JPH0841095A - 抗血栓症活性を有する化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 本発明は式I： 【化１】 で示されるＬ−アルギニンアルデヒド誘導体、及びそれ
を含有する医薬製剤に関する。 【効果】 本発明の化合物はトロンビンインヒビター、
凝血インヒビター及び血栓塞栓障害剤として有用であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は哺乳動物における有用な抗凝血物
質であるトロンビン阻害物質に関する。詳細には、本発
明は高い抗凝血活性、抗トロンビン活性及び経口バイオ
アベイラビリティーを有するＬ−アルギニンアルデヒド
誘導体に関する。

【０００２】血液凝固の過程である血栓症は、血栓形成
を引き起こす複雑なタンパク質分解カスケードによって
誘発される。トロンビンは、血漿中にて可溶性であるフ
ィブリノーゲンのＡａ鎖及びＢｂ鎖から活性ペプチドを
タンパク質分解的に取り出し、不溶性のフィブリン形成
を促す。

【０００３】抗凝血は現在、ヘパリン及びクマリンの投
与によって行われている。凝血及び血栓症の経口的な薬
理制御はヘパリンを使用するトロンビンの阻害を基礎と
している。ヘパリンは内生のアンチトロンビンIII（ト
ロンビンの主要な生理学的インヒビター）の阻害作用を
増強し、トロンビンに対して間接的に作用する。アンチ
トロンビンIIIの血漿レベルは変動し、表面結合トロン
ビンはこの間接的な作用に対して耐性のようであるの
で、ヘパリンは非効率的な処置となる場合がある。凝血
検定には効能及び安全性が絡んでいると考えられるの
で、ヘパリンレベルは凝血検定（特に、活性化部分トロ
ンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）検定）によってモニタ
ーしなければならない。クマリンは、プロトロンビン及
びこのタイプの別のタンパク質の合成の際に翻訳後ガン
マカルボキシル化を阻害することによりトロンビンの生
成を妨げる。この作用機序のため、クマリンの効果は投
与後６−２４時間というゆっくりとした状態でしか現れ
ることができない。さらに、クマリンは選択的な抗凝血
物質でない。クマリンもまた、凝血検定（特にトロンビ
ン時間（ＰＴ）検定）によるモニターが必要である。

【０００４】最近、天然の基質と同様の態様でタンパク
質分解酵素に認識される小さな合成ペプチドに対する関
心が高まっている。Ｄ−Ｐhe−Ｐro−Ａrg−Ｈ、Ｂoc−
Ｄ−Ｐhe−Ｐro−Ａrg−Ｈ及びＤ−ＭeＰhe−Ｐro−Ａr
g−Ｈなどのトリペプチド アルデヒド［Bajuszら, J.Me
d.Chem., 33, 1729-1735(1990)］はトロンビンの強力な
直接的阻害を示す。多くの研究者は、医薬物質の開発に
努力を払い、その同族体を合成した［例えば、Shuman
ら, J.Med.Chem., 36, 314-319(1993)、及び欧州特許出
願、公開番号４７９４８９、５４２５２５及び５２６８
７７］。

【０００５】ヘパリン及びクマリンは有効な抗凝血物質
であり、既知のトリペプチドアルデヒドのクラスの化合
物が有望視されているにもかかわらず、このトリペプチ
ドアルデヒドから薬物は未だ開発されておらず、従って
トロンビンに選択に作用し、またアンチロトンビンIII
とは別個に投与後短期間で阻害作用を表し、かつまた止
血状態を維持するのに必要な血餅の溶解を妨害しない抗
凝血物質に対する要望が存在する。

【０００６】本発明は、以下に詳述する本発明の化合物
が強力なトロンビンインヒビターであるという発見に基
づく。従って、本発明の第一の目的は、抗凝血物質とし
て有用である強力なトロンビンインヒビターである新規
なＬ−アルギニンアルデヒド誘導体を提供することにあ
る。他の目的、特徴及び利点は、特許請求の範囲の記載
及び以下の説明から当業者には明らかであろう。

【０００７】本発明は式I：

【化３】 ［式中、Ｒ^１は水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、置換又は非置
換フェニル、置換又は非置換フェニル（Ｃ₁−Ｃ₄）アル
キル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチ
ル（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、又はシクロヘキシル（Ｃ₁−
Ｃ₄）アルキルであり、Ｒ^２は水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキ
ル、置換又は非置換フェニル、置換又は非置換フェニル
（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、シクロペンチル、シクロヘキシ
ル、シクロペンチル（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、又はシクロ
ヘキシル（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキルであり、Ｒ^３は水素、Ｃ
₁−Ｃ₄アルキル、又は（Ｃ₁−Ｃ₄アルキル）Ｓ(Ｏ)n
（ここにｎは１又は２）であるか、Ｒ^１及びＲ^２はそれ
らが結合している炭素原子と一緒になって、５又は６員
のシクロアルキル基、フェニル基又はノルボルナニル基
を与え、Ｒ^２及びＲ^３はそれらが結合している炭素及び
窒素原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄の中から
選ばれる別のヘテロ原子を１つさらに含有することがで
きる置換もしくは非置換の５又は６員の窒素含有ヘテロ
環、又は窒素、酸素及び硫黄の中から選ばれる別のヘテ
ロ原子を１つさらに含有することができる置換もしくは
非置換の９又は１０員の窒素含有ヘテロ環を与え、
Ｒ¹、Ｒ^２及びＲ^３はそれらが結合しているそれぞれの
炭素及び窒素原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄
の中から選ばれる別のヘテロ原子を１つさらに含有する
ことができる置換もしくは非置換の５又は６員の窒素含
有ヘテロ環、又は窒素、酸素及び硫黄の中から選ばれる
別のヘテロ原子を１つさらに含有することができる置換
もしくは非置換の９又は１０員の窒素含有ヘテロ環を与
え、Ｙは式：

【化４】 で示される基である。ただし、Ｙがプロリニルのとき
は、Ｒ^１は水素であり、Ｒ^３は水素であるが、Ｒ^２はフ
ェニルでない。さらに、Ｙがプロリニルのときは、Ｒ^２
は水素であり、Ｒ^３は水素であるが、Ｒ^１はベンジルで
ない。］で示されるトロンビン阻害化合物に関する。

【０００８】本発明は式Iで示される化合物に加え、製
薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と共に式Iで
示される化合物を含有してなる医薬製剤をも目的とす
る。また、本発明は、処置を必要としている哺乳動物に
凝血阻害量の式Iの化合物を投与することからなる、哺
乳動物の凝血を阻害する方法に関する。さらに、本発明
は、処置を必要としている哺乳動物にトロンビン阻害量
の式Iの化合物を投与することからなる、トロンビンを
阻害する方法に関する。また、本発明は、処置を必要と
している哺乳動物に式Iの化合物の有効量を投与するこ
とからなる、血栓塞栓障害を処置する方法に関する。

【０００９】本発明はトロンビンの新規なインヒビタ
ー、その化合物を活性成分として含有する医薬組成物、
ならびに静脈血栓症、肺塞栓症、動脈血栓症、特に心筋
虚血、心筋梗塞及び脳血栓、全身凝固亢進状態及び局所
凝固亢進状態、例えば血管形成及び冠動脈バイパス手術
後、及び炎症反応が関連する全身性の組織障害、などの
血栓塞栓障害の予防及び処置のための抗凝血物質として
の使用に関する。

【００１０】「アルキル」なる用語はそれ単独で、又は
別の置換分の一部として、特に明記しないかぎり指示し
た炭素数を有する直鎖又は分枝鎖アルキル基、例えばメ
チル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチ
ル、ｔ−ブチル、イソブチル及びsec−ブチルを意味す
る。

【００１１】「アルコキシ」なる用語は、酸素原子を介
して親部分と結合している、指示した数の炭素原子を有
する直鎖又は分枝鎖アルキル基を意味する。「ハロ」な
る用語はクロロ、フルオロ、ブロモ又はヨウドを意味す
る。「ジ（Ｃ₁−Ｃ₄アルキル）アミノ」なる用語は、そ
れぞれのアルキル基が個別に、指示した炭素原子数を有
している−Ｎ（Ｃ₁−Ｃ₄アルキル）₂ の基を意味する。

【００１２】「フェニル（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル」なる用
語は、アルキル基の末端炭素原子にフェニル環が結合し
ている、指示した炭素原子数を有する直鎖アルキル基を
意味する。「シクロペンチル（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル」な
る用語は、アルキル基の末端炭素原子にシクロペンチル
環が結合している、指示した炭素原子数を有する直鎖ア
ルキル基を意味する。「シクロヘキシル（Ｃ₁−Ｃ₄）ア
ルキル」なる用語は、アルキル基の末端炭素原子にシク
ロヘキシル環が結合している、指示した炭素原子数を有
する直鎖アルキル基を意味する。

【００１３】「ノルボルナニル」なる用語は、式：

【化５】 ［式中、−ＮＨＲ^３は式Iに示すアミノ基と同じであ
る］で示される基を意味する。

【００１４】置換フェニル及び置換フェニル（Ｃ₁−
Ｃ₄）アルキルは、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₄アルキ
ル、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ、アミノ（−ＮＨ₂）、及びＣ₁
−Ｃ₄アルキルアミノの中から選ばれる１つ又はそれ以
上の同一又は異なった置換分を有することができる。

【００１５】「５又は６員の窒素含有ヘテロ環」なる用
語は、１つの窒素原子、１つの硫黄原子又は１つの酸素
原子をさらに含有することができる、１つの窒素原子を
含有する安定な構造体を与えるあらゆる５又は６員の窒
素含有環を意味する。ヘテロ環にはピラゾリル、オキサ
ゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリ
ル、ピラニル、ピリニジニル、ピラジニル、及びオキサ
ジニルなどがある。

【００１６】「９又は１０員の窒素含有ヘテロ環」なる
用語は、上記の５又は６員環がゲンゼン環、シクロヘキ
サン環又は安定な構造体を与える別のヘテロ環と縮合し
ている二環式の基を意味する。これらのヘテロ環にはイ
ンドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフリル、ベンゾオキ
サゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾピラゾリ
ル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリ
ル、及びベンゾチアゾリルなどがあるが、これらに限定
されない。これらのヘテロ環の中には互変異性体の形態
で存在できるものがある。これらすべての形態が本発明
の範囲内に包含される。

【００１７】Ｒ^２及びＲ^３又はＲ¹、Ｒ^２及びＲ^３がそ
れらがそれぞれ結合している炭素及び窒素原子と一緒に
なって、窒素、酸素及び硫黄の中から選ばれる別のヘテ
ロ原子を１つさらに含有できる置換されている安定な５
又は６員の窒素含有ヘテロ環、又は窒素、酸素及び硫黄
の中から選ばれる別のヘテロ原子を１つさらに含有でき
る置換されている安定な９又は１０員の窒素含有ヘテロ
環を与える場合、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₄アルキ
ル、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ、アミノ（−ＮＨ₂）、モノ
（Ｃ₁−Ｃ₄アルキル）アミノ、ジ（Ｃ₁−Ｃ₄アルキル）
アミノ、メルカプト、（Ｃ₁−Ｃ₄アルキル）チオ（−Ｓ
(Ｏ)pＣ₁−Ｃ₄アルキル）、−ＮＨＳ(Ｏ)p（Ｃ₁−Ｃ₄ア
ルキル）、−ＮＨＣ(Ｏ)Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、−Ｓ(Ｏ)p
ＮＨ₂、−Ｓ(Ｏ)pＮＨ（Ｃ₁−Ｃ₄アルキル）、及び−Ｓ
(Ｏ)pＮ（Ｃ₁−Ｃ₄アルキル）₂［ここにｐは１又は２で
ある］の中から選ばれる１つ又は２つの置換分を有す
る。

【００１８】式：

【化６】 で示される基はそれぞれプロリニル及びアゼチジン−２
−カルボニルと呼称され、それぞれＰro及びＡztと略さ
れる。

【００１９】式Iでは、基：Ｙのカルボニル官能基が式I
に示すアミノ基に結合している。Ｙのアミノ官能基が式
Iに示すカルボニル基に結合している。

【００２０】上記のヘテロ環は互変形態として存在する
ことができる。これらすべての形態が本発明の範囲内に
包含される。式I及び置換分Ｙにおける星印は（Ｌ）型
であるキラル中心を示す。

【００２１】さらに、置換分Ｒ^１及びＲ^２が結合してい
る炭素原子において、その置換分によってはジアステレ
オマーが存在することができる。本発明の化合物は２つ
又はそれ以上のジアステレオマーの混合物、及び個々の
異性体それぞれを包含している。本発明の好ましい化合
物は式I中、Ｒ^１が水素、フェニル（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキ
ル又はシクロヘキシル（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキルであり、Ｒ
^２が水素、シクロペンチル、シクロヘキシル又はフェニ
ルであり、Ｒ^３が水素又はＣ₁−Ｃ₄アルキルであるか、
又はＲ^１及びＲ^２がそれらが結合している炭素原子と一
緒になって、５又は６員のシクロアルキル基を与え、又
はＲ¹、Ｒ^２及びＲ^３がそれらがそれぞれ結合している
炭素及び窒素原子と一緒になって、非置換又は置換９又
は１０員の窒素含有ヘテロ環を与え、そしてＹが式Iの
定義と同意義である化合物、及び製薬的に許容されるそ
の塩及び溶媒和物である［ただし、Ｙがプロリニルの場
合、Ｒ^１は水素であり、Ｒ^３は水素であるが、Ｒ^２はフ
ェニルではない。さらに、Ｙがプロリニルの場合、Ｒ^２
は水素であり、Ｒ^３は水素であるが、Ｒ^１はベンジルで
ない。］。

【００２２】本発明の特に好ましい化合物は式I中、Ｒ
^１が水素、ベンジル又はシクロヘキシルメチルであり、
Ｒ^２が水素、シクロヘキシル又はフェニルであり、Ｒ^３
が水素又はＣ₁−Ｃ₃アルキルであるか、又はＲ^１及びＲ
^２がそれらが結合している炭素原子と一緒になって、５
又は６員のシクロアルキル基を与え、そしてＹが式Iの
定義と同意義である化合物、及び製薬的に許容されるそ
の塩及び溶媒和物である［ただし、Ｙがプロリニルの場
合、Ｒ^１は水素であり、Ｒ^３は水素であるが、Ｒ^２はフ
ェニルではない。さらに、Ｙがプロリニルの場合、Ｒ^２
は水素であり、Ｒ^３は水素であるが、Ｒ^１はベンジルで
ない。］。

【００２３】上述のように、本発明は上記式Iで示され
る化合物の製薬的に許容される塩を包含する。本発明の
具体的な化合物は充分な塩基性を有する１つ又はそれ以
上の官能基を有しており、従って多くの無毒性の無機及
び有機酸と反応することができる。酸付加塩を形成させ
るのに普通に使用される酸には塩酸、臭酸、ヨウ化水素
酸、硫酸、リン酸などの無機酸、及びｐ−トルエンスル
ホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−ブロモフェ
ニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香
酸、酢酸などの有機酸がある。このような製薬的に許容
される塩としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜
硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン
酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸酸、塩化物、臭
化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸
塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸
塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオン酸塩、シ
ュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セ
バシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，
４−ジオエート、ヘキシン−１，６−ジオエート、安息
香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニト
ロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香
酸塩、フマル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸
塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニ
ル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシ乳酸
塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、
プロピオンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸
塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩など
が例示される。好ましい製薬的に許容される酸付加塩
は、塩酸、臭化水素酸及び硫酸などの鉱酸から生成され
る塩である。

【００２４】上記のように、本発明は式Iで示される化
合物の溶媒和物及びその製薬的に許容される塩を包含す
る。本発明の個々の化合物又はその製薬的に許容される
塩は水及び通常の有機溶媒と溶媒和物を形成することが
できる。このような溶媒和物も本発明の化合物の範囲内
に包含される。

【００２５】式Iの化合物の製造は、式II：

【化７】 ［式中、各Ｐは個別にアミノ保護基から選択される］で
示される対応する化合物の保護基Ｐを同時に、又は順次
除去することによって行われる。次いで、式Iの化合物
の塩が必要であれば、製薬的に許容される酸から塩を形
成させる。例えば、アミノ保護基がベンジルオキシカル
ボニルである式IIで示される化合物は、エタノール性希
塩酸中、環境圧下、パラジウム−炭素触媒により水素添
加することによって、対応する式Iの化合物の塩酸塩に
変換することができる。

【００２６】式Iで示される化合物は既知のペプチドカ
ップリング方法によって製造される。このような１つの
方法よれば、酸：ＰＸ−ＣＯＯＨ［式中、ＸはＲ³−Ｎ
Ｈ−ＣＨＲ²−ＣＨＲ¹（ここに、Ｒ¹、Ｒ^２及びＲ^３は
式Iにおける定義と同意義）であり、Ｐはアミノ保護基
である］をカルボキシ保護プロリン（又はアゼチジン−
２−カルボキシエステル）とカップリングさせ、ジペプ
チドを形成させる。次いで、プロリン部分のカルボキシ
保護エステル基を除去（脱ブロック又は脱エステル化）
し、得られたジペプチドの遊離酸形態をアルギニンのラ
クタム形態とカップリングさせる。この一連の反応は以
下の反応式によって表される：

【化８】 ［式中、Ｐはアミノ保護基である］

【００２７】カップリングしたＡrg（Ｐ）ラクタム生成
物(c)を、不活性溶媒又は溶媒混液中にて水素化還元
剤、好ましくは水素化アルミニウムリチウム又は水素化
トリtert−ブトキシアルミノリチウムと反応させ、ラク
タム環を還元し、式：

【化９】 ［式中、Ｐはアミノ保護基である］で示される、アルギ
ニン アルデヒド形態のトリペプチドを製造する。その
保護基は、金属触媒による水素添加反応など、当業者に
既知の手法によって除去される。

【００２８】アルギニンのラクタム形態はアミノ保護ア
ルギニン［Ａrg−ＯＨ］の分子内カップリングによって
得られる。例えば、式：

【化１０】 ［ここに、Ｂocはt−ブチルオキシカルボニルであり、
Ｃbzはベンジルオキシカルボニルである］で示されるＢ
oc−Ａrg(Ｃbz)ＯＨをまず、クロロギ酸エステル、例え
ばクロロギ酸エチルからクロロギ酸イソブチルによって
活性混合無水物などの活性エステル形態に変換する。エ
ステル形成はＮ−メチルモルホリンなどの３級アミンの
存在下に行う。さらに、又は別の３級アミン塩基、例え
ばトリエチルアミン又はジイソプロピルアミンを加える
と内部アシル化が起こり、式：

【化１１】 で示されるジ−アミノ保護アルギニンのラクタム形態が
得られる。先の反応式に示すようにＰＸ(Ｃ＝Ｏ)−Ｐro
−ＯＨとのカップリングに使用する前に、Ｂoc又は他の
アミノ保護基はトリフルオロ酢酸又は塩酸によって選択
的に除去し、必要な遊離アミノ基を生成させる。

【００２９】ＰＸＣＯＯＨ化合物をプロリンエステルと
カップリングさせるのは［ここに、ＸはＲ³−ＮＨ−Ｃ
ＨＲ²−ＣＨＲ^１であり、Ｒ¹、Ｒ^２及びＲ^３は式Iにお
ける前記の定義と同意義である］、そのアミノ酸のアミ
ノ基をまず保護して行う。アミノ基の一時的な保護又は
ブロックに普通に使用される通常のアミノ保護基が使用
される。

【００３０】アミノ保護基とは、化合物上の別の官能基
が反応している間にそのアミノ官能基をブロック又は保
護するのに通常使用されるアミノ基の置換分を意味す
る。このようなアミノ保護基の例としては、ホルミル
基、トリチル基、フタルイミド基、トリクロロアセチル
基、クロロアセチル、ブロモアセチル及びヨードアセチ
ル基、ウレタン型ブロッキング基、例えばベンジルオキ
シカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、４−フェニル
ベンジルオキシカルボニル、２−メチルベンジルオキシ
カルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、
４−フルオロベンジルオキシカルボニル、４−クロロベ
ンジルオキシカルボニル、３−クロロベンジルオキシカ
ルボニル、２−クロロベンジルオキシカルボニル、２，
４−ジクロロベンジルオキシカルボニル、４−ブロモベ
ンジルオキシカルボニル、３−ブロモベンジルオキシカ
ルボニル、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、４−
シアノベンジルオキシカルボニル、２−（４−キセニ
ル）イソプロポキシカルボニル、１，１−ジフェニルエ
チ−１−イルオキシカルボニル、１，１−ジフェニルプ
ロピ−１−イルオキシカルボニル、２−フェニルプロピ
−２−イルオキシカルボニル、２−（ｐ−トルイル）プ
ロピ−２−イルオキシカルボニル、シクロペンタニルオ
キシカルボニル、１−メチルシクロペンタニルオキシカ
ルボニル、シクロヘキサニルオキシカルボニル、１−メ
チルシクロヘキサニルオキシカルボニル、２−メチルシ
クロヘキサニルオキシカルボニル、２−（４−トルイル
スルホニル）エトキシカルボニル、２−（メチルスルホ
ニル）エトキシカルボニル、２−（トリフェニルホスフ
ィノ）エトキシカルボニル、９−フルオロエニルメトキ
シカルボニル（ＦＭＯＣ）、２−（トリメチルシリル）
エトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、１−
（トリメチルシリルメチル）プロピ−１−エニルオキシ
カルボニル、５−ベンゾイソキサリルメトキシカルボニ
ル、４−アセトキシベンジルオキシカルボニル、２，
２，２−トリクロロエトキシカルボニル、２−エチニル
−２−プロポキシカルボニル、シクロプロピルメトキシ
カルボニル、４−（デシルオキシ）ベンジルオキシカル
ボニル、イソボルニルオキシカルボニル、１−ピペリジ
ルオキシカルボニルなど；ベンゾイルメチルスルホニル
基、２−（ニトロ）フェニルスルフェニル基、ジフェニ
ルホスフィン・オキシド基、及び同様のアミノ保護基な
どが挙げられる。使用するアミノ保護基の種類は、誘導
されるアミノ基が分子の別の部位における以後の反応に
対して安定であり、かつ残りの分子を破壊することなく
適当な時点に除去できる限り、重要でない。好ましいア
ミノ保護基はベンジルオキシカルボニル、アリルオキシ
カルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、トリチル基であ
る。セファロスポリン、ペニシリン及びペプチド分野に
て使用される同様のアミノ保護基も上記の用語に包含さ
れる。この用語が意味する基のさらなる例は、J.W.Bart
on, 「Protective Groups in Organic Chemistry」, J.
G.W.McOmie編, プレノーン・プレス, ニューヨーク, N.
Y., 1973, 第2章、及びT.W.Greene, 「Protective Grou
ps in Organic Synthesis」, John Wiley and Sons, ニ
ューヨーク, N.Y., 1981, 第7章に記載されている。関
連する用語「保護アミノ」は、上記のアミノ保護基に置
換されているアミノ基を意味する。

【００３１】カップリング反応を行うには、アミノ保護
基がそのままで残る条件下に除去することができるプロ
リンのエステル保護基を使用する。かくして、アシル化
酸ＰＸＣＯＯＨのアミノ保護基はその場所に残り、反応
式１において化合物(c)を生成させるアルギニンラクタ
ム化合物との以後のカップリングの際にアミノ基を保護
する。

【００３２】本明細書中で使用しているカルボキシ保護
エステル基とは、反応が他の官能基で行われている際に
カルボン酸基をブロック又は保護するのに通常使用され
るカルボン酸基のエステル誘導体の１つを意味する。こ
のようなカルボン酸保護基としては、Ｃ₁−Ｃ₃アルキ
ル、ベンジル、４−ニトロベンジル、４−メトキシベン
ジル、３，４−ジメトキシベンジル、２，４−ジメトキ
シベンジル、２，４，６−トリメトキシベンジル、２，
４，６−トリメチルベンジル、ペンタメチルベンジル、
３，４−メチレンジオキシベンジル、ベンズヒドリル、
４，４'−ジメトキシベンズヒドリル、２，２'，４，
４'−テトラメトキシベンズヒドリル、ｔ−ブチル、ｔ
−アミル、トリチル、４−メトキシトリチル、４，４'
−ジメトキシトリチル、４，４'，４''−トリメトキシ
トリチル、２−フェニルプロピ−２−イル、トリメチル
シリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、フェナシル、２，
２，２−トリクロロエチル、２−（トリメチルシリル）
エチル、２−（ジ（ｎ−ブチル）メチルシリル）エチ
ル、ｐ−トルエンスルホニルエチル、４−ニトロベンジ
ルスルホニルエチル、アリル、シンナミル、１−（トリ
メチルシリルメチル）−プロピ−１−エン−３−イル、
及び同様の部分が挙げられる。使用するカルボキシ保護
基の種類は、別の部位での以後の反応条件に対してその
誘導化カルボン酸が安定であり、残りの分子を破壊する
ことなく適当な時点に除去できる限り、重要でない。具
体的には、カルボキシ保護された分子は、求核性の強塩
基又は高度に活性化された金属触媒、例えばラニーニッ
ケルを使用する還元条件にさらさないことが重要であ
る。（このような除去の苛酷な条件は以下に示すアミノ
保護基を除去する場合にも避けるべきである） 好まし
いカルボキシ保護基はＣ₁−Ｃ₃アルキル及びベンジルで
ある。これらの基のさらなる例示は、E.Haslam, 「Prot
ective Groups in Organic Chemistry」, J.G.W.McOmie
編, プレノーン・プレス,ニューヨーク, N.Y., 1973,
第2章、及びT.W.Greene, 「Protective Groups inOrgan
ic Synthesis」, John Wiley and Sons, ニューヨーク,
N.Y., 1981, 第7章に記載されている。

【００３３】Ｙがアゼチジニル（又はプロリニル）であ
る式Iの化合物はペプチドのカップリングの既知の方法
によって類似の態様で製造される。このような１つの方
法では、アルギニンの環状ラクタム(e)を製造し、それ
を以下に示すようにアミノ保護アゼチジン−２−カルボ
ン酸(d)とカップリングし、ジペプチド(f)を得る：

【化１２】 ［ここに、Ｐはベンジルオキシカルボニル（Ｃbz）基、
ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂoc）、ｐ−トルエンスルホ
ニルなどのアミノ保護基である］

【００３４】使用するアミノ保護基はマイルドな酸（例
えば、トリフルオロ酢酸）又は強酸（例えば、塩酸）に
よる水素添加又は処置によって除去されるのが、好まし
い。他の適当なアミノ保護基の例は、T.W.Greene及びP.
G.M.Wuts, 「Protective Groups in Organic Synthesi
s」, 第7章, 309-405頁, John Wiley and Sons,Inc.出
版社に記載されている。Ｂoc又は他の適当な保護基をア
ゼチジン環窒素から除去し、次いで所望のアミノ酸アシ
ル基でアシル化し、以下に示すトリペプチドを得る：

【化１３】

【００３５】Ｙがアゼチジニル−２−カルボニルである
本発明の化合物群を例示して説明してきたが、当業者な
らば、これらの手法がＹがプロリニルである化合物群の
製造にも使用できることは理解されよう。

【００３６】カップリングしたＡrg（Ｐ）ラクタム生成
物(g)を不活性溶媒又は溶媒混液中にて、水素化還元
剤、好ましくは水素化アルミニウムリチウム又は水素化
トリ−tert−ブトキシアルミノリチウムで還元し、ラク
タムを還元し、式： ＰＸ（Ｃ＝Ｏ）−Ａzt−Ａrg（Ｐ）−Ｈ ［式中、Ｐはアミノ保護基である］で示されるアルギニ
ン アルデヒド形態のトリペプチドを得る。保護基は、
金属触媒による水素添加反応など、当業者に知られてい
る手法によって除去する。

【００３７】あるいは、本発明の化合物は、酸化合物：
ＰＸＣＯＯＨをカルボキシ保護されたアゼチジン−２−
カルボン酸とカップリングさせて製造する。得られたジ
ペプチドを脱保護し、次いで上記のようにして製造した
ラクタム形態のアミノ保護されたアルギニンとカップリ
ングする。次いで、得られたトリペプチドを還元してラ
クタム環を開環させ、上記のようにアミノ保護されたア
ルギナル トリペプチドを製造する。

【００３８】ＰＸＣＯＯＨ化合物のカップリングは、ア
ミノ酸のアミノ基をまず保護することによって行われ
る。アミノ基の一時的な保護又はブロッキングに普通に
使用されている通常のアミノ保護基が使用される。この
ような保護基の例は既述している。

【００３９】上記のカップリング反応は冷所にて、好ま
しくは−２０℃から約１５℃の温度で行う。また、この
カップリング反応はジメチルホルムアミド、ジメチルア
セトアミド、テトラヒドロフラン、メチレンクロライ
ド、クロロホルム、及び同様の普通の溶媒又はこれらの
溶媒の混液など、不活性有機溶媒中にて行う。カップリ
ング反応においてアシル化する酸の活性エステルを使用
する場合は、一般には無水条件下に行う。

【００４０】本発明の化合物は酸付加塩の形態で単離す
るのが最善である。式Iで示される化合物と上記の酸と
の塩は抗トロンビン物質を投与し、及びこれらの物質の
製剤を調製するのに製薬的に許容される塩として有用で
ある。ペプチドの単離及び精製の際には他の酸付加塩を
調製し使用することができる。例えば、メタンスルホン
酸、ｎ−ブタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸及
びナフタレンスルホン酸などのスルホン酸によって形成
される塩も使用することができる。

【００４１】式Iの化合物を精製するにあたり同時に所
望の安定な塩形態を調製する好ましい方法は、米国特許
第５，２５０，６６０号に記載されている。この方法に
よれば、水性成分がpＨ２．５の硫酸又は塩酸でありア
セトニトリルが有機成分であるＣ₁₈逆相クロマトグラフ
ィーによって調製的に精製し、安定な硫酸塩又は塩酸塩
を得る。酸性溶離剤のpＨはヒドロキシ型の陰イオン交
換樹脂、例えばＢio−Ｒad ＡＧ−１Ｘ８により約４か
ら約６に調節する。pＨを調節した後、トリペプチド硫
酸塩又は塩酸塩の溶液を凍結乾燥し、乾燥粉末形態の純
粋な塩とする。この操作を例示すると、粗製の２−アミ
ノシクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrg−Ｈ
塩酸塩を水に溶解し、得られた溶液をＶydac Ｃ₁₈ ＲＰ
−ＨＰＬＣ５cm×５０cmカラムにかける。１０時間かけ
てＡの２−２０％Ｂグラジエント（Ａ＝０．０５％塩
酸；Ｂ＝アセトニトリル）を使用する。多くの画分を採
取し、分析用ＲＰ−ＨＰＬＣで測定される生成物を含有
する画分をプールする。プールした画分のpＨをヒドロ
キシ型のＡＧ−１Ｘ８樹脂［Ｂio−Ｒad，カリフォルニ
ア９４８０４，リッチモンド，ラガッタ・ブールバード
３３００番］によってpＨ４．０−４．５に調節する。
得られた溶液を濾過し、濾液を凍結乾燥して、塩酸塩形
態の純粋なＬ−、Ｌ−化合物を得る。

【００４２】基：Ｒ³−ＮＨ−ＣＨＲ²−ＣＨＲ^１のジア
ステレオマーの光学活性異性体も本発明の一部と考え
る。このような光学活性異性体は上記の手法によりそれ
ぞれの光学活性前駆体から、又はラセミ混合物の光学分
割によって調製することができる。この光学分割は、キ
メラ試薬と誘導化し、クロマトグラフィー又は結晶化を
繰り返すことで行うことができる。キメラな補助体を常
法によって除去し、本発明の化合物の実質的に光学活性
な異性体又はその前駆体を製造する。光学分割について
の詳細は、Jacquesら, Enantiomers, Racemates, and R
esolutions, JohnWiley & Sons, 1981から得ることがで
きる。

【００４３】本発明の化合物の合成において最初の出発
物質として使用される化合物は充分に知られており、市
販されていない場合でも、当業者が普通に使用する標準
的な手法によって容易に合成される。本発明をさらに詳
細に説明するため、以下に実施例を挙げるが、これらは
本発明を限定するものでない。

【００４４】実施例にて使用している分析用ＨＰＬＣ方
法は次のようである：方法１ Ｖydac Ｃ₁₈逆相カラム（０．４６cm×１０cm）を使用
する日立Ｌ−６２００。Ａ（０．１％(ｖ：ｖ)水性ＴＦ
Ａ）及びＢ（アセトニトリル中、０．１％(ｖ：ｖ)ＴＦ
Ａ）からなるグラジエントを使用し、試料を溶出した。
Ｌ−４０００ＵＶ検出器を使用し、２１４nmにてクロマ
トグラムをモニターした。

【００４５】実施例にて使用している略語は以下の意味
を有している： アミノ酸：Ａrg＝アルギニン、Ｐro＝プロリン、Ａzt＝
アゼチジン−２−カルボニル Ｂoc＝ｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−ブトキシカル
ボニル） Ｂzl＝ベンジル Ｃbz＝ベンジルオキシカルボニル ＤＣＣ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル Ｅｔ₂Ｏ＝ジエチルエーテル ＥｔＯＨ＝エタノール ＦＡＢ−ＭＳ＝高速原子衝撃質量スペクトル ＦＤ−ＭＳ＝電場脱着質量スペクトル ＨＯＢＴ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物 ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー ＩＲ＝赤外吸収スペクトル ＬＡＨ＝水素化アルミニウムリチウム ＮＭＲ＝核磁気共鳴 ＭＯＣ＝メトキシカルボニル ＲＰＨＰＬＣ＝逆相高速液体クロマトグラフィー ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸 ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー 特に明記しないかぎり、pＨの調節及び処理は酸又は塩
基の水溶液を用いて行った。

【００４６】実施例１ Ｎ−メチル−３−アミノ−３−フェニルプロピオニル−
Ｌ−プロリニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド二塩酸塩
二水和物の製造 Ａ．Ｄ，Ｌ−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−フェニルプロ
ピオン酸

【化１４】 ＤＬ−３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸５０．０
ｇ（３００mmol）の１Ｎ 水性ＮaＯＨ３００ml（３００
mmol）中のスラリー（０℃）を、クロロギ酸ベンジル４
８．０ml（３４０mmol）及び１Ｎ 水性ＮaＯＨ３００ml
（３００mmol）で同時に処理した。反応物を環境温度に
て１８時間撹拌し、その時点で、濃塩酸溶液でそのpＨ
がpＨ２になるまで酸性にし、酢酸エチルで抽出した
（４×２００ml）。有機層画分をまとめ、それを硫酸ナ
トリウムで乾燥し、減圧下に蒸発させて、Ｎ−Ｃbz−３
−アミノ−３−フェニルプロピオン酸７３．４ｇ（２５
０mmol；８２％）をオフホワイトの固形物として得た。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ２９９（Ｍ⁺，１００） ＩＲ（ＫＢr）３３６２，３０３８，１６９７，１５３
２，１２８９，１２３１，１０２８，６９９ ｃｍ^−１ 元素分析（Ｃ_１７Ｈ₁₇ＮＯ₄として） 理論値：Ｃ；６８．２２，Ｈ；５．７２，Ｎ；４．６８ 実測値：Ｃ；６８．５１，Ｈ；５．８１，Ｎ；４．９０

【００４７】Ｂ． Ｄ，Ｌ−Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３
−アミノ−３−フェニルプロピオン酸

【化１５】 Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸２
２．８ｇ（７６mmol）のＴＨＦ（５０ml）溶液を、ＫＨ
３６．６ｇ（２３０mmol；鉱油中、２５％懸濁液）及び
１８−クラウン−６（１．０ｇ、４mmol）のスラリー
（０℃）に、反応温度が１０℃以下となる速度で加え
た。ＭｅＩ（８６．３ｇ；６１０mmol）のＴＨＦ（５０
ml）溶液を滴加し、得られた反応物を１０℃にて３時間
撹拌した。酢酸１５ml により反応をクエンチし、水２
００ml 中に注加した。５Ｎ 水性ＮaＯＨにより水性プ
ールのpＨを１０に調節し、ジエチルエーテルで洗浄し
た（２×１００ml）。５Ｎ 塩酸で水層のpＨを４にまで
酸性にし、酢酸エチルで抽出した（４×２００ml）。酢
酸エチル層をまとめ、それを硫酸マグネシウムで乾燥
し、減圧下に蒸発させ、オレンジ色の油１５．６ｇを
得、それをフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；
クロロホルム中、５％メタノール）によって精製し、Ｎ
−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−フェニルプロピ
オン酸１０．５ｇ（３３．５mmol；４５％）を清澄な油
として得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl₃） δ１０．０５−７．９０（ブ
ロード，１Ｈ），５．９５−５．７８（ｍ，１Ｈ），
５．２０（ｓ，２Ｈ），３．０４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈ
ｚ），２．７４（ｓ，３Ｈ） ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ３１３（Ｍ⁺，１００）

【００４８】Ｃ．Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−
３−フェニルプロピオニル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル

【化１６】 Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−フェニルプロ
ピオン酸１０．５ｇ（３３．５mmol）、Ｌ−プロリンベ
ンジルエステル８．１２ｇ（３３．５mmol）、及び１−
ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物４．５３ｇ（３
３．５mol）のＴＨＦ（３００ml）溶液（５℃）を、ジ
イソプロピルエチルアミン１２．９６ｇ（１００mmol）
及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル
カルボジイミド塩酸塩７．０８ｇ（３６．９mmol）で処
理した。得られた混合物を５℃で３０分撹拌し、６６時
間かけて環境温度にまで暖めた。減圧下に溶媒を留去
し、得られた残留物を酢酸エチル５００ml で希釈し
た。この混合物を、１Ｎ 塩酸（２×）、重炭酸ナトリ
ウムの飽和水溶液（２×）、及び食塩水で連続して洗浄
した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下に蒸発
させ、無色の油を得、それをフラッシュクロマトグラフ
ィー（ＳｉＯ₂；塩化メチレン中、１０％酢酸エチル）
で精製し、Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−フ
ェニル・プロピオニル−Ｌ−Ｐro−ベンジルエステル１
２．８８ｇ（２５．８mmol；７７％）を清澄な油として
得た。 ＩＲ（ＣＨＣｌ₃）３０２５，３０１９，３０１３，１
７４１，１６９０，１６４５，１４５３ cm^-1 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ５００（Ｍ⁺，１００） 元素分析（Ｃ₃₀Ｈ₃₂Ｎ₂Ｏ₅として） 理論値：Ｃ；７１．９８，Ｈ；６．４４，Ｎ；５．６０ 実測値：Ｃ；７２．１１，Ｈ；６．５４，Ｎ；５．６０ ［α］_D＝−４３．１゜（ｃ＝０．０１，メタノール）

【００４９】Ｄ．Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−
３−フェニルプロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbz
ラクタム

【化１７】 Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−フェニルプロ
ピオニル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル１２．５ｇ（２５
mmol）のジオキサン（２００ml）溶液を、ＬｉＯＨ５．
２３ｇ（１２５mmol）で、次いで水１００ml で処理し
た。得られた反応物を室温にて１６時間撹拌し、その時
点でジオキサンを減圧下に留去した。濁った混合物を水
２０ml で希釈し、塩化メチレンで抽出した（×２）。
５Ｎ 塩酸を用いて水層をpＨ２にまで酸性にし、クロロ
ホルムで抽出した（×３）。クロロホルム抽出液をまと
め、それを減圧下に蒸発させて、白色の泡物質として対
応する粗製の酸物質９．８５ｇを得た。期待される酸の
存在は、ＦＤ−ＭＳ（ｍ／ｅ ４１１，Ｍ＋１，１０
０）で確認し、得られた混合物を直接次の反応に使用し
た。

【００５０】粗製の酸物質９．６５ｇのＴＨＦ（１００
ml）溶液（−１５℃）を、Ｎ−メチルモルホリン２．３
８ｇ（２３mmol）で、次いでクロロギ酸イソブチル３．
２０ｇ（２３mmol）で処理した。この混合物を５分間撹
拌し、Ａrg−ラクタム８．５４ｇ（２３mmol）及びジイ
ソプロピルエチルアミン６．０７ｇ（４６mmol）のＤＭ
Ｆ及びＴＨＦ２：１混液３００ml 中溶液で処理した。
反応物を一晩かけて環境温度とし、その時点で１Ｎ 重
炭酸ナトリウム１５ml を加えた。溶媒を減圧下に蒸発
させ、得られた油を酢酸エチル２００ml 及び水１００m
l に分配した。有機層を分離し、１Ｍ ＮａＨＳＯ₄水溶
液、水、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液及び食塩水で順
次洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下
に蒸発させ、白色の泡物質を得、これをフラッシュクロ
マトグラフィー（ＳｉＯ₂；塩化メチレン中、３０％Ｃ
Ｈ₃ＣＮ）で精製し、Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミ
ノ−３−フェニルプロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−
Ｃbzラクタム６．９６ｇ（１０mmol；Ｎ−メチル−Ｎ−
Ｃbz−３−アミノ−３−フェニルプロピオニル−Ｌ−Ｐ
ro−ベンジルエステルから４０％）を白色泡物質として
得た。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ６８３（ＭＨ⁺） ＩＲ（ＣＨＣｌ₃）３３７３，３０１２，１６８７，１
６１４，１４９９，１２６６，１１８０ cm^-1 元素分析（Ｃ₃₇Ｈ₄₂Ｎ₆Ｏ₇として） 理論値：Ｃ；６５．０９，Ｈ；６．２０，Ｎ；１２．３
１ 実測値：Ｃ；６５．３１，Ｈ；６．３７，Ｎ；１１．８
５ ［α］_D＝−５２．８゜（ｃ＝０．０１，塩化メチレン）

【００５１】Ｅ．Ｎ−メチル−３−アミノ−３−フェニ
ルプロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド

【化１８】 Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−フェニルプロ
ピオニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム６．９６
ｇ（１０mmol）のＴＨＦ（１２０ml）溶液（−２５℃）
を、Ｌｉ（ｔ−ＢｕＯ）₃ＡｌＨ溶液１５ml（１５mmo
l；ＴＨＦ中、１Ｍ）で処理するに当たり、反応温度が
−２０℃を越えるまで暖まらないようにした。得られた
反応物を−２５℃で２．５時間撹拌し、それを１Ｎ 塩
酸１００mlに注加した。その混合物をＴＨＦ：ヘキサン
の１：１混液で（２×３００ml）、次いで酢酸エチル
（２×３００ml）で抽出した。酢酸エチル抽出液をまと
め、それを硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下に蒸発さ
せ、白色泡物質６．８８ｇを得た。所望の生成物の存在
は、ＦＤ−ＭＳ（ｍ／ｅ ６８５，Ｍ⁺）で確認し、得ら
れた混合物を直接次の反応に使用した。

【００５２】粗製の還元生成物のエタノール３００ml、
水１００ml 及び１Ｎ 塩酸１５ml中溶液に５％Ｐｄ／Ｃ
１．７ｇを加え、得られた混合物を水素ガス蒸気で３
時間処理した。触媒を濾過し、エタノール：水３：１の
混液２００ml で洗浄した。濾液をまとめ、減圧下に蒸
発させて１５ml とし、水で希釈して７５ml に戻した。
ＡＧ １−Ｘ８陰イオン交換樹脂で混合物のpＨを４に調
節し、凍結乾燥して、Ｎ−メチル−３−アミノ−３−フ
ェニルプロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド二
塩酸塩 二水和物３．６ｇ（６．９mmol；Ｎ−メチル−
Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−フェニルプロピオニル−Ｌ
−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタムから６９％）を得た。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｅ ４１７（ＭＨ⁺，１００） ＩＲ（ＫＢｒ）３３１４，２９５８，１６５７，１４５
７，７０３ cm^-1 元素分析（Ｃ₂₁Ｈ₃₂Ｎ₆Ｏ₃・２ＨＣｌ・２Ｈ₂Ｏとし
て） 理論値：Ｃ；４８．００，Ｈ；７．２９，Ｎ；１５．９
９ 実測値：Ｃ；４７．５４，Ｈ；７．０４，Ｎ；１５．９
２ ［α］_D＝−９０．３゜（ｃ＝０．０１，メタノール）

【００５３】実施例２ Ｎ−メチル−３−アミノ−３−シクロヘキシルプロピオ
ニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド二塩酸塩 半水和
物の製造

【００５４】Ａ．Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−シクロヘ
キシルプロピオン酸

【化１９】 ３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸２５ｇ(１５１m
mol)のＨＯＡc(４５０ml)溶液に５％ Ｒh／Ａl₂Ｏ₃２５
ｇを入れ、その混合物を４.１bar(６０psi)の圧力下に
６０℃で３０時間水素添加した。その反応物をケイ藻土
で濾過して、減圧下に蒸発させると、暗色の油状物質が
得られた。所望の生成物の存在をＦＤ−ＭＳ（ｍ／ｅ
１７２，ＭＨ⁺，１００）により確認した。実質的には
実施例１.Ａの手順に従って、その粗製の還元生成物を
塩基性条件下にベンジルクロロホルメート(２５.６７
ｇ；１５１mmol)で処理すると、Ｎ−Ｃbz−３−アミノ
−３−シクロヘキシルプロピオン酸２３.４ｇが灰色の
固体として生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ３０６（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３４３８，２９３２，１７１５，１
７５１，１４５１cm^-1 元素分析（Ｃ₁₇Ｈ₂₃ＮＯ₄として） 理論値：Ｃ ６６.８６，Ｈ ７.５９，Ｎ ４.５９ 実測値：Ｃ ６６.５６，Ｈ ７.６５，Ｎ ４.４１

【００５５】Ｂ．Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−
３−シクロヘキシルプロピオン酸

【化２０】 実質的には実施例１.Ｂの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−３
−アミノ−３−シクロヘキシルプロピオン酸１１.０ｇ
(３６.０７mmol)をＫＨおよびＭeＩで処理すると、粗製
のＮ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−シクロヘキ
シルプロピオン酸メチル２４.７６ｇが生成した。実質
的には実施例１.Ｄの手順に従って、そのメチルエステ
ルを対応する酸に加水分解すると、Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃ
bz−３−アミノ−３−シクロヘキシルプロピオン酸７.
５０ｇが油状物質として生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ３２０（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１２，２９３２，１６９８，１
４５１，１１２４，９８６cm^-1

【００５６】Ｃ．Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−
３−シクロヘキシル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル

【化２１】 実質的には実施例１.Ｃの方法に従って、Ｎ−メチル−
Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−シクロヘキシルプロピオン
酸８.６ｇ(２７.０mmol)をＬ−プロリンベンジルエステ
ルに結合させた。その粗生成物をフラッシュクロマトグ
ラフィー（ＳiＯ₂；ＣＨ₂Ｃl₂中、１０％ ＥtＯＡc）に
より精製すると、Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−
３−シクロヘキシル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル５.８
０ｇ(１１.５mmol；４３％)が透明な油状物質として生
成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ５０７（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１２，２９３４，１７４２，１
６８９，１４５１，１１７２cm^-1 元素分析（Ｃ₃₀Ｈ₃₈Ｎ₂Ｏ₅として） 理論値：Ｃ ７１.１２，Ｈ ７.５６，Ｎ ５.５３ 実測値：Ｃ ７１.３０，Ｈ ７.６１，Ｎ ５.６９

【００５７】Ｄ．Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−
３−シクロヘキシルプロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ
−Ｃbzラクタム

【化２２】 実質的には実施例１.Ｄの条件に従って、Ｎ−メチル−
Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−シクロヘキシル−Ｌ−Ｐro
ベンジルエステル５.３７ｇ(１０.６mmol)を加水分解す
ると、対応する酸４.３６ｇが生成した。期待される酸
の存在をＦＤ−ＭＳ（ｍ／ｅ ４１７，Ｍ⁺１，１００）
により確認してから、その粗生成物をＣbzで保護したＡ
rgラクタム(３.８０ｇ；１０.４８mmol)に結合させた。
その結合させた生成物をフラッシュクロマトグラフィー
（ＳiＯ₂；ＣＨ₂Ｃl₂中、７５％ＥtＯＡc）により精製
すると、標記化合物４.２４ｇ(６.１７mmol；Ｎ−メチ
ル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−シクロヘキシル−Ｌ−
Ｐroベンジルエステルから５８％)が生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ６８８（Ｍ⁺），５１１（１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１１，２９３５，１６８７，１
６１５，１４９８９，１２６７，１１８２cm^-1 元素分析（Ｃ₃₇Ｈ₄₈Ｎ₆Ｏ₇として） 理論値：Ｃ ６４.５２，Ｈ ７.０２，Ｎ １２.２０ 実測値：Ｃ ６４.６３，Ｈ ７.１１，Ｎ １２.１３ ［α］_D＝−５１.８゜（ｃ＝０.０１，ＣＨ₂Ｃl₂）

【００５８】Ｅ．Ｎ−メチル−３−アミノ−３−シクロ
ヘキシルプロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド

【化２３】 実質的には実施例１.Ｅの手順に従って、Ｎ−メチル−
Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−３−シクロヘキシルプロピオニ
ル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム１.８３ｇ(２.
６６mmol)を水素化トリ−ｔ−ブトキシアルミニウムリ
チウムで還元すると、粗製の保護されたアルギナール
１.０９ｇが生成した。実施例１.Ｅに従って脱保護する
と、Ｎ−メチル−３−アミノ−３−シクロヘキシルプロ
ピオニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド０.５６ｇ
(１.０７mmol；２段階で４０％)が二塩酸塩 半水和物と
して得られた。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｅ ４２３（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＫＢr） ３３４７，２９３２，１６５７，１４５
０cm^-1 元素分析（Ｃ₂₁Ｈ₃₈Ｎ₆Ｏ₃・２ＨＣl・０.５Ｈ₂Ｏとし
て） 理論値：Ｃ ５０.１７，Ｈ ８.１４，Ｎ １６.９６ 実測値：Ｃ ４９.９９，Ｈ ８.１９，Ｎ １６.７１ ［α］_D＝−４９.３゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００５９】実施例３ Ｎ−メチル−３−アミノ−２−ベンジルプロピオニル−
Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド二塩酸塩 一水和物の製
造

【００６０】Ａ．Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−２−ベンジル
プロピオン酸エチル

【化２４】 ２−シアノ−３−フェニルプロピオン酸エチル２１.０
ｇ(１０３mmol)のＥtＯＨ(１４０ml)溶液に５％ Ｒd／
Ｃ３.０ｇおよびＨＣl(ｇ)３.０ｇを入れた。その結果
得られる混合物を４.１bar(６０psi)の圧力下に室温で
３時間水素添加した。その反応物をケイ藻土で濾過して
蒸発させると、暗色の粘稠な油状物質２５.１４ｇが得
られるので、実質的には実施例１.Ａに従って、これを
塩基性条件下にベンジルクロロホルメート(１９.３４
ｇ；１１３mmol)で処理した。その反応混合物をフラッ
シュクロマトグラフィー（ＳiＯ₂；ＣＨ₂Ｃl₂）により
精製すると、Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−２−ベンジルプロ
ピオン酸エチル１６.７０ｇ(４８.７mmol；４９％)が透
明な油状物質として生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ３４１（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３４５３，３０２９，１７２２，１
５４１，１１９６cm^-1 元素分析（Ｃ₂₀Ｈ₂₃ＮＯ₄として） 理論値：Ｃ ７０.３６，Ｈ ６.７９，Ｎ ４.１０ 実測値：Ｃ ７０.５９，Ｈ ６.８２，Ｎ ４.２１

【００６１】Ｂ．Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−２−ベンジル
プロピオン酸

【化２５】 実質的には実施例１.Ｄの条件に従って、Ｎ−Ｃbz−３
−アミノ−２−ベンジルプロピオン酸エチルのサンプル
１６.６０ｇ(４８.６８mmol)を加水分解すると、Ｎ−Ｃ
bz−３−アミノ−２−ベンジルプロピオン酸１４.４０
ｇ(４６.０mmol；９４％)が白色の固体として生成し
た。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ３１３（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０２２，１７００，１４０５，１
１４２cm^-1 元素分析（Ｃ₁₈Ｈ₁₉ＮＯ₄として） 理論値：Ｃ ６８.９９，Ｈ ６.１１，Ｎ ４.４７ 実測値：Ｃ ６８.７８，Ｈ ６.２３，Ｎ ４.５０

【００６２】Ｃ．Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−
２−ベンジルプロピオン酸

【化２６】 実質的には実施例１.Ｂの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−３
−アミノ−２−ベンジルプロピオン酸１３.９０ｇ(４
４.４mmol)をアルキル化すると、Ｎ−メチル化カルボン
酸とＮ−メチル化メチルエステルとの混合物１４.２３
ｇが生成した。実質的には実施例１.Ｄの条件に従っ
て、その粗製の混合物を加水分解すると、Ｎ−メチル−
Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−２−ベンジルプロピオン酸８.
１０ｇが生成した。期待される生成物の存在をＦＤ−Ｍ
Ｓ（ｍ／ｅ ３２８，ＭＨ⁺，１００）により確認してか
ら、その粗製の材料を次の反応に直接使用した。

【００６３】Ｄ．Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−
２−ベンジルプロピオニル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル

【化２７】 実質的には実施例１.Ｃで記載した方法に従って、粗製
のＮ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−２−ベンジルプ
ロピオン酸８.０７ｇをプロリンベンジルエステルに結
合させた。その反応混合物をフラッシュクロマトグラフ
ィー（ＳiＯ₂；ＣＨ₂Ｃl₂中、１０％ ＥtＯＡc）により
精製すると、Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−２−
ベンジルプロピオニル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル９.
０ｇ(１７.５mmol；Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ
−２−ベンジルプロピオン酸から３９％)が透明な油状
物質として生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ５１５（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１０，１７４２，１６９４，１
６３８，１４５１，１１７２cm^-1 元素分析（Ｃ₃₁Ｈ₃₄Ｎ₂Ｏ₅として） 理論値：Ｃ ７２.３５，Ｈ ６.６６，Ｎ ５.４４ 実測値：Ｃ ７２.６０，Ｈ ６.７５，Ｎ ５.４２ ［α］_D＝−５３.５゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００６４】Ｅ．Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−
２−ベンジルプロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbz
ラクタム

【化２８】 実質的には実施例１.Ｄの手順に従って、Ｎ−メチル−
Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−２−ベンジルプロピオニル−Ｌ
−Ｐroベンジルエステル９.０ｇ(１７.５mmol)を加水分
解すると、対応する酸７.１９ｇが生成した。期待され
る生成物の存在をＦＤ−ＭＳ（ｍ／ｅ ４２５，ＭＨ⁺，
１００）により確認してから、その粗製の混合物をＣbz
で保護したＡrgラクタム(６.０５ｇ；１６.６７mmol)に
結合させた。その粗生成物をフラッシュクロマトグラフ
ィー（ＳiＯ₂；ＣＨ₂Ｃl₂中、７５％ ＥtＯＡc）により
精製すると、Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−２−
ベンジルプロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラク
タム５.７１ｇ(８.２mmol；Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−３
−アミノ−２−ベンジルプロピオニル−Ｌ−Ｐroベンジ
ルエステルから４７％)が生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ６９８（Ｍ⁺２；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３３７６，３０１２，１６９９，１
６１５，１４９８，１２６７，１１８１cm^-1 元素分析（Ｃ₃₈Ｈ₄₄Ｎ₆Ｏ₇として） 理論値：Ｃ ６５.５０，Ｈ ６.３６，Ｎ １２.０６ 実測値：Ｃ ６５.３１，Ｈ ６.３９，Ｎ １２.０８ ［α］_D＝−３６.３゜（ｃ＝０.０１，ＣＨ₂Ｃl₂）

【００６５】Ｆ．Ｎ−メチル−３−アミノ−２−ベンジ
ルプロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド二塩酸
塩 一水和物

【化２９】 実質的には実施例１.Ｅの手順に従って、Ｎ−メチル−
Ｎ−Ｃbz−３−アミノ−２−ベンジルプロピオニル−Ｌ
−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム５.６５ｇ(８.１mmol)
を水素化トリ−ｔ−ブトキシアルミニウムリチウムで還
元すると、粗製の保護されたアルギナール４.７１ｇが
生成した。実質的には再び実施例１.Ｅの手順に従って
脱保護すると、粗製のＮ−メチル−３−アミノ−２−ベ
ンジルプロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド
２.４５ｇが得られた。逆相クロマトグラフィーにより
精製すると、Ｎ−メチル−３−アミノ−２−ベンジルプ
ロピオニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド１.５１ｇ
(２.９mmol；２段階で３６％）が二塩酸塩 一水和物と
して得られた。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｅ ４３１（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＫＢr） ３３９０，１６５３，１４５３，７５４
cm^-1 元素分析（Ｃ₂₂Ｈ₃₄Ｎ₆Ｏ₃・２ＨＣl・Ｈ₂Ｏとして） 理論値：Ｃ ５０.６７，Ｈ ７.３４，Ｎ １６.１１ 実測値：Ｃ ５０.５２，Ｈ ７.２４，Ｎ １５.９７ ［α］_D＝−１０３.８゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００６６】実施例４ ２−(２−ピペリジニル)アセチル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−アル
ギニンアルデヒド二塩酸塩 一水和物の製造

【００６７】Ａ．Ｎ−Ｃbz−２−(２−ピペリジノ)酢酸

【化３０】 ２−ピリジル酢酸２４.５ｇ(１４０mmol)のＥtＯＨ(４
７０ml)溶液にＰtＯ₂５.０ｇを入れ、その混合物を４.
１bar(６０psi)の圧力下に４０℃で６時間水素添加し
た。その反応物をケイ藻土で濾過して蒸発させると、灰
色の油状物質２９.７２ｇが得られた。飽和酸の存在を
ＦＤ−ＭＳ（ｍ／ｅ １４４，Ｍ⁺１，１００）により確
認してから、実質的には実施例１.Ａの手順に従って、
その粗製の反応混合物を塩基性条件下にベンジルクロロ
ホルメート(５６.４５ｇ；３３２mmol)で処理すると、
Ｎ−Ｃbz−２−ピペリジニル酢酸が透明な油状物質とし
て生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ２７７（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１１，２９４７，１７１４，１
６９０，１４２８，１２６５cm^-1 元素分析（Ｃ₁₅Ｈ₁₉ＮＯ₄として） 理論値：Ｃ ６４.９７，Ｈ ６.９１，Ｎ ５.０５ 実測値：Ｃ ６５.２０，Ｈ ６.８８，Ｎ ５.３４

【００６８】Ｂ．Ｎ−Ｃbz−２−(２−ピペリジニル)ア
セチル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル

【化３１】 実質的には実施例１.Ｃの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−２
−(２−ピペリジニル）酢酸２０．８５ｇ(７５mmol)を
プロリンベンジルエステルに結合させた。その粗生成物
をフラッシュクロマトグラフィー（ＳiＯ₂；ＣＨ₂Ｃl₂
中、１０％ ＥtＯＡc）により精製すると、Ｎ−Ｃbz−
２−(２−ピペリジノ)アセチル−Ｌ−Ｐroベンジルエス
テル２７.６１ｇ(５９.６mmol；７９％)が透明な油状物
質として得られた。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ４６４（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１３，１７４２，１６８５，１
４２５，１２６３，１１７２cm^-1 元素分析（Ｃ₂₇Ｈ₃₂Ｎ₂Ｏ₅として） 理論値：Ｃ ６９.８１，Ｈ ６.９４，Ｎ ６.０３ 実測値：Ｃ ６９.８２，Ｈ ７.１０，Ｎ ６.０２ ［α］_D＝−４０.０゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００６９】Ｃ．Ｎ−Ｃbz−２−(２−ピペリジニル)ア
セチル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム

【化３２】 実質的には実施例１.Ｄの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−２
−(２−ピペリジニル)アセチル−Ｌ−Ｐroベンジルエス
テル２７.３６ｇ(５９mmol)を加水分解すると、対応す
る酸３１.４０ｇが生成した。その酸の存在をＦＤ−Ｍ
Ｓ（ｍ／ｅ ３７５，ＭＨ⁺，１００）により確認してか
ら、実質的には実施例１.Ｄの手順に従って、その粗製
の反応混合物のサンプル１２.８０ｇをＮ−Ｃbz−Ａrg
ラクタム(１２.４４ｇ；３４mmol)に結合させた。その
粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳiＯ₂；Ｃ
Ｈ₂Ｃl₂中、３０％ ＣＨ₃ＣＮ）により精製すると、Ｎ
−Ｃbz-2-(２−ピペリジノ)アセチル−Ｌ−Ｐro−Ａrg
−Ｎ−Ｃbzラクタム４.２７ｇ(６.５mmol)が生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ６４７（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１２，１６８５，１６１５，１
４９９，１２６４，１１７９cm^-1 元素分析（Ｃ₃₄Ｈ₄₂Ｎ₆Ｏ₇として） 理論値：Ｃ ６３.１４，Ｈ ６.５５，Ｎ １２.９９ 実測値：Ｃ ６３.４１，Ｈ ６.７１，Ｎ １２.７５ ［α］_D＝−４５.３゜（ｃ＝０.０１，ＣＨ₂Ｃl₂）

【００７０】Ｄ．２−(２−ピペリジニル)アセチル−Ｌ
−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド二塩酸塩 一水和物

【化３３】 実質的には実施例１.Ｅの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−２
−(２−ピペリジニル)アセチル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−
Ｃbzラクタム２.６０ｇ(４.２mmol)を水素化トリ−ｔ−
ブトキシアルミニウムリチウムで還元すると、粗製の保
護されたアルギナール２.１０ｇが生成した。実質的に
は再び実施例１.Ｅの手順に従って脱保護すると、２−
(２−ピペリジニル)アセチル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアル
デヒド１.１３ｇ(２.４９mmol；５９％)が二塩酸塩 一
水和物として生成した。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｅ ３８１（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＫＢr） ３３３６，２９５１，１６５７，１４５
３，１３０２，７５２cm^-1 元素分析（Ｃ₁₈Ｈ₃₂Ｎ₆Ｏ₃・２ＨＣl・Ｈ₂Ｏとして） 理論値：Ｃ ４７.６８，Ｈ ７.５０，Ｎ １８.５４ 実測値：Ｃ ４７.３７，Ｈ ７.１９，Ｎ １８.１１ ［α］_D＝−１４３.３゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００７１】実施例５ ３−ピペリジニルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−アルギニ
ンアルデヒド二塩酸塩一水和物の製造

【００７２】Ａ．Ｎ−Ｃbz−ニペコチン酸

【化３４】 実質的には実施例１.Ａの手順に従って、ニペコチン酸
２５.０ｇ(１９４mmol)を塩基性条件下にベンジルクロ
ロホルメートで保護すると、分析的に純粋なＮ−Ｃbz−
ニペコチン酸１８.０ｇ(６８mmol；３５％)が白色の固
体として生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ２６４（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＫＢr） ３０９２，２９５０，１７３２，１６４
９，１４４９，１２７３，１１５５，６９６cm^-1 元素分析（Ｃ₁₄Ｈ₁₇ＮＯ₄として） 理論値：Ｃ ６３.８７，Ｈ ６.５１，Ｎ ５.３２ 実測値：Ｃ ６３.９８，Ｈ ６.５８，Ｎ ５.３６

【００７３】Ｂ．Ｎ−Ｃbz−ニペコトイル−Ｌ−Ｐroメ
チルエステル

【化３５】 実質的には実施例１.Ｃの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−ニ
ペコチン酸１７.０ｇ(６５mmol)をプロリンメチルエス
テルに結合させた。その反応混合物をフラッシュクロマ
トグラフィー（ＳiＯ₂；ヘキサン中、７０％ ＥtＯＡ
c）により精製すると、Ｎ−Ｃbz−ニペコトイル−Ｌ−
Ｐroメチルエステル１３.９ｇ(３７.２mmol；５７％)が
透明な油状物質として生成した。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｅ ３７５（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（フィルム） ２９５１，１７４６，１６９９，１
６４４，１４２６，１２５９，１１４８，７００cm^-1 元素分析（Ｃ₂₀Ｈ₂₆Ｎ₂Ｏ₅として） 理論値：Ｃ ６４.１６，Ｈ ７.００，Ｎ ７.４８ 実測値：Ｃ ６４.１２，Ｈ ７.１６，Ｎ ７.７４

【００７４】Ｃ．Ｎ−Ｃbz−ニペコトイル−Ｌ−Ｐro−
Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム

【化３６】 実質的には実施例１.Ｄの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−ニ
ペコトイル−Ｌ−Ｐroメチルエステル１２.９ｇ(３５mm
ol)を加水分解すると、対応する酸１０.０ｇが生成し
た。実質的には再び実施例１.Ｄの手順に従って、所望
の生成物の存在をＦＤ−ＭＳ（ｍ／ｅ ３６１，Ｍ⁺１，
１００）により確認してから、その粗製の反応混合物を
Ｃbzで保護したＡrgラクタム(１０.０９ｇ；２７.８mmo
l)に結合させた。フラッシュクロマトグラフィー（Ｓi
Ｏ₂；ヘキサン中、５０％ ＥtＯＡc）により精製する
と、Ｎ−Ｃbz−ニペコトイル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃ
bzラクタム３.４５ｇ(５.５mmol；Ｎ−Ｃbz−ニペコト
イル−Ｌ−Ｐroメチルエステルから１６％)が生成し
た。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ６３３（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＫＢr） ３３７０，１７００，１６４１，１６１
２，１２６４，１１５０，６９８cm^-1 元素分析（Ｃ₃₃Ｈ₄₀Ｎ₆Ｏ₇として） 理論値：Ｃ ６２.６５，Ｈ ６.３７，Ｎ １３.２８ 実測値：Ｃ ６２.７２，Ｈ ６.５０，Ｎ １３.０１ ［α］_D＝−５３.８゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００７５】Ｄ．ニペコトイル−Ｌ−Ｐro−Ａrgアルデ
ヒド

【化３７】 実質的には実施例１.Ｅの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−ニ
ペコトイル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム３.０
ｇ(４.７mmol)を水素化トリ−ｔ−ブトキシアルミニウ
ムリチウムで還元すると、粗製の保護されたアルギナー
ル０.７５ｇが生成した。実質的には実施例１.Ｅの手順
に従って脱保護した後、その粗生成物を逆相クロマトグ
ラフィーにより精製すると、３−ピペリジニルカルボニ
ル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド０.１３ｇ(０.２mmo
l；５％)が二塩酸塩 一水和物として得られた。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｅ ３６７（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＫＢr） ３３３６，２９５１，１６５７，１４５
３，１３０２，７５２cm^-1 元素分析（Ｃ₁₈Ｈ₂Ｎ₆Ｏ₃・２ＨＣl・Ｈ₂Ｏとして） 理論値：Ｃ ４７.６８，Ｈ ７.５０，Ｎ １８.５４ 実測値：Ｃ ４７.３７，Ｈ ７.１９，Ｎ １８.１１ ［α］_D＝−３２.２゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００７６】実施例６ ３−パーヒドロインドリルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−
アルギニンアルデヒド二塩酸塩 一水和物の製造

【００７７】Ａ．Ｎ−Ｃbz−３−パーヒドロインドリル
カルボン酸

【化３８】 インドール−３−カルボン酸２５ｇ(１５５mmol)のＨ₂
Ｏ(１５００ml)およびＨＯＡc(１５０ml)溶液に５％ Ｒ
h／Ａl₂Ｏ₃２５ｇを入れ、その混合物を４.１bar(６０p
si)の圧力下に６０℃で３０時間水素添加した。その混
合物をケイ藻土で濾過して、減圧下に蒸発させると、暗
色の油状物質が得られるので、実質的には実施例１.Ａ
の手順に従って、これを塩基性条件下にベンジルクロロ
ホルメート(２６.３５ｇ；１５５mmol)で処理した。そ
の粗生成物を熱ＣＨ₂Ｃl₂／ヘキサンから結晶析出させ
ると、Ｎ−Ｃbz−３−パーヒドロインドリルカルボン酸
１６.０６ｇ(５３mmol；４９％)が白色の固体として得
られた。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ３０３（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１２，２９４２，１６９８，１
４１４，１３０５，１１１７cm^-1 元素分析（Ｃ₁₇Ｈ₂₁ＮＯ₄として） 理論値：Ｃ ６７.３１，Ｈ ６.９８，Ｎ ４.６２ 実測値：Ｃ ６７.６１，Ｈ ６.９９，Ｎ ４.７２

【００７８】Ｂ．Ｎ−Ｃbz−３−パーヒドロインドリル
カルボニル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル

【化３９】 実質的には実施例１.Ｃの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−３
−パーヒドロインドリルカルボン酸１４.０３ｇ(４６.
３mmol)をプロリンベンジルエステルに結合させると、
粗製の結合された生成物２２.６ｇが得られた。フラッ
シュクロマトグラフィー（ＳiＯ₂；ＣＨ₂Ｃl₂中、１０
％ ＥtＯＡc）により精製すると、Ｎ−Ｃbz−３−パー
ヒドロインドリルカルボニル−Ｌ−Ｐroベンジルエステ
ル１８.７９ｇ(３８.３mmol；８３％)が透明な油状物質
として生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ４９０（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１３，２９４２，１７４１，１
６９４，１６４４，１４１３，１１７４cm^-1 元素分析（Ｃ₂₉Ｈ₃₄Ｎ₂Ｏ₅として） 理論値：Ｃ ７１.００，Ｈ ６.９８，Ｎ ５.７１ 実測値：Ｃ ７１.１０，Ｈ ７.１２，Ｎ ５.７７ ［α］_D＝−５２.９゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００７９】Ｃ．Ｎ−Ｃbz−３−パーヒドロインドリル
カルボニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム

【化４０】 実質的には実施例１.Ｄの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−３
−パーヒドロインドリルカルボニル−Ｌ−Ｐroベンジル
エステル７.５４ｇ(１５.３９mmol)を加水分解すると、
対応する酸５.４５ｇが生成した。期待される酸の存在
をＦＤ−ＭＳ（ｍ／ｅ ４００，Ｍ⁺，１００）により確
認してから、その粗製の材料をＣbzで保護したＡrgラク
タム(４.７６ｇ；１３.１２mmol)に結合させた。その生
成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳiＯ₂；ＣＨ₂
Ｃl₂中、７５％ ＥtＯＡc）により精製すると、Ｎ−Ｃb
z−３−パーヒドロインドリルカルボニル−Ｌ−Ｐro−
Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム４.３０ｇ(６.４mmol；Ｎ−Ｃb
z−３−パーヒドロインドリルカルボニル−Ｌ−Ｐroベ
ンジルエステルから４２％)が生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ６７３（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１１，１６８７，１６１６，１
４９９，１２６８，１１８１，１１０８cm^-1 元素分析（Ｃ₃₆Ｈ₄₄Ｎ₆Ｏ₇として） 理論値：Ｃ ６４.２７，Ｈ ６.５９，Ｎ １２.４９ 実測値：Ｃ ６４.００，Ｈ ６.６１，Ｎ １２.１９ ［α］_D＝−５９.２゜（ｃ＝０.０１，ＣＨ₂Ｃl₂）

【００８０】Ｄ．３−パーヒドロインドリルカルボニル
−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド

【化４１】 実質的には実施例１.Ｅの手順に従って、Ｎ−Ｃbz−３
−パーヒドロインドリルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−
Ｎ−Ｃbzラクタム４.０８ｇ(６.１６mmol)を水素化トリ
−ｔ−ブトキシアルミニウムリチウムで還元すると、粗
製の保護されたアルギナール２.３１ｇが生成した。再
び実施例１.Ｅに従って脱保護すると、分析的に純粋な
３−パーヒドロインドリルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−
Ａrgアルデヒド１.３０ｇ(２.７１mmol；Ｎ−Ｃbz−３
−パーヒドロインドリルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−
Ｎ−Ｃbzラクタムから４４％)が二塩酸塩 一水和物とし
て生成した。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｅ ４０７（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＫＢr） ３３５１，２９３９，１６５８，１４４
９cm^-1 元素分析（Ｃ₂₀Ｈ₃₄Ｎ₆Ｏ₃・２ＨＣl・Ｈ₂Ｏとして） 理論値：Ｃ ４８.３０，Ｈ ７.６９，Ｎ １６.８９ 実測値：Ｃ ４８.７２，Ｈ ７.４１，Ｎ １７.０１ ［α］_D＝−６１.８゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００８１】実施例７ ２−(Ｎ−メチルアミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ
−Ｐro−Ｌ−アルギニンアルデヒド二塩酸塩の製造

【００８２】Ａ．２−(Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−アミノ)
シクロヘキサン酸

【化４２】 Ｎ−メチルアントラニル酸５０ｇ(３３１mmol)のＨ₂Ｏ
溶液にＲuＯ₂を入れ、その混合物を１３８bar(２０００
psi)の圧力下に１２０℃で１０時間水素添加した。触媒
を濾過し、その反応物を減圧下に濃縮すると、粘稠な油
状物質４７.２ｇが得られた。その油状物質を２Ｎ Ｎa
ＯＨ水溶液５００mlに入れて、ＣＨ₂Ｃl₂(２×２５０m
l)で洗浄した。実質的には実施例１.Ａの手順に従っ
て、その塩基性水相をベンジルクロロホルメート(５６.
４７ｇ；３３１mmol)で処理すると、粗製の２−(Ｎ−メ
チル−Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキサン酸５０.０３ｇ
が生成した。期待される生成物の存在をＦＤ−ＭＳ（ｍ
／ｅ ２９１，ＭＨ⁺，１００）により確認してから、そ
の粗生成物を次の段階で直接使用した。

【００８３】Ｂ．２−(Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−アミノ)
シクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル
（７Ａ）および２−(Ｎ−Ｃbz−アミノ)−シクロヘキシ
ルカルボニル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル（７Ｂ）

【化４３】 実質的には実施例１.Ｃの手順に従って、２−(Ｎ−メチ
ル−Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキサン酸のサンプル２
４.６４ｇをプロリンベンジルエステル(２０.４９ｇ；
８５mmol)に結合させた。その粗製の還元生成物をフラ
ッシュクロマトグラフィー（ＳiＯ₂；ヘキサン中、２５
％ ＥtＯＡc）により精製すると、２−(Ｎ−メチル−Ｎ
−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐro
ベンジルエステル２２.７０ｇ(４７.５mmol)および２−
(Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐ
roベンジルエステル５.３７ｇ(１１.６mmol)が生成し
た。 ２−(Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシルカ
ルボニル−Ｌ−Ｐroベンジルエステル： ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ４７８（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１３，２９３８，１７４２，１
６８３，１６３７，１４５０，１３４７，１１５５cm^-1 元素分析（Ｃ₂₈Ｈ₃₄Ｎ₂Ｏ₅として） 理論値：Ｃ ７０.２７，Ｈ ７.１６，Ｎ ５.８５ 実測値：Ｃ ７０.３９，Ｈ ７.３８，Ｎ ５.７４ ［α］_D＝−１０.９゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ） ２−(Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ
−Ｐroベンジルエステル： ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ４６４（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３０１１，２９４１，１７４１，１
６９１，１４４９，１１７３cm^-1 元素分析（Ｃ₂₇Ｈ₃₂Ｎ₂Ｏ₅として） 理論値：Ｃ ６９.８１，Ｈ ６.９４，Ｎ ６.０３ 実測値：Ｃ ６９.５５，Ｈ ７.１６，Ｎ ５.９１ ［α］_D＝−４１.６゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００８４】Ｃ．２−(Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−アミノ)
シクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrg−Ｎ−
Ｃbzラクタム

【化４４】 実質的には実施例１.Ｄの手順に従って、２−(Ｎ−メチ
ル−Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ
−Ｐroベンジルエステル２２.５５ｇ(４７mmol)を加水
分解すると、粗製の酸１８.９０ｇが生成した。実質的
には再び実施例１.Ｄと同じ手順により、期待される生
成物の存在をＦＤ−ＭＳ（ｍ／ｅ ３８９，Ｍ⁺１，１０
０）により確認してから、その粗製の材料をＣbzで保護
したＡrgラクタム(１７.２９ｇ；４７mmol)に結合させ
た。その生成物をフラッシュクロマトグラフィー（Ｓi
Ｏ₂；ＣＨ₂Ｃl₂中、３０％ ＣＨ₃ＣＮ）により精製する
と、２−(Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシ
ルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム
１２.２０ｇ(３３.６mmol；２−(Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz
−アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐroベンジ
ルエステルから７２％)が生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ６６１（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３３７５，２９４１，１６８３，１
６１５，１４９８，１１４９，１１０５cm^-1 元素分析（Ｃ₃₅Ｈ₄₄Ｎ₆Ｏ₇として） 理論値：Ｃ ６３.６２，Ｈ ６.７１，Ｎ １２.７２ 実測値：Ｃ ６３.６７，Ｈ ６.８０，Ｎ １２.９８ ［α］_D＝−３１.４゜（ｃ＝０.０１，ＣＨ₂Ｃl₂）

【００８５】Ｄ．２−(Ｎ−メチルアミノ)シクロヘキシ
ルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド二塩酸塩

【化４５】 実質的には実施例１.Ｅの手順に従って、２−(Ｎ−メチ
ル−Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ
−Ｐro−Ｌ−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム７.９０ｇ(１１.
９７mmol)を水素化トリ−ｔ−ブトキシアルミニウムリ
チウムで還元すると、粗製の保護されたアルギナール
５.４０ｇが生成した。実施例１.Ｅの手順に従って脱保
護すると、分析的に純粋な２−(Ｎ−メチルアミノ)シク
ロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド
２.８４ｇ(６.０８mmol；２−(Ｎ−メチル−Ｎ−Ｃbz−
アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａr
g−Ｎ−Ｃbzラクタムから５１％)が二塩酸塩として生成
した。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｅ ３９５（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＫＢr） ３３１８，１６５９，１４５６，１３６
３cm^-1 元素分析（Ｃ₁₉Ｈ₃₄Ｎ₆Ｏ₃・２ＨＣlとして） 理論値：Ｃ ４８.８２，Ｈ ７.７６，Ｎ １７.９８ 実測値：Ｃ ４８.５４，Ｈ ７.６３，Ｎ １７.８３ ［α］_D＝−７１.６゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００８６】実施例８ ２−アミノシクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−
アルギニンアルデヒド三塩酸塩 一水和物の製造

【００８７】Ａ．２−(Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシ
ルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム

【化４６】 実質的には実施例１.Ｄの手順に従って、２−(Ｎ−Ｃbz
−アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐro−ベン
ジルエステルのサンプル５.０９ｇ(１０.６mmol)を加水
分解すると、粗製の酸４.３４ｇが生成した。実質的に
は実施例１.Ｄと同じ手順により、期待される酸の存在
をＦＤ−ＭＳ（ｍ／ｅ ３７５，ＭＨ⁺，１００）により
確認してから、その粗製の材料をＣbzで保護したＡrgラ
クタム(４.０２ｇ；１１.１mmol)に結合させた。その生
成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳiＯ₂；ＣＨ₂
Ｃl₂中、３０％ ＣＨ₃ＣＮ）により精製すると、２−
(Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐ
ro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタム１.４６ｇ(２.２１mmol；
２−(Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ
−Ｐro−ベンジルエステルから２０％)が生成した。 ＦＤ−ＭＳ ｍ／ｅ ６４７（ＭＨ⁺；１００） ＩＲ（ＣＨＣl₃） ３３７６，２９４３，１７０３，１
６１６，１５０９，１２６７，１１８１，１０４３cm^-1 元素分析（Ｃ₃₄Ｈ₄₂Ｎ₆Ｏ₇として） 理論値：Ｃ ６３.１４，Ｈ ６.５５，Ｎ １２.９９ 実測値：Ｃ ６３.２３，Ｈ ６.４７，Ｎ １２.７９ ［α］_D＝−４３.７゜（ｃ＝０.０１，ＣＨ₂Ｃl₂）

【００８８】Ｂ．２−アミノシクロヘキシルカルボニル
−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド

【化４７】 実質的には実施例１.Ｅの手順に従って、２−(Ｎ−Ｃbz
−アミノ)シクロヘキシルカルボニル−Ｌ−Ｐro−Ａrg
−Ｎ−Ｃbzラクタム１.２８ｇ(１.９４mmol)を水素化ト
リ−ｔ−ブトキシアルミニウムリチウムで還元すると、
粗製の保護されたアルギナール０.８２ｇが生成した。
実質的には再び実施例１.Ｅの手順に従って脱保護する
と、分析的に純粋な２−アミノシクロヘキシルカルボニ
ル−Ｌ−Ｐro−Ｌ−Ａrgアルデヒド０.４０ｇ(０.８８m
mol；２−(Ｎ−Ｃbz−アミノ)シクロヘキシルカルボニ
ル−Ｌ−Ｐro−Ａrg−Ｎ−Ｃbzラクタムから４６％)が
三塩酸塩 一水和物として生成した。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｅ ３８１（Ｍ⁺；１００） ＩＲ（ＫＢr） ３３３０，１６６３，１４５１，１００
２cm^-1 元素分析（Ｃ₁₉Ｈ₃₄Ｎ₆Ｏ₃・３ＨＣl・Ｈ₂Ｏとして） 理論値：Ｃ ４８.８２，Ｈ ７.７６，Ｎ １７.９８ 実測値：Ｃ ４８.５４，Ｈ ７.６３，Ｎ １７.８３ ［α］_D＝−７４.５゜（ｃ＝０.０１，ＭeＯＨ）

【００８９】本発明の化合物は、身体本来のクロット溶
解能を強く干渉することなく、血液凝固と関連のある他
のタンパク分解酵素および非酵素タンパクによりトロン
ビンを選択的に阻害すると考えられている（本発明の化
合物は、フィブリン溶解に対して僅かな阻害作用を有す
る）。さらに、そのような選択性は、血栓溶解およびフ
ィブリン溶解を実質的に干渉することなく、血栓溶解剤
の併用を可能にすると考えられている。

【００９０】本発明の一態様では、哺乳動物においてト
ロンビンを阻害する方法であって、処置を必要とする哺
乳動物に、式Ｉで示される化合物の(トロンビン阻害)有
効量を投与することから成る方法を提供する。

【００９１】他の態様において、本発明は、血栓塞栓障
害を処置する方法であって、処置を必要とする哺乳動物
に、式Ｉで示される化合物の(血栓塞栓障害治療および
／または予防)有効量を投与することから成る方法を提
供する。

【００９２】本発明の他の態様では、哺乳動物において
凝固を阻害する方法であって、処置を必要とする哺乳動
物に、式Ｉで示される化合物の(凝固阻害)有効量を投与
することから成る方法を提供する。

【００９３】本発明の方法により意図されるトロンビン
阻害、凝固阻害および血栓塞栓障害処置には、適切な医
学療法処置および／または予防処置が包含される。

【００９４】さらなる態様において、本発明は、ヒトま
たは動物における、トロンビン阻害を必要とする病態の
処置に関する。本発明の化合物は、ヒトを含む動物にお
いて、血液および組織での血栓症および凝固性亢進の処
置または予防に有用であろうと思われる。本発明の化合
物が潜在的有効性を有する障害とは、血液および組織で
の血栓症および凝固性亢進の処置または予防におけるも
のである。本発明の化合物が処置および／または予防に
おいて潜在的有効性を有する障害には、静脈血栓症およ
び肺動脈塞栓症、心筋虚血、心筋梗塞、不安定なアンギ
ナ、血栓症に基づく発作および末梢動脈血栓症における
ような動脈血栓症が包含される。さらに、本発明の化合
物は、冠状動脈疾患、大脳動脈疾患および末梢動脈疾患
といったような、アテローム性動脈硬化症疾患の予防に
おける有効性が期待されている。さらに、本発明の化合
物は、血栓溶解性と共に心筋梗塞において有用であるこ
とが期待される。さらに、本発明の化合物は、血栓溶
解、経皮的内腔通過血管形成(percutaneous translumin
al angioplasty，ＰＴＣＡ)および冠状バイパス手術後
の閉塞再発予防における有効性が期待されている。さら
に、本発明の化合物は、顕微手術後の血栓症再発予防に
おける有効性が期待されている。さらに、本発明の化合
物は、人口臓器および心臓弁での抗凝固処置において有
用であろうと思われる。さらに、本発明の化合物は、血
液透析および散在性脈管内凝固での抗凝固処置における
有効性が期待されている。さらに期待される有効性と
は、患者のインビボにおいて使用したカテーテルや機械
的装置を洗う際におけるもの、また血液、血漿およびイ
ンビトロにおける他の血液製剤の保存用抗凝固剤として
のものである。またさらに、本発明の化合物は、転移を
含む癌、関節炎を含む炎症性疾患および糖尿病といった
ような、血液凝固が基本的原因過程または副次的病状の
原因となり得る他の疾患や障害における有効性が期待さ
れている。抗凝固化合物は、例えば、静脈内注射(iv)、
筋肉内注射(im)または皮下(sc)により、経口的に、もし
くは非経口的に投与する。

【００９５】勿論、治療効果および／または予防効果を
得るために本発明で投与される化合物の具体的な用量
は、例えば、投与される化合物、投与速度、投与経路、
および処置する病態を含め、その病気を取り巻く個々の
状況により決定される。

【００９６】上記各々の有効性に対する典型的な１日量
は、約０.０１mg／kg〜約１０００mg／kgである。その
用法は種々に変更可能であり、例えば、予防的使用に
は、１回で１日量を投与してもよいし、あるいは１日３
〜５回のように１日量を数回に分けることも適当であり
得る。重要な治療の場合においては、本発明の化合物を
約０.０１mg／kg／ｈ〜約２０mg／kg／ｈ、好ましくは
約０.１mg／kg／ｈ〜約５mg／kg／ｈの割合で、iv注入
により投与することができる。

【００９７】本発明の方法はまた、クロット溶解剤(例
えば、組織プラスミノーゲン活性化剤(t−ＰＡ)、改質t
−ＰＡ、ストレプトキナーゼまたはウロキナーゼ)を併
用しても行う。クロット形成が起こって、部分的または
全体的に動脈または静脈がふさがれた場合に、通常、ク
ロット溶解剤を使用する。本発明の化合物は、溶解剤を
投与する前に、または溶解剤と共に、もしくは溶解剤を
使用した後で投与することかでき、さらには、クロット
の再発を防ぐためにアスピリンと共に投与するのが好ま
しい。

【００９８】本発明の方法はまた、血小板凝集を阻害す
る、血小板糖タンパク受容体(IIｂ／IIIａ)拮抗剤を併
用しても行う。本発明の化合物は、クロット形成の発生
または再発を防ぐために、IIｂ／IIIａ拮抗剤を投与す
る前に、またはIIｂ／IIIａ拮抗剤と共に、もしくはII
ｂ／IIIａ拮抗剤を使用した後で投与することかでき
る。

【００９９】本発明の方法はまた、アスピリンを併用し
ても行う。本発明の化合物は、クロット形成の発生また
は再発を防ぐために、アスピリンを投与する前に、また
はアスピリンと共に、もしくはアスピリンを使用した後
で投与することかできる。上述のように、本発明の化合
物は、クロット形成剤やアスピリンを併用して投与する
のが好ましい。

【０１００】本発明はまた、上記治療法に使用するため
の医薬品製剤をも提供する。本発明の医薬品製剤は、制
約的に許容し得る担体、賦形剤または希釈剤と共に、ト
ロンビン阻害有効量の式Ｉで示される化合物を含む。経
口投与には、抗血栓化合物を、結合剤、滑剤、崩壊剤等
といったような賦形剤を含有し得るゼラチンカプセルま
たは錠剤に製剤化する。非経口投与には、抗血栓化合物
を、製薬的に許容し得る希釈剤(例えば、生理的食塩水
(０.９％)、５％ デキストロース、リンゲル液等)に製
剤化する。

【０１０１】本発明の化合物は、約０.１mg〜約１００
０mg用量を含む単位投与製剤に製剤化することができ
る。本発明の化合物は、例えば、硫酸塩、酢酸塩または
リン酸塩といったような製薬的に許容し得る塩の形であ
るのが好ましい。単位投与製剤の例には、本発明の化合
物が製薬的に許容し得る塩として５mg入った、１０mlの
滅菌ガラスアンプルが含まれる。他の単位投与製剤の例
には、本発明の化合物が製薬的に許容し得る塩として約
１０mg入った、滅菌アンプル入りの２０mlの等張食塩水
が含まれる。

【０１０２】本発明の化合物は経口、経直腸、経皮、皮
下、静脈内、筋肉内及び鼻腔内等、種々の経路から投与
できる。本発明の化合物は投与前に製剤化するのが好ま
しい。本発明の別の態様は、式Iで示される化合物又は
その製薬的に許容される塩もしくは溶媒和物を有効量
で、製薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と共に
含有する医薬製剤である。

【０１０３】このような製剤中における活性成分は製剤
当たり０．１重量％〜９９．９重量％で含有される。
「製薬的に許容される」なる用語は、担体、希釈剤又は
賦形剤が製剤の別の成分と適合しなければならず、また
その受容者にとって有害であってはならないことを意味
する。

【０１０４】本発明の製剤は周知かつ容易に入手可能な
成分を用いて既知の手法により製造される。本発明の組
成物は、患者への投与後迅速に、持続的に、又は遅延し
て活性成分を放出するよう、当業者に周知の手法によっ
て製剤化することができる。本発明の組成物を製造する
に当たっては通常、活性成分を担体と混合し、又は担体
によって希釈し、又はカプセル、サシエ、ペーパー又は
他の容器形態にできる担体内に含有させる。担体が希釈
剤として役立つなら、それはビヒクル、賦形剤又は活性
成分の媒質として機能する固形物、半固形物又は液体物
であってよい。従って、本発明の組成物は錠剤、ピル
剤、粉末剤、ロゼンジ剤、サシエ剤、カシェ剤、エリキ
シル剤、懸濁剤、乳剤、溶液剤、シロップ剤、エアロゾ
ル剤、（固形物として又は液体媒質中）、ゼラチン軟及
び硬カプセル剤、坐剤、滅菌注射用溶液剤、滅菌パッケ
ージ粉末剤などの形態とすることができる。

【０１０５】以下に製剤例を挙げて上記の事項をさらに
詳細に説明するが、これらはいかなる意味においても本
発明の範囲の限定を意図しない。「活性成分」なる用語
は当然ながら、式Iで示される化合物、又はその製薬的
に許容される塩もしくは溶媒和物を意味する。

【０１０６】製剤例１ 以下の成分を用いて、ゼラチン硬カプセル剤を製造す
る。 量（mg／カプセル剤） 活性成分 ２５０ デンプン，乾燥 ２００ ステアリン酸マグネシウム １０ 合 計 ４６０mg

【０１０７】 製剤例２ 以下の成分を用いて、錠剤を製造する。 量（mg／錠剤） 活性成分 ２５０ セルロース，微晶質 ４００ 二酸化ケイ素，フュームド １０ ステアリン酸 ５ 合 計 ６６５mg 各成分を混合して圧縮成形し、各々の重量が６６５mgの
錠剤とする。

【０１０８】製剤例３ 以下の成分を含有するエアゾール溶液を製造する。 重 量 活性成分 ０.２５ エタノール ２５.７５ プロペラント ２２（クロロジフルオロメタン） ７０.００ 合 計 １００.００ 活性成分をエタノールと混合し、その混合物にプロペラ
ント ２２を滴加して、−３０℃まで冷却し、充填容器
に移した。次いで、必要量をステンレス鋼製の容器に入
れて、残りのプロペラントで希釈する。次いで、バルブ
装置を容器に取り付ける。

【０１０９】製剤例４ 活性成分を各々６０mg含有する錠剤を以下のようにして
製造する。 活性成分 ６０ mg デンプン ４５ mg 微晶質セルロース ３５ mg ポリビニルピロリドン（１０％ 水溶液として） ４ mg カルボキシメチルセルロースナトリウム ４.５ mg ステアリン酸マグネシウム ０.５ mg タルク １ mg 合 計 １５０ mg 活性成分、デンプンおよびセルロースを米国Ｎo.４５メ
ッシュの篩にかけて、完全に混合する。その結果得られ
る粉末とポリビニルピロリドン溶液とを混合した後、そ
の混合物を米国Ｎo.１４メッシュの篩にかける。このよ
うにして製造した顆粒を５０℃で乾燥させて、米国Ｎo.
１８メッシュの篩にかける。次いで、あらかじめ米国Ｎ
o.６０メッシュの篩にかけておいたカルボキシメチルセ
ルロースナトリウム、ステアリン酸マグネシウムおよび
タルクを顆粒に加え、混合した後、これを打錠機で圧縮
すると、各々の重量が１５０mgの錠剤が得られる。

【０１１０】製剤例５ 活性成分を各々８０mg含有するカプセル剤を以下のよう
にして製造する。 活性成分 ８０ mg デンプン ５９ mg 微晶質セルロース ５９ mg ステアリン酸マグネシウム ２ mg 合 計 ２００ mg 活性成分、セルロース、デンプンおよびステアリン酸マ
グネシウムを混合して、米国Ｎo.４５メッシュの篩にか
け、ゼラチン硬カプセルに２００mg量を充填する。

【０１１１】製剤例６ 活性成分を各々２２５mg含有する坐剤を以下のようにし
て製造する。 活性成分 ２２５ mg 飽和脂肪酸グリセリド ２,０００ mg 合 計 ２,２２５ mg 活性成分を米国Ｎo.６０メッシュの篩にかけ、あらかじ
め必要最小限の熱を利用して溶解しておいた飽和脂肪酸
グリセリド中に懸濁させる。次いで、その混合物を２ｇ
容量の坐剤型に流し込んで放冷する。

【０１１２】製剤例７ ５ml用量につき活性成分を各々５０mg含有する懸濁剤を
以下のようにして製造する。 活性成分 ５０ mg カルボキシメチルセルロースナトリウム ５０ mg シロップ １.２５ ml 安息香酸溶液 ０.１０ ml 香料 適 量 着色料 適 量 精製水を加えて５mlとする 活性成分を米国Ｎo.４５メッシュの篩にかけ、カルボキ
シメチルセルロースナトリウムおよびシロップと混合し
て、滑らかなペーストとする。安息香酸溶液、香料およ
び着色料を少量の水で希釈して、撹拌しながら加える。
次いで、水を加えて、所望の容量とする。

【０１１３】製剤例８ 静脈内注射用製剤を以下のようにして製造する。 活性成分 １００ ｍｇ 等張食塩水 １,０００ mg 上記活性成分を含む溶液は、通例、１分間につき１mlの
割合で被験者に静脈内投与する。

【０１１４】本発明の化合物（式I）は哺乳動物におい
てトロンビンの作用を選択的に阻害する。有効なトロン
ビンインヒビターとなり得る本発明化合物の能力を以下
に記載の幾つかの検定により評価した。トロンビによっ
て発色基質、Ｎ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン−
Ｌ−バリル−Ｌ−アルギニル−ｐ−ニトロアニリド、Ｎ
−ベンゾイル−Ｌ−Ｐhe−Ｌ−Ｖal−Ｌ−Ａrg−ｐ−ニ
トロアニリドを加水分解させる検定にて測定される、ト
ロンビンのアミダーゼ活性のインビトロ阻害によって、
トロンビンの阻害が示される。

【０１１５】緩衝液（０．０３Ｍ トリス、０．１５Ｍ
ＮaＣl、pＨ７．４）５０μlをヒトトロンビン溶液（精
製ヒトトロンビン、Enzyme Research Laboratories, イ
ンディアナ, サウス・ベンド，８ＮＩＨ単位／ml）及び
溶媒（５０％水性メタノール(v:v)）中の試験化合物２
５ml と混合することによって、検定を実施する。次い
で、発色基質（０．２５mｇ/ml）の水溶液１５０μl を
加え、反応物におけるｐ−ニトロアニリドの放出を４０
５nmにてモニターし、その基質の加水分解の速度を測定
する。遊離のトロンビン濃度を加水分解速度に対してプ
ロットし、標準曲線を作成する。次いで、試験化合物を
用いて観察される加水分解の速度をそれぞれの検定につ
いて、標準曲線を用いて「遊離トロンビン」の値に変換
する。結合トロンビン（試験化合物に結合するトロンビ
ン）は、各検定に使用した既知の最初のトロンビン量か
ら各検定にて観察される遊離トロンビンの量を差し引く
ことで、計算される。各検定における遊離インヒビター
の量は、添加したインヒビター（試験化合物）のモル数
から結合トロンビンのモル数を差し引くことで計算され
る。

【０１１６】Ｋａｓｓ値は、トロンビンと試験化合物
(Ｉ)との反応における仮定平衡定数である。

【数１】 Ｋａｓｓは試験化合物の濃度範囲として計算し、その平
均値を１モル当たり１リットルの単位で報告する。

【０１１７】ヒトトロンビンについて既述した上記の操
作に実質的に従い、別のヒト血液凝固系セリンプロテア
ーゼを使用し、以下に示す発色基質を用いたフィブリン
分解系セリンプロテアーゼを使用し、凝固因子セリンプ
ロテアーゼ及びフィブリン分解性セリンプロテアーゼに
対する本発明化合物の選択性を評価し、さらに本発明化
合物がヒト血漿血餅フィブリン分解を実質的に妨害しな
いことを評価した。

【０１１８】ヒト第Ｘ因子、第Ｘａ因子、第ＩＸａ因
子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩａ因子はEnzyme Research
Laboratories(インディアナ, サウス・ベンド)から、ヒ
トウロキナーゼはＬeo Pharmaceuticals(デンマーク)か
ら入手し、組換え活性化プロテインＣ（ａＰＣ）は米国
特許第４，９８１，９５２号に実質的に従ってEli Lill
y and Co.にて調製した。発色基質：Ｎ−ベンゾイル−
Ｉle−Ｇlu−Ｇly−Ａrg−ｐ−ニトロアニリド（第Ｘａ
因子について）、Ｎ−Ｃbz−Ｄ−Ａrg−Ｇly−Ａrg−ｐ
−ニトロアニリド（第Ｘａ因子基質としての第ＩＸａ因
子検定）、ピログルタミル−Ｐro−Ａrg−ｐ−ニトロア
ニリド（第ＸＩａ因子及びａＰＣについて）、Ｈ−Ｄ−
Ｐro−Ｐhe−Ａrg−ｐ−ニトロアニリド（第ＸＩＩａ因
子について）、及びピログルタミル−Ｇly−Ａrg−ｐ−
ニトロアニリド（ウロキナーゼについて）はKabiVitrum
(スウェーデン, ストックホルム)又はMidwest Biotech
(インディアナ, フィッシャー)から入手した。ウシトリ
プシンはWorthington Biochemicals(ニュージャージー,
フリーホールド)から、ヒト血漿カリクレインはKabiVi
trum(スウェーデン, ストックホルム)から入手した。血
漿カリクレインについての発色基質Ｈ−Ｄ−Ｐro−Ｐhe
−Ａrg−ｐ−ニトロアニリドはKabi Vitrumから入手し
た。ヒトトロンビン及びトリプシンの基質であるＮ−ベ
ンゾイル−Ｐhe−Ｖal−Ａrg−ｐ−ニトロアニリドは、
本発明化合物について既述した手法に従って、既知のペ
プチドカップリング法により市販されている反応剤から
合成するか、又はMidwest Biotech(インディアナ, フィ
ッシャー)から入手した。

【０１１９】ヒトプラスチンはBoehringer Mannheim(イ
ンディアナ, インディアナポリス)から、ｎt-ＰＡは一
本鎖活性標品として、American Diagnostica(コネクチ
カット, グリーンウィッチ)から入手し、改変t-ＰＡ６
は当業者に既知の手法［Burckら, J.Biol.Chem.,265,51
20-5177(1990)］によってEli Lilly and Co.にて調製し
た。プラスチン発色基質であるＨ−Ｄ−Ｖal−Ｌeu−Ｌ
ys−ｐ−ニトロアニリド及びt-ＰＡ基質であるＨ−Ｄ−
Ｉle−Ｐro−Ａrg−ｐ−ニトロアニリドはKabiVitrum
（スウェーデン，ストックホルム）から入手した。

【０１２０】上記の発色基質では、Ｉle、Ｇlu、Ｇly、
Ｐro、Ａrg、Ｐhe、Ｖal、Ｌeu及びＬysなる３文字用語
を使用し、それぞれイソロイシン、グルタミン酸、グリ
シン、プロリン、アルギニン、フェニルアラニン、バリ
ン、ロイシン及びリシンの対応するアミノ酸基を示して
いる。

【０１２１】式Iで示される以下に示す化合物によって
得られるＫａｓｓ値を以下の表１に示す。

【表１】 表 １ Ｋass (Ｌ/mol×１０⁶) 実施例 番 号 ヒトトロンビン Ｘa トリプシン プラスミン t−ＰＡ 1 70 0.14 21 0.07 0.003 2 85 0.04 7 0.05 0.0004 3 12 0.04 66 0.1 0.0001 4 1.4 0.08 1.0 0.02 0.001 5 1.6 0.03 0.8 0.04 0.002 6 11 0.1 4.8 0.1 0.01 7 18.4 0.09 0.8 0.03 0.002 8 39 0.14 2.2 0.06 0.006

【０１２２】トロンビンインヒビターは好ましくは、ウ
ロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター（t-
ＰＡ）及びストレプトキナーゼにより誘発されるフィブ
リン溶解を補助すべきである。このことは、ストレプト
キナーゼ、t-ＰＡ又はウロキナーゼ血栓溶解療法に対す
る付加物としてこのようなインヒビターを治療的に使用
する際に、及び内生フィブリン溶解−補助（t-ＰＡ及び
ウロキナーゼについて）抗トロンビン物質としてこのよ
うなインヒビターを使用する際に重要である。ヒト血漿
血餅及びそれぞれのフィブリン溶解プラスミノーゲンア
クチベーターによる溶解によって、フィブリン溶解プロ
テアーゼのアミダーゼ活性を妨害しないことに加え、こ
のようなフィブリン溶解系補助作用を試験した。

【０１２３】材 料 覚醒混血猟犬（いずれかの性のHazelton-LRE, 米国，ミ
シガン，カラマズー）から、３．８％クエン酸への静脈
穿刺によりイヌ血漿を入手した。新鮮なイヌ血漿からフ
ィブリノーゲンを調製し、また従前の操作及び説明に従
って、ｉｎ−ｄａｔａ ＡＣＤヒト血液の画分Ｉ−２か
らヒトフィブリノーゲンを調製した。Smith, Biochem.
J., 185, 1-11(1980)；及びSmith, ら, Biochemistry,
11, 2958-2967(1972)。ヒトフィブリノーゲン（９８％
純度／プラスミン不含）はAmericanDiagnostica, グリ
ーンウィッチ・コネクチカットから得た。フィブリノー
ゲンＩ−２調製物の標識は既に報告されているようにし
て行った。Smith, ら，Biochemistry, 11, 2958-2967(1
972)。ウロキナーゼは Leo Pharmaceuticals(デンマー
ク)から２２００ Plough単位／バイアルとして入手し
た。ストレプトキナーゼはHoechst Pharmaceuticals(ニ
ュージャージー, ソメルビル)から入手した。

【０１２４】方法−ヒト血漿血餅のt-ＰＡによる溶解に
対する効果 トロンビン５０μl（７３ＮＩＨ単位／ml）を、０．０
２２９μＣi １２５−ヨウ素標識フィブリノーゲンを含
有するヒト血漿１００μl に加え、ヒト血漿血餅をマイ
クロテストチューブ内に形成させる。得られた血餅にウ
ロキナーゼ又はストレプトキナーゼ（５０、１００又は
１０００単位／ml）５０μl を重層し、室温で２０時間
インキュベートすることで、血餅溶解を試験した。イン
キュベート後に、チューブをベックマン遠心機で遠心し
た。上清２５μl を、ガンマカウンター用の０．０３Ｍ
トリス／０．１５Ｍ ＮaＣl緩衝液１．０ml 容量中に
加えた。トロンビン（及び置き換え緩衝液）を省くこと
で、カウント対照の１００％溶解を得た。トロンビンイ
ンヒビター化合物を１、５及び１０μｇ/ml 濃度で重層
溶液中に加え、フィブリン溶解に対する可能性ある妨害
性を評価した。フィブリン溶解物質の個々の濃度に対し
て５０％の溶解に対応する値に対してデータ点から直線
外挿し、およそのＩＣ₅₀値を算定した。

【０１２５】抗凝固活性 材 料 覚醒混血猟犬（いずれかの性のHazelton-LRE, 米国，ミ
シガン，カラマズー）又は麻酔した雄性Sprague-Dawley
ラット（Harlan Sprague-Dawly,Inc., 米国,インディア
ナ, インディアナポリス）から、３．８％クエン酸への
静脈穿刺によりイヌ血漿及びラット血漿を入手した。従
前の操作及び説明に従って、ｉｎ−ｄａｔａ ＡＣＤヒ
ト血液から画分Ｉ−２としてフィブリノーゲンを調製し
た。Smith, Biochem.J., 185, 1-11(1980)；及びSmith,
ら, Biochemistry, 11, 2958-2967(1972)。ヒトフィブ
リノーゲン（９８％純度／プラスミン不含）もAmerican
Diagnostica, グリーンウィッチ・コネクチカットから
得た。凝固試薬ＡＣＴＩＮ、トロンボプラスチン及びヒ
ト血漿はBaxter Healthcare Corp.,フロリダ,マイアミ,
デイド・ディビジョンから入手した。血漿中の凝固検定
には、Parke-Davis(ミシガン, デトロイト)から得たウ
シトロンビンを使用した。

【０１２６】方 法 抗凝固測定 凝固検定の操作は既に記載されているとおりである。Sm
ithら, Thrombosis Research, 50,163-174(1988)。Ｃo
ＡＳcreener凝固装置(American LABor, Inc.)をすべて
の凝固検定の測定に使用した。プロトロンビン時間（Ｐ
Ｔ）は、生理食塩水０．０５ml 及びトロンボプラスチ
ン−Ｃ試薬０．０５ml を試験血漿０．０５ml に加えて
測定した。活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴ
Ｔ）の測定は、試験血漿０．０５ml をアクチン試薬
０．０５ml と共に１２０秒、次いでＣaＣl₂０．０５ml
（０．０２Ｍ）と共にインキュベートすることで行う。
トロンビン時間（ＴＴ）は、生理食塩水０．０５ml 及
びトロンビン０．０５ml（１０ＮＩＨ単位／ml）を試験
血漿０．０５ml に加えることで測定した。式Iの化合物
を広範な種々の濃度でヒト又は動物血漿に加え、ＡＰＴ
Ｔ、ＰＴ及びＴＴ検定における持続化の効果を測定す
る。各検定において凝固時間を二倍にするのに要する濃
度の算定には、直線外挿法を行う。

【０１２７】

【表２】 ヒト血漿抗凝固 実施例番号 ２×凝固時間（nｇ／ml），ＴＴ １ ４０ ２ ８０ ３ ５０ ４ ７７０ ５ ５６０ ６ １９０ ７ １９０ ８ １８０

【０１２８】動 物 雄性のSprague Dawleyラット（３５０−４２５ｇ、Harl
an Sprague Dawley Inc.,IN, インディアナポリス）を
キシラジン(xylazine)２０mｇ／kg ｓ.ｃ及びケタミン
１２０mｇ／kg ｓ.ｃで麻酔し、温水ブランケット（３
７℃）上で飼育する。頚静脈にカニューレ挿入し、灌流
できるようにした。

【０１２９】動脈−静脈シャントモデル ポリエチレンＰＥ６０チューブ（長さ２０cm）を左頚静
脈及び右頚動脈にカニューレ挿入する。内腔に綿糸（５
cm）を入れたより大きなチューブ（ＰＥ１９０）の６cm
中央部分を、上記のより長いチューブ部分間に摩擦接合
させ、動脈−静脈シャント回路を形成させる。このシャ
ントを介して血液を１５分間灌流させ、次いで綿糸を注
意して取り出し、重量を測定した。湿った綿糸の重量
を、その綿糸及び血栓の総重量から差し引く［J.R.Smit
h, Br J Pharmacol, 77:29,1982を参照］。

【０１３０】動脈損傷のＦeＣｌ₃モデル 中線腹頚切開(midline ventral cervical incision)を
介して頚動脈を単離する。熱電対を各動脈下に入れ、ス
トリップチャート記録器により血管温度を連続して記録
する。熱電対の上から加圧帯のチューブ（縦に切断；
０．０５８ＩＤ×０．０７７ＯＤ×４mm，Baxter Med.
シリコン・グレード）を各頚動脈に直接回して巻いた。
ＦeＣｌ₃・６水和物を水に溶解し、その濃度（２０％）
をＦeＣｌ₃単独の実際の重量として表した。動脈を傷付
けて血栓を誘発するため、加圧帯に２．８５μlをピペ
ットで入れ、熱電対プローブ上の動脈を浸す。動脈の塞
栓は温度の急落により示される。塞栓の時間を分単位で
記録するが、この塞栓時間はＦeＣｌ₃の適用と血管温度
の急落との間の時間である［K.D.Kurz, Thromb.Res.,6
0:269,1990］。

【０１３１】自発血栓溶解モデル インビトロのデータは、トロンビンインヒビターペプチ
ドがトロンビンを阻害し、より高濃度ならば、プラスミ
ン及び組織プラスミノーゲンアクチベーターなどの他の
セリンプロテアーゼをも阻害できることを示している。
本発明化合物がインビボにおいてフィブリン溶解を阻害
するか否かを評価するため、標識した全血餅を肺循環中
に移植して、自発血栓溶解の速度を測定した。ラットの
血液（１ml）をウシトロンビン（４ＩＵ，Parke Davi
s）及び¹²⁵Ｉヒトフィブローゲン(human fibrogen)（５
μＣi，ＩＣＮ）と迅速に混合し、即座にシラスティッ
クチューブに流し込み、３７℃にて１時間インキュベー
トした。古い血栓をチューブから剥がし、１cmセグメン
トに切断し、通常の生理食塩水で３回洗浄し、各セグメ
ントをガンマーカウンターで計数した。既知のカウント
を有するセグメントをカテーテル内に吸引し、次いでそ
のカテーテルを頸静脈に移植した。カテーテルの先端を
右心房付近にまで進め、血餅を剥がして肺循環中へ浮遊
させる。移植して１時間後、心臓及び肺を取り出し、そ
れぞれ別個に計数する。血栓溶解は次の式によりパーセ
ンテイジで表す：

【数２】 移植した血餅のフィブリン溶解的な溶解が経時的に起こ
った［J.P.Clozel, Cardiovas.Pharmacol.,12:520,198
8］。

【０１３２】凝固パラメーター 血漿トロンビン時間（ＴＴ）及び活性化部分トロンボプ
ラスチン時間（ＡＰＴＴ）をフィブロメーターを用いて
測定した。血液を頸カテーテルからサンプリングし、ク
エン酸ナトリウム（３．８％，１部から９部血液）を入
れたシリンジ内に採取した。ＴＴを測定するため、ラッ
ト血漿（０．１ml）を生理食塩水（０．１ml）及びウシ
トロンビン（０．１ml、ＴＲＩＳ緩衝液中、３０Ｕ／m
l；ParkeDavis）と３７℃にて混合した。ＡＰＴＴ測定
では、血漿（０．１ml）をＡＰＴＴ溶液（０．１ml、Or
ganon Teknika）を５分間インキュベート（３７℃）
し、ＣaＣl₂（０．０１ml、０．０２５Ｍ）を加えて凝
血を開始させた。検定は２回行い、その平均をとった。

【０１３３】バイオアベイラビリティーのインデックス 生物活性、血漿トロンビン時間（ＴＴ）の測定は、ＴＴ
の増加が親化合物のみに由来すると仮定すると、親化合
物の検定の代替方法として役立つ。トロンビンインヒビ
ターのＴＴに対する効果の時間経過を、麻酔ラットに静
脈内ボーラス投与した後、及び迅速覚醒ラットを経口処
置した後に測定する。処置する時間と応答が処置前の値
に戻る時間との間の時間経過を測定するのに必要な血液
量及び時点の数は限定されているので、２つの集団のラ
ットを使用する。各集団サンプルは交互の時間ポイント
を代表する。経時的な平均ＴＴを使用し、曲線下面積
（ＡＵＣ）を計算する。バイオアベイラビリティーのイ
ンデックスは、以下の式により計算し、相対活性のパー
センテイジとして表す。

【０１３４】血漿ＴＴ時間経過の曲線下面積（ＡＵＣ）
を測定し、各用量について調節する。このバイオアベイ
ラビリティーのインデックスは「相対活性％」と呼ば
れ、次の式で計算される：

【数３】

【０１３５】化合物 通常の生理食塩水により、化合物の溶液を毎日、新たに
調製し、それを１５分前にボーラスとして注射し、又は
注入し、それを、動脈損傷の動静脈シャントモデルでは
１５分並びに動脈損傷のＦｅＣｌ₃モデル及び自発血栓
溶解モデルでは６０分、不安実験の間中続行した。ボー
ラス注射の用量は静脈内（ｉ.ｖ.）では１ml／kg、経口
（ｐ.ｏ.）では５ml／kgであり、注入用量は３ml／時間
であった。

【０１３６】統 計 得られた結果を平均＋／−ＳＥＭとして表す。変数の一
方向分析を使用し、統計的な有意差を求め、次いでDunn
ett's試験を適用し、いずれの平均が異なっているか決
定した。等平均の帰無仮説の拒絶の有意なレベルはＰ＜
０．０５である。

【表３】バイオアベイラビリティーのインデックス 実施例 相対活性％ １ ２８ ２ １９ ３ ８ ８ １５

【０１３７】動 物 雄性イヌ（ビーグル犬；１８カ月から２才；１２−１３
kg，Marshall Farms,ニューヨーク14516，ノース・ロー
ズ）を一晩絶食させ、Purina保証の処方食事［Purina M
ills, ミズーリ, セントルイス］を投薬の２４０分後に
与えた。水は自由に与える。室温は６６−７４Ｆ゜に維
持させる；４５ー５０％相対湿度、及び０６００−１８
００時の照射。

【０１３８】薬力学モデル 試験化合物は滅菌した０．９％生理食塩水に５mｇ/ml
調製物となるまで溶解し、投与の直前に製剤化する。イ
ヌには、試験化合物用量２mｇ／kgを単回、経口的な胃
管栄養法により投与する。血液サンプルは頭部静脈か
ら、投与後０．２５、０．５、０．７５、１、２、３、
４及び６時間の時点に採取する。サンプルをクエン酸処
理したVacutainerチューブに取り、遠心により血漿に落
ちる前に氷上に置く。血漿サンプルをジニトロフェニル
ヒドラジンと誘導化させ、リン酸でpＨ７に調節したメ
タノール／５００mＭ 酢酸ナトリウム（６０：４０，ｖ
／ｖ）で溶出させるＨＰＬＣ（Zorbax ＳＢ−Ｃ８カラ
ム）で分析した。試験化合物の血漿濃度を記録し、それ
を薬力学パラメーターの計算に使用する：除去速度定
数、Ｋｅ；総クリアランス、Ｃｌｔ；分布の量、Ｖ_D；
最大血漿試験化合物濃度の時間、Ｔmax；Ｔmaxにおける
試験化合物の最大濃度、Ｃmax；血漿半減期、ｔ_0.5；曲
線下面積、ＡＵＣ；及び吸収された試験化合物の画分、
Ｆ。

【０１３９】冠動脈血栓のイヌモデル イヌの外科的準備方法及び装置の説明はJacksonら,Circ
ulation,82,930-940(1990)に記載されている。混血猟犬
（６−７カ月令、いずれかの性、Hazelton-LRE,米国,M
I,カラマズー）をペントバルビタールナトリウム（３０
mｇ／kg、静脈内投与）で麻酔し、挿管手術を施し、部
屋の空気を換気させた。血液のＰＯ₂、ＰＣＯ₂及びpＨ
が正常域に保たれるよう、１回換気量及び呼吸速度を調
節した。皮下針電極を挿入し、リードIIＥＣＧを記録し
た。

【０１４０】中外側の頚を切開し、左頸静脈及び総頚動
脈を単離する。前もって較正したＭillar変換器（ＭＰ
Ｃ−５００，Millar Instruments, 米国，TX，ハウスト
ン）を頚動脈に挿入し、動脈血圧（ＡＢＰ）を連続して
測定する。頚静脈にカニューレを挿入し、実験の間に血
液をサンプリングする。さらに、後脚の大腿静脈にカニ
ューレ挿入し、試験化合物を投与する。

【０１４１】第５肋間部位にて左胸開術を施し、心臓を
心膜クレードル(pericardial cradle)に吊り下げる。最
初の主要な対角心室枝に最も近い左回旋冠動脈（ＬＣ
Ｘ）の１から２cmセグメントを分離する。２６ゲージ針
を先端に付けたワイヤー陽電極（テフロン被覆、３０ゲ
ージの銀めっきした銅線）３−４mm長をＬＣＸに挿入
し、それを動脈の内膜表面と接触させる（実験の終わり
に確かめる）。陰極を皮下（ｓ.ｃ.）部位に設置して、
刺激回路を完結させる。電極領域の上、ＬＣＸの回りに
調節可能なプラスチック製閉塞体を設ける。前較正した
電磁気流プローブ［Carolina Medical Electronics, 米
国, NC, キング］を、冠血流量（ＣＢＦ）の測定のため
の陽極に近いＬＣＸの回りに設置する。ＬＣＸを１０秒
閉塞させた後に観察される充血血流応答を４０−５０％
阻害するよう、閉塞体を調節する。血行動態及びＥＣＧ
測定値のすべてを記録し、データ取得システム（Ｍ３０
００型、Modular Instruments, 米国,PA,マルベルン）
を用いて分析する。

【０１４２】血栓形成及び化合物投与計画 １００μＡ直流電流を陽極に適用し、ＬＣＸの脈管内膜
の電解損傷を生じさせる。６０分電流を維持し、次いで
血管が閉塞しているか否かで中断する。ＬＣＸがすべて
閉塞されるまで（これはゼロＣＢＦ及びＳ−Ｔセグメン
トの増大で決定）、血栓形成は自然に進行する。閉塞す
る血栓が１時間経った後に、化合物の投与を開始する。
０．５及び１mｇ／kg／時の本発明化合物の２時間注入
を、血栓溶解物質（例えば、組織プラスミノーゲンアク
チベーター、ストレプトキナーゼ、ＡＰＳＡＣ）の注入
と同時に開始する。試験化合物の投与の３時間後に再灌
流を行う。血栓溶解が成功した後の冠動脈の再閉塞は、
≧３０分持続するゼロＣＢＦで定義される。

【０１４３】血液学及び鋳型出血時間の測定 血液分析装置［Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner, 米国,C
A,マウント・ビュー］を用いて、クエン酸（３．８％）
処理血液（クエン酸１部：血液９部）の試料４０μl に
ついて、全血液細胞のカウント、ヘモグロビン、及びヘ
マトクリット値を測定した。Simplate II出血時間装置
［Organon Teknika Durham, 米国,N.C.］を用いて、歯
肉鋳型出血時間を測定した。この装置は、イヌの上又は
下あごいずれかの歯肉に２つの水平切開を作成するため
に使用する。各切開は３mm幅×２mm深である。切開を作
成し、ストップウォッチを使用してどのぐらい長く出血
が起こるかを測定する。切開部から滲み出る血液を吸収
するのに綿棒を使用する。鋳型出血時間は、切開から出
血が止まるまでの時間である。出血時間は、試験化合物
の投与直前（０分）、注入の６０分、試験化合物の投与
を止めた時点（１２０分）、及び実験の終了時点に測
る。

【０１４４】すべてのデータを変数の一方向分析（ＡＮ
ＯＶＡ）により分析し、次いでスチューデント−ニュー
マン−クール・ポスト・ホックｔ検定(Student-Neuman-
Kuels post hoc t test)により分析し、有意差のレベル
を調べた。ＡＮＯＶＡ測定を繰り返し使用し、時間の間
の時間の間の有意差を決定した。値は少なくともｐ＜
０．０５のレベルで統計的に異なっていることが示され
た。すべての値は平均±ＳＥＭである。すべての試験
は、American Physiological Societyのガイドラインに
沿って行った。操作のさらなる説明は、Jacksonら, J.C
ardiovasc.Pharmacol.,21,587-599(1993)に記載されて
いる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式I： 【化１】 ［式中、Ｒ^１は水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、置換又は非置
   換フェニル、置換又は非置換フェニル（Ｃ₁−Ｃ₄）アル
   キル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチ
   ル（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、又はシクロヘキシル（Ｃ₁−
   Ｃ₄）アルキルであり、 Ｒ^２は水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、置換又は非置換フェニ
   ル、置換又は非置換フェニル（Ｃ₁−Ｃ₄）アルキル、シ
   クロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル（Ｃ₁
   −Ｃ₄）アルキル、又はシクロヘキシル（Ｃ₁−Ｃ₄）ア
   ルキルであり、 Ｒ^３は水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、又は（Ｃ₁−Ｃ₄アルキ
   ル）Ｓ(Ｏ)n（ここにｎは１又は２）であるか、 Ｒ^１及びＲ^２はそれらが結合している炭素原子と一緒に
   なって、５又は６員のシクロアルキル基、フェニル基又
   はノルボルナニル基を与え、 Ｒ^２及びＲ^３はそれらが結合している炭素及び窒素原子
   と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄の中から選ばれる
   別のヘテロ原子を１つさらに含有することができる置換
   もしくは非置換の５又は６員の窒素含有ヘテロ環、又は
   窒素、酸素及び硫黄の中から選ばれる別のヘテロ原子を
   １つさらに含有することができる置換もしくは非置換の
   ９又は１０員の窒素含有ヘテロ環を与え、 Ｒ¹、Ｒ^２及びＲ^３はそれらが結合しているそれぞれの
   炭素及び窒素原子と一緒になって、窒素、酸素及び硫黄
   の中から選ばれる別のヘテロ原子を１つさらに含有する
   ことができる置換もしくは非置換の５又は６員の窒素含
   有ヘテロ環、又は窒素、酸素及び硫黄の中から選ばれる
   別のヘテロ原子を１つさらに含有することができる置換
   もしくは非置換の９又は１０員の窒素含有ヘテロ環を与
   え、 Ｙは式： 【化２】 で示される基である。ただし、Ｙがプロリニルのとき
   は、Ｒ^１は水素であり、Ｒ^３は水素であるが、Ｒ^２はフ
   ェニルでない。さらに、Ｙがプロリニルのときは、Ｒ^２
   は水素であり、Ｒ^３は水素であるが、Ｒ^１はベンジルで
   ない。］で示される化合物又はその製薬的に許容される
   塩、又は該化合物もしくはその塩の製薬的に許容される
   溶媒和物。
2. 【請求項２】 Ｎ−メチル−３−アミノ−３−フェニル
   プロピオニル−Ｌ−プロリニル−Ｌ−アルギニン アル
   デヒド、Ｎ−メチル−３−アミノ−３−シクロヘキシル
   プロピオニル−Ｌ−プロリニル−Ｌ−アルギニン アル
   デヒド、及び２−アミノシクロヘキシルカルボニル−Ｌ
   −プロリニル−Ｌ−アルギニン アルデヒドの中から選
   ばれる、請求項１に記載の化合物又はその製薬的に許容
   される塩もしくは溶媒和物。
3. 【請求項３】 請求項１又は２に記載の式Iで示される
   化合物又はその製薬的に許容される塩もしくは溶媒和物
   を、製薬的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と共に
   含有する医薬製剤。