azidet ble oppløst i metanol (200 ml) og denne oppløs-ningen ble tilsatt til en omrørt suspensjon av finmalt Na2S*9H20 (51 g, 212 mmol) og trietylamin (lg, 11 mmol) i metanol (100 ml). Den resulterende blandingen ble oppvarmet med tilbakeløpskjøling (16 timer), så avkjølt til romtempe-råtur og oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum. Resten ble fortynnet med vann (250 ml) og surgjort med fast sitronsyre. Den vandige fasen ble vasket to ganger med etylacetat (250 ml), gjort basisk med fast natriumbikarbonat og mettet med fast natriumklorid. Den vandige fasen ble så ekstrahert tre ganger med etylacetat (200 ml) og de kombinerte ekstraktene ble tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert for å gi 6,4 g (45*) av en tykk olje.
1-H-NMR
D) Fremstilling av N-Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-trans-4-(N-Boc-aminometyl )cykloheksan.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G, ble 4,5 g (74*) N-Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-trans-4-(N-Boc-aminometyl)cykloheksan fremstilt fra Boc-D-Phe-Pro-OH og NH2CH2-trans-4-(N-Boc-aminometyl)-cykloheksan.
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 587 (M<+>)
E) Fremstilling av D-Phe-Pro-NHCH2-trans-4-(aminometyl)-cykloheksan*HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-H ble 588 mg (75*) D-Phe-Pro-NHCH2-trans-4-(aminometyl)cykloheksan-HCl fremstilt. I dette tilfellet var den analytiske RP-HPLC av mellomproduktet TFA-saltet meget rent, men saltet var hygroskopisk. Saltet ble så oppløst i 0,1N HC1 (20 ml), pH ble justert til 5, og prøven ble lyofilisert igjen for å gi et stabilt, hvitt fast hydrokloridsalt.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 387 (M<+>)
Analyse for C22<H>34<N>4O2'HC1•TFA-2H20: Eksempel 13
A) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 8 g Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4N02 fremstilt fra Boc-D-Phe-Pro-OH og p-N02-benzylamin-HCl. Mellomproduktet ble oppløst i etanol (350 ml) og oppvarmet med tilbakeløpskjøling. Til denne omrørte oppløsningen ble det tilsatt en oppløsning av Na2S204 (12,3 g, 70 mmol) i vann (125 ml). Etter omrøring med tilbakeløpskjøling i 2 timer, ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble skilt mellom etylacetat (250 ml) og vann (250 ml). Den vandige fasen ble ekstrahert igjen med etylacetat (250 ml) og de kombinerte, organiske fasene ble tørket (MgS04), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 2,4 g (21*) av et lyst gult faststoff.
^H-NMR
FD-MS, m/e 466 (M<+>).
Analyse for C26H34N4O4:
B) Fremstilling av D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2-HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-H ble 180 mg (60*) D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2'HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 1, 98/2 (A/B), gradient til 60/40 (A/B), 60 minutter ).
1-H-NMR
FD-MS, m/e 366 (M<+>)
Analyse for C21<H>26N402'HC1•0,6TFA'0,5H20:
Eksempel 14
A) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CÉ>H4NH2.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 13-A ble 3 g (23*) Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2 fremstilt fra Boc-D-Phe-Pro-OH og p-N02-fenetylamin-HCl.
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 480 (M<+>)
Analyse for C27<H>35<N>4O4: B) Fremstilling av D-Phe-Pro-p-MHCH2CH2C6H4NH2"HC1•
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-H ble 175 mg (58*) D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2"HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 1, 98/2 (A/B), gradient til 60/40 (A/B), 60 minutter).
1-H-NMR
FD-MS, m/e 380 (M<+>)
Analyse for C22<H>28<N>4°2'Hcl'0»75TFA'0,7H20:
Eksempel 15 1
0 (D-fenylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid.hydroklorid)
A) Fremstilling av p-(aminometyl)benzonitril'TFA.
Til en omrørt suspensjon av natriumhydrid (2,2 g, 56 mmol, 5 60* dispersjon i olje) i tetrahydrofuran (100 ml) ble det tilsatt 4-(brommetyl)benzonitril (10 g, 51 mmol). Til denne blandingen ble det sakte tilsatt via ved tilsetningstrakt en oppløsning av di-t-butyliminodikarboksylat (12,2 g, 56 mmol). Etter omrøring i 16 timer ble blandingen fortynnet med dietyleter (300 ml) og vasket to ganger med vann (150 ml). Den organiske fasen ble så tørket (MgS04), filtrert og konsentrert. Det resulterende faststoff ble så oppløst i en minimumsmengde diklormetan. Anisol (10 ml) ble tilsatt og oppløsningen ble avkjølt til 0°C. Oppløsningen ble så fortynnet med trifluoreddiksyre (200 ml) og omrørt 1 time. Oppløsningsmidlet ble så fjernet under vakuum og den oljeaktige resten ble omrørt kraftig med dietyleter (100 ml) og etter få minutter stivnet produktet. Utfellingen ble filtrert, vasket med dietyleter og tørket under vakuum for å gi 11,3 g (90*) hvitt pulver.
IR
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 132 (M<+>)
B) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 7,4 g (78*) Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN fremstilt fra Boc-D-Phe-Pro-OH og p-(aminometyl)-benzonitril'TFA. I dette tilfellet ble produktet renset ved rekrystallisering fra dietyleter.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 476 (M<+>)
C) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C£,H4C(NH)NH2• Hydrogensulfidgass ble boblet gjennom en oppløsning av Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN (2 g, 4,2 mmol) i pyridin (25 ml) og trietylamin (2,5 ml) i 30 minutter. Reaksjonskaret ble så forseglet og satt ved romtemperatur i 2 dager. Oppløsningen ble så fortynnet med vann (100 ml) og ekstrahert to ganger med etylacetat (200 ml). Den kombinerte, organiske fasen ble vasket to ganger med mettet, vandig natriumklorid, tørket (MgSC-4), filtrert og konsentrert under vakuum.
Resten ble oppløst i aceton (50 ml), metyljodid (10 ml) ble tilsatt og oppløsningen ble oppvarmet med tilbakeløpskjøling (2 timer). Oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum, resten ble oppløst i metanol (20 ml), NH40Ac (712 mg, 9,2 mmol) ble tilsatt, og oppløsningen ble oppvarmet med tilbakeløpskjøling (12 timer). Oppløsningsmidlet ble igjen fjernet under vakuum, resten ble oppløst i IN sitronsyre (100 ml) og den vandige fasen ble vasket to ganger med etylacetat (200 ml), så gjort basis med fast natriumbikarbonat, mettet med fast natriumklorid og ekstrahert to ganger med etylacetat (200 ml). De kombinerte etylacetatekstraktene ble så tørket (MgS04), filtrert og konsentrert for å gi 1,4 g (67*) tykk olje.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 494 (M<+>)
D) Fremstilling av D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-H ble 7,7 (57*) D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4-C(NH)NH2'HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 3, 98/2 (A/B), gradient til 70/30 (A/B), 300 minutter ).
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 394 (M<+>)
Analyse for C22<H>27N502'HC1•1,4TFA*0,5H2<0:>
Eksempel 16
A) Fremstilling av m-(aminometylJbenzonitril*TFA.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 15-A ble 10,8 g (86*) m-(aminometyl)-benzonitril•TFA fremstilt fra m-(brommetyl)-benzonitril.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 132 (M<+>)
B) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-m-NHCHgCfcl^CN.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 7,5 g (79*) Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CN fremstilt fra Boc-D-Phe-Pro-OH og m-(aminometyl)-benzonitril*TFA. I dette tilfellet ble produktet renset ved rekrystallisering fra dietyleter.
IR
<!>h-NMR
FD-MS, m/e 476 (M<+>)
Analyse for C27H32N4O4:
C) Fremstilling av Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 15-C ble 1,1 g (53*) Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2<C>6H4C(NH)NE2 fremstilt.
FD-MS, m/e 494 (M<+>).
D) Fremstilling av D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2'0,75HCl. Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 0,65 g (63*) D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2-0,75HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 75/25 (A/B), 120 minutter).
FD-MS, m/e 394 (M<+>)
Analyse for C22H27N502•0,75HC1* 1,2TFA'0,5H20:
(D-homopr olyl -N - [ [ 4 - (aminoiminometyl )f enyl] me tyl] -L-prolinamid .hydr oki or id
A) Fremstilling av Cbz-D-hPro-OH.
D-hPro-OH (5,0 g, 38,7 mmol) ble oppløst i tetrahydrofuran (100 ml) og vann (30 ml). pH til oppløsningen ble justert til 9,5 med 2N natriumhydroksyd og benzylklorformat (5,5 ml, 38,7 mmol) ble tilsatt dråpevis og pH holdt ved 9,5 med 2N natriumhydroksyd. Reaksjonen ble omrørt ytterligere 1 time ved romtemperatur. Det organiske oppløsningsmidlet ble avdampet under vakuum, dietyleter (100 ml) og vann (50 ml) ble tilsatt til resten. Det vandige laget ble separert, pH til oppløsningen ble justert til 2,8 med 3N saltsyre og etylacetat (150 ml) ble tilsatt. Det organiske laget ble separert og tørket (MgS04); filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi 9,6 g (95*) av en klar olje.
IR
FD-MS, m/e 264 (ME<+>)
B) Fremstilling av Cbz-D-hPro-Pro-OH.
Cbz-D-hPro-OH (9,5 g, 36 mmol) ble oppløst i etylacetat (100 ml) og oppløsningen ble avkjølt til 0°C. Tilsatt til oppløsningen ble 2,4,5-triklorfenol (7,1 g, 36 mmol) og 1,3-dicykloheksylkarbodiimid (7,4 g, 36 mmol). Reaksjonen ble omrørt i 1 time ved 0°C og 1 time ved romtemperatur. Utfellingen ble filtrert og filtratet konsentrert under vakuum til en olje. Oljen ble oppløst i pyridin (100 ml) Pro-OH (4,2 g, 36 mmol) og trietylamin (5,0 ml, 36 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur(24 timer). Reaksjonsoppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum for å gi en olje. Resten ble oppløst i vann (100 ml), dietyleter (50 ml) ble tilsatt og pH justert til 9,5 med 2N natriumhydroksyd. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med dietyleter. Det vandige laget ble separert, pH justert til 2,8 med 3N saltsyre og etylacetat (150 ml) ble tilsatt. Det organiske laget ble separert, tørket (MgS04), og filtratet avdampet under vakuum for å gi et amorft faststoff (11,4 g, 88*).
FD-MS, m/e 361 (M<+>)
Analyse for CigH24N2<0>5<:>
C) Fremstilling av Cbz-D-bPro-Pro-p-NHOtøC^CN.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 2,2 g (84*) Cbz-D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4CN fremstilt fra Cbz-D-hPro-Pro-OE og p-NH2 CH2 C 6H4 CN'TFA.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 474 (M<+>)
Analyse for C27<H>3q<N>404:
D) Fremstilling av D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 15-C ble Cbz-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2 (28 mmol, teoretisk) fremstilt. Dette råmaterialet ble oppløst i eddiksyre (350 ml) og HBr-gass ble boblet gjennom oppløsningen i 30 minutter. Etter omrøring i 1 time ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i vann (200 ml) og vasket to ganger med etylacetat (100 ml). Den vandige fasen ble så justert til pH 4 med ionebytteresin (Bio Rad AG1-X8, i basisk form) og lyofilisert for å gi et fluffe, hvitt faststoff. Produktet ble gjenoppløst i vann (25 ml) og renset ved preparativ RP-HPLC (metode 3, 98/2 (A/B), gradient til 70/30 (A/B), 300 minutter) for å gi 5 g (41*) hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2•0,9HC1■0,9HBr•0,5H20.
<!>h-NMR
FD-MS, m/e 357 (M<+>)
Analyse for CigH27N502•0,9HC1■0,9HBr* 0,5H20: Eksempel 18
(N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-l-[[(4aS,8aS)-decahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid.dihydroklorid)
A) Fremstilling av Cbz-D-l-Piq-Pro-OH.
En oppløsning av 1-isokinolinkarboksylsyre (50 g, 0,288 mol) i EtOH (150 ml) og 60 ml 5N HC1 ble redusert over 5* Rh/Al203 (14 g) ved 52 bar (750 psi) hydrogen i et høytrykksapparat ved 50° C i 17 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en pute diatomejord og filtratet ble konsentrert under vakuum. Resten ble finfordelt med vann, filtrert og tørket for å gi DL-perhydro-l-isokinolinkarboksylsyre (DL-1-Piq-0H) (30 g, 48*).
FD-MS 184 (MH<+>).
DL-l-Piq-OH (30,2 g, 137 mmol) ble oppløst i tetrahydrofuran (150 ml) og vann (150 ml). pH til oppløsningen ble justert til 9,8 med 5N NaOH og benzylklorformat (21,6 ml, 151 mmol) ble tilsatt dråpevis og pH holdt ved 9,5 med 2N NaOH. Reaksjonsblandingen ble omrørt i ytterligere 2 timer ved romtemperatur. Det organiske oppløsningsmidlet ble avdampet under vakuum og dietyleter (150 ml) og vann (50 ml) ble tilsatt til resten. Det vandige laget ble separert, pH til oppløsningen ble justert til 2,5 med 5N HC1 og etylacetat (200 ml) ble tilsatt. Det organiske laget ble separert og tørket (MgS04) og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en klar olje. Oljen ble oppløst i dietyleter (150 ml) og oppløsningen ble satt ved romtemperatur (24 timer). Utfellingen ble filtrert og tørket for å gi 2-Cbz-DL-perhydro-1-isokinolinkarboksylsyre (Cbz-DL-l-Piq-OH) (32 g, 75%).
FD-MS 318 (MH<+>)
Cbz-Dl-l-Piq-OH (31,8 g, 100 ml) ble oppløst i DMF (100 ml) og avkjølt til 0"C. Til reaksjonsblandingen ble det tilsatt prolin-t-butylester (17,1 g, 100 mmol), 1-hydroksybenzotriazol (13,5 g, 100 mmol) og DCC (20,6 g, 100 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 timer og 24 timer ved romtemperatur. Reaksjonsutfellingen ble filtrert og filtratet konsentrert under vakuum til en olje. Oljen ble oppløst i EtOAc (200 ml) og vann (100 ml). Det organiske laget ble separert, og vasket i rekkefølge med IN NaHC03, vann 1,5N sitronsyre og vann. Det organiske laget ble tørket (MgS04), og filtratet ble avdampet for å gi en olje som ble tørket for å gi 2-Cbz-DL-perhydro-l-isokinolinkarbonyl-L-prolyl-t-butylester (Cbz-DL-l-Piq-Pro-O-t-Bu) (47,0 g, 100*).
FAB-MS 470 (MH<+>).
Cbz-DL-l-Piq-Pro-O-t-Bu (47,0 g, 100 mmol) ble plassert i en rundbundet flaske inneholdende trifluoreddiksyre (100 ml), CH2CI2 (35 ml), anisol (5 ml) og omrørt ved romtemperatur (1 time). Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum uten oppvarming, og dietyleter (100 ml) og vann (100 ml) ble tilsatt. pH til oppløsningen ble justert til 9,8 med 5N NaOH. Det vandige laget ble separert, pH til oppløsningen ble justert til 2,5 med 5N HC1, og etylacetat (200 ml) ble tilsatt. Det organiske laget ble separert og tørket (MgS04) og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en klar olje. Oljen ble oppløst i dietyleter (700 ml) og (L)—(—)—a—metylbenzylamin ble tilsatt til oppløsningen. Oppløsningen ble satt ved romtemperatur i 5 dager. Det resulterende faststoff ble filtrert og vasket med dietyleter. Filtratet ble vasket med 1,5N sitronsyre og vann. Det organiske laget ble tørket (MgSO^ og filtratet avdampet til en olje. Oljen ble oppløst i dietyleter (400 ml) og satt ved romtemperatur (48 timer). Det resulterende faststoff ble filtrert, vasket med dietyleter og tørket for å g 2-Cbz-D-perhydro-1-isokinolinkarbonyl-L-prolin (Cbz-D-l-Piq-Pro-OH)
(5,86 g, 36*).
FAB-MS 415 (MH<+>);
[a]g° = -34,2° (c = 0,5, MeOH).
B) Fremstilling av N-Boc-p-(aminometyl)benzonitril.
Til en omrørt suspensjon av natriumhydrid (4,6 g, 115 mmol, 60* dispersjon i olje) i tetrahydrofuran (150 ml) ble det tilsatt 4-(brommetyl)benzonitril (20,5 g, 105 mmol). Til denne blandingen ble det tilsatt (sakte via en tilsetningstrakt) en oppløsning av di-t-butyliminodikarboksylat (25 g, 115 mmol). Etter omrøring i 16 timer ble blandingen fortynnet med dietyleter (500 ml) og vasket to ganger med vann (250 ml). Den organiske fasen ble så tørket (MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi 40,2 g rått faststoff.
Det resulterende faststoff (28,3 g, 85 mmol) ble så oppløst i tetrahydrofuran (150 ml) og en oppløsning av natriumhydroksyd (3,4 g, 85 mmol) i metanol (300 ml) ble tilsatt. Etter omrøring over natten ble oppløsningen konsentrert til omtrent halvt volum og vann ble tilsatt for å fremme utfellingen av produktet. Utfellingen ble filtrert og tørket under vakuum for å gi 18,5 g (94*) av et hvitt faststoff.
IR
<3->H-NMR
FD-MS, m/e 232 (M<+>)
Analyse for C13<H>16<N>2O2:
C) Fremstilling av p-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NHCbz.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 15-C ble N-Boc-p-(aminometyl)benzonitril (32,7 g, 140 mmol) utviklet til p-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NH2. Resten fra denne prosedyren ble oppløst i dimetylformamid (700 ml) og N ,N-diisopropyletylamin (72 g, 560 mmol) ble tilsatt. Til denne omrørte oppløsningen ble det tilsatt dråpevis benzylklorformat (48 g, 280 mmol). Etter omrøring i 16 timer ble vann (100 ml) tilsatt og så ble oppløsnings-midlene fjernet under vakuum. Resten ble skilt mellom vann (250 ml) og etylacetat (500 ml). Fasene ble separert og den organiske fasen ble vasket tre ganger med mettet, vandig ammoniumklorid (250 ml), en gang med vann (200 ml) og to ganger med mettet, vandig natriumbikarbonat (250 ml). Den organiske fasen ble så tørket (MgS04), filtrert og konsentrert og produktet ble rekrystallisert fra dietyleter for å gi 14 g (26*) hvitt faststoff.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 384 (M<+>)
D) Fremstilling av p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz'2HCl.
Til en oppløsning av p-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NHCbz (11 g, 28,7 mmol) i diklormetan (125 ml) ved 0°C ble det tilsatt anisol (10 ml), fulgt av trifluoreddiksyre (125 ml). Etter omrøring i 2 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i IN saltsyre (50 ml) og vasket to ganger med dietyleter (50 ml). pH ble justert til 3 med ionebytteresin (Bio Rad AG1-X8, i basisk form) og oppløsningen ble så lyofilisert for å gi 9,2 g (90*) hvitt pulver.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 284 (M<+>)
E) Fremstilling av Cbz-l-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 4,4 g (79*) Cbz-l-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz fremstilt fra Cbz-l-Piq-Pro-OH og p-H2NCE2C6E4C(NH)NHCbz-2HCl. I dette tilfellet ble reaksjonen utført i dimetylformamid på grunn av oppløselighetsproblemer med p-E2NCE2C6E4C(NE)NHCbz'2ECl.
<i>fl-NMR
FD-MS, m/e 681 (ME<+>)
Analyse for C3<gE>45<N>506:
F) Fremstilling av l-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-2HC1.
Til en oppløsning av Cbz-l-Piq-Pro-p-NECE2C6E4C(NE)NHCbz (4,2 g, 6,1 mmol) i etanol (200 ml) ble det tilsatt IN saltsyre (18,3 ml, 18,3 mmol) og vann (100.ml). Til denne omrørte oppløsning ble det tilsatt 5* Pd/C (1 g) og hydrogengass ble boblet gjennom oppløsningen i en periode på 2 timer. Blandingen ble så flushet med nitrogen, og filtrert gjennom en pute diatomejord. Filtratet ble så konsentrert under vakuum, gjenoppløst i vann (25 ml) og renset ved RP-EPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 60/40 (A/B), 300 minutter) for å gi 1,3 g (53*) 1-Piq-Pro-p-NHCE2C6E4C(NE)NE2-2EC1.
ifl-NMR
FD-MS, m/e 412 (M<+>)
Analyse for C23<E>33<N>502•1,9EC1•2,5E20:
Eksempel 19
A) Fremstilling av Cbz-D-3-Piq-Pro-OH.
D-f enylalanin (50 g, 302 mmol) ble reagert med en 37* oppløsning formaldehyd (120 ml) og konsentrert HC1 (380 ml) med tilbakeløpskjøling. Etter 30 minutter ble ytterligere 50 ml formaldehyd tilsatt og reaksjonen ble fortsatt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til —10°C og utfellingen ble filtrert. Faststoffet ble tørket under vakuum for å gi D—1,2,3,4-tetrahydro-3-isokinolinkarboksylsyre (24,2 g, 45*).
FD-MS 178 (MH<+>).
En oppløsning av D-l,2,3,4-tetrahydro-3-isokinolinkarboksylsyre (17 g, 96 mmol) i vann (200 ml) og 20 ml 5N HC1 ble hydrogenert over 5* Rh/Al203 (8,5 g) ved 138 bar (2000 psi) i et høytrykksapparat ved 120"C i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en pute diatomejord og filtratet ble frysetørket for å gi D-perhydro-3-isokinolinkarboksylsyre (D-3-Piq-0H) (21 g, 100*).
FD-MS 184 (MH<+>)
D-3-Piq-0H (21,0 g, 95,8 mmol) ble oppløst i tetrahydrofuran (75 ml) og vann (50 ml). pH til oppløsningen ble justert til 10,0 med 5N NaOH og benzylklorformat (16,4 ml, 115 mmol) ble tilsatt dråpevis og pH ble holdt ved 9,5 med 2N NaOH. Reaksjonsblandingen ble omrørt i ytterligere 1 time ved romtemperatur. Det organiske oppløsningsmidlet ble avdampet under vakuum og dietyleter (100 ml) og vann (50 ml) ble tilsatt til resten. Det vandige laget ble separert, pH til oppløsningen ble justert til 3,0 med 3N HC1 og etylacetat (250 ml) ble tilsatt. Det organiske laget ble separert og tørket (MgS04). Filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en klar olje 2-Cbz-D-perhydro-3-isokinolinkarboksylsyre (Cbz-D-3-Piq-0H) (25,8 g, 85*).
FD-MS 318 (MH<+>)
Cbz-D-3-Piq-0H (17,2 g, 54 mmol) ble oppløst i DMF (50 ml) og avkjølt til 0°C. Til reaksjonsblandingen ble det tilsatt prolin-t-butylester (9,2 g, 54 mmol), 1-hydroksybenzotriazol (7,3 g, 54 mmol) og DCC (11,1 g, 54 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 timer ved 0°C og 24 timer ved romtemperatur. Reaksjonsutfellingen ble filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum til en olje. Oljen ble oppløst i EtOAc (200 ml) og vann (100 ml). Det organiske laget ble separert og vasket i rekkefølge med IN NaHC03, vann, 1,5N sitronsyre og vann. Det organiske laget ble tørket (MgS04) og filtratet avdampet til en olje som ble tørket for å gi 2—Cbz-D-perhydro-3-isokinolinkarbonyl-L-prolin-t-butylester (Cbz-D-2-Piq-O-Bu) (23,8 g, 94*).
FAB-MS 471 (MH<+>).
Cbz-D-3-Piq-Pro-O-t-Bu (31,2 g, 66,3 mmol) ble plassert i en rundbunnet flaske inneholdende trifluoreddiksyre (100 ml), anisol (5 ml) og omrørt ved romtemperatur (1 time). Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum uten oppvarming og dietyleter (150 ml) og vann (100 ml) ble tilsatt. pH til oppløsningen ble justert til 9,8 med 5N NaOH. Det vandige laget ble separert, pH til oppløsningen ble justert til 2,8 med 3N HC1 og etylacetat (200 ml) ble tilsatt. Det organiske laget ble separert, tørket (MgS04) og filtrert. Filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en klar olje. Oljen ble oppløst i dietyleter (300 ml) og oppløsningen ble satt ved romtemperatur (24 timer). Det resulterende faststoff ble filtrert, vasket med dietyleter og tørket for å gi 2-Cbz-perhydro-3-isokinolinkarbonyl-L-prolin (Cbz-D-3-Piq-Pro-0H)
(13,5 g, 49*).
FAB-MS 415 (MH<+>)
Analyse for C23H3QN2O5:
B) Fremstilling av Cbz-D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz. Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-E ble 1,6 g (49*) Cbz-D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz fremstilt fra Cbz-D-3-Piq-Pro-0H og p-H2NCH2C6H4C(NE)NHCbz-2HCl.
FD-MS, m/e 680 (M<+>)
C) Fremstilling av D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2<*>3HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 17-C ble 150 mg D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4-C(NH)NH2"3HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 60/40 (A/B), 240 minutter).
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 412 (M<+>)
Analyse for C23H33N5O2*3HC1•0,5H20:
Eksempel 20
( (S-cis )-N-[[4-( aminoiminometyl )f enyl] metyl] -oktahydro-l-D-homoprolyl-lH-indol-2-karboksamid.trihydroklorid)
A) Fremstilling av Cbz-D-hPro-0hi-0H.
HCl-gass ble boblet gjennom en omrørt suspensjon av (S)-indolin-2-karboksylsyre (20 g, 110 mmol) i etanol (500 ml). Når syren var fullstendig oppløst, ble oppløsningen bragt til tilbakeløpskjølingstemperatur. Etter 16 timer ble oppløs-ningen avkjølt og oppløsningsmidlet fjernet under vakuum. Resten ble finfordelt med dietyleter og det resulterende, nær hvite faststoff ble oppsamlet ved filtrering, vasket med heksaner og tørket over natten i en vakuumovn ved 30°C for å gi (S)-indolin-2-karboksylsyreetylester* <hcl (25,7 g, 78*).
Faststoffet ble oppløst i etanol (800 ml), 5* Pd/C (25 g) ble tilsatt og den resulterende suspensjonen ble hydrogenert på en Parr-rister i 8 timer (4,1 bar, 60 psi). Oppløsningen ble filtrert og oppløsningsmidlet fjernet under vakuum. Resten ble oppløst, finfordelt med dietyleter og 18,8 g (73*) av et nær hvitt faststoff (cis-Ohi-OEt*HC1) ble oppsamlet ved filtrering.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-A ble 13,5 g (93*) Cbz-D-hPro-cis-0hi-OEt fremstilt fra Cbz-D-hPro-0H og cis-Ohi-OEt-HC1.
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 442 (M<+>)
Analyse for C25<H>34<N>2<O>5<:>
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-D ble 12,5 g (102*) Cbz-D-hPro-cis-Ohi-OH fremstilt.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 414 (M<+>)
Analyse for C23<H>3Q<N>2<O>5:
B) Fremstilling av Cbz-D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-E ble 3,3 g (67*) Cbz-D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz fremstilt fra Cbz-D-hPro-Ohi-OH og p<->H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz'2HCl.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 681 (MH<+>)
C) Fremstilling av D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-3HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-F ble 2,2 g (66*) D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-3HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 60/40 (A/B), 3000 minutter ).
1-H-NMR
FD-MS, m/e 412 (M<+>)
Analyse for C^E^NgC^ * 3HC1 • 0 , 5H20 : Eksempel 21
(D-homoprolyl-N(a)-(2-f enyletyl )-N-[[4-(aminoiminometyl )-fenyl]metyl]glyeinamid.dihydroklorid)
A) Fremstilling av Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-OH.
Til en oppløsning av fenetylamin (58 ml, 461 mmol) og trietylamin (21 ml, 154 mmol) i etanol (200 ml) ved 0°C ble det tilsatt en oppløsning av t-butylbromacetat (30 g, 154 mmol) i etanol (50 ml) i løpet av 1 time. Det kalde badet ble satt til henstand og oppløsningen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter omrøring over natten ble oppløsnings-midlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i IN sitronsyre. Den vandige oppløsningen ble vasket to ganer med dietyleter, gjort basisk med fast natriumbikarbonat og så ekstrahert tre ganger med etylacetat (200 ml). De sammenslåtte etylacetatekstraktene ble tørket (MgS04), filtrert og satt i 24 timer. Den resulterende utfellingen ble filtrert, vasket med dietyleter og tørket for å gi 10,5 g hvitt faststoff. Morvæsken ble konsentrert for å gi et volum på omkring 100 ml og så fortynnet med dietyleter (400 ml). Etter henstand i 30 minutter ble oppløsningen filtrert for å gi ytterligere 23,5 g hvitt faststoff og gi en total på 34 g (94*) N(PhCH2CH2)Gly-0-t-Bu.
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 235 (M<+>)
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-A ble 10,8 g (56*) Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-0-t-Bu fremstilt fra Cbz-D-hPro-OH og N(PhCH2<C>H2)Gly-0-t-Bu.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 480 (M<+>)
Analyse for C2<g>H3^N205:
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-A for avbeskyttelse av Cbz-DL-l-Piq-Pro-O-t-Bu, ble det fremstilt 9,2 g (100*) Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2 )Gly-0H.
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 425 (M<+>)
Analyse for C24<H>2g<N>205:
B) Fremstilling av Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2C6H4C-(NH)NHCbz.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-E ble 3,2 g (55*) Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz fremstilt fra Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-OH og p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz■2HC1.
•^-H-NMR
FD-MS, m/e 690 (M<+>)
Analyse for C4Q<H>43<N>5O5: C) Fremstilling av D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2'2HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 19-F ble 770 mg (54*) D-hPro-N-(PhCH2CH2)Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-2HCl fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 85/15 (A/B), 120 minutter).
1-H-NMR
FD-MS, m/e 423 (MH<+>)
Analyse for C24<H>31<N>502•2HC1:
Eksempel 22
D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2•2HC1
(c1s-D-homoprolyl-N-[[4-(aminoiminometyl )-f enyl]metyl]-4-fenoksy-L-prolinamid.dihydroklorid)
Å) Fremstilling av Cbz-D-hPro-Pro(4-cls-PhO)-0H.
Til en oppløsning av Cbz-Pro(4-trans-OH)-Et (58,8 g, 200 mmol), trifenylfosfin (65,6 g, 250 mmol) og fenyl (23,5 g, 250 mmol) i tetrahydrofuran (500 ml) ved 0°C ble det tilsatt (dråpevis i løpet av 1 time) en oppløsning av dietylazodikarboksylat (40 ml, 250 mmol) i tetrahydrofuran (150 ml). Det kalde badet ble så fjernet og oppløsningen ble oppvarmet til romtemperatur (16 timer). Oppløsningsmidlet ble så fjernet under vakuum og den gjenværende ravgule sirupen ble finfordelt med dietyleter. Det hvite faststoffet ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Resten ble så kromatografert på sillkagel (1 kg), eluert med en trinngradient fra heksaner til 1:1 etylacetat/heksaner. Fraksjonene inneholdende rent produkt (bedømt ved TLC) ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi 36,3 g (50*) Cbz-Pro(4-cis-fenoksy)-0Et som en fargeløs sirup.
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 369 (M<+>)
Analyse for C21H23NO5:
Til en oppløsning av Cbz-Pro(4-cis-fenoksy)-OEt (25 g, 67,7 mmol) i etanol (400 ml) ble det tilsatt 5* Pd/C (5 g). Etter gjennombobling av hydrogen gjennom oppløsningen i 3 timer, ble oppløsningen filtrert gjennom en pute diatomejord og oppløsningen ble konsentrert under vakuum. Resten ble suspendert i dietyleter under kraftig omrøring og så filtrert og tørket for å gi 14,2 g (77*) Pro(4-cis-fenoksy)-0Et-HC1 som et hvitt faststoff.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 235 (M<+>)
Analyse for Ci^H^gNC^C! :
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-A ble 19,4 g (100*) Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-fenoksy)-0Et fremstilt fra Cbz-D-hPro-OH og Pro(4-cis-fenoksy )-0EfHCl.
^H-NMR
FD-MS, m/e 480 (M<+>)
Analyse for C27<H>32<N>2<0>^<:>
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-D ble 16 g (100*) Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-fenoksy)-0H fremstilt.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 452 (M<+>)
Analyse for 025^8^0^: B) Fremstilling av Cbz-D-hPro-Pro( 4-cis-PhO )- p- THHCa2CfJE^ C-(NH)NHCbz.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-E ble 4,55 g (75*) Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-Pho)-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz fremstilt fra Cbz-D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-OH og p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz-2HCl.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 718 (M<+>)
C) Fremstilling av D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2-2HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-F ble 873 mg (40*) D-hPro-Pro(4-cis-PhO)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'2HCl fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 85/15 (A/B), 120 minutter).
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 451 (M<+>)
Analyse for C25H31N503•2HC1:
Eksempel 23
EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-HCl
( N-(etylsulf onyl)-D-fenylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl)-fenyl]metyl]-L-prolinamid.hydroklorid)
A) Fremstilling av p-NH2CH2-C6H4CN'HCl.
HCl-gass ble boblet gjennom en omrørt oppløsning av N-Boc-p-aminometylbenzonitril (15 g, 64,6 mmol) i etylacetat (400 ml) ved 0°C i 10 minutter. Kjølebadet ble fjernet og etter omrøring i 1,5 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble suspendert i dietyleter, filtrert, vasket med dietyleter og tørket for å gi 10,1 g (93*) hvitt faststoff.
IR
-^H-NMR
FD-MS, m/e 132 (M<+>)
Analyse for CgHgN2Cl:
B) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C5H4CN.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 1,5 g (80*) EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2-<C>6H4CN fremstilt fra EtS02-D-Phe-Pro-0H og p-NH2CH2-C6H4CN-HC1.
IR
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 468 (M<+>)
Analyse for C24<H>2g<N>404S: C) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-p-mCM2-C6H4C(=N0H)-NH2'HC1.
Til en oppløsning av EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4CN (1 g, 2,1 mmol) i absolutt etanol (35 ml) ble det tilsatt N,N-diisopropyletylamin (0,47 ml, 2,7 mmol) fulgt av hydroksylaminhydroklorid (185 mg, 2,7 mmol) og oppløsningen ble bragt til tilbakeløpskjølingstemperatur. Etter 16 timer ble oppløs-ningen avkjølt og oppløsningsmidlene fjernet under vakuum. 250 mg av dette materialet ble tatt videre til det neste trinnet og det gjenværende materialet ble renset ved RP-HPLC (metode 1, 90/10 (A/B); gradient til 60/40 (A/B), 200 minutter).
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 501 (M<+>)
Analyse for C^^^C-sS' 1,2HC1 "H20:
D) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(=NH)NH2-HCl. Til en oppløsning EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(=N0H)NH2'HC1 (250 mg, 0,52 mmol) i etanol (40 ml) og vann (19 ml) ble det tilsatt IN HC1 (1 ml) fulgt av 5* Pd på karbon (250 mg). Den omrørte suspensjonen ble plassert under en atmosfære av hydrogen i 18 timer og ble så filtrert, konsentrert og renset ved RP-HPLC (metode 1, 90/10 (A/B), gradient til 60/40 (A/B), 200 minutter) for å gi 140 mg (52*) EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(=NH)NH2-HC1.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 486 (M<+>)
Analyse for C24H31N504S-HC1•1,5H20:
Ytterligere 5 g av produktet ble fremstilt ved metodene beskrevet i eksempel 15 og renset ved RP-HPLC (metode 3, 98/2 (A/B), 60 minutter, gradient til 60/40 (A/B), 300 minutter).
Eksempel 24
EtS02-D-Pne-Pro-m-NHCH2-C6H4C(=NH)NH2-HCl
A) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(=NOH)NH2. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 23 ble EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(=N0H)NH2 fremstilt ved anvendelse av m-BrCH2-C^H4CN istedenfor p-BrCH2-C6H4CN. 140 mg (13*) av dette krystallinske mellomproduktet ble holdt tilbake og resten av materialet ble tatt videre til trinn B.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 502 (M<+>)
Analyse for C24H31<N>5O5S:
Beregnet: C 57,47 H 6,23 N 13,96 Funnet: C 57,28 H 6,21 N 13,66 B) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(=NH)NH2-HC1. Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23-C og 23-D ble 0,27 g (28*, 2 trinn) EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2-C6H4C(=NH)NH2-HCl fremstilt.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 486 (M<+>)
Analyse for C24H31N504S•1,1HC1•2E20:
Beregnet: C 51,32 H 6,48 N 12,47 Cl 6,94 Funnet: C 51,33 H 6,09 N 12,20 Cl 6,66 Eksempel 25
D-l-Piq-Pro-m-NHCH2-C6<H>4C(=NH)NH2-HCl
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23 ble 0,86 g D-l-Piq-Pro-m-NHCH2-C6H4C(=NH)NH2'HC1 fremstilt fra Cbz-D-l-Piq-Pro-OH og m-NH2CH2-C6H4CN-HCl.
l-H-NMR
FD-MS, m/e 412 (M<+>)
Analyse for C23<H>33<N>502•2,5HC1•0,5H20: Eksempel 26
EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2<C>H2-C6H4C(=NH)NH2'HCl
A) Fremstilling av metyl-p-cyano-trans-cinnamat.
Til en omrørt suspensjon av NaH (6,1 g av 60* oljesuspensjon, 153 mmol) og p-cyanobenzaldehyd (20 g, 153 mmol) i tetrahydrofuran (250 ml) ved 0°C ble det tilsatt via tilsetningstrakt til en oppløsning trimetylf osfonoacetat (28 g, 153 mmol) i tetrahydrofuran (50 ml). Etter omrøring 48 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og den rå resten ble oppløst i etylacetat (500 ml). Etylacetatoppløsningen ble vasket en gang med vann, tre ganger med mettet, vandig NaHS03 og en gang med saltvann. Den organiske fasen ble så tørket med MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 28 g (98*) hvitt faststoff.
IR
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 187 (M<+>)
B) Fremstilling av metyl-p-cyano-dihydrocinnamat.
Til en oppløsning av metyl-p-cyano-trans-cinnamat (13,6 g, 73 mmol) i toluen (485 ml) ble det tilsatt 5* Pd/BaS04 (2,7 g). Etter 9 timer under hydrogengass ved 4 bar ble oppløsningen filtrert, konsentrert under vakuum, kromatografert over silikagel, eluert med en trinngradient av heksaner til 30* etylacetat/heksaner. De produktinneholdende fraksjonene ble kombinert og konsentrert for å gi 10,6 g (77*) fargeløs olje.
IR
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 189 (M<+>)
C) Fremstilling av p-cyano-dihydrocinnaminsyre.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 1-D ved anvendelse av 1,1 ekvivalent LiOEPItøO ble 5,1 g (58*) p-cyano-dihydrocinnaminsyre fremstilt fra metyl-p-cyano-dihydrocinnamat.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 175 (M<+>)
D) Fremstilling av Boc-p-NHCH2CH2-C6H4CN.
Til en oppløsning av p-cyano-dihydrocinnaminsyre (6,7 g, 38,2 mmol) og trietylamin (5,9 ml, 42 mmol) i t-butanol (150 ml) ble det tilsatt difenylfosforylazid (11,6 g, 42 mmol) og oppløsningen ble bragt til tilbakeløpskjølingstemperatur. Etter omrøring over natten ble oppløsningen avkjølt og oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum. Resten ble oppløst i etylacetat og vasket tre ganger med IN sitronsyre, en gang med saltvann, to ganger med mettet, vandig NaHC03 og så tørket (MgSO^, filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble så kromatografert over silikagel, eluert med 10* etylacetat/heksaner til 50* etylacetat/heksaner. De produktinneholdende fraksjonene ifølge TLC ble kombinert og konsentrert for å gi 5,4 (57*) hvitt faststoff.
IR
'1-H-NMR
FD-MS, m/e 246 (M<+>)
Analyse for <C>14<H>igN202:
E) Fremstilling av p-NH2CH2CH2-C6H4CN'HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 23-A ble 3,6 g (98*) p-NH2CH2CH2-C6H4CN'HCl fremstilt.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 147 (MH<+>)
Analyse for CgH^^N2Cl:
F) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4CN.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 1-G ble 1,5 g EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4CN fremstilt fra EtS02-D-Phe-Pro-OH og p-NH2CH2CH2-C6H4CN-HCl.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 482 (M<+>)
G) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(=N0H)-NH2'HC1.
Til en omrørt oppløsning av EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4CN (1 g, 2,07 mmol) og N,N-di i sopropyl etyl amin (0,45 ml, 2,59 mmol) ble det tilsatt hydroksylaminhydroklorid (180 mg, 2,59 mmol) og oppløsningen ble bragt til tilbakeløpskjølings-temperatur. Etter 18 timer ble oppløsningen avkjølt, oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum og resten ble oppløst i eddiksyre (15 ml) og renset ved RP-HPLC (metode 2, 90/10 (A/B), gradient til 60/40 (A/B), 200 minutter). Fraksjonene inneholdende rent EtSOg-D-Phe-Pro-p-NHCB^-C6H4C(=NOH)NH2-HCL ifølge analytisk RP-HPLC ble kombinert og pH justert som beskrevet ovenfor og lyofilisert for å gi 0,35 g (31*) EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(=N0H)NH2'HCl.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 516 (M<+>)
Analyse for C25<H>33<N>505S-HC1'H20:
H) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C£)H4C( =NH)-NH2*HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23-D ble 0,098 g (50*) EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(=NH)NH2-HCl fremstilt fra EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(=N0H)NH2'HC1.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 500 (M<+>)
Analyse for C25<H>33<N>504S-2,6HC1-H20:
Eksempel 27
EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2<C>H2-C6H4C(=NH)NH2•HC1
A) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(=N0H)NH2. Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 26-A til 26-E og 24-A ble 0,15 g EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(=N0H)NH2 fremstilt fra m-cyanobenzaldehyd.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 516 (M<+>)
Analyse for C^B^NsC^S:
B) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(=NH)-NH2'HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 24-D ble 0,21 g (20* EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(=NH)NH2-HC1 fremstilt fra EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(=N0H)NH2.
<3->H-NMR
FD-MS, m/e 500 (M<+>)
Analyse for C25<H>33<N>504S•2,1HC1•0,7H20:
Eksempel 28
D-l-Plq-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(=NH)NH2•2HC1
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til. den beskrevet i eksempel 23 ble 0,85 g l-Piq-Pro-p-NHCH2CH2-C6H4C(=NH)NH2-2HC1 fremstilt fra Cbz-D-l-Piq-Pro-OH og p-NH2CH2CH2-C6H4CN'HC1.
^H-NMR
FD-MS, m/e 426 (M<+>)
Analyse for C24<H>35<N>502•2HC1•2H20:
Eksempel 29
D-l-Piq-Pro-m-NHCH2CH2-C6H4C(=NH)NH2-2HCl
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23 ble 0,8 g l-Piq-Pro-m-NECE2CH2-C6E4C(=NH)NE2'2EC1 fremstilt fra Cbz-D-l-Piq-Pro-OH og m-NH2CH2CH2-C6H4CN-HCl.
Ifi-NMR
FD-MS, m/e 426 (M<+>)
Analyse for C24<H>35<N>502•2HC1•2H20:
Eksempel 30
EtS02-D-Phe-Pro-p-NECH2CH2-C6H4C(=NH)NH2-HCl
A) Fremstilling av p-H0CH2CH2CH2-C6H4CN.
Til en omrørt oppløsning av metyl-p-cyanodihydrocinnamat (10 g, 53 mmol) i tetrahydrofuran (150 ml) ble det tilsatt LiBH2 (1,15 g, 53 mmol) og oppløsningen ble oppvarmet med tilbake-løpskjøling. Etter 2 timer ble oppløsningen avkjølt og natriumfosfatbuffer (pH 7) ble tilsatt dråpevis. Etter at gassutviklingen var fullstendig ble etylacetat og vann tilsatt og lagene ble separert. Den vandige fasen ble ekstrahert en gang med etylacetat og de kombinerte etylacetatfåsene ble vasket med saltvann, så tørket med MgSC^, filtrert og konsentrert for å gi 8,1 g (95*) av en tykk, fargeløs olje.
IR
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 161 (M<+>)
B) Fremstilling av p-BrCH2CH2~c6H4CN'
Til en omrørt oppløsning av p-HOCH2CH2CH2-C6H4CN (8,1 g, 50 mmol) i tetrahydrofuran (100 ml) ble det tilsatt trifenylfosfin (14,4 g, 55 mmol) fulgt av karbontetrabromid (18,2 g, 55 mmol). Etter omrøring i 18 timer ble så oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble kromatografert over silikagel eluert med en trinngradient i heksan til 20* etylacetat/heksan. De produktinneholdende fraksjonene ifølge TLC ble kombinert og konsentrert for å gi 7,3 g (65*) av en tykk, fargeløs olje.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 223 (M<+>)
Analyse for C^qH^qBtN:
C) Fremstilling av p-BocgNCHgCHgO^-C^CN.
Til en omrørt suspensjon av NaH (1,4 g 60* oljedispersjon, 34 mmol) i DMF (100 ml) ble det dråpevis tilsatt en oppløsning av di-t-butyliminodikarboksylat (7,4 g, 34 mmol) i DMF (20 ml) via en tilsetningstrakt. Etter at gassutviklingen var fullstendig, ble en oppløsning av p-BrCHgCB^CHg-CfcB^CN (7 g, 31 mmol) i DMF tilsatt via en tilsetningstrakt og oppløs-ningen ble oppvarmet til 70°C. Etter omrøring i 12 timer ble oppløsningen avkjølt og oppløsningsmidlet fjernet under vakuum. Resten ble oppløst i dietyleter og vasket tre ganer med vann. Den organiske fasen ble tørket med MgS04, filtrert og konsentrert og resten ble kromatografert over silikagel, eluert med heksan til 20* etylacetat/heksan. De produktinneholdende fraksjonene ble kombinert og konsentrert for å gi 9,38 g (84*) av et hvitt faststoff.
IR
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 361 (M<+>)
Analyse for C2oH28N2°4:
D) Fremstilling av p-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN-HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 23-A ble 4,3 g (84*) p-NE^CB^CE^CB^-C^CN-HCl fremstilt.
IR
^H-NMR
FD-MS, m/e 160 (M<+>)
E) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=N0H)-NH2-HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-G og 26-G ble 0,32 g EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CE2CH2-C6H4C(=N0H)NH2-HC1 fremstilt fra EtS02-D-Phe-Pro-OH og p-NHCH2CH2CH2-C6H4CN'HCl.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 530 (M<+>)
Analyse for C26<H>35<N>505S-1,2HC1-H20: F) Fremstilling av EtS02-D-Pne-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=NH)-NH-HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23-D ble 0,13 g (67*) EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=NH)NH2'HC1 fremstilt fra EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2-<C>6H4C(=NOH)NH2-HCl.
<1->H-NMK
FD-MS, m/e 514 (M<+>)
Analyse for C26<H>35<N>504S-1,5HC1•2H20:
Eksempel 31
EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=NH)NH2-HCl
A) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=NOH)-NH2-HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-G og 26-G ble 0,32 g EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=N0H)NH2'BC1 fremstilt fra m-cyanodihydro-cinnaminsyre.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 530 (M<+>)
Analyse for C26<H>35<N>5O5S'HCl■1,1H20:
B) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-m-NHTO2CH2CH2-C6H4C(=NH)"
NH.HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23-D ble 0,12 g (62*) EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=NH)NH2-HC1 fremstilt fra EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6<H>4C(=N0H)NH2"HCl.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 514 (M<+>)
Analyse for C26<H>35<N>504S*1,5HC1"H20:
Eksempel 32
l-Piq-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=NH)NH2'2HCl
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23 ble 0,66 g (48*) 1-Piq-Pro-p-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=NH)NH2'HC1 fremstilt fra 1-Piq-Pro-OH og p-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN-HCl.
FD-MS, m/e 440 (M<+>)
Analyse for C25H37N5O2* 2,1HC1-H20: Eksempel 33
l-Piq-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=NH)NH2•2HC1
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23 ble 0,64 g (46*) 1-Piq-Pro-m-NHCH2CH2CH2-C6H4C(=NH)'HCl fremstilt fra 1-Piq-Pro-OH og m-NH2CH2CH2CH2-C6H4CN'HC1.
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 440 (M<+>)
Analyse for C25<H>37<N>5O2*2HC1'H20:
Eksempel 34
EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6<H>4NEC(NH)NH2'HCl
Å) Fremstilling av Boc-p-NHCHgC^I^NOg.
Til en omrørt oppløsning av 4-nitrobenzylaminhydroklorid (15 g, 79 mmol) og N,N-diisopropyletylamin (14 ml, 79 mmol) i diklormetan (200 ml) ble det tilsatt di-t-butyldikarbonat (17 g, 79 mmol). Etter 48 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i etylacetat (500 ml) og vasket to ganger med IM sitronsyre, en gang med vann, og en gang med mettet, vandig NaHCC^. Den organiske fasen ble tørket med MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi et nær hvitt faststoff som ble rekrystallisert fra kloroform/heksan. Tre høster ble kombinert, vasket med heksan og tørket under vakuum for å gi 11,5 g (58*) hvitt faststoff.
IR
l-H-NMR
FD-MS, m/e 252 (M<+>)
Analyse for C-l2<H>i6<N>2<0>4:
B) Fremstilling av p-BocNHCHgCb1^111^•
Til en omrørt oppløsning av p-BocNHCHgC^H^NC^ (7,5 g, 29,7 mmol) og NiCl2'6H20 (17,7 g, 74,3 mmol) i metanol (150 ml) ved 0°C ble det tilsatt NaBH4 (5,6 g, 149 mmol) i små porsjoner i løpet av 30 minutter. Etter fullstendig tilsetning av NaBH4 og 15 minutter, ble oppløsningsmidlet avdampet under vakuum og resten ble oppløst i konsentrert ammoniumhydroksyd og ekstrahert to ganger med diklormetan. De kombinerte, organiske ekstraktene ble vasket med saltvann, tørket med MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 6,4 g (97*) hvitt faststoff.
IR
^H-NMR
FD-MS, m/e 222 (M<+>)
Analyse for C-^HigNgC^:
C) Fremstilling av N,N<*->di-Cbz-S-metylisotiourea.
Til en omrørt suspensjon av bis-S-metylisotioureasulfat (20 g, 144 mmol) i diklormetan (200 ml) ble det tilsatt 5N natriumhydroksyd (16 ml). Oppløsningen ble avkjølt til 0°C og benzylklorformat (41 ml, 288 mmol) ble tilsatt dråpevis. Samtidig ble 2N natriumhydroksyd tilsatt under stedsformål pH til oppløsningen var omkring 11. Avkjølingsbadet ble så fjernet og etter oppvarming til romtemperatur ble fasene separert og den vandige fasen ble ekstrahert med diklormetan (250 ml). De kombinerte, organiske fasene ble så vasket to ganer med 0,1N HC1 (250 ml) og en gang med saltvann (250 ml). Den organiske fasen ble så tørket med MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 41 g (79*) tykk, fargeløs sirup.
1-H-NMR
D) Fremstilling av p-Boc-NHCH2C6H4NHC(NCbz)NHCnz.
TII en omrørt oppløsning av p-Boc-NHCH2C^H4NH2 (5 g, 22,5 mmol) i tetrahydrofuran (50 ml) ble det tilsatt N,N'-d-Cbz-S-metylisotiourea (8,9 g, 24,7 mmol). Etter 48 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten oppløst i kloroform. Silikagel ble tilsatt og oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum for å gi et nær hvitt pulver som så ble tørrlastet på en silikagelkolonne. Kolonnen ble eluert med en trinngradient på 5* etylacetat/heksan til 30* etylacetat/- heksan. De produktinneholdende fraksjonene (bedømt ved TLC) ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi 7,6 g (63*) av et hvitt faststoff.
IR
^H-NMR
FD-MS, m/e 532 (M<+>)
Analyse for C2gH32N4C>6:
E) Fremstilling av HC1-p-NH2CH2C6H4NHC(NCbz )NHCbz.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23-A ble 4,7 g (89*) HC1•p-NH2CH2C6H4-NHC-(NCbz)NHCbz, et hvitt faststoff, fremstilt fra p-Boc-NHCH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz.
IR
<1->H-NMR
FD-MS,. m/e . 433 (M<+>)
F) Fremstilling av EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2-HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 1-G og eksempel 18-F ble 1,1 g EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2-HC1 fremstilt fra EtS02-D-Phe-Pro-OH og HC1•p-NH2CH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz.
IR
<3->H-NMR
FD-MS, m/e 501 (M<+>)
Analyse for C24H32N604S"HC1 'H20: Eksempel 35
EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2<C>6H4NHC(NH)NH2'HCl
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 34 ble 1,8 g EtS02-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4CNH-(NH)NH2-HC1 fremstilt fra 4-nitrofenetylamin-HCl.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 515 (M<+>)
HRMS (FAB), m/e Beregnet for C25H35N604S: 515,2441
Funnet: 515,2483
Eksempel 36
EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2-HCl
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 30-C og 34-B til 34-F ble 1,8 g EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2-HCl fremstilt fra 3-nitrobenzylbromid.
IR
^H-NMR
FD-MS, m/e 501 (MH<+>)
HRMS (FAB), m/e Beregnet for C24H33<N>604S: 501,2284
Funnet: 501,2280
Eksempel 37
EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2<C>6H4NHC(NH)NH2'HCl
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 26-D, 26-B (ved anvendelse av 5% Pd/C istedenfor for Pd/BaS04 og etylacetat istedenfor toluen) og 34-D til 34-F, ble 0,85 g EtS02-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2"HCl fremstilt fra 3-nitrocinnaminsyre.
^H-NMR
FD-MS, m/e 515 (MH<+>)
Analyse for C25<H>34<N>604S'2,2HC1•0,5H20:
Eksempel 38
D-l-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2•2HC1
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til den beskrevet i eksempel 34 ble 0,94 g D-l-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)-NH2'2HC1 fremstilt. Det endelige produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 70/30 (A/B), 180 minutter).
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 427 (MH<+>)
Analyse for C23<H>34<N>602•2HC1:
Eksempel 39
D-l-Piq-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2•2HC1
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til den beskrevet i eksempel 35 ble 1,03 g D-l-Piq-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)-NH2'2HC1 fremstilt. Det endelige produkt ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 70/30 (A/B), 180 minutter).
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 441 (M<+>)
Analyse for C43<H>36<N>602•2HC1■1,5H20:
Eksempel 40
D-l-Piq-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2-2HCl
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til den beskrevet i eksempel 36 ble 1,04 g D-l-Piq-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)-NH2*2HC1 fremstilt. Det endelige produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 70/30 (A/B), 180 minutter ).
1-H-NMR
FD-MS, m/e 427 (M<+>)
Analyse for C23<H>34<N>602'2HC1-H20:
Eksempel 41
D-l-Plq-Pro-m-NHCH2CH2<C>6H4NHC(NH)NH2'2HC1
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til den beskrevet i eksempel 37 ble 0,96 g D-l-Piq-Pro-m-NHCH2CH26H4NHC(NH)-NH2*2HC1 fremstilt. Det endelige produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 70/30 (A/B), 180 minutter ).
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 441 (M<+>)
Analyse for C24H36<N>602•2,1HC1•1,5H20:
Eksempel 42
D-l-Piq-cls-0hi-p-NHCH2C6<H>4C(NH)NB2-2HCl
A) Fremstilling av Cbz-DL-l-Piq-cis-Ohi-OEt.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-A ble 16,6 g (100*) Cbz-DL-l-Piq-cis-Ohi-OEt fremstilt fra Cbz-DL-l-Piq-OH og cis-Ohi-OEt*HC1.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 496 (M<+>)
Analyse for C2<g>H4øN205:
B) Fremstilling av Cbz-D-l-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(lIH)NHCbz. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-D og 18-E ble Cbz-D-l-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2-C6H4C(NH)NHCbz og Cbz-L-l-Piq-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz fremstilt fra Cbz-D,L-1-Piq-Pro-OH og p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz*2HCl. Disse diastereomerene ble separert ved silikagel-kromatografri ved anvendelse av etylacetat/heksangradient. Fraksjonene inneholdende den ledende diastereomer (Rf = 0,31, etylacetat) ble oppsamlet og konsentrert for å gi 1,3 g Cbz-L-l-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz. Fraksjonene inneholdende den etterfølgende diastereomer (Rf = 19, etylacetat) ble oppsamlet og konsentrert for å gi 1,5 g Cbz-D-l-Piq-cis-0hi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz som et hvitt skum.
FD-MS, m/e 735 (MH<+>)
Analyse for C43<H>51<N>5O6: C) Fremstilling av D-l-Piq-cis-0hi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-2HCl. Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-F ble 0,61 g (63*) D-l-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NE2,2HC1 fremstilt fra Cbz-D-l-Piq-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz. HPLC-gradienten benyttet i dette tilfellet var en gradient fra 98/2 A/B til 70/30 A/B i løpet av 120 minutter.
<1>H-NMR
FAB-MS, m/e 466,4 (MH<+>)
Analyse for C27<H>3g<N>g02<*>2HC1•1H20:
Eksempel 43
D-3-Piq-cis-0hi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'2HCl
Å) Fremstilling av D-3-Piq-cis-0hi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2<*>2HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til den beskrevet i eksempel 1-A, 1-D, 18-E og 18-F ble 1,3 g 3-Piq-cis-0hi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'2HC1 fremstilt. HPLC-gradienten anvendt i dette eksempel var en gradient fra 98/2 A/B til 70/30 A/B i løpet av 120 minutter.
<1>H-NMR
FAB-MS, m/e 466,6 (MH<+>)
Analyse for C27H3g<N>502•2HC1:
Eksempel 44
EtS02-Phg-cis-Ohi-NHCH2C6<H>4C(NH)NH2-HCl
( (S-cls)-N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-l-[N-(etylsulfonyl)-D-fenylglycyl]-lH-indol-2-karboksamid.hydroklorid)
Å) Fremstilling av Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1—A ble 14,9 g (58*) Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt fremstilt fra Boc-D-Phg-OH og (S)-cis-oktahydroindol-2-karboksylsyreetylester"HC1.
FD-MS, m/e 430 (M<+>)
Analyse for C24<H>34<N>2O5:
B) Fremstilling av D-Phg-cis-Ohi-OEfHCl.
Til en kald (0"C), omrørt oppløsning av Boc-D-Phg-cis-Ohi-OEt i etylacetat ble det boblet HCl-gass i 10 minutter. Etter omrøring i 2 timer under oppvarming til romtemperatur ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum. Det resulterende faststoff ble suspendert i dietyleter og deretter isolert ved filtrering for å gi 10,7 g (97*) D-Phg-cis-Ohi-OEt'HC1.
^H-NMR
FD-MS, m/e 331 (M<+>)
Analyse for C19H27N2O3CI:
C) Fremstilling av EtS02-D-Phg-cis-Ohi-OEt.
Ti:l en oppløsning av D-Phg-cis-Ohi-OEt'HC1 (10 g, 27 mmol) og N,N-diisopropyletylamin (10,7 ml, 61 mmol) i THF (200 ml) ved —78° C ble det dråpevis tilsatt via en tilsetningstrakt en oppløsning av etansulfonylklorid (3,9 g, 30 mmol) i THF (20 ml). Avkjølingsbadet ble satt uten pass og oppløsningen ble sakte oppvarmet til romtemperatur. Etter omkring 18 timer ble oppløsningen konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i etylacetat (200 ml), vasket to ganger med IN sitronsyre (200 ml), mettet, vandig NaHC03 (200 ml) og saltvann (200 ml). Den organiske fasen ble så tørket med MgSC^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 11,2 g (97*) av et gult skum.
^H-NMR
FD-MS, m/e 422 (M<+>)
Analyse for C21<H>30<N>2O5S:
D) Fremstilling av EtS02-Phg-cis-0hi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-D, 18-E og 18-F ble 0,62 g EtS02-Phg-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-2HCl oppnådd. HPLC-gradienten benyttet i dette tilfellet var en gradient fra 90/10 A/B til 60/40 A/B i løpet av 120 minutter.
<!>h-NMR
FAB-MS, m/e 526,3 (MH<+>)
Analyse for 0^35^048'HC1:
Eksempel 45 EtS02-Phe-cis-0hi-p-NHCH2C6<H>4C(NH)NH2'HCl ( ( S-cis)-N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-l-[N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl]-lH-indol-2-karboksamid.hydroklorid) A) Fremstilling av EtSOg-Phe-cis-Ohi-p-NHCHgCcfl^CfNH)-NH2•2HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 44 ble 1,5 g EtS02-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2-HC1 fremstilt fra Boc-D-Phe-OH.
FAB-MS, m/e 540,3 (MH<+>)
Analyse for C28H37N504 'HC1 -H20:
Eksempel 46
H00CCH2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-HC1
(N-(karboksyrnetyl)-D-fenylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl )-fenyl]metyl]-L-prolinamid.hydroklorid)
Å) Fremstilling av N-(6-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OBn.
Til en oppløsning av D-Phe-Pro-OBn"HCl (20 g, 51 mmol) i DMF (100 ml) ble det tilsatt t-butylbromacetat (9,9 g, 56 mmol) i en porsjon og N,N-diisopropyletylamin (17,4 ml, 101 mmol) ble dråpevis tilsatt i løpet av 30 minutter. Denne blandingen ble omrørt i 18 timer ved romtemperatur. Di-t-butyldikarbonat (16,6 g, 76 mmol) og N,N-diisopropyletylamin (13,2 ml, 76 mmol) ble så tilsatt i en porsjon og reaksjonen ble så omrørt i ytterligere 24 timer. Oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum og resten ble skilt mellom etylacetat (1 1) og IM vandig sitronsyre (500 ml). Lagene ble separert og den organiske fasen ble vasket en gang med IM vandig sitronsyre, to ganger med mettet, vandig bikarbonat og en gang med saltvann (hver gang 500 ml). Den organiske fasen ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert under vakuum. En ravgul olje ble renset ved silikagelkromatografi eluert med en etylacetat/heksan-gradient (heksaner til 30* etylacetat/- heksaner). Fraksjoner inneholdende produktet ble kombinert og konsentrert for å gi 19,0 g (66*) som en fargeløs olje som sakte ble krystallisert ved henstand.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 566 (M<+>)
Analyse for C32<H>42<N>2O7:
B) Fremstilling av N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH.
Til en oppløsning av N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OBn (18,5 g, 33 mmol) i etylacetat (250 ml) ble det tilsatt 5* Pd/C-katalysator (5 g). Denne oppløsningen ble avgasset under vakuum flere ganger og plassert under en atmosfære av hydrogen i 2 timer under omrøring. Ballong ble fjernet, diatomejord ble tilsatt og oppslemmingen ble filtrert over en pute diatomejord. Filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi 13,2 g (8456) av et hvitt skum.
ifl-NMR
FD-MS, m/e 476 (M<+>)
Analyse for C25<H>36<N>2O7:
C) Fremstilling av N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2-C6H4C(NH)NHCbz.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-E ble 2,7 g ( 9056 ) N-( t-BuOOCCH2 )-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz fremstilt fra N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH og p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz•2HC1.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 743 (MH<+>)
Analyse for C4^H51N50g<:>
D) Fremstilling av HOOCCH2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)liH2-HCl. Til en avkjølt (0°C) oppløsning av N-(t-Bu00CCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz (2,2 g, 3 mmol) i dioksan (100 ml) ble det boblet HCl-gass i 10 minutter. Etter omrøring i 3 timer under oppvarming til romtemperatur ble dioksanet fjernet under vakuum. Resten ble oppløst i en blanding av absolutt etanol (150 ml), vann (75 ml) og IN HC1 (6 ml). Til dette ble det tilsatt 5* Pd/C (1 g). Etter avgassing under vakuum ble blandingen plassert under en hydrogenatmosfære i 16 timer under omrøring ved romtemperatur. Diatomejord ble tilsatt og den resulterende oppslemmingen ble filtrert over en pute diatomejord. Filtratet ble konsentrert under vakuum til en rest og denne ble umiddelbart renset ved HPLC, metode 2 (98/2 A/B— til 70/30 A/B-gradient i løpet av 2 timer). Fraksjonene inneholdende rent produkt ble oppsamlet og lyofilisert for å gi 1,1 g (72*) hvitt faststoff.
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 452,3 (MH<+>)
Analyse for C24<H>29<N>5O4•2HC1:
Eksempel 47
HOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4<C>(NH)NH2-ECl
A) Fremstilling av t-Bu00CCH2-D-Phe-cis-0hi-0Et.
Til en oppløsning av D-Phe-cis-Ohi-OEt•HC1 (30 g, 79 mmol) i acetonitril (400 ml) ble det tilsatt N,N-diisopropyletylamin (41 ml, 236 mmol) og t-butylbromacetat (14 ml, 87 mmol). Denne oppløsningen ble oppvarmet til 50°C og holdt der i 3 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble oppløsningen konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i etylacetat (300 ml) og denne oppløsningen ble vasket to ganger med mettet, vandig ammoniumklorid (200 ml), to ganger med mettet, vandig natriumbikarbonat (200 ml) og to ganger med saltvann (200 ml). Det organiske laget ble tørket (MgS04), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi en oransje olje som ble renset ved silikagelkromatografi eluert med en gradient av heksan til 1:1 heksan/etylacetat. Fraksjoner inneholdende produkt (ifølge TLC) ble kombinert og konsentrert for å gi 33,2 g ( 92%) av en fargeløs olje.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 458 (M<+>)
Analyse for C2^H3gN205:
B) Fremstilling av N-(t-Bu00CCH2)-N-Boc-D-Phe-cis-Ohi-OH.
Til en oppløsning av t-BuOOCCH2-D-Phe-cis-Ohi-OEt (30 g, 65 mmol) i THF (200 ml) ble det tilsatt N,N-diisopropyletylamin (17 ml, 98 mmol) og di-t-butyldikarbonat (15,7 g, 72 mmol). Denne oppløsningen ble bragt til forsiktig tilbakeløpskjøling og holdt der i 16 timer. Oppvarmingen ble avbrutt og straks blandingen var kald, ble oppløsningen konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i etylacetat (400 ml) og vasket to ganger med 1,0M sitronsyre (200 ml), to ganger med mettet, vandig natriumbikarbonat (200 ml) og to ganger med saltvann (200 ml). Den organiske oppløsningen ble tørket (MgSO^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi en gul olje. En porsjon av denne oljen (24,8 g, 44 mmol) ble oppløst i 300 ml dioksan. Til denne ble det tilsatt en oppløsning bestående av 2,05 g LiOH'H20 (49 mmol) i 150 ml vann. Denne blandingen ble omrørt i 5 timer ved romtemperatur ved hvilken tid 100 ml mettet, vandig ammoniumklorid ble tilsatt. Oppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum og resten ble skilt mellom mettet, vandig natriumbikarbonat og dietyleter. Lagene ble separert og det vandige laget ble surgjort til pH 3 med sitronsyre. Den sure, vandige oppløsningen ble ekstrahert tre ganer med dietyleter (200 ml) og disse ble kombinert, tørket (MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi 24,3 g N-(t-Bu00CCH2)-N-Boc-D-Phe-cis-Ohi-OH som et hvitt skum.
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 530 (M<+>)
Analyse for C2<gH>42<N>207:
C) Fremstilling av H00CCH2-D-Phe-cis-0hi-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2'HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 18-E og 46-D ble 1,2 g (67SÉ) H00CCH2-D-Phe-cis-0hi-p-NHCH2C6H4(NH)NH2-HCl fremstilt.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 506,3 (MH<+>)
Analyse for C28<H>35<N>504'2HC1-H20:
TCkaem pel 48 HOOCCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-HC1 (N-(karboksyrnetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid) A) Fremstilling av H00CCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2<*>HC1. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 46 ble 0,92 g HOOCCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6E4C(NH)-NH2-HC1 fremstilt.
ifl-NMR
FD-MS, m/e 458 (M<+>)
Analyse for C24H35N504'HCl•0,5H20:
Eksempel 49
HOOCCH2-D-Cha-cis-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'HCl
((S-cis )-N-[[4-(amlnoiminometyl)fenyl]metyl]-1-[N-(karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl]-lH-indol-2-karboksamid.hydroklorid)
Å) Fremstilling av H00CCH2-D-Phe-cis-0hi-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2-HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-A og 1-D, 18-E, 44-B 47-A (ved benyttelse av benzylbromacetat) og 18-F, ble 0,75 g H00CCH2-D-Cha-cis-0hi-p<->NHCH2C6H4C(NH)NH2-HCl oppnådd med utgangspunkt i Boc-D-Cha og cis-Ohi-OEt*HC1. HPLC, metode 2 ble benyttet i rensing av dette materialet ved anvendelse av en gradient på 98/2 A/B til 70/30 A/B i løpet av 3 timer.
<1->H-NMR
FAB-MS, m/e 512,3 (MH<+>)
Analyse for C28<H>41<N>504•2HC1:
Eksempel 50
H00CCH2-D-Phe-Pro(4-cis-isoamyl)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'HC1
A) Fremstilling av Cbz-pro(4-trans-0H)-0Et.
Til en oppløsning av Cbz-Pro(4-trans-0H)-0H (33 g, 124 mmol) i etanol (500 m) ble det tilsatt p-toluensulfonsyre (1 g) og oppløsningen ble oppvarmet med tilbakeløpskjøling. Etter 16 timer ble oppløsningen avkjølt til romtemperatur og oppløs-ningsmidlet ble fjernet under vakuum. Resten ble oppløst i etylacetat (400 ml) og vasket to ganger med mettet, vandig NaHCOs, og to ganger med mettet, vandig natriumkloridoppløs-ning. Etylacetatoppløsningen ble tørket med MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 34,5 g (95*) av en fargeløs olje.
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 293 (M<+>)
Analyse for C15<H>19NO5:
B) Fremstilling av Cbz-Pro(4-okso)-OEt.
Cbz-Pro(4-trans-0H)-0Et (32,7 g, 111 mmol) ble oppløst i diklormetan (500 ml) med mekanisk omrøring i en 1 1 rundbundet flaske. Til denne oppløsningen ble det tilsatt 3 Å molekylsikter (100 g) og pyridiniumklorkromat (60 g, 278 mmol) i porsjoner små nok til å opprettholde effektiv omrøring. Etter omrøring i 12 timer ved romtemperatur ble dietyleter (200 ml) tilsatt og den sorte oppslemmingen ble dekantert fra en tjæreaktig rest og flushet gjennom en kolonne silikagel (200 g). Resten ble vasket to ganger med diklormetan (200 ml) og de kombinert vaskevann ble også passert gjennom silikapluggen. Filtratet ble flushet gjennom en silikagelkolonne med en 1:1 etylacetat/heksan (4 1) og 500 ml fraksjoner ble oppsamlet. Alle produktinneholdende fraksjoner ifølge TLC, ble blandet og konsentrert under vakuum for å gi 23,8 g (74*) av en fargeløs olje.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 291 (M<+>)
Analyse for C-j^H-LyNC^:
C) Fremstilling av Cbz-Pro(4-isobutylmetyliden)-0Et. Kalium-t-butoksy (34 g, 288 mmol) ble suspendert i tetrahydrofuran (800 ml) i en ovnstørket, 2-halset, 2 1 rundbunnet flaske utstyrt med et nitrogeninnløp, magnetisk rørestav og tilsetningstrakt. Til denne suspensjonen ble det i flere porsjoner tilsatt isoamyltrifenylfosfoniumbromid (120 g, 288 mmol). Etter omrøring i 30 minutter ble en oppløsning av Cbz-Pro(4-okso )-0Et (70 g, 240 mmol) i tetrahydrofuran (150 ml) tilsatt dråpevis via en tilsetningstrakt i løpet av 1 time. Etter omrøring i ytterligere 2 timer ble mettet, vandig NH4CI (100 ml) tilsatt. Denne oppløsningen ble fortynnet med etylacetat (750 ml) og lagene ble separert. Det organiske laget ble vasket to ganger med IN sitronsyre, to ganger med mettet, vandig NaHC03 og to ganger med en mettet, vandig natriumkloridoppløsning. Den organiske oppløsningen ble tørket med MgS04, filtrert og konsentrert for å gi en gul olje. Denne oljen ble renset ved flashkromatografi over silikagel, eluert med 2:1 heksan/etylacetat. De produktinneholdende porsjoner (ifølge TLC) ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi 37 g (45*) fargeløs olje.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 345 (M<+>)
Analyse for C20<H>27NO4:
D) Fremstilling av Pro( 4-cis-isoamyl )-OEfHCl.
Til en oppløsning av Cbz-Pro(4-isobutylmetyliden)-OEt (37 g, 107 mmol) i etanol (500 ml) ble det tilsatt 5* Pd/C (5 g). Nitrogengass ble boblet gjennom denne oppløsningen i 5 minutter og så ble hydrogengass boblet gjennom i 3 timer. Oppløsningen ble filtrert gjennom en pute diatomejord. Hydrokloridgass ble så boblet gjennom oppløsningen inntil metting, og så ble oppløsningen konsentrert under vakuum for å gi 26 g (97*) av en ravgul olje.
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 214 (M<+>)
Analyse for C12<H>24CINO2:
E) Fremstilling av H00CCH2-D-Phe-Pro(4-cis-isoamyl)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2■HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-A og 1-D, 18-E, 44-B, 47-A (ved bruk av benzylbromacetat) og 18-F, ble 0,27 g H00CCH2-D-Phe-Pro(4-cis-isoamyl )-p-NHCH2C5H4C(NH)NH2'HC1 oppnådd med utgangspunkt i Boc-D-Cha og Pro(4-cis-isoamyl)-0Et-HC1. HPLC, metode 2 ble benyttet i rensingen av dette materialet ved anvendelse av en gradient av 98/2 A/B til 50/50 A/B i 3 timer.
<1->H-NMR
FAB-MS, m/e 528,4 (MH<+>)
Analyse for C29<H>45<N>5O4M,9HC1:
Eksempel 51
D-Cha-Pro-p-NHCH2C6<H>4C(NH)NH2■2HC1
( D-cykloheksylalanyl -N- [ [4-(aminoiminometyl )f enyl] me tyl] -L-prolinamid.dihydroklorid)
A) Fremstilling av Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH42CÉ,H4C(KH)NHCbz.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-A, 46-E og 18-E ble 32,5 g (94*) Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz fremstilt med utgangspunkt i Boc-D-Cha-Pro-OH.
^H-NMR
FD-MS, m/e 634 (M<+>)
Analyse for C35H47N506:
B) Fremstilling av D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-2HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23-A ble 9,5 g (101*) D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-2HCl fremstilt fra Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6E4C(NH)NHCbz.
FD-MS, m/e 534 (M<+>)
Analyse for C3o<H>4i<N>504Cl2<:>
C) Fremstilling av D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'2HCl. Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-F ble 0,74 g (62* D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'2HC1 fremstilt. HPLC, metode 2 ble benyttet i rensingen av dette materialet ved anvendelse av en gradient
på 98/2 A/B til 75/25 A/B i 2,5 timer.
i
ifi-NMR
FAB-MS, m/e 400,3 (M<+>)
Analyse for C22<H>33<N>502'2,1HC1:
Eksempel 52 HOOCCH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2"HCl (N-(2-karboksyetyl ) -D-cykloheksylalanyl-N-[ [4-(aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid.hydroklorid) A) Fremstilling av H00CCH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2'HC1.
D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz'2HCl (2,5 g, 4,1 mmol) ble suspendert i EtOAc (100 ml) under omrøring. En oppløsning av IM KHCO3 (100 ml) ble tilsatt til suspensjonen og blandingen ble omrørt inntil alt faststoff var oppløst. Blandingen ble overført til en skilletrakt og lagene separert. Det organiske laget ble tørket (MgS04), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 1,24 g av den fri base som et hvitt faststoff. Dette faststoff ble oppløst i EtOH (100 ml). Benzyl-akrylat (0,41 g, 2,6 mmol) ble tilsatt og oppløsningen ble omrørt i 2 dager ved romtemperatur. Så ble det til denne oppløsningen tilsatt vann (50 ml), IN HC1 (4,6 ml) og 5% PD/C (0,5 g) og den omrørte suspensjonen ble avgasset og plassert i en atmosfære av hydrogen. Etter 16 timer ble diatomejord tilsatt og oppslemmingen filtrert over en pute diatomejord. Filtratet ble konsentrert til et volum på 25 ml under vakuum og renset ved preparativ RP-HPLC, metode 2 ved bruk av en gradient på 98/2 A/B til 75/25 A/B i 2,5 timer. Fraksjoner inneholdende rent produkt (ifølge analytisk HPLC) ble oppsamlet, konsentrert og lyofilisert for å gi 0,27 g (23*) H00CC<H>2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6<H>4C(NH)NH2-HCl.
l-H-NMR
FAB-MS, m/e 472,4 (MH<+>)
Analyse for C25<H>37<N>504•1,9HC1:
Eksempel 53
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-piperidin-HCl
A) Fremstilling av Boc-4-(aminometyl)pyridin.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 34-A ble 19 g (87*) Boc-4-(aminometyl)-pyridin fremstilt fra 4-(aminometyl)pyridin.
1-H-NMR
B) Fremstilling av 4-BocNHCH2-N-Cbz-piperidin.
4-BocNHCH2-pyridin (10 g, 48 mmol) ble oppløst i etanol (280 ml) og 5* Rh/C (10 g) ble tilsatt. Suspensjonen ble ristet under en atmosfære av hydrogen (4,1 bar, 60 psi) ved 60° C over natten. Katalysatoren ble filtrert fra og oppløsningen ble konsentrert under vakuum for å gi 9,0 g av et grått faststoff. 3,2 g av dette faststoff ble oppløst i tetrahydro-
furan (75 ml) og en vandig oppløsning (75 ml) kaliumkarbonat (4,2 g, 30 mmol) ble tilsatt. Til denne omrørte oppløsningen ble det tilsatt benzylklorformat (2,3 ml, 16 mmol). Etter 15 minutter ble oppløsningen konsentrert under vakuum til omkring halvparten av det opprinnelige volum og så fortynnet med etylacetat. Den organiske fasen ble separert og vasket med saltvann, så tørket (MgS04), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 4,6 g (76*) hvitt faststoff.
FD-MS, m/e 349 (M<+>)
C) Fremstilling av 4-NH2CH2-N-Cbz-piperidin-HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23-A ble 3 g (84*) 4-NH2CH2-N-Cbz-piperidin-HCl fremstilt fra 4-BocNHCH2-N-Cbz-piperidin.
IR
^H-NMR
FD-MS, m/e 249 (MH<+>)
D) Fremstilling av N-(t-Bu02CCH2 )-N-Boc-D-Cha-Pro-OH.
N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH (13 g, 27 mmol) ble oppløst i etanol (750 ml) og Pt02 (13 g) ble tilsatt. Suspensjonen ble ristet under en atmosfære av hydrogen ved 4,1 bar (60 psi) ved 40°C i 16 timer. Katalysatoren ble så filtrert fra og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi 11,7 g (90*) hvitt skum.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 483 (M<+>)
Analyse for C25<H>42<N>20y:
E) Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-piperidin-HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 1-G og eksempel 46-D ble 1,1 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-piperidin-HCl fremstilt fra N-(5-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH og HC1•4-NH2CH2-N-Cbz-piperidin. Produktet ble renset ved RP-HPLC, metode 2, med gradient fra 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B) i løpet av 2 timer.
IR
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 423 (M<+>)
Analyse for C22<H>38<N>404•2HC1•1,5H20:
Eksempel 54
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-piperidin-HCl
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-piperidin-HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 52 ble 0,59 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-piperidin'HCl fremstilt fra 4-aminoetylpyridin. Produktet ble renset ved RP-HPLC, metode 2, gradient fra 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B) i løpet av 2 timer.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 437 (M<+>)
Analyse for C23H40N4O4 • 2 , 5HC1 • 1, 5H20: Eksempel 55
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-piperidin'HCl
A) Fremstilling av 4-hydroksypropyl-N-Cbz-piperidin.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 53-B ble 28 g (67*) 4-hydroksypropyl-N-Cbz-piperidin fremstilt fra 4-hydroksypropylpyridin.
3-H-NMR
B) Fremstilling av 4-(NH2CH2CH2CH2)-N-Cbz-piperidin'HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 30-B, 30-C og 30-D ble 7,3 g 4-(NH2CH2CH2CH2)-N-Cbz-piperidin'HC1 fremstilt fra 4-hydroksypropyl-N-Cbz-piperidin.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 276 (M<+>)
C) Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-piperidin'HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de "beskrevet i eksemplene 53-D og 53-E ble 0,39 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-piperidin-HCl fremstilt fra N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH og 4-aminopropyl-N-Cbz-piperidin"HC1. Produktet ble renset ved RP-HPLC, metode 2, gradient fra 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B) i løpet av 2 timer.
IR
<1->H-NMR
IS-MS, m/e 451,4 (MH<+>)
Analyse for C24<H>42<N>4<0>4•2HC1-H20:
Eksempel 56
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2l-amidinopiperidin'HCl
(N - (karb ok syrne tyl ) -D - cykloheksyl al anyl-N- [ [1- (aminoiminometyl )-heksahydropyridin-4-yl]metyl]-L-prolinamid.hydroklorid)
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-l-amidino-pyridin-HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 34-D, 34-A, 1-G (ved bruk av N-(t-Bu02CCH2)-N-
Boc-D-cha-Pro-OH), 18-E og 1-H, ble 0,35 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-l-amidinopiperidin-HCl fremstilt fra 4-BocNHCH2-piperidin. Det endelige produktet ble renset ved RP-HPLC, metode 2 (98/2 (A/B) gradient til 75/25 (A/B), 150 minutter).
IR
<i>H-NMR
FAB-MS, m/e 465 (MH<+>)
Analyse for C23<H>4o<N>604•2HC1:
Eksempel 57
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-l-amidinopiperidin-HCl
Fremstilling av HOgCCHg-D-Cha-Pro^-NHCHgCHg-l-amidino-piperidi 'HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 34-D, 23-A, 1-G (ved bruk av N-(t-(Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH), 18-E og 1-H ble 0,34 g H02CCH2-b-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-l-amidinopiperidin-HCl fremstilt fra 4-BocNHCH2-CH2-piperidin. Det endelige produktet ble renset ved RP-HPLC, metode 2 (98/2 (A/B) gradient til 75/25 (A/B), 150 minutter).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 479,4 (MH<+>)
Analyse for C24<H>42<N>604•2HC1: Eksempel 58
H02CCH2-D-CHa-Pro-4-NHCH2-3,4-dehydro-piperidin-HCl
A) Fremstilling av 4-BocNHCH2-N-metyl-pyridiniumjodid.
Til en omrørt oppløsning av 4-BocNHCE2-pyridin (20 g, 96 mmol) i acetonitril. (200 ml) ble det tilsatt jodmetan (8,9 ml, 144 mmol). Etter 16 timer ble oppløsningen konsentrert under vakuum for å gi 33,8 g (96*) av en tykk lys gul olje.
FD-MS, m/e 223,1 (M<+>)
B) Fremstilling av 4-BocNHCH2-N-Fmoc-3,4-dehydro-piperidin. Til en omrørt oppløsning av 4-BocNHCH2-N-metyl-pyridinium-jodid (7,7 g, 34 mmol) i 1,2-dikloretan (100 ml) ble det tilsatt 1,8-bis(dimetylamino)naftalen (1,5 g, 6,8 mmol) fulgt av 2-kloretylklorformat (5,3 g, 37 ml). Oppløsningen ble oppvarmet med tilbakeløpskjøling og etter 2 timer ble oppløsningen avkjølt til romtemperatur og oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum og resten ble flushet gjennom en kolonne silikagel med 20* etylacetat/heksan. De organiske oppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum og resten ble oppløst i metanol (300 ml) og oppvarmet med tilbakeløps-kjøling i 20 minutter. Mettet, vandig NaHC03 (100 ml) ble så tilsatt og oppløsningsmidlene ble fjernet under vakuum. Resten ble oppløst i vann (200 ml) og vasket to ganger med heksan, så mettet med fast NaCl og ekstrahert flere ganger med etylacetat. De kombinerte etylacetatekstraktene ble tørket (MgS04), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi en lys gul olje som ble oppløst i diklormetan (75 ml). Til denne omrørte oppløsningen ble det så tilsatt N,N-diisopropyletylamin (2,1 ml, 12,2 mmol), fulgt av 9-fluorenyl-metylklorformat (3,2 g, 12,2 mmol). Etter 2 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i etylacetat (250 ml) og vasket to ganger med IN sitronsyre, en gang med saltvann, to ganger med mettet, vandig NaHCOs og endelig en gang med saltvann. Den organiske fasen ble så tørket (MgS04), filtrert og konsentrert under vakuum og resten ble kromatografert over silikagelkolonne, eluert med en trinngradient på 5* etylacetat/heksan til 50* etylacetat/- heksan. De produktinneholdende fraksjonene (ifølge TLC) ble kombinert og konsentrert for å gi 4 g (27* hvitt faststoff.
IR
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 435 (M<+>)
C) Fremstilling av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-N-Fmoc-3,4-dehydro-piperidin.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 23-A og 1-G (ved bruk av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH), ble 2,5 g N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCE2-N-Fmoc-3,4-dehydro-piperidin fremstilt fra 4-Boc-NHCH2-N-Fmoc-3,4-dehydro-piperidin.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 799 (M<+>)
D) Fremstilling av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3,4-dehydro-piperidin.•
N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-N-4-NHCH2-N-Fmoc-3,4-dehydro-piperidin (1,5 g, 1,9 mmol) ble oppløst i morfolin (25 ml) og etter omrøring i 5 timer ble oppløsningsmidlet avdampet under vakuum. Resten ble oppløst i etylacetat og vasket to ganger med mettet, vandig NaHC03, tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble så oppløst i et lite volum kloroform og kromatografert over silikagel eluert med en gradient 5* til 10* A/B (A = 9:1 metanol/konsentrert NH4OH; B = kloroform). De produktinneholdende fraksjonene ifølge TLC, ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi 890 mg (82*) av et hvitt faststoff.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 576 (MH<+>).
E) Fremstilling av H02CCH2)-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3,4-dehydro-piperidin*HCl.
HCl-gass ble boblet gjennom en oppløsning av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3,4-dehydro-piperidin(820 mg, 1,4 mmol) og anisol (1 ml) i dioksan (25 ml) ved 0°C i 10 minutter. Etter omrøring i 12 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i vann (50 ml) og vasket to ganger med dietyleter. Den vandige fasen ble konsentrert til et volum på omkring 20 ml under vakuum og resten ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer). De produktinneholdende fraksjonene ifølge analytisk RP-HPLC, ble kombinert, delvis konsentrert under vakuum og lyofilisert for å gi 442 mg (68*) hvitt faststoff.
IR
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 423 (MH<+>)
Analyse for C22<H>36<N>4O4•1,5H2O: Eksempel 59
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-3,4-dehydro-piperidin-ECl
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2~3'4~denydro~ piperidin*HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 58 ble 73 mg H02CCH2 )-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-3,4-dehydro-piperidin'HCl fremstilt fra 4-BocNHCH2CH2-pyridin. Det endelige produktet ble renset ved RP-HPLC, metode 2 (98/"
(A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer).
IR
<1->H-NMR
IS-MS, m/e 435,2 (MH<+>)
Analyse for 023^^404 • 2 , 3HC1 • 3H20 :
Eksempel 60
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-3,4-dehydro-piperidin'HC1
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-3,4-dehydro-piperidin *HC1 .
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 58 ble 205 mg H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-3,4-dehydro-piperidin-HCl fremstilt fra 4-BocNHCH2CH2CH2-pyridin.
IR
1-H-NMR
IS-MS, m/e 449,2 (MH<+>)
Analyse for (^48:40^04 • 2 , 3HC1-H20 :
Eksempel 61
(N-[4 - [ ( aminoiminometyl)amino]butyl-l-[[(4aR,8aR )-decahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-l-prolinamid.trihydroklorid)
Rf-verdiene i dette eksempel ble bestemt ved silikagel-tynnsjiktskromatografi (Kiselgel 60 F-254) i de følgende systemer (v/v):
Å) N-metoksykarbonylfenetylamin.
Til en omrørt oppløsning av fenetylamin (75,2 ml, 0,6 mol) og trietylamin (83 ml, 0,6 mol) i THF (500 ml) ble det sakte tilsatt metylklorformat (46,2 ml, 0,6 mol) oppløst i THF (50 ml). Etter at reaksjonsblandingen var omrørt i ytterligere 1 time ved romtemperatur ble dietyleter (2 1) og IN HC1 (800 ml) tilsatt. Det organiske laget ble vasket med vann, tørket (MgS04), filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en klar olje av den rene forbindelsen ifølge tittelen (102 g, 95*). B) 2-metoksykarbonyl-DL-l ,2 ,3,4-tetrahydroisokinolin-l-karboksylsyre.
Til en oppløsning av N-metoksykarbonylfenetylamin (102 g, 0,57 mol) i trif luoreddiksyre (300 ml) ble det tilsatt glyoksylsyre (63 g, 0,68 mol) og blandingen ble oppvarmet til tilbakeløpskjølingstemperatur. Etter 4 timer med tilbake-løpskjøling ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og dietyleter (800 ml)/vann (100 ml) ble tilsatt til resten. Reaksjons-blandingens pH ble øket til 12 med 5N NaOH og det vandige laget separert. Til det vandige laget ble det tilsatt dietyleter (500 ml) og oppløsningen ble surgjort til pH 2,5 med 5N HC1. Det organiske laget ble separert, tørket (MgS04), filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en olje av den rene forbindelsen ifølge tittelen (107 g, 80*).
FAB-MS 236 (MH<+>).
C) 2-metoksykarbonyl-DL-l, 2 ,3,4- tetrahydroisokinol in-1-karboksylsyre-t-butylester.
Til en omrørt, avkjølt (0"C) oppløsning av 2-metoksykarbonyl-DL-l , 2 , 3 , 4-tetrahydroisokinol in-l-karboksylsyre (2) (105 g, 0,45 mol) i CH2C12 (200 ml) ble det tilsatt t-butanol (52 ml, 0,54 mol) og DCC (92 g, 0,45 mol). Etter 2 timer ved 0°C og 24 timer ved romtemperatur ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og etylacetat (800 ml)/IN NaHC03 (300 ml) ble tilsatt resten. Det organiske laget ble separert, vasket med vann, 1,5N sitronsyre og vann. Det organiske laget ble tørket (MgSC^), filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en olje av den rene forbindelsen i tittelen (106 g, 81*);
FAB-MS, m/e 292 (MH<+>)
TLC Rf (A) 0,61
Analyse for C15H21N04:
D) 2-metoksykarbony 1 - (IRS, 4aSR, 8aSR)-perhydroisokinolin-1-karboksylsyre-t-butylester.
En oppløsning av 2-metylkarbonyl-DL-l,2,3,4-tetrahydroisokinolin-l-karboksylsyre-t-butylester (105 g, 0,36 mol) i t-butanol (800 ml) ble redusert over 5* Rh/Al203 (52,5 g) ved 55 bar (800 psi) hydrogen i et høytrykksapparat ved 50°C i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en pute diatomejord og filtratet ble konsentrert under vakuum. Den resulterende oljen ble tørket for å gi den rene forbindelsen i tittelen (96,5 g, 90*).
FD-MS 298 (ME<+>)
TLC Rf (C) 0,63
E) 2-metoksykarbony 1 - (IRS, 4aRS,8aRS)-perhydroisokinolin-1-karboksylsyre-etylester.
Til en oppløsning av 2-metoksykarbonyl-(lRS,4aSR,8aSR)-perhydroisokinolin-l-karboksylsyre-t-butylester (81,2 g, 273 mmol) i EtOH (500 ml) ble det tilsatt natriumetoksyd (21* i etanol) (88,4 ml, 273 mmol) og reaksjonsblandingen ble oppvarmet med tilbakeløpskjøling (24 timer). Det organiske oppløsningsmiddel ble avdampet under vakuum, etylacetat (400 ml) og vann (100 ml) ble tilsatt til resten. Det organiske laget ble separert, vasket to ganger med vann, tørket (MgS04), filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en olje av den rene forbindelsen i tittelen (70 g, 95*).
FAB-MS 270 (MH<+>)
TLF Rf (A) 0,61
F) 2-metoksykarbonyl-(IRS, 4aRS, 8aRS)-perhydroisokinolin-1-karboksy1syre.
Til en oppløsning av produktet fra trinn E (70 g, 260 mmol) i THF (250 ml) ble det tilsatt 2N NaOH (156 ml, 312 mmol) og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur (30 timer). Det organiske oppløsningsmidlet ble avdampet under vakuum, dietyleter (400 ml) og vann (100 ml) ble tilsatt til resten. Det vandige laget ble separert og etylacetat (400 ml) ble tilsatt. pH til oppløsningen ble justert til 2,0 med 5N HC1. Det organiske laget ble tørket (MgS04), filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en klar olje. Den klare oljen ble krystallisert fra heksan (200 ml) for å gi den rene forbindelsen i tittelen (46,4 g, 74*).
FAB-MS 242 (MH<+>)
TLF Rf (A) 0,36
Analyse for C12<H>19NO4:
NMR-bestemmeIsen ble gjort ved homonukleær dekobling, COSY—, MHQC— og DEPT-eksperimenter. G) 2-Cbz-(IRS,4aRS,8aRS)-perhydroisokinolin-1-karboksylsyre. Til en omrørt oppløsning av produktet fra trinn F (46 g, 191 mmol) ble det ved romtemperatur i vannfri CH3CN (200 ml) under en inert atmosfære tilsatt en oppløsning av jod-trimetylsilan (62,4 ml, 440 mmol) i CH3CN (60 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 55° C i 30 minutter og avkjølt til romtemperatur. Reaksjonen ble bråstoppet med vann (100 ml), fulgt av natriumetabisulfitt (1 g). pH til reaksjonsblandingen ble øket til 10,0 med 5N NaOH og benzylklorformat (27,3 ml, 191 mmol) ble tilsatt dråpevis, mens pH ble holdt ved 10 med 2N NaOH. Etter at reaksjonsblandingen var omrørt i ytterligere 30 minutter ved romtemperatur, ble det organiske oppløsningsmidlet avdampet under vakuum og dietyleter (200 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen fikk stå ved romtemperatur (2 timer) og etylacetat (200 ml) ble tilsatt. Det vandige laget ble surgjort til pH 2,5 med 5N HC1; det organiske laget ble separert, tørket (MgS04), filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi den rene forbindelsen i tittelen som en olje (39,5 g, 65*).
FAB-MS, m/e 318 (MH<+>)
Analyse for C^gH23N04:
H) 2-Cbz-(IRS,4aRS,8aRS)-pernydroisokinolin-l-karbonyl-Pro-0-t-Bu.
Til en omrørt, avkjølt (0°C) oppløsning av produktet fra trinn G (39 g, 123 mmol) i DMF (200 ml) ble det tilsatt prolin-t-butylester (21,1 g, 123 mmol), 1-hydroksybenzotriazol (16,6 g, 123 mmol) og DCC (25,3 g, 123 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 timer ved 0°C og 24 timer ved romtemperatur. Reaksjonsutfellingen ble filtrert og filtratet konsentrert under vakuum til en olje. Oljen ble oppløst i EtOAc (200 ml) og vann (100 ml). Det organiske laget ble vasket i rekkefølge med IN NaHC03, vann, 1,5N sitronsyre og vann. Det organiske laget ble tørket (MgSO/j), filtrert og filtratet ble avdampet til et amorft faststoff av forbindelsen ifølge tittelen som en blanding av diastereomerer (527 g, 91*).
FAB-MS, m/e 471 (MH<+>)
I) 2-Cbz-(4aR,8aR)-perhydroisokinolin-l(R)-karbonyl-Pro-0H. Til en omrørt oppløsning av produktet fra trinn H (52,4 g, 111 mmol) i CH2C12 (20 ml) ble det tilsatt trifluoreddiksyre (70 ml) og anisol (5 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time og konsentrert under vakuum uten oppvarming. Resten ble fortynnet med dietyleter (400 ml), vann (100 ml) og pH til oppløsningen ble justert til 10,0 med 5N NaOH. Det vandige laget ble separert og etylacetat (300 ml) tilsatt. pH til oppløsningen ble justert til 2,5 med 5N HC1; det organiske laget separert, tørket (MgS04), filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en klar olje. Oljen ble oppløst i dietyleter (500 ml) og (L)-(-)-cx-metylbenzylamin ble tilsatt til oppløsningen. Oppløsningen ble hensatt ved romtemperatur (24 timer). Det resulterende faststoff ble filtrert, vasket med dietyleter og tørket. Faststoffet ble suspendert i etylacetat, vasket med 1,5N sitronsyre og vann. Det organiske laget ble tørket (MgS04), filtrert og filtratet avdampet for å gi forbindelsen i tittelen som en olje (20,2 g, 44*).
FAB-MS, m/e 415 (MH<+>)
[a]g° = 3,2° (C = 0,5, MeOH);
Analyse for C23<H>30<N>2O5:
J) 2-Cbz-(4aR,8aR)-perhydroisokinolin-l(RJ-karbonyl-Pro-NH-tCHg )4~NH-Boc.
I flaske 1 ble produktet fra trinn I (1,06 g, 2,55 mmol) oppløst i DMF (10 ml), avkjølt til -15°C og N-metylmorfolin (0,28 ml, 2,55 mmol) ble tilsatt, fulgt av isobutylklorformat (0,33 ml, 2,55 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved
—15"C i 2 minutter.
I flaske 2 ble N-Boc-1,4-diamino-butan (0,48 g, 2,55 mmol) oppløst i DMF (10 ml), avkjølt til 0°C og N-metylmorfolin (0,28 ml, 2,55 mmol) ble tilsatt til oppløsningen. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 2 minutter.
Innholdet i flaske 2 ble tilsatt til flaske 1 og reaksjonsblandingen ble omrørt i 4 timer (—15° C) og 24 timer ved romtemperatur. Til reaksjonsblandingen ble det tilsatt IN NaHCOs (1 ml) og reaksjonsoppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum for å gi en olje. Resten ble oppløst i EtOAc (200 ml) og vasket i rekkefølge med 1,5N sitronsyre, vann, IN NaHC03 (100 ml) og vann. Den organiske oppløsningen ble tørket (MgS04), filtrert og konsentrert til tørrhet under vakuum for å gi rå forbindelsen ifølge tittelen som et faststoff (1,47 g, 99*).
FAB-MS, m/e 585 (MH<+>)
TLC Rf (A) 0,70.
K) (4aR, 8aR) -perhydroi sokinol in-1 (R) -karbonyl -Pr o-Agm • 3HC1.
Til en omrørt oppløsning av produktet fra trinn J (1,4 g, 2,4 mmol) i CH2C12 (2 ml) ble det tilsatt trifluoreddiksyre (25 ml) og anisol (2,5 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 30 minutter og konsentrert under vakuum uten oppvarming. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med dietyleter (100 ml) og supernatanten dekantert. Den resulterende oljen ble finfordelt to ganger med dietyleter og tørket. Den tørkede oljen ble oppløst i THF (20 ml), trietylamin (0,66 ml, 4,8 mmol) og bis-Cbz-S-metylisotiourea (0,859 g, 2,4 mmol) og ble tilsatt til blandingen. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 48 timer. Det organiske oppløs-ningsmidlet ble avdampet under vakuum og resten ble oppløst i EtOAc (200 ml) og vasket i rekkefølge med IN NaHC03 (100 ml) og vann. Den organiske oppløsningen ble tørket (MgS04), filtrert og konsentrert til tørrhet under vakuum for å gi et rått faststoff (1,5 g, 79*).
TLF Rf (D) 0,33.
Det rå faststoff (1,5 g, 1,93 mmol) ble oppløst i etanol (50 ml), vann (10 ml) og IN HC1 (5,8 ml, 5,8 mmol) ble hydrogenert i nærvær av 5* Pd/C-katalysator (2,5 g) ved omgivelsestemperatur og trykk. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og filtratet konsentrert til en olje under vakuum. Resten ble oppløst i trifluoreddiksyre (10 ml), tioanisol (1,0 ml) og trifluormetansulfonsyre (1,0 ml) ble tilsatt til blandingen. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 0,5 timer og dietyleter (100 ml) ble tilsatt. Supernatanten ble dekantert og den resulterende oljen ble finfordelt to ganger med dietyleter og tørket under vakuum for å gi et rått faststoff (1,3 g). Det rå faststoff (1,3 g) ble oppløst i 0,05* HC1 og satt på en 5 x 25 cm kolonne Vydac C±q resin. En gradient med økende konsentrasjon av CH3CN (2* til 25*) ble benyttet for å eluere peptidet fra kolonnen. Fraksjoner ble oppsamlet på basis av analytisk RP-HPLC-profil og lyofilisert for å gi den rene forbindelsen i tittelen (0,139 g, 15*).
FAB-MS, m/e 393 (MH<+>)
Analyse for C20H36<N>6O2'5HC1'3H2°:
Beregnet: C 38,28
Funnet: C 38,34
Eksempel 62
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4NH2-HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-G (ved bruk av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH), 23-D og 58-E ble 0,17 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-Cfc^NH^HCl fremstilt fra 4-nitrobenzylamin.hydroklorid. Det endelige produktet ble renset ved RP-HPLC, metode 2 (98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer).
IR
<i>H-NMR
FAB-MS, m/e 431,3 (MH<+>)
Analyse for C23H34N402•2 , 2HC1•1,5H20:
Eksempel 63
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2<C>H2C6H4NH2-HCl
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2C6H4NH2-HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 62 ble 0,19 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2C6H4-NH2'HC1 fremstilt fra 4-nitrofenetylamin.hydroklorid. Det endelige produkt ble renset ved RP-HPLC, metode 2 (98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 445,3 (MH<+>)
Analyse for C24<H>36<N>404•2,2HC1•0,5H20:
Eksempel 64
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2'HCl
A) Fremstilling av 4-B0C2NCH2-3-F-C5H3NO2.
Til en omrørt oppløsning av 2-fluor-4-nitrotoluen (5 g, 32 mmol) i karbontetraklorid (160 ml) ble det tilsatt N—brom-succinimid (5,7 g, 32 mmol) fulgt av benzoylperoksyd (0,78 g, 3,2 mmol) og oppløsningen ble oppvarmet med tilbakeløps-kjøling. Etter 12 timer ble varmen fjernet og blandingen ble fortynnet med karbontetraklorid (100 ml) og vasket med vann. Den organiske fasen ble fortynnet med etylacetat (300 ml), tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i tetrahydrofuran (50 ml) og tilsatt en omrørt oppløsning av NaH (60* dispersjon i olje, 1,3 g, 32 mmol) og di-t-butyliminodikarboksylat (6,9 g, 32 mmol) i tetrahydrofuran (100 ml). Etter omrøring over natten ble oppløsnings-midlet fjernet under vakuum og resten ble kromatografert over silikagel, eluert med en trinngradient av heksan til 20* etylacetat/heksan. De produktinneholdende fraksjonene (ifølge TLC) ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi 3,9 g (33*) hvitt faststoff.
IR
<3->H-NMR
FD-MS, m/e 370 (M<+>)
Analyse for C^ E22^ 2°b: B) Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2'HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 23-A, 1-G (ved bruk av N-(t-Bu02CCH2 )-N-Boc-D-Cha-ProOH), 23-D og 58-E, ble 0,44 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2-HCl fremstilt. Det endelige produkt ble renset ved bruk av RP-HPLC, metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer).
IR
^H-NMR
FAB-MS, m/e 449,3 (MH<+>)
Analyse for C23<H>33<N>404F■1,3HC1:
Eksempel 65
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-amidinotiofen-HCl
(N-(karboksyrnetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[5-(aminoiminometyl )tiofen-2-yl]metyl]-L-prolinamid.hydroklorid)
Å) Fremstilling av 2-cyano-5-formyltiofen.
Til en flammetørket 3-halset, 1 1 rundbunnet flaske ble det tilsatt diisopropylamin (9 ml, 66 mmol) og THF (150 ml) under en nitrogenatmosfære. Flasken ble avkjølt til en indre temperatur på -78°C (tørris/aceton). Til denne omrørte oppløsningen ble det tilsatt n-butyllitium (1,6M i heksan, 41,3 ml, 66,1 mmol) via sprøyte og blandingen ble omrørt i 5 minutter. Til denne oppløsningen ble det tilsatt en oppløs-ning av 2-tiofenkarbonitril (6,55 g, 60 mmol) i THF (30 ml) i løpet av 10 minutter. Den resulterende klart røde oppløs-ningen ble omrørt ved -78°C i 45 minutter, ved hvilken tid dimetylformamid (23,3 ml, 300 mmol) ble tilsatt via sprøyte. Denne blandingen ble omrørt i 2 timer ved -78° C og så ble fast sitronsyre (omkring 10 g) tilsatt, fulgt av vann (60 ml). Flyktige oppløsningsmidler ble fjernet under vakuum og resten ble skilt mellom dietyleter og saltvann (hver 200 ml). Lag ble separert og den vandige fasen vasket en gang med dietyleter. De sammenslåtte, organiske fasene ble vasket med saltvann, tørket (MgSO^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi et gult faststoff som ble renset med silikagelkromatografi ved anvendelse av etylacetat/heksan-gradient (heksan til 50* etylacetat/heksan). Produktinneholdende fraksjoner ble oppsamlet og konsentrert under vakuum for å gi 6,9 g (84*) 2-cyano-5-formyl-tiofen.
^H-NMR
B) Fremstilling av 2-cyano-5-(hydroksymetyl)tiofen.
Til en oppløsning av 2-cyano-5-formyl-tiofen (6,9 g, 50 mmol) i EtOH (100 ml) ble det tilsatt natriumborhydrid (1,9 g, 50 mmol) i porsjoner. Etter 5 minutters omrøring ble oppløs-ningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble skilt mellom etylacetat og saltvann. Lagene ble separert og den organiske fasen ble vasket en gang med IM sitronsyre og en gang med saltvann og så tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 6,1 g (88*) 2-cyano-5-(hydroksymetyl)tiofen.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 140 (M<+>)
Analyse for C6H5N0S:
C) Fremstilling av 2-cyano-5-(brommetyl)tiofen.
Til en oppløsning av 2-cyano-5-(hydroksymetyl)tiofen (6,0 g, 43 mmol) i THF (50 ml) ble det tilsatt trifenylfosfin (15,7 g, 47 mmol) og karbontetrabromid (12,3 g, 47 mmol). Etter omrøring over natten under nitrogenatmosfaere ved romtemperatur ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i kloroform, så adsorbert på silikagel og lastet på en silikagelkolonne. Produktet ble eluert ved bruk av etylacetat/heksan-gradient. Fraksjonene inneholdende rent produkt (ifølge TLC) ble oppsamlet og konsentrert under vakuum for å gi 6,5 g (75*) 2-cyano-5-(brommetyl)tiofen.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 203 (M<+>)
Analyse for C6H4<N>SBr:
D) Fremstilling av 2-cyano-5-(aminometyl)tiofen*HC1.
Til en kald (0"C) oppløsning av 2-cyano-5-(brommetyl)tiofen (6,0 g, 30 mmol) i THF (50 ml) under nitrogen ble det tilsatt NaH (60* dispersjon i olje, 1,3, 33 mmol) i porsjoner. Til denne omrørte suspensjonen ble det tilsatt en oppløsning av di-t-butyliminodikarboksylat (7,1 g, 33 mmol) i THF (50 ml) i løpet av 30 minutter. Etter omrøring i 3 timer ble mettet, vandig ammoniumklorid (100 ml) tilsatt. Flyktige oppløsnings-midler ble så fjernet under vakuum og resten ble skilt mellom etylacetat og vann. Lagene ble separert og den organiske fasen ble vasket to ganger med saltvann, tørket (MgS04), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 10,5 g (100*) 2-cyano-5-Boc2NCH2-tiofen som ble krystallisert ved henstand. Dette faststoffet ble oppløst i EtOAc (200 ml) og avkjølt til 0°C ved anvendelse et is/vannbad. Vannfri HCl-gass ble boblet gjennom oppløsningen i 10 minutter og blandingen ble omrørt i 2 timer under oppvarming til romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum og den endelig faststoff ble suspendert i dietyleter og isolert ved filtrering. Det hvite faststoff ble tørket over natten under vakuum for å gi 5,2 g (100* ) 2-cyano-5-(aminometyl)tiofen*HCl.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 139 (M<+>)
Analyse for C6H7N2SC1:
E) Fremstilling av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-cyanotiofen.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1—G (ved bruk av t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-
Cha-ProOH), ble 4,6 g (93*) N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-cyanotiofen fremstilt fra 2-cyano-5-(aminometyl)-tiofen-HCl.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 602 (M<+>)
F) Fremstilling av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-C(NH)NHBoc-tiofen.
Hydrogensulfidgass ble boblet gjennom en oppløsning av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-cyanotiofen (1,5 g, 2,5 mmol) og trietylamin (4,5) i pyridin (45 ml) i 5 minutter og så ble karet forseglet og satt over natten. Neste morgen ble nitrogen boblet gjennom oppløsningen i 5 minutter og oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum. Resten ble oppløst i etylacetat og vasket en gang med vann og en gang med saltvann, så tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i toluen og konsentrert under vakuum to ganger.
Resten ble så oppløst i aceton (100 ml) og jodmetan (5 ml) ble tilsatt. Etter omrøring over natten ved romtemperatur ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum. Det resulterende gullfargede skum ble så oppløst i metanol (20 ml), NH20Ac (0,39 g, 5 mmol) ble tilsatt og oppløsningen ble oppvarmet med tilbakeløpskjøling. Etter 1 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i tetrahydrofuran (10 ml). Til denne omrørte oppløsningen ble det tilsatt en oppløsning av K2C03 (1,73 g, 12,5 mmol) i vann (10 ml), fulgt av di-t-butyldikarbonat (2,2 g, 10 mmol). Etter omrøring 1 time ble suspensjonen fortynnet med etylacetat (400 ml) og vasket med vann fulgt av saltvann. Den organiske fasen ble konsentrert under vakuum og kromatografert over silikagel eluert med en trinngradient av 10* etylacetat/heksan til 75* etylacetat/heksan. De produktinneholdende fraksjonene ifølge TLC ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi 1,1 g (61*) hvitt skum.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 720 (M<+>)
Analyse for Cs^Hsy^OgS:
G) Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-amidino-tiofen*HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 58-E ble 500 mg H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-amidinotiofen-HCl fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC, metode 21 (98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer).
IR
3-H-NMR
FAB-MS, m/e 464,2 (MH<+>)
Analyse for C22<H>33<N>5<0>4S-2HC1'H20:
Eksempel 66
H02CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-amidinopyridin-HCl
(N-(karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[5-(aminoiminometyl )pyridin-2-yl]metyl]-L-prolinamid.hydrokiorid)
Å) Fremstilling av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-cyanopyridin.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 64-A, 23-A og 1-G (ved bruk av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH), ble 4,4 g N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-cyanopyridin fremstilt fra 2-metyl-5-cyanopyridin.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 597 (M<+>)
B) Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-amidino-pyridin*HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 65-F og 65-G ble 130 mg H02CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-amidinopyridin-HCl fremstilt fra N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-cyanopyridin. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer).
IR
<1>H-NMR
FAB-MS, m/e 459,3 (MH<+>) Eksempel 67
H02CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-amidinopiperidin-HCl
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-amidino-piperidin'HCl.
N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-cyanopyridin (1,2 g, 2 mmol) ble utviklet ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 23-A, 23-B og 1-B. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer). Fraksjonene inneholdende det mindre produkt ifølge analytisk RP-HPLC ble kombinert, delvis konsentrert under vakuum og lyofilisert for å gi 93 mg (9*) av et blekt, grønt faststoff.
IR
1-H-NMR
IS-MS, m/e 465,5 (MH<+>)
Eksempel 68
H02CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-amidino-5,6-dehydropiperidin*HCl
(N-(karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[5-(aminoiminometyl)-!,2,3, 4 -1 e t r ahydr opyr i din-2-yl]metyl] -L-prol in-amid .hydroklorid)
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-amidino-5,6-dehydro-piperidin*HCl.
N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-cyanopyridin (1,2 g, 2 mmol) ble utviklet ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 23-A, 23-B og 1-B. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer). Fraksjonene inneholdende hoved-produktet ifølge analytisk RP-HPLC ble kombinert, delvis konsentrert og lyofilisert for å gi 422 mg (39*) hvitt faststoff.
IR
<1>H-NMR
IS-MS, m/e 463,3 (MH<+>)
Analyse for C23<H>38<N>604•2,9HC1•2H20:
Eksempel 69
H02CCH2-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6-amidino-pyradazin-3HC1
(N-(karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[6-(aminoiminometyl )pyridazin-3-yl]metyl]-L-prolinamid.trihydroklorid)
Å) Fremstilling av 3-metyl-6-cyanopyridazin.
Til en omrørt oppløsning av 3-metylpyridazin (11 g, 118 mmol) i diklormetan (200 ml) ble det tilsatt A1C13 (0,05 g), fulgt av trimetylsilylcyanid (21 g, 211 mmol). Etter 20 minutter ble en oppløsning av p-toluensulfonylklorid (38 g, 201 mmol) i diklormetan (50 ml) tilsatt via tilsetningstrakt og oppløsningen ble omrørt over natten. Neste morgen ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble suspendert i etanol med omrøring i 15 minutter og så filtrert for å gi et hvitt faststoff. Faststoffet ble oppløst i tetrahydrofuran (200 ml) og til denne omrørte oppløsningen ble det tilsatt 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-en (16 ml, 105 mmol). Etter 1 time ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble skilt mellom heksan og mettet, vandig NH4CI. Fasene ble separert og den vandige fasen ble gjort basisk med fast Na2C03. Blandingen ble så ekstrahert tre ganger med etylacetat. De sammenslåtte etylacetatfåsene ble så tørket (MgSC^), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 9 g (64*) hvitt faststoff.
IR
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 119,1 (M<+>)
B) Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6-amidino-pyridazin*HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 66, ble 90 mg H02CCH2 )-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6-amidinopyridazin'HCl fremstilt fra 3-metyl-6-cyanopyridazin. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2. (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 460,3 (MH<+>)
Analyse for C22<H>33<N>704'3HC1'2H20:
Eksempel 70
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-l-amidino-3,4-dehydropiperidin'HCl
(N-(karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[1-(aminoiminometyl)-l,2,3, 6 -1 e t rahydr opy r i din-4-yl]metyl] -L-prol in-amid .hydr oki or id )
Å) Fremstilling av N.M<T->Bocg-tiourea.
Til en omrørt suspensjon av NaH (60* oljedispersjon, 9,4 g, 234 mmol) i tetrahydrofuran (500 ml) ved 0°C ble det tilsatt tiourea (4,0 g, 52 mmol). Etter 30 minutter ble kjølebadet fjernet og reaksjonsblandingen ble omrørt i 30 minutter ved romtemperatur. Igjen ble karet avkjølt til 0°C og en oppløsning av di-t-butyldikarbonat (25 g, 115 mmol) i tetrahydrofuran (100 ml) ble tilsatt via tilsetningstrakt. Etter omrøring i 30 minutter ved 0°C og ytterligere 2 timer ved romtemperatur ble mettet, vandig NaHC03 tilsatt. Oppløsningen ble så konsentrert til omkring halvparten av det opprinnelige volum under vakuum og etylacetat ble tilsatt. Den organiske fasen ble så vasket med mettet, vandig NaHC03, fulgt av saltvann og så tørket med MgS04, filtrert og konsentrert for å gi 11,9 g (83*) hvitt faststoff.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 276 (M<+>)
Analyse for ChH2qN2°4<S:>B) Fremstilling av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-l-(N,N'-Boc2-amidino)-3,4-dehydro-piperidin.
Til en omrørt oppløsning av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3,4-dehydro-piperidin (0,6 g, 1 mmol) og trietylamin (0,35 g, 3,4 mmol) i dimetylformamid (10 ml) ble det tilsatt N,N'-Boc2-tiourea (0,28 g, 1 mmol), fulgt av HgCl2 (0,28 g, 1 mmol). Etter 4 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i etylacetat og vasket to ganger med saltvann. Den organiske fasen ble tørket med MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum. Produktet ble renset ved kromatografi over silikagel, eluert med 20* etylacetat/- heksan til 75* etylacetat/heksan. De produktinneholdende fraksjonene ifølge TLC ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi 800 mg (94*) hvitt skum.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 820 (MH<+>)
Analyse for C42<H>7q<N>5<0>1q<:>
C) Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-l-amidino-3,4-dehydro-piperidin*HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 58-E ble 0,22 g (55*) H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-l-amidino-3,4-dehydro-piperidin'HCl fremstilt fra N-(t-Bu02CCH2 )-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-l-(N,N'-Boc2-amidino)-3,4-dehydro-piperidin. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 463,3 (MH<+>)
Analyse for C23<H>38<N>604•2,2HC1•2H20: Eksempel 71
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-benzamidin-HCl
(N-(karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[4 -(aminoiminometyl )-2-fluorfenyl]metyl]-L-prolinamid.hydrokiorid)
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-benzamidin-HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet 1 eksempel 66, ble 0,27 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-benzamidin*HCl fremstilt fra 3-F-4-Me-benzonitril. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 2 timer).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 476,3 (MH<+>)
Analyse for C24H34N504F-2HC1* 1,5H20:
Eksempel 72
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3,5-F2-benzamidin'HCl
(N-(karboksymetyl )- D-cykloheksylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl )-2,6-difluorfenyl]metyl]-L-prolinamid.hydroklorid)
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3,5-F2-benz-amidin-HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 66, ble 0,28 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3,5-F2-benzamidin'HC1 fremstilt fra 3 , 5-F2-4-Me-benzonitril. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 150 minutter).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 494,2 (MH<+>)
Analyse for C24<H>33<N>504F2•2HC1•1,5H20:
Eksempel 73
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-aminopyridin-HCl
Å) Fremstilling av 4-metyl-2-ftalimidopyridin.
Til en omrørt oppløsning av 4-metyl-2-aminopyridin (50 g, 460 mmol) i eddiksyre (1 1) ble det tilsatt ftalsyreanhydrid (68 g, 460 mmol) og reaksjonsblandingen ble oppvarmet med tilbakeløpskjøling. Etter 12 timer ble eddiksyreanhydrid (43 ml, 460 mmol) tilsatt og oppløsningen ble omrørt videre med tilbakeløpskjøling i ytterligere 48 timer. Oppløsningsmidlet ble så fjernet under vakuum og resten ble suspendert i toluen og konsentrert under vakuum to ganger. Faststoffet ble så suspendert i etylacetat med kraftig omrøring og filtrert. Etter gjentagelse av etylacetat-vaskeprosedyren ble faststoffet tørket over natten under vakuum for å gi 46,6 g (42%) hvitt faststoff.
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 238 (M<+>)
Analyse for C14H^qN202:
<B>) Fremstilling av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-ftalimidopyr idin.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 64-A, 23-A og 1-G (ved anvendelse av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH), ble 2,4 g N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NBXH2-2-ftalimidopyridin fremstilt fra 4-metyl-2-ftalimidopyridin.
IR
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 717,7 (M<+>)
C) Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-amino-pyridin-HCl.
Til en omrørt oppløsning av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-ftalimidopyridin (1,6 g, 2,2 mmol) i etanol (25 ml) ble det tilsatt hydrazinhydrat (0,52 ml, 10,4 mmol). Etter 1 time ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i etylacetat og konsentrert under vakuum to ganger. Resten ble innarbeidet en prosedyre hovedsakelig ekvivalent med den beskrevet i eksempel 58-E for å gi 380 mg (37*) hvitt faststoff. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 150 minutter).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 432,3 (MH<+>)
Analyse for C22<H>33<N>504•2,1HC1'H20:
Eksempel 74
H02CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-aminopyridin'HCl
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-aminopyridin"HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 73 ble 0,88 g H02CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-amino-pyridin'HCl fremstilt fra 5-metyl-2-aminopyridin. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 150 minutter ).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 432,3 (MH<+>)
Analyse for C22<H>33<N>504•2HC1-H20:
Eksempel 75
H02CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2-aminopyridln-HCl
A) Fremstilling av 5-Me-2-Boc2N-pyridin. Til en omrørt oppløsning av 5-metyl-2-aminopyridin (10,5 g, 100 mmol) i diklormetan (200 ml) ved 0°C ble det tilsatt N,N-diisopropyletylamin (25,8 g, 200 mmol), fulgt av di-t-butyldikarbonat (55 g, 250 mmol) og til sist 4-(N,N-dimetyl-amino)pyridin (12,2 g, 100 mmol). Kjølebadet ble fjernet og oppløsningen ble fortsatt omrørt over natten. Blandingen ble fortynnet med etylacetat (600 ml) og vasket tre ganger med mettet, vandig NH4CI, en gang med saltvann, to ganger med mettet, vandig NaHC03 og en gang igjen med saltvann. Den organiske fasen ble så tørket (MgSC^), filtrert, konsentrert under vakuum og kromatografert over silikagel eluert med 10* etylacetat/heksan til 75* etylacetat/heksan. Fraksjonene inneholdende produkt ifølge TLC, ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi 12,8 g (42*) hvitt faststoff.
IR
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 308 (M<+>)
Analyse for C-^H^NgC^:
B) Fremstilling av 5-BrCH2-2-Boc2N-pyridin.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 64-A ble omkring 11,6 g 5-BrCH2-2-Boc2N-pyridin (som var kontaminert med startmaterialet) fremstilt fra 5-Me-2-Boc2N-pyridin.
^H-NMR
FD-MS, m/e 386,3 (M<+>)
Analyse for C-^B^s^C^Br:
C) Fremstilling av 5-NCCH2-2-Boc2N-pyridin.
Til en omrørt oppløsning av svakt urent 5-BrCH2~2-Boc2N-pyridin (9,7 g, 25 mmol) i dimetylformamid (150 ml) ble det tilsatt 18-krone-6 (1,32 g, 5 mmol), fulgt av KCN (1,95 g, 30 mmol). Etter omrøring i 6 timer ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble kromatografert over silikagel, eluert med en trinngradient av heksan til 40* etylacetat/- heksan. De produktinneholdende fraksjonene ifølge TLC, ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi 2,6 g (31* over 2 trinn) hvitt faststoff.
IR
^H-NMR
FD-MS, m/e 333,4 (M<+>)
Analyse for C17H23N3O4:
D) Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2-amino-pyridi *HC1.
Til en omrørt oppløsning av 5-NCCH2-2-Boc2N-pyridin (2,5 g, 7,5 mmol) i metanol (150 ml) ble det tilsatt C0CI2 (0,97 g, 7,5 mmol) og vann (0,81 g, 45 mmol). Etter 5 minutter ble NaBH4 (2,84 g, 75 mmol) tilsatt i små porsjoner i løpet av 15 minutter. Etter ytterligere 15 minutter ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble oppløst i konsentrert, vandig NH4OH og ekstrahert flere ganger med etylacetat. De kombinerte etylacetatekstraktene ble tørket med MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum.
Så, ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-A og 73-C ble resten opparbeidet for å gi 1,2 g (33*) H02CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2-amino-pyridin-HCl. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 60/40 (A/B), 150 minutter).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 446,3 (MH<+>)
HRMS (FAB), m/e Beregnet for C23<H>36<N>504: 446,2767
Funnet: 446,2769
Eksempel 76
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-2-aminopyridin-HCl
A) Fremstilling av 4-BocNHCH2CH2-2-CN-pyridin.
Til en oppløsning av 4-BocNHCH2CH2-pyridin (2,22 g, 10 mmol)
i aceton (50 ml) ble det tilsatt en oppløsning av m-klor-perbenzosyre (5,2 g, 30 mmol) i aceton (50 ml) via en
tilsetningstrakt i løpet av 10 minutter. Etter omrøring over natten ble oppløsningsmidlet fjernet under vakuum og resten ble skilt mellom vann (100 ml) og dietyleter (100 ml). Den organiske fasen ble separert og ekstrahert tre ganger med vann. Den kombinerte, vandige fasen ble så mettet med fast NaCl og ekstrahert tre ganer med diklormetan (100 ml). De kombinerte diklormetanekstraktene ble vasket en gang med saltvann, tørket med Na£S04, filtrert og konsentrert til et lite volum under vakuum og så ble dietyleter tilsatt. Den hvite utfellingen (2,0 g) ble filtrert og tørket under vakuum.
Halvparten av det isolerte faststoff (4,2 mmol) ble oppløst i diklormetan (10 ml) og til denne omrørte oppløsningen ble det tilsatt trimetylsilylcyanid (0,84 ml, 6,3 mmol), fulgt av N,N-dimetylkarbamoylklorid (0,58 ml, 6,3 mmol). Etter omrøring over natten ble IM vandig KHCO3 (1 ml) tilsatt sakte og blandingen ble skilt mellom etylacetat og vann. Den organiske fasen ble så vasket to ganger med saltvann, tørket med MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 0,6 g (58*) av en ravgul olje som krystalliserte ved henstand.
IR
<!>h-NMR
FD-MS, m/e 247 (M<+>)
Analyse for C13<H>17<N>3<O>2<:>
B) Fremstilling av 4-BocNHCH2CH2-2-CbzNH-pyridin.
Til en omrørt oppløsning av 4-BocNHCH2CH2-2-CN-pyridin (0,5 g, 2 mmol) i metanol (2,4 ml) ble det tilsatt 5N NaOH (1,6 ml, 8 mmol) og oppløsningen ble oppvarmet med tilbakeløps-kjøling. Etter 24 timer ble oppløsningen avkjølt til romtemperatur og omrørt i ytterligere 48 timer. pH ble justert til 7 med IN HC1 og oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum.
Resten ble suspendert i toluen (50 ml) og oppvarmet med tilbakeløpskjøling. Til denne omrørte oppløsningen ble det i rekkefølge tilsatt trietylamin (0,36 ml, 2,6 mmol), benzyl-alkohol (0,27 ml, 2,6 mmol) og difenylfosforylazid (0,72 g, 2,6 mmol). Etter omrøring med tilbakeløpskjøling over natten ble oppløsningen avkjølt og så fortynnet med etylacetat (200 ml) og vasket to ganger med mettet, vandig NH4CI og to ganger med saltvann. Den organiske fasen ble tørket med MgS04, filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble så kromatografert over silikagel eluert med en trinngradient av heksan til 50* etylacetat/heksan. De produktinneholdende fraksjonene ifølge TLC, ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi 0,37 g (50*) hvitt faststoff.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 371,2 (M<+>)
Analyse for C20<H>25<N>3O4:
C) Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-2-amino-pyridi-HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 23-A, 1-G (ved anvendelse av N-(t-BuC^CCEtø )-N-Boc-D-Cha-ProOH), 23-D og 58-E, ble 48 mg H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-2-aminopyridin-HCl fremstilt fra 4-BocNHCH2CH2-2-CbzNH-pyridin. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 150 minutter).
-'-H-NMR
FAB-MS, m/e 446,4 (MH<+>)
Analyse for 0^35^04 • 1, 5HC1 'H20: Eksempel 77
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-F-anilin-HCl
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-F-anilin-HCl
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 64 ble 0,55 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-F-anilin-HCl fremstilt fra 3-F-4-N02-toluen. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 60/40 (A/B), 180 minutter).
IR
l-H-NMR
FAB-MS, m/e 449,3 (MH<+>)
Analyse for C^^s^C^F*0 , 9HC1 'H20 :
Eksempel 78
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6<H>4CH2NH2'HCl
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2-HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 10 ved bruk av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH istedenfor Boc-D-Phe-ProOH, ble 0,53 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2-HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 150 minutter).
IR
1-H-NMR
FD-MS, m/e 445,4 (MH<+>)
Analyse for C24<H>36<N>404•2,2HC1•0,5H20:
Eksempel 79
H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6<H>10CH2NH2-HCl
Fremstilling av H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6<H>1oCH2NH2"HC1•
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 12 ved bruk av N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH istedenfor Boc-D-Phe-ProOH ble 0,04 g H02CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H10CH2NH2-HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B) til 70/30 (A/B), 150 minutter).
1-H-NMR
FD-MS, m/e 451 (M<+>)-
Analyse for C24H42N404•2,7HC1•0,5H20:
Eksempel 80
EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6<H>4C(NH)NH2'HCl
(N - ( etyl sulfonyl)-D-cykloheksylalany1-N-[[4-(aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid.hydrokiorid)
Fremstilling av EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4C(NH)NH2-HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 18 ved bruk av EtS02-D-Cha-ProOH istedenfor Cbz-D-1-Piq-ProOH ble 3,6 g EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4C(NH)NH2'HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 90/10 (A/B) til 50/50 (A/B), 180 minutter).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 492,3 (MH<+>)
Analyse for C24<H>37<N>504S"HCl:
Eksempel 81
EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6<H>4CH2NH2-HCl
Fremstilling av EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2-HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 10 ved bruk av EtS02-D-Phe-ProOH, ble EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2CcfH4CH2NH2-HCl fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 90/10 (A/B) til 50/50 (A/B), 180 minutter ).
IR
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 479,4 (MH<+>)
Analyse for C24<H>38<N>404S'HC1-H20:
Eksempel 82
EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-c6<H>3NH2-HCl
Fremstilling av EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2-HCl.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 64 ved bruk av EtS02-D-Cha-ProOH istedenfor N(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH, ble 0,53 g EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2-C6H3NH2-HC1 fremstilt. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 90/10 (A/B) til 50/50 (A/B), 180 minutter).
IR
<1>H-NMR
FAB-MS, m/e 483,3 (MH<+>)
Analyse for C23<H>35N404SF•1,1HC1•0,5H20:
Eksempel 83
EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-aminopyridin-HCl
Fremstilling av EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-aminopyridin*HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 73 ved bruk av EtS02-D-Cha-ProOH istedenfor N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH, ble 0,22 g EtS02-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-aminopyridin-HCl fremstilt fra 4-metyl-2-amino-pyridin. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 90/10 (A/B) til 50/50 (A/B), 180 minutter).
^H-NMR
FAB-MS, m/e 466,4 (MH<+>)
Analyse for C22<H>35<N>504S-1,1HC1:
Eksempel 84
EtS02-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-aminopyridin-HCl
Fremstilling av EtS02-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-aminopyridin-HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 73 ved bruk av EtS02-D-Cha-ProOH istedenfor N-(t-Bu02CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH, ble 0,24 g EtS02-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-aminopyridin-HCl fremstilt fra 5-metyl-2-amino-pyridin. Produktet ble renset ved RP-HPLC (metode 2, 90/10 (A/B) til 50/50 (A/B), 180 minutter).
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 466,4 (MH<+>)
Analyse for C22<H>35<N>504S•1,15HC1:
Eksempel 85 H00CCH2CH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'HCl (N-( 3-karboksypropyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid.hydroklorid) A) Fremstilling av Cbz-Me00CCH=CHCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2c6H4-C(NH)NHCbz.
Til en oppløsning av D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-2HC1 (2,5 g, 4,1 mmol) i DMF (50 ml) ble det tilsatt N,N-diisopropyletylamin (2,2 ml, 12,2 mmol) og metyl-3-bromkrotonat (0,95 g, 4,5 mmol). Etter omrøring i 48 timer ble Cbz-Cl (0,7 ml, 5 mmol) og ytterligere N,N-diisopropyletylamin (0,85 ml, 5 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 16 timers omrøring ble flyktige stoffer fjernet under vakuum. Resten ble skilt mellom etylacetat (100 ml) og mettet, vandig ammoniumklorid (100 ml). Lagene ble separert og den organiske fasen ble vasket en gang med mettet, vandig ammoniumklorid (50 ml), to ganger med mettet, vandig natriumbikarbonat (50 ml) og to ganger med saltvann (50 ml). Den organiske fasen ble tørket (MgS04), filtrert og konsentrert under vakuum. Den rå resten ble renset ved flashkromatografi (etylacetat/heksan-gradient) for å gi 660 mg (22*) hvitt skum.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 766 (M<+>)
Analyse for C43H5iN50g: B) Fremstilling av H00CCH2CH2CH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2-HC1.
Til en oppløsning av Cbz-MeOOCCH=CHCH2-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4-C(NH)NHCbz (0,5 g, 0,65 mmol) i etanol (5 ml) ble det tilsatt IN natriumhydroksyd (0,65 ml). Etter omrøring i 5 timer ved romtemperatur ble IN HC1 (3 ml), 10* Pd/C (0,5 g), H20 (15 ml) og etanol (25 ml) tilsatt. Den omrørte suspensjonen ble avgasset under vakuum, så plassert under en atmosfære av hydrogen i 18 timer. Diatomejord ble tilsatt og oppslemmingen ble filtrert. Filtratet ble konsentrert under vakuum og renset ved RP-HPLC (metode 2, 98/2 (A/B), gradient til 72/25 (A/B), i løpet av 150 minutter). Fraksjoner inneholdende rent produkt ble oppsamlet og lyofilisert for å gi 46 mg (13*).
l-H-NMR
FAB-MS, m/e 486,3 (MH<+>)
Analyse for C26<H>3g<N>504•2,1HC1:
Eksempel 86
HOOCCH2-D-Chg-Pro-P-NHCH2C6<H>4C(NH)NH2-HC1
(N -karboksymetyl)-D-cykloheksylglycyl-N-[[4-(aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid.hydroklorid)
A) Fremstilling av D-cykloheksylglycin.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 53-B ble 16,1 g (16*) D-cykloheksylglycin fremstilt med utgangspunkt i D-fenylglycin.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 117 (M<+>)
Analyse for CgH-^NO;?:
B) Fremstilling av Boc-D-cykloheksylglycin.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 17-A (ved bruk av di-tert-butyldikarbonat), ble 22 g (90*) Boc-D-cykloheksylglycin fremstilt.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 258 (M<+>)
Analyse for C-^H^NO^
C) Fremstilling av Boc-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 20,5 g (76*) Boc-Pro-p-NHCH2-C6E4C(NH)NHCbz fremstilt fra Boc-Pro-OH og NH2CH2C6H4C(NH)NHCbz'2HCl.
^H-NMR
FD-MS, m/e 481 (M<+>)
Analyse for C2£,H32N405:
D) Fremstilling av Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz*2HCl.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23-A, ble 18,4 g (100*) Pro-p-NHCH2C6H4-C(NH)NHCbz-2HCl fremstilt.
1-H-NMR
FD-MS, m/e 381 (M<+>)
Analyse for C2^H2(,N403C12:
E) Fremstilling av Boc-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G, ble 3,6 g (97*) Boc-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz fremstilt.
<i>H-NMR
FD-MS, m/e 619 (M<+>)
Analyse for C34H45N5O6: F) Fremstilling av Cbz-t-Bu00CCH2-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)-NHCbz.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 23-A og 85-A (ved bruk av t-butylbromacetat og benzylklorformat), ble 1,6 g (45*) N-Cbz-N-(t-BuOOCCH2)-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NBCbz fremstilt.
1-E-NMR
FD-MS, m/e 769 (M<+>)
Analyse for C43H53<N>5O8:
G) Fremstilling av H00CCH2-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 23-A (ved bruk av dioksan som oppløsningsmiddel) og 18-F, ble 411 mg (61*) E00CCE2-D-Chg-Pro-p-NECE2C6E4C(NE)-NE2'EC1 fremstilt.
<1>H-NMR
FAB-MS, m/e 444,3 (ME<+>)
Analyse for C23H33<N>5<0>4•2,5EC1:
Eksempel 87 HOOCCH2-D-hPhe-Pro-p-NHCH2C6<H>4C(NH)NH2-HCl (N-(karboksymetyl)-D-homofenylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl)-fenyl]metyl]-L-prolinamid.hydrokiorid) A) Fremstilling av HOOCCH2-D-hPhe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2'HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 86, ble 335 mg HOOCCH2-D-hPHe-Pro-p-NHCH2C6H4C-(NH)NH2'HC1 fremstilt med utgangspunkt i Boc-D-hPhe-OH.
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 466,3 (MH<+>)
Analyse for C25<H>31<N>504•2,1HC1-H20:
Eksempel 88
HOOCCH2-D-hCha-Pro-p-NHCH2C6<H>4C(NE)NH2-HCl
(N-(karboksymetyl)-D-homocykloheksylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-L-prolinamid.hydrokiorid)
A) Fremstilling av Boc-D-hCha-OH.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 53-D ble 5,1 g (100*) Boc-D-hCha-OH fremstilt fra Boc-D-hPhe-OH.
<1>H-NMR
FD-MS, m/e 240 (M<+>)
Analyse for C15HJ27NO4:
B) Fremstilling av H00CCH2-D-hCha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2*HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 86 ble 135 mg HOOCCH2-D-hCha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2-HC1 fremstilt.
1-H-NMR
FAB-MS, m/e 472,3 (MH<+>)
Analyse for C25H37N504 ■ 2 , 2HC1 • 0 , 5H20: Eksempel 89
H00CCH2-Gly-N-C6H5CH2CH2Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'HCl
A) Fremstilling av H00CCH2-Gly-N-C6H5CH2CH2Gly-p-NHCH2C6H4C-(NH)NH2-HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-G, 1-D, 1-G, 23-A, 85-A og 18-F ble 365 mg N-H0 0CCH2-Gly-N-C6H5CH2CH2-Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'HC1 fremstilt.
<1->H-NMR
FAB-MS, m/e 426,2 (MH<+>)
Analyse for C22<H>27<N>504•2,2HC1•1,5H20:
Eksempel 90
(C2<H>5)2CHC0-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2•HC1
A) Fremstilling av Boc-(-Y-0Bn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz. Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 1-G ble 2,7 g (64*) Boc-(-y-0Bn )-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz fremstilt med utgangspunkt i Boc-(-y-0Bn)-Glu-0H og Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz•2HC1.
FD-MS, m/e 700 (M<+>)
Analyse for C3<gH>45<N>508:
B) Fremstilling av (-y-OBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-2HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 23-A ble 2,38 g (98* (-y-OBn )-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz•2HC1 fremstilt.
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 600 (M<+>)
Analyse for C33H39N5<O>6CI2: C) Fremstilling av (C2H5 )2CHCO-(-y-OBn )-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4-C(NH)NHCbz.
Til en omrørt blanding av (-y-OBn )-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH-2HC1 (1,3 g, 2 mmol) i THF/H20 (hver 50 ml) ble det tilsatt K2C03 (1,38 g, 10 mmol) og 2-etylbutyrylklorid (0,3 g, 2,2 mmol). Etter omrøring i 10 minutter ble de flyktige forbindelser fjernet under vakuum. Den resulterende resten ble skilt mellom vann og etylacetat (hver 100 ml). Lag ble separert og den organiske fasen ble vasket to ganger hver med mettet, vandig ammoniumklorid og saltvann, tørket (MgS04), filtrert og konsentrert under vakuum for å gi 1,45 g (100*).
<1->H-NMR
FD-MS, m/e 698 (M<+>)
Analyse for C^ qH^ H^ O^ :
D) Fremstilling av (C2H52CHCO-Glu-Pro-p-jjHCH2C5H4C(NH)-NH2'HC1.
Ved en fremgangsmåte hovedsakelig ekvivalent til den beskrevet i eksempel 18-F ble 425 mg (47*) (C2H5)2CH0C0-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'HCl fremstilt. HPLC, metode 2 (gradient 98/2 (A/B) til 75/25 (A/B) i løpet av 150 minutter) ble benyttet for å rense produktet.
<1->H-NMR
FAB-MS, m/e 474,3 (MH<+>)
Analyse for C24H35N505•1,5HC1'1,1H20:
Eksempel 91
(C2H5)2CHCO-Met(02)-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2'HC1
A) Fremstilling av (C2H5)2CHC0-Met(02)-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)-NH2'HC1.
Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksempel 90 ble 530 mg (C2H5)2<C>HC0-Met(02)-Pro-p-NHCH2C6<H>4-C(NH)NH2'HC1 fremstilt.
<1>H-NMR
FAB-MS, m/e 508,2 (MH<+>)
Analyse for C24<H>37<N>505S■1,1HC1:
Eksempel 92
MeS02CH2C0-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6E4C(NH)NH2-HCl
(N-(metyl sul f onyl acetyl )-L-cykloheksylalanyl-N-[ [4- (aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid.hydroklorid)
Fremstilling av MeS02CH2C0-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-HCl. Ved fremgangsmåter hovedsakelig ekvivalente til de beskrevet i eksemplene 1-G og 18-F hie 550 mg MeS02CH2C0-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-HC1 fremstilt.
FAB-MS, m/e 520,5 (MH<+>)
Analyse for C25<H>37N5<0>5S•1,2HC1-H20:
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen antas selektivt å hemme trombin med andre proteinaser og ikke-enzymproteiner involvert i blodkoagulasjonen uten nevneverdig interferens med kroppens naturlige levringslyserende evne (forbindelsene har en lav hemmende effekt på fibrinolyse). Videre, er slik selektivitet antatt å tillate anvendelsen med trombolytiske midler uten substansiell interferens med trombolyse og fibrinolyse. Videre, er forbindelsene ifølge oppfinnelsen antatt å være oralt aktive.
Oppfinnelsen fremskaffer ifølge et av dets aspekter en fremgangsmåte for hemming av trombin hos pattedyr som omfatter administrering til et pattedyr som trenger behandling av en effektiv (trombinhemmende) dose av forbindelse med formel I.
Trombinhemmingen omfattet av foreliggende fremgangsmåte omfatter både medisinsk terapeutisk og/eller profylaktisk behandling.
I en ytterligere utførelsesform angår oppfinnelsen behandling, i et menneske eller dyr, av en tilstand hvor hemming av trombin er påkrevet. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er forventet å være nyttige i dyr, inkludert mennesker, ved behandling eller profylakse av trombose og hyperkoagulabilitet i blod og vev. Sykdomstilstander hvor forbindelsene har en potensiell anvendelse er i behandling eller profylakse av trombose og hyperkoagulabilitet i blod og vev. Sykdomstilstander hvor forbindelsene har potensiell anvendelse i behandling og/eller profylakse, omfatter venøs trombose og pulmonar embolisme, arteriell trombose, slik som myokardial ischemi, myokardialt infarkt, ustabil angina, trombose-basert slag og perifer arteriell trombose. Videre, har forbindelsene forventet anvendelse i profylakse av aterosklerotiske tilstander slik som koronar arteriell sykdom, cerebral arteriell sykdom og perifer arteriell sykdom. Videre, er forbindelsene forventet å være anvendelige sammen med trombolytika ved myokardialt infarkt. Videre, har forbindelsene forventet anvendelse i behandling av profylakse av reokklusjon etter trombolyse, perkutan transluminal angioplasti (PTCA) og koronar bypass-operasjon. Videre, har forbindelsene forventet anvendelse i forhindring av retrom-bose etter mikrokirurgi. Videre, er forbindelsene forventet å være anvendelige i antikoagulantbehandling i sammenheng med kunstige organer og hjerteklaffer. Videre, er forbindelsene forventet å være anvendelige i antikoagulantbehandling i hemodialyse og disseminært intravaskulær koagulering. En ytterligere forventet anvendelse er for rensing av katetere og mekaniske anordninger benyttet i pasienter in vivo og som antlkoagulant for konservering av blod, plasma og andre blodprodukter in vitro. Enda videre, har forbindelsene forventet anvendelse for andre sykdommer hvor blodkoagulering kan være en fundamental bidragende prosess eller kilde for sekundær patologi, slik som cancer, inkludert metastaser, og inflammatoriske sykdommer inkludert artritis og diabetes. Antl-koagulantforbindelsen blir administrert oralt eller parenteralt, f.eks. ved intravenøs infusjon (iv), intra-muskulær injeksjon (im) eller subkutan injeksjon (sc).
Den spesifikke dosen av en forbindelse administrert ifølge foreliggende oppfinnelse for å oppnå terapeutisk og/eller profylaktisk effekt vil naturlig bli bestemt ved de spesielle forholdene som omgir tilfellet, inkludert f.eks. den administrerte forbindelsen, administrasjonsrate og tilstanden som skal behandles.
En typisk daglig dose for hver av anvendelsene ovenfor er mellom omkring 0,01 mg/kg og omkring 1000 mg/kg. Doseregimet kan variere, f.eks. for profylaktisk anvendelse i en enkel daglig dose, kan bli administrert eller multiple doser slik som 3 eller 5 ganger daglig kan være passende. I kritiske pleiesituasjoner blir en forbindelse ifølge oppfinnelsen administrert ved iv-infusjon ved en rate på omkring 0,01 mg/kg/time og omkring 20 mg/kg/time og fortrinnsvis mellom omkring 0,1 mg/kg/time og omkring 5 mg/kg/time.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen blir også utført i sammenheng med et levringslyserende middel, f.eks. vevsplasminogenaktivator (t-PA), modifisert t-PA, streptokinase eller urokinase. I tilfeller hvor levringsdannelse opptrådte og en arterie eller vene er blokkert, enten delvis eller totalt, blir et levringslyserende middel vanligvis benyttet. En forbindelse ifølge oppfinnelsen kan bli administrert før eller sammen med det lyserende midlet eller etter dets anvendelse sammen eller fortrinnsvis videre bli administrert sammen med aspirin for å forhindre gjenopptreden av levringsdannelse.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er også utført i sammenheng med en blodplate-glykoproteinreseptor (Ilb/IIIa)-antagonist som hemmer blodplateaggregering. En forbindelse ifølge oppfinnelsen kan bli administrert før eller sammen med Ilb/IIIa-antagonisten eller etter dens anvendelse for å forhindre gjenopptreden av levringsdannelse.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen blir også utført i sammenheng med aspirin. En forbindelse ifølge oppfinnelsen kan bli administrert før eller sammen med aspirin eller etter dets anvendelse for å forhindre gjenopptreden av leverings-dannelse. Som angitt ovenfor, blir fortrinnsvis en forbindelse ifølge oppfinnelsen administrert sammen med et levringslyserende middel og aspirin.
Oppfinnelsen fremskaffer også farmasøytiske formuleringer for anvendelse i den ovenfor beskrevne terapeutiske fremgangsmåte. Farmasøytiske formuleringer ifølge oppfinnelsen omfatter en effektiv trombinhemmende mengde av en forbindelse med formel I sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer, hjelpestoff eller fortynner. For oral administrering blir den antitrombotiske forbindelsen formulert i gelatinkapsler eller tabletter som kan inneholde hjelpestoffer slik som binde-midler, smøremidler, disintegreringsmidler og lignende. For parenteral administrasjon blir det antitrombotiske midlet formulert i farmasøytisk akseptable fortynnere, f.eks. fysiologisk saltvann (0,9*), 5* dekstrose, Ringers oppløsning og lignende.
Forbindelsen ifølge oppfinnelsen kan bli formulert i enhetsdoseformuleringer inneholdende en dose på mellom omkring 0,1 mg og omkring 1000 mg. Fortrinnsvis, er forbindelsen i form av et farmasøytisk akseptabelt salt slik som sulfatsaltet, acetatsaltet eller et fosfatsalt. Et eksempel på en enhetsdoseringsformulering omfatter 5 mg av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse som farmasøytisk akseptabelt salt i en 10 ml steril glassampulle. Andre eksempler på en enhetsdoseformulering omfatter omkring 10 mg av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse som farmasøytisk akseptabelt salt i 20 ml isotonisk saltvann inneholdt i en steril ampulle.
Forbindelsene kan bli administrert forskjellige veier, inkludert oralt, rektalt, transdermalt, subkutant, intra-venøst, intramuskulaert og intranasalt. Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse blir fortrinnsvis formulert før administrering. Derfor, omfatter en annen utførelsesform av foreliggende oppfinnelse en farmasøytisk formulering omfattende en effektiv mengde av en forbindelse med formel I eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer, fortynner eller hjelpestoff.
Den aktive ingrediensen i slike formuleringer omfatter fra omkring 0,1 til 99,9 vekt-* av formuleringen. Ved "farmasøy-tisk akseptabel" er det ment at bæreren, fortynneren eller hjelpestoffet må være forenelig med de andre ingrediensene i formuleringen og ikke være skadelig for mottageren.
Foreliggende farmasøytiske formuleringer blir fremstilt ved kjente prosedyrer ved bruk av velkjente og lett tilgjengelige ingredienser. Ved fremstilling av sammensetninger ifølge oppfinnelsen vil den aktive ingrediensen vanligvis bli blandet sammen med en bærer eller fortynnet med en bærer, eller innekapslet i en bærer som kan være i form av en kapsel, pose, papir eller annen beholder. Når bæreren tjener som fortynningsmiddel, kan den være et faststoff, halvfast stoff eller flytende materiale som virker som en bærer, hjelpestoff eller medium for den aktive ingrediens. Således, kan sammensetningene være i form av tabletter, piller, pulvere, pastiller, poser, kapsler, eliksirer, suspensjoner, emulsjoner, oppløsninger, siruper, aerosoler (som en fast eller i et flytende medium), myke eller harde gelatinkapsler, stikkpiller, sterile injiserbare oppløsninger, sterilt pakkede pulvere og lignende. Sammensetningene ifølge oppfinnelsen kan bli formulert for å gi en hurtig, vedvarende eller forsinket frigivning av den aktive ingrediens etter administrasjon til pasienten ved anvendelse av prosedyrer som er velkjente i teknikken.
De følgende formuleringseksemplene er illustrative og er ikke ment å begrense rammen av oppfinnelsen på noen måte. "Aktiv ingrediens" er naturligvis en forbindelse med formel I eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav.
Formulering 1
Harde gelatinkapsler kan bli fremstilt ved bruk av de følgende ingredienser:
Formulering 2
En tablett blir fremstilt ved anvendelse av ingrediensene nedenfor:
Komponentene blir blandet og presset for å danne tabletter hver med en vekt på 665 mg.
Formulering 3
En aerosoloppløsning ble fremstilt inneholdende de følgende komponenter:
Den aktive forbindelsen ble blandet med etanol og blandingen tilsatt til en porsjon av propellant 22, avkjølt til —30°C og overført til en påfyllingsanordning. Den nødvendige mengden ble så tilført en rustfri stålbeholder og fortynnet med resten av drivmidlet. Ventilenheter ble så satt på beholderen.
Formulering 4
Tabletter, hver inneholdende 60 mg aktiv ingrediens ble fremstilt som følger:
Den aktive ingrediens, stivelsen og cellulosen ble ledet gjennom en nr. 45 mesh US-sikt og blandet grundig. Den vandige oppløsningen inneholdende polyvinylpyrrolidon ble blandet med det resulterende pulveret og blandingen ble så ledet gjennom en nr. 14 mesh US-sikt. De således produserte korn ble tørket ved 50° C og ført gjennom en nr. 18 mesh US sikt. Natriumkarboksymetylstivelsen, magnesiumstearatet og talket som på forhånd var ført gjennom en nr. 60 mesh US-sikt, ble så tilsatt til kornene som etter blanding ble presset på en tabletteringsmaskin for å gi tabletter hver med en vekt på 150 mg.
Formulering 5
Kapsler, hver inneholdende 80 mg aktiv ingrediens, ble fremstilt som følger:
Den aktive ingrediens, cellulose, stivelse og magnesium-stearat ble blandet, ført gjennom en nr. 45 mesh US-sikt og fylt i harde gelatinkapsler i mengder av 200 mg.
Formulering 6
Stikkpiller, hver inneholdende 225 mg aktiv ingrediens, ble fremstilt som følger:
Den aktive ingrediensen ble ledet gjennom en nr. 60 mesh US-sikt og suspendert i mettede fettsyreglycerider som på forhånd var smeltet ved anvendelse av minimum varmemengde. Blandingen ble så helt i stikkpilleform med nominell kapasitet på 2 g og avkjølt.
Formulering 7
Suspensjoner, hver inneholdende 50 mg aktiv ingrediens pr. 5 ml dose, ble fremstilt som følger:
Den aktive ingrediensen ble ledet gjennom en nr. 45 mesh US-sikt og blandet med natriumkarboksymetylcellulose og sirup for å danne en glatt pasta. Benzosyreoppløsningen, smaken og fargen ble fortynnet med en del av vannet og tilsatt under omrøring. Tilstrekkelig vann ble så tilsatt for å gi det ønskede produkt.
Formulering 8
En intravenøs formulering kan bli fremstilt som følger:
Oppløsningen av ingrediensene ovenfor ble generelt administrert intravenøst til et individ ved en hastighet på 1 ml/minutt.
Forbindelsene fremskaffet ved foreliggende oppfinnelse (formel I) er oralt aktive og hemmer selektivt virkningen av trombin i pattedyr.
Evnen til forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse å være effektive og oralt aktive trombinhemmere, blir evaluert i en eller flere av de følgende analyser.
Hemming av trombin blir demonstrert ved in vitro-hemming av amidaseaktiviteten av trombin, målt i en analyse hvor trombin hydrolyserer det kromogene substratet N-benzoyl-L-fenylalanyl -L-valyl-L-arginyl-p-ni tr oanil id .
Analysen blir utført ved blanding av 50 pl buffer (0.03M Tris, 0.15M NaCl, pH 7,4) med 25 pl bovint trombin eller human trombinoppløsning (0,21 mg/ml trombostat bovint trombin, Parke-Davis eller renset humant trombin, Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana, ved omkring 8 NIH-enheter/ml, i den samme buffer) og 25 pl av testforbindelsen i et oppløsningsmiddel (i 50* vandig metanol, v:v). 150 pl av en vandig oppløsning av det kromogene substrat (ved 0,25 mg/ml) ble tilsatt og hydrolyseraten av substratet ble målt ved overvåking av reaksjonen ved 405 nm for frigiving av p-nitroanilin. Standardkurver ble konstruert ved plotting av fri trombinkonsentrasjon mot hydrolyserate. Hydrolyserater observert med testforbindelsene ble så omdannet til "fritt trombin"-verdier i de respektive analysene ved anvendelse av standardkurver. Det bundne trombin (bundet til testforbindelsen) ble beregnet ved å trekke fra mengden fritt trombin observert i hver analyse fra den kjente initielle mengden trombin benyttet i analysen. Mengden fri hemmer i hver analyse beregnet ved å trekke antallet mol bundet trombin fra antallet mol bundet hemmer (testforbindelse).
Kass-verdien er den hypotetiske likevektskonstant for reaksjonen mellom trombin og testforbindelse (I).
Kass er beregnet for et område konsentrasjon av testforbindelsene og gjennomsnittverdien er rapportert i enheter på liter pr. mol.
Ved hovedsakelig å følge prosedyren beskrevet ovenfor for humant trombin og anvendelse av andre humant blod-koaguleringssystem-serinproteaser og proteaser for fibrinolytisk system med passende kromogene substrater, identifisert nedenfor, kan selektiviteten til forbindelsene ifølge oppfinnelsen hva angår koaguleringsfaktor-serinproteasene og hva angår fibrinolytisk system-serinproteasene evaluert så vel som deres hovedsakelige mangel på interferens med serinproteaser fra det fibrinolytiske system. Trombinhemmere skal fortrinnsvis spare fibrinolyse indusert av urokinase, vevsplasminogenaktivator (t-PA) og streptokinase. Dette vil være viktig for den terapeutiske anvendelsen av slike midler i
som en hjelp til streptokinase, t-PA eller urokinase trombolytisk terapi og anvendelsen av slike midler som et endogent, fibrinolyse-sparende (hva angår t-PA og urokinase) antitrombotisk middel. I tillegg til manglende interferens med amidaseaktiviteten til de fibrinolytiske proteasene, kan slikt fibrinolytisk systemsparing bli studert ved anvendelse av human plasmalevring og deres lysis ved respektive f ibrinolytiske plasminogenaktivatorer.
Humane faktorer X, Xa, IXa, Xla og Xlla er anskaffet fra Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana; human urokinase fra Leo Pharmaceuticals, Danmark; og rekombinant aktivert protein C (aPC) ble fremstilt ved Eli Lilly and Co. hovedsakelig ifølge US patent 4.981.952. Kromogene substrater: N-benzoyl-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilid (for faktor Xa); N-Cbz-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilid (for faktor IXa analyse som faktor Xa substrat); pyroglutamyl-Pro-Arg-p-nitroanilid (for faktor Xla og for aPC); H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitroanilid (for faktor Xlla); og pyroglutamyl-Gly-Arg-p-nitroanilid (for urokinase); blir anskaffet fra Kabi Vitrum, Stockholm, Sverige eller fra Midwest Biotech, Fishers, Indiana. Bovint trypsin ble anskaffet fra Wortington Biochemicals, Freehold, New Jersey og humant plasma kalli-krein fra Kabi Vitrum, Stockholm, Sverige. Kromogent substrat H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitroanilid for plasma kalllkrein ble anskaffet fra Kabi Vitrum, Stockholm, Sverige. N-benzoyl-Phe-Val-Arg-p-nitroanilid, substratet for humant trombin og trypsin, blir syntetisert ifølge prosedyren beskrevet ovenfor for forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse ved anvendelse av kjente fremgangsmåter for peptidkobling fra kommersielt tilgjengelige reaktanter eller anskaffet fra Midwest Biotech, Fishers, Indiana.
Humant plasmin ble anskaffet fra Boehringer Mannheim, Indianapolis, Indiana; nt-PA ble anskaffet som enkel-kjede-aktivitetsreferanse fra Amercian Diagnostica, Greenwich, Connecticut; modifisert t-PA6 (mt-PA6) ble fremstilt ved Eli Lilly and Company ved prosedyrer kjent i teknikken (se Burck et al., J. Biol. Chem., 26j>, 5120-5177 (1990). Plasmin-kromogent substrat H-D-Val-Leu-Lys-p-nitroanilid og vevsplasminogenaktivator (t-PA) substrat H-D-Ile-Pro-Arg-p-nitroanilid ble anskaffet fra Kabi Vitrum, Stockholm, Sverige.
I de kromogene substratene beskrevet ovenfor blir tre-bokstavsforkortelsene Ile, Glu, Gly, Pro, Arg, Phe, Val, Leu og Lys benyttet for å indikerer de tilsvarende aminosyre-gruppene isoleucin, glutaminsyre, glycin, prolin, arginin, fenylalanin, valin, leucin og lysin.
Tabell 1 viser Kass-verdiene oppnådd med angitte forbindelser representert ved formel I.
Det ble uventet observert at forbindelsene hvor X inneholder en D-cykloheksylalanylgruppe, har forbedret kraft i forhold til hemming av trombin og viser spesielt overraskende øket kraft med hensyn til hemming av faktor Xa sammenlignet med eksempelvis tilsvarende forbindelser hvor X inneholder en D-fenylalanylgruppe.
Materialer
Hundeplasma ble anskaffet fra bevisste blandingshunder (begge kjønn Hazelton-LRE, Kalamazoo, Michigan, USA) ved vene-tapping opp i 3,8* citrat. Fibrinogen ble fremstilt fra fersk hundeplasma og humant fibrinogen ble fremstilt ACD humant blod fra fraksjonen 1-2 ifølge tidligere prosedyrer og beskrivelser. Smith, Biochem. J., 185. 1-11 (980); og Smith et al., Biochemistry, 11, 2958-2967 (1972). Humant fibrinogen (98* rent/plasminfritt) er fra American Diagnostica, Greenwich, Connecticut. Radiomerking av fibrinogen 1-2 preparater ble utført som tidligere rapportert. Smith et al., Biochemistry, 11, 2958-2967 (1972). Urokinase ble anskaffet fra Leo Pharmaceuticals, Danmark, som 2200 Ploug enheter/glass. Streptokinase ble anskaffet fra Hoechst-Roussel Pharmaceuticals, Somerville, New Jersey.
Fremgangsmåter - effekter på lvsis av humane plasmalevringer ved t- PA
Humane plasmalevringer blir dannet i mikrotestrør ved tilsetning av 50 pl trombin (73 NI-enheter/ml) til 100 pl humant plasma inneholdende 0,0229 pCi 125-jod-merket fibrinogen. Levringslysis blir studert ved å legge over levringene med 50 pl urokinase eller streptokinase (50, 100 eller 1000 enheter/ml) og inkubering i 20 timer ved romtemperatur. Etter inkubering ble rørene sentrifugert i en Beckman Microfuge. 25 pl av supernatanten ble tilsatt i 1,0 ml volum 0.03M tris/0,15M NaCl-buffer for gamma-telling. Tellekontroll for 100* lysis ble oppnådd ved å utelate trombin (og tilsette buffer). Trombinhemmerne ble evaluert for mulig interferens med fibrinolyse ved å inkludere forbindelsene i overleggingsoppløsningen ved 1, 5 og 10 pg/ml konsentrasjoner. Røffe estimater på ICsg-verdier er estimert ved lineære ekstrapolasjoner fra datapunkter til en verdi som ville representere 50* lysis på den bestemte konsentrasjonen av fibrinolytisk middel.
Antikoagulantaktivitet
Materialer
Hundeplasma og rotteplasma ble oppnådd fra bevisste blandingsrasehunder (begge kjønn, Hazelton-LRE, Kalamazoo, Michigan, USA) eller fra bedøvede hannkjønns Sprague-Dawley-rotter (Harlan Sprague-Dawley, Inc., Indianapolis, Indiana, USA) ved venepunktering opp i 3,8* citrat. Fibrinogen ble fremstilt fra ACD-humant blod som fraksjon 1-2 ifølge tidligere prosedyrer og beskrivelser. Smith, Biochem. J., 185, 1-11 (980); og Smith et al., Biochemistry, 11, 2958-2967
(1972). Humant fibrinogen ble også anskaffet som 98* rent/plasminfritt fra American Diagnostica, Greenwich, Connecticut. Koaguleringsreagenser ACTIN, tromboplastin og humant plasma er fra Baxter Healthcare Corp., Dade Division, Miami, Florida. Bovint trombin fra Parke-Davis (Ann Detroit, Michigan) ble benyttet for koaguleringsanalyse i plasma.
Metoder
Antikoaguleringsbestemmelser
Koaguleringsanalyseprosedyrer er tidligere beskrevet. Smith et al., Trombosis Research, 50, 163-174 (1988). Et CoAScreen-koaguleringsintrument (American LABor, Inc.) ble benyttet for alle koaguleringsanalysemålinger. Protrombintiden (PT) er målt ved tilsetning av 0,05 ml saltvann og 0,05 ml tromboplastin-C-reagens til 0,05 ml testplasma. Den aktiverte partielle tromboplastintiden (APTT) er målt ved inkubering av 0,05 ml testplasma med 0,05 ml actin-reagens i 120 sekunder fulgt av 0,05 ml CaCl2 (0.02M). Trombintiden (TT) ble målt ved tilsetning av 0,05 ml saltvann og 0,05 ml trombin (10 NIH-enheter/ml) til 0,05 ml testplasma. Forbindelsene med formel I blir tilsatt til humant eller animalsk plasma over et vidt konsentrasjonsområde for å bestemme forlengings-effekten av APTT—, PT— og TT-analyser. Lineære ekstrapolasjoner blir utført for å estimere konsentrasjonene som er nødvendige for å fordoble levringstiden for hver analyse.
Dyr
Hannkjønns Sprague-Dawley-rotter (350-425 g, Harlan Sprague Dawley Inc., Indianapolis, IN) ble bedøvet med xylazin (20 mg/kg, s.c.) og ketamin (120 mg/kg, s.c.) og holdt i et oppvarmet vannteppe (37°C). Den jugulare vene ble kanylert for å tillate infusjon.
Arterio- venøs shunt- modell
Den venstre jugalare vene og høyre karotidarterie ble kanylert med 20 cm lengde av polyetylen PE 60-slange. En 6 cm centerseksjon med større slange (PE 190) med en bomullstråd (5 cm) i lumen, ble friksjonstilpasset mellom de lengre seksjonene for å fullføre den arterio-venøse shuntkretsen. Blod sirkulerte gjennom shunten i 15 minutter før tråden ble forsiktig fjernet og veid. Vekten av en våt tråd ble subtrahert fra den totale vekten av tråden og trombus (se J.R. Smith, Br. J. Pharmacol., 77, 29 (1982)).
Når forbindelsen i eksempel 48 ble sammenlignet med D-MePhe-Pro-Arg-H (diskutert ovenfor på side 2) i arteriovenøs shuntmodell, ble den antitrombotiske kraften funnet å være 9 ganger større under kontinuerlig intravenøs infusjon. For å redusere trombusvekt til samme grad (omkring 20* av kontroll), forlenget forbindelsen fra eksempel 48 plasmatrombintiden omkring 3 ganger, mens plasmatrombintiden ble forlenget mer enn 20 ganger under infusjon av standard-forbindelsen. Protrombintid og APTT ble forlenget kun omkring 120* av kontroll (noen få sekunder) under infusjon av forbindelsen fra eksempel 48.
FeClq- modell på arteriell skade
Karotidarteriene blir isolert via et midtlinje ventralt cervikalt snitt. En termokobler ble plassert under hver arterie og temperaturen ble målt kontinuerlig med en skriver. En mansjett for slange (0,058 ID x 0,077 OD x 4 mm, Baxter Med. Grade Silicone), skåret i lengderetningen, ble plassert rundt hver karotid direkte overfor termokobleren. FeCl3~ heksahydrat ble oppløst 1 vann og konsentrasjonen (20*) ble uttrykt som den faktiske vekt av FeCl3. For å skade arterien og indusere trombose ble 2,85 pl pipettert inn i mansjetten for å treffe arterien over termokobllngsproben. Arteriell okklusjon er indikert ved hurtig fall i temperatur. Tid for okklusjon er rapportert i minutter og representerer den forløpte tid mellom applikasjon av FeCl3 og det hurtige fall i kartemperatur (se K.D. Kurz, Thromb. Res., 60, 269 (1990)).
Spontan trombolvsemodell
In vitro-data antyder at peptid-trombinhemmere hemmer trombin og andre serinproteaser slik som plasmin og vevsplasminogenaktivator. For å måle om forbindelsen hemmer fibrinolysen in vivo, blir raten av spontan trombolyse bestemt ved implantering av en merket helblodlevring i lungesirkulasjonen. Rotteblod (1 ml) ble hurtig blandet med bovint trombin (4 IU, Parke Davis) og <125>j humant fibrinogen (5 pCi, ICN) ble umiddelbart trukket inn i silastinrør og inkubert ved 37"C i
1 time. Den eldre trombus ble tatt ut fra røret, skåret i 1 cm segmenter, vasket tre ganer i normalt saltvann og hvert segment ble talt i en gamma-teller. Et segment med kjent telling ble aspirert inn i et kateter som deretter ble implantert i den jugulare venen. Kateterspissen ble ført inn i nærheten av det høyre atrium og levringen ble støt ut for å flyte inn i lungesirkulasjonen. En time etter implantering ble hjertet og lungene tatt ut og talt separat. Trombolyse er uttrykt som en prosent hvor:
Den fibrinolytiske oppløsningen av den implanterte levringen skjer tidsavhengig (se J.P. Clozel, Cardiovas. Pharmacol., 12, 520 (1988)).
Koaguleringsparametere
Plasmatrombintid (TT) og aktivert partiell tromboplastintid (APTT) ble målt med et fibrometer. Blod ble tatt fra et jugulart kateter og oppsamlet i sprøyte inneholdende natriumcitrat (3,8*, 1 del til 9 deler blod). For å måle TT, ble rotteplasma (0,1 ml) blandet med saltvann (0,1 ml) og bovint trombin (0,1 ml, 30 U/ml i TRIS-buffer; Parke Davis) ved 37°C. For APTT, ble plasma (0,1 ml) og APTT-oppløsning (0,1 ml, Organon Teknika) inkubert i 5 minutter ved 37°C og CaCl2 (0,01 ml, 0.025M) ble tilsatt for å starte koagulering. Analysering ble gjort i duplikat og gjennomsnitt beregnet.
Indeks av biotilgjengelighet
En måling av bioaktivitet, plasmatrombintid (TT) tjener som et substitutt for analyse av moderforbindelsen med den antagelse at tillegg i TT resulterte fra trombinhemming ved kun moderforbindelsen. Tidsforløpet for effekten av trombinhemming på TT er bestemt etter i.v. bolusadministrasjon til bedøvde rotter etter oral behandling av fastede, bevisste rotter. På grunn av begrensninger på blodvolum og antallet punkter nødvendig for å bestemme tidsforløpet fra behand-lingstiden til tiden hvor responsen returnerte til for-behandlingsverdier, ble to populasjoner rotter benyttet. Hver prøvepopulasjon representerte alternerende sekvensielle tidspunkt. Den gjennomsnittlige TT over tidsforløp ble benyttet for å beregne areal underkurven (AUC). Indeks for biotilgjengelighet ble beregnet ved formelen vist nedenfor og uttrykt som prosent relativ aktivitet.
Arealet under kurven (AUC) av plasma TT tidsforløp ble bestemt og justert for dosen. Denne indeks for biotilgjengelighet er kalt "# relativ aktivitet" og er beregnet som
Forbindelser
Forbindelsesoppløsninger ble fremstilt fersk daglig i normalt saltvann og ble injisert som en bolus eller ble infusert med start 15 minutter før og fortsatt gjennom det eksperimentelle forløp som er 15 minutter i arteriovenøsshunten og 60 minutter i FeCl3-modellen for arteriell skade og i den spontane trombosemodellen. Bolusinjeksjonsvolumet er 1 ml/kg for i.v. og 5 ml/kg for p.o. og infusjonsvolumet er 3 ml/time.
Statistikk
Resultatene er uttrykt som gjennomsnitt SEM. En-veis-variansanalyse ble benyttet for å detektere statistisk signifikante forskjeller og da er Dunnetts test anvendbar for å bestemme hvilke gjennomsnitt som er forskjellige. Signifikante avvisnlngsnivåer for null hypotesen for like gjennomsnitt er P<0,05.
Dyr
Hannkjønns hunder (beagler; 18 måned - 2 år; 12-13 kg, Marshall Farms, North Rose, New York 14516) ble fastet over natten og gitt Purina sertifisert Prescription Diet (Purina Mills, St. Louis, Missouri) 240 minutter etter dosering. Vann er tilgjengelig ad libitum. Romtemperaturen ble holdt mellom 19 og 23°C (66-74°F); 45-50* relativ fuktighet; og lys fra 0600-1800.
Farmakokinetisk modell
Testforbindelsen er formulert umiddelbart før dosering ved oppløsning i sterilt 0,9* saltvann til et 5 mg/ml preparat. Hunder ble gitt en enkel 2 mg/kg dose av testenforbindelsen ved oral sonde. Blodprøver (4,5 ml) ble tatt fra den cefaliske vene ved 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 3, 4 og 6 timer etter dosering. Prøver ble oppsamlet i citrerte Vacutainer-rør og holdt på is før reduksjon til plasma ved sentri-fugering. Plasmaprøver ble derivatisert med dinitrofenyl-hydrazin og analysert ved HPLC (Zorbax SB-C8 kolonne) eluert med metanol/500 mM natriumacetat justert til pH 7 med fosforsyre (60:40, v/v). Plasmakonsentrasjon av testforbindelse ble målt og benyttet for å beregne farmakokine-tiske parametere; elimineringsratekonstant, Ke; total klaring, Clt; distribusjonsvolum, Vp; tid for maksimum plasmatestforbindelsekonsentrasjon, Tmaks; maksimum konsentrasjon av testforbindelse ved Tmaks, Cmaks; plasma halveringstid, t0,5; areal under kurven, A.U.C.; og fraksjon av testforbindelse absorbert, F.
Kaninmodell for koronar arteietrombose
Kirurgiske preparater og instrumentering av hunder er beskrevet i Jackson et al., Circulation, 82, 930-940 (1990). Blandingsrasehunder (6-7 måneder, begge kjønn, Hazelton-LRE, Kalamazoo, MI, USA) ble bedøvd med natriumpentabartital (30 mg/kg intravenøs, i.v.), intubert og ventilert med luft. Tidalt volum og respirasjonsrater ble justert til å opprettholde blod POg, PCOg, og pH innen normale grenser. Subdermal nålelektroder ble satt inn for måling av en II EKG.
Den venstre jugulare vene og felles karotidarterie ble isolert ved et venstre mediolateralt nakkesnitt. Arterielt blodtrykk (ABP) ble målt kontinuerlig med en forhåndskalibrert Millar transduser (modell MPC-500, Millar Instruments, Houston, TX, USA) satt inn karotidarterien. Den jugulare vene ble kanylert for blodprøvetaking under eksperimentet. I tillegg, ble de femorale venene i begge bakben kanylert for administrasjon av testforbindelse.
En venstre thoraktomi ble utført ved det femte interkostalrom og hjertet ble suspendert i en perkardial vugge. Et 1 til 2 cm segment av den venstre cirkumflekse koronarearterie (LCX) ble isolert proksimalt for den første store diagnoale ventrikulære gren. En 26 gauge nålspisset tråd anodal elektrode (Teflon®-belagt, 30 gauge sølvbelagt kobberwire) 3—4 cm lang ble injisert i LCX og plassert i kontakt med den indre overflate av arterien (bekreftet ved slutten av eksperimentet). Stimuleringskretsen ble fullført ved å plassere katoden i et subkutant (s.c.) sete. En justerbar plastlukker ble plassert rundt LCX over regionen med elektroden. En forhåndskalibrert elektromagnetisk strømnings-probe (Carolina Medical Electronics, King, NC, USA) ble plassert rundt LCX proksimalt for anoden for måling av den koronare blodstrøm (CBF). Lukkeren ble justert for å gi en 40-50* hemming av den hyperemiske blodstrømrespons observert etter 10 sekunders mekanisk lukking av LCX. Alle hemodyna-miske og EKG-målinger ble registrert og analysert med dataregistreringssystem (modell M3000, Modular Instruments, Malvern, PA, USA).
Trombusdannelse og regimer for forbindelsesadministrasjon Elektrolytisk skade av det indre av LCX ble produsert ved å påføre 100 pA likestrøm (DC) til anoden. Spenningen ble opprettholdt i 60 minutter og så avbrutt enten karet var lukket eller ikke. Trombusdannelsen gikk spontant inntil LCX ble totalt stengt (bestemt som null CBF og en økning i S-T-segmentet). Forbindelsesadministrasjonen ble startet etter at lukkingen av trombus hadde fått elde i 1 time. En 2 timers infusjon av forbindelsen ifølge oppfinnelsen ved doser på 0,5 og 1 mg/kg/t ble startet samtidig med en infusjon av trombolytisk middel (f.eks. vevsplasminogenaktivator, streptokinas, APSAC). Eeperfusjon ble tillatt i 3 timer etter administrasjon av testforbindelse. Reokklusjon av de koronare arterier etter suksessfull trombolyse ble definert som null CBF som varte i > 30 minutter.
Hematologi og templat blødningstidsbestemmelser Helblodtellinger, hemoglobin og hematokrittverdier ble bestemt på en 40 pl prøve av citrert (3,8*) blod (1 del citrat: 9 deler blod) med en hematologianalysator (Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner, Mount View, CA, USA). Gingival templat blødetider ble bestemt med en Simplate II-blødningstids-anordning (Organon Teknika Durham, NC, USA).
Anordningen ble benyttet for å gjøre to horisontale snitt i gingiva i enten den øvre eller nedre venstre kjeven til hunden. Hvert snitt var 3 mm bredt og 2 mm dypt. Snittene ble gjort og en stoppeklokke ble benyttet for å bestemme hvor lenge blødning skjedde. En bomullstampong ble benyttet for å suge opp blodet etter som den trakk ut fra snittene. Templat blødningstid er tiden for snitt til stopp av blødning. Blødningstid er tatt rett før administrasjon av testforbindelse (0 minutter), 60 minutter inn i infusjon, ved avslutning av administrasjon av testforbindelsen (120 minutter), og i slutten av eksperimentet.
Alle data ble analysert ved en-veis-variansanalyse (ANOVA), fulgt av Student-Neuman-Kuels post hoc t-test for å bestemme signifikansnivået. ANOVA for gjentatte målinger ble benyttet for å bestemme signifikansforskjeller mellom tidspunktene under eksperimentene. Verdier ble bestemt å være statistisk forskjellige ved minst et nivå på p<0,05. Alle verdier er gjennomsnitt ± SEM. Alle studier er utført ifølge vei-ledningene til American Physiological Society. Ytterligere detaljer angående prosedyrene er beskrevet i Jackson et al., J. Cardiovasc. Pharmacol., 21, 587-599 (1993).
Noter til tabell 2
NC<1> indikerer at screening ikke var fullstendig; lav eller meget lav aktivitet observert ved 20 mg/kg p.o.
NC** indikerer at screening ikke var fullstendig; lav eller meget lav aktivitet observert ved 60 mg/kg p.o.
NC<3> indikerer at screening ikke var fullstendig; lav eller meget lav aktivitet observert ved 50 mg/kg p.o.
NT indikerer ikke testet, dette gjelder også en manglende oppføring.
Biologiske tester
Test A
Bestemmelse av trombinlevringstid ( TT)
Humant trombin (T 6769, Sigma Chem Co) i bufferløsning, pH 7,4, 100 ul, og inhibitorløsning, 100 pl, ble inkubert i et minutt. Prøver på normal citratbehandlet human plasma, 100 pl, ble deretter tilsatt og levringstiden målt i en auto-matisk anordning (KC 10, Amelung).
Levringstiden i sekunder ble plottet mot inhiberingskonsentrasjonen, og IC50TT ble bestemt ved interpolering.
IC50TT er konsentrasjonen av inhibitoren som dobler trombin-levringstiden for humant plasma.
Test B
Bestemmelse av aktivert partiell tromboplastintid ( APTT)
APTT ble bestemt i prøver på normal human citratbehandlet plasma med reagenset PTT Automated 5 produsert av Stago. Inhibitorene ble tilsatt til plasmaen (10 pl inhibitorløsning til 90 pl plasma) fulgt av reagenset og kalsiumkloridløsning og APTT ble bestemt i blandingen ved anvendelse av koagula-sjonsanalysatoren KC10 (Amelung) ifølge instruksjoner fra reagensprodusenten. Levringstiden i sekunder ble plottet mot inhiberingskonsentrasjonen i plasma og IC5QAPTT ble bestemt ved interpolering.
IC5QAPTT er definert som inhiberingskonsentrasjonen i human plasma som dobler aktivert partiell tromboplastintid.
EKSEMPLER
Generelle eksperimentelle prosedyrer
Massespektra ble registrert på en Finnigan MAT TSQ 700 trippel kvadrupol massespektrometer utstyrt med en elektro-spray interface (FAB-MS) og VG plattform II massespektrometer utstyrt med en elektro-spray interface (LC-MS). <1>H NMR og <13>C NMR målinger ble utført på BRUKER ACP 300 og Varian UNITY pluss 400 og 500 spektrometere, som opererte ved ^-H frekvenser på 300,13, 399,96 og 499,82 MHz respektivt, og ved <13>C frekvenser på 75,46, 100,58 og 125,69 MHz respektivt.
Eksempel A
Ch-( R. S) CH( OH)- C( 0)- Aze- Pab x HC1
(i) Boc- Aze- OH
Di-tert-butyldikarbonat (13,75 g; 63 mmol) ble tilsatt under røring ved romtemperatur til en blanding av 5,777 g (57 mmol) L-azetidin-2-karboksylsyre (H-Aze-OH) og 6,04 g (57 mmol) natriumkarbonat i 50 ml vann og 100 ml THF. Etter 60 timer ble THF fjernet i vakuum og blandingen ble fortynnet med vann og surgjort med 2M kaliumhydrogenfosfat. Ekstraksjon med metylenklorid fulgt av tørking (magnesiumsulfat) og fordampning av løsøemidlet ga et residue som ble krystallisert fra metylenkloridrheksan som ga 10,87 g (95*) av farveløse krystaller.
1-H-NMR (300 MHz; CDC13): S 4,85-4,7 (br, s, 1H), 4,0-3,75 (m, 2H), 2,65-2,35 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).
(ii) Boc- Aze- Pab( Z)
Ved romtemperatur ble EDC (13,5 g; 70 mmol) tilsatt til en blanding av Boc-Aze-OH (10,87 g; 54 mmol; fra trinn (i) ovenfor, H-Pab(Z) x HC1 (18,31 g; 57 mmol; fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad W0 94/29336 ) og DMAP (9,9 g; 81 mmol) i acetonitril (270 ml). Etter 16 timer ble løsemidlet fjernet i vakuum og erstattet med etylacetat. Blandingen ble vasket med vann og en vandig løsning av citronsyre. Det organiske sjiktet ble tørket (magnesiumsulfat) og løsemidlet fjernet i vakuum som ga et residue som ga Boc-Aze-Pab(Z) (17,83 g) etter krystallisasjon fra en blanding av metylenklorid, toluen, diisopropyleter og petroleumeter.
1-H-NMR (300 MHz; CDC13): 7,85-7,75 (d, 1H) , 7,45-7,2 (m, 7H), 5,2 (s, 2H), 4,7 (t, 1H), 4,6-4,4 (m, 2H), 3,95-3,8 ("q", 1H), 3,8-3,7 (q, 1H), 2,5-2,3 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).
(iii) H- Aze- Pab( Z)
Boc-Aze-Pab(Z) (2,44 g; 5,2 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) ble løst i en blanding av 10 ml trif luoreddiksyre og 10 ml metylenklorid. Etter 30 minutter ble løsemidlet og trifluoreddiksyre fjernet i vakuum og residuet ble løst i metylenklorid. Den organiske fasen ble vasket med 10* natriumkarbonatløsning og tørket (kaliumkarbonat). Fjerning av løsemidlet i vakuum ga et residue som ga H-Aze-Pab(Z)
(1,095 g; 57*) som farveløse krystaller etter krystallisasjon fra metylenklorid.
1-H-NMR (300 MHz, CD3OD): 5 7,85-7,75 (d, 2H), 7,45-7,25 (m, 7H), 5,2 (s, 2H), 4,5 (s, 2H), 4,3 (d, 1H), 3,65 (q, 1H), 3,4-3,3 (m, 1H), 2,7-2,5 (m, 1H), 2,4-2,2 (m, 1H).
(iv) Ch-( R. S) CH( OH)- C( 0)- ze- Pab( Z)
Fremstilling i overensstemmelse med fremgangsmåten beskrevet av Kelly og LaCour (Synth. Comm. 22, 859 (1992)) på følgende måte. Til en løsning av (R,S )-heksahydromandelsyre (0,30 g, 1,9 mmol), en katalytisk mengde DMAP og pyridin (0,31 g, 3,9 mmol) i metylenklorid (5 ml) ble tilsatt TMSC1 (0,42 g, 3,9 mmol) dråpevis. Reaksjonen ble rørt ved romtemperatur i 4 timer. Reaksjonen ble avkjølt til 0°C og en katalytisk mengde DMF (3 dråper fra en 2 ml sprøyte) ble tilsatt fulgt av oksalylklorid (0,25 g, 2,0 mmol). Reaksjonen ble rørt i 1 time ved 0°C, og en blanding av H-Aze-Pab(Z) (0,67 g, 1,8 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) og pyridin (0,50 g, 6,3 mmol) ble tilsatt og reaksjonen ble varmet til romtemperatur og rørt over natten. En.10* løsning av citronsyre i metanol (6 ml) ble tilsatt til reaksjonen. Etter 30 minutter ble reaksjonen helt over i en skylletrakt og fortynnet med 30 ml etylacetat og den vandige fasen ble ekstrahert med etylacetat. De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med en mettet bikarbonatløsning fulgt av saltvann og tørket (Na2SC"4). Etter fordampning og f lash-kromatograf i med silikagel ved anvendelse av metylenklorid:metanol (99:1 til 92:8) som eluent ble undertittelf orbindelsen (60 mg; 6*) oppnådd.
<1>H-NMR (300 MHz; CDC13): S 1,0-1,9 (m, 11H), 2,4-2,7 (m, 2H), 3,80 (d, 1H), 4,05-4,25 (m, 1H), 4,3-4,5 (m, 2H), 4,85-5,0 (m, 1H), 5,18 (s, 2H), 7,1-7,5 (m, 7H), 7,65-7,8 (m, 2H), 7,86 (bt, 1H), mindre diastereomer og/eller rotamer), 8,33
(bt, 1H, større diastereomer og/eller rotamer)
<13>C-NMR (75 MHz, CDCI3) amidin og karbonylkarboner: S 174,8, 170,6, 168,0 og 164,5.
(v) Ch-( R. S) CH( OH)- C( 0)- Aze- Pab x HC1
Ch-(R,S)CH(OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (60 mg, 0,12 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) ble løst i etanol (5 ml), og 5* Pd/C og HC1 (0,1 ml, kons.) ble tilsatt. Blandingen ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 2 timer. Etter filtrering og fordampning ble produktet renset ved preparativ RPLC ved anvendelse av (0,005 M NH4OAC, 0,005 M HOAc) : CH3CN 4:1 som eluent. Etter frysetørking, ble HC1 (aq) tilsatt og løsningen ble fryse-tørket. Utbyttet av tittelforbindelsen var 15 mg (31*).
^H-NMR (300 MHz, D20; spektret var komplisert på grunn av diastereomerer og/eller rotamerer): 5 0,7-2,0 (m, 11H), 2,25-2,4 (m, 1H), 2,65-2,9 (m, 1H), 3,79 (d, 1H, mindre), 4,03 (d, 1H, større), 4,05-4,15 (m, 2H, mindre), 4,35-4,45 (m (bt),
2H, større), 4,5-4,6 (m, 2H), 5,20 (m, 1H, mindre, det større signalet overlappet med HOD signalet), 7,5-7,65 (m, 2H), 7,75-7,85 (m, 2H).
<13>C-NMR (75 MHz; CDC13) amidin og karbonylkarboner (diastereomerer og/eller rotamerer): S 176,3, 175,4, 173,7, 173,3, 167,2 og 167,0.
Eksempel B
( Et)2 C( OH)- C( 0)- Aze- Pab x HC1
(i) H- Aze- Pab( Z) x 2 HC1
Undertittelforbindelsen ble fremstilt ved reaksjon av Boc-Aze-Pab(Z) (se Eksempel A(ii) ovenfor) med EtOAc mettet med HC1 i gassform. Reaksjonsblandingen ble fordampet etter en halv time som ga H-Aze-Pab(Z) x 2 HC1 i et kvantitativt utbytte.
(i i) ( Et )g C( OH)- C( 0)- Aze- Pab( Z)
En blanding av dietylglykolsyre (0,13 g, 0,80 mmol), H-Aze-Pab(Z) x 2 HC1 (0,39 g, 0,88 mmol; fra trinn (i) ovenfor), TBTU (0,28 g, 0,88 mmol) i DMF (15 ml) ble avkjølt på et isbad. DIPEA (0,41 g, 3,2 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble helt over i 500 ml vann og ekstrahert 3 ganger med etylacetat. Den kombinerte organiske fasen ble vasket med vandig NaHC03 og vann, tørket (NagSO^ og fordampet. Det urene produktet ble flash-kromatografert på silikagel ved anvendelse av metylenklorid:THF som eluent. Utbytte: 30 mg
(856).
1-H-NMR (400 MHz; CDCI3): 5 8,04 (bt, 1H), 7,77 (d, 2H), 7,40 (d, 2H), 7,35-7,2 (m, 5H), 5,17 (s, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,46 (dd, 1H), 4,39 (dd, 1H), 4,3-4,2 (m, 2H), 2,66 (m, 1H), 2,44 (m, 1H), 1,8-1,5 (m, 4H), 0,9-0,75 (m, 6H).
(i i i) ( Et )2 C( 0H)- C( 0)- Aze- Pab * HC1
Tittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel A(v) fra (Et )2C(0H)-C(0)-Aze-Pab(Z) (30 mg, 0,063 mmol; fra trinn (ii) ovenfor). Utbytte: 19 mg (79*).
1-H-NMR (300 MHz; DgO; spektret var komplisert på grunn av rotamerer): S 7,80 (d, 2H), 7,65-7,5 (m, 2H), 5,43 (m, 1H, mindre rotamer), 4,90 (m, 1H, større rotamer, 4,6-4,5 (m, 3H), 4,11 (m, 1H, rotamer), 3,70 (m, 1H, rotamer), 2,8-2,55 (m, 1H), 2,35-2,15 (m, 1H), 1,9-1,6 (m, 4H), 1,0-0,75 (m, 6H).
<13>C-NMR (75 MHz; DgO) amidin og karbonylkarboner (rotamerer): S 178,3, 177,4, 175,0, 173,5, 167,2.
Eksempel C
n- CbE13-( R. S) CH( OH)- C( 0)- Aze- Pab x HC1
( i ) ILiC62l 3-( R. S) CH( 0H)- C( 0)- Aze- Pab( Z) Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel B(ii) ovenfor fra (R,S )-2-hydroksyoktan-syre (0,13 g, 0,80 mmol) som gir 0,25 g (61*).
•jH-NMR (400 MHz; CDC13): S 8,24 (bt, 1H, en diastereomer), 7,89 (bt, 1H, en diastereomer), 7,8-7,75 (m, 2H), 7,4-7,45 (m, 2H), 7,35-7,25 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,95-4,85 (m, 1H), 4,55-4,35 (m, 2H), 4,2-4,0 (m, 3H), 2,8-2,65 (m, 1H), 2,6-2,4 (m, 1H), 2,0-1,2 (m, 10H), 0,9-0,8 (m, 3H). (ii) n-C6H1 3-( R. S) CH( OH)- C( 0)- Aze- Pab x HC1 Tittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel A(v) fra n-C6H13-(R,S)CH(OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,14 g, 0,28 mmol; fra trinn (i) ovenfor) som gir 88 mg (78*).
■^H-NMR (400 MHz; D20): S 7,7-7,6 (m, 2H) , 7,45-7,3 (m, 2H), 5,03 (m, 1H, en diastereomer) 4,74 (m, 1H, en diastereomer overlapper med vannsignalet), 4,45-4,35 (m, 2H), 4,3-4,1 (m, 2H), 4,0-3,8 (m, 1H), 2,65-2,45 (m, 1H), 2,3-2,1 (m, 1H), 1,6-0,9 (m, 10H), 0,75-0,65 (m, 3H).
<13>C-NMR (75 MHz; DgO) amidin og karbonylkarboner (diastereomerer og rotamerer): S 176,8, 176,4, 176,0, 173,5, 173,3, 173,2, 167,2.
Eksempel D
Ph( 4- 0H)-( R. S) CH( 0H)- C( O)- Aze- Pab x HC1
(i) Ph( 4- 0H)-( R. S) CH( 0H)- C( 0)- Aze- Pab( Z)
Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel B(ii) fra (R,S)-4-hydroksymandelsyre (0,34 g, 2,0 mmol). Flash-kromatografi (Si-gel, EtOAc/EtOH 9/1) ga 0,18 g (17*).
1-H-NMR (400 MHz; CDC13): S 7,70 (d, 2H, mindre diastereomer/- rotamer), 7,64 (d, 2H, større diastereomer/rotamer), 7,5-7,0 (m, 7H), 6,82 (d, 2H, større diastereomer/rotamer), 6,67 (d, 2H, mindre diastereomer/rotamer), 6,43 (d, 2H, større diastereomer/rotamer), 5,30, 5,26, 5,22, 5,21 (singleter, 2H, diastereomerer/rotamerer), 4,95-4,8 (m, 2H), 4,15-4,05 (m, 2H), 4,0-3,7 (m, 2H), 2,7-2,5, (m, 2H).
(ii) Ph( 4- 0H)-( R. S) CH( 0H)- C( 0)- Aze- Pab x HC1
Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel A(v) fra Ph(4-0H)-(R,S)CH(0H)-C(0)-Aze-Pab(Z) (94 mg, 0,18 mmol; fra trinn (i) ovenfor). Utbytte; 37 mg (49*) av et hvitt pulver.
1-H-NMR (600 MHz; D20): S 7,76, 7,72, 7,71, 7,68, 7,52, 7,47, 7,40, 7,35, 7,25, 7,19, 7,11, 6,97, 6,82, 6,76, 6,73, 6,71
(dubletter, 8H, diastereomerer/rotamerer), 5,19 (s, 1H, diastereomerer/rotamerer), 5,17 (s, 1H, diastereomer/- rotamer), 5,14 (s, 1H, diastereomer/rotamer), 5,01 (m, 1H, diastereomer/rotamer), 4,88 (m, 1H, diastereomer/rotamer; andre signaler fra samme proton overlappet med HDO-signalet), 4,6-3,8 (m, 4H), 2,77 (m, 1H, diastereomer/rotamer), 2,62 (m, 1H, diastereomer/rotamer), 2,49 (m, diastereomer/rotamer) 2,3-2,1 (m, 1E)
<l>^C-NMR (75 MEz; DgO), amidin og karbonylkarboner (diastereomerer og rotamerer): S 175,9, 174,8, 174,3, 173,3, 173,2, 172,9, 167,1
Eksempel E
Ph-( R) CE( OMe)- C( 0)- Aze- Pab x EC1
(i) E- Aze- Ome x BC1
MeOE (200 ml) ble avkjølt til -40°C under argonatmosfære. Tionylklorid (47,1 g, 0,396 mol) ble tilsatt dråpevis og reaksjonsblandingen ble rørt ved -10°C i 35 minutter. E-Aze-OE (10,0 g, 0,099 mol) ble tilsatt og blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble deretter fordampet som ga 16,1 g (100*) av tittelforbindelsen.
XE NMR (400 MHz, CDC13): S 5,12-5,24 (m, 1H), 4,08-4,29 (m, 2H), 3,84 (s, 3E), 2,65-2,87 (m, 2H).
(ii) Ph-( R) CH( OMe)- C( 0)- Aze- OMe
Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel A(ii) fra R(-)-a-metoksyfenyleddiksyre (0,60 g; 3,6 mmol) og H-Aze-OMe x EC1 (0,55 g, 3,6 mmol, fra trinn (i) ovenfor) som ga 0,32 g (34*). I-E NMR (400 MEz; CDCI3): S 7,29-7,48 (m, 5E), 4,71-5,08 (m, 2E), 3,92-4,31 (m, 2E) , 3,69-3,83 (m, 3E) , 3,19-3,46 (m, 3H), 2,13-2,65 (m, 2H).
(iii) Ph-( R) CH( OMe)- C( 0)- Aze- OH
Til en løsning av Ph-(R)CH(OMe)-C(0)-Aze-OMe (0,32 g, 1,2 mmol); fra trinn (ii) ovenfor i THF (10 ml) ble en løsning av litiumhydroksidmonohydrat (0,071 g; 1,7 mmol) i H20 (6 ml) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt i 3 timer og ble deretter fordampet. Residuet ble løst i H20 og ekstrahert med toluen. pH'en til H20-laget ble justert til 3 med vandig HC1 fulgt av en ekstraksjon med etylacetat (4 ganger). Det kombinerte organiske sjiktet ble fordampet som ga 0,28 g (92%) av tittelforbindelsen.
* E NMR (300 MHz, CDC13): S 7,30-7,50 (m, 5H), 4,95-5,10 (m, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,10-4,35 (m, 2H), 3,40 (s, 3H), 2,40-2,80 (m, 2h).
(iv) Ph-( R ) CH( OMe)- C( 0)- Aze- Pab( Z)
Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel A(ii) fra H-Pab(Z) x HC1 (0,36 g, 1,0 mmol) og Ph-CH(0Me)-C(0)-Aze-0H (0,25 g, 1,0 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) som ga 0,39 g (76* som et hvitt pulver.
1-H-NMR (400 MHz; CDCI3): S 8,29 (m, 1H), 7,77 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,4-7,2 (m, 10H), 5,22 (s, 2H), 4,93 (m, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,44 (m, 2H), 4,15 (m, 2H), 3,35 (s, 3H), 2,69 (m, 1H), 2,42 (m, 1H).
(v) Ph-( R) CH( 0Me)- C( 0)- Aze- Pab x HC1
Tittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet I Eksempel A(v) fra Ph-(R)CH(0Me)-C(0)-Aze-Pab(Z)
(0,15 g, 0,29 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) som ga 50,4 mg (41*) som et hvitt pulver.
<1->H-NMR (4 00 MHz, CD30D; a-hydrogenet av Aze og benzyl-hydrogenet fra mandelatet ble uklart på grunn av CD3OH-signalet): S 7,8-7,6 (m, 2H), 7,6-7,4 (m, 2H), 7,4-7,1 (m, 5H), 4,6-4,4 (m, 2H) , 4,3-4,0 (m, 2H), 3,29 (s, 3H), 2,7-2,5 (m, 1H), 2,4-2,1 (m, 1H).
Eksempel F
Ph( 3- Me)-( R. S) CH( 0H)- C( 0)- Aze- Pab x HOAc
(i) ( E, S)- 3- metylmandelsyre
En blanding av 3-metylbenzaldehyd (12,0 g, 0,1 mol) og benzyltrietylammoniumklorid (1,23 g; 0,005 mol) in CHCI3 (16 ml) ble rørt ved 56°C. En løsning av NaOH (25 g) i H20 (25 ml) ble tilsatt dråpevis til blandingen. Når tilsettingen var fullstendig, ble reaksjonsblandingen rørt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med H20 (og ga 400 ml) og ekstrahert med dietyleter (3 x 50 ml). pH'en til reaksjonsblandingen ble justert til 1 med H2S04 (kons.) fulglt av en ekstraksjon med dietyleter (6 x 50 ml). De kombinerte organiske sjiktene ble tørket (MgS04) og fordampet. Det urene produktet (11,6 g) ble rekrystallisert fra toluen som ga 8,47 g (51*) av tittelforbindelsen.
LC-MS m/z 165 (M-l)-, 331 (2M-1)-
^ NMR (600 MHz, CD3OD): S 7,10-7,28 (m, 4H), 5,08 (s, 1H), 2,32 (s, 3H). (ii) Ph( 3- Me)-( R. S) CH( 0H)- C( 0)- Aze- Pab( Z) Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel B(ii) fra (R,S)-3-metylmandelsyre (0,22 g, 1,3 mmol; fra trinn (i) ovenfor) som ga 0,37 g (54*).
LC-MS m/z 515 (M+l) +
1-H NMR (400 MHz, CDCI3): S 8,11-8,21 (t, NH), 6,97-7,89 (m, 13H), 5,18-5,24 (m, 2H) , 4,83-5,00 (m, 2H) , 4,37-4,58 (m, 2H), 3,50-4,11 (m, 2H) , 2,39-2,71 (m, 2H), 2,27-2,38 (m, 3H).
(iii) Ph( 3- Me)-( R. S) CH( 0H)- C( 0)- Aze- Pab x HOAc
En blanding av Ph(3-Me)-(R,S)CH(OH)-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,105 g, 0,20 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), eddiksyre (0,012 g, 0,20 mmol) og Pd/C (5*, 0,14 g) i etanol (12 ml) ble hydrogenert ved atmosfæretrykk i 6 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet ble fordampet. Det urene produktet (97 mg) ble løst i H20 og frysetørket som resulterte i et klebrig produkt. Produktet ble løst i HOAc og frysetørket en gang til uten noen forbedring. Produktet ble løst i H20, filtrert gjennom et HPLC-filter og ble frysetørket. Utbyttet var 67 mg (76*) av tittelforbindelsen.
LC-MS m/z 381 (M+l)<+>
<1->H NMR (400 MHz, D20): S 6,89-7,72 (m, 8H), 4,79-5,23 (m, 2H), 3,76-4,51 (m, 4H), 2,38-2,82 (m, 2H), 2,15-2,27 (m, 3H) <13>C NMR (75,5 MHz; D20; komplisert på grunn av diastereomerer/rotamerer) amidin og karbonylkarboner: S 181,21, 175,43, 174,38, 173,94, 173,23, 173,06, 172,16 167,00
Eksempel G
Ph( 3- 0Pr( n))-( R. S) CH( OH)- C( 0)- Aze- Pab x HOAc
(i) ( R. S)- 3- allyloksymandelsyre
(R,S )-3-hydroksymandelsyre (0,504 g, 3,0 mmol) ble løst i tørr aceton (25 ml) i nitrogenatmosfære. Allylbromid (0,907 g, 7,5 mmol) og tørr K2C03 (1,037 g, 7,5 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble rørt i nitrogenatmosfære i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fordampet. Residuet ble løst i H20 (25 ml) og aceton (6 ml) og blandingen ble rørt i 2 timer (reaksjonen ble fulgt av HPLC). Blandingen ble fordampet og vannsjiktet ble ekstrahert med etylacetat. pH'en av vannsjiktet ble justert til 2 med vandig KHSO4 og ekstrahert med etylacetat (3 ganger). Det kombinerte organiske sjiktet ble vasket med H20, tørket (Na2S04) og fordampet som ga undertittelproduktet i et utbytte på 0,175 g (28*).
<1>H NMR (500 MHz, CDCI3): S 6,87-7,30 (m, 4H), 5,97-6,10 (m, 1H), 5,26-5,44 (m, 2H), 5,20 (s, 1H), 4,51-4,55 (d, 2H).
( i i ) Ph( 3- 0CH2 CH=CH2)-( R. S) CH( 0H)- C( 0)- Aze- Pab( Z)
Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel B(ii) fra (R,S)-3-allyloksymandelsyre (0,167 g, 0,8 mmol; fra trinn (i) ovenfor) som ga 260 mg (58*).
1-H NMR (500 MHz; CDC13): S 8,09-8,17 (t, NH), 6,79-7,87 (m, 13H), 5,94-6,09 (m, 1H), 5,20-5,44 (m, 4H) , 4,86-5,02 (m, 2H), 4,32-4,62 (m, 4H) , 3,54-4,15 (m, 2H), 2,30-2,74 (m, 2H).
(iii) Ph( 3- QPr( n))-( R. S) CH( OH)- C( 0)- Aze- Pab x HOAc
Tittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel F(iii) fra Ph(3-0CH2CH=CH2 )-(R,S)CH(0H)-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,06 g, 0,1 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) som ga 47 mg (97* ).
LC-MS m/z 425 (M+l)<+>, 423 (M-l)"
1- H NMR (500 MHz, D20) : S 6,70-7,71 (m, 8H) , 4,70-5,25 (m, 2H), 3,78-4,53 (m, 6H), 2,05-2,80 (m, 2H), 1,56-1,75 (m, 2H), 0,82-0,95 (m, 3H).
Eksempel H
2- naftvl-( R. S) CH( 0H)- C( 0)- Aze- Pab x HOAc
(i) ( R. S)-( 2- naftvl) glykolsyre
Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel F(i) ovenfor fra 2-naftaldehyd (15,6 g, 100 mmol) som ga 12,37 g (61*).
LC-MS m/z 201 (M-l)<+>, 403 (2M-1)"
<!>h NMR (500 MHz, CD3OD): S 7,43-7,98 (m, 7H), 5,29-5,35 (m, 1H).
(ii) 2- naftvi-( R. S) CH( 0H)- C( 0)- Aze- Pab( Z) Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempe B(ii) ovenfor fra (R,S)-(2-naftyl)-glykolsyre (0,162 g, 0,8 mmol; fra trinn (i) ovenfor som ga 266 mg (60*).
LC-MS m/z 551 (M+l)<+>
1-H NMR (400 MHz; CDC13): S 7,18-7,91 (m, 16H), 4,86-5,26 (m, 3H), 4,05-4,60 (m, 3H), 3,52-3,78 (m, 2H), 2,24-2,73 (m, 2H). (iii) 2- naftvl-( R. S) CH( OH)- C( 0)- Aze- Pab x HOAc Tittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel F(iii) ovenfor fra 2-naftyl-(R,S)CH(0H)-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,266 g, 0,48 mmol; fra trinn (ii) ovenfor som ga 202 mg (88*).
LC-MS m/z 417 (M+l)<+>
<i>H NMR (500 MHz; CD3OD): S 7,28-7,96 (m, 11H), 5,30-5,40 (m, 1H), 3,95-4,82 (m, 5H), 2,09-2,59 (m, 2H).

Claims (18)

1. Forbindelse, karakterisert ved formel I hvor X er prolinyl, homoprolinyl, R<m->(CH2)g-NH-CH2-C(0), hvori Rd er karboksy eller metylsulfonyl; R<c> er Cj-C<->LQ-alkyl eller et (C3-C8 )-cykloalkyl (C-j—Cfc )-alkylradikal med 4-10 karboner ; T er C3-C8-cykloalkyl, Cji-Cg-alkyl, a er 0, 1 eller 2; Q er -OH, C1-C4-alkoksy eller -NH-A; og A er hydrogen, R"S02-, R"OC(0)-, R"C(0)- eller- (CH2)g-R<m>; g er 1, 2 eller 3; R' er hydrogen eller C1-C4-alkyl; R" er C1-C4-alkyl, -(CH2 )d-Rm, eller indolyl valgfritt substituert med C^-C4 alkyl; R<m> er -COOR<b> eller -S02(C1-<C>4-alkyl); R<b> er hydrogen eller C1-C4-alkyl; d er 1, 2, eller 3; m er 0, 1 eller 2; n er 0, 1 eller 2; og Z er hydrogen, C1-C4-alkyl, C1-C4-alkoksy eller hydroksy; hvori RS er -(CH2)p-L-(CH2)q-T'; R<p> er hydrogen, C1-C6-alkyl, eller -(CH2)p-L-(CH2)q<->T' ; hvor p er 0, 1, 2, 3, eller 4; L er en binding eller -0-; q er 0, 1, 2 eller 3; og T' er usubstituert eller substituert fenyl; Ry er -CH2-; R<z> danner en mettet, karbocyklisk ring med 5-8 atomer når den tas sammen med Ry og de tre sammenbundne karbonatomene; r er 1, 2 eller 3; og G er -(CH2)S-R, hvor s er 0-5, -CH=CH-(CH2)t-R, hvor t er 0-3, eller G er hvor D og E hver uavhengig står for N eller CH; k er 0 eller 1; b er 0 eller 1; og eller G er og hvori et til alle av de ellers usubstituerte karbonatomene av de aromatiske eller heteroaromatiske ringene av kan bære en fluorsubstituent; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav; eller en farmasøytisk akseptabel løsning av nevnte forbindelse eller salt derav; forutsatt at A ikke er hydrogen, -(CH2)g-R<m> hvor R<m> er COOR<b>, eller t-butyloksykarbonyl når G er -(CH2)S-R eller -CH=CH-(CH2)t<->R og R er -C(NH)NH2 eller -NH-C(NH)NH2, Y er eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), og T er og videre forutsatt at R ikke er amino eller guanidino når r=l og s=0; og videre forutsatt at A ikke er hydrogen, metylsulfonyl eller -(CH2)g-R<m> når G er -(C<H>2)S-R, hvori R er Y er eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), R' er hydrogen, T er cykloheksyl og Q er -NH-A; og videre forutsatt at A ikke er hydrogen, R"S02- (hvor R" er C1-C4-alkyl), eller -(CH2)g-R<m> (hvor R<m> er -COOR<D>) når T er cykloheksyl eller Y er er hydrogen), G er -(C<H>2)S-R eller -CH=CH-(CH2)t-<R> og R er -C(NH)NH2 eller -NH-C(NH)NH2; og videre forutsatt at A ikke er R"S02- når G er T er C^-Cg alkyl, er -NH-A; og videre forutsatt at R ikke er når X er hvori Z er hydrogen, a er 1, R' er hydrogen og Q er —NEA, hvori A er hydrogen, Y er usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), r er 1 eller 2, og G er (hvor D og E hver er CH, -(CE2)jj-R er para og k er 0); og videre forutsatt at når: Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert proluinyl (RP er hydrogen); og G er hvori i de to siste gruppene er R -C(NE)NE2 når k er 0 eller 1, eller R er -NE-C(NH)NH2 når k er 0; da: (a) når X er T-(CH2)a-CH(R')(Q)-C(0)-; og R' er H; Q er -NH-A; og A er E, R"S02-, R"OC(0)- (hvori i de to siste gruppene er R" C1-C4 alkyl), R"C(0)- (hvori gruppen R" er <C>^ C^ alkyl eller -(CH2)d-COOR<D>, hvori d er 1 eller 2), eller -(CH2)g-COOR<D>; da er ikke gruppen T-(CH2)a: (i) Ci-Cg alkyl; (ii) -(CH2)a-<C>5-C6 cykloalkyl; (iii) -(CH2)a-fenyl, hvori fenylgruppen er valgfritt substituert med en C^-C4 alkylgruppe; (iv) -(CH2 )a-fenyl, hvori a er 0 eller 1 og fenylgruppen er substituert med enten en hydroksy eller en C^-C4 alkoksygruppe; eller (v) -(CH2)a-naftyl, hvori a er 0 eller 1; og (b) X ikke er prolinyl, homoprolinyl eller og videre forutsatt at når: Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen); r er 1; og G er da: (a) når X er T-(CH2)a-C(R' ) (Q )-C(0 )-; og R' er H; da er ikke Q OH, C1-C4 alkoksy eller -NH-A hvori A er: (i) H; (ii) R"C(0)- hvori R" er C-^- C^ alkyl; (iii) R"OC(0)- hvori R" er C^ C^ alkyl eller -(CH2)d-COOR<13>; eller (iv) R"S02- hvori R" er C^ C^ alkyl, eller -(CH2)d-COOR<b>; og (b) når X er Rd<->(CH2)2-CH(NHC(0)R<C>)-C(0)-; og Rd er karboksy; da er ikke R<c> C1-C6 alkyl; (a) forutsatt at når: Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert prolinyl (RP er H); X er T-(CH2)a-C(R')(Q)-C(0)-; T er cykloheksyl; R' er H; G er -(CH2)S-R; R er -NH-C(NH)-NH2; og kjeden -(CH2)r-(CH2)s står for C2-C6 alkylen; 0 er -NH-A; da er ikke A R"OC(0)- hvori R" er tert-butyl; (b) og videre forutsatt at når: Y er usubstituert prolinyl (RP er H); X er T-(CH2)a-C(R')(Q)-C(0)-; T er cykloheksyl; a er 1; R' er H; G er -(CH2)S-R; og Q er -NH-A; da: (i) når kjeden -(CH2)r-(CH2)s er Cg alkylen og R er -NH2> da er A ikke -CH2-COOR<b> hvori R<b> er etyl; eller (ii) når kjeden -(CH2)r-(CH2)s er C3 alkylen og R er -NH2, da er A ikke -(CH2 )g-COORb hvori g er 1 eller 2 og R<b> er etyl; (iii) når kjeden -(CH2)r-(CH2)s er C4 alkylen og R er -NH-C(NH)-NH2, da er A ikke R"OC(0) hvori R" er tert-butyl, og videre forutsatt at forbindelsen ikke er N-[4-[ ( aminoimonimetyl )amino]buty]-l-[N-(metylsulfonyl )-D- fenylalanyl]-L-prolinamid; eller, uansett forutsetningene ovenfor, hvori forbindelsen med formel I er utvalgt fra: a. N - [ (metyl-lH-indol-2-yl)karbonyl]-D-fenylalanyl-N-[4- [(aminometyl)amino]butyl]-L-prolinamid; b . D-f eny lalanyl -N - [4 - [ ( aminoiminometyl ) aminometyl] -fenyl- metyl] -L-prolinamid; c. D-fenylalanyl-N-[4-(aminometyl)fenylmetyl]-L-prolinamid; d. D-fenylalanyl-N-[3-(aminometyl)fenylmetyl]-L-prolinamid; e. D-fenylalanyl-N-[trans-4-(aminometyl)-cykloheksylmetyl]-L-prolinamid; f. D-fenylalanyl-N-[4-(amino)fenylmetyl]-L-prolinamid; g. D-fenylalanyl-N-[2-[4-(amino)fenyl]etyl]-L-prolinamid; i. D-fenylalanyl-N-[ [3-(amimoiminometyl )f enyl] me tyl] - L-prolinamid; j. D-homoprolyl-N-[[4-(aminoiminometyl )f enyl] metyl] -L-prolinamid; k. N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-l-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid;
1. N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-3-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R )-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; m. (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-1-D-homoprolyl-oktrahydro-lH-indol-2-karboksamid; n. D-homoprolyl-N-(a)-(2-fenyletyl)-N-[[4-(aminoiminometyl)-fenyl]metyl]glyeinamid; o. D-homoprolyl-N-[[4-( aminoiminometyl )f enyl] metyl] - 4-fenoksy-L-prolinamid; p. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[4-[amino(hydroksyimino)-metyl]fenyImetyl]-L-prolinamid; q. N-(etyl sul fonyl)-D-fenylalanyl-N-[4-(aminoiminometyl )-fenylmetyl]-L-prolinamid; r. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[3-[amino(hydroksyimino)-metyl]fenylmetyl]-L-prolinamid; s. N-(etyl sul fonyl)-D-fenylalanyl-N-[3-(aminoiminometyl )-fenylmetyl]-L-prolinamid; t. N-[[3-[amino(hydroksyimino]metyl] f eny 1 ] me ty 1 ] -1 - [ [ ( 4aS , 8aS ) - dekahy dr o -1 (R ) - i sokinol inyl ] karbonyl ] -L-prolinamid; u. N-[[3-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-l-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; v. N- ( etyl sulf onyl) -D-f enylalanyl-N- [2 - [4-[amino(hydroksy-imino)metyl]fenyl]etyl]-L-prolinamid; w. N-( etyl sulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[2-[4-(aminoiminometyl)-fenyl]etyl]-L-prolinamid; x. N-(etylsulfonyl )-D-fenylalanyl-N-[2-[3-[amino(hydroksy-imino)metyl]fenyl]etyl]-L-prolinamid; y. N-(etyl sul fonyl)-D-fenylalanyl-N-[2-[3-(aminoiminometyl)-fenyl]etyl]-L-prolinamid; z. N-[2-[4-(amino(hydroksyimino)metyl]fenyl]etyl]-l-[[(4aS,8aS ) - dekahy dro -1 (R )- i sokinol inyl] karbonyl ] -L-prolinamid; aa. N-[2-[4-(aminoiminometyl)fenyl]etyl]-1-[[(4aS,8aS)- dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; ab. N-[ 2 - [ 3-[ amino ( hydr oksy imino )metyl] f enyl] etyl]-1- [ [ ( 4aS ,8aS )-dekahydro-1 (R ) -i sokinol inyl]karbonyl]-L-prolinamid; og ac . N-[2-[3-(aminoiminometyl)fenyl]etyl]-1-[[(4aS,8aS)- dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid.
2. Forbindelse med formel I eller salt eller oppløsning derav, karakterisert ved at X er prolinyl, homoprolinyl, eller T er C3-Cg-cykloalkyl, Cj-Cg-alkyl, a er 0 eller 1; Q er -0H, C1-C4-alkoksy eller -NH-A; A er hydrogen, R"S02-, R"0C(0)-, R"C(0)- eller -(CH2)g-COOH; g er 1, 2 eller 3; R' er hydrogen eller C-j— C4-alkyl; R" er C1-C4-alkyl, -(CH2)d-COOH eller indolyl valgfritt substituert med Cj-C4 alkyl; d er 1, 2 eller 3; m er 0, 1 eller 2; n er 0, 1 eller 2; og Z er hydrogen, C^-C4-alkyl, C^-C.j-alkoksy eller hydroksy; Y er hvori R<g> er -(CH2)p-L-(CH2)q-T'; RP er hydrogen, Ci-Cfc-alkyl eller -(CH2)p-L-(CH2)q-T'; hvor p er 0, 1 eller 2; L er en binding eller -0-; q er 0, 1 eller 2; og T<*> er fenyl; Ry er -CH2-; R<z> danner en mettet karbocyklisk ring med 5-8 atomer når den tas sammen med Ry og de tre karbonatomene ved siden av; r er 1 eller 2; og G er -(C<H>2)S-R, hvor s er 0-5, -CH=CH-(CH2)t-R, hvor t er 0-3, hvor D og E hver uavhengig står for N eller CH; k er 0 eller 1; b er 0 eller 1; og R er -NH2, forutsatt at A ikke er hydrogen eller t-butyloksykarbonyl når G er -(CH2)S-R eller -CH=CH-(CH2)t-<R > og R er -C(NH)NE2 eller -NH-C(NH)NH2, Y er eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), og T er og videre forutsatt at R ikke er amino eller guanidino når r=l og s=0; og videre forutsatt at A ikke er hydrogen, metylsulfonyl eller -(CH2)g-C00H når G er -(CH2)S-R hvori R er Y er eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), R' er hydrogen, T er cykloheksyl og 0 er -NH-A; og videre forutsatt at A ikke er hydrogen, R"S02- (hvor R" er C1-C4-alkyl), eller -(CH2)g-COOH når T er cykloheksyl eller Y er eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), G er -(CH2)S-R eller -CH=CH-(CH2)t-R og R er -C(NH)NH2 eller -NH-C(NH)NH2; og videre forutsatt at A ikke er R"S02- når G er T er C^-Cs-alkyl, og 0 er -NH-A; og videre forutsatt at R ikke er X er hvori Z er hydrogen, a er 1, R' er hydrogen og 0 er -NHA hvor A er hydrogen, Y er usubstituert prolinyl (RP er hydrogen), r er 1 eller 2, og G er (hvor D og E hver er CH, -(CH2)i[-R er para og k er 0); og videre forutsatt at når: Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen); og G er hvori den siste gruppen R er -C(NH)NH2 når k er 0 eller 1, eller R er -NH-C(NH)NH2 når k er 0; da: (a) når X er T-(CH2 )a-CH(R*)(Q )-C(0)-; og R' er H; 0 er -NH-A; og A er H, R"S02-, R"0C(0)- (hvori de to sistnevnte gruppene R" er C1-C4 alkyl), R"C(0)- (hvori gruppen R" er C1-C4 alkyl eller -(CH2 )d-C00H, hvori d er 1 eller 2) eller -(CH2 )g-C00H; da er ikke gruppen T-(CH2)a: (i) Ci-Cg alkyl; (ii) -(CH2)a-<C>5-C6 cykloalkyl; (iii) -(CH2)a-fenyl, hvor fenylgruppen er valgfritt substituert med en C^-C4 alkylgruppe; (iv) -(CH2)a-fenyl, hvor fenylgruppen er substituert med enten en hydroksy eller en C^-C4 alkoksygruppe; eller (v) -(CH2)a-naftyl; og (b) X er ikke prolinyl, homoprolinyl eller og videre gitt at når: Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert prolinyl (RP er hydrogen); r er 1; og G er da: (a) når X er T-(CH2)a-C(R')(0)-C(0)-; og R' er H; da er ikke Q OH, C^- C^ alkoksy eller -NH-A hvori A er; (i) H; (ii) R"C(0)- hvori R" er C^ C^ alkyl; (iii) R"OC(0)- hvori R" er <C>^ C^ alkyl eller -CH2)d-COOH; eller (iv) R"S02- hvori R" er C^ C^ alkyl, eller -(CH2)d-COOH; (a) forutsatt at når: Y er azetidin-2-karbonyl eller usubstituert prolinyl (RP er H); X er T-(CH2)a-C(R')(Q)-C(0)-; T er cykloheksyl; R' er H; G er -(CH2)S-R; R er -NH-C(NH)-NH2; og kjeden -(CH2 )r-(CH2)s står for <C>2-C6 alkylen; Q er -NH-A; da er ikke A R"OC(0)- hvori R" er tert-butyl; (b) og videre forutsatt at når: Y er usubstituert prolinyl (RP er H); X er T-(CH2)a-C(R')(Q)-C(0)-; T er cykloheksyl; a er 1; R' er H; G er -(CH2)S-R; og 0 er -NH-A; da: (iii) når kjeden -(CH2)r-(CH2)s er C4 alkylen og R er -NH-C(NH)-NH2, da er A ikke R"OC(0) hvori R" er tert-butyl, eller, uansett forutsetningene ovenfor, hvori forbindelsen med formel I er valgt fra: a. N - [ ( me tyl-lH-indol-2-yl)karbonyl]-D-fenylalanyl-N-[4-[(aminometyl)amino]butyl]-L-prolinamid; b. D-f eny lalanyl-N-[ 4-[( aminoiminometyl )aminometyl]-fenyl-metyl] -L-prolinamid; c. D-fenylalanyl-N-[4-(aminometyl)fenylmetyl]-L-prolinamid; d. D-fenylalanyl-N-[3-(aminometyl)fenylmetyl]-L-prolinamid; e. D-fenylalanyl-N-[trans-4-(aminometyl)-cykloheksylmetyl]-L-prolinamid; f. D-fenylalanyl-N-[4-(amino)fenyImetyl]-L-prolinamid; g. D-fenylalanyl-N-[2-[4-(amino)fenyl]etyl]-L-prolinamid; i. D-fenylalanyl-N-[[3-( amimoiminometyl ) f enyl] metyl ] - L- prolinamid; j . D-homoprolyl-N-[ [4-(aminoiminometyl ) f enyl] metyl ] -L- prolinamid; k. N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-l-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid;
1. N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-3-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; m. (S-cis)-N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-1-D-homopropyl-oktrahydro-lH-indol-2-karboksamid; n. D-homopropyl-N-(a)-(2-fenyletyl)-N-[[4-(aminoiminometyl)-fenyl]metyl]glyeinamid; o. D-homopropyl-N-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]metyl]-4-fenoksy-L-prolinamid; p. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[4-[amino(hydroksyimino)-metyl]fenylmetyl]-L-prolinamid; q. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[4-(aminoiminometyl )-fenylmetyl]-L-prolinamid; r. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[3-[amino(hydroksyimino)-metyl]fenyImetyl]-L-prolinamid; s. N-(etyl sul fonyl)-D-fenylalanyl-N-[3-(aminoiminometyl)-fenylmetyl]-L-prolinamid; t. N- [ [3 - [am i no (hydr ok sy im ino] metyl] fenyl] metyl] - l-[ [(4aS , - 8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; u. N-[[3-(aminoiminometyl)feny1]mety1]-l-[[(4aS,8aS)-dekahydro-1(R )-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; v. N-(etylsulfonyl )-D-fenylalanyl-N-[2-[4-[amino(hydroksy-imino)metyl]fenyl]etyl]-L-prolinamid; w. N-(etylsulfonyl)-D-fenylalanyl-N-[2-[4-(aminoiminometyl)-fenyl]etyl]-L-prolinamid; x. N-(etylsulfonyl )-D-fenylalanyl-N-[2-[3-[amino(hydroksy-imino)metyl]fenyl]etyl]-L-prolinamid; y. N-(etyl sul fonyl)-D-fenylalanyl-N-[2-[3-(aminoiminometyl)-fenyl]etyl]-L-prolinamid; z. N-[2-[4-( amino(hydroksyimino)metyl]fenyl]etyl]-l-[[(4aS,- 8aS)-dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; aa. N-[2-[4-(aminoiminometyl)fenyl]etyl]-1-[[(4aS,8aS)- dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid; ab. N-[2-[3-[amino(hydroksyimino)metyl]f enyl] etyl] -1 - [ [ ( 4aS ,8aS )-dekahydro-1 (R )-i sokinol inyl]karbonyl]-L-prolinamid; og ac. N-[2-[3-(aminoiminometyl)fenyl]etyl]-1-[[(4aS,8aS)- dekahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid.
3. En forbindelse eller salt eller oppløsning derav ifølge krav 1 eller 2,karakterisert ved at alkyl i seg selv eller som en del av en annen substituent er metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, t-butyl, isobutyl eller sek-butyl; C3-C8 cykloalkyl er cyklopropyl, metylcyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cykloheksyl, 4-metylcykloheksyl eller cyklooktyl.
4. Forbindelse eller salt eller oppløsning derav ifølge krav 1,
2 eller 3, karakterisert ved at X er homoprolinyl eller 1- eller 3-Piq; Y er prolinyl; A er hydrogen eller R"S02-; og R er en guanidino- eller en amidinogruppe.
5. Forbindelse eller salt eller oppløsning derav ifølge et hvilket som helst av kravene 1-4, karakterisert ved at G er en 4-amidinofenylgruppe.
6. Forbindelse eller salt eller oppløsning derav ifølge kravene 1, 2 eller 3, karakterisert ved at X er hvori A er hydrogen, R"S02- eller -(CH2)g-COOH.
7. Forbindelse eller salt eller oppløsning derav ifølge krav 6, karakterisert ved at A er R"S02- og R" er etyl.
8. Forbindelse eller salt eller oppløsning derav ifølge krav 6, karakterisert ved at A er -(CH2)g-C00H og g er 1.
9. Forbindelse eller salt eller oppløsning derav ifølge et hvilket som helst av kravene 1-3 eller 6-8, karakterisert ved at Yer (L)-prolinyl, (S)-cis-oktahydro-lH-indol-2-karbonyl, eller N-(2-fenyletyl)glycyl.
10. Forbindelse, eller farmasøytisk akseptabelt salt eller oppløsning derav ifølge krav 1, karakterisert ved at forbindelsen er utvalgt fra a) en forbindelse med formel Ia hvori benzamidinringen er usubstituert eller kan bære en eller to fluorsubstituenter, b) en forbindelse med formel Ib og c) en forbindelse med formel Ic hvori D er N eller CH; og X har en hvilken som helst av verdiene angitt i kravene 1-4 og 6-8.
11. Forbindelse, eller salt eller oppløsning derav, ifølge krav 10, karakterisert ved at den er en forbindelse med formel Ia hvori benzamidinringen er usubstituert .
12. Forbindelse, eller salt eller oppløsning derav, ifølge krav 10, karakterisert ved at X er hvori T er cykloheksyl eller fenyl og A er hydrogen, etylsulfonyl eller karboksymetyl.
13. Forbindelse eller salt eller oppløsning derav ifølge krav 1, karakterisert ved at forbindelsen er utvalgt fra b ) N-[[4-(aminoiminometyl)feny1]mety1]-l-[[(4aS,8aS)- decahydro-1(R)-isokinolinyl]karbonyl]-L-prolinamid, c ) N-( etyl sulf onyl )-D-fenylalanyl-N-[ [4-(aminoiminometyl )- fenyl]metyl]-L-prolinamid, d) (S-cis)-N-[ [4-(aminoiminometyl ) f enyl] me tyl]-l-[N-( etylsulfonyl )-D-fenylglycyl]-oktahydro-lH-indol-2-karboksamid, e) (S-cis)-N-[[4-( aminoiminometyl ) f eny 1] metyl ] - l-[N-( etylsulfonyl )-D-fenylalanyl]-oktahydro-lH-indol-2-karboksamid, f) N-(karboksymetyl )-D-fenylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl )-fenyl]metyl]-L-prolinamid, g) (S-cis )-N-[ [4-( aminoiminometyl)fenyl]metyl]-l-[N-(karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl]-lH-oktahydro-indol-2-karboksamid, h) N-(karboksymetyl )-D-cykloheksylalanyl-N-[[5-(aminoimino- metyl)tiofen-2-yl]metyl]-L-prolinamid, i ) N - (karboksymetyl ) -D - cykloheksyl al anyl-N- [ [5-(aminoimino metyl )pyridin-2-yl]metyl]-L-prolinamid, j ) N-(karboksymetyl )-D-cykloheksylalanyl-N-[[5-(aminoimino metyl)-l,2,3,4-tetrahydropyridin-2-yl]metyl]-L-prolinamid, k) N-(karboksymetyl )-D-cykloheksylalanyl-N-[[6-(aminoiminometyl )pyridazin-3-yl]metyl]-L-prolinamid,
1) N-(karboksymetyl )-D-cykloheksylalanyl-N-[[l-(aminoiminometyl)-l,2,3,6-tetrahydropyridin-4-yl]metyl]-L-prolinamid, m) N-(karboksymetyl )-D-cykloheksylalanyl-N-[ [4-(aminoiminometyl)-2-fluorfenyl]metyl]-L-prolinamid, n) N-(karboksymetyl )-D-cykloheksylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl)-2,6-difluorfenyl]metyl]-L-prolinamid,
0) N-( etyl sul f onyl )-D-cykloheksylalanyl-N-[ [4-( aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid, q) N-(karboksymetyl)-D-homofenylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid, r) N-(metylsulfonylacetyl)-L-cykloheksylalanyl-N-[[4-(aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid.
14. Forbindelse eller salt eller oppløsning derav ifølge krav 1, karakterisert ved at forbindelsen er valgt fra
1) (S-cis )-N - [ [4-( aminoiminometyl )fenyl]metyl]-l-[N-etylsulfonyl ) - D-f eny 1 al anyl] -oktahydro-lH-indol -2-karboksamid, ii) N-( karboksymetyl )-D-f enylalanyl-N-[ [4-(aminoiminometyl )fenyl]metyl]-L-prolinamid, iii ) N - ( karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[5-(aminoiminometyl )tiofen-2-yl]metyl]-L-prolinamid, iv) N-(karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[l-(aminoiminometyl)-l,2,3, 6-1 et rahydropyr idin-4-yl]metyl] -L-prolinamid , v ) N-(karboksymetyl )-D-cykloheksylalanyl-N-[[4-(aminoimino metyl)-2-fluorfenyl]metyl]-L-prolinamid og vi) N-(karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[4-(amino iminometyl-2,6-difluorfenyl]metyl]-L-prolinamid.
15. Forbindelse eller salt eller oppløsning derav ifølge krav 2, karakterisert ved at forbindelsen er N— ( karboksymetyl)-D-cykloheksylalanyl-N-[[5-(aminoiminometyl )tiofen-2-yl]metyl]-L-prolinamid.
16. Farmasøytisk formulering, karakterisert ved at den innbefatter sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer, fortynningsmiddel eller eksipient, en forbindelse med formel I, Ia, Ib eller Ic, eller et farma-søytisk akseptabel salt eller oppløsning derav, ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 15.
17. Forbindelse, karakterisert ved formel I hvor X er prolinyl, homoprolinyl, R<m->(CH2)g-NH-CH2-C(0), hvori Rd er karboksy eller metylsulfonyl; R<c> er Ci-C<->LQ-alkyl eller et (C3-C8)-c<y>kloalkyl (C1-C6)- alkylradikal med 4-10 karboner; T er C3-C8-cykloalkyl, C1-C8-alkyl, a er 0, 1 eller 2; Q er _NH-A; og A er R"0C(0)- eller -(CH2)g-R<m>; g er 1, 2 eller 3; R' er hydrogen eller C^—C4-alkyl; R" er _(CH2)d-R<m. > R<m> er -COOR<b> eller -S02(C1-<C>4-alkyl); R<b> er hydrogen eller C-j-C4-alkyl; d er 1, 2, eller 3; m er 0, 1 eller 2; n er 0, 1 eller 2; og Z er hydrogen, C^-C4-alkyl, C1-C4-alkoksy eller hydroksy; Y er hvori R<g> er -(CH2)p-L-(CH2)q-T'; RP er hydrogen, C-j-C6-alkyl, eller -(CH2 )p-L-(CH2 )q-T' ; hvor p er 0, 1, 2, 3, eller 4; L er en tinding eller -0-; q er 0, 1, 2 eller 3; og T' er usubstituert eller substituert fenyl; Ry er -CH2-; R<z>> sammen med Ry og de tre tilstøtende karbonatomene, danner en mettet, karbocyklisk ring med 5-8 atomer; r er 1, 2 eller 3; og G hvor D og E hver er uavhengig N eller CH; k er 0 eller 1; b er 0 eller 1; og R er eller G er og hvori et eller alle av de ellers usubstituerte karbonatomene til de aromatiske eller heteroaromatiske ringene av kan bære en fluorsubstituent; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav; eller et farmasøytisk akseptabelt solvat av nevnte forbindelse eller salt derav.
18. Forbindelse med formel I eller salt eller solvat derav ifølge krav 17,karakterisert ved at X er prolinyl, homoprolinyl, eller T er <C>3-C8-cykloalkyl, C-r-Cg-alkyl, a er u ener i; Q er -OH, C1-C4-alkoksy eller -NH-A; A er R"0C(0)- eller -(CH2)g-COOH; g er 1, 2 eller 3; R<*> er hydrogen eller C}—C4-alkyl; R" er _(CH2)d-COOH; d er 1, 2, eller 3; m er 0, 1 eller 2; n er 0, 1 eller 2; og Z er hydrogen, C1-C4-alkyl, C1-C4-alkoksy eller hydroksy; Y er hvori R<g> er -(CH2)p-L-(CH2)q-T'; RP er hydrogen , Cj-Cfc-alkyl, eller -(CH2)p-L-(CH2 )q-T'; hvor p er 0, 1 eller 2; L er en binding eller -0-; q er 0, 1 eller 2; og T'er fenyl; Ry er -CH2-; R<z>» sammen med Ry og de tre tilstøtende karbonatomene, danner en mettet, karbocyklisk ring med 5-8 atomer; r er 1 eller 2; og G er hvor D og E hver er uavhengig N eller CH; k er 0 eller 1; h er 0 eller 1; og R er _
NO963684A 1994-03-04 1996-09-03 Trombinhemmende forbindelser og farmasøytisk formulering omfattende samme NO309034B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US20655394A 1994-03-04 1994-03-04
PCT/US1995/002558 WO1995023609A1 (en) 1994-03-04 1995-03-03 Antithrombotic agents

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO963684D0 NO963684D0 (no) 1996-09-03
NO963684L NO963684L (no) 1996-10-28
NO309034B1 true NO309034B1 (no) 2000-12-04

Family

ID=22766894

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO963684A NO309034B1 (no) 1994-03-04 1996-09-03 Trombinhemmende forbindelser og farmasøytisk formulering omfattende samme

Country Status (28)

Country Link
EP (2) EP1361212A1 (no)
JP (1) JP4081138B2 (no)
KR (1) KR100337271B1 (no)
CN (2) CN100491348C (no)
AT (1) ATE250028T1 (no)
AU (1) AU684918C (no)
BR (1) BR9506979A (no)
CA (1) CA2183464A1 (no)
CZ (1) CZ294674B6 (no)
DE (1) DE69531753T2 (no)
DK (1) DK0672658T3 (no)
ES (1) ES2206479T3 (no)
FI (1) FI963451A (no)
HU (1) HU227356B1 (no)
IL (1) IL112795A (no)
MX (1) MX9603831A (no)
MY (1) MY119987A (no)
NO (1) NO309034B1 (no)
NZ (1) NZ282588A (no)
PE (1) PE41696A1 (no)
PL (1) PL181306B1 (no)
PT (1) PT672658E (no)
RU (1) RU2148585C1 (no)
SI (1) SI0672658T1 (no)
TW (1) TW401403B (no)
UA (1) UA67715C2 (no)
WO (1) WO1995023609A1 (no)
ZA (1) ZA951617B (no)

Families Citing this family (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4421052A1 (de) 1994-06-17 1995-12-21 Basf Ag Neue Thrombininhibitoren, ihre Herstellung und Verwendung
DE4443390A1 (de) * 1994-12-06 1996-06-13 Basf Ag Neue dipeptidische p-Amidinobenzylamide mit N-terminalen Sulfonyl- bzw. Aminosulfonylresten
CA2210989A1 (en) * 1995-02-10 1996-08-15 Basf Aktiengesellschaft Thrombin inhibitors
NZ302649A (en) 1995-02-17 2000-01-28 Basf Ag Dipeptide amidine derivatives, preparation and pharmaceutical compositions thereof
US5629324A (en) * 1995-04-10 1997-05-13 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5612369A (en) * 1995-06-07 1997-03-18 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Thrombin inhibitors
SA96170106A (ar) 1995-07-06 2005-12-03 أسترا أكتيبولاج مشتقات حامض أميني جديدة
FR2739858B1 (fr) * 1995-10-11 1997-11-14 Synthelabo Derives de n-sulfonyl- et n-sulfamoylpeptidylprolinamide, leur preparation et leur application en therapeutique
ES2186807T3 (es) * 1995-10-24 2003-05-16 Merck & Co Inc Inhibidores de trombina.
TWI238827B (en) * 1995-12-21 2005-09-01 Astrazeneca Ab Prodrugs of thrombin inhibitors
EP1007544A1 (en) * 1996-02-13 2000-06-14 Akzo Nobel N.V. Serine protease inhibitors
IL120310A (en) * 1996-03-01 2002-02-10 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors and pharmaceuticals containing them
TW523513B (en) * 1996-03-01 2003-03-11 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors
US5811402A (en) * 1996-03-22 1998-09-22 Eli Lilly And Company Antithrombotic diamides
CA2200163A1 (en) * 1996-03-22 1997-09-22 Michael Robert Wiley Antithrombotic diamides
SE9602263D0 (sv) * 1996-06-07 1996-06-07 Astra Ab New amino acid derivatives
US5863929A (en) * 1996-06-25 1999-01-26 Eli Lilly And Company Anticoagulant agents
US6200967B1 (en) 1996-06-25 2001-03-13 Eli Lilly And Company Anticoagulant agents
EP1110968B1 (en) * 1996-06-25 2003-10-01 Eli Lilly &amp; Company Intermediate for the preparation of Thrombininhibitors as anticoagulant agents
SE9602646D0 (sv) 1996-07-04 1996-07-04 Astra Ab Pharmaceutically-useful compounds
DE19632773A1 (de) * 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag Neue Thrombininhibitoren
DE19632772A1 (de) 1996-08-14 1998-02-19 Basf Ag Neue Benzamidine
IL121474A0 (en) * 1996-08-23 1998-02-08 Akzo Nobel Nv Thrombin inhibitors
TW542822B (en) 1997-01-17 2003-07-21 Ajinomoto Kk Benzamidine derivatives
CA2289625A1 (en) * 1997-05-15 1998-11-19 Charles Van Jackson Antithrombotic compound
AR013084A1 (es) 1997-06-19 2000-12-13 Astrazeneca Ab Derivados de amidino utiles como inhibidores de la trombina, composicion farmaceutica, utilizacion de dichos compuestos para la preparacion demedicamentos y proceso para la preparacion de los compuestos mencionados
DE19734445A1 (de) * 1997-08-08 1999-02-11 Basf Ag Lipophile polymere UV-Absorber
DE69830410T2 (de) * 1997-08-29 2006-01-26 Tularik Ltd. Meta-benzamidinderivate als serinprotease-inhibitoren
US6740682B2 (en) 1997-08-29 2004-05-25 Tularik Limited Meta-benzamidine derivatives as serine protease inhibitors
SE9704543D0 (sv) 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
CA2317761A1 (en) * 1998-01-26 1999-07-29 Basf Aktiengesellschaft Thrombin inhibitors
WO1999037611A1 (de) * 1998-01-26 1999-07-29 Basf Aktiengesellschaft Heterocyclische amidine als kallikrein protease inhibitoren
NZ506507A (en) * 1998-02-09 2003-08-29 Dimensional Pharm Inc Heteroaryl amidine, methylamidine or guanidine derivatives useful as urokinase inhibitors
US6291514B1 (en) 1998-02-09 2001-09-18 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Heteroaryl amidines, methylamidines and guanidines, preparation thereof, and use thereof as protease inhibitors
US6417161B1 (en) 1998-04-24 2002-07-09 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Amino acid amidinohydrazones, alkoxyguanidines and aminoguanidines as protease inhibitors
AU758567B2 (en) * 1998-06-08 2003-03-27 Ajinomoto Co., Inc. Benzamidine derivative
SE9804313D0 (sv) * 1998-12-14 1998-12-14 Astra Ab New compounds
AU3127900A (en) * 1998-12-23 2000-07-31 Du Pont Pharmaceuticals Company Thrombin or factor xa inhibitors
KR20000047461A (ko) * 1998-12-29 2000-07-25 성재갑 트롬빈 억제제
WO2000042059A1 (en) 1999-01-13 2000-07-20 Astrazeneca Ab New amidinobenzylamine derivatives and their use as thrombin inhibitors
BR9917036A (pt) * 1999-02-09 2002-07-30 Dimensional Pharm Inc Amidinas heteroarila, metilamidinas e guanidinas como inibidores de protease
TR200102912T2 (tr) 1999-04-09 2002-03-21 Basf Ag. Trombin ihtibit”rlerinin ”n ila‡larì.
AR023510A1 (es) 1999-04-21 2002-09-04 Astrazeneca Ab Un equipo de partes, formulacion farmaceutica y uso de un inhibidor de trombina.
FR2793248B1 (fr) * 1999-05-03 2001-06-29 Adir Nouveaux derives de 2,3-methano-aminoacides, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP1194151A4 (en) * 1999-06-23 2003-01-15 Merck & Co Inc ANTAGONISTS OF THE INTEGRIN RECEPTORS
RU2222529C2 (ru) * 1999-10-28 2004-01-27 Санкио Компани, Лимитед Производные бензамидина
AU1890201A (en) 1999-12-14 2001-06-25 Showa Denko Kabushiki Kaisha Process for producing salt of cyanobenzylamine or derivative
SE0000382D0 (sv) 2000-02-07 2000-02-07 Astrazeneca Ab New process
SE0001803D0 (sv) 2000-05-16 2000-05-16 Astrazeneca Ab New compounds i
US7129233B2 (en) 2000-12-01 2006-10-31 Astrazeneca Ab Mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
AR035216A1 (es) 2000-12-01 2004-05-05 Astrazeneca Ab Derivados de acido mandelico ,derivados farmaceuticamente aceptables, uso de estos derivados para la fabricacion de medicamentos, metodos de tratamiento ,procesos para la preparacion de estos derivados, y compuestos intermediarios
US6528503B2 (en) 2000-12-18 2003-03-04 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
AU2002230836A1 (en) 2000-12-18 2002-07-01 Merck & Co., Inc. Benzylamine derivatives and their use as thrombin inhibitors
US7144899B2 (en) 2001-02-09 2006-12-05 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
AR034517A1 (es) 2001-06-21 2004-02-25 Astrazeneca Ab Formulacion farmaceutica
US7838560B2 (en) 2002-03-11 2010-11-23 The Medicines Company (Leipzig) Gmbh Urokinase inhibitors, production and use thereof
KR20030076446A (ko) * 2002-03-22 2003-09-26 주식회사 엘지생명과학 (2ｓ)-ｎ-[5-[아미노(이미노)메틸]-2-티에닐]메틸-1-[(2ｒ)-2-[(카복시메틸)아미노]-3,3-디페닐프로파노일]-2-피롤리딘카르복사미드 말레산 염 및 그의 제조방법
CN1642947A (zh) * 2002-03-22 2005-07-20 株式会社Lg生命科学 ( 2 S )－N－5－[氨基(亚氨基)甲基]－2－噻吩基甲基－1－( 2 R ) －2－[(羧甲基) 氨基]－3 ,3－二苯基丙酰－2－吡咯烷甲酰胺·nH2O的新晶形
US7084134B2 (en) 2002-05-02 2006-08-01 Merk & Co., Inc. Thrombin inhibitors
SE0201659D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0201661D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab New salts
DE10301300B4 (de) 2003-01-15 2009-07-16 Curacyte Chemistry Gmbh Verwendung von acylierten 4-Amidino- und 4-Guanidinobenzylaminen zur Inhibierung von Plasmakallikrein
EP1720844B1 (de) * 2003-04-03 2009-04-29 MERCK PATENT GmbH Pyrrolidin-1,2-dicarbonsäure-1-(phenylamid)-2-(4-(3-oxo-morpholin-4-yl)-phenylamid) derivate und verwandte verbindungen als inhibitoren des koagulationsfaktors xa zur behandlung von thromboembolischen erkrankungen
US7781424B2 (en) 2003-05-27 2010-08-24 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
DE10342108A1 (de) * 2003-09-11 2005-04-14 Curacyte Chemistry Gmbh Basisch-substituierte Benzylaminanaloga als Inhibitoren des Gerinnungsfaktors Xa, ihre Herstellung und Verwendung
FR2867780B1 (fr) * 2004-03-19 2006-05-19 Servier Lab Nouveaux derives de 4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo (1,2-a) pyrazine-6-carboxamides, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US7795205B2 (en) 2004-04-12 2010-09-14 Canyon Pharmaceuticals, Inc. Methods for effecting regression of tumor mass and size in a metastasized pancreatic tumor
TWI396686B (zh) * 2004-05-21 2013-05-21 Takeda Pharmaceutical 環狀醯胺衍生物、以及其製品和用法
EP1890703B1 (en) 2005-06-14 2016-05-11 Taigen Biotechnology Pyrimidine compounds as chemokine receptors inhibitors
US8193206B2 (en) 2005-06-14 2012-06-05 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Pyrimidine compounds
DE102005044319A1 (de) 2005-09-16 2007-03-22 Curacyte Chemistry Gmbh 2-(Aminomethyl)-5-Chlor-Benzylamid-Derivate und ihre Verwendung als Hemmstoffe des Gerinnungsfaktors Xa
KR101276847B1 (ko) 2006-01-12 2013-06-18 엘지전자 주식회사 다시점 비디오의 처리
KR100943914B1 (ko) 2006-01-12 2010-03-03 엘지전자 주식회사 다시점 비디오의 처리 방법 및 장치
KR101069051B1 (ko) 2006-05-23 2011-09-29 아이알엠 엘엘씨 채널 활성화 프로테아제 억제제로서의 화합물 및 조성물
DE102006050672A1 (de) 2006-10-24 2008-04-30 Curacyte Discovery Gmbh Hemmstoffe des Plasmins und des Plasmakallikreins
TW200827336A (en) 2006-12-06 2008-07-01 Astrazeneca Ab New crystalline forms
MX2009007476A (es) * 2007-01-10 2009-07-22 Irm Llc Compuestos y composiciones como inhibidores de proteasa activadora de canal.
US8372849B2 (en) 2008-04-21 2013-02-12 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Heterocyclic compounds
CN101724016B (zh) * 2008-10-28 2013-09-25 上海医药工业研究院 一类肽化合物、其制备方法及用途
CN102924567B (zh) * 2008-10-28 2014-06-04 上海医药工业研究院 一类肽化合物、其制备方法及用途
WO2010056847A2 (en) 2008-11-13 2010-05-20 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Lyophilization formulation
CN102464701B (zh) 2010-11-08 2015-10-21 上海医药工业研究院 一类新型化合物、其制备方法及用途
CN103403018B (zh) * 2010-12-21 2015-08-19 医药公司（莱比锡）有限公司 胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶抑制剂,它们的制备以及作为凝结因子IIa和Xa的选择性抑制剂的用途
GB2494851A (en) * 2011-07-07 2013-03-27 Kalvista Pharmaceuticals Ltd Plasma kallikrein inhibitors
GB201212081D0 (en) * 2012-07-06 2012-08-22 Kalvista Pharmaceuticals Ltd New polymorph
GB2510407A (en) * 2013-02-04 2014-08-06 Kalvista Pharmaceuticals Ltd Aqueous suspensions of kallikrein inhibitors for parenteral administration
CN105218561B (zh) * 2014-06-25 2018-10-30 上海艾力斯医药科技有限公司 稠合嘧啶环衍生物、其制备方法及应用
GB201805174D0 (en) * 2018-03-29 2018-05-16 Univ Leeds Innovations Ltd Compounds
CN109224139B (zh) * 2018-05-09 2020-08-18 祖晓麟 热敏型心脏支架
WO2019231935A1 (en) * 2018-05-29 2019-12-05 Omeros Corporation Masp-2 inhibitors and methods of use
EP4010333A1 (en) 2019-08-09 2022-06-15 Kalvista Pharmaceuticals Limited Plasma kallikrein inhibitors
WO2021113686A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Omeros Corporation Masp-2 inhibitors and methods of use
JP2023504543A (ja) 2019-12-04 2023-02-03 オメロス コーポレーション Ｍａｓｐ－２阻害剤および使用方法
CA3159167A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Neil S. Cutshall Masp-2 inhibitors and methods of use
US12030853B2 (en) 2019-12-04 2024-07-09 Omeros Corporation MASP-2 inhibitors and methods of use
GB202107722D0 (en) 2021-05-28 2021-07-14 Lunac Therapeutics Ltd Factor XIIA Inhibitors

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU178398B (en) * 1979-06-12 1982-04-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for producing new agmatine derivatives of activity against haemagglutination
IL99527A (en) * 1990-09-28 1997-08-14 Lilly Co Eli Tripeptide antithrombotic agents
SE9102462D0 (sv) * 1991-08-28 1991-08-28 Astra Ab New isosteric peptides
NZ245039A (en) * 1991-11-12 1994-12-22 Lilly Co Eli N-phenylalanyl and n-phenylglycyl derivatives of the dipeptide of l-azetidine-2-carboxylic acid and l-arginine aldehyde; anti-blood clotting compositions
SE9103612D0 (sv) * 1991-12-04 1991-12-04 Astra Ab New peptide derivatives
AU675981B2 (en) * 1992-12-02 1997-02-27 Bristol-Myers Squibb Company Guanidinyl-substituted heterocyclic thrombin inhibitors
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
CA2140598C (en) 1994-01-27 2010-03-09 Masahiro Ohshima Prolineamide derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
IL112795A (en) 2001-01-28
FI963451A0 (fi) 1996-09-03
PT672658E (pt) 2004-02-27
PL320637A1 (en) 1997-10-13
PE41696A1 (es) 1996-10-12
NO963684D0 (no) 1996-09-03
CN1147205A (zh) 1997-04-09
JP4081138B2 (ja) 2008-04-23
BR9506979A (pt) 1997-11-18
FI963451A (fi) 1996-09-03
HU227356B1 (en) 2011-04-28
EP0672658A1 (en) 1995-09-20
RU2148585C1 (ru) 2000-05-10
DK0672658T3 (da) 2004-01-12
ES2206479T3 (es) 2004-05-16
CN1515550A (zh) 2004-07-28
CN100491348C (zh) 2009-05-27
TW401403B (en) 2000-08-11
HU9602408D0 (en) 1996-11-28
MY119987A (en) 2005-08-30
DE69531753T2 (de) 2004-10-21
DE69531753D1 (de) 2003-10-23
KR100337271B1 (ko) 2002-11-30
UA67715C2 (en) 2004-07-15
NZ282588A (en) 1997-12-19
MX9603831A (es) 1997-03-29
CN1134264C (zh) 2004-01-14
ZA951617B (en) 1997-02-27
AU1975295A (en) 1995-09-18
JPH09509937A (ja) 1997-10-07
IL112795A0 (en) 1995-05-26
CZ294674B6 (cs) 2005-02-16
HUT76330A (en) 1997-08-28
CZ258496A3 (en) 1997-06-11
WO1995023609A1 (en) 1995-09-08
AU684918B2 (en) 1998-01-08
NO963684L (no) 1996-10-28
KR970701693A (ko) 1997-04-12
EP0672658B1 (en) 2003-09-17
EP1361212A1 (en) 2003-11-12
AU684918C (en) 2003-05-08
SI0672658T1 (en) 2004-02-29
PL181306B1 (en) 2001-07-31
CA2183464A1 (en) 1995-08-09
ATE250028T1 (de) 2003-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO309034B1 (no) Trombinhemmende forbindelser og farmasøytisk formulering omfattende samme
US5710130A (en) Antithrombotic agents
US5705487A (en) Antithrombotic agents
US5707966A (en) Antithrombotic agents
US5726159A (en) Antithrombotic agents
US5914319A (en) Antithrombotic agents
CA2143532A1 (en) Bisulfite adducts of arginine aldehydes
WO1997049404A1 (en) Anticoagulant agents
EP0672659B1 (en) Antithrombotic agents
EP0673936B1 (en) Antithrombotic agents
JPH07278093A (ja) 抗血栓物質
JPH0841095A (ja) 抗血栓症活性を有する化合物
GB2287027A (en) Tripeptide antithrombotic agents
US5599793A (en) Antithromobotic agents
JPH07278092A (ja) 抗血栓剤
JPH09509943A (ja) 抗血栓剤

Legal Events

Date Code Title Description
LC4 Limitation of patent rights - b3 (par. 39b patent act)

Effective date: 20021010

MM1K Lapsed by not paying the annual fees