HU227356B1 - Peptide derivates containing four aminoacids at the most, process for preparing them and pharmaceutical compositions compriting them - Google Patents
Peptide derivates containing four aminoacids at the most, process for preparing them and pharmaceutical compositions compriting them Download PDFInfo
- Publication number
- HU227356B1 HU227356B1 HU9602408A HU9602408A HU227356B1 HU 227356 B1 HU227356 B1 HU 227356B1 HU 9602408 A HU9602408 A HU 9602408A HU 9602408 A HU9602408 A HU 9602408A HU 227356 B1 HU227356 B1 HU 227356B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- pro
- alkyl
- formula
- group
- mmol
- Prior art date
Links
- 0 OC([C@]1NC*C1)=O Chemical compound OC([C@]1NC*C1)=O 0.000 description 5
- OBSYXAXPUGVQSN-UHFFFAOYSA-N O=C1NC(CCCC2)C2CC1 Chemical compound O=C1NC(CCCC2)C2CC1 OBSYXAXPUGVQSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSZYHRHLUIIARD-YUMQZZPRSA-N CCOC([C@H](C1)NC[C@H]1C#C)=O Chemical compound CCOC([C@H](C1)NC[C@H]1C#C)=O OSZYHRHLUIIARD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- SPTVCXKSSRBTMN-UHFFFAOYSA-N N#CCCC(CCCC1)C1=O Chemical compound N#CCCC(CCCC1)C1=O SPTVCXKSSRBTMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ICSQYGDMSMVESO-UHFFFAOYSA-N O=C1NC(CCCC2)C2CC1(Cl)Cl Chemical compound O=C1NC(CCCC2)C2CC1(Cl)Cl ICSQYGDMSMVESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQYBNXGHMBNGCG-UHFFFAOYSA-N OC(C(C1)NC2C1CCCC2)=O Chemical compound OC(C(C1)NC2C1CCCC2)=O CQYBNXGHMBNGCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQYBNXGHMBNGCG-RNJXMRFFSA-N OC([C@H](C1)N[C@H]2[C@H]1CCCC2)=O Chemical compound OC([C@H](C1)N[C@H]2[C@H]1CCCC2)=O CQYBNXGHMBNGCG-RNJXMRFFSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
- C07D205/06—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D205/08—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with one oxygen atom directly attached in position 2, e.g. beta-lactams
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
- C07K5/06165—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic and Pro-amino acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/022—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2
- C07K5/0222—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2 with the first amino acid being heterocyclic, e.g. Pro, Trp
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0606—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing heteroatoms not provided for by C07K5/06086 - C07K5/06139, e.g. Ser, Met, Cys, Thr
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/582—Recycling of unreacted starting or intermediate materials
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Description
A találmány tárgyát az emlősökben hasznos antikoaguláns trombininhibitorok, különösen a nagy trombózis- 35 ellenes aktivitással, antikoaguláns aktivitással és orális biohozzáférhetőséggel rendelkező peptidszármazékok képezik.
A vér koagulációját, a trombózist egy komplex, proteolitikus kaszkád váltja ki, és ez a trombin képződésé- 40 hez vezet. A trombin proteolitikusan eltávolítja a vérplazmában oldódó fibrinogén Aa és Ββ láncainak aktivációs peptideit, oldhatatlan fibrinformációk képződését segítve elő.
Antikoagulációt csak az utóbbi időben, heparinok 45 és kumarinok hozzáadásával sikerült elérni.
A koaguláció és a trombózis parenterális gyógyászati kontrollja a trombin heparinok által történő inhibícióján alapszik. A heparinok hatásukat a trombinon indirekt módon, az endogén antitrombin lll - a trombin fő 50 fiziológiai inhibitora - inhibíciós hatásának felgyorsítása útján fejtik ki. Mivel az antitrombin lll szint a plazmában változó lehet, és mivel a felületen kötött trombin az ilyen indirekt mechanizmussal szemben ellenálló, a heparinos kezelés hatástalan maradhat. Mivel a koagulá- 55 ciós vizsgálatok általános nézet szerint hatékonyak és biztonságosak, a heparinszintek ellenőrzése ilyen vizsgálatokkal, különösen az aktivált parciális tromboplasztin idő vizsgálattal (APTT) történik. A kumarinok a trombin képződését a protrombin és más ilyen típusú pro- 60 tein szintézisében a poszttranszlációs gamma-karboxiláció blokkolásával akadályozzák. Reakciómechanizmusukból kifolyólag hatásuk csak lassan, az adagolástól számított 6-24 óra elteltével jelentkezik, továbbá az antikoagulánsokra sem szelektívek. A kumarinok szintén koagulációs vizsgálatokkal - különösen protrombin idő (PT) vizsgálattal - történő ellenőrzést igényelnek.
Az utóbbi időben megnőtt a proteolitikus enzimek által, a természetes anyagokhoz hasonló módon felismert, szintetikus peptidek utáni érdeklődés. Tripeptid aldehidek, mint a D-Phe-Pro-Arg-H, Boc-D-Phe-ProArg-H és a D-MePhe-Pro-Arg-H [Bajusz et al., J. Med. Chem., 33, 1729-1735 (1990)] a trombinnal szemben erős, direkt inhibíciós hatást mutatnak. Korábbi klinikai tanulmányok kimutatták, hogy a D-MePhe-Pro-Arg-Hszulfát az emberben antikoaguláns [lásd Simoons et al., Circulation, 90,1-231, Abstr. 1241 (1994)]. Számos kutató állított elő analógokat, gyógyászati szerek előállításán kísérletezve [például Shuman et al., J. Med. Chem., 36, 314-319, (1993)]. A 4,346,078 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírás egy sor antikoaguláns, agmatin-(1-amino-4-guadino-bután)-csoportot tartalmazó peptidet ismertet. Az agmatinszármazékok és a vonatkozó vegyületek is megismerhetők a WO 93/11152 számú nemzetközi közzétételi iratból, valamint az 1994. június 15-én közzétett, 601459 közzétételi számú európai szabadalmi bejelentésből. Ezek
HU 227 356 Β1 a vegyületek az előző sorozatoktól abban különböznek, hogy az agmatinvegyületekből hiányzik egy, a hasonló, Arg csoportot tartalmazó vegyületeknél talált karbonillánc.
Bár a heparinok és a kumarinok hatékony antikoagulánsok, és az ismert tripeptid aldehidekből nem sikerült gyógyszert kifejleszteni, valamint annak ellenére, hogy a vegyületcsoport ígéretesnek mutatkozik, szükség van egy olyan antikoagulánsra, mely trombinra szelektív, az antitrombin lll-tól független, inhibíciós hatását nem sokkal adagolása után fejti ki, előnyösen orálisan beadható, és nem zavarja a vérrögök lízisét, mely a vérpangás fenntartásához szükséges.
A jelen találmány azon a felfedezésen alapszik, hogy az alábbiakban ismertetett, találmány szerinti vegyületek erős trombininhibitorok, melyek orális beadás után nagy biohozzáférhetőséggel rendelkezhetnek. Ezenfelül bizonyos, a találmány szerinti vegyületek az Xa faktorral szembeni inhibíciót is mutathatnak, mely faktort a koagulációs kaszkád tartalmazza.
Ennek megfelelően a találmány elsődleges tárgya olyan új peptidszármazékok létrehozása, illetve azok előállítási eljárásainak kidolgozása, melyek antikoagulánsként alkalmazható trombininhibitorok.
A találmány további vonatkozásait az alábbiakban, a leírás, valamint az igénypontok alapján ismertetjük.
A találmány tárgyát az (I) általános képletű trombin inhibíciós vegyületek, ahol
X jelentése homoprolinilgyök,
Rm-(CH2)g-NH-CH2-C(O)-, (a), (b), (e) vagy (f) általános képletű csoport, ahol
Rd jelentése karboxi- vagy metil-szulfonil-csoport,
Rc 1-10 szénatomos alkilcsoport,
T 3-8 szénatomos cikloalkil-, 1-8 szénatomos alkilcsoport, (g) vagy (h) általános képletű csoport, a értéke 0, 1 vagy 2,
Q jelentése hidroxi-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy -NH-A általános képletű csoport, és
A hidrogénatom, R”SO2-, R”OC(O)-, R”C(O)vagy -(CH2)g-Rm általános képletű csoport, g értéke 1,2 vagy 3,
R’ hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport,
R” 1-4 szénatomos alkil-, -(CH2)d-Rm vagy arilcsoport, ahol az arilcsoport 9 vagy 10 tagú, szubsztituált kondenzált biciklusos aromás heterociklusos csoport, mely egy nitrogénatomot tartalmaz, és ahol a nitrogénatom 1-4 szénatomos alkilcsoporttal lehet helyettesítve,
Rm -COOH vagy -SO2(1-4 szénatomos)-alkilcsoport, d értéke 1,2 vagy 3, és
Z hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy hidroxicsoport,
Y (i), (j), (k) vagy (I) általános képletű csoport, ahol
R9 -(CH2)p-L-(CH2)q-T általános képletű csoport,
RP hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkil- vagy -(CH2)p-L-(CH2)q-T általános képletű csoport, ahol p értéke 0, 1 vagy 2, L jelentése kötés vagy -0-, q értéke 0,1 vagy 2, és T’ jelentése Ar csoport, ahol Ar fenil- vagy naftilcsoport,
Rv -CH2- csoport,
Rz, Ry csoporttal és a három, kapcsolódó szénatommal együtt telített, 5-8 tagú karbociklusos gyűrűt alkot, r értéke 1, 2 vagy 3, és
G jelentése -(CH2)S-R általános képletű csoport, ahol s értéke 0-5, -CH=CH-(CH2),-R általános képletű csoport, ahol t értéke 0-3, vagy
G jelentése (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t) vagy (u) általános képletű csoport, ahol
D és E egymástól függetlenül N vagy CH,
M jelentése S vagy O, k értéke 0 vagy 1, és
R jelentése -NH2, -C(=NH)-NH2, -C(=NOH)-NH2 vagy-NH-C(=NH)-NH2 csoport, vagy
G jelentése (y) vagy (aa) képletű csoport, és ahol az (m), (r) és (s) általános képletű aromás vagy heteroaromás gyűrűk egyébként szubsztituálatlan szénatomjai fluoratommal lehetnek szubsztituálva, és ahol az Y csoportok jelentéseiben szereplő csillag (L)-konfigurációjú királis centrumot jelent, és ahol az X csoportok jelentéseiben szereplő csillag (D)- vagy (DL)-konfigurációjú királis centrumot jelent, és ahol az X csoportok jelentéseiben szereplő # (L)-konfigurációjú királis centrumot jelent, vagy ezen vegyületek gyógyászatilag elfogadható sói; vagy ezen vegyületek vagy sóik gyógyászatilag elfogadható szolvátjai képezik, azzal a feltétellel, hogy A hidrogénatomtól vagy t-butil-oxi-karbonil-csoporttól eltérő, ha G jelentése -(CH2)S-NH-C(NH)NH2 csoport, Y szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom, és T jelentése (g) általános képletű csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy R aminocsoporttól vagy guanidinocsoporttól eltérő, ha r=1 és s=0, továbbá azzal a feltétellel, hogy A hidrogénatomtól, metil-szulfonil-csoporttól vagy -(CH2)g-Rm csoporttól eltérő, ha G jelentése -(CH2)S-R általános képletű csoport, melyben R jelentése -C(=NH)-NH2 vagy -NHC(=NH)-NH2 csoport, Y (j) általános képletű szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom, R’ hidrogénatom, T ciklohexilcsoport, és Q jelentése -NH-A általános képletű csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy R”SO2 jelentése aril-szulfonil-csoporttól eltérő, ha G jelentése -(CH2)s-R általános képletű csoport, melyben R jelentése -NH-C(=NH)-NH2 csoport, Y szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom, és Q jelentése -NH-A csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy A jelentése R”SO2 csoporttól eltérő, ha G jelentése (p) vagy (y) képletű csoport, T jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport, (g) vagy (h) képletű csoport, és Q jelentése -NH-A csoport;
továbbá azzal a feltétellel, hogy ha X jelentése
D-fenil-alanil-csoport és Y jelentése szubsztituálatlan prolinilcsoport, azaz RP hidrogénatomot jelent, akkor
HU 227 356 Β1
a) G jelentése -CH=CH-CH2-NH-C(NH)-NH2 csoporttól eltérő, ha r értéke 1; és
b) G jelentése 4-fenil-NH-C=(NH)NH2 csoporttól eltérő, ha r értéke 1 vagy 2;
továbbá azzal a feltétellel, hogy ha X jelentése
T-(CH2)a-C(R’)(Q)-C(O)-csoport és T jelentése ciklohexilcsoport,
R’ jelentése H-atom és
G jelentése -(CH2)S-R csoport, akkor
a) ha Y jelentése azetidin-2-karbonil-csoport vagy szubsztituálatlan prolinilgyök (RP jelentése H-atom),
R jelentése -C(NH)NH2 vagy -NH-C(NH)-NH2 csoport és a (CH2)r-(CH2)a lánc 2-6 szénatomos alkiléncsoportot jelent, akkor Q olyan -NH-A-csoporttól eltérő jelentésű, ahol A jelentése
a) H-atom vagy metil-szulfonil-csoport vagy b) -(CH2)g-COOH csoport; és
b) ha Y azetidin-2-karbonil- vagy szubsztituálatlan prolinilcsoport (RP jelentése H-atom), és
R jelentése -NH-C(NH)-NH2 csoport, a (CH2)r-(CH2)s lánc 2-6 szénatomos alkiléncsoportot jelentés Q jelentése -NH-A csoport, akkor A jelentése R”OC(O) csoporttól eltérő, ahol R” jelentése terc-butilcsoport;
továbbá azzal a feltétellel, hogy az (I) általános képletű vegyület eltér (i) N-[4-[(amino-imino-metil)-amino]-butil]-1-[N-(metil-szulfonil)-D-fenil-alanil]-L-prolinamidtól és (ii) N-[-[ 1 -(amino-imino-metiI)-4-piperidinil]-metilj-1 D-fenil-alanil-L-prolinamidtól;
továbbá azzal a feltétellel, hogy ha Y azetidin-2karbonil- vagy szubsztituálatlan prolinilcsoport (RP jelentése H-atom), és
G jelentése 4-fenil-C(NH)NH2, 4-fenilNH-C(NH)NH2 csoport, (p) általános képletű csoport, ahol R jelentése (v) csoport, (y) csoport, vagy olyan (m) általános képletű csoport, ahol k értéke 0 és R jelentése NH2 csoport, vagy (t) vagy ciklohexil-(CH2)k—R általános képletű csoport, ahol a két utóbbi csoportban R jelentése -C(NH)NH2 csoport, ha k értéke 0 vagy 1, illetve R jelentése -NH-C(NH)NH2 csoport, ha k értéke 0, akkor
a) ha X jelentése T-(CH2)a-C(R’)(Q)-C(O)-csoport,
R’ H-atom, és
Q NH-A csoportot jelent, ahol A jelentése H-atom, R”SO2-, R”OC(O)-csoport (ahol R” 1-4 szénatomos alkilcsoportot jelent),
R”C(O)-csoport [ahol R” jelentése 1-4 szénatomos alkil- vagy -CH2)dCOOH csoport (ahol d értéke 1 vagy 2)] vagy jelentése -(CH2)g-COOH, akkor a T-(CH2)a csoport jelentése (i) 1-4 szénatomos alkilcsoporttól, (ii) -(CH2)a-C5-C6 cikloalkilcsoporttól, (iii) -(CH2)a-fenil-csoporttól (ahol a fenilcsoport adott esetben 1-4 szénatomos alkilcsoporttal helyettesítve lehet), (iv) -(CH2)a-fenil-csoporttól (ahol a értéke 0 vagy 1 és a fenilcsoport hidroxi- vagy 1-4 szénatomos alkoxicsoporttal van helyettesítve), vagy (v) —(CH2)a-naftil-csoporttól (ahol a értéke 0 vagy 1) eltérő; és
b) X jelentése homoprolinil- vagy (b) csoporttól eltérő;
továbbá azzal a feltétellel, hogy ha Y azetidin-2-karbonil-csoport vagy szubsztituálatlan prolinilgyök (RP jelentése H-atom), r értéke 1,
G 4-fenil-R vagy 4-ciklohexil-R általános képletű csoport, ahol R jelentése -NH2, -C(=NH)NH2,
-C(=NOH)NH2, -NH-C(=NH)NH2;
vagy
G jelentése 4-pi perid i nil-R vagy 4-di h id ropirid i l-R általános képletű csoport, ahol R jelentése -C(=NH)NH2 vagy-C(=NOH)NH2;
akkor
a) ha X jelentése T-(CH2)a-C(R’)Q-C(O)- és R’ H-atom, akkor Q hidroxi-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy -NH-A csoporttól eltérő jelentésű, ezekben a csoportokban
A jelentése (i) H-atom;
(ii) R”C(O)-csoport, ahol R” 1-4 szénatomos alkilcsoport;
(iii) R”OC(O)-csoport, ahol R” 1-4 szénatomos alkil- vagy -(CH2)d-COOH;
(iv) R”SO2-, ahol R” 1-4 szénatomos alkil- vagy -(CH2)d-COOH; és
b) ha X jelentése Rd-(CH2)2-CH(N(H)C(O)Rc-C(O)és Rd karboxicsoport, akkor Rc jelentése 1-6 szénatomos alkilcsoporttól eltérő jelentésű.
A fenti (I) általános képletű vegyületek egy különleges csoportja azokból a vegyületekből áll, ahol
X jelentése homoprolinilgyök, (a), (b) vagy (c) általános képletű csoport, ahol
T 3-8 szénatomos cikloalkil-, 1-8 szénatomos alkilcsoport, (g) vagy (h) általános képletű csoport, a értéke 0 vagy 1,
Q jelentése hidroxi-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy -NH-A általános képletű csoport, és
A hidrogénatom, R”SO2-, R”OC(O)-, R”C(O)vagy-(CH2)g-Rm általános képletű csoport, g értéke 1, 2 vagy 3,
R’ hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport,
R” 1-4 szénatomos alkil-, -(CH2)d-COOH vagy arilcsoport, ahol az arilcsoport 9 vagy 10 tagú, szubsztituált kondenzált biciklusos aromás heterociklusos csoport, mely egy nitrogénatomot tartalmaz, és ahol a nitrogénatom 1-4 szénatomos alkilcsoporttal lehet helyettesítve, d értéke 1, 2 vagy 3, és
Z hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy hidroxicsoport,
Y (i), (í), (k) vagy (I) általános képletű csoport, ahol
R9 -(CH2)p-L-(CH2)g-T általános képletű csoport,
RP hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkil- vagy
-(CH2)p-L-(CH2)g-T általános képletű csoport, ahol p értéke 0, 1 vagy 2, L jelentése kötés vagy -0-, q értéke 0, 1 vagy 2, és T jelentése fenilcsoport,
HU 227 356 Β1
Rv -CH2- csoport,
Rz, Ry csoporttal és a három, kapcsolódó szénatommal együtt telített, 5-8 tagú karbociklusos gyűrűt alkot, r értéke 1 vagy 2, és
G jelentése -(CH2)S-R általános képletű csoport, ahol s értéke 0-5, -CH=CH-(CH2)t-R általános képletű csoport, ahol t értéke 0-3, vagy
G jelentése (m), (n), (o), (p), vagy (q) általános képletű csoport, ahol
D és E egymástól függetlenül N vagy CH,
M jelentése S vagy 0, k értéke 0 vagy 1, és
R jelentése -NH2, -C(=NH)-NH2, -C(=NOH)-NH2 vagy -NH-C(=NH)-NH2 csoport, és ahol az Y csoportok jelentéseiben szereplő csillag (L)-konfigurációjú királis centrumot jelent, és ahol az X csoportok jelentéseiben szereplő csillag (D)- vagy (DL)-konfigurációjú királis centrumot jelent, és ahol az X csoportok jelentéseiben szereplő # (L)-konfigurációjú királis centrumot jelent, vagy ezen vegyületek gyógyászatilag elfogadható sói; vagy ezen vegyületek vagy sóik gyógyászatilag elfogadható szolvátjai;
azzal a feltétellel, hogy A hidrogénatomtól vagy t-butil-oxi-karbonil-csoporttól eltérő, ha G jelentése -(CH2)s-NH-C(NH)NH2 csoport, Y szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom, és T jelentése (g) általános képletű csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy R aminocsoporttól vagy guanidinocsoporttól eltérő, ha r=1 és s=0, továbbá azzal a feltétellel, hogy A hidrogénatomtól, metil-szulfonil-csoporttól vagy -(CH2)g-Rm csoporttól eltérő, ha G jelentése -(CH2)S-R általános képletű csoport, melyben R jelentése -C(=NH)-NH2 vagy -NHC(=NH)-NH2 csoport, Y (j) általános képletű szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom, R’ hidrogénatom, T ciklohexilcsoport, és Q jelentése -NH-A általános képletű csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy R”SO2 jelentése aril-szulfonil-csoporttól eltérő, ha G jelentése —(CH2)S—R általános képletű csoport, melyben R jelentése -NH-C(=NH)-NH2 csoport, Y szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom, és Q jelentése -NH-A csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy A jelentése R”SO2 csoporttól eltérő, ha G jelentése (p) képletű csoport, T jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport, (g) vagy (h) képletű csoport, és Q jelentése -NH-A csoport.
A jelentése nem lehet R”-SO2-csoport.
Az (I) általános képletű vegyületeken kívül a találmány tárgyát képezik továbbá az (I) általános képletű vegyületeket egy gyógyászatilag alkalmas hordozóval, oldószerrel vagy kötőanyaggal együtt tartalmazó gyógyszerkészítmények is.
A találmány alkalmazható az emlősökben előforduló trombózis gátlására, beleértve az (I) általános képletű vegyület trombózist gátló adagjának kezelés céljából emlősökön történő alkalmazását.
A találmány lehetővé tesz trombininhibíciós módszert, beleértve az (I) általános képletű vegyület trombininhibíciós adagjának kezelés céljából emlősökön történő alkalmazását.
A találmány szerinti új trombininhibitorok és az ezeket a vegyületeket mint aktív összetevőket tartalmazó gyógyászati készítmények a kórmegelőzésben, valamint tromboembolikus megbetegedéseknél, így vénás trombózis, tüdőembólia, arteriális trombózis, különösen részleges szívizom-vértelenség, szívinfarktus és agyi trombózis, általános és helyi hiperalvadásos állapot esetén, az ezeket követő angioplasztika és koszorúérbypass műtéteknél, valamint - mivel a gyulladásos folyamattal összefüggésben áll - az általános szövetsérüléseknél alkalmazhatók.
Az „alkil” kifejezés önmagában vagy más szubsztituensben egyenes láncú vagy elágazó, a meghatározott számú szénatomot tartalmazó alkilgyököt jelent, így metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, η-butil-, t-butil-, izobutil- és szekunder butilcsoportot. A perfluor-alkil kifejezés önmagában vagy más szubsztituensben egyenes láncú vagy elágazó, meghatározott számú szénatomot tartalmazó alkilgyököt jelent, ahol minden hidrogénatom helyén fluoratom található, így trifluor-metil-, perfluor-etil-, perfluor-n-propil-, perfluor-izopropil-, perfluor-n-butil-, perfluor-t-butil-, perfluor-izobutil- és perfluor-szek-butil-csoportot.
A 3-8 szénatomos cikloalkilcsoport jelentése 3-8 szénatomot tartalmazó telített aliciklikus gyűrűt jelent, így ciklopropil-, metil-ciklopropil-, ciklobutil-, ciklopentil-, ciklohexil-, 4-metil-ciklohexil-, ciklooktil- és hasonló csoportokat.
Az „alkoxi” kifejezés jelentése egyenes láncú vagy elágazó láncú, meghatározott számú szénatomot tartalmazó, az alaplánchoz egy oxigénatomon keresztül kapcsolódó alkilgyök. A halogénatom klór-, fluor-, bróm- vagy jódatomot jelent. Az acetilcsoport kifejezés CH3-C(O)- csoportot jelent. A t-butil-oxi-karbonilcsoport jelentése (CH3)3C-O-C(O)- képletű csoport, rövidítése: Boc. A benzil-oxi-karbonil-csoport jelentése C6H5CH2-O-C(O)- képletű csoport, rövidítése: Cbz.
A 9 vagy 10 tagú heterociklusos gyűrű jelentése biciklusos csoport lehet, például indolil-, benzotienil-, benzofuril-, benzoxazolil-, benzoizoxazolil-, benzopirazolil-, kinolinil-, izokinolinil-, benzimidazolil- vagy benzotiazolilcsoport.
Látható, hogy a fenti heterociklusok közül sok tautomer formákban is jelen lehet. Minden ilyen forma a találmány tárgyi körét képezi.
Az Ar vagy R” jelentésénél felsorolt aromás vagy heteroaromás csoportok egymástól függetlenül szubsztituálatlanok vagy egy vagy két, stabil szerkezetet biztosító szubsztituenst viselnek, melyek egymástól függetlenül halogénatom, hidroxi-, 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi-, amino-, (-NH2), mono(1-4 szénatomos alkil)-amino-, -(CH2)jCOOHmerkapto-, -S(O)h(1-4 szénatomos alkil)-, -NHS(O)h(1-4 szénatomos alkil)-, -NHC(O)(1-4 szénatomos alkil)-, -S(O)hNH2, -S(O)hNH(1-4 szénatomos
HU 227 356 Β1 alkil)- vagy -S(0)hN(1-4 szénatomos alkil)2-csoport, ahol h jelentése 0, 1 vagy 2, és j jelentése 0, 1,2, 3 vagy 4.
Egy, az R” (C)O-szubsztituensre különösen előnyös ilyen jelentés az 1 -metil-indol-2-oil-csoport.
Az (I) általános képletű vegyületnél az X csoport karbonilfunkciója az Y csoport aminfunkciójához kapcsolódik, majd az Y csoport karbonilfunkciója kapcsolódik az (I) általános képletű vegyületben lévő aminocsoporthoz.
A (cc) általános képletű csoportra, ahol
Z és A jelentése egyaránt hidrogénatom, fenil-glicilcsoportként hivatkozunk, és Phg-ként rövidítjük.
Az olyan vegyületekre, ahol A jelentése például metilcsoport, Na-metil-fenil-glicil-csoportként hivatkozunk, és MePhg-ként rövidítjük. Az olyan szubsztituált vegyületeknél, ahol Z nem hidrogén, a szubsztituens helyzetére és típusára hivatkozunk, mint például 3’-klór-fenil-glicil-csoport, rövidítve Phg(3-CI).
A (dd) általános képletű csoportra, ahol
Z és A jelentése egyaránt hidrogénatom, fenil-alanil-csoportként hivatkozunk, és Phe-ként rövidítjük.
Az olyan vegyületekre, ahol A jelentése például metilcsoport, Na-metil-fenil-alanil-csoportként hivatkozunk, és MePhe-ként rövidítjük. Az olyan szubsztituált vegyületeknél, ahol Z nem hidrogén, a szubsztituens helyzetére és típusára hivatkozunk, mint például 3’-klór-fenil-alanil-csoport, rövidítve Phe(3-CI).
Az (ee) és (ff) általános képletű csoportokra, ha R’ jelentése hidrogénatom, 1-, illetve 3-tetrahidro-izokinolin-karbonil-csoportként hivatkozunk, és azokat 1-Tiq, illetve 3-Tiq-ként rövidítjük.
A (gg) és (hh) általános képletű csoportokra, ha R’ jelentése hidrogénatom, 1-, illetve 3-perhidroizokinolinkarbonil-csoportként hivatkozunk, és azokat 1-Piq, illetve
3- Piq-ként rövidítjük. Amint arra a hullámos vonalak is utalnak, ezen szubsztituenseknek számos gyűrűfúziós izomerje létezik, a jelen találmány valamennyi ilyen önálló izomerrel, valamint azok kombinációival foglalkozik.
Az (ii) és j képletű vegyületekre prolinil-, illetve azetidin-2-karbonil-csoportként hivatkozunk, és Pro, illetve Azt-ként rövidítjük.
Az (I) általános képletű csoport egy 4,5; 5,5; 6,5; 7,5 vagy 8,5 típusú telített biciklusos rendszert jelent. 3a helyzetben a karbonilcsoportra vonatkoztatott sztereokémia cisz, a másik hídfőkötés cisz vagy transz, kivéve a 4,5 és 5,5 rendszereket, ahol csak cisz lehet. Ry és Rz jelentéséből következően a változtatható gyűrű, mely a jelzett három szénatomot magában foglalja, egy
4- 8 atomból álló telített karbociklusos rendszer. A gyűrűatomok mindegyike lehet szénatom, vagy egyikük egy heteroatom, mely oxigén- vagy kénatom lehet, vagy -NH csoport. Ez a definíció magában foglalja az oktahidroindol-2-karboxilsavból levezethető, (jj) képletű előnyös láncot, melyet Ohi-nak rövidítünk. Ezen lánc különböző cisz és transz formáival jelen találmányunk szintén foglalkozik.
Az Y gyökben lévő csillag jelzés egy L forgatóképességű királis centrumot jelöl. Az X gyökben lévő csillag jelzés egy D vagy DL forgatóképességű királis centrumot, az ugyanebben a gyökben lévő kettős kereszt jelölés pedig egy (L) forgatóképességű királis centrumot jelöl.
Ezenfelül különböző diasztereomerek fordulhatnak elő az alkilszubsztituensek elágazásaitól függően. Jelen találmány tárgyi köre magában foglalja két vagy több diasztereomer keverékét, valamint minden egyes önálló izomert.
Jelen találmány előnyös vegyületei közé azok az (I) általános képletű vegyületek tartoznak, ahol
X jelentése (kk) általános képletű csoport, homoprolinil-, 1- vagy 3-Tiq- vagy 1- vagy 3-Piq-csoport, és
Y jelentése prolinilcsoport, valamint ezek gyógyászatilag elfogadható sói és oldatai.
Különösen előnyösek azok a vegyületek, ahol
Q jelentése NHA-csoport, ahol
A jelentése hidrogénatom vagy szulfonamidcsoport,
R’jelentése hidrogénatom,
Z jelentése hidrogénatom, és
B jelentése hidrogénatom.
Tehát azok a vegyületek, ahol
R jelentése guanidino- vagy különösen amidinocsoport, előnyösek.
A szubsztituensek egy különösen előnyös kombinációjánál
G jelentése R-szubsztituált fenilcsoport (azaz D=E=CH-csoport, valamint k=0), különösen előnyös, ha
G jelentése 4-amidino-fenil-csoport.
Az (m), (r) és (s) általános képletű csoportok aromás vagy heteroaromás gyűrűiben az egyébként szubsztituálatlan szénatomok egytől mindegyikéig fluoratom-szubsztituenst viselő vegyületek csoportjából előnyösek azok, melyeknél D-hez és E-hez képest sem α-, sem β-helyzetben nem található fluoratomszubsztituens, ha D vagy E jelentése nitrogénatom.
Egy másik, a fent leírt, (I) általános képletű, a találmány szerint előnyös vegyületcsoportnál
X jelentése (a) általános képletű csoport, ahol
T jelentése ciklohexilcsoport, a jelentése 1,
R’jelentése hidrogénatom, és
Q jelentése NH-A-csoport.
Ezen vegyületek egyik különleges alcsoportja, ahol
A jelentése hidrogénatom, egy másik különleges alcsoportjánál A jelentése R”SO2-csoport, különösen, ha R” jelentése etilcsoport.
Egy harmadik különleges alcsoportnál A jelentése -(CH2)g-COOH-csoport, ahol g jelentése előnyösen 1.
Az (I) általános képletű vegyületekben, ahol X, r és G jelentése a fenti, Y különleges jelentése (L)-prolinil(Pro), (S)-cisz-oktahidro-l H-indol-2-karbonil- (Ohi) és N-(2-fenil-etil)-glicil-[N(PhCH2CH2)Gly]-csoport is lehet. Az olyan (I) általános képletű vegyületeknél, ahol
R jelentése -NH2-csoport, X és Y jelentése előnyösen a fenti, és
HU 227 356 Β1
a) r jelentése 1, és
G jelentése (II) képletű csoport, amelyben az anilinogyűrűn egy vagy két fluorszubsztituens található,
b) r jelentése 1, és
G jelentése (mm) képletű csoport, és
c) r jelentése 1 vagy 2, és
G jelentése (nn) képletű csoport.
Az (I) általános képletű vegyületek egy különösen előnyös csoportjánál
Y jelentése (L)-prolinil-csoport, r jelentése 1, és
G jelentése (bb) általános képletű csoport, ahol
D és E jelentése -CH-csoport, k jelentése 0, és R jelentése amidinocsoport, és amely jelen lehet egy (la) általános képletű vegyületben, ahol a benzamidingyűrű szubsztituálatlan vagy egy vagy két fluorszubsztituenst viselhet, előnyösen az amidingyökhöz képest meta-helyzetben, és
X jelentése a fent megadottak közül bármelyik.
Az (la) általános képletű vegyületek egy még különlegesebb formájánál a benzamidingyűrű szubsztituálatlan.
Az (I) általános képletű vegyületek egy másik különösen előnyös csoportjánál
Y jelentése (L)-prolinil-csoport, r jelentése 1, és
G jelentése (o) általános képletű csoport, ahol
M jelentése kénatom,
W mindegyikének jelentése CH-csoport, és
R jelentése amidinocsoport, és amely jelen lehet egy (Ib) általános képletű vegyületben, ahol
X jelentése a fent megadottak közül bármelyik.
Az (I) általános képletű vegyületek egy további előnyös csoportjánál
Y jelentése (L)-prolinil-csoport, r jelentése 1, és
G jelentése (s) általános képletű csoport, ahol
D jelentése nitrogénatom vagy -CH-csoport, k jelentése 0, és amely jelen lehet egy (le) általános képletű vegyületben, ahol
X jelentése a fent megadottak közül bármelyik, és
D jelentése nitrogénatom vagy -CH-csoport.
Az (la), (Ib) és (le) általános képletű vegyületekben X jelentése előnyösen (a) általános képletű csoport, ahol
R’ jelentése hidrogénatom, a jelentése 1,
T jelentése ciklohexil- vagy fenilcsoport, és
Q jelentése NH-A csoport.
Még előnyösebben A jelentése hidrogénatom, etilszulfonil- vagy karboxi-metil-csoport.
X egy különösen előnyös jelentése N-karboxi-metilD-ciklohexil-alanil-csoport. X másik előnyös jelentése N-karboxi-metil-D-fenil-alanil-csoport.
Az (I) általános képletű különlegesen előnyös vegyületek leírása a példákban található meg. Előnyös, gyógyászati célokra alkalmas sóként vagy oldatként a
15., 18., 23., 44., 45., 46., 48., 49., 51., 52., 56., 65.,
66., 68., 69., 70., 71., 72., 80., 86., 87., 88. és 92. példában ismertetett vegyületek, még előnyösebben a
45., 46., 48., 51., 65., 70., 71. és 72. példában leírt vegyületek használhatók fel. Várakozáson felül kiváló tulajdonságai alapján legelőnyösebb a 48. példában ismertetett vegyület. Másik nagyon előnyös hatóanyag a 65. példában ismertetett vegyület.
Mint azt a fentiekben már említettük, a találmány tárgykörébe az (I) általános képletű vegyületek szerinti, gyógyászati célokra alkalmas savaddíciós sók is beletartoznak. Egy, a találmány szerinti különleges vegyület egy vagy több, elegendően bázikus csoporttal rendelkezik, és ennek megfelelően számos szervetlen és szerves sav bármelyikével való szokásos reakciója során gyógyászati célokra alkalmas sót képez. Savaddíciós sók képzéséhez a gyakorlatban szervetlen savakat, így például sósavat, hidrogénbromidot, hidrogén-jodidot, kénsavat, foszforsavat és ehhez hasonlókat, és szerves savakat, így például p-toluolszulfonsavat, metánszulfonsavat, oxálsavat, p-bróm-fenil-szulfonsavat, karbonsavat, szukcinsavat, citromsavat, benzoesavat, ecetsavat és hasonlókat alkalmaznak. Ebből következően ilyen, gyógyászati célokra alkalmas sók például a szulfát, piroszulfát, biszulfát, szulfit, biszulfit, foszfát, monohidrogén-foszfát, dihidrogén-foszfát, metafoszfát, pirofoszfát, klorid, bromid, jodid, acetát, propionát, dekanoát, kaprilát, akrilát, formát, izobutirát, kaproát, heptanoát, propiolát, oxalát, malonát, szukcinát, szuberát, szebakát, fumarát, maleát, butin-1,4-dioát, hexin-1,6-dioát, benzoát, klór-benzoát, metil-benzoát, dinitro-benzoát, hidroxi-benzoát, metoxi-benzoát, italát, szulfonát, xilolszulfonát, fenil-acetát, fenil-propionát, fenil-butirát, citrát, laktát, gamma-hidroxi-butirát, glikolát, tartarát, metánszulfonát, propánszulfonát, naftalin-1-szulfonát, naftalin-2-szulfonát, mandelát és hasonlók. Előnyös, gyógyászati célokra alkalmas savaddíciós sók az ásványi savakkal, így sósavval, hidrogén-bromiddal és kénsavval képzett sók.
A jelen találmány szerinti vegyületek ismert tulajdonsága, hogy megfelelő oldószerekkel hidrátokat és szolvátokat képeznek. Az oldatok készítésére alkalmas előnyös oldószerek közé tartozik például a víz, alkoholok, tetrahidrofurán, DMF és a DMSO. Előnyös alkoholok a metanol és az etanol. Más, megfelelő oldószerek kiválasztása az oldószer-molekula mérete alapján történhet. A kisméretű oldószer-molekulák megkönnyítik a megfelelő oldat kialakulását. Az oldat vagy a hidrát képződése jellemzően átkristályosodás vagy sóképződés útján megy végbe. Egy, az oldatokra vonatkozó hasznos referenciaanyag: Sykes, Peter, A Giudebook to Mechanism in Organic Chemistry, 6th Ed (1986, John Wiley and Sons, New York). Az itt használt oldat kifejezés magában foglal hidrátformákat, így monohidrátot és dihidrátot is.
Az (I) általános képletű vegyületek előállítása az ismert peptidkapcsolásos módszer szerint történik. Egy ilyen módszernek megfelelően a P-X’-COOH savat, ahol
HU 227 356 Β1
-X’-C(O)- jelentése -X-, melynek jelentése az (I) általános képletű vegyületnél megadottaknak felel meg, és
P jelentése amino-védőcsoport, amennyiben szükséges, egy karboxivédett Y vegyülethez kapcsolunk, eredményként az (oo) általános képletű dipeptidet kapva.
Ezután az Y lánc karboxivédő észtercsoportját (védőcsoport- vagy észtermentesítjük) és a (pp) általános képletű dipeptid szabad sav formáját a védett (qq) reagenssel kapcsoljuk végtermékként az (rr) általános képletű vegyületet kapva (1. reakcióvázlat), ahol
G’ jelentése megegyezik G jelentésével, kivéve, ha R jelentése -CN vagy NHP, (ss), illetve (tt) általános képletű csoport,
P jelentése, amennyiben szükséges, amino-védőcsoport,
P’ jelentése hidrogénatom vagy P, alk jelentése rövid szénláncú alkil- vagy hasonló karboxilsav-védőcsoport, és
Y’ jelentése a látható amino-, illetve karboxifunkciókkal együtt megegyezik Y jelentésével, azaz -Ymegfelel -N-Y’-C(O)-nak.
Amennyiben G’-ben cianocsoport van jelen, azt R valamely jelentésének megfelelően kialakítjuk, majd a szakember számára ismert módon, így például fémkatalizátor fölötti hidrogénezéssel a védőcsoportokat eltávolítva az (I) általános képletű vegyületekhez jutunk.
A P-X’-COOH vegyület HN-Y’-COO-alk vegyülettel történő kapcsolása során első lépésként amennyiben található, az aminosav aminocsoportját védjük. Erre a célra az aminocsoport átmeneti védelmére vagy blokkolására a gyakorlatban használt amino-védőcsoportokat alkalmazzuk.
Amino-védőcsoport alatt az aminocsoport olyan szubsztituensei értendők, melyek blokkolják vagy védik az aminocsoportot, míg a vegyület más funkciós csoportja reakcióban vesz részt. Ilyen amino-védőcsoportok lehetnek például a formil-, tritil-, ftálimido-, triklóracetil-, klór-acetil-, bróm-acetil- és jód-acetil-csoportok, uretán típusú blokkolócsoportok, mint például benziloxi-karbonil-, t-butoxi-karbonil-, 4-fenil-benzil-oxi-karbonil-, 2-metil-benzil-oxi-karbonil-, 4-metoxi-benzil-oxikarbonil-, 4-fluor-benzil-oxi-karbonil-, 4-klór-benzil-oxikarbonil-, 3-klór-benzil-oxi-karbonil-, 2-klór-benzil-oxikarbonil-, 2,4-diklór-benzil-oxi-karbonil-, 4-bróm-benziloxi-karbonil-, 3-bróm-benzil-oxi-karbonil-, 4-nitro-benzil-oxi-karbonil-, 4-ciano-benzil-oxi-karbonil-, 2-(4-xenil)-izopropoxi-karbonil-, 1,1 -difenil-et-1-il-oxi-karbonil-, 1,1 -difenil-prop-1 -il-oxi-karbonil-, 2-fenil-prop-2-il-oxikarbonil-, 2-(p-toluil)-prop-2-il-oxi-karbonil-, ciklopentanil-oxi-karbonil-, 1 -metil-ciklopentanil-oxi-karbonil-, ciklohexan i l-oxi-karboni I-, 1 -metil-ciklohexan i l-oxikarbonil-, 2-metil-ciklohexanil-oxi-karbonil-, 2-(4-toluilszulfonil)-etoxi-karbonil-, 2-(metil-szulfonil)-etoxi-karbonil-, 2-(trifenil-foszfin)-etoxi-karbonil-, 9-fluorenil-metoxi-karbonil- („FMOC”), 2-(trimetil-szilil)-etoxi-karboniI-, alIil-oxi-karboniI-, 1 -(trimetil-sziIil-metiI)-prop-1 -eniloxi-karbonil-, 5-benzizoxalil-metoxi-karbonil-, 4-acetoxi-benzil-oxi-karboniI-, 2,2,2-triklór-etoxi-karbonil-,
2-etinil-2-propoxi-karbonil-, ciklopropil-metoxi-karbonil-, 4-(decil-oxi)-benzil-oxi-karbonil-, izobornil-oxi-karbonil-, 1 -piperidil-oxi-karbonil-csoport és hasonlók, valamint a benzoil-metil-szulfonil-, a 2-(nitro)-fenil-szulfenil-, a difenil-foszfin-oxid-csoport és más hasonló amino-védőcsoportok. Az alkalmazott amino-védőcsoport fajtája mindaddig mellékes, míg a származtatott aminocsoport stabil a molekula többi pozícióján lejátszódó reakciókkal szemben, és a megfelelő pillanatban a molekula maradékának szétszakítása nélkül eltávolítható. Előnyös aminocsoportok a benzil-oxi-karbonil-, allil-oxikarbonil-, t-butoxi-karbonil- és a tritilcsoport. A fentiekben leírtak a cefalosporin-, penicillin- és peptidkémiában használt hasonló amino-védőcsoportokat is felölelik. Az előbbiekben leírt csoportok további példáit lásd J. W. Barton, „Protective Groups in Organic Chemistry”, J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, Chapter 2, és T. W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley and Sons, New York, N.Y. 1981, Chapter 7. Az alkalmazott védett aminocsoport kifejezés egy, a fenti csoportok valamelyikével helyettesített aminocsoportot jelent.
A kapcsolási reakció végrehajtásánál a HN-Y’-COOH képletű vegyületnél egy észtervédőcsoportot alkalmazunk, melyet olyan körülmények mellett tudunk eltávolítani, ahol az amino-védőcsoport sértetlen marad. így a P-X’-COOH acilezősav amino-védőcsoportja a helyén marad, hogy az aminocsoportot a következő kapcsolási reakcióban - melynél a (qq) általános képletű amin kapcsolásával egy (rr) általános képletű vegyülethez jutunk - védje.
A leírásban szereplő karboxivédő észtercsoport a kaboxilsavcsoport olyan, általánosan alkalmazott észterszármazékait jelenti, melyek blokkolják vagy védik a karboxilsavcsoportot a molekula más funkciós csoportjain lezajló reakciók során. Ilyen karboxilsav-védőcsoport lehet például 1-4 szénatomos alkil-, benzil-, 4-nitro-benzil-, 4-metoxi-benzil-, 3,4-dimetoxi-benzil-, 2,4dimetoxi-benzil-, 2,4,6-trimetoxi-benzil-, 2,4,6-trimetilbenzil-, pentametil-benzil-, 3,4-metilén-dioxi-benzil-, benzhidril-, 4,4’-dimetoxi-benzhidril-, 2,2’,4,4’-tetrametoxi-benzhidril-, terc-butil-, terc-amil-, tritil-, 4-metoxi-tritil-, 4,4’-dimetoxi-tritil-, 4,4’,4”-trimetoxi-tritil-, 2-fenilprop-2-il-, trimetil-szilil-, fenacil-, 2,2,2-triklór-etil-, p-(trimetil-szilil)-etil-, p-(di-n-butil)-metil-szilil-etil-, p-toluolszulfonil-etil-, 4-nitro-benzil-szulfonil-etil-, allil-, cinnamil-, 1-(trimetil-szilil-metil)-prop-l-én-3-il-csoport és hasonló láncok. Az alkalmazott karboxi-védőcsoport fajtája mindaddig mellékes, míg a származtatott karboxilsavcsoport stabil a molekula többi pozícióján lejátszódó reakciókkal szemben, és a megfelelő pillanatban a molekula maradékának szétszakítása nélkül eltávolítható. Különösen fontos, hogy a karboxivédett molekulát ne tegyük ki erős nukleofil bázisok hatásának vagy erősen aktivált fémkatalizátort - így például Raney-nikkelt - alkalmazó reduktív körülményeknek. (Ilyen erőteljes eltávolítási körülmények az alábbiakban tárgyalt amino-védőcsoportok eltávolításánál is kerülendőek.) Ezen csoportok további példáit lásd E. Hasiam, „Protective Groups in Organic Chemistry”, J. G. W. Mco8
HU 227 356 Β1 mié, Ed., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, Chapter 5, és T. W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1981, Chapter 5. Az (I) általános képletű vegyületek előállítása úgy is történhet, hogy először a HN-Y’-CONH(CH2)r-G’ általános képletű amid prekurzort állítjuk elő, és ezt reagáltatjuk egy védett X-lánccal. Egy ilyen módszer szerint előállítjuk a (qq) általános képletű vegyületet, ezt kapcsoljuk az (uu) általános képletű vegyülethez, így végtermékként a (vv) általános képletű amidot kapva (2. reakcióvázlat), ahol
P jelentése amino-védőcsoport, így például benziloxi-karbonil- (Cbz), terc-butoxi-karbonil- (Boc), p-toluolszulfonilcsoport és hasonlók. Előnyösen az alkalmazott aminocsoport hidrogénezéssel vagy gyenge savval például trifluor-ecetsavval - vagy erős savval - például sósavval - távolítható el. Példákat ilyen, megfelelő aminocsoportokra lásd T. W. Greene and Peter G. M. Wuts, „Protective Groups in Organic Synthesis”, Second Edition, Chapter 7, page 309-405 (1991), John Wiley and Sons, Inc. A Boc-ot vagy más alkalmas védőcsoportot eltávolítjuk az Y-maradék amino-nitrogénjéről, majd azt a megfelelő aminosav-acil-csoporttal acilezve az alábbi dipeptidet kapjuk (3. reakcióvázlat). A G-ben lévő cianocsoportot kialakítjuk, és az (rr) általános képletű vegyületen lévő védőcsoportokat az előbbiekben leírtak szerint távolítjuk el.
A P-X’-COOH vegyület kapcsolása során először az aminosav aminocsoportját védjük, amennyiben ilyen jelen van. Ennek során az aminocsoport átmeneti védelmére vagy blokkolására általánosan használt hagyományos amino-védőcsoportokat használunk. Példákat ilyen védőcsoportokra a korábbiakban már ismertettünk.
A fentiekben leírt kapcsolási reakciókat hidegen végezzük, előnyösen -20 és +15 °C között. A reakciót iners szerves oldószerben, így például dimetilformamidban, dimetil-acetamidban, tetrahidrofuránban, metilén-kloridban vagy kloroformban és hasonlókban, általános oldószerekben vagy ezek keverékeiben végezzük. Általánosan vízmentes közeget alkalmazunk, amennyiben a kapcsolási reakcióban az acilezősav egy aktív észter formája van jelen. A (qq) és (uu) általános képletű intermedierek előállítására a 4. reakcióvázlat szerinti standard szerves kémiai módszereket alkalmazzuk, ahol
-K-R jelentése -(CH2)rG-csoport.
E szerint a sorrend szerint védett guanidinek állíthatók elő S-metil-izotiokarbamid dupla védésével. Előnyös blokkolócsoport a Boc csoport, melyet S-metilizotiokarbamid di-t-butil-dikarbonát jelenlétében történő elreagáltatása során kaphatunk. Gyakran az S-metilizotiokarbamid egy savsó formáját alkalmazzuk, melyet in situ szabad bázis formájába alakíthatunk át a sót vízben oldva és vizes bázist adva hozzá. Ezután adjuk hozzá a vízzel elegyedő oldószerben - így például t-butanolban - oldott di-t-butil-dikarbonátot, és eredményként a duplán védett S-metil-izotiokarbamidot kapjuk. A kívánt duplán védett guanidint ezután a megfelelő, nem reaktív oldószerben vagy oldószerkeverékben oldott H2N-K-NH2 diamin hozzáadásával kaphatjuk. Tipikusan vízzel elegyedő oldószerek, mint például a dimetil-formamid vagy a víz vagy ezek keveréke, hatásosan alkalmazható. Az ilyen reakciók általános reakcióideje 3-72 óra. A keletkezett védett guanidint ezután a korábban leírt módokon kapcsolva az (I) általános képletű vegyületek védett származékaihoz jutunk, ahol
R jelentése (x) képletű csoport.
Azokban az (I) általános képletű vegyületekben, ahol
R jelentése -NH2-csoport, az intermedier egy egyszeresen védett diamin.
Legtöbb esetben ez az intermedier egy nem védett diamin és a védő reagens mólekvivalens mennyiségének reakciója útján állítható elő. Más, a végső amin (R jelentése -NH2-csoport) előállítására alkalmas módszerek szerves kémikusok számára nyilvánvalóak. Például az amint előállíthatjuk valamely prekurzor funkciós csoport, például egy nitro- vagy cianocsoport átalakításával. Nitrocsoport esetében az aminocsoporttá történő átalakítást előnyösen olyan anyagokon hajtjuk végre, ahol a nitrocsoport közvetlenül az aromás gyűrűhöz kapcsolódik, különösen a fenilcsoporton. Ilyen esetekben a nitro-fornil-csoportot a szakmában ismert számos módszer bármelyike szerint a megfelelő anilinfunkcióvá redukáljuk. Egy különösen hatásos módszer szerint a nitrocsoportot nem reaktív oldószerben, így például etanolban, vízben vagy ezek keverékében oldott nátrium-hidrogén-szulfittal kezeljük. Ha a nitrovegyületet reflux alatt víz-etanol elegyben nátrium-hidrogén-szulfit jelenlétében melegítjük, a reakció általában csak hosszú órák alatt játszódik le. A cianocsoportot hasonló módon redukálhatjuk, amennyiben szükséges, redukálószer, így például lítium-alumínium-hidrid vagy valamely oldószerben, így például tetrahidrofuránban oldott borán jelenlétében, vagy fémmel aktivált nátrium-bór-hidrides redukció útján.
A találmány szerinti amidinek [R jelentése (v) képletű csoport] szintén előállíthatok nitril prekurzorból. Ezen átalakítás végrehajtására a szakmában számos módszer ismeretes. Különösen az az eljárás előnyös és hatásos, mikor először piridin és trietil-amin elegyében oldott hidrogén-szulfidot, majd acetonos és metiljodidos kezelést, végül pedig metanolban oldott ammónium-acetátos kezelést alkalmazunk. Lehetőség van az átalakítás végrehajtására a nitril hidroxil-amin-hidrokloriddal és egy hidroxilos oldószerben, mint például etanolban oldott bázis, mint például N,N-diizopropil-etilaminnal történő hevítésére, melyet katalitikus hidrogénezés követ (így palládiummal aktivált szén feletti hidrogenolízis). Ez az eljárás a hidroxi-amidin-formát eredményezi, mint intermediert, mely izolálható, amennyiben szükséges. A találmány szerinti vegyületek előállításánál alkalmazott kiindulási anyagok jól ismertek, kereskedelmi forgalomban nem kaphatók, és szakemberek által általánosan alkalmazott standard módszerek szerint kerülnek előállításra. A 4-helyettesített prolinok [RP jelentése 1-6 szénatomos alkil- vagy 3-8 szénatomos cikloalkil- vagy -(CH2)p-L-(CH2)q-T’
HU 227 356 Β1 képletű csoport], melyeket a találmány szerinti vegyületek előállítására használunk fel, mind cisz-konfigurációjúak a 4-szubsztituens karbonillánchoz viszonyított helyzetét tekintve. Az ezen funkció (I) általános képletű vegyületekbe történő beépítésére szolgáló intermediereket standard módszerekkel állítjuk elő.
Például azok a 4-helyettesített prolinvegyületek, ahol az RP csoport a prolingyűrűhöz való kapcsolódási helyén egy metiléncsoportot tartalmaz, az 5. reakcióvázlat alapján állítható elő, ahol
R4 jelentése egy R3CH2 képletű csoport, vagyis egy, a prolingyűrűhöz való kapcsolódási helyén egy metiléncsoportot tartalmazó RP csoport.
A 4-hidroxi-prolint, melynek cisz és transz formája is kereskedelmi forgalomban kapható, először aminovédőcsoporttal védjük - mely védésre a Cbz csoport különösen alkalmas. Az így kapott intermediert ezután észterezzük (a metil- vagy etil-észterek különösen alkalmasak), majd az észtert oxidálva a megfelelő ketonhoz jutunk. Az oxidációt a számos oxidációs eljárás bármelyikét választva elvégezhetjük, mint például Jones-reagenssel vagy piridínium-klorokromáttal, mely utóbbi különösen hasznos, azt száraz, nem reaktív oldószerben, például diklór-metánban alkalmazva. A reakció szobahőmérsékleten általában 8-16 óra alatt lejátszódik. Ezt a labilis keton intermediert a továbbiakban a megfelelő Wittig-reagenssel reagáltatva a kívánt olefinhez jutunk. Főleg a megfelelő, RP-helyettesített trifenil-foszfónium-halidot szokták száraz, iners oldószerhez - például tetrahidrofuránhoz - adni, mely valamilyen erős bázist - például kálium-t-butoxidot - tartalmaz. A keton hozzáadása után, szobahőmérsékleten, körülbelül 3 óra elteltével a kívánt olefin intermedier izolálható. A jó olefinkitermelés érdekében a Wittig-reagenst a ketonhoz képest 0,4-0,6-szeres mólfeleslegben célszerű alkalmazni. Az olefint ezután szabványos redukciós módszerrel a kívánt RP-helyettesített prolinná redukáljuk. Laboratóriumi körülmények között ezt az átalakítást legkönnyebben katalitikus hidrogénezéssel végezhetjük. Az olefin iners oldószerben, például etanolban lévő katalizátor (például 5%-os palládiumos szén) jelenlétében végzett hidrogénezését hatásosan atmoszferikus nyomáson végezhetjük. Azon intermedierek esetében, ahol az amino-védőcsoport Cbz csoport, a hidrogénezés során a védőcsoport is leszakad, és így olyan vegyülethez jutunk, mely alkalmas a P-X’-COOH képletű vegyülettel történő kapcsolásra. Mint az a szakemberek számára nyilvánvaló, ez az eljárás nem alkalmazható olyan vegyületek előállítására, ahol az RP csoport aromás gyűrű, vagy valamilyen heteroatomon keresztül kapcsolódik a prolingyűrűhöz. Azaz a fenti séma szerint R3 jelentése alkil-, aralkil(például benzil-), (cikloalkil)-alkil-csoport stb. lesz.
Egy, az ezen intermedierek előállítására szolgáló módszert mutat be a 6. reakcióvázlat.
Ez a reakcióvázlat a korábban ismertetett Wittigreakció egyik lehetséges megvalósítási formája, mely hasznosan olyan vegyületek előállítására alkalmazható, melyek számára Wittig-reagens nem készíthető. Vagyis azon intermedierek előállításánál, ahol
Ra jelentése alkil- vagy fenil- vagy hasonló csoport, a pirrolidinon intermediert reagáltatjuk a megfelelő Grignard-reagenssel.
A reakció során a Grignard-reagenst jellemzően kis mólfeleslegben, általában alacsony hőmérsékleten (például -80 és -60 °C között) és alacsony fagyáspontú, iners oldószerben, például tetrahidrofuránban alkalmazzák. A reagensek elegyítése után engedélyezett a reakcióelegy szobahőmérsékletre melegítése, miután a reakció órák múltán lejátszódik. A keletkező intermediert víztelenítjük, például trifluor-ecetsavas kezeléssel. A 3,4-dihidrointermediert ezután a kívánt cisz-intermedierré alakítjuk a fentiekben ismertetett, az olefin intermedier redukciójánál alkalmazott módszer segítségével.
Azok az intermedierek, ahol a hetero „L” csoport jelentése oxigénatom, mely közvetlenül a prolingyűrűhöz kapcsolódik (azaz p jelentése 0), előállíthatok a 7. reakcióvázlat szerinti Mitsunobu-reakcióval [Mitsunobu, Synthesis, 1, (1981)]. A reakció során a transz-hidroxi-pirrolidin-karboxil-észtert oldószerben, például tetrahidrofuránban oldott trifenil-foszfinnal reagáltatjuk, aromás alkohol jelenlétében. Az elegyet körülbelül 0 °C-ra hűtjük, és dietil-azodikarboxilátot adunk hozzá. Szobahőmérsékletre történő felmelegítés után lejátszatjuk a reakciót, melynek eredményeképpen a kívánt cisz-intermedierhez jutunk. Míg az előbbi reakcióvázlat azon vegyületek reakcióit írja le, ahol
L jelentése -0- csoport, p és q jelentése 0, és T jelentése Ar csoport, ez a lépéssorozat alkalmas más vegyületek előállítására, ahol p jelentése 0, és
L jelentése -O- csoport.
Azok az intermedierek, ahol
L jelentése közvetlenül a gyűrűhöz kapcsolódó kénatom, előállíthatok úgy, hogy első lépésben a hidroxicsoportot toziláttá, vagy hasonló kilépőcsoporttá alakítjuk, és ezután tiolátanionra cseréljük [lásd még például Krapcho, et al., J. Med. Chem., 31, 1148-1160 (1988); Smith, et al., J. Med. Chem., 31,875-855 (1988)].
Azok az intermedierek, ahol
L jelentése közvetlenül a gyűrűhöz kapcsolódó nitrogénatom, előállíthatok úgy, hogy első lépésben a hidroxicsoportot toziláttá, vagy hasonló kilépőcsoporttá alakítjuk, és ezután azidra cseréljük. Az azidot ismert módszerek segítségével redukálva és alkilezve a kívánt funkciós csoportot kapjuk [lásd például Smith, et al., J. Med. Chem., 31,875-855 (1988)].
Azok a találmány szerinti vegyületek, melyek ciszhelyzetű Ohi funkciós csoportot tartalmaznak, előállíthatok úgy, hogy a megfelelő savból S-indolin-karboxilsav-etil-észtert készítünk [lásd Vincent, et al., Drug design and Discovery, Vol. 9., pp 11-28, (1992)], és ezt az intermediert etanolban oldott 5%-os palládiumos szén felett hidrogénezéssel redukálva kapjuk az oktahidroindol-2-karboxilsav-észtert, általánosan Ohi-észtert. Ezt a reakciót a 8. reakcióvázlat szemlélteti.
HU 227 356 Β1
Azok a találmány szerinti vegyületek, amelyek transz-Ohi funkciót tartalmaznak, a 9. reakcióvázlat szerint állíthatók elő [Vincent, et al., Drug design and Discovery, Vol. 9., pp 11-28, (1992)].
A találmány szerinti, heteroatomos vagy anélküli biciklusos rendszert tartalmazó vegyületek általánosan a 10. reakcióvázlat szerinti módszer alapján állíthatók elő [Teetz, et al., Tetrahedron Letters, 25, 4479 (1984)], ahol
P jelentése védőcsoport, és
Rx jelentése alkilcsoport.
A találmány szerinti vegyületek előállítására szolgáló, N-helyettesített glicin funkciós csoport (Y) beépítésére használt intermedierek szabványos módszerekkel állíthatók elő.
Például egy haloacetát-észter, mint például a t-butil-bróm-acetát a kívánt helyettesített vegyületté alakítható a megfelelő primer aminnal való reakció során, melyet a 1. reakcióvázlat szemléltet. Itt a t-butil-brómacetátot a megfelelő tiszta vagy előnyösen nem reaktív oldószerben - így például alkoholban - oldott aminnal reagáltatjuk. A reakció teljessé tételéhez előnyösen aminfelesleget használunk. A reakcióelegy előnyösen valamilyen nem reaktív savas tisztítót is tartalmaz, így például legalább egy mólekvivalens trietil-amint. Míg a reagenseket általában hűtve keverik össze (például 0 °C-on), a reakciót szobahőmérsékletre melegítik, ahol a reakció 24 óra alatt lejátszódik. Bár a reakcióban előnyösen bróm-acetátot használunk, más haloacetátok, mint például a jód-acetátok és a klór-acetátok szintén alkalmazhatók az átalakítás során. Hasonlóan, más észtercsoportok is alkalmazhatók. A t-butil-észter előnyös, mivel a későbbiekben anizolos és trifluorecetsavas kezeléssel könnyen eltávolítható.
Egy másik, ezen intermedierek előállítására alkalmas módszert a 2. reakcióvázlat ismertet, ahol
R°-CH2 jelentése olyan R9 csoport, mely a glicinlánchoz való kapcsolódási hely mellett egy helyettesítetlen metiléncsoportot visel.
Ebben a reakcióban megfelelő aldehidet keverünk össze egy nem reaktív oldószerben, mint például metanolban vagy etanolban oldott glicin-észterrel. Amennyiben a glicin-észter só formáját használjuk, valamely bázis, mint például kálium-hidroxid mólekvivalens mennyiségét alkalmazhatjuk az amino-észter szabad bázisának létrehozására. Az aldehid és a glicin-észter reakciója az intermedier Schiff-bázist eredményezi, melyet redukálószerrel, mint például nátrium-cianobór-hidrid, in situ redukálhatunk. A Schiff-bázis keletkezése általában kevesebb mint egy órán belül jelentkezik, a redukció általában 10-15 óra elteltével válik teljessé. A metil- és az etil-észterek alkalmazása különösen hasznos, mivel ezek a csoportok vizes dioxánban oldott lítium-hidroxidos kezeléssel eltávolíthatók. Az R°-CHO aldehid helyett a megfelelő ketont használva az intermedierek előállításánál azt eredményezi, hogy a glicin-aminhoz kapcsolódó metiléncsoport helyettesített lesz. Lehetőség szerint, és különösen azoknál a vegyületeknél, ahol R9 jelentése Ar (azaz nincs közbeeső alkilcsoport), a P-X’-CONHAr intermediert előnyösen szabványos módszerekkel állítjuk elő (azaz a P-X’-COOH vegyület aktivált formáját reagáltatjuk ArNH2-nal), és ezt az intermediert egy, a fent leírt haloacetáttal reagáltatva kapjuk a P-X’-CONHAr-CH2-COO-alk képletű vegyületet, melyet a szokásos módon alakíthatunk tovább.
Sok, a találmány szerinti vegyület vagy azok intermedierjei átalakíthatok egymásba szabványos módszerek segítségével. Például a nitrocsoporttal rendelkező arilvegyületek redukálhatok (például nem reaktív oldószerben - például etanolban, vízben vagy azok keverékében - oldott nátrium-hidrogén-szulfit jelenlétében). A nitrovegyületet víz és etanol elegyében, reflux alatt, nátrium-hidrogén-szulfit jelenlétében melegítve a redukció általában néhány óra alatt lezajlik. A keletkező amin a végtermékben is jelen lehet, amennyiben az amin egy intermedier formában van jelen, szükség lehet rá, hogy azt végső, kívánt formájába (például acilezéssel az acilezett aminhoz jutunk) vagy védett formájába alakítsuk át, hogy elkerüljük mellékreakciók lejátszódását a későbbi lépések során. Amennyiben a szabad amin a kívánt vegyület, a Cbz védőcsoport különösen hasznos ebben a tekintetben. Más, ilyenfajta átalakítások és egymásba alakítások nyilvánvalóak a képzett szerves kémikusok számára.
Mint az a szakemberek számára nagy jelentőséggel bír, a fenti átalakítások végrehajthatók a fent jelzett kiindulási anyagokon, vagy a legtöbb esetben az ugyanolyan, megfelelő funkciós csoportokat tartalmazó di- vagy tripeptid intermediereken is. Az utóbbi esetben a különböző csoportok védésének szükségessége vagy annak hiánya figyelmen kívül hagyható, az alkalmazott kémia típusa és rendje fogja meghatározni a védőcsoportok szükségességét és típusát, valamint a szintézis végrehajtási sorrendjét. Mint az a képzett mechanikusok számára szintén nagy jelentőségű, egészen addig választható más védőcsoport, míg az a további lépések során a funkciós csoport védelmét szolgálja, de a megfelelő körülmények között, valamint a későbbi átalakítások végrehajtásának céljából az el is távolítható. Például az 1. számú reakcióvázlatban G’ jelentése magában foglal olyan szubsztituenseket, ahol R jelentése -CN-csoport, ez a nitrilcsoport amidinné alakítható vagy aminná redukálható, melyet a találmányszerinti guanidinné alakíthatunk.
A találmány szerinti vegyületeket legjobban savaddíciós só formájában izolálhatjuk. Az (I) általános képletű vegyületek savakkal képzett sói, mint például a korábban említettek, alkalmazhatók, mint a trombózisellenes szerek beadására alkalmas gyógyászatilag megfelelő sók, valamint az ezen szereket tartalmazó készítmények előállítására. Más savaddíciós sók is előállíthatok és használhatók peptidek izolálására és tisztítására. Például a szulfonsavakkal képzett sók, mint például a metánszulfonsav, n-butánszulfonsav, p-toluolszulfonsav és a naftalinszulfonsav szintén alkalmazhatók.
Az (I) általános képletű vegyületek előállíthatok
a) a megfelelő, (II) általános képletű vegyületekből, ahol
HU 227 356 Β1 (P)X jelentése egy X gyök, mely egy vagy több védőcsoportot visel, melyek egymástól függetlenül az (I) általános képletű vegyületek P amino-védőcsoportjai lehetnek, ahol
X jelentése magában foglal egy alap-NH-láncot és az (I) általános képletű vegyületek egy P karboxi-védőcsoportját, ahol
X jelentése egy karboximaradék és G(P) jelentése egy olyan G gyök, mely egy vagy több, a P amino-védőcsoportok közül egymástól függetlenül választott védőcsoportot visel, a védőcsoportok egyidejű vagy egymás utáni eltávolításával,
b) úgy, hogy amennyiben egy olyan (I) általános képletű vegyület elállítása a cél, ahol
R jelentése (z) képletű csoport, az olyan (I) általános képletű vegyületet, ahol
R jelentése (v) képletű csoport, és amelyet, amennyiben az (I) általános képletű vegyület sóját kívánjuk előállítani, egy gyógyászatilag megfelelő savval reagáltatunk, hidrogenolízissel alakítjuk át.
Előnyös lehet, ha a b) és az a) eljárást egyidejűleg folytatjuk le. Az olyan (I) általános képletű vegyületeknél, ahol a sav védőcsoport a t-butil-észter és/vagy egy amino-védőcsoport t-butoxi-karbonil-csoport, a védőcsoport(ok) eltávolítható(k) erős savas kezeléssel - így például trifluor-ecetsavval vagy iners oldószerben, így például dioxánban vagy diklór-metánban oldott vízmentes hidrogén-kloriddal - anizol jelenlétében. Az olyan (I) általános képletű vegyületeknél, ahol a sav védőcsoport a benzil-észter és/vagy egy amino-védőcsoport benzil-oxikarbonil-csoport, a védőcsoport(ok) eltávolítható(k) előnyösen etanolos hidrogén-kloridban, szénre felvitt palládiumkatalizátor fölött végrehajtott hidrogenolízissel.
Az (I) általános képletű vegyületek tisztítására előnyösen alkalmazható eljárás - melynek során egyidejűleg a kívánt, stabil só formát kapjuk - leírása az 5,250,660 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban található. E szerint a módszer szerint stabil szulfátokat vagy hidrokloridokat kapunk preparatív tisztítás útján, C18 fordított fázisú kromatográfiás módszer segítségével, melynek során a vizes fázis 2,5 pH-jú kénsav- vagy sósavtartalmú, és a szerves fázis acetonitril. A savas eluensnél a pH-t hidroxil formájú anioncserélő gyantával, így például Bio-Rad AG 1X8cal 4 és 6 érték közé szabályozzuk. A pH beállítása után a tripeptid-szulfát- vagy -hidrokloridsó oldatát liofilizálva száraz por formájában a tiszta sót kapjuk. Ezen eljárás egy változataként nyers D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2-szulfátot oldhatunk vízben, és az oldatot 5 cmx50 cm-es Vydac Cl8 RP HPLC oszlopra töltjük. Gradiensként 10 órán át 2-10% B-t (A=0,01% H2SO4; B=acetonitril) használunk. Az összetett frakciókat összegyűjtjük, és az RP HPLC alapján a termékeket tartalmazókat különválasztjuk. Az elkülönített frakciók pH-ját hidroxid formájú AG1-X8 gyantával (Bio-Rad, 3300 Regatta Blvd., Richmond, CA, 94084) 4,0 és 4,5 közé állítjuk be. Az oldatot szűrjük, és a szűrletet liofilizálva szulfátsó formájában a tiszta D-, L-diamidhoz jutunk.
Az X gyöknél lévő diasztereomerek optikailag aktív izomerjeit szintén a találmány részének tekintjük. Ilyen, optikailag aktív izomerek előállíthatok megfelelő, optikailag aktív prekurzoraikból a fentiekben ismertetett módszerek szerint, vagy a racém keverék oldásával. Ez kivitelezhető egy királis reagenssel történő reakció és az ezt követő kromatográfia vagy ismételt kristályosítás útján. A királis kiegészítő eltávolítása a találmány szerinti vegyületek vagy azok prekurzorainak optikailag elég tiszta izomerjeit eredményezi. A felbontással kapcsolatos további részleteket lásd Jacques, et al., Enantiomers, Racemates, and Resolutions, John Wiley and Sons, 1981.
A találmány szerinti vegyületek kiindulási vegyületeiként alkalmazott anyagok jól ismertek, kereskedelmi forgalomban nem kaphatók, és a szakemberek által rendszeresen alkalmazott szabványos módszerek útján kerülnek előállításra.
A találmányt közelebbről a következő példákon keresztül világítjuk meg, szolgáltatunk összehasonlító példákat, de ezek nem jelentik a találmány tárgyi körének korlátozását.
A használt rövidítések jelentése a következő:
Aminosavmaradékok:
Arg: arginilGlu: glutamilGly: glicilPro: prolinilhPro: homoprolinilAzt: acetidin-2-karbonilPhg: fenil-glicilPhe: fenil-alanilhPhe: homofenil-alanil1 -Tiq: 1,2,3,4-tetrahid roizoki nol i n-1 -karbon i I3-Tiq: 1,2,3,4-tetrahid roizoki nol i n-3-karbon i ICha: β-ciklohexil-alanilhCha: a-amino-y-ciklohexil-butirilNMI: N-metil-indol-2-oilOhi: cisz-oktahidroindol-2-oil1-Piq: perhidroizokinolin-1-karbonil3-Piq: perhidroizokinolin-3-karbonilMet: metionilMet(O2): S,S-dioxo-metionilAgm: agmatinBoc: t-butil-oxi-karbonilBn: benzilCbz: benzil-oxi-karbonilDCC: diciklohexil-karbodiimid
DMF: dimetil-formamid
Et: etilDMSO: dimetil-szulfoxid
EtOAc: etil-acetát
Et2O: dietil-éter
EtOH: etanol
Fmoc: 9-fluorenil-metoxi-karbonilFAB-MS: gyors atombombázásos tömegspektrum
FD: meződeszorpciós tömegspektrum
IS-MS: ionszóródásos tömegspektrum
HRMS: nagyfelbontású tömegspekrum
HU 227 356 Β1
HOBT: 1 -hidroxi-benzotriazol-hidrát
IR: infravörös spektrum
RPHPLC: fordított fázisú, nagynyomású folyadékkromatográfia
Ph: fenilTFA: trifluor-ecetsav
THF: tetrahidrofurán
TLC: vékonyréteg-kromatográfia
Az RPHPLC-nél a következő paraméterekkel dolgoztunk:
A oldószer: 0,05%-os vizes sósav (1,5 ml tömény sósav 3 I vízben oldva)
B oldószer: acetonitril gradiens: példánként definiálva
1. módszer: oszlop: Vydac C18 - 2,5 cmx25 cm átfolyási sebesség: 5 ml/perc
2. módszer: oszlop: Vydac C18 - 2,5 cmx25 cm átfolyási sebesség: 10 ml/perc
3. módszer: oszlop: Vydac C-|8 - 2,5 cmx50 cm átfolyási sebesség: 10 ml/perc
Amennyiben külön nincs jelezve, a pH-beállítás és a feldolgozás vizes, savas vagy bázikus oldatokkal történik.
A példáknál, ahol 1H-NMR jelzés látható, a reakciótermék vizsgálatát a példa címvegyületére protonNMR-rel végeztük. Az adatok nélküli IR jelzés azt jelenti, hogy kielégítő infravörös spektrumot kaptunk. HRMS módszert azoknak a vegyületeknek a pontos tömegmeghatározására használtunk, amelyeknél a leírt módszer végtermékére kielégítő elemanalízist nem kaptunk; a megfigyelt ion elemi összetételét feltüntettük (például MH+).
Példák
1. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-Agm.HCI
A) A Boc-D-Phe-Pro-OBn előállítása °C-on, 600 ml diklór-metánban 81,9 g (336 mmol) Boc-D-Phe-OH-t, 81,2 g (336 mmol) Pro-OBn-hidrokloridot, 50 g (370 mmol) HOBT-tés 176 ml (1,008 mmol) Ν,Ν-diizopropil-etil-amint oldunk, és az oldathoz 71 g (370 mmol) 1 -(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid hidrokloridot adunk. Az elegyet 18 órán át kevertetjük, 1 I dietil-éterrel hígítjuk, és sorrendben először 250 ml 1 N citromsavval háromszor, 250 ml vízzel egyszer, 250 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal háromszor és 250 ml telített vizes nátrim-kloriddal egyszer mossuk. A szerves fázist Na2SO4 felett szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk, végtermékként 140 g halványsárga habot kapunk (kitermelés: 92,5%). FD-MS, m/e 452 (M+) 1H-NMR
B) A D-Phe-Pro-OBn.TFA előállítása g (150 mmol) Boc-D-Phe-Pro-OBn és 50 ml diklór-metán 0 °C-on kevert oldatához 20 ml anizolt, majd 400 ml trifluor-ecetsavat adunk. Háromórai kevertetés után az oldószereket vákuumban bepároljuk, és a sűrű, olajszerű maradékot 1,5 I dietil-éterben oldjuk és 72 órán keresztül hűtve tároljuk. A fehér csapadékot szűrjük, 300 ml dietil-éterrel mossuk, majd szárítjuk. Végtermékként 59,4 g fehér port kapunk (kitermelés: 85%).
1H-NMR
C) Az EtSO2-D-Phe-Pro-OBn előállítása g (25,7 mmol) D-Phe-Pro-OBn.TFA, 7 ml (50,2 mmol) trietil-amin és 200 ml diklór-metán oldatát -78 °C-on kevertetjük, és az oldathoz cseppenként 2,65 ml (28,3 mmol) etánszulfonil-kloridot adunk csepegtetőtölcséren keresztül. A reakcióedényt 0 °C-ra melegítjük, és 4 órai kevertetés után az elegyhez 10 ml vizet adunk. A szerves fázist 100 ml 1 N sósavval háromszor, 100 ml telített nátrium-klorid-oldattal egyszer mossuk, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A terméket gyors szilikagél kromatográfiával tisztítjuk, az elúcióhoz etil-acetát/hexánok (6:4) elegyét használva. A termékeket tartalmazó frakciókat (TLC-vel elbírálva) egyesítettük, és bepárolva 6,62 g sárga olaj formájában kaptuk a végterméket, mely megszilárdult. 1H-NMR
FD-MS, m/e 445 (M+)
Elemanalízis C23H28N2O5S-ra: (%) képlet alapján számított: C, 62,14; H, 6,35; N, 6,30 mért: C, 61,87; H, 6,37; N, 6,18
D) Az EtSO2-D-Phe-Pro-OH előállítása
Egy 150 ml p-dioxánból és 4,5 g (10,1 mmol) EtSO2-D-Phe-Pro-OBn-ből készített, kevert oldathoz egy 75 ml vízből és 2,1 g (50,5 mmol) lítium-hidroxidmonohidrátból készített oldatot adunk. Az elegyet 16 órai kevertetés után, vákuum alatt felére pároljuk be, majd 300 ml vízzel és 100 ml 0,1 N NaOH-oldattal hígítjuk. A vizes fázist 250 ml dietil-éterrel kétszer mossuk, szilárd citromsavval savanyítjuk, és 150 ml etil acetáttal háromszor extraháljuk. Az egyesített etil-acetátos extraktumokat 200 ml telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük, majd bepároljuk, és eredményképpen 3,6 g fehér, szilárd anyagot kapunk (kitermelés: 90%).
FD-MS, m/e 355 (M+)
Elemanalízis C16H22N2O5S-ra: (%) számított: C, 54,22; H, 6,26; N, 7,90 mért: C, 54,40; H, 6,42; N, 7,85
E) N,N’-di-Boc-S-metil-izotiokarbamid előállítása
Egy 100 g (458 mmol) di-t-butil-dikarbonátból és
300 ml t-butanolból készített, kevert oldathoz 32,7 g (117 mmol) bisz-S-metil-izotiokarbamid 150 ml vízzel készített oldatát, majd 19,2 g (480 mmol) nátrium-hidroxid 150 ml vízzel készített oldatát adjuk. Az elegyet 48 órai kevertetés után vákuumban körülbelül eredeti térfogatának egyharmadára pároljuk be, majd ezután 500 ml dietil-éterrel hígítjuk. A szerves fázist 250 ml vízzel egyszer, 250 ml 1 N citromsavval háromszor, majd 250 ml vízzel még egyszer mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítva, szűrve és vákuumban bepárolva végtermékként 42 g szilárd, fehér anyagot kapunk (kitermelés: 62%).
1H-NMR
HU 227 356 Β1
F) N9,N9’-di-Boc-agmatin előállítása g (258 mmol) 1,4-bután-diamint 300 ml 2:1 arányú dimetil-formamid-víz elegyben oldunk, és az elegyhez keverés közben 15 g (52 mmol) N,N’-di-BocS-metil-izotiokarbamid 100 ml dimetil-formamiddal készített oldatát adjuk. Kétórai kevertetés után az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, majd a maradékot 250 ml 1 N citromsavban oldjuk, 250 ml vízzel hígítjuk és 250 ml etil-acetáttal mossuk. Az etil-acetátos fázist 100 ml 1 N citromsavval visszaextraháljuk, az egyesített vizes fázisokat nátrium-karbonáttal lúgosítjuk, szilárd nátrium-kloriddal telítjük, és 250 ml etil-acetáttal kétszer extraháljuk. Az egyesített etil-acetátos extraktumokat 200 ml telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd MgSO4 fölött szárítva, szűrve és bepárolva 12,5 g sűrű sziruphoz jutunk (kitermelés: 73%). 1H-NMR
G) Az EtSO2-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2 előállítása g (6 mmol) N9,N9’-di-Boc-agmatin 30 ml diklórmetánnal készített oldatához 2,1 g (6 mmol) EtSO2-DPhe-Pro-OH-t, 810 mg (6 mmol) HOBT-t és 1,6 g (12 mmol) Ν,Ν-diizopropil-etil-amint, majd 1,4 g (73 mmol) 1-(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 20 órán át kevertetjük, majd 300 ml etil-acetáttal hígítjuk, és 150 ml 1 N citromsavval háromszor, 150 ml vízzel egyszer és telített vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal kétszer mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk, elúciós gradiensként etil-acetáton keresztül etilacetát:hexán (1:4) arányt alkalmazva. A terméket tartalmazó frakciókat (TLC-vel kiválasztva) egyesítjük, és bepárolva 2,4 g sűrű olajat kapunk (kitermelés: 60%). 1H-NMR
FD-MS, m/e 668 (MH+)
H) Az EtSO2-D-Phe-Pro-Agm.HCI előállítása
1,6 g (2,4 mmol) EtSO2-D-Phe-Pro-Agn(Boc)2 1 ml anizollal készített szuszpenzióját keverés közben 20 ml trifluor-ecetsavban oldjuk és szobahőmérsékleten egy órán át kevertetjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot felosztjuk, és egy részét 100 ml vízben, más részét 50 ml dietil-éterben oldjuk. A vizes fázist újra 50 ml dietil-éterrel mossuk, majd részben bepároljuk és liofilizáljuk, melynek eredményeképpen 1,4 g nyers trifluor-acetát-sót kapunk. Az anyag felét vízben oldjuk, RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=98/2, A/B=50/50-ig haladva 60 perc alatt), és végtermékként 490 mg fehér port kapunk (kitermelés: 81%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 467 (M+)
Elemanalízis C21H34N6O4S.HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 48,41; H, 7,16; N, 16,13; Cl, 6,80 mért: C, 48,01; H, 6,81; N, 16,15; Cl, 6,97
2. példa: EtSO2-D-Cha-Pro-Agm.HCI
A) A Boc-D-Cha-Pro-OBn előállítása
Az 1 A) példában leírtakkal teljesen megegyező módon Boc-D-Cha-Pro-OBn-t állítunk elő Boc-D-Cha-OHból és Pro-OBn.HCI-ból 109 g végterméket kapva (kitermelés: 91%).
FD-MS, m/e 458 (M+)
B) A D-Cha-Pro-OBn.TFA előállítása
A vegyület előállítását az 1B) példában leírtakkal teljesen megegyező módon végezzük, 130 g végterméket kapva (elméleti kitermelés: 116%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 359 (M+)
C) EtSO2-D-Cha-Pro-OBn előállítása
A vegyületet az 1C) példában leírtakkal teljesen megegyező módon állítjuk elő, és 2,3 g végterméket kapunk (kitermelés: 20%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 450 (M+)
Elemanalízis C23H34N2O5S-ra: (%) számított: C, 61,31; H, 7,61; N, 6,22 mért: C, 61,55; H, 7,59; N, 6,28
D) EtSO2-D-Cha-Pro-OH előállítása
A vegyületet az 1D) példában leírtakkal teljesen azonos módon állítjuk elő, 0,78 g végterméket kapunk (kitermelés: 48%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 361 (M+)
E) EtSO2-D-Cha-Pro-Agm(Boc)2 előállítása
A vegyületet az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, 400 mg EtSO2-D-Cha-ProAgm(Boc)2-t kapunk EtSO2-D-Cha-Pro-OH-ból és N9,N9’-di-Boc-Agm-ból kiindulva (kitermelés: 40%). 1H-NMR
FD-MS, m/e 674 (MH+)
F) EtSO2-D-Cha-Pro-Agm.HCI előállítása
A vegyületet az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, 100 mg végterméket kapunk (kitermelés: 45%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=98/2, A/B=50/50-ig haladva 60 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 473 (M+)
Elemanalízis C21H40N6O4S.1,2HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 47,20; H, 8,15; N, 15,73; Cl, 7,96 mért: C, 47,47; H, 7,84; N, 16,10; Cl, 7,80
3. példa: EtOCO-D-Phe-Pro-Agm.HCI
A) EtOCO-D-Phe-Pro-OH előállítása
A vegyületet az 1C) és 1D) példában leírtakkal lényegében azonos módon, etil-kloroformátot használva etánszulfonil-klorid helyett állítjuk elő, és 6,59 g végterméket kapunk (kitermelés: 92%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 335 (M+)
Elemanalízis C17H22N2O5-ra: (%) számított: C, 61,07; H, 6,63; N, 8,38 mért: C, 60,88; H, 6,72; N, 8,14
HU 227 356 Β1
B) EtOCO-D-Phe-Pro-Agm.HCI előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon EtOCO-D-Phe-Pro-OH-ból és N9,N9’-di-Boc-Agmból 2,1 g EtOCO-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2-t állítunk elő (kitermelés: 54%). Ezután az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon EtOCO-D-Phe-ProAgm.HCI-t állítunk elő, és 390 mg végterméket kapunk (kitermelés: 77%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=98/2, A/B=50/50-ig haladva 60 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e
Elemanalízis C22H34N6O4.0,9HCI.0,2TFA.H2O-ra: számított: C, 51,70; H, 7,22; N, 16,15; Cl, 6,13 mért: C, 51,73; H, 7,20; N, 16,54; Cl, 6,36
4. példa: NMI-D-Phe-Pro-Agm.HCI (N-[(1-metil-1 Hindol-2-il)-karbonil]-D-fenil-alanil-N-{4-[(aminoimino-metil)-amino]-butil}-L-prolinamidmonohidroklorid)
A) 2,6 g (14,9 mmol) N-metil-indol-2-karboxilsavat 45 ml száraz tetrahidrofuránban oldunk, és az oldathoz 3 g (16,5 mmol) pentafluoro-fenolt, majd 3,2 g (16,5 mmol) 1-(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimidet adunk. A keveréket reflux alatt 3,5 órán keresztül kevertetjük, majd szobahőmérsékletre hűtjük. Az elegyhez 7 g (14,9 mmol) D-Phe-Pro-OBn.TFA és 4 g (30 mmol) N,N-diizopropil-etil-amin 25 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk. További 2 órai kevertetés után az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 500 ml etil-acetátban oldjuk, és 250 ml 0,1 N vizes nátrium-hidrogén-szulfáttal háromszor, majd 250 ml 1 N vizes kálium-karbonáttal szintén háromszor mossuk. A szerves fázist Na2SO4 fölött szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk, így termékként 6,5 g amorf szilárd anyagot kapunk, mely a kívánt végtermék, pentafluoro-fenollal szennyezve. Ezt a terméket az 1D) példában leírtakkal teljesen megegyezően elhidrolizáljuk, melynek eredményeképpen 3,8 g vakító fehér szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 62%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 419 (M+)
B) NMI-D-Phe-Pro-Agm.HCI előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon 900 mg NMI-D-Phe-Pro-Agm(Boc)2-t állítunk elő (kitermelés: 20%). Ezután az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon 114 mg NMI-DPhe-Pro-Agm.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 31%). A terméket jégecetben és RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=90/10, A/B=40/60-ig haladva 80 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 532 (M+)
Elemanalízis C29H37N7O3.0,9HCI.0,6TFA.0,5H2O-ra:
(%) számított: C, 56,46; H, 6,29; N, 15,27; Cl, 4,97 mért: C, 56,77; H, 6,58; N, 15,35; Cl, 5,28
5. példa: D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NH)NH2.HCI
A) Boc-D-Phe-Pro-OH előállítása
660 ml p-dioxánban 145 g (320 mmol) Boc-D-PhePro-OBn-t oldunk, és az elegyhez 54 g (1,280 mmol) lítium-hidroxid-monohidrát 330 ml vízzel készített oldatát adjuk erőteljes keverés mellett. Az oldatot 4 óra elteltével eredeti térfogatának körülbelül egynegyedére pároljuk be, majd 350 ml vízzel és 100 ml 0,1 N nátrium-hidroxiddal hígítjuk. A vizes fázist 250 ml dietil-éterrel háromszor mossuk, majd szilárd citromsavval 3-as pH-ig savanyítjuk, melynek következményeként csapadék válik ki. A szilárd anyagot szűrve, vízzel kétszer mosva és nagyvákuumban szárítva 91 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 78%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 363 (M+)
B) N9,N9’-di-Boc-6-amino-hexil-guanidin előállítása
A vegyületet az 1F) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, 1,6-hexán-diaminból 4,7 g N9,N9’-di-Boc-6-amino-hexil-guanidint kapunk (kitermelés: 66%).
C) Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NBoc)NH(Boc) előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon Boc-D-Phe-Pro-OH-ból és N9,N9’-di-Boc-6amino-hexil-guanidinből 1,3 g Boc-D-Phe-ProNH(CH2)6NHC(NBoc)NH(Boc)-t állítunk elő (kitermelés: 62%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 703 (M+)
D) D-Phe-Pro-NH(CH2)6NHC(NH)NH2.HCI előállítása
A vegyületet az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, körülbelül 100 mg végterméket kapunk.
FD-MS, m/e 389 (M+)
Elemanalízis C21H34N6O2.0,9HCI.0,9TFA.0,5H2O-ra: számított: C, 49,97; H, 6,95; N, 15,34 mért: C, 49,60; H, 7,13; N, 15,23
6. példa: D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NH)NH2.HCI
A) N9,N9’-di-Boc-5-amino-pentil-guanidin előállítása
A vegyületet az 1F) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, 1,5-pentán-diaminból 1,73 g N9,N9’-di-Boc-5-amino-pentil-guanidint kapunk (kitermelés: 72%).
FD-MS, m/e 345 (M+) 1H-NMR
B) Boc-D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NBoc)NH(Boc) előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-Phe-Pro-OH-ból N9,N9’-di-Boc-5-amino-pentil-guanidinből 1,9 g Boc-D-Phe-ProNH(CH2)5NHC(NBoc)NH(Boc)-t állítunk elő (kitermelés: 92%).
HU 227 356 Β1 1H-NMR
FD-MS, m/e 689 (M+)
C) D-Phe-Pro-NH(CH2)5NHC(NH)NH2.HCI előállítása
A vegyületet az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, körülbelül 100 mg végterméket kapunk. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=98/2, A/B=40/60-ig haladva 40 perc alatt).
FD-MS, m/e 389 (M+)
Elemanalízis C2űH32N6O2.0,9HCI.0,9TFA.0,7H2O-ra:
(%) számított: C, 48,71; H, 6,79; N, 15,63 mért: C, 48,34; H, 6,68; N, 16,01
7. példa: D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NH)NH2.HCI
A) D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NBoc)NH(Boc) előállítása
2,2 g (30 mmol) 1,3-diamino-propánt 25 ml dimetilformamidban oldunk, és az oldathoz 2,9 g (10 mmol) N,N’-di-Boc-S-metil-izotiokarbamid 25 ml dimetilformamiddal készített oldatát adjuk. Egyórai kevertetés után az elegyet 400 ml diklór-metánnal hígítjuk, 200 ml, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonátból és telített, vizes nátrium-kloridból álló eleggyel kétszer és 250 ml telített, vizes nátrium-kloriddal egyszer mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük és vákuumban körülbelül 200 ml térfogatig pároljuk be. Ehhez az oldathoz 3,6 g (10 mmol) Boc-D-Phe-Pro-OH-t és 1,3 g (10 mmol) Ν,Ν-diizopropil-etil-amint, majd 2,1 g (11 mmol) 1-(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid.HCI-t adunk. Az elegyből az oldószereket 16 órai kevertetés után vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot 250 ml etil-acetátban oldjuk. A szerves fázist 200 ml 1 N citromsavval háromszor, 100 ml vízzel egyszer, 200 ml, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal kétszer és telített, vizes nátrium-kloriddal egyszer mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük, és vákuumban bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk elúciós gradiensként etil-acetáton keresztül etil-acetát:hexán (1:4) arányt alkalmazva. A terméket tartalmazó frakciókat (TLC-vel vizsgálva) bepárolva végtermékként 2,6 g sűrű, színtelen olajat kapunk (kitermelés: 40%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 661 (M+)
B) D-Phe-Pro-NH(CH2)3NHC(NH)NH2.HCI előállítása
A vegyületet az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, és 460 mg végterméket kapunk (kitermelés: 71%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=98/2, A/B=40/60-ig haladva 40 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 361 (M+)
Elemanalízis C18H28N6O2.HCI.1,1TFA.1,1H2O-ra: (%) számított: C, 44,66; H, 6,20; N, 15,47 mért: C, 44,69; H, 6,10; N, 15,19
8. példa: D-Phe-Pro-NHCH2-transzCH=CHCH2NHC(NH)NH2.HCI
A) N9,N9’-di-Boc-4-amino-transz-2-butenil-guanidin előállítása
Az 1F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 1,4-diamino-transz-2-buténből 2,4 g N9,N9’-di-Boc4-amino-transz-2-butenil-guanidint állítunk elő (kitermelés: 42%).
B) Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-transzCH=CHCH2NHC(NBoc)NHBoc előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon Boc-D-Phe-Pro-OH-ból és N9,N9’-di-Boc-4-aminotransz-2-butenil-guanidinból 2,7 g Boc-D-Phe-ProNHCH2-transz-CH=CHCH2NHC(NBoc)NHBoc-t állítunk elő (kitermelés: 55%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 673 (M+)
C) D-Phe-Pro-NHCH2-transzCH=CHCH2NHC(NH)NH2.HCI előállítása
Az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon körülbelül 100 mg D-Phe-Pro-NHCH2-transzCH=CHCH2NHC(NH)NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=98/2, A/B=40/60-ig haladva 40 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 373 (M+)
Elemanalízis C19H28N6O2.HCI.0,5TFA.2,5H2O-ra: (%) számított: C, 47,01; H,6,81; N, 16,45 mért: C, 47,36; H, 6,53; N, 16,70
9. példa: D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4CH2NHC(NH)NH2.2TFA
A) p-H2NCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc előállítása
Az 1F) példában leírtakkal lényegében azonos módon p-xilol-diaminból 2,3 g p-H2NCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc-t állítunk elő (kitermelés: 42%).
1H-NMR
B) Boc-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc előállítása
A vegyületet az 1D) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-Phe-Pro-OH-ból és p-H2NCH2C6H4CH2NHC(NBoc)NHBoc-ból állítjuk elő,
2,8 g végterméket kapunk (kitermelés: 63%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 723 mm 723 (M+)
C) D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4CH2NHC(NH)NH2.2TFA előállítása
A vegyületet az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, így 725 mg végterméket kapunk (kitermelés: 81%), melyet a továbbiakban nem tisztítottunk RPHPLC-vel.
1H-NMR
FD-MS, m/e 423 (M+)
HU 227 356 Β1
Elemanalízis C23H30NgO2.2,1TFA.H2O-ra: (%) számított: C, 48,05; H, 5,05; N, 12,36 mért: C, 48,06; H, 4,85; N, 12,28
10. példa: D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2.HCI
A) N-Boc-p-(amino-metil)-benzil-amin előállítása
100 ml 1:1 arányú dimetil-formamid-víz elegyben g (73 mmol) p-xilol-diamint oldunk, és az oldathoz keverés közben 8 g (37 mmol) di-t-butil-dikarbonátot adunk. Az elegyet 10 órai kevertetés után vákuumban bepároljuk, és a maradékot 200 ml dietil-éter és 200 ml 1 N citromsav között osztjuk fel. A vizes fázist újra 200 ml dietil-éterrel mossuk, szilárd nátrium-hidrogén-karbonáttal lúgosítjuk és szilárd nátrium-kloriddal telítjük. A vizes fázist ezután 200 ml etil-acetáttal négyszer extraháljuk. Az egyesített etil-acetátos fázisokat MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük és bepároljuk, végtermékként 2,1 g sűrű olajat kapunk (kitermelés: 24%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 237 (M+)
Elemanalízis C13H20N2O2-ra:
számított: C, 66,07; H, 8,53; N, 11,85 mért: C, 66,33; H, 8,44; N, 12,11
B) Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NHBoc előállítása
A vegyületet az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-Phe-Pro-OH-ból és N-Boc-p(amino-metil)-benzil-aminból állítjuk elő, így 1,1 g végtermékhez jutunk (kitermelés: 63%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 581 (M+)
Elemanalízis C32H44N4O6-ra: (%) számított: C, 66,19; H, 7,64; N, 9,65 mért: C, 65,99; H, 7,63; N, 9,42
C) D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CH2NH2.HCI előállítása
Az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon, körülbelül 100 mg D-Phe-Pro-pNHCH2CgH4CH2NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=98/2, A/B=40/60-ig haladva 40 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 373 (M+)
Elemanalízis C22H28N4O2.HCI.1,1TFA.H2O-ra: (%) számított: C, 51,87; H, 5,77; N, 10,00 mért: C, 51,78; H, 5,88; N, 10,28
11. példa: D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CH2NH2.HCI
A) N-Boc-m-(amino-metil)-benzil-amin előállítása
A 10A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, m-xilol-diaminból 2,6 g N-Boc-m-(amino-metil)benzil-amint állítunk elő (kitermelés: 30%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 237 (MH+)
Elemanalízis C13H20N2O2-ra:
számított: C, 66,07; H, 8,53; N, 11,85 mért: C, 65,81; H, 8,48; N, 11,98
B) Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2CgH4CH2NHBoc előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-Phe-Pro-OH-ból és N-Boc-m-(amino-meti I )-benzi l-am i nból 1,6 g Boc-D-Phe-Pro-mNHCH2C6H4CH2NHBoc-t állítunk elő (kitermelés: 95%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 581 (M+)
C) D-Phe-Pro-m-NHCH2CgH4CH2NH2.HCI előállítása
A vegyületet az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, körülbelül 100 mg végterméket kapunk.
1H-NMR
FD-MS, m/e 381 (M+)
Elemanalízis C22H28N4O2.HCI.TFA.H2O-ra: (%) számított: C, 52,51; H, 5,87; N, 10,21 mért: C, 52,13; H, 6,21; N, 10,48
12. példa: D-Phe-Pro-NHCH2-transz-4-(aminometil)-ciklohexán.HCI
A) N-Boc-transz-4-(amino-metil)ciklohexánkarboxilsav előállítása g (318 mmol) transz-4-(amino-metil)-ciklohexánkarboxilsavat, 334 ml (334 mmol) ciklohexánkarboxilsavat 334 ml (334 mmol) 1 N nátrium-hidroxidban és 400 ml t-butanolban oldunk, és az elegyhez 73 g (334 mmol) di-t-butil-dikarbonát 50 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk. Az elegyet 20 órán át kevertetjük, az oldószereket vákuumban bepároljuk, és a maradékot 500 ml víz és 250 ml dietil-éter között osztjuk fel. A vizes fázist további 250 ml dietil-éterrel mossuk, majd szilárd citromsavval savanyítjuk, mely fehér csapadékot eredményez. A szilárd anyagot leszűrjük, 100 ml vízzel kétszer mossuk, és vákuumban szárítjuk, végtermékként 48 g fehér port kapunk (kitermelés: 59%).
1H-NMR
B) HOCH2-transz-4-(N-Boc-amino-metil)ciklohexán előállítása g (58 mmol) N-Boc-transz-4-(amino-metil)-ciklohexánkarboxilsavat 150 ml tetrahidrofuránban oldunk, és az elegyhez 0 °C-on, keverés közben 5,9 g (58 mmol) metil-morfolint, majd 6,3 g (58 mmol) etil-kloroformátot adunk. Az elegyhez 30 percnyi kevertetés után 6,5 g (175 mmol) nátrium-bór-hidridet, majd 5 perc alatt csepegtetőtölcséren át 300 ml metanolt adunk. A keveréket további 1 órán át kevertetjük, majd az oldószereket vákuumban eltávolítjuk. A maradékot 500 ml etil-acetátban oldjuk, és 250 ml 1 N citromsavval kétszer, 100 ml vízzel egyszer, 250 ml, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal kétszer és 250 ml, telített, vizes nátrium-kloriddal egyszer mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítva, szűrve, majd bepárolva végtermékként a címvegyület 13 g-ját kapjuk (kitermelés: 91%).
1H-NMR
HU 227 356 Β1
C) NH2CH2-transz-4-(N-Boc-amino-metil)ciklohexán előállítása g (53 mmol) HOCH2-transz-4-(N-Boc-aminometil)-ciklohexánt és 21 g (80 mmol) trifenil-foszfint oldunk 300 ml tetrahidrofuránban, és az oldathoz 13,9 g (80 mmol) dietil-azodikarboxilátot, majd 22 g (80 mmol) difenil-foszforil-azid 100 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk. Az elegyet 16 órán át kevertetjük, majd az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk, elúciós gradiensként etil-acetáton keresztül 1:3 etil-acetát/hexán arányt alkalmazva. A termékeket tartalmazó frakciókat (TLC-vel vizsgálva) egyesítjük és bepároljuk, melynek eredményeképpen 17,4 g nyersterméket kapunk, mely hosszabb szénláncú (Rf) termékkel szennyezett. A nyers azidot 200 ml metanolban oldjuk, és az oldatot 51 g (212 mmol) finomra őrölt Na2S.9H2O és 1 g (11 mmol) trietil-amin 100 ml metanollal készített szuszpenziójához öntjük. A kapott keveréket reflux alatt 16 órán át melegítjük, majd szobahőmérsékletre hűtjük, és az oldószereket vákuumban eltávolítjuk. A maradékot 250 ml vízben oldjuk és szilárd citromsavval savanyítjuk. A vizes fázist 250 ml etil-acetáttal kétszer mossuk, szilárd nátrium-hidrogén-karbonáttal lúgosítjuk és szilárd nátrium-kloriddal telítjük. A vizes fázist ezután 200 ml etil-acetáttal háromszor extraháljuk, és az egyesített extraktumokat MgSO4 fölött szárítva, szűrés és bepárlás után végtermékként 6,4 g sűrű olajat kapunk (kitermelés: 45%).
1H-NMR
D) N-Boc-D-Phe-Pro-NHCH2-transz-4-(N-Bocamino-metil)-ciklohexán előállítása
A vegyületet az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-Phe-Pro-OH-ból és NH2CH2transz-4-(N-Boc-amino-metil)-ciklohexánból állítjuk elő,
4,5 g végterméket kapva (kitermelés: 74%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 587 (M+)
E) D-Phe-Pro-NHCH2-transz-4-(amino-metil)ciklohexán.HCI előállítása
Az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon 588 mg D-Phe-Pro-NHCH2-transz-4-(amino-metil)ciklohexán.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 75%). Ebben az esetben az intermedier TFA-só analitikai RPHPLC-je nagyon tiszta, de maga a só higroszkópos volt. A sót ezért 20 ml 0,1 N sósavban oldottuk, a pH-t 5-ös értékre állítjuk be, és a mintát liofilizáljuk, melynek eredményeképpen a stabil, szilárd, fehér hidrokloridsót kapjuk. 1H-NMR
FD-MS, m/e 38,7 (M+)
Elemanalízis C22H34N4O2.HCI.TFA.2H2O-ra: (%) számított: C, 50,30; H, 7,04; N, 9,78 mért: C, 50,44; H, 7,20; N, 9,62
13. példa: D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2.HCI
A) Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon Boc-D-Phe-Pro-OH-ból és p-nitro-benzilamin.HCI-ból 8 g Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NO2-t állítunk elő. Az intermediert 250 ml etanolban oldjuk és refluxig melegítjük. Keverés közben ehhez az elegyhez 12,3 g (70 mmol) Na2S2O4 125 ml vízzel készített oldatát adjuk. Az elegyet 2 órán át kevertetjük, majd az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot 250 ml etil-acetát és 250 ml víz között osztjuk meg. A vizes fázist 250 ml etil-acetáttal újra extraháljuk, és az egyesített szerves fázisokat MgSO4 fölött szárítva, szűrve és vákuumban bepárolva 2,4 g halványsárga, szilárd végterméket kapunk (kitermelés: 21%). 1H-NMR
FD-MS, m/e 4,66 (M+)
Elemanalízis C26H34N4O4-ra:
számított: C, 66,93; H, 7,34; N, 12,01 mért: C, 66,69; H, 7,32; N, 12,28
B) D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4NH2.HCI előállítása
A vegyületet az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, 180 mg végterméket kapva (kitermelés: 60%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=98/2, A/B=60/40-ig haladva 60 perc alatt). 1H-NMR
FD-MS, m/e 366 (M+)
Elemanalízis C21H26N4O2.HCI.0,6TFA.0,5H2O-ra: számított: C, 55,51; H, 6,00; N, 11,66 mért: C, 55,16; H, 6,14; N, 11,57
14. példa: D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2.HCI
A) Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2 előállítása
A 13A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-Phe-Pro-OH-ból és p-nitro-fenetil-amin.HCIból 3 g Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2-t állítunk elő (kitermelés: 23%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 480 (M+) Elemanalízis C27H36N4O4-ra: számított: C, 67,48; H, 7,55; N, 11,66 mért: C, 67,30; H, 7,54; N, 12,34
B) D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4NH2.HCI előállítása
A vegyületet az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, melynek során 175 mg végterméket kapunk (kitermelés: 58%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=98/2, A/B=60/40-ig haladva 60 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 380 (M+)
Elemanalízis C22H28N4O2.HCI.0,7TFA.0,7H2O-ra: számított: C, 55,18; H,6,15; N,11,00 mért: C, 55,12; H, 6,18; N, 10,99
15. példa: D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI (D-fenil-alanil-N[[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil]-L-prolinamidhidroklorid)
A) p-(Amino-metil)-benzonitril.TFA előállítása
2,2 g (56 mmol, 60%-os olajos diszperzió) nátriumhidrid 100 ml tetrahidrofuránnal készített szuszpenziójához keverés közben 10 g (51 mmol) 4-(bróm-metil)18
HU 227 356 Β1 benzonitrilt adunk. A keverékhez csepegtetőtölcséren keresztül, lassan, 12,2 g (56 mmol) di-t-butil-imino-dikarboxilátot adunk. Az elegyet 16 órán át kevertetjük, majd 30 ml dietil-éterrel hígítjuk és 150 ml vízzel kétszer mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. A kapott szilárd anyagot a legkevesebb, szükséges mennyiségű diklór-metánban oldjuk. Az elegyhez 10 ml anizolt adunk és 0 °C-ra hűtjük. Az oldatot 200 ml trifluor-ecetsavval hígítjuk és 1 órán át kevertetjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és az olajos maradékot 100 ml dietil-éterrel erőteljesen kevertetjük, melynek eredményeképpen néhány perc múlva szilárd formájú terméket kapunk. A csapadékot szűrve, dietil-éterrel mosva és vákuumban szárítva fehér por formájában 11,3 g végterméket kapunk.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 132 (M+)
B) Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-Phe-Pro-OH-ból és p-(amino-metil)-benzonitril.TFA-ból 7,4 g Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN-t állítunk elő (kitermelés: 78%). A terméket dietil-éterből történő átkristályosítással tisztítottuk.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 476 (M+)
C) Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2 előállítása g (4,2 mmol) Boc-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN 25 ml piridinnel és 2,5 ml trietil-aminnal készített oldatán 30 percen keresztül hidrogén-szulfid-gázt buborékoltatunk keresztül. A reakcióedényt lezárjuk és 2 napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az oldatot 100 ml vízzel hígítjuk és 200 ml etil-acetáttal kétszer extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat telített, vizes nátrium-kloriddal kétszer mossuk, MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot 50 ml acetonban oldjuk, az oldathoz 10 ml metiljodidot adunk, és az elegyet 2 órán át reflux alatt melegítjük. Az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 20 ml metanolban oldjuk, és az oldathoz 712 mg (9,2 mmol) NH4OAc-t adunk, majd az elegyet 12 órán át reflux alatt melegítjük. Az oldószert vákuumban ismét eltávolítjuk, a maradékot 100 ml 1 N citromsavban oldjuk, a vizes fázist 200 ml etil-acetáttal kétszer mossuk, szilárd nátrium-hidrogén-karbonáttal lúgosítjuk, szilárd nátrium-kloriddal telítjük, és 200 ml etilacetáttal extraháljuk. Az egyesített etil-acetátos extraktumokat MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük és bepároljuk, melynek eredményeképpen 1,4 g sűrű olajhoz jutunk. 1H-NMR
FD-MS, m/e 494 (M+)
D) D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
A vegyületet az 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, melynek során 7,7 g végterméket kapunk (kitermelés: 57%). A terméket RPHPLCvel tisztítjuk (3. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 300 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 394 (M+)
Elemanalízis C22H27N5O2.HCI.1,4TFA.0,5H2O-ra: (%) számított: C, 49,76; H, 5,12; N, 11,70 mért: C, 49,75; H, 5,19; N, 11,58
16. példa: D-Phe-Pro-mNHCH2C6H4C(NH)NH2.0,75HCI
A) m-(Amino-metil)-benzonitril.TFA előállítása
A 15A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, m-(bróm-metil)-benzonitrilből 10,8 g m-(aminometil)-benzonitril.TFA-t állítunk elő (kitermelés: 86%). IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 132 (M+)
B) Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4CN előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-Phe-Pro-OH-ból és m-(amino-metil)-benzonitril.TFA-ból 7,5 g Boc-D-Phe-Pro-mNHCH2C6H4CN-t állítunk elő (kitermelés: 79%). A termék tisztítását dietil-éterből történő átkristályosítás útján végezzük.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 476 (M+)
Elemanalízis C27H32N4O4-ra: (%) számított: C, 68,05; H, 6,77; N, 11,76 mért: C, 68,27; H, 6,82; N, 11,96
C) Boc-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2 előállítása
A vegyületet a 15C) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, melynek eredményeképpen
1,1 g végtermékhez jutunk (kitermelés: 53%).
FD-MS, m/e 494 (M+)
D) D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(NH)NH2.0,75HCI előállítása
A vegyületet az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, melynek során 0,65 g végterméket kapunk (kitermelés: 65%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=75/25-ig haladva 120 perc alatt).
FD-MS, m/e 394 (M+)
Elemanalízis C22H27N5O2.0,75HCI.1,2TFA.0,5H2O-ra:
(%) számított: C, 51,72; H, 5,33; N, 12,36; Cl, 4,69 mért: C, 51,79; H, 4,93; N, 11,96; Cl, 4,82
17. példa: D-hPro-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI
A) Cbz-D-hPro-OH előállítása g (38,7 mmol) D-hPro-OH-t 100 ml tetrahidrofuránban és 30 ml vízben oldunk. Az oldat pH-ját 2 N nátrium-hidroxiddal 9,5-re állítjuk be, az oldathoz cseppenként 5,5 ml (38,7 mmol) benzil-kloroformátot
HU 227 356 Β1 adunk, és a pH-t 2 N nátrium-hidroxiddal 9,5-es értéken tartjuk. Az elegyet 1 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A szerves oldószert vákuumban bepároljuk, és a maradékhoz 100 ml dietil-étert és 50 ml vizet adunk. A vizes réteget különválasztjuk, és az oldat pH-ját 3 N sósavval 2,8-re állítjuk be, majd az elegyhez 150 ml etil-acetátot adunk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítjuk, és a szűrletet vákuumban bepárolva 9,6 g tiszta olajat kapunk (kitermelés: 95%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 264 (MH+)
B) Cbz-D-hPro-Pro-OH előállítása
9,5 g (36 mmol) Cbz-D-hPro-OH-t 100 ml etil-acetátban oldunk, és az oldatot 0 °C-ra hűtjük. Az oldathoz
7,1 g (36 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt és 7,4 g (36 mmol)
I, 3-diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 1 órán át 0 °C-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A csapadékot leszűrjük, és a szűrletet vákuumban olajos állagig pároljuk be. Az olajat 100 ml piridinben oldjuk, majd az oldathoz 4,2 g (36 mmol) Pro-OH-t és 5 ml (36 mmol) trietil-amint adunk. A reakciót szobahőmérsékleten 24 órán át kevertetjük, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk, míg az elegy olajállagú nem lesz. A maradékot 100 ml vízben oldjuk, az oldathoz 50 ml dietil-étert adunk, és a pH-t 2 N nátrium-hidroxiddal 9,5-re állítjuk be. A vizes fázist dietil-éterrel kétszer extraháljuk. A vizes részt elválasztjuk, és a pH-t 3 N sósavval 2,8-re állítjuk be, majd az elegyhez 150 ml etil-acetátot adunk. A szerves fázist elválasztjuk, MgSO4 fölött szárítjuk, és a szűrletet bepárolva
II, 4 g amorf, szilárd anyagot kapunk (kitermelés: 88). FD-MS 361 (M+)
Elemanalízis C19H24N2O5-ra: (%) számított: C, 63,32; H, 6,71; N, 7,77 mért: C, 63,42; H, 6,84; N, 7,96
C) Cbz-D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4CN előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-D-hPro-Pro-OH-ból és p-NH2CH2C6H4CN.TFA-ból 2,2 g Cbz-D-hPro-Pro-pNHCH2C6H4CN-t állítunk elő (kitermelés: 84%). 1H-NMR
FD-MS, m/e 474 (M+)
Elemanalízis C27H30N4O4-ra: (%) számított: C, 68,34; H, 6,37; N, 11,81 mért: C, 68,36; H, 6,47; N, 11,57
D) D-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
A 15C) példában leírtakkal lényegében azonos módon Cbz-hPro-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2-t állítunk elő (28 mmol elméleti kitermelés). Ezt a nyers anyagot 350 ml ecetsavban oldjuk, és az oldaton 30 percen keresztül hidrogén-bromid-gázt buborékoltatunk át. További 1 órai kevertetés után az oldószert vákuum alatt eltávolítjuk, a maradékot 200 ml vízben oldjuk és 100 ml etilacetáttal kétszer mossuk. A vizes fázis pH-ját ioncserélő gyantával (Bio-Rad AG1-X8, bázisos formában) 4-re állítjuk be, majd liofilizálás után szivacsos, fehér szilárd anyaghoz jutunk. A terméket 25 ml vízben visszaoldjuk és RPHPLC-s tisztítás után (3. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 300 perc alatt) 5 g hPro-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.0,9HCI.0,9HBr.0,5H2O-t kapunk.
1H-NMR
FD-MS, m/e 357 (M+)
Elemanalízis C19H27N5O2.0,9HCI.0,9HBr.0,5H2O-ra:
(%) számított: C, 48,34; H, 6,36; N, 14,83; Cl, 6,76;
Br, 15,23 mért: C, 48,66; H, 6,36; N, 14,62; Cl, 7,14;
Br, 14,90
18. példa: 1 -Piq-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI (N-[[4-(amino-iminometi I )-feni l]-meti I]-1 -{[(4aS,8aS)-dekahidro-1 (R)izokinolinil]-karbonil}-L-prolinamid-dihidroklorid)
A) Cbz-D-1-Piq-Pro-OH előállítása g (0,288 mmol) 1-izokinolin-karboxilsav 150 ml etanollal és 60 ml 5 N sósavval készített oldatát 17 órán át 50 °C-on 52 bar (750 psi) nyomáson, nagynyomású készülékben 14 g 5%-os Rh/AI2O3 fölött redukáljuk. A keveréket kovaföldrétegen át szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A szilárd anyagot vízzel péppé zúzzuk és szárítjuk, termékként 30 g DL-perhidro-1-izokinolin-karboxilsavat (DL-1-Piq-OH) kapva (kitermelés: 48%).
FD-MS, 184 (MH+)
30,2 g (137 mmol) DL-!Piq-OH-t 150 ml tetrahidrofuránban és 150 ml vízben oldunk. Az oldat pH-ját 5 N nátrium-hidroxiddal 9,8-re állítjuk be, az oldathoz cseppenként 21,6 ml (151 mmol) benzil-kloroformátot adunk, és a pH-t 2 N nátrium-hidroxid-oldattal 9,5-es értéken tartjuk. A reakciót 2 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A szerves fázist vákuumban bepároljuk, majd a maradékhoz 150 ml dietil-étert és 50 ml vizet adunk. A vizes részt különválasztjuk, az oldat pH-ját 5 N sósavval 2,5-re állítjuk be, majd az elegyhez 200 ml etil-acetátot adunk. A szerves fázist elválasztjuk, MgSO4 fölött szárítjuk, és a szűrletet vákuumban bepárolva átlátszó olajhoz jutunk. Az olajat 150 ml dietil-éterben oldjuk, és az oldatot szobahőmérsékleten 24 órán át állni hagyjuk. A csapadékot szűrve és szárítva 32 g 2-Cbz-DL-perhidro-1-izokinolin-karboxilsavhoz (Cbz-DL-1-Piq-OH) jutunk (kitermelés: 75%).
31,8 g (100 mmol) Cbz-DL-1-Piq-OH-t 100 ml DMFben oldunk, és az oldatot 0 °C-ra hűtjük. Az elegyhez
17,1 g (100 mmol) prolin-t-butil-észtert, 13,5 g (100 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt és 20,6 g (100 mmol) DCC-t adunk. Az elegyet 3 órán keresztül 0 °C-on, majd 24 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A keletkező csapadékot szűrjük, és a szűrletet vákuumban olajjá pároljuk be. Az olajat 200 ml EtOAcban és 100 ml vízben oldjuk, és sorrendben 1 N nátrium-hidrogén-karbonáttal, 1,5 N citromsavval és vízzel mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítjuk, és a szűrletet olajjá bepárolva, majd szárítva 47 g 2-CbzDL-perhid ro-1 -izoki nol i n-karbon i l-L-prolil-t-butil20
HU 227 356 Β1 észterhez (Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu) jutunk (kitermelés: 100%).
FAB-MS, 470 (MH+) g (100 mmol) Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu-t, 100 ml trifluor-ecetsavat, 35 ml CH2CI2-t és 5 ml anizolt tartalmazó elegyet kerek aljú lombikba helyezünk, és az elegyet szobahőmérsékleten 1 órán át kevertetjük. A keveréket vákuumban, melegítés nélkül bepároljuk, majd 100 ml dietil-étert és 100 ml vizet adunk hozzá. Az elegy pH-ját 5 N nátrium-hidroxiddal 9,8-re állítjuk be. A vizes fázist különválasztjuk, és az oldat pH-ját 5 N sósavval 2,5-re szabályozzuk, majd 200 ml etilacetátot adunk hozzá. A szerves részt elkülönítjük, MgSO4 fölött szárítjuk, majd a szűrletet vákuumban bepárolva átlátszó olajat kapunk. Az olajat 700 ml dietiléterben oldjuk, és az oldathoz (L)-(-)-a-metil-benzilamint adunk. Az oldatot szobahőmérsékleten 5 napig állni hagyjuk. A kapott szilárd anyagot leszűrjük és dietil-éterrel mossuk. A szűrletet 1,5 N citromsavval és vízzel mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítjuk, majd a szűrletet olajjá pároljuk be. Az olajat 400 ml dietil-éterben oldjuk, és az oldatot szobahőmérsékleten 48 órán keresztül állni hagyjuk. A kapott szilárd anyagot leszűrjük, dietil-éterrel mossuk, és szárítás után 5,86 g 2-Cbz-D-perhidro-1 -izokinolin-karbonil-L-prolint (Cbz-D-1-Piq-Pro-OH) kapunk (kitermelés: 36%). FAB-MS 415 (MH+) [a]D=-34,2° (C=0,5, MeOH)
B) N-Boc-p-(amino-metil)-benzonitril előállítása
4,6 g (115 mmol, 60%-os olajos diszperzió) nátrium-hidridet 150 ml tetrahidrofuránban oldunk, és az oldathoz 20,5 g (105 mmol) 4-(bróm-metil)-benzonitrilt adunk. Az elegyhez csepegtetőtölcséren keresztül, óvatosan 25 g (115 mmol) di-t-butil-imino-dikarboxilátot adunk. Az elegyet 16 órai kevertetés után 500 ml dietiléterrel hígítjuk, majd 250 ml vízzel kétszer mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítjuk, majd szűrés és bepárlás után 40,2 g nyers, szilárd anyaghoz jutunk.
A kapott szilárd anyag 28,3 g-ját (85 mmol) 150 ml tetrahidrofuránban oldjuk, majd az elegyhez 3,4 g (85 mmol) nátrium-hidroxid 300 ml metanollal készített oldatát adjuk. Az oldatot egy éjszakán át történő kevertetés után térfogatának körülbelül felére pároljuk be, a csapadék leválásának elősegítésére. A csapadékot szűrve és vákuumban bepárolva 18,5 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 94%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 232 (M+)
Elemanalízis C13H16N2O2-ra:
számított: C, 67,22; H, 6,94; N, 12,06 mért: C, 67,19; H, 7,16; N, 11,82
C) p-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NHCbz előállítása
A 15C) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 32,7 g (140 mmol) N-Boc-p-(amino-metil)-benzonitrilt p-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NH2-ná alakítunk. Az eljárás maradékát 700 ml dimetil-formamidban oldjuk, és az oldathoz 72 g (560 mmol) N,N-diizopropil-etilamint adunk. Az elegyhez keverés közben 48 g (280 mmol) benzil-kloroformátot adunk, majd 16 órán át kevertetjük, 100 ml vizet adunk hozzá, és az oldószereket vákuumban eltávolítjuk. A maradékot 250 ml víz és 500 ml etil-acetát között osztjuk meg. A fázisokat különválasztjuk, a szerves fázist 250 ml telített, vizes ammónium-kloriddal háromszor, 200 ml vízzel egyszer és 250 ml, telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal kétszer mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük és bepároljuk, és a terméket dietil-éterből átkristályosítva 14 g fehér, szilárd anyagot kapunk (kitermelés: 26%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 384 (M+)
D) p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI előállítása g (28,7 mmol) p-(BocNHCH2)C6H4C(NH)NHCbz-t 125 ml diklór-metánban oldunk, és az oldathoz 10 ml anizolt, majd 125 ml trifluor-ecetsavat adunk. Az elegyből kétórás kevertetés után az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 50 ml 1 N sósavban oldjuk és 50 ml dietil-éterrel kétszer mossuk. A pH-t ioncserélő gyantával (Bio-Rad AG1-X8, bázisos formájú) 3-as értékre állítjuk be, majd az oldatot liofilizálva 9,2 g fehér porhoz jutunk (kitermelés: 90%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 284 (M+)
E) Cbz-1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-1-Piq-Pro-OH-ból és p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-ból 4,4 g Cbz-1Piq-Pro-p-NHCH2c6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő (kitermelés: 79%). Az előállítási reakciót a p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI oldódási nehézségei miatt dimetil-formamidban végeztük.
1H-NMR
FD-MS, m/e 681 (MH+)
Elemanalízis C39H45N5O6-ra: (%) számított: C, 68,91; H, 6,67; N, 10,30 mért: C, 68,71; H, 6,93; N, 10,38
F) 1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI előállítása
4,2 g (6,1 mmol) Cbz-1-Piq-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t 200 ml etanolban oldunk, és az oldathoz 18,3 ml (18,3 mmol) 1 N sósavat, majd 100 ml vizet adunk. Az oldathoz keverés közben 1 g 5%-os Pd/C katalizátort adunk, majd 2 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át rajta. A keveréket nitrogénnel átöblítjük, majd kovaföldrétegen át szűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, 25 ml vízben visszaoldjuk és RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=60/40-ig haladva 300 perc alatt). 1H-NMR
FD-MS, m/e 412 (M+)
Elemanalízis C23H33N5O2.1,9HCI.2,5H2O-ra: (%) számított: C, 52,53; H, 7,65; N, 13,32; Cl, 12,81 mért: C, 52,63; H, 7,36; N, 13,47; Cl, 12,95
HU 227 356 Β1
19. példa: D-3-Piq-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.3HCI
A) Cbz-D-3-Piq-Pro-OH előállítása
Reflux alatt 50 g (302 mmol) D-fenil-alanint reagáltatunk 120 ml 37%-os formaldehiddel és 380 ml tömény sósavval. Az elegyhez 30 perc elteltével további 50 ml formaldehidet adunk, és a reakciót még 3 órán át folytatjuk. A reakciót -10 °C-ra hűtjük, és a csapadékot leszűrjük. A szilárd anyagot vákuumban szárítva 24,2 g D-1,2,3,4-tetrahidro-3-izokinolin-karboxilsavat kapunk (kitermelés: 45%).
g (96 mmol) D-1,2,3,4-tetrahidro-3-izokinolinkarboxilsavat 200 ml vízben és 20 ml 5 N sósavban oldunk, és 8,5 g 5%-os Rh/AI2O3 katalizátor fölött, nagynyomású készülékben, 120 °C-on 16 órán keresztül hidrogénezzük. A reakcióelegyet kovaföldrétegen át szűrjük, és a szűrletet fagyasztva szárítjuk, melynek eredményeképpen 21 g D-perhidro-3-izokinolin-karboxilsavat (D-3-Piq-OH) kapunk (kitermelés: 100%).
g (95,8 mmol) D-3-Piq-OH-t 75 ml tetrahidrofurán és 50 ml víz elegyében oldunk. Az oldat pH-ját 5 N nátrium-hidroxid-oldattal 10-re szabályozzuk be, az oldathoz 16,4 ml (115 mmol) benzil-kloroformátot adunk, és a pH-t 2 N nátrium-hidroxiddal 9,5-es értéken tartjuk. Az elegyet szobahőmérsékleten további 1 órán át kevertetjük. A szerves fázisról az oldószert vákuumban bepároljuk, és a maradékhoz 100 ml dietil-étert és 50 ml vizet adunk. A vizes részt elválasztjuk, az oldat pH-ját 3 N sósavval 3,0-re állítjuk be. A szerves fázist elválasztjuk és MgSO4 fölött szárítjuk. A szűrletet vákuumban bepároljuk, termékként 25,8 g 2-Cbz-D-perhidro-3-izokinolin-karboxilsavat (Cbz-D-3-Piq-OH) kapunk átlátszó olaj formájában (kitermelés: 85%).
17.2 g (54 mmol) Cbz-D-3-Piq-OH-t 50 ml DMF-ben oldunk, és az oldatot 0 °C-ra hűtjük le. Az elegyhez
9,2 g (54 mmol) prolin-t-butil-észtert, 7,3 g (54 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt és 11,1 g (54 mmol) DCC-t adunk. Az elegyet 3 órán át 0 °C-on és 24 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A keletkező csapadékot leszűrjük, és a szűrletet olajjá pároljuk be. Az olajat 200 ml EtOAc-ban és 100 ml vízben oldjuk. A szerves fázist elválasztjuk, és sorrendben 1 N NaHCO3-tal, 1,5 N citromsavval és vízzel mossuk. A szerves részt MgSO4 fölött szárítjuk, és a szűrletet olajjá pároljuk be, melyet megszárítva 23,8 g 2-Cbz-D-perhidro-3-izokinolin-karbonil-L-prolin-t-butil-észtert (Cbz-D-3-Piq-ProO-Bu) kapunk (kitermelés: 94%).
FAB-MS 471 (MH+)
31.2 g (66,3 mmol) Cbz-D-3-Piq-Pro-O-t-Bu-t, 100 ml trifluor-ecetsavat és 5 ml anizolt tartalmazó elegyet kerek aljú lombikba rakunk, és az elegyet szobahőmérsékleten 1 órán át kevertetjük. A reakciót vákuumban, melegítés nélkül bepároljuk, majd 150 ml dietil-étert és 100 ml vizet adunk hozzá. Az oldat pH-ját 5 N nátrium-hidroxiddal 9,8-es értékre állítjuk be. A vizes részt elválasztjuk, az oldat pH-ját 3 N sósavval 2,8-re állítjuk be, és 200 ml etil-acetátot adunk hozzá. A szerves fázist elválasztjuk, MgSO4 fölött szárítjuk és szűrjük. A szűrletet vákuumban átlátszó olajjá pároljuk be. Az olajat 300 ml dietil-éterben oldjuk, és az oldatot szobahőmérsékleten 24 órán át állni hagyjuk. A keletkező szilárd anyagot szűrjük, dietil-éterrel mossuk, majd szárítás után 13,5 g 2-Cbz-perhidro-3-izokinolinkarbonil-L-prolint (Cbz-D-3-Piq-Pro-OH) kapunk (kitermelés: 49%).
FAB-MS 415 (MH+)
Elemanalízis C23H30N2 O5-ra: (%) számított: C, 66,65; H, 7,29; N, 6,76 mért: C, 66,90; H, 7,33; N, 6,81
B) Cbz-D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
A 18E) példában leírtakkal lényegében azonos módon Cbz-D-3-Piq-Pro-OH-ból és p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-ból 1,6 g Cbz-D-3Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő (kitermelés: 49%).
FD-MS, m/e 680 (M+)
C) D-3-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.3HCI előállítása
A 17C) példában leírtakkal lényegében azonos módon 150 mg D-3-Piq-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.3HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=60/40-ig haladva 240 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 412 (M+)
Elemanalízis C23H33N5O2.3HCI.0,5H2O-ra: (%) számított: C, 52,13; H, 7,04; N, 13,22 mért: C, 52,35; H, 7,23; N, 12,95
20. példa: D-hPro-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.3HCI ((S-cisz)-N{[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil}-oktahidro-1 -Dhomoprolil-1H-indol-2-karboxamid-triklorohidrát)
A) Cbz-D-hPro-Ohi-OH előállítása g (110 mmol) (S)-indolin-2-karboxilsavat 500 ml etanollal elegyítünk, és a szuszpenzión kevertetés közben sósavgázt buborékoltatunk keresztül. A sav teljes beoldódása után az oldatot refluxáljuk. Az oldatot 16 óra elteltével lehűtjük, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot trietil-éterrel péppé őröljük, a keletkező világosfehér szilárd anyagot szűréssel leválasztjuk, hexánokkal mossuk és egy éjszakán át 30 °C-os vákuumkemencében szárítjuk, melynek eredményeképpen 25,7 g (S)-indolin-2-karboxilsav-etil-észter.HCI-t kapunk (kitermelés: 78%). A szilárd anyagot 800 ml etanolban oldjuk, az oldathoz 25 g 5%-os Pd/C katalizátort adunk, és a keletkezett szuszpenziót Parr rázógépen 8 órán át 4,1 *105 Pa nyomás alatt hidrogénezzük. Az oldatot leszűrjük, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot dietil-éterrel pépesítjük, és 18,8 g világosfehér anyagot (cisz-Ohi-OEt.HCI) kapunk (kitermelés: 73%). Az 1 A) példában leírtakkal lényegében azonos módon Cbz-D-hPro-OH-ból és ciszOhi-OEt.HCI-ból 13,5 g Cbz-D-hPro-cisz-Ohi-OEt-t kapunk (kitermelés: 93%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 442 (M+)
HU 227 356 Β1
Elemanalízis C25H34N2O5-ra: (%) számított: C, 67,85; H, 7,74; N, 6,33 mért: C, 67,59; H, 7,72; N, 6,48
Az 1D) példában leírtakkal lényegében azonos módon 12,5 g Cbz-D-hPro-cisz-Ohi-OH-t állítunk elő (kitermelés: 102%).
1H-NMR
FD-MS, m/e, 414 (M+)
Elemanalízis C23H30N2O5-ra: (%) számított: C, 66,65; H, 7,29; N, 6,76 mért: C, 66,46; H, 7,30; N, 6,86
B) Cbz-D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
A 18E) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-D-hPro-Ohi-OH-ból és p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-ból 3,3 g Cbz-DhPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő (kitermelés: 67%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 681 (MH+)
C) D-hPro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.3HCI előállítása
A 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 2,2 g D-Hpro-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.3HCI-t állítunk elő (kitermelés: 66%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=60/40-ig haladva 3000 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 412 (M+)
Elemanalízis C23H33N5O2.3HCI.0,5H2O-ra: (%) számított: C, 52,13; H, 7,04; N, 13,22; mért: C, 51,98; H, 7,04; N, 13,35;
21. példa: D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI (D-homoprolil-N(a)(2-fenil-etil)-n-{[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil}glicinamid-dihidroklorid)
A) Egy 58 ml (461 mmol) fenetil-aminból, 21 ml (154 mmol) trietil-aminból, 200 ml acetonból álló oldathoz 30 g (154 mmol) t-butil-bróm-acetát 50 ml etanollal készített oldatát adjuk 0 °C-on, 1 óra alatt. A hideg fürdőt őrizetlenül hagyva az oldatot hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. Egy éjszakán át kevertetjük, az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot 1 N citromsavban oldjuk. A vizes oldatot dietil-éterrel kétszer mossuk, szilárd nátrium-bikarbonáttal lúgosítjuk, majd 200 ml etil-acetáttal háromszor extraháljuk. Az egyesített etil-acetátos extraktumokat MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük, majd 24 órán át állni hagyjuk. A keletkező csapadékot leszűrjük, dietil-éterrel mossuk, és szárítás után 10,5 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk. Az anyalúgot körülbelül 100 ml-re pároljuk be, és 400 ml dietil-éterrel hígítjuk. Az oldatot 30 percig állni hagyjuk, majd leszűrjük, így további 23,5 g, összesen 34 g fehér, szilárd anyagot kapunk (kitermelés: 94%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 235 (M+)
Az 1 A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-D-hPro-OH-ból és N(PhCH2CH2)Gly-O-t-Buból 10,8 g Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-O-t-Bu-t állítunk elő (kitermelés: 56%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 480 (M+)
Elemanalízis C28H36N2 O5-ra: (%) számított: C, 69,98; H, 7,55; N, 5,83 mért: C, 69,68; H, 7,56; N, 5,77
A 18A) példában leírtakkal lényegében azonos módon a Cbz-DL-1-Piq-Pro-O-t-Bu védésének feloldására
9,2 g Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-OH-t állítunk elő. 1H-NMR
FD-MS, m/e 425 (M+)
Elemanalízis C24H28N2O5-ra: (%) számított: C, 67,91; H, 6,65; N, 6,60 mért: C, 68,19; H, 6,68; N, 6,71
B) Cbz-hPro-N(PHCH2CH2)Gly-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
A 18E) példában leírtakkal lényegében azonos módon Cbz-D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-OH-ból és p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-ból 3,2 g CbzhPro-N(PHCH2CH2)Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő (kitermelés: 55%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 690 (M+)
Elemanalízis C40H43N5O6-ra: (%) számított: C, 69,65; H, 6,28; N, 10,15 mért: C, 69,80; H, 6,46; N, 10,14
C) D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI előállítása
A 19F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 770 mg D-hPro-N(PhCH2CH2)Gly-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI-t állítunk elő (kitermelés: 54%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=85/15-ig haladva 120 perc alatt). 1H-NMR
FD-MS, m/e 423 (M+)
Elemanalízis C24H31 N5O2-ra: (%) számított: C, 58,30; H, 6,73; N, 14,16 mért: C, 58,05; H, 6,60; N, 14,28
22. példa: D-hPro-Pro(4-cisz-PhO)-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI (cisz-D-homoprolil-N{[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil}-4-fenoxi-Lprolinamid-dihidroklorid)
A) Cbz-D-hPro-Pro(4-cisz-PhO)-OH előállítása
58,8 g (200 mmol) Cbz-Pro(4-transz-OH)-Et-t,
65,6 g (250 mmol) trifenil-foszfint és 23,5 g (250 mmol) fenolt 500 ml tetrahidrofuránban oldunk, és az oldathoz 0 °C-on cseppenként, 1 óra alatt 40 ml (250 mmol) dietil-azodikarboxilát 50 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk. A hideg fürdőt elvesszük, és az oldatot 16 órán át állni hagyjuk, miközben az szobahőmérsékletre melegszik. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a visszamaradó sárga szirupot dietil-éterrel keverjük el. A fehér, szilárd anyagot szűréssel távolítjuk el, és a szűrletet bepároljuk. A maradékot szilikagélen kroma23
HU 227 356 Β1 tografáljuk, elúciós gradiensként etil-acetáton keresztül 1:1 etil-acetát/hexánok arányt alkalmazva. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat (TLC-vel vizsgálva) egyesítjük és vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen 36,3 g Cbz-Pro(4-cisz-fenoxi)-OEt-t kapunk, színtelen szirup formájában (kitermelés: 50%). 1H-NMR
FD-MS, m/e 369 (M+)
Elemanalízis C2iH23NO5-ra: (%) számított: C, 68,28; H, 6,28; N, 3,79 mért: C, 68,38; H, 6,30; N, 3,89 g (67,7 mmol) Cbz-Pro(4-cisz-fenoxi)-OEt-t 400 ml etanolban oldunk, és az oldathoz 5 g 5%-os Pd/C katalizátort adunk. Az oldaton 3 órán át hidrogéngázt buborékoltatunk keresztül, majd kovaföldrétegen át szűrjük, 3 ml tömény sósavat adunk hozzá, és vákuumban bepároljuk. A maradékot erőteljes kevertetés mellett dietil-éterben szuszpendáljuk, majd szűrés és szárítás után 14,2 g Pro(4-cisz-fenoxi)-OEt.HCI-t kapunk, fehér, szilárd anyag formájában (kitermelés: 77%). 1H-NMR
FD-MS, m/e 235 (M+)
Elemanalízis C13H18NO3CI-ra: (%) számított: C, 57,46; H, 6,68; N, 5,15 mért: C, 57,68; H, 6,78; N, 5,18
Az 1 A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-D-hPro-OH-ból 19,4 g Cbz-D-hProPro(4-cisz-fenoxi)-OEt-t állítunk elő (kitermelés: 100%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 480 (M+)
Elemanalízis C27H32N2 Og-ra: (%) számított: C, 67,48; H, 6,71; N, 5,83 mért: C, 67,71; H, 6,79; N, 5,89
Az 1D) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 16 g Cbz-D-hPro-Pro(4-cisz-fenoxi)-OH-t állítunk elő (kitermelés: 100%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 452 (M+)
Elemanalízis C25H28N2O6-ra: (%) számított: C, 66,36; H, 6,24; N, 6,19 mért: C, 66,22; H, 6,18; N, 6,18
B) Cbz-D-hPro-Pro(4-cisz-PhO)-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
A 18E) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-D-hPro-Pro(4-cisz-PhO)-OH-ból és p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-ból 4,55 g Cbz-DhPro-Pro(4-cisz-PhO)-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő (kitermelés: 75%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 718 (M+)
C) D-hPro-Pro(4-cisz-PhO)-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI előállítása
A 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 873 mg D-hPro-Pro(4-cisz-PhO)-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI-t állítunk elő (kitermelés: 40%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=85/15-ig haladva 120 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 451 (MH+)
Elemanalízis C25H31N5O3.2HCI-ra: (%) számított: C, 57,47; H, 6,37; N, 13,40 mért: C, 57,22; H, 6,29; N, 13,47
23. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI (N-(etil-szulfonil)-Dfenil-alanil-N-{[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil}-Lprolinamid-hidroklorid)
A) p-NH2CH2C6H4CN.HCI előállítása g (64,6 mmol) N-Boc-p-amino-metil-benzonitrilt 400 ml etil-acetátban oldunk, és az oldaton 0 °C-on, 10 percen át sósavgázt buborékoltatunk keresztül. A hideg fürdőt 1,5 órai kevertetés után eltávolítjuk, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot dietiléterben szuszpendáljuk, majd szűrve, dietil-éterrel mosva és szárítva 10,1 g fehér, szilárd anyagot kapunk (kitermelés: 93%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 132 (M+)
Elemanalízis C8H9N2CI-ra: (%) számított: C, 56,98; H, 5,38; N, 16,61; Cl, 21,02 mért: C, 56,36; H, 5,46; N, 16,22; Cl, 21,31
B) EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Phe-Pro-OH-ból és p-NH2CH2C6H4CN.HCI-ból 1,5 g EtSO2-D-Pne-Pro-pNHCH2C6H4CN-ot állítunk elő (kitermelés: 80%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 468 (M+)
Elemanalízis C24H28N4O4S-ra: (%) számított: C, 61,52; H, 6,02; N, 11,90; Cl mért: C, 61,23; H, 6,13; N, 11,80; Cl
C) EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI előállítása g (2,1 mmol) EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2C6H4CN-t 35 ml abszolút etanolban oldunk, 0,47 ml (2,7 mmol) Ν,Ν-diizopropil-etil-amint és 185 mg (2,7 mmol) hidroxilamin-hidrokloridot adunk hozzá, majd az oldatot refluxig melegítjük. Az oldatot lehűtjük, és az oldószereket vákuumban eltávolítjuk. A következő lépésben ennek az anyagnak 250 mg-ját használjuk fel, a maradékot RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=90/10, A/B=60/40-ig haladva 200 percnél több idő alatt).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 501 (M+)
Elemanalízis C24H3iN5O5S.1,2H2O-ra: (%) számított: C, 51,17; H, 6,12; N, 12,42; Cl, 7,55 mért: C, 51,04; H, 5,81; N, 12,39; Cl, 7,18
D) EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4C(=NH)NH2.HCI előállítása
250 mg (0,52 mmol) EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI-t 40 ml etanolban ol24
HU 227 356 Β1 dunk, majd az oldathoz 19 ml vizet, 1 ml 1 N sósavat és 250 mg 5%-os Pd/C katalizátort adunk. A kevert szuszpenziót 18 órára hidrogénatmoszférába helyezzük, majd leszűrjük, bepároljuk, és a terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (1. módszer A/B=90/10, A/B=60/40-ig haladva 200 percnél több idő alatt). 1H-NMR
FD-MS, m/e 486 (M+)
Elemanalízis C24H31N5O2.HCI.1,5H2O-ra: (%) számított: C, 52,50; H, 6,42; N, 12,75 mért: C, 52,56; H, 6,19; N, 12,59
A 15. példában leírt módszerek alkalmazásával további 5 g termékhez jutunk, melyet RPHPLC-vel tisztítunk (3. módszer A/B=98/2 60 percig, A/B=60/40-ig haladva 300 perc alatt).
24. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2C6H4C(=NH)NH2.HCI
A) EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4C(=NOH)NH2 előállítása
A vegyületet a 23. példánál leírt módszerekkel azonos módon állítjuk elő, p-BrCH2C6H4CN helyett m-BrCH2C6H4CN-t alkalmazva, az így kapott kristályos intermedier 140 mg-ját (13%-át) félrerakjuk, a többit a B) lépéshez használjuk fel.
1H-NMR
FD-MS, m/e 502 (M+)
Elemanalízis C24H31N5O5S-ra: (%) számított: C, 57,47; H, 6,23; N, 13,96 mért: C, 57,28; H, 6,21; N, 13,66
B) EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2C6H4C(=NH)NH2.HCI előállítása
A vegyületet a 23C) és 23D) példában leírtakkal lényegében azonos módon állítjuk elő, 0,27 g végterméket kapunk (kitermelés: 28%, két lépésben).
1H-NMR
FD-MS, m/e 486, (M+)
Elemanalízis C24H31 N5O4S-ra: (%) számított: C, 51,32; H, 6,48; N, 12,47; Cl, 6,94 mért: C, 51,33; H, 6,09; N, 12,20; Cl, 6,66
25. példa: D-1-Piq-Pro-mNHCH2C6H4C(=NH)NH2.HCI
A 23. példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-D-1-Piq-Pro-OH-ból és m-NH2CH2C6H4CN.HCI-ból 0,86 g D-1-Piq-Pro-m-NHCH2C6H4C(=NH)NH2.HCI-t állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e
Elemanalízis C23H33N5O2.2,5HCI.0,5H2O-ra: (%) számított: C, 53,99; H, 7,19; N, 13,69 mért: C, 54,19; H, 7,02; N, 13,81
26. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI
A) Metil-p-ciano-transz-cinnamát előállítása
6,1 g (153 mmol, 60%-os olaj szuszpenzió) nátrium-hidrid és 20 g (153 mmol) p-ciano-benzaldehid
250 ml tetrahidrofuránnal készített, kevert szuszpenziójához 28 g (153 mmol) trimetil-foszfonacetát 50 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk. Az elegyből 48 órai kevertetés után az oldószert vákuum alatt eltávolítjuk, és a nyers maradékot 500 ml etil-acetátban oldjuk. Az etil-acetátos oldatot vízzel egyszer, majd telített, vizes NaHSO3-tal háromszor, végül telített sóoldattal egyszer mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítva, szűrve és vákuumban bepárolva 28 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 98%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 187 (M+)
B) Metil-p-ciano-dihidrocinnamát előállítása
13,6 g p-ciano-transz-cinnamátot 485 ml toluolban oldunk, és az oldathoz 2,7 g 5%-os Pd/BaSO4 katalizátort adunk. Az oldatot 9 órán át (4*105 Pa) nyomású hidrogénatmoszféra alatt tartjuk, majd szűrjük, vákuumban bepároljuk, majd szilikagélen kromatografáljuk, elúciós gradiensként hexánokon át 30%-os etilacetát/hexánok keveréket használva. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd bepároljuk, melynek eredményeképpen 10,6 g színtelen olajat kapunk (kitermelés: 77%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 189 (M+)
C) p-Ciano-dihidrofahéjsav előállítása
Az 1D) példában leírtakkal lényegében azonos módon 1,1 ekvivalens LiOH.H2O-t alkalmazva 5,1 g p-ciano-dihidrofahéjsavat állítunk elő metil-p-cianodihidrocinnamátból.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 175 (M+)
D) Boc-p-NHCH2CH2C6H4CN előállítása
6,7 g (38,2 mmol) p-ciano-dihidrofahéjsavat és 5,9 ml (42 mmol) trietil-amint 150 ml t-butanolban oldunk, 11,6 g (42 mmol) difenil-foszforil-azidot adunk hozzá, és az oldatot refluxig melegítjük. Egy éjszakai kevertetés után az oldatot lehűtjük, és az oldószert vákuumban bepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, 1 N citromsavval háromszor, sóoldattal egyszer, majd telített, vizes NaHSO3-tal kétszer mossuk, MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk, az elúciót 50% etil-acetát/hexánon át 10% etil-acetát/hexánnal végezve. ATLC alapján kiválasztott, terméket tartalmazó frakciókat egyesítve és bepárolva
5,4 g fehér, szilárd anyagot kapunk (kitermelés: 57%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 246 (M+)
HU 227 356 Β1
Elemanalízis C14H18N2O2-ra: (%) számított: C, 68,27; H, 7,37; N, 11,37 mért: C, 68,39; H, 7,50; N, 11,40
E) p-NH2CH2CH2C6H4CN.HCI előállítása
A 23A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 3,6 g p-NH2CH2CH2C6H4CN.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 98%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 147 (M+)
Elemanalízis C9H11N2CI-ra: (%) számított: C, 59,18; H, 6,07; N, 15,34; Cl, 19,41 mért: C, 58,90; H, 6,16; N, 15,20; Cl, 19,30
F) EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2C6H4CN előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Phe-Pro-OH-ból és p-NH2CH2CH2C6H4CN.HCI-ból 1,5 g EtSO2-D-PhePro-p-NHCH2CH2C6H4CN-t állítunk elő.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 482 (M+)
G) EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI előállítása
Egy 1 g (2,07 mmol) EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2C6H4CN-ból és 0,45 ml (2,59 mmol) N,Ndiizopropil-etil-aminból készült, kevert oldathoz 180 mg (2,59 mmol) hídroxil-amin-hidrokloridot adunk, és az oldatot refluxig melegítjük. Az elegyet 18 óra elteltével lehűtjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 15 ml ecetsavban oldjuk és RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=90/10, A/B=60/40-ig haladva 200 percnél hosszabb idő alatt). Az analitikai RPHPLCvel meghatározott, tiszta EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI-t tartalmazó frakciókat egyesítjük, a pH-t a fenti módon beállítjuk, és liofilizálás után 0,35 g EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI-t kapunk (kitermelés: 31%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 516 (M+)
Elemanalízis C25H33N5O5S.HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 52,67; H, 6,36; N, 12,28; Cl, 6,22 mért: C, 52,40; H, 6,10; N, 12,25; Cl, 6,51
H) EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI előállítása
A 23D) példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI-ból 0,098 g EtSO2D-Pne-Pro-p-NHCH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 50%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 500 (M+)
Elemanalízis C25H33N5O4S.2,6HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 49,03; H, 6,19; N, 11,14 mért: C, 48,87; H, 5,79; N, 11,15
27. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI
A) EtSO2-D-Phe-Pro-mNH2CH2CH2C6H4C(=NOH)NH2 előállítása
A 26A)—26E), valamint 24A) példákban leírtakkal lényegében azonos módon, m-ciano-benzaldehidből 0,15 g EtSO2-D-Phe-Pro-mNH2CH2CH2C6H4C(=NOH)NH2-t állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e 516 (M+)
Elemanalízis C25H33N5O5S-ra: (%) számított: C, 58,23; H, 6,45; N, 13,50 mért: C, 57,99; H, 6,57; N, 13,28
B) EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI előállítása
A 24B) példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2C6H4C(=NOH)NH2ból 0,21 g EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI-t állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e 500 (M+)
Elemanalízis C25H33N5O4S.2,1HCI.0,7H2O-ra: (%) számított: C, 51,00; H, 6,25; N, 11,89 mért: C, 50,79; H, 5,86; N, 11,54
28. példa: D-1-Piq-Pro-pNHCH2CH2C6H4C(=NH)NH2.2HCI
A 23. példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-D-1-Piq-Pro-OH-ból és p-NH2CH2CH2C6H4CN.HCI-ból 0,85 g 1-Piq-Pro-pNHCH2CH2C6H4C(=NH)NH2.2HCI-t állítunk elő. 1H-NMR
FD-MS, m/e 426 (M+)
Elemanalízis C24H35N5O2.2HCI.2H2O-ra: (%) számított: C, 53,93; H, 7,73; N, 13,10; mért: C, 53,94; H, 7,60; N, 13,06;
29. példa: D-1-Piq-Pro-mNHCH2CH2C6H4C(=NH)NH2.2HCI
A 23. példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-D-1-Piq-Pro-OH-ból és m-NH2CH2CH2C6H4CN.HCI-ból 0,8 g D-1-Piq-Pro-mNHCH2CH2C6H4C(=NH)NH2.2HCI-t állítunk elő. FD-MS, m/e 426 (M+)
Elemanalízis C24H35N5O2.2HCI.2H2O-ra: (%) számított: C, 53,93; H, 7,73; N, 13,10 mért: C, 53,62; H, 7,57; N, 13,18
30. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI
A) p-HOCH2CH2CH2C6H4CN előállítása g (53 mmol) metil-p-ciano-dihidrocinnamátot 150 ml tetrahidrofuránban oldunk, keverés közben 1,15 g (53 mmol) LiBH4-ot adunk hozzá, és az oldatot refluxig melegítjük. Az oldatot 2 óra elteltével lehűtjük, és cseppenként 7 pH-jú nátrium-foszfát-puffert adunk hozzá. Miután a gázfejlődés befejeződik, az oldathoz etil-acetátot és vizet adunk, majd a fázisokat elválasztjuk. A vizes fázist etil-acetáttal egyszer extraháljuk, és
HU 227 356 Β1 az egyesített etil-acetátos fázisokat sóoldattal mossuk, MgSO4 fölött szárítjuk, majd bepároljuk, melynek eredményeként 8,1 g sűrű, színtelen olajat kapunk (kitermelés: 95%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 161 (M+)
B) p-BrCH2CH2CH2C6H4CN előállítása
8,1 g (50 mmol) p-HOCH2CH2CH2C6H4CN-t 100 ml tetrahidrofuránban oldunk, és keverés közben
14,4 g (55 mmol) trifenil-foszfint, majd 18,2 g (55 mmol) szén-tetrabromidot adunk hozzá. Az oldószereket 18 órai kevertetés után vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk elúciós gradiensként hexánon át 20% etil-acetát/hexánt használva. A TLC-vel kiválasztott, termékeket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk, melynek eredményeképpen 7,3 g sűrű, színtelen olajat kapunk (kitermelés: 45%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 223 (M+)
Elemanalízis C10H10BrN-ra: (%) számított: C, 53,60; H, 4,50; N, 6,25 mért: C, 53,90; H, 4,67; N, 6,24
C) p-Boc2NCH2CH2CH2C6H4CN előállítása
1,4 g (34 mmol, 60%-os olaj diszperzió) nátriumhidrid 100 ml DMF-fel készült szuszpenziójához keverés mellett, csepegtetőtölcséren keresztül, cseppenként 7,4 g (34 mmol) di-t-butil-imino-dikarboxilát 20 ml DMF-fel készített oldatát adjuk. Miután a gázfejlődés véget ért, az elegyhez csepegtetőtölcséren át 7 g (31 mmol) p-BrCH2CH2CH2C6H4CN DMF-es oldatát adjuk, majd az így kapott oldatot 70 °C-ra melegítjük. Az oldatot 12 órai kevertetés után lehűtjük, és az oldószert vákuum alatt eltávolítjuk. A maradékot dietil-éterben oldjuk és vízzel háromszor mossuk. A szerves fázist MgSO4 fölött szárítjuk, szűrjük és bepároljuk, majd a maradékot szilikagélen kromatografáljuk, az elúciót hexánon át 20%-os etil-acetát/hexán eleggyel végezve. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítve és bepárolva 9,38 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 84%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 361 (M+)
Elemanalízis C20H28N2O4-ra: (%) számított: C, 66,64; H, 7,83; N, 7,77 mért: C, 66,40; H, 7,81; N, 7,57
D) p-NH2CH2CH2CH2C6H4CN.HCI előállítása
A 23A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4,3 g p-NH2CH2CH2CH2C6H4CN.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 84%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 160 (M+)
E) EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2CH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI előállítása Az 1G) és 26G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Phe-Pro-OH-ból és p-NHCH2CH2CH2C6H4CN.HCI-ból 0,32 g EtSO2-DPhe-Pro-p-NHCH2CH2CH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI-t állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e 530 (M+)
Elemanalízis C26H35N5O5S.1,2HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 52,88; H,6,51; N, 11,84 mért: C, 52,71; H, 6,26; N, 11,76
F) EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI előállítása A 23D) példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Phe-Pro-p-NHCH2CH2CH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI-ból
0,13 g EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 67%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 514 (M+)
Elemanalízis C26H35N5O4S.1,5HCI.2H2O-ra: (%) számított: C, 51,67; H, 6,75; N, 11,59 mért: C, 51,36; H, 6,46; N, 11,28
31. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2CH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI
A) EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2CH2CH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI előállítása Az 1G) és 26G) példában leírtakkal lényegében azonos módon m-ciano-dihidrofahéjsavból 0,32 g EtSO2-DPhe-Pro-m-NHCH2CH2CH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI-t állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e 530 (M+)
Elemanalízis C26H35N5O5S.HCI.1,1H2O-ra: (%) számított: C, 53,30; H, 6,57; N, 11,95; Cl, 6,05 mért: C, 52,97; H, 6,19; N,11,96; Cl, 6,13
B) EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2CH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI előállítása A 23D) példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2CH2CH2C6H4C(=NOH)NH2.HCI-ból 0,12 g EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2CH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 62%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 514 (M+)
Elemanalízis C26H35N5O4S.1,5HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 53,26; H, 6,62; N, 11,94 mért: C, 53,19; H, 6,25; N, 12,00
32. példa: 1 -Piq-Pro-pNHCH2CH2CH2C6H4C(=NH)NH2.2HCI
A 23. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 1-Piq-Pro-OH-ból és p-NH2CH2CH2CH2C6H4CN.HCI-ból 0,66 g 1-Piq-Pro27
HU 227 356 Β1 p-NHCH2CH2CH2CgH4C(=NH)NH2.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 48%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 440 (M+)
Elemanalízis C25H37N5O2.2,1HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 56,21; H, 7,75; N, 13,11 mért: C, 56,36; H, 7,44; N, 12,79
33. példa: 1-Piq-Pro-mNHCH2CH2CH2C6H4C(=NH)NH2.2HCI
A 23. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 1-Piq-Pro-OH-ból és m-NH2CH2CH2CH2C6H4CN.HCI-ból 0,64 g 1-Piq-Prom-NHCH2CH2CH2C6H4C(=NH)NH2.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 46%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 440 (M+)
Elemanalízis C25H37N5O2.2HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 56,60; H, 7,79; N, 13,20 mért: C, 56,92; H, 7,55; N, 12,26
34. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4NHC(NH)NH2.HCI
A) Boc-p-NHCH2C6H4NO2 előállítása g (79 mmol) 4-nitro-benzil-amint és 14 ml (79 mmol) N,N-diizopropil-etil-amint 200 ml diklór-metánban oldunk, és az oldathoz 17 g (79 mmol) di-t-butildikarbonátot adunk. Az oldószert 48 óra elteltével vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 500 ml etil-acetátban oldjuk, 1 m citromsavval kétszer, vízzel egyszer és végül telített, vizes NaHCO3-oldattal egyszer mossuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és bepároljuk, így egy világosfehér anyaghoz jutunk, melyet kloroform/hexán elegyből kristályosítunk át három részletben. Az adagokat összekeverjük, hexánnal mossuk, vákuumban történő szárítás után 11,5 g fehér anyaghoz jutunk (kitermelés: 58%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 252 (M+)
Elemanalízis C12H16N2O4-ra: (%) számított: C, 57,13; H, 6,39; N, 11,10 mért: C, 57,27; H, 6,60; N, 11,13
B) p-BocNHCH2CóH4NH2 előállítása
7,5 g (29,7 mmol) p-BocNHCH2C6H4NO2-t és
17,7 g (74,3 mmol) NiCI2.6H2O-t 150 ml metanolban oldunk, és az oldathoz keverés közben, 0 °C-on 5,6 g (149 mmol) NaBH4-ot adunk, kis adagokban, 30 perc alatt. A NaBH4 hozzáadása után 15 percet várunk, majd az oldószert vákuumban bepároljuk, a maradékot tömény ammónium-hidroxidban oldjuk és diklórmetánnal kétszer extraháljuk. Az egyesített szerves extraktumokat sós vízzel mossuk, MgSO4-tal szárítjuk, majd szűrjük és vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen 6,4 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 222 (M+)
Elemanalízis C12H18N2O2-ra: (%) számított: C, 64,84; H, 8,16; N, 12,60 mért: C, 65,10; H, 8,42; N, 12,76
C) N,N’-di-Cbz-S-metil-izotiokarbamid előállítása g (144 mmol) bisz-S-metil-izotiokarbamidszulfátot 200 ml diklór-metánban oldunk, és az oldathoz 16 ml 5 N nátrium-hidroxid-oldatot adunk. Az elegyet 0 °C-ra hűtjük, és 41 ml (288 mmol) benzil-kloroformátot adunk hozzá. Egyidejűleg annyi 2 N nátriumhidroxidot adagolunk, mely az oldat pH-ját körülbelül 11-es értéken tartja. A hideg fürdőt elvesszük, és miután az oldat szobahőmérsékletre melegszik, a fázisokat elválasztjuk. A vizes fázist 250 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat 250 ml 0,1 N HCI-dal kétszer és 250 ml sós vízzel egyszer mossuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen 41 g sűrű, színtelen sziruphoz jutunk (kitermelés: 79%).
1H-NMR
D) p-Boc-NHCH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz előállítása g (22,5 mmol) p-BocNHCH2C6H4NH2-t 50 ml tetrahidrofuránban oldunk, és az oldathoz N,N’-di-CbzS-metil-izotiokarbamidot adunk. Az oldószert 48 óra elteltével vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot kloroformban oldjuk. Az oldathoz szilikagélt adunk, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk, így világosfehér port kapunk, melyet szárazon szilikagél oszlopra töltünk. Az oszlopon ezután elúciót hajtunk végre, elúciós gradiensként 30%-os etil-acetát/hexán elegyen keresztül 5%-os etil-acetát/hexán összetételt alkalmazva. A TLC-vel kiválasztott, terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd vákuumban történő bepárlás után 7,6 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 63%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 532 (M+)
Elemanalízis C2gH32N4O6-ra: (%) számított: C, 65,40; H, 6,06; N, 10,52 mért: C, 65,66; H, 6,35; N, 10,59
E) HCI.p-NH2CH2C6H4NHC(NHCbz)NHCbz előállítása
A 23A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, p-BocNHCH2C6H4NHC(NCbz)NHCbz-ból 4,7 g HCI.p-NH2- CH2C6H4NHC(NHCbz)NHCbz-t állítunk elő, fehér por formájában (kitermelés: 89%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 433 (M+)
F) EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4NHC(NH)NH2.HCI előállítása
Az 1G) és 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Phe-Pro-OH-ból és HCI.p28
HU 227 356 Β1
NH2CH2C6H4NHC(NHCbz)NHCbz-ból 1,1 g EtSO2-DPhe-Pro-p-NHCH2CgH4NHC(NH)NH2.HCI-t állítunk elő. IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 501 (M+)
Elemanalízis C24H32NgO4S.HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 51,73; H, 6,36; N, 15,14 mért: C, 52,32; H, 5,99; N, 14,79
35. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-pNHCH2CH2CgH4NHC(NH)NH2.HCI
A 34. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-nitro-fenetil-amin.HCI-ból 1,8 g EtSO2-D-PhePro-p-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2.HCI-t állítunk elő.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e515(MH+)
HRMS (FAB), m/e C25H35N6O4S-ra:
számított: 515,2441 mért: 515,2483
36. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2C6H4NHC(NH)NH2.HCI
A 30C) és 34B) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 3-nitro-benzil-bromidból 1,8 g EtSO2D-Phe-Pro-m-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2.HCI-t állítunk elő.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e515(MH+)
HRMS (FAB), m/e C24H33N6O4S-ra:
számított: 501,2284 mért: 501,2280
37. példa: EtSO2-D-Phe-Pro-mNHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2.HCI
A 26D), 26B) (Pd/BaSO4 helyett Pd/C-t és toluol helyett etil-acetátot használva), valamint 34D)-34F) példákban leírtakkal lényegében azonos módon 3-nitro-fahéjsavból 0,85 g EtSO2-D-Phe-Pro-m-NHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2.HCI-t állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e515(MH+)
Elemanalízis C25H34N6O4S.2,2HCI.0,5H2O-ra: (%) számított: C, 49,73; H, 6,21; N, 13,92 mért: C, 49,45; H, 5,82; N, 13,55
38. példa: D-1-Piq-Pro-pNHCH2C6H4NHC(NH)NH2.2HCI
A 34. példában leírtakkal lényegében azonos módon 0,94 g D-1-Piq-Pro-p-NHCH2C6H4NHC(NH)NH2.2HCI-t állítunk elő. A végterméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 180 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 427 (MH+)
Elemanalízis C23H34N6O2.2HCI-ra: (%) számított: C, 55,31; H, 7,26; N, 16,82; Cl, 14,20 mért: C, 55,05; H, 7,23; N, 16,55; Cl, 14,24
39. példa: D-1-Piq-Pro-pNHCH2CH2C6H4NHC(=NH)NH2.2HCI
A 35. példában leírtakkal lényegében azonos módon 1,02 g D-1-Piq-Pro-pNHCH2CH2C6H4NHC(=NH)NH2.2HCI-t állítunk elő. A végterméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 180 perc alatt). 1H-NMR
FD-MS, m/e 4,41 (M+)
Elemanalízis C24H36NgO2.2HCI.1,5H2O-ra: (%) számított: C, 53,33; H, 7,65; N, 15,55; Cl, 13,62 mért: C, 53,41; H, 7,45; N, 15,37; Cl, 13,48
40. példa: D-1-Piq-Pro-mNHCH2C6H4NHC(=NH)NH2.2HCI
A 36. példában leírtakkal lényegében azonos módon 1,04 g D-1-Piq-Pro-mNHCH2CgH4NHC(=NH)NH2.2HCI-t állítunk elő. A végterméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 180 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 427 (M+)
Elemanalízis C23H34N6O2.2HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 53,38; H, 7,40; N, 16,24; Cl, 13,70 mért: C, 53,25; H, 7,50; N, 16,23; Cl, 13,88
41. példa: D-1-Piq-Pro-mNHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2.2HCI
A 37. példában leírtakkal lényegében azonos módon 0,96 g D-1-Piq-Pro-mNHCH2CH2C6H4NHC(NH)NH2.2HCI-t állítunk elő. A végterméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 180 perc alatt). 1H-NMR
FD-MS, m/e 441 (M+)
Elemanalízis C24H36NgO2.2,1HCI.1,5H2O-ra: (%) számított: C, 52,97; H, 7,61; N, 15,44; Cl, 13,68 mért: C, 52,80; H, 7,57; N, 15,46; Cl, 13,35
42. példa: D-1 -Piq-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI
A) Cbz-DL-1-Piq-cisz-Ohi-Et előállítása
Az 1A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-DL-1-Piq-OH-ból és cisz-Ohi-OEt.HCI-ból 16,6 g Cbz-DL-1 -Piq-cisz-Ohi-Et-t állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e 496 (M+)
Elemanalízis C29H40N2O5-ra: (%) számított: C, 70,13; H, 8,12; N, 5,64 mért: C, 69,96; H, 8,23; N, 5,73
B) Cbz-D-1-Piq-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
Az 1D) és 18E) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-D,L-1-Piq-Pro-OH-ból és p-H2NCH2CgH4C(NH)NHCbz.2HCI-ból Cbz-D-1-Piqcisz-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t és Cbz-L-1Piq-cisz-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő. A diasztereomereket szilikagélen, etil-acetát/hexán gradienst használva választjuk el. A fő diasztereomert
HU 227 356 Β1 tartalmazó frakciókat (Rf=0,31, etil-acetát) összegyűjtjük és bepárolva 1,3 g Cbz-L-1-Piq-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t kapunk. A másik diasztereomert tartalmazó frakciókat (Rf=0,19, etil-acetát) összegyűjtjük és bepárolva 1,5 g Cbz-D-1-Piq-ciszOhi-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t kapunk, fehér hab formájában.
1H-NMR
FD-MS, m/e 735 (MH+)
Elemanalízis C43H51 N5O6-ra: (%) számított: C, 70,37; H, 7,00; N, 9,54 mért: C, 70,20; H, 7,22; N, 9,36
C) D-1-Piq-cisz-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI előállítása
A 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Cbz-D-1-Piq-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz-ből 0,61 g D-1 -Piq-cisz-Ohip-NHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI-t állítunk elő. A jelen esetben használt HPLC-gradiens: A/B=98/2, A/B=60/40-ig haladva, 120 perc alatt.
1H-NMR
FAB-MS, m/e 466,4 (M+)
Elemanalízis C27H39N5O2.2HCI.1 H2O-ra: számított: C, 58,27; H, 7,79; N, 12,58 mért: C, 58,66; H, 7,56; N, 12,78
43. példa: D-3-Piq-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI
Az 1A), 1D), 18E) és 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 1,3 g D-3-Piq-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI-t állítunk elő. A használt HPLC-gradiens: A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva, 120 perc alatt.
1H-NMR
FAB-MS, m/e 466,4 (MH+)
Elemanalízis C27H39N5O2.2HCI-ra: (%) számított: C, 60,22; H, 7,67; N, 13,00 mért: C, 59,95; H, 7,73; N, 12,89
44. példa: EtSO2-Phg-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI ((S-cisz)-N-[[4-(aminoimino-metil)-fenil]-metil]-1-[N-(etil-szulfonil)-D-fenilglicil]-1 H-indol-2-karboxamid-hidroklorid)
A) Boc-D-Phg-cisz-Ohi-OEt előállítása
Az 1 A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-Phg-OH-ból és (S)-cisz-oktahidroindol-2karboxilsav-etil-észter.HCI-ból 14,9 g Boc-D-Phg-ciszOhi-OEt-t állítunk elő (kitermelés: 58%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 430 (M+)
Elemanalízis C24H34N2 O5-ra: (%) számított: C, 66,95; H, 7,96; N, 6,51 mért: C, 66,69; H, 8,02; N, 6,40
B) D-Phg-cisz-Ohi-OEt.HCI előállítása
Boc-D-Phg-cisz-Ohi-OEt-t etil-acetátban oldunk, és az oldaton 0 °C-on, kevertetés közben HCI-gázt buborékoltatunk át rajta. Az oldatot 2 órai kevertetés alatt hagyjuk szoba-hőmérsékletűre melegedni, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A kapott szilárd anyagot dietil-éterben szuszpendáljuk, majd szűréssel teljesen leválasztjuk, melynek eredményeképpen
10,7 g D-Phg-Cisz-Ohi-OEt.HCI-t kapunk (kitermelés: 97%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 331 (M+)
Elemanalízis C19H27N2O3CI-ra: (%) számított: C, 62,20; H, 7,41; N, 7,64 mért: C, 62,42; H, 7,36; N, 7,85
C) EtSO2-D-Phg-cisz-Ohi-OEt előállítása g (27 mmol) D-Phg-cisz-Ohi-OEt.HCI-t és
10,7 ml (61 mmol) Ν,Ν-diizopropil-etil-amint 200 ml tetrahidrofuránban oldunk -78 °C-on, majd az oldathoz cseppenként, csepegtetőtölcséren keresztül 3,9 g (30 mmol) etánszulfonil-klorid 20 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk. A hideg fürdőt magára hagyjuk, míg az oldat lassan szobahőmérsékletre melegszik. Körülbelül 18 óra elteltével az oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot 200 ml etil-acetátban oldjuk, majd 200 ml 1 N citromsavval egyszer, 200 ml telített, vizes NaHCO3-tal egyszer és 200 ml sós vízzel egyszer mossuk. A szerves fázist MgSO4tal szárítjuk, szűrjük és bepároljuk, melynek eredményeképpen 11,2 g sárga habot kapunk (kitermelés: 97%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 422 (M+)
Elemanalízis C21H30N2O5S-ra: (%) számított: C, 59,69; H, 7,16; N, 6,63 mért: C, 59,94; H, 7,08; N, 6,78
D) EtSO2-Phg-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
Az 1D), 18E) és 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 0,62 g EtSO2-Phg-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő. Az alkalmazott HPLC gradiens: A/B=98/2-től A/B=60/40-ig haladva, 120 percnél hosszabb idő alatt.
1H-NMR
FAB-MS, m/e 526,3 (MH+)
Elemanalízis C27H35N5O4S.HCI-ra: (%) számított: C, 57,69; H, 6,45; N, 12,46 mért: C, 57,47; H, 6,48; N, 12,20
45. példa: EtSO2-Phe-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI ((S-cisz)-N-{[4-(aminoimino-metil)-fenil]-metil}-1 -[N-(etil-szulfonil)-D-fenilalanil]-1 H-indol-2-karboxamid-hidroklorid)
A) EtSO2-Phe-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI előállítása
A 44. példában leírt módszerekkel lényegében azonos módon, Boc-D-Phe-Pro-OH-ból 1,5 g EtSO2-Phecisz-Ohi-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI-t állítunk elő. 1H-NMR
FAB-MS, m/e 540,3 (MH+)
Elemanalízis C28H37N5O4S.HCI.H2O-ra: számított: C, 56,51; H, 6,94; N, 11,77 mért: C, 56,24; H, 6,55; N, 11,72
HU 227 356 Β1
46. példa: HOOCCH2-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI ((N-(karboxi-metil)-Dfenil-alanil-N-{[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil}-Lprolinamid-hidroklorid)
A) N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OBn előállítása g (51 mmol) D-Phe-Pro-OBn.HCI-t 100 ml DMFben oldunk, és az oldathoz egy részletben 9,9 g (56 mmol) t-butil-bróm-acetátot, majd 30 perc alatt cseppenként 17,4 ml (101 mmol) Ν,Ν-diizopropil-etilamint adunk. Az elegyet 18 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A keverékhez 16,6 g (76 mmol) di-t-butil-dikarbonátot és 13,2 ml (76 mmol) Ν,Ν-diizopropiletil-amint adunk egy részletben, és a kevertetést további 24 órán át végezzük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot 1 I etil-acetáttal és 500 ml
N citromsavval osztjuk meg. A fázisokat elkülönítjük, és a szerves fázist 500 ml 1 N vizes citromsavval egyszer, 500 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal kétszer és 500 ml sós vízzel egyszer mossuk. A szerves fázist Na2SO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A sárga olajat szilikagél kromatográfiával tisztítjuk, az elúciót etil-acetát/hexán gradienssel végezve (hexántól 30%-os etil-acetát/hexánig). A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk, melynek eredményeképpen 19 g színtelen olajat kapunk, mely állás közben lassan kikristályosodik (kitermelés: 66%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 566 (M+)
Elemanalízis C32H42N2O7-ra: (%) számított: C, 67,82; H, 7,47; N, 4,94 mért: C, 68,06; H, 7,33; N, 5,17
B) N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH előállítása
18,5 g (33 mmol) N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-PhePro-OH-t 250 ml etil-acetátban oldunk, és az oldathoz 5 g 5%-os Pd/C katalizátort adunk. Az oldatot vákuumban sokszor gázmentesítjük, majd kevertetés mellett órára hidrogénatmoszféra alá helyezzük. A gázpalackot eltávolítjuk, az oldathoz kovaföldet adunk, és az iszapot kovaföldrétegen át szűrjük. A szűrletet vákuumban bepárolva 13,2 g fehér habot kapunk (kitermelés: 84%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 476 (M+)
Elemanalízis C25H36N2O7-ra: (%) számított: C, 63,01; H, 7,61; N, 5,88 mért: C, 63,03; H, 7,73; N, 5,59
C) N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
A 18E) példában leírtakkal lényegében azonos módon, N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH-ból és p-H2NCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-ból 2,7 g N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e 743 (MH+)
Elemanalízis C41H5.|N5O8-ra: (%) számított: C, 66,38; H, 6,93; N, 9,44 mért: C, 66,08; H, 6,92; N, 9,16
D) HOOCCH2-D-Phe-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
2,2 g (3 mmol) N-(t-BUOOCCH2)-N-Boc-D-PhePro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz 100 ml dioxánnal készített, 0 °C-ra hűtött oldatán át 10 percen keresztül sósavgázt buborékoltatunk keresztül. Az elegyből 3 órai kevertetés után - miközben az szobahőmérsékletre melegszik fel - a dioxánt vákuumban eltávolítjuk. A maradékot 150 ml abszolút etanol, 75 ml víz és 6 ml 1 N sósav elegyében oldjuk, majd a keverékhez 1 g 5%-os Pd/C katalizátort adunk. Vákuummal való gázmentesítés után az elegyet 16 órán át kevertetés mellett, szobahőmérsékleten hidrogénatmoszféra alatt tároljuk. Kovaföld hozzáadása után a keletkező iszapot kovaföldrétegen keresztül szűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, és közvetlenül ezután HPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, Α/Β-70/30-ig haladva 120 percnél több idő alatt).
1H-NMR
FAB-MS, m/e 452,3 (MH+)
Elemanalízis C24H29N5O4.2HCI-ra:
számított: C, 54,97; H, 5,96; N, 13,35 mért: C, 55,21; H, 6,11; N, 13,39
47. példa: HOOCCH2-D-Phe-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI
A) t-BuOOCCH2-D-Phe-cisz-Ohi-OEt előállítása g (79 mmol) D-Phe-cisz-Ohi-OEt.HCI-t 400 ml acetonitrilben oldunk, majd az oldathoz 41 ml (236 mmol) Ν,Ν-diizopropil-etil-amint és 14 ml (87 mmol) t-butil-bróm-acetátot adunk. Az oldatot 50 °C-ra melegítjük, és 3 órán keresztül ezen a hőmérsékleten tartjuk. Ezután szobahőmérsékletre hűtjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot 300 ml etil-acetátban oldjuk, és az így kapott oldatot 200 ml telített, vizes ammónium-kloriddal kétszer, 200 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal kétszer, majd 200 ml sós vízzel szintén kétszer mossuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, majd szűrve és vákuumban bepárolva narancssárga olajhoz jutunk, melyet szilikagél-kromatográfiával tisztítunk, elúciós gradiensként hexán 1:1 hexán/etil-acetát arányt alkalmazva. A TLC-vel vizsgált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítve és bepárolva 33,2 g színtelen olajhoz jutunk (kitermelés: 92%). 1H-NMR
FD-MS, m/e 458 (M+)
Elemanalízis C26H38N2O5-ra: (%) számított: C, 68,10; H, 8,35; N, 6,11 mért: C, 68,37; H, 8,47; N, 5,90
B) N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-d-Phe-cisz-Ohi-OH előállítása g (65 mmol) t-BuOOCCH2-D-Phe-cisz-Ohi-OEt-t
200 ml tetrahidrofuránban oldunk, és az oldathoz 17 ml (98 mmol) Ν,Ν-diizopropil-etil-amint és 15,7 g (72 mmol) di-t-butil-dikarbonátot adunk. Az oldatot eny31
HU 227 356 Β1 he refluxig melegítjük, és 16 órán keresztül itt tartjuk. Ezután a fűtést megszakítjuk, és miután az oldat lehűlt, vákuumban bepároljuk. A maradékot 400 ml etil-acetátban oldjuk, és 200 ml 1 m citromsavoldattal kétszer, 200 ml telített, vizes nátrium-bikarbonáttal kétszer és 200 ml sós vízzel kétszer mossuk. A szerves oldatot MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, majd vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen sárga olajhoz jutunk. Az olaj egy részét, 24,8 g-ot (44 mmol), 300 ml dioxánban oldunk. Az elegyhez egy 2,05 g (49 mmol) LiOH.H2O-ból és 150 ml vízből álló oldatot adunk. A keveréket szobahőmérsékleten 5 órán át kevertetjük, majd 100 ml telített, vizes ammónium-kloridot adunk hozzá. Az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal és dietil-éterrel osztjuk meg. A fázisokat elkülönítjük, és a vizes fázist citromsavval 3-as pH-értékűre savanyítjuk. A savas vizes oldatot 200 ml dietil-éterrel háromszor extraháljuk, az extraktumokat egyesítjük, MgSO4tal szárítjuk, szűrjük és bepároljuk, melynek eredményeképpen 24,3 g N-(t-BuOOCCH2)-N-Boc-D-Phecisz-Ohi-OH-t kapunk fehér hab formájában.
1H-NMR
FD-MS, m/e 530 (M+)
Elemanalízis C29H42N2O7-ra: (%) számított: C, 65,64; H, 7,98; N, 5,28 mért: C, 65,39; H, 8,04; N, 5,39
C) HOOCCH2-D-Phe-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
A 18E) és 46D) példában leírtakkal lényegében azonos módon 1,2 g HOOCCH2-D-Phe-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 67%).
1H-NMR
FAB-MS, m/e 506,3 (MH+)
Elemanalízis C28H35N5O4.2HCI.H2O-ra:
számított: C, 57,24; H, 6,52; N, 11,92 mért: C, 57,40; H, 6,30; N, 11,69
48. példa: HOOCCH2-D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI (N-(karboxi-metil)-Dciklohexil-alanil-N-{[4-(amino-imino-metil)-fenil]metil}-L-prolinamid)
A 46. példában leírtakkal lényegében azonos módon 0,92 g HOOCCH2-D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e 458 (M+)
Elemanalízis C24H35N5O4.HCI.0,5H2O-ra:
számított: C, 57,30; H, 7,41; N, 13,92 mért: C, 57,52; H, 7,29; N, 13,83
49. példa: HOOCCH2-D-Cha-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI ((S-cisz)-N-{[4-(aminoimino-metil)-fenil]-metil}-1-[N-(karboxi-metil)-Dciklohexil-alanil]-1 H-indol-2-karboxamid-hidroklorid) Az 1 A), 1D), 18E), 44B), 47A) (benzil-bróm-acetátot alkalmazva) és 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 0,75 g HOOCCH2-D-Phe-cisz-Ohi-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket HPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 180 percnél hosszabb idő alatt).
1H-NMR
FAB-MS, m/e 512,3 (MH+)
Elemanalízis C28H41N5O4.HCI-ra:
számított: C, 61,36; H, 7,72; N, 12,78 mért: C, 61,08; H, 7,47; N, 12,53
50. példa: HOOCCH2-D-Phe-Pro-(4-cisz-izoamil)p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI
A) Cbz-Pro-(4-transz-OH)-OEt előállítása g (124 mmol) Cbz-Pro-(4-transz-OH)-OH-t 500 ml etanolban oldunk, az oldathoz 1 ml p-toluolszulfonsavat adunk és refluxig melegítjük. Az oldatot 16 órán át tartó kevertetés után szoba-hőmérsékletűre hűtjük, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot 400 ml etil-acetátban oldjuk, telített, vizes NaHCO3-tal kétszer és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal kétszer mossuk. Az etil-acetátos oldatot MgSO4-tal szárítjuk, majd szűrve és vákuumban bepárolva 34,5 g színtelen olajhoz jutunk (kitermelés: 95%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 293 (M+)
Elemanalízis C15H19NO5-ra: (%) számított: C, 61,42; H, 6,53; N, 4,77 mért: C, 61,20; H, 6,65; N, 4,73
B) Cbz-Pro-(4-oxo)-OEt előállítása
32,7 g (111 mmol) Cbz-Pro-(4-transz-OH)-OEt-t 500 ml diklór-metánban oldunk mechanikus kevertetés mellett, 1 l-es, kerek aljú lombikban. Az oldathoz 100 g, 3 A-ös molekulaszitát és 60 g (278 mmol) piridíniumklór-kromátot adunk, olyan, megfelelően kis adagokban, hogy a kevertetés hatásos maradjon. Az elegyet szobahőmérsékleten 12 órán át kevertetjük, majd 200 ml dietil-étert adunk hozzá, a fekete iszapot leöntjük a kátrányos maradékról, és 200 g szilikagélt tartalmazó oszlopra öntjük. A maradékot 200 ml diklór-metánnal kétszer mossuk, és az egyesített, használt mosófolyadékokat szintén átfuttatjuk a szilikatölteten. A szűrletet 4 I 1:1 etil-acetát/hexán eleggyel szilikagél oszlopon futtatjuk keresztül, és összesen 500 ml-nyi frakciót kapunk. A TLC-vel vizsgált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és azokat vákuumban bepárolva 23,4 g színtelen olajat kapunk (kitermelés: 74%). 1H-NMR
FD-MS, m/e 291 (M+)
Elemanalízis C15H17NO5-ra:
számított: C, 61,85; H, 5,88; N, 4,81 mért: C, 61,57; H, 5,82; N, 4,71
C) Cbz-Pro-(4-izobutil-metilidén)-OEt előállítása
34,2 g (288 mmol) kálium-t-butoxidot 800 ml tetrahidrofuránban szuszpendálunk egy kemencében szárított, kétnyakú, 2 l-es, kerek aljú, nitrogénbevezető csonkkal, mágneses keverővei és csepegtetőtölcsérrel ellátott lombikban. A szuszpenzióhoz kis részletekben 120 g (288 mmol) izoamil-trifenil-foszfónium-bromidot adunk. Az elegyet 30 percig kevertetjük, majd a cse32
HU 227 356 Β1 pegtetőtölcséren keresztül, 1 óra alatt, cseppenként 70 g (240 mmol) Cbz-Pro-(4-oxo)-OEt 150 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk. További két órán át tartó kevertetés után 100 ml telített, vizes ammóniumkloridot adunk hozzá. Az oldatot 750 ml etil-acetáttal hígítjuk, és a fázisokat elválasztjuk. A szerves fázist 1 N citromsavval kétszer, telített, vizes NaHCO3-tal kétszer és telített, vizes nátrium-klorid-oldattal kétszer mossuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, majd szűrjük és bepároljuk, melynek eredményeképpen sárga olajat kapunk. Az olajat gyors szilikagél kromatográfiával tisztítjuk, az elúciót 2:1 arányú etil-acetát/hexán eleggyel végezve. A TLC-vel vizsgált, termékeket tartalmazó frakciókat egyesítve és vákuumban bepárolva 37 g színtelen olajhoz jutunk (kitermelés: 45%). 1H-NMR
FD-MS, m/e 345 (M+)
Elemanalízis C20H27NO4-ra: (%) számított: C, 69,54; H, 7,88; N, 4,05 mért: C, 69,74; H, 7,85; N, 3,99
D) Pro-(4-cisz-izoamil)-OEt.HCI előállítása g (107 mmol) Cbz-Pro(4-izobutil-metilidén)OEt-t 500 ml etanolban oldunk, és az oldathoz 5 g 5%-os Pd/C katalizátort adunk. Az oldaton öt percig nitrogéngázt, majd 3 órán át hidrogéngázt buborékoltatunk keresztül, majd kovaföldrétegen át szűrjük. Az oldaton telítésig hidrogén-klorid-gázt buborékoltatunk keresztül, és vákuumban bepárolva 26 g sárga olajhoz jutunk (kitermelés: 97%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 214 (M+)
Elemanalízis C12H24CINO2-ra: (%) számított: C, 57,70; H, 9,68; N, 5,61 mért: C, 57,46; H, 9,50; N, 5,82
E) HOOCCH2-D-Phe-Pro-(4-cisz-izoamil)-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
Az 1 A), 1D), 18E), 44B), 47A) (benzil-bróm-acetátot alkalmazva) és 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-Cha-ból és Pro-(4-cisz-izoamil)OEt.HCI-ból kiindulva 0,27 g HOOCCH2-D-Phe-Pro(4-cisz-izoamil)-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket HPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=50/50-ig haladva 180 percnél hosszabb idő alatt).
1H-NMR
FAB-MS, m/e 528,4 (MH+)
Elemanalízis C2gN45N5O4.1,9HCI-ra: (%) számított: C, 58,34; H, 7,92; N, 11,73; Cl, 11,28 mért: C, 58,30; H, 7,85; N, 11,83; Cl, 11,27
51. példa: D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI (D-ciklohexil-alanil-N{[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil}-L-prolinamiddihidroklorid)
A) Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
Az 1 A), 46E) és 18E) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-Cha-Pro-OH-ból 32,5 g
Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő (kitermelés: 94%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 634 (M+)
Elemanalízis C35H47N5O6-ra: (%) számított: C, 66,33; H, 7,47; N, 11,05 mért: C, 66,30; H, 7,47; N, 11,26
B) D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI előállítása
A 23A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-ből kiindulva 9,6 g D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-t állítunk elő (kitermelés: 100%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 534 (M+)
Elemanalízis C30H41N5O4CI2-ra: (%) számított: C, 59,40; H, 6,81; N, 11,54; Cl, 11,69 mért: C, 59,54; H, 6,80; N, 11,77; Cl, 11,21
C) D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI előállítása
A 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 0,74 g D-Cha-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.2HCI-t állítunk elő (kitermelés: 62%). A terméket HPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=75/25-ig haladva 150 percnél hosszabb idő alatt).
1H-NMR
FAB-MS, m/e 400,3 (M+)
Elemanalízis C22H33N5O2.2,1HCI-ra: (%) számított: C, 55,50; H, 7,43; N, 14,71; Cl, 15,64 mért: C, 55,64; H, 7,50; N, 14,65; Cl, 15,81
52. példa: HOOCCH2CH2-D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI (N-(2-karboxi-etil)-Dciklohexil-alanil-N-{[4-(amino-imino-metil)-fenil]metil}-L-prolinamid-hidroklorid)
A) HOOCCH2CH2-D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
2,5 g (4,1 mmol) D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-t kevertetés közben 100 ml EtOAc-ban szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz 100 ml 1 M KHCO3-ot adunk, és az elegyet addig kevertetjük, míg az összes szilárd anyag fel nem oldódik. Az elegyet elválasztótölcsérbe öntjük, és a fázisokat elválasztjuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen a szabad bázis 1,24 g-ját kapjuk fehér, szilárd anyagként. A szilárd anyagot 100 ml etanolban oldjuk. Az oldathoz 0,41 g (2,6 mmol) benzil-akrilátot adunk, és 2 napon keresztül, szobahőmérsékleten kevertetjük. Ezután ehhez az oldathoz 50 ml vizet, 4,6 ml 1 N sósavat és 0,5 g 5%-os Pd/C katalizátort adunk, a kevert szuszpenziót gázmentesítjük és hidrogénatmoszférába helyezzük. Az oldathoz 16 óra elteltével kovaföldet adunk, és az iszapot kovaföldrétegen át szűrjük. A szűrletet vákuumban 25 ml-re pároljuk be és RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=75/25-ig haladva 210 percnél hosszabb idő alatt).
HU 227 356 Β1
Az analitikai HPLC-vel vizsgált, tiszta terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd bepárlás és liofilizálás után 0,27 g HOOCCH2CH2-D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t kapunk (kitermelés: 27%).
1H-NMR
FAB-MS, m/e 472,4 (MH+)
Elemanalízis C25H37N5O4.1,9HCI-ra: (%) számított: C, 55,50; H, 7,25; N, 12,94; Cl, 12,45 mért: C, 55,26; H, 7,26; N, 13,21; Cl, 12,85
53. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2piperidin.HCI
A) Boc-4-(amino-metil)-piridin előállítása
A 39A) példában leírtakkal lényegében azonos módon 4-(amino-metil)-piridinből 19 g Boc-4-(amino-metil)-piridint állítunk elő (kitermelés: 87%).
1H-NMR
B) 4-BocNHCH2-N-Cbz-piridin előállítása g (48 mmol) 4-BocNHCH2-piridint 280 ml etanolban oldunk, és az oldathoz 10 g 5%-os Rh/C katalizátort adunk. A szuszpenziót 4,1x105 Pa nyomású hidrogénatmoszféra alatt, 60 °C-on egy éjszakán át rázatjuk. A katalizátort kiszűrjük, és az oldatot vákuumban bepárolva 9 g szürke, szilárd anyagot kapunk. Ennek az anyagnak 3,2 g-os részét 75 ml tetrahidrofuránban oldjuk, és az oldathoz 4,2 g (30 mmol) kálium-karbonát 75 ml-nyi vizes oldatát adjuk.
Ezután az oldathoz kevertetés közben 2,3 g (16 mmol) benzil-kloroformátot adunk, majd 15 perc elteltével az oldatot vákuumban eredeti térfogatának körülbelül felére pároljuk be és etil-acetáttal hígítjuk. A szerves fázist elválasztjuk, sós vízzel mossuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen 4,6 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 76%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 349 (M+)
C) 4-NH2CH2-N-Cbz-piperidin.HCI előállítása
A 23A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-BocNHCH2-N-Cbz-piperidinből 3 g 4-NH2CH2-N-Cbz-piperidin.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 84%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 249 (M+)
D) N-(t-Bu-O2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH előállítása g (27 mmol) N-(t-Bu-O2CCH2)-N-Boc-D-PhePro-OH-t 750 ml etanolban oldunk, és az oldathoz 13 g PtO2-ot adunk. A szuszpenziót 4,1 x105 Pa nyomású hidrogénatmoszféra alatt 16 órán át 40 °C-on rázatjuk.
A katalizátort kiszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen 11,7 g fehér habot kapunk (kitermelés: 90%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 483 (M+)
Elemanalízis C25H42N2O7-ra: (%) számított: C, 62,22; H, 8,77; N, 5,80 mért: C, 62,99; H, 8,96; N, 5,48
E)HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-piperidin.HCI előállítása
Az 1G) és 46D) példában leírtakkal lényegében azonos módon, N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH-ból és HCI.4-NH2CH2-N-Cbz-piperidinből 1,1 g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-piperidin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 percnél több idő alatt).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 423 (M+)
Elemanalízis C22H38N4O4.2HCI.1,5H2O-ra: (%) számított: C, 50,57; H, 8,29; N, 10,72 mért: C, 50,31; H, 8,46; N, 10,93
54. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2piperidin.HCI
Az 52. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-amino-etil-piridinből 0,59 g HO2CCH2-D-ChaPro-4-NHCH2CH2-piperidin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 437 (M+)
Elemanalízis C23H40N4O4.2,5HCI.1,5H2O-ra: (%) számított: C, 49,80; H, 8,27; N, 10,10 mért: C, 49,95; H, 8,08; N, 10,34
55. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4NHCH2CH2CH2-piperidin.HCI
A) 4-Hidroxi-propil-N-Cbz-piperidin előállítása
Az 53B) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-hidroxi-propil-piridinből 28 g 4-hidroxi-propilN-Cbz-piperidint állítunk elő (kitermelés: 67%). 1H-NMR
B) 4-(NH2CH2CH2CH2)-N-Cbz-piperidin.HCI előállítása
A 30B), 30C) és 30D) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-hidroxi-propil-N-Cbz-piperidinből 7,3 g 4-(NH2CH2CH2CH2)-N-Cbz-piperidin.HCI-t állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e 276 (M+)
C) HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2piperidin.HCI előállítása
Az 53D) és 53E) példában leírtakkal lényegében azonos módon, N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OHból és 4-amino-propil-N-Cbz-piperidin.HCI-ból 0,39 g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-piperidin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt).
HU 227 356 Β1
IR 1H-NMR
IS-MS, m/e 451,4 (MH+)
Elemanalízis C24H42N4O4.2HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 53,23; H, 8,56; N, 10,35 mért: C, 53,43; H, 8,63; N, 10,19
56. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1amidino-piperidin.HCI (N-(karboxi-metil)-Dciklohexil-alanil-N-{[1 -(amino-imino-metil)hexahidropiridin-4-il]-metil}-L-prolinamidhidroklorid)
A 34D), 23A), 1G) [N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-ChaPro-OH-t alkalmazva], 18E) és 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-BocNHCH2-piperidinből 0,35 g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-amidino-piperidin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=75/25-ig haladva 150 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 465 (MH+)
Elemanalízis C23H40N6O4.2HCI-ra: (%) számított: C, 51,39; H, 7,88; N, 15,63; Cl, 13,19 mért: C, 51,66; H, 7,98; N, 15,80; Cl, 13,48
57. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-1amidino-piperidin.HCI
A 34D), 23A), 1G) [N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-ChaPro-OH-t alkalmazva], 18E) és 1H) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-BocNHCH2CH2-piperidinből 0,34 g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-1amidino-piperidin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=75/25-ig haladva 150 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 479,4 (MH+)
Elemanalízis C24H42N6O4.2HCI-ra: (%) számított: C, 52,26; H, 8,07; N, 15,24; Cl, 12,86 mért: C, 52,56; H, 8,15; N, 15,37; Cl, 13,07
58. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3,4dehidropiperidin.HCI
A) 4-BocNHCH2-N-metil-piridinium-jodid előállítása g (96 mmol) 4-BocNHCH2-piridint 200 ml acetonitrilben oldunk, és az oldathoz keverés mellett 8,9 ml (144 mmol) metil-jodidot adunk. Az oldatot 16 óra elteltével vákuumban bepároljuk, végtermékként 33,8 g sűrű, világossárga olajat kapunk (kitermelés: 96%). FD-MS, m/e 223,1 (M+)
B) 4-BocNHCH2-N-Fmoc-3,4-dehidropiperidin előállítása
7,7 g (34 mmol) 4-BocNHCH2-N-metil-piridiniumjodidot 100 ml 1,2-diklór-etánban oldunk, és az oldathoz keverés mellett 1,5 g (6,8 mmol) 1,8-bisz(dimetilamino)-naftalint, majd 5,3 g (37 mmol) 2-klór-etil-kloroformátot adunk. Az oldatot refluxig melegítjük, 2 óra elteltével szoba-hőmérsékletűre hűtjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, majd a maradékot 20%-os etilacetát/hexán eleggyel gyorsan szilikagéllel töltött oszlopra öntjük. A szerves oldószereket vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 300 ml metanolban oldjuk, majd refluxig melegítjük, és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk. Ezután az oldathoz telített, vizes NaHCO3-ot adunk, és az oldószereket vákuumban eltávolítjuk. A maradékot 200 ml vízben oldjuk, hexánnal kétszer mossuk, szilárd NaCI-dal telítjük, majd etil-acetáttal sokszor extraháljuk. Az egyesített etil-acetátos extraktumokat MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, majd vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen halványsárga olajat kapunk, melyet 75 ml diklór-metánban oldunk. Ehhez az oldathoz keverés közben 2,1 ml (12,2 mmol) d iizopropi l-eti l-ami nt, majd 3,2 g (12,2 mmol) 9-fluorenil-metil-kloroformátot adunk. Az elegyböl 2 óra elteltével az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 250 ml etil-acetátban oldjuk, majd 1 N citromsavval kétszer, sós vízzel egyszer, telített, vizes NaHCO3-tal kétszer, majd végül sós vízzel újra egyszer mossuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, vákuumban bepároljuk, és a maradékot szilikagél oszlopon kromatografáljuk, az elúciót 5%-os etilacetát/hexán összetételű elegytől 50%-os etil-acetát/hexán összetételű eleggyel végezve. A TLC-vel vizsgált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és azokat vákuumban bepárolva 4 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 435 (M+)
C) N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4NHCH2-N-Fmoc-3,4-dehidropiperidin előállítása
A23A) és 1G) [N-t-(BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH-t alkalmazva] példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-BocNHCH2-N-Fmoc-3,4-dehidropiperidinből 2,5 g N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4NHCH2-N-Fmoc-3,4-dehidropiperidint állítunk elő.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 799 (M+)
D) N-t-(BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH23,4-dehidropiperidin előállítása
1,5 g (1,9 mmol) N-t-(BuO2CCH2)-N-Boc-D-ChaPro-4-NHCH2-N-Fmoc-3,4-dehidropiperidint 25 ml morfolinban oldunk, majd az oldatból az oldószert 5 órai kevertetés után vákuumban eltávolítjuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, kétszer mossuk telített, vizes NaHCO3-tal, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot kis mennyiségű kloroformban oldjuk, majd szilikagélen kromatografáljuk, elúciós gradiensként 5%-ostól 10%-os A/B összetételt alkalmazva (A=9:l metanol/tömény NH4OH, B=kloroform). A TLC-vel vizsgált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen 890 mg fehér, szilárd anyagot kapunk.
1H-NMR
FD-MS, m/e 576 (M+)
HU 227 356 Β1
E) HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3,4dehidropiperidin.HCI előállítása
820 mg (1,4 mmol) N-t-(BuO2CCH2)-N-Boc-D-ChaPro-4-NHCH2-3,4-dehidropiperidint és 1 ml anizolt 25 ml dioxánban oldunk, és az oldaton 0 °C-on, 10 percig sósavgázt buborékoltatunk keresztül. Az oldatból 12 órai kevertetés után az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 50 ml vízben oldjuk és dietil-éterrel kétszer mossuk. Ezután a vizes fázist vákuumban körülbelül 20 ml-re pároljuk be, és RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt). Az analitikai RPHPLC-vel vizsgált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és vákuumban részlegesen bepároljuk, melynek eredményeképpen 442 mg fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 68%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 423 (MH+)
Elemanalízis C22H36N4O4.2HCI.1,5H2O-ra: (%) számított: C, 50,57; H, 8,29; N, 10,72 mért: C, 50,31; H, 8,46; N, 10,93
59. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH23,4-dehidropiperidin.HCI
Az 58. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-BocNHCH2CH2-piridinből 73 mg HO2CCH2-DCha-Pro-4-NHCH2CH2-3,4-dehidropiperidin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt).
IR 1H-NMR IS-MS, m/e 435,2 (MH+)
Elemanalízis C23H38N4O4.2,3HCI.3H2O-ra: (%) számított: C, 48,26; H, 8,15; N, 9,79; Cl, 14,24 mért: C, 48,31; H, 7,93; N, 9,66; Cl, 14,56
60. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4NHCH2CH2CH2-3,4-dehidropiperidin.HCI
Az 58. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-BocNHCH2CH2CH2-piridinből 205 mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2CH2-3,4-dehidropiperidin.HCI-t állítunk elő.
IR 1H-NMR
IS-MS, m/e 449,2 (MH+)
Elemanalízis C24H40N4O4.2,3HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 52,37; H, 3,11; N, 10,18 mért: C, 51,64; H, 7,72; N, 10,31; Cl, 14,69
61. példa: (1R,4aR,8aR)-1-Piq-Pro-Agm.3HCI (N-{4-[(amino-imino-metil)-amino]-butil}-1{[(4aR,8aR)-dekahidro-1 (R)-izokinolinil]-karbonil}1 -prol i nam id-tri h i d roklorid)
Ebben a példában az Rf értékeket szilikagél vékonyréteg-kromatográfiával határoztuk meg (Kieselgel 60 F-254), az alábbi összetételű elegyek segítségével (a számok térfogatarányokat jelentenek).
(A) kloroform:metanol:ecetsav 135:15:1 (B) etil-acetát:ecetsav:abszolút etanol 90:10:10 (C) etil-acetát:hexán 70:30 (D) kloroform
A) N-Metoxi-karbonil-fenetil-amin
75,2 ml (0,6 mól) fenetil-amint és 83 ml (0,6 mól) trietil-amint 500 ml tetrahidrofuránban oldunk, és az oldathoz keverés közben, lassan 46,2 ml (0,6 mól) metil-kloroformát 50 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk. Miután a reakciót szobahőmérsékleten további 1 órán át kevertetjük, az elegyhez 2 I dietilétert és 800 ml 1 N sósavat adunk. A szerves fázist vízzel mossuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepárolva 102 g-nyi tiszta címvegyületet kapunk tiszta olaj formájában (kitermelés: 95%).
B) 2-Metoxi-karbonil-DL-1,2,3,4tetrahidroizokinolin-1 -karboxilsav
102 g (0,57 mól) N-metoxi-karbonil-fenetil-amint 300 ml trifluor-ecetsavban oldunk, az oldathoz 63 g (0,68 mól) glioxilsavat adunk, és a keveréket refluxhőmérsékletre melegítjük. A reakciót 4 órai reflux után szobahőmérsékletre hűtjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, majd 800 ml dietil-éter és 100 ml víz elegyét adjuk hozzá. A reakcióelegy pH-ját 5 N NaOH-dal 12-re állítjuk be, majd a vizes fázist elválasztjuk. A vizes fázishoz 500 ml dietil-étert adunk, és az oldatot 5 N sósavval 2,5-es pH-ig savanyítjuk. A szerves fázist elválasztjuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen a tiszta címvegyület 107 g-ját kapjuk olaj formájában (kitermelés: 80%).
FAB-MS 236 (MH+)
C) 2-Metoxi-karbonil-DL-1,2,3,4tetrahidroizokinolin-1 -karboxilsav-t-butilészter
105 g (0,45 mól) 2-metoxi-karbonil-DL-1,2,3,4-tetrahidroizokinolin-1-karboxilsavat 200 ml diklór-metánban oldunk, majd ehhez az oldathoz 0 °C-on, kevertetés mellett 52 ml (0,54 mól) t-butanolt és 92 g (0,45 mól) DCC-t adunk. Az elegyet 2 órán át 0 °C-on, 24 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékhoz 800 ml etil-acetát és 300 ml 1 N NaHCO3 elegyét adjuk. A szerves fázist elválasztjuk, vízzel, 1,5 N citromsavval, majd megint vízzel mossuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepárolva a tiszta címvegyület 106 g-ját kapjuk olaj formájában.
FAB-MS 292 (MH+)
TLCRf(A)0,61
Elemanalízis C16H21NO4-ra:
számított: C, 65,96; H, 7,27; N, 4,81 mért: C, 66,24; H, 7,28; N, 4,73
D) 2-Metoxi-karbonil-(1 RS,4aSR,8aSR)perhidroizokinolin-1 -karboxilsav-t-butilészter
105 g (0,36 mól) 2-metoxi-karbonil-DL-1,2,3,4-tetrahidroizokinolin-1-karboxilsav-t-butil-észtert 800 ml t-butanolban oldunk, és az oldatot nagynyomású készülékben, 50 °C-on, 5,5 MPa nyomású hidrogénatmoszféra alatt, 5%-os Rh/AI2O3 katalizátor fölött
HU 227 356 Β1 órán át redukáljuk. A reakcióelegyet kovaföldrétegen keresztül átszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A kapott olajat megszárítva 96,5 g, tiszta címvegyülethez jutunk (kitermelés: 90%).
FD-MS 298 (MH+)
TLC Rf(C) 0,63
E) 2-Metoxi-karbonil-(1 RS,4aSR,8aSR)perhidroizokinolin-1 -karboxilsav-etilészter
81,2 g (273 mmol) 2-metoxi-karbonil(1 RS,4aSR,8aSR)-perhidroizokinolin-1 -karboxilsav-tbutil-észtert 500 ml etanolban oldunk, és az oldathoz
88,4 ml (273 mmol) 21 %-os, etanolos nátrium-etoxidot adunk, majd az oldatot 24 órán át refluxáltatjuk. A szerves oldószert vákuumban bepároljuk, és a maradékhoz 400 ml etil-acetátot és 100 ml vizet adunk. A szerves fázist elválasztjuk, vízzel kétszer mossuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, majd a szűrletet vákuumban bepárolva a tiszta címvegyület 70 g-ját kapjuk olaj formájában (kitermelés: 95%).
FAB-MS 270 (MH+)
TLC Rf(A) 0,61
F) 2-Metoxi-karbonil-(1 RS,4aSR,8aSR)perhidroizokinolin-1-karboxilsav
Az E) lépés végtermékének 70 g-ját (260 mmol) 250 ml tetrahidrofuránban oldjuk, az oldathoz 156 ml (312 mmol) 2 N NaOH-ot adunk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 30 órán át kevertetjük. A szerves oldószert vákuumban bepároljuk, majd a maradékhoz 400 ml dietil-étert és 100 ml vizet adunk. A vizes fázist elválasztjuk, és 400 ml etil-acetátot adunk hozzá. Az oldat pH-ját 5 N sósavval 2-es értékre állítjuk be. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepárolva tiszta átlátszó olajat kapunk. Az olajat 200 ml hexánból átkristályosítva a tiszta címvegyület 46,4 g-ját kapjuk.
FAB-MS 242 (MH+)
TLC Rf (A) 0,36
Elemanalízis C12H19NO4-ra: (%) számított: C, 59,74; H, 7,94; N, 5,81 mért: C, 59,95; H, 7,88; N, 5,54
NMR-eloszlásokat homonukleáris bontás útján, COSY, HMQC és DEPT kísérletek segítségével kaptunk.
G) 2-Cbz-(1RS,4aRS,8aRS)-perhidroizokinolin-1karboxilsav
Az F) lépés végtermékének 46 g-ját (191 mmol) inért atmoszférában, szobahőmérsékleten vízmentes CH3CN-ban oldjuk, majd az oldathoz 62,4 ml (440 mmol) jód-trimetil-szilán 60 ml CH3CN-dal készített oldatát adjuk. A reakcióelegyet 30 percen keresztül 55 °C-on kevertetjük, majd szobahőmérsékletre hűtjük. A reakciót 100 ml víz, majd 1 g nátrium-metabiszulfit hozzáadásával megállítjuk. Az elegy pH-ját 5 N NaOHdal 10-re emeljük, és pH-ját 5 N NaOH-dal 10-re emeljük, és 23,7 ml (191 mmol) benzil-kloroformátot adunk hozzá cseppenként, miközben az elegy pH-ját 2 N
NaOH-dal 10-es értéken tartjuk. A reakciót szobahőmérsékleten további 30 percig kevertetjük, a szerves oldószert vákuumban bepároljuk, és az elegyhez 200 ml dietil-étert adunk. A reakciót szobahőmérsékleten 2 órán át állni hagyjuk, majd 200 ml etil-acetátot adunk hozzá. A vizes oldatot 5 N sósavval 2,5-es pH-ig savanyítjuk. A szerves fázist elválasztjuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, majd a szűrletet vákuumban bepárolva a tiszta címvegyület 39,5 g-ját kapjuk (kitermelés: 65%).
FAB-MS 318 (MH+)
Elemanalízis Ci8H23NO4-ra: (%) számított: C, 68,12; H, 7,30; N, 4,41 mért: C, 66,37; H, 7,52; N, 4,37
H) 2-Cbz-(1RS,4aRS,8aRS)-perhidroizokinolin-1karbonil-Pro-O-t-Bu
A G) lépés végtermékének 39 g-ját (123 mmol) 200 ml DMF-ben oldjuk, és ehhez az oldathoz 0 °C-on, keverés mellett 21,1 g (123 mmol) prolin-t-butil-észtert, 16,6 g (123 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolt és 25,3 g (123 mmol) DCC-t adunk. A reakcióelegyet 2 órán át 0 °C-on, majd 24 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A keletkezett csapadékot leszűrjük, és a szűrletet vákuumban olajjá pároljuk be. Az olajat 200 ml EtOAc és 100 ml víz elegyében oldjuk. A szerves fázist sorrendben 1 N NaHCO3-tal, vízzel, 1,5 N citromsavval, majd megint vízzel mossuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet bepárolva 52,7 g címvegyületet kapunk, amorf, szilárd diasztereomer keverék formájában (kitermelés: 91%).
FAB-MS 471 (MH+)
I) 2-Cbz-(4aR,8aR)-perhidroizokinolin-1 (R)karbonil-Pro-OH
A H) lépés végtermékének 52,4 g-ját (111 mmol) 20 ml diklór-metánban oldjuk, és az oldathoz keverés mellett 70 ml trifluor-ecetsavat és 5 ml anizolt adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 1 órán át kevertetjük, és vákuumban, melegítés nélkül besűrítjük. A maradékot 400 ml dietil-éterrel és 100 ml vízzel hígítjuk, és az oldat pH-ját 5 N NaOH-dal 10-re állítjuk be. A vizes fázist elválasztjuk, és 300 ml etil-acetátot adunk hozzá. Az oldat pH-ját 5 N sósavval 2,5-re állítjuk be. A szerves fázist elválasztjuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepárolva átlátszó olajhoz jutunk. Az olajat 500 ml dietil-éterben oldjuk, és az oldathoz L-(—)alfa-metil-benzil-amint adunk, majd szobahőmérsékleten 24 órán át állni hagyjuk. Az így kapott szilárd anyagot leszűrjük, dietil-éterrel mossuk és megszárítjuk. A szilárd anyagot etil-acetátban szuszpendáljuk, 1,5 N citromsavval és vízzel mossuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, és a szűrletet bepárolva a címvegyület 20,2 g-ját kapjuk, olaj formájában (kitermelés: 44%).
FAB-MS 415 (MH+) [a]D=3,2° (C=0,5, MeOH)
Elemanalízis C23H30N2O5-ra: (%) számított: C, 66,65; H, 7,30; N, 6,76 mért: C, 66,38; H, 7,36; N, 6,63
HU 227 356 Β1
J) 2-Cbz-(4aR,8aR)-perhidroizokinolin-1 (R)karbonil-Pro-NH-(CH2)4-NH-Boc
Az 1. számú lombikban az I) lépés végtermékének 1,06 g-ját (2,55 mmol) 10 ml DMF-ben oldjuk, -15 °C-ra hűtjük, és 0,28 ml (2,55 mmol) N-metilmorfolint, majd 0,33 ml (2,55 mmol) izobutil-kloroformátot adunk hozzá, majd az elegyet -15 °C-on 2 percig kevertetjük. A 2. számú lombikban 0,48 g (2,55 mmol) N-Boc-1,4-diamino-butánt 10 ml DMF-ben oldunk, 0 °C-ra hűtjük, és az oldathoz 0,28 ml (2,55 mmol) N-metil-morfolint adunk, majd az elegyet 2 percig 0 °C-on kevertetjük. Az 1. és 2. lombik tartalmát összeöntjük, és a reakcióelegyet-15 °C-on 4 órán át, majd szobahőmérsékleten további 24 órán át kevertetjük. Az elegyhez 1 ml 1 N NaHCO3-ot adunk, és az oldószert vákuumban eltávolítva olajszerű anyagot kapunk. A maradékot 200 ml EtOAc-ban oldjuk, és sorrendben 1,5 N citromsavval, vízzel, 100 ml 1 N NaHCO3-tal és újra vízzel mossuk. A szerves oldatot MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, és vákuumban szárazra párolva a nyers címvegyület 1,47 g-ját kapjuk szilárd anyag formájában (kitermelés: 99%).
FAB-MS 585 (MH+)
TLC Rf(A) 0,70
K) (4aR,8aR)-Perhidroizokinolin-1 (R)-karbonil-ProAgm.3HCI
A J) lépés végtermékének 1,4 g-ját (2,4 mmol) 2 ml diklór-metánban oldjuk, majd 25 ml trifluor-ecetsavat és 2,5 ml anizolt adunk hozzá. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 30 percig kevertetjük, és vákuumban, melegítés nélkül besűrítjük. A reakciót 100 ml dietiléterrel hígítjuk, és a felső fázist dekantáljuk. A kapott olajat dietil-éterrel kétszer eldörzsöljük és megszárítjuk. A szárított olajat 20 ml tetrahidrofuránban oldjuk, majd az oldathoz 0,66 ml (4,8 mmol) trietil-amint és 0,859 g (2,4 mmol) bisz-Cbz-S-metil-izotiokarbamátot adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 48 órán át kevertetjük. A szerves oldószert vákuumban bepároljuk, majd a maradékot EtOAc-ban oldjuk, és sorrendben 100 ml 1 N NaHCO3-tal és vízzel mossuk. A szerves oldatot MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, és vákuumban szárazra párolva 1,5 g nyers, szilárd anyagot kapunk (kitermelés: 79%).
TLC Rf(D) 0,33
Ezt a nyers, szilárd anyagot 50 ml etanol, 10 ml víz és 5,8 ml (5,8 mmol) 1 N sósav elegyében oldjuk, és
2,5 g 5%-os Pd/C katalizátor jelenlétében környezeti hőmérsékleten és nyomáson hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, és a szűrletet vákuumban olajjá pároljuk be. Az olajat 10 ml trifluor-ecetsavban oldjuk, és ehhez a keverékhez 1 ml tioanizolt és 1 ml trifluormetánszulfonsavat adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 30 percen át kevertetjük, és 100 ml dietilétert adunk hozzá. A felső fázist dekantáljuk, a kapott olajat dietil-éterrel kétszer elfolyósítjuk, majd vákuumban bepárolva 1,3 g nyers, szilárd termékhez jutunk. Ezt a szilárd anyagot 0,05%-os sósavban oldjuk, és egy 5x25 cm-es Vydac C18 gyantát tartalmazó oszlopba vezetjük be. A peptid oszlopból való elúciójához növekvő CH3CN koncentrációgradienst alkalmazunk (2-25%). Analitikai RPHPLC vizsgálatok alapján összegyűjtjük a megfelelő frakciókat, és azokat liofilizálva a tiszta címvegyület 0,139 g-ját kapjuk (kitermelés: 15%).
FAB-MS 393 (MH+)
Elemanalízis C20H36N6O2.5HCI.3H2O-ra: (%) számított: C, 38,28 mért: C, 38,34
62. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4NHCH2C6H4NH2.HCI
Az 1G) [N-t-(BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH-t alkalmazva] és 23D) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-nitro-benzil-amin-hidrokloridból 0,17 g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H4NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 431,3 (MH+)
Elemanalízis C23H34N4O4.2,2HCI.1,5H2O-ra: (%) számított: C, 51,37; H, 7,35; N, 10,42; Cl, 14,50 mért: C, 50,87; H, 6,72; N, 10,41; Cl, 14,18
63. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4NHCH2CH2C6H4NH2.HCI
A 62. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-nitro-fenetil-amin-hidrokloridból 0,19 g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2C6H4NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 445,3 (MH+)
Elemanalízis C24H36N4O4.2,2HCI.0,5H2O-ra: (%) számított: C, 54,00; H, 7,40; N, 10,50; Cl, 14,61 mért: C, 53,65; H, 7,59; N, 10,24; Cl, 14,33
64. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-FC5H3NH2.HCI
A) 4-Boc2NCH2-3-F-C6H3NO2 előállítása g (32 mmol) 2-fluor-4-nitro-toluolt 160 ml szén-tetrakloridban oldunk, és az oldathoz keverés mellett 5,7 g (32 mmol) N-bróm-szukcinimidet, majd 0,78 g (3,2 mmol) benzoil-peroxidot adunk, és az oldatot refluxig melegítjük. Tizenkét óra elteltével a fűtést megszakítjuk, és a keveréket szén-tetrakloriddal hígítjuk, majd vízzel mossuk. A szerves fázist 300 ml etil-acetáttal hígítjuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot 50 ml tetrahidrofuránban oldjuk, majd 1,3 g NaH (32 mmol, 60%-os, olajos diszperzió) és 6,9 g (32 mmol) di-t-butil-imino-dikarboxilát 100 ml tetrahidrofuránnal készített oldatához öntjük. Egy éjszakán át tartó kevertetés után az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk, hexán - 20%-os etil-acetát/hexán elúciós gradienst alkalmazva. A TLC-vel kimutatott, terméket tartalmazó frakciókat egyesítve és vákuumban bepárolva 3,9 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 33%).
HU 227 356 Β1
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 370 (M+)
Elemanalízis C17H23N2O6-ra: (%) számított: C, 55,13; H, 6,26; N, 7,56 mért: C, 55,27; H, 6,23; N, 7,44
B) HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-FC6H3NH2.HCI előállítása
A 23A), 1G) [N-t-(BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH-t alkalmazva], 23D) és 58E) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 0,44 g HO2CCH2-D-ChaPro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2.HCI-t állítunk elő. A végterméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 449,3 (MH+)
Elemanalízis C23H33N4O4F.!3HCI-ra: (%) számított: C, 55,70; H, 6,97; N, 11,30; Cl, 9,29 mért: C, 55,38; H, 6,97; N, 11,05; Cl, 9,31
65. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-imidinotiofén.HCI (N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N{[5-(amino-imino-metil)-tiofén-2-il]-metil}-Lprolinamid-hidroklorid)
A) 2-Ciano-5-formil-tiofén előállítása
Egy lánggal szárított, háromnyakú, 1 l-es, kerek aljú lombikba nitrogénatmoszféra alatt 9 ml (66 mmol) diizopropil-amint és 150 ml tetrahidrofuránt adunk. A lombik belső hőmérsékletét szárazjég és aceton keverékének segítségével -78 °C-ra állítjuk be. Ehhez az oldathoz keverés mellett 41,3 ml (66,1 mmol, 1,6 M hexános oldat) n-butil-lítiumot adunk fecskendőn keresztül, és az elegyet 5 percen át kevertetjük. Az oldathoz 6,55 g (60 mmol) 2-tiofén-karbonitril 30 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk 10 perc alatt. Az így kapott világospiros oldatot -78 °C-on 45 percig kevertetjük, majd ekkor fecskendőből 23,3 ml (300 mmol) dimetilformamidot adunk hozzá. Az elegyet -78 °C-on további 2 órán át kevertetjük, majd körülbelül 10 g szilárd citromsavat, és ezt követően 60 ml vizet adunk hozzá. Az illékony oldószereket vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot 200 ml dietil-éterrel és 200 ml sós vízzel osztjuk meg. A fázisokat elválasztjuk, és a vizes fázist dietiléterrel egyszer mossuk. Az egyesített szerves fázisokat egyszer mossuk sós vízzel, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, és vákuumban bepárolva sárga, szilárd anyagot kapunk, melyet szilikagél kromatográfiával tisztítunk gradiensként hexán - 50% etil-acetát/hexán összetételt alkalmazva. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, és vákuumban bepárolva 6,9 g 2-ciano5-formil-tiofénhez jutunk (kitermelés: 84%).
1H-NMR
B) 2-Ciano-5-(hidroxi-metil)-tiofén előállítása
6,9 g (50 mmol) 2-ciano-5-formil-tiofént 100 ml etanolban oldunk, és az oldathoz részletekben 1,9 g (50 mmol) nátrium-bór-hidridet adunk. Ötpercnyi kevertetés után az oldószert vákuumban bepároljuk, és a maradékot etil-acetáttal és sós vízzel osztjuk meg. A fázisokat elválasztjuk, és a szerves fázist 1 M citromsavval és sós vízzel egyszer-egyszer mosva, MgSO4tal szárítva, szűrve és bepárolva 6,1 g 2-ciano-5(hidroxi-metil)-tiofént kapunk (kitermelés: 88%). 1H-NMR
FD-MS, m/e 140 (M+)
Elemanalízis C6H5NOS-ra: (%) számított: C, 51,78; H, 3,62; N, 10,06 mért: C, 51,54; H, 3,62; N, 9,86
C) 2-Ciano-5-(bróm-metil)-tiofén előállítása g (43 mmol) 2-ciano-5-(hidroxi-metil)-tiofént 50 ml tetrahidrofuránban oldunk, és az oldathoz 15,7 g (47 mmol) trifenil-foszfint és 12,3 g (47 mmol) szén-tetrabromidot adunk. Az elegyet egy éjszakán át szobahőmérsékleten nitrogénatmoszféra alatt kevertetjük, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot kloroformban oldjuk, szilikagélen adszorbeáljuk és szilikagél oszlopra töltjük. A termék elúcióját etilacetát—hexán gradienssel végeztük. A TLC-vel igazoltan terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, és vákuumban bepárolva 6,5 g 2-ciano-5-(bróm-metil)-tiofénhez jutunk.
1H-NMR
FD-MS, m/e 203 (M+)
Elemanalízis C6H4NSBr-ra: (%) számított: C, 35,66; H, 1,99; N, 6,93 mért: C, 35,71; H, 2,03; N, 6,95
D) 2-Ciano-5-(amino-metil)-tiofén.HCI előállítása g (30 mmol) 2-ciano-5-(bróm-metil)-tiofén 50 ml tetrahidrofuránnal készített, 0 °C-os oldatához nitrogénatmoszféra alatt részletekben 1,3 g NaH-et (33 mmol 60%-os olajos diszperzió) adunk. A szuszpenzióhoz kevertetés mellett 7,1 g (33 mmol) di-t-butilimino-dikarboxilát 50 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk 30 perc alatt. Az elegyhez 3 órai kevertetés után 100 ml telített, vizes ammónium-kloridot adunk. Az illékony oldószereket vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot etil-acetáttal és vízzel osztjuk meg. A fázisokat elválasztjuk, és a szerves fázist sós vízzel kétszer mossuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk, így 10,5 g 2-ciano-5-Boc2NCH2-tiofént kapunk, mely állás közben kristályosodik ki (kitermelés: 100%). Az így kapott szilárd anyagot 200 ml EtOAcban oldjuk, és jégfürdő segítségével 0 °C-ra hűtjük. Az oldaton 10 percig vízmentes sósavgázt buborékoltatunk keresztül, és az elegyet kevertetés mellett 2 órán át hagyjuk szoba-hőmérsékletűre melegedni. Az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, és a kapott szilárd anyagot dietil-éterben oldjuk, majd szűréssel elválasztjuk. A fehér, szilárd anyagot egy éjszakán át vákuumban szárítjuk, melynek eredményeképpen 5,2 g 2-ciano-5-(amino-metil)-tiofén.HCI-t kapunk.
1H-NMR
FD-MS, m/e 139 (M+)
Elemanalízis C6N7N2SCI-ra: (%) számított: C, 41,26; H,4,04; N, 16,04 mért: C, 41,19; H, 4,12; N, 15,82
HU 227 356 Β1
E) N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2ciano-tiofén előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 2-ciano-5-(amino-metil)-tiofén.HCI-ból 4,6 g N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-cianotiofént állítunk elő (kitermelés: 93%).
ÍR 1H-NMR
FD-MS, m/e 602 (M+)
F) N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2C(NH)NHBoc-tiofén előállítása
1,5 g (2,5 mmol) N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-ChaPro-4-NHCH2-2-ciano-tioféntés4,5 ml trietil-amint 45 ml piridinben oldunk, és az oldaton 5 percig hidrogén-szulfid-gázt buborékoltatunk keresztül, majd a reakcióedényt lezárjuk, és egy éjszakán át állni hagyjuk. Következő reggel az oldaton öt percig nitrogéngázt buborékoltatunk át, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, vízzel, majd sós vízzel egyszeregyszer mossuk, MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot toluolban oldjuk és vákuumban kétszer bepároljuk. A maradékot 100 ml acetonban oldjuk, és az oldathoz 5 ml metil-jodidot adunk. Az oldatból egyéjszakás, szobahőmérsékleten történő kevertetés után az oldószereket vákuumban eltávolítjuk. A kapott aranyszínű habot 20 ml metanolban oldjuk, az oldathoz 0,39 g (5 mmol) NH4OAc-t adunk, és az elegyet refluxig melegítjük. Az oldatból egy óra elteltével az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot 10 ml tetrahidrofuránban oldjuk. Az oldathoz keverés közben 1,73 g (12,5 mmol) K2CO3 10 ml vízzel készített oldatát, majd ezt követően 2,2 g (10 mmol) di-t-butil-dikarbonátot adunk. A szuszpenziót 1 órás kevertetés után 400 ml etil-acetáttal hígítjuk, és először vízzel, majd sós vízzel mossuk. A szerves fázist vákuumban bepároljuk és szilikagélen kromatografáljuk gradiensként 10-75%-os etil-acetát/hexán összetételt használva. A TLC alapján elbírált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítve és vákuumban bepárolva 1,1 g fehér habot kapunk (kitermelés: 61%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 720 (M+)
Elemanalízis CseHszNsOgS-ra: (%) számított: C, 60,06; H, 7,98; N, 9,73 mért: C, 59,76; H, 8,07; N, 9,52
G) HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-amidinotiofén.HCI
Az 58E) példában leírtakkal lényegében azonos módon 500 mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-amidino-tiofén.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 464,2 (MH+)
Elemanalízis C22H33N5O4S.2HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 47,65; H, 6,73; N, 12,63 mért: C, 47,53; H, 6,57; N, 12,59
66. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5amidino-piridin.HCI (N-(karboxi-metil)-D-ciklohexilalanil-N-{[5-(amino-imino-metil)-piridin-2-il]-metil}-Lprolinamid-hidroklorid)
A) N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5ciano-piridin előállítása
A 64A), 23A) és 1G) [N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-DCha-Pro-OH-t alkalmazva] példában leírtakkal lényegében azonos módon, 2-metil-5-ciano-piridinből 4,4 g N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-cianopiridint állítunk elő.
ÍR 1H-NMR
FD-MS, m/e 597 (M+)
B) HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-amidinopiridin.HCI előállítása
A 65F) és 65G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-2NHCH2-5-ciano-piridinből 130 mg HO2CCH2-D-ChaPro-2-NHCH2-5-amidino-piridin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, Α/Β-70/30-ig haladva 120 perc alatt).
1H-NMR
FAB-MS, m/e 459,3 (MH+)
HRMS-FAB, m/e C23H35N6O4-ra:
számított: 459,2720 mért: 459,2707
67. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5amidino-piperidin.HCI
A 23A), 23B) és 1B) példában leírtakkal lényegében azonos módon 1,2 g (2 mmol) N-(t-BuO2CCH2)-NBoc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-ciano-piridint készítünk. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt). Az analitikai HPLC alapján elbírált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítve, vákuumban részlegesen bepárolva és liofilizálva 93 mg halványzöld, szilárd anyagot kapunk.
IR 1H-NMR
IS-MS, m/e 465,5 (MH+)
HRMS-FAB, m/e C23H41N6O4-ra:
számított: 465,3189 mért: 465,3191
68. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5amidino-5,6-dehidropiperidin.HCI (N-(karboximetil)-D-ciklohexil-alanil-N-{[5-(amino-imino-metil)1,2,3,4-tetrahidropiridin-2-il]-metil}-L-prolinamidhidroklorid)
A 23A), 23B) és 1B) példában leírtakkal lényegében azonos módon 1,2 g (2 mmol) N-(t-BuO2CCH2)-NBoc-D-Cha-Pro-2-NHCH2-5-ciano-piridint állítunk elő.
A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer
A/B=98/2, A/B=70/300-ig haladva 120 perc alatt).
IR 1H-NMR
IS-MS, m/e 463,3 (MH+)
HU 227 356 Β1
Elemanalízis C23H38NgO4.2,9HCI.2H2O-ra: (%) számított: C, 45,71; H, 7,49; N, 13,91; Cl, 17,01 mért: C, 45,51; H, 6,83; N, 13,66; Cl, 16,83
69. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6amidino-piridazin.3HCI (N-(karboxi-metil)-Dciklohexil-alanil-N-{[6-(amino-iminometil)-piridazin-3-il]-metil}-L-prolinamidtrihidroklorid)
A) 3-Metil-6-ciano-piridazin előállítása g (118 mmol) 3-metil-piridazint 200 ml diklórmetánban oldunk, és az oldathoz keverés közben 0,05 g AICI3-ot, majd ezt követően 21 g (211 mmol) trimetil-szilil-cianidot adunk hozzá. Az elegyhez 20 perc elteltével csepegtetőtölcséren keresztül 38 g (201 mmol) p-toluolszulfonsav-klorid 50 ml diklór-metánnal készített oldatát adjuk, és a kevertetést egy éjszakán át folytatjuk. A következő reggelen az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot 15 percnyi keveréssel etanolban szuszpendáljuk, majd szűrés után fehér, szilárd anyagot kapunk. A kapott anyagot 200 ml tetrahidrofuránban oldjuk, és az oldathoz keverés mellett 16 ml (105 mmol) 1,8-diaza-biciklo[5.4.0.]undec-7-ént adunk. Az elegyből 1 óra múlva az oldószert vákuumban eltávolítjuk, majd a maradékot hexánnal és telített, vizes NH4CI-dal osztjuk meg. A fázisokat elkülönítjük, a vizes fázist szilárd Na2CO3tal lúgosítjuk, majd etil-acetáttal háromszor extraháljuk. Az egyesített etil-acetátos fázisokat MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen 9 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 64%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 119,1 (M+)
B) HO2CCH2-D-Cha-Pro-3-NHCH2-6-amidinopiridazin.HCI előállítása
A 66. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 3-metil-6-ciano-piridazinból 90 mg HO2CCH2-DCha-Pro-3-NHCH2-6-amidino-piridazin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 460,3 (MH+)
Elemanalízis C22H33N7O4.3HCI.2H2O-ra: (%) számított: C, 43,68; H, 6,66; N, 16,21 mért: C, 44,04; H, 6,45; N, 15,57
70. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1amidino-3,4-dehidropiperidin.HCI (N-(karboximetil)-D-ciklohexil-alanil-N-{[1 -(amino-imino-metil)1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-metil}-L-prolinamidhidroklorid)
A) N,N’-Boc2-tiokarbamid előállítása
9,4 g (234 mmol, 60%-os olajos diszperzió) NaH-et 500 ml tetrahidrofuránban szuszpendálunk, és a szuszpenzióhoz 0 °C-on, keverés közben 4 g (52 mmol) tiokarbamidot adunk. A hideg fürdőt 30 perc múlva elvesszük, és a reakcióelegyet további 30 percen át szobahőmérsékleten kevertetjük. A reakcióedényt újra 0 °C-ra hűtjük, és az oldathoz 25 g (115 mmol) di-t-butil-dikarbonát 100 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk csepegtetőtölcséren keresztül. Az elegyet 30 percig 0 °C-on, majd 2 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük, és ezután telített, vizes NaHCO3-ot adunk hozzá. Az oldatot ezt követően vákuumban eredeti térfogatának körülbelül felére pároljuk be, és etil-acetátot adunk hozzá. A szerves fázist telített, vizes NaHCO3-tal mossuk, MgSO4-tal szárítjuk, majd szűrve és bepárolva 11,9 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 83%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 276 (M+)
Elemanalízis C11H20N2O4S-ra: (%) számított: C, 47,81; H, 7,30; N, 10,14 mért: C, 47,69; H, 7,28; N, 10,34
B) N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH21-(N,N’-Boc2-amidino)-3,4-dehidropiperidin előállítása
0,6 g (1 mmol) N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-ChaPro-4-NHCH2-3,4-dehidropiperidint és 0,35 g (3,4 mmol) trietil-amint 10 ml dimetil-formamidban oldunk, és az oldathoz keverés közben 0,28 g (1 mmol) N,N’-Boc2-tiokarbamidot, majd ezt követően 0,28 g (1 mmol) HgCI2-ot adunk. Az oldatból 4 óra elteltével az oldószert eltávolítjuk, a maradékot etil-acetátban oldjuk és sós vízzel kétszer mossuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A terméket szilikagél kromatográfiával tisztítjuk, az elúciót 20-75% etil-acetát/hexán eleggyel végezve. A TLC alapján elbírált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen 800 mg fehér habot kapunk (kitermelés: 94%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 820 (MH+)
Elemanalízis C42H70N6O10-ra: (%) számított: C, 61,59; H, 8,61; N, 10,26 mért: C, 61,81; H, 8,79; N, 10,45
C) HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-amidino-3,4dehidropiperidin.HCI előállítása
Az 58E) példában leírtakkal lényegében azonos módon, N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH21-(N,N’-Boc2-amidino)-3,4-dehidropiperidinből 0,22 g HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-1-amidino-3,4-dehidropiperidin.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 55%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 463,3 (MH+)
Elemanalízis C23H38N6O4.2,2HCI.2H2O-ra: (%) számított: C, 47,73; H, 7,70; N, 14,52; Cl, 13,47 mért: C, 47,79; H, 7,64; N, 14,55; Cl, 13,48
HU 227 356 Β1
71. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-Fbenzamidin.HCI (N-(karboxi-metil)-D-ciklohexilalanil-N-{[4-(amino-imino-metil)-2-fluor-fenil]-metil}L-prolinamid-hidroklorid)
A 66. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 3-F-4-Me-benzonitrilböl 0,27 g HO2CCH2-D-ChaPro-4-NHCH2-3-F-benzamidin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 120 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 476,3 (MH+)
Elemanalízis C24H34N5O4.2HCI.1,5H2O-ra: (%) számított: C, 50,09; H, 6,83; N, 12,17; Cl, 12,32 mért: C, 49,89; H, 6,65; N, 12,17; Cl, 12,42
72. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3,5-F2benzamidin.HCI (N-(karboxi-metil)-D-ciklohexilalanil-N-{[4-(amino-imino-metil)-2,6-difluor-feniljmetil}-L-prolinamid-hidroklorid)
A 65. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 3,5-F2-benzonitrilből 0,28 g HO2CCH2-D-ChaPro-4-NHCH2-3,5-F2-benzamidin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 150 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 494,2 (MH+)
Elemanalízis C24H33N5O4.2HCI.1,5H2O-ra: (%) számított: C, 48,57; H, 6,45; N, 11,80; Cl, 11,95 mért: C, 48,26; H, 6,17; N,11,89; Cl,11,90
73. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2amino-piridin.HCI
A) 4-Metil-2-ftálimido-piridin előállítása g (460 mmol) 4-metil-2-amino-piridint 1 I ecetsavban oldunk, és az oldathoz keverés közben 68 g (460 mmol) ftálsavanhidridet adunk, majd a reakciót refluxig melegítjük. Az elegyhez 12 óra elteltével 43 ml (460 mmol) ecetsavanhidridet adunk, és további 48 órán át reflux alatt kevertetjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a szilárd maradékot toluolban szuszpendáljuk és vákuumban kétszer bepároljuk. A kapott szilárd anyagot erőteljes keverés mellett etilacetátban szuszpendáljuk, majd leszűrjük. Ezt a lépést még egyszer megismételjük, majd az így kapott szilárd anyagot egy éjszakán át vákuumban szárítva 46,6, g fehér, szilárd anyagot kapunk (kitermelés: 42%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 238 (M+)
Elemanalízis C14H10N2O2-ra: (%) számított: C, 70,58; H, 4,23; N, 11,76 mért: C, 70,42; H, 4,29; N, 11,70
B) N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2ftálimido-piridin előállítása
A 64A), 23A) és 1G) [N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-DCha-Pro-OH-t alkalmazva] példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-metil-2-ftálimido-piridinből
2,4 g N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2ftálimido-piridint állítunk elő.
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 717,7 (M+)
C) HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-aminopiridin.HCI előállítása
1,6 g (2,2 mmol) N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-ChaPro-4-NHCH2-2-ftálimido-piridint 25 ml etanolban oldunk, és az oldathoz keverés közben 0,52 ml (10,4 mmol) hidrazin-hidrátot adunk. Az oldatból 1 óra elteltével az oldószereket eltávolítjuk, a maradékot etilacetátban oldjuk és vákuumban kétszer bepároljuk. A maradékot az 58E) példában leírtakkal lényegében azonos módon dolgozzuk fel, melynek eredményeképpen 380 mg fehér, szilárd anyagot kapunk (kitermelés: 37%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 150 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 432,3 (MH+)
Elemanalízis C22H33N5O4-2,1HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 50,23; H, 7,11; N, 13,31 mért: C, 50,05; H, 7,08; N, 13,54
74. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2amino-piridin.HCI
A 73. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 5-metil-2-amino-piridinből 0,88 g HO2CCH2-DCha-Pro-5-NHCH2-2-amino-piridin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 150 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 432,3 (MH+)
Elemanalízis C22H33N5O4.2HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 50,58; H, 7,14; N, 13,40 mért: C, 50,79; H, 7,20; N, 13,58
75. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2amino-piridin.HCI
A) 5-Me-2-Boc2N-piridin előállítása
10,5 g (100 mmol) 5-metil-2-amino-piridint 200 ml diklór-metánban oldunk, és az oldathoz 0 °C-on, keverés mellett 25,8 g (200 mmol) N,N-diizopropil-etilamint, majd ezt követően 55 g (250 mmol) di-t-butildikarbonátot, végül 12,2 g (100 mmol) 4-(N,N-dimetilamino)-piridint adunk. A hideg fürdőt elvesszük, és a kevertetést egy éjszakán át folytatjuk. A keveréket ezután 600 ml etil-acetáttal hígítjuk, telített, vizes NH4CI-dal háromszor, sós vízzel egyszer, telített, vizes NaHCO3-tal kétszer és sós vízzel még egyszer mossuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük, vákuumban bepároljuk és szilikagélen kromatografáljuk, az elúciót 10-75%-os etil-acetát/hexán eleggyel végezve. A TLC alapján elbírált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és vákuumban bepárolva 12,8 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 42%).
HU 227 356 Β1
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 308 (M+)
Elemanalízis C16H24N2O4-ra: (%) számított: C, 62,32; H, 7,84; N, 9,08 mért: C, 62,51; H, 8,11; N, 9,37
B) 5-BrCH2-2-Boc2N-piridin előállítása
A 64A) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 5-Me-2-Boc2N-piridinből 11,6 g, a kiindulási anyaggal szennyezett 5-BrCH2-2-Boc2N-piridint állítunk elő.
1H-NMR
FD-MS, m/e 386,3 (M+)
Elemanalízis C16H23N2O4Br-ra:
számított: C, 49,62; H, 5,99; N, 7,23 mért: C, 49,86; H, 6,00; N, 7,07
C) 5-NCCH2-2-Boc2N-piridin előállítása
9,7 g (25 mmol) enyhén szennyezett 5-BrCH2-2Boc2-N-piridint 150 ml dimetil-formamidban oldunk, és az oldathoz keverés mellett 1,32 g (5 mmol) 18-korona6-ot, és ezt követően 1,95 g (30 mmol) KCN-ot adunk. Az oldatból 6 óra elteltével az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot szilikagélen kromatografáljuk hexán - 40% etil-acetát/hexán elegyet alkalmazva. A TLC alapján elbírált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és vákuumban bepárolva 2,6 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 31%, két lépésben). IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 333,4 (M+)
Elemanalízis C17H23N3O4-ra: (%) számított: C, 61,25; H, 6,95; N, 12,60 mért: C, 61,09; H, 6,92; N, 12,53
D) HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2-aminopiridin.HCI előállítása
2,5 g (7,5 mmol) 5-NCCH2-2-Boc2N-piridint 150 ml metanolban oldunk, és az oldathoz keverés közben 0,97 g (7,5 mmol) COCI2-ot és 0,81 g (45 mmol) vizet adunk hozzá. Az elegyhez 5 perc eltelte után, 15 perc alatt, kis adagokban 2,84 g (75 mmol) NaBH4-ot adunk. További 15 perc eltelte után az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot tömény, vizes NH4OH-ban oldjuk és etil-acetáttal alaposan extraháljuk. Az egyesített etil-acetátos fázisokat MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk.
Ezután a maradékot az 1 A) és 73C) példában leírtakkal lényegében azonos módon feldolgozva 1,2 g HO2CCH2-D-Cha-Pro-5-NHCH2CH2-2-amino-piridin.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 33%). A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=60/40-ig haladva 150 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 446,3 (MH+)
HRMS-FAB, m/e C23H36N5O4-ra:
számított: 446,2767 mért: 446,2769
76. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-2amino-piridin.HCI
A) 4-BocNHCH2CH2-2-CN-piridin előállítása
2,2 g (10 mmol) 4-BocNHCH2CH2-piridint 50 ml acetonban oldunk, és az oldathoz 10 perc alatt csepegtetőtölcséren keresztül 5,2 g (30 mmol) m-klór-perbenzoesav 50 ml acetonnal készített oldatát adjuk. Egyéjszakás kevertetés után az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot 100 ml vízzel és 100 ml dietil-éterrel osztjuk meg. A szerves fázist elválasztjuk és vízzel háromszor extraháljuk. Az egyesített vizes fázisokat ezután szilárd NaCI-dal telítjük és 100 ml diklór-metánnal háromszor extraháljuk. Az egyesített diklór-metános extraktumokat sós vízzel egyszer mossuk, Na2SO4-tal szárítjuk, szűrjük, vákuumban kis térfogatra bepároljuk, majd dietil-étert adunk hozzá. A kapott, 2 g-nyi fehér csapadékot leszűrjük és vákuumban szárítjuk.
Az így elválasztott szilárd anyag felét (4,2 mmol) 10 ml diklór-metánban oldjuk, és az oldathoz keverés közben 0,84 ml (6,3 mmol) trimetil-szilil-cianidot, majd ezt követően 0,58 ml (6,3 mmol) N,N-dimetilkarbamoil-kloridot adunk. Egyéjszakás kevertetés után az oldathoz lassan 1 ml 1 M vizes KHCO3-ot adunk, és a keveréket etil-acetáttal és vízzel osztjuk meg. A szerves fázist sós vízzel kétszer mossuk, MgSO4-tal szárítjuk, majd szűrve és vákuumban bepárolva 0,6 g sárga olajat kapunk, mely állás közben kikristályosodik (kitermelés: 58%).
IR 1H-NMR
FD-MS, m/e 247 (M+)
Elemanalízis C13H17N3O2-ra: (%) számított: C, 63,31; H, 7,02; N, 16,99 mért: C, 63,31; H, 7,02; N, 16,71
B) 4-BocNHCH2CH2-2-CbzNH-piridin előállítása
0,5 g (2 mmol) 4-BocNHCH2CH2-2-CN-piridint 2,4 ml metanolban oldunk, és az oldathoz keverés közben 1,6 ml (8 mmol) 5 N NaOH-ot adunk, majd az elegyet refluxig melegítjük. Az oldatot 24 óra elteltével szobahőmérsékletre hűtjük, és a kevertetést további 48 órán át folytatjuk. A pH-t 1 N sósavval 7-re állítjuk be, és az oldatból az oldószereket vákuumban eltávolítjuk.
A maradékot 50 ml toluolban szuszpendáljuk és refluxig melegítjük. Az oldathoz sorrendben 0,36 ml (2,6 mmol) trietil-amint, 0,27 ml (2,6 mmol) benzil-alkoholt és 0,72 g (0,26 mmol) difenil-foszforil-azidot adunk. Az elegyet egy éjszakán át reflux alatt kevertetjük, majd az oldatot hagyjuk lehűlni, 200 ml etil-acetáttal hígítjuk, majd kétszer telített, vizes NH4CI-dal és kétszer sós vízzel mossuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot szilikagélen kromatografáljuk gradiensként hexán 50%-os etil-acetát/hexán összetételt alkalmazva. A TLC alapján elbírált, terméket tartalmazó frakciókat egyesítve és vákuumban bepárolva 0,37 g fehér, szilárd anyaghoz jutunk (kitermelés: 50%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 371,2 (M+)
HU 227 356 Β1
Elemanalízis C2oH25N304-ra: (%) számított: C, 64,67; H, 6,78; N, 11,31 mért: C, 64,90; H, 7,07; N, 11,06
C) HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH2-2-aminopiridin.HCI előállítása
A 23A), 1G) [N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-ProOH-t alkalmazva], 23D) és 58E) példában leírtakkal lényegében azonos módon, 4-BocNHCH2CH2-2-CbzNHpiridinből 48 mg HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2CH22-amino-piridin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLCvel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 150 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 446,4 (MH+)
Elemanalízis C23H35N5O4.1,5HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 53,30; H, 7,49; N, 13,51 mért: C, 53,64; H, 7,27; N, 13,80
77. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-Fanilin.HCI
A 64. példában leírtakkal lényegében azonos módon, 3-F-4-NO2-toluolból 0,55 g HO2CCH2-D-Cha-Pro4-NHCH2-2-F-anilin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=60/40-ig haladva 180 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 449,3 (MH+)
Elemanalízis C23H33N4O4.0,9HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 55,32; H, 7,25; N, 11,22; Cl, 6,39 mért: C, 55,49; H, 6,93; N, 11,15; Cl, 6,23
78. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4NHCH2C6H4CH2NH2.HCI
A 10. példában leírtakkal lényegében azonos módon, N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH-t használva Boc-D-Phe-Pro-OH helyett, 0,53 g HO2CCH2-DCha-Pro-4-NHCH2C6H4CH2NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 150 perc alatt).
ÍR 1H-NMR
FD-MS, m/e 445,4 (MH+)
Elemanalízis C24H36N4O4.2,2HCI.0,5H2O-ra: (%) számított: C, 54,00; H, 7,40; N, 10,50; Cl, 14,61 mért: C, 54,18; H, 7,54; N, 10,31; Cl, 14,86
79. példa: HO2CCH2-D-Cha-Pro-4NHCH2C6H10CH2NH2.HCI
A 12. példában leírtakkal lényegében azonos módon, N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH-t használva Boc-D-Phe-Pro-OH helyett, 0,04 g HO2CCH2D-Cha-Pro-4-NHCH2C6H10CH2NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=70/30-ig haladva 150 perc alatt).
1H-NMR
FD-MS, m/e 451 (MH+)
Elemanalízis C24H42N4O4.2,7HCI.0,5H2O-ra: (%) számított: C, 51,65; H, 8,25; N, 10,04 mért: C, 51,47; H, 7,87; N, 9,97
80. példa: EtSO2-D-Cha-Pro-4NHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI (N-(etil-szulfonil)-Dciklohexil-alanil-N-{[4-(amino-imino-metil)-fenil]metil}-L-prolinamid-hidroklorid)
A 18. példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Cha-Pro-OH-t alkalmazva Cbz-D-1-PiqPro-OH helyett, 3,6 g EtSO2-D-Cha-Pro-4NHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=90/10, A/B=50/50-ig haladva 180 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 492,3 (MH+)
Elemanalízis C24H37N5O4S.HCI-ra: (%) számított: C, 54,58; H, 7,25; N, 13,26 mért: C, 54,31; H, 7,31; N, 13,37
81. példa: EtSO2-D-Cha-Pro-4NHCH2C6H4CH2NH2.HCI
A 10E) példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Cha-Pro-OH-t alkalmazva Boc-D-PhePro-OH helyett, EtSO2-D-Cha-Pro-4NHCH2C6H4CH2NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=90/10, A/B=50/50-ig haladva 180 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 479,4 (MH+)
Elemanalízis C24H38N4O4S.HCI-ra: (%) számított: C, 54,07; H, 7,75; N, 10,51; Cl, 6,65 mért: C, 54,13; H, 7,44; N, 10,51; Cl, 6,78
82. példa: EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-FC6H3NH2.HCI
A 64. példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Cha-Pro-OH-t alkalmazva N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH helyett, 0,53 g EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-3-F-C6H3NH2.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=90/10, A/B=50/50-ig haladva 180 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 483,3 (MH+)
Elemanalízis C23H35N4O4SF.1,1HCI.0,5H2O-ra: (%) számított: C, 51,95; H, 7,03; N, 10,54; Cl, 7,33 mért: C, 52,09; H, 6,94; N, 10,39; Cl, 7,24
83. példa: EtSO2-D-Cha-Pro-4-NHCH2-2-aminopiridin.HCI
A 73. példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Cha-Pro-OH-t alkalmazva N-(t-BuO2CCH2)-NBoc-D-Cha-Pro-OH helyett, 0,22 g EtSO2-D-Cha-Pro-4NHCH2-2-amino-piridin.HCI-t állítunk elő. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=90/10, A/B=50/50-ig haladva 180 perc alatt).
HU 227 356 Β1
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 466,4 (MH+)
Elemanalízis C27H35N5O4S.1,1HCI-ra: (%) számított: C, 52,25; H, 7,19; N, 13,85; Cl, 7,71 mért: C, 52,49; H, 6,96; N, 13,96; Cl, 7,76
84. példa: EtSO2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-aminopiridin.HCI
A 73. példában leírtakkal lényegében azonos módon, EtSO2-D-Cha-Pro-OH-t alkalmazva N-(t-BuO2CCH2)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH helyett, 0,24 g EtSO2-D-Cha-Pro-5-NHCH2-2-amino-piridin.HCI-t állítunk elő, 5-metil-2-amino-piridinből kiindulva. A terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=90/10, A/B=50/50-ig haladva 180 perc alatt).
IR 1H-NMR
FAB-MS, m/e 466,4 (MH+)
Elemanalízis C22H35N5O4S.1,15HCI-ra: (%) számított: C, 52,06; H, 7,18; N, 13,80; Cl, 8,03 mért: C, 52,38; H, 6,97; N, 14,20; Cl, 8,46
85. példa: HOOCCH2CH2CH2-D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI (N-(3-karboxi-propil)D-ciklohexil-alanil-N-{[4-(amino-imino-metil)-fenil]metil}-L-prolinamid-hidroklorid)
A) Cbz-MeOOCH=CHCH2-D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
2,5 g (4,1 mmol) D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-t 50 ml dimetilformamidban oldunk, és az oldathoz 2,2 ml (12,2 mmol) N,N-diizopropil-etil-amint, majd 0,95 g (4,5 mmol) metil-3-bróm-krotonátot adunk. Az oldatot 48 órán át kevertetjük, és 0,7 ml (5 mmol) Cbz-CI-ot, majd további 0,85 ml (5 mmol) diizopropil-etil-amint adunk hozzá. További 16 órai kevertetés után az illő anyagokat vákuumban eltávolítjuk. A maradékot 100 ml etil-acetáttal és 100 ml telített, vizes ammónium-kloriddal osztjuk meg. A fázisokat elválasztjuk, majd a szerves fázist 50 ml telített, vizes ammóniumkloriddal egyszer, 50 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal kétszer és 50 ml sós vízzel kétszer mossuk. A szerves fázist MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. A nyers maradékot gyors szilikagél kromatográfiával tisztítjuk (etil-acetát/hexán gradienssel), melynek eredményeképpen 660 mg fehér habot kapunk (kitermelés: 22%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 766 (M+)
Elemanalízis C43H51N5O8-ra: (%) számított: C, 67,43; H, 6,71; N, 9,14 mért: C, 67,22; H, 6,57; N, 8,98
B) HOOCCH2CH2CH2-D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
0,5 g (0,65 mmol) Cbz-MeOOCH=CHCH2-D-ChaPro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t 5 ml etanolban oldunk, és az oldathoz 0,65 ml 1 N nátrium-hidroxidot adunk. Az elegyet 5 órán át kevertetjük szobahőmérsékleten, majd 3 ml 1 N sósavat, 0,5 g 10%-os Pd/C katalizátort, 15 ml vizet és 25 ml etanolt adunk hozzá. A kevert szuszpenziót vákuumban gázmentesítjük, majd 18 órára hidrogénatmoszféra alá helyezzük. Az elegyhez kovaföldet adunk, és az iszapot leszűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, és a terméket RPHPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=75/25-ig haladva 150 perc alatt). A tiszta terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, és azokat liofilizálva 46 mg-nyi anyaghoz jutunk (kitermelés: 16%). 1H-NMR
FAB-MS, m/e 486,3 (MH+)
Elemanalízis C26H39N5O4.2,1HCI-ra: (%) számított: C, 55,15; H, 7,35; N, 12,19; Cl, 13,24 mért: C, 55,55; H, 7,37; N, 12,19; Cl, 13,58
86. példa: HOOCCH2-D-Chg-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI (N-(karboxi-metil)-Dciklohexil-glicil-N-{[4-(amino-imino-metil)-fenil]metil}-L-prolinamid-hidroklorid)
A) D-Ciklohexil-glicin előállítása
Az 53B) példában leírtakkal lényegében azonos módon, D-fenil-glicinből 16,1 g D-ciklohexil-glicint állítunk elő (kitermelés: 16%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 117 (M+)
Elemanalízis C8H15NO2-ra: (%) számított: C, 61,12; H, 9,62; N, 8,91 mért: C, 61,23; H, 9,56; N, 8,73
B) Boc-D-ciklohexil-glicin előállítása
A 17A) példában leírtakkal lényegében azonos módon (di-t-butil-dikarbonátot alkalmazva) 22 g Boc-D-ciklohexil-glicint állítunk elő (kitermelés: 90%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 258 (M+)
Elemanalízis C13H23NO4-ra: (%) számított: C, 60,68; H, 9,01; N, 5,44 mért: C, 60,91; H, 9,18; N, 5,38
C) Boc-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-Pro-OH-ból és
NH2CH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-ból 20,5 g Boc-Prop-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő (kitermelés: 76%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 481 (M+)
Elemanalízis C26H32N4O5-ra: (%) számított: C, 64,98; H, 6,71; N, 11,66 mért: C, 64,76; H, 6,78; N, 11,62
D) Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI előállítása
A 23A) példában leírtakkal lényegében azonos módon 18,4 g Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-t állítunk elő (kitermelés: 100%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 381 (M+)
HU 227 356 Β1
Elemanalízis C2iH26N4O3Cl2-ra: (%) számított: C, 55,63; H, 5,78; N, 12,36 mért: C, 54,19; H, 6,27; N, 12,15
E) Boc-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon 3,6 g Boc-D-Chg-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő (kitermelés: 97%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 619 (M+)
Elemanalízis C34H45N5O6-ra: (%) számított: C, 65,89; H, 7,32; N, 11,30 mért: C, 67,59; H, 8,07; N, 10,99
F) Cbz-t-BuOOCCH2-D-Chg-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
A 23A) és 85A) (t-butil-bróm-acetátot és benzil-kloroformátot alkalmazva) példában leírtakkal lényegében azonos módon 1,6 g N-Cbz-N-(t-BuOOCCH2)-D-ChgPro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő (kitermelés: 45%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 769 (M+)
Elemanalízis C43H53N5O8-ra: (%) számított: C, 67,26; H, 6,96; N, 9,12 mért: C, 67,50; H, 6,97; N, 9,11
G) HOOCCH2CH2CH2-D-Chg-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
A 23A) (oldószerként dioxánt alkalmazva) és 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 411 mg HOOCCH2CH2CH2-D-Chg-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 61%).
1H-NMR
FAB-MS, m/e 444,3 (MH+)
Elemanalízis C23H33N5O4.2,5HCI-ra: (%) számított: C, 51,67; H, 6,69; N, 13,10 mért: C, 51,84; H, 6,50; N, 13,15
87. példa: HOOCCH2-D-hPhe-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI
A 86. példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-hPhe-OH-ból 335 mg HOOCCH2-D-hPhePro-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő. 1H-NMR
FAB-MS, m/e 466,3 (MH+)
Elemanalízis C25H31N5O4.2,1HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 53,61; H, 6,32; N, 12,50; Cl, 13,29 mért: C, 53,58; H, 6,08; N, 12,59; Cl, 13,67
88. példa: HOOCCH2-D-hCha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI (N-(karboxi-metil)-Dhomociklohexil-alanil-N-{[4-(amino-imino-metil)fenil]-metil}-L-prolinamid-hidroklorid)
A) Boc-D-hCha-OH előállítása
Az 53D) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-D-hPhe-OH-ból 5,1 g Boc-D-hCha-OH-t állítunk elő (kitermelés: 100%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 240 (M+)
Elemanalízis C15H27NO4-ra: (%) számított: C, 63,13; H, 9,54; N, 4,91 mért: C, 63,38; H, 9,39; N, 5,12
B) HOOCCH2-D-hCha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
A 86. példában leírtakkal lényegében azonos módon 135 mg HOOCCH2-D-hCha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő.
1H-NMR
FAB-MS, m/e 472,3 (MH+)
Elemanalízis C25H37N5O4.2,2HCI.0,5H2O-ra: (%) számított: C, 53,54; H, 7,22; N, 12,49; Cl, 13,91 mért: C, 53,29; H, 7,01; N, 12,46; Cl, 14,30
89. példa: HOOCCH2-Gly-N-(C6H5CH2CH2)Gly-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI
Az 1G), 1D), 23A), 85A) és 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 365 mg HOOCCH2-GlyNC6H5CH2CH2Gly-p-NHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő.
1H-NMR
FAB-MS, m/e 426,2 (MH+)
Elemanalízis C22H27N5O4.2,2HCI.1,5H2O-ra: (%) számított: C, 49,60; H, 6,09; N, 13,15; Cl, 14,64 mért: C, 49,79; H, 5,71; N, 13,31; Cl, 14,49
90. példa: (C2H5)2CHCO-Glu-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI
A) Boc-(y-OBn)-Glu-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
Az 1G) példában leírtakkal lényegében azonos módon, Boc-(y-OBn)-Glu-OH-ból és Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-ból 2,7 g Βοο-(γOBn)-Glu-Pro-p-NHCH2C6H4C(NH)NHCbz-t állítunk elő (kitermelés: 98%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 700 (M+)
Elemanalízis C38H45N5O8-ra: (%) számított: C, 65,22; H, 6,48; N, 10,01 mért: C, 65,00; H, 6,56; N, 10,06
B) (y-OBn)-Glu-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI előállítása
A 23A) példában leírtakkal lényegében azonos módon 2,38 g (y-OBn)-Glu-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-t állítunk elő (kitermelés: 98%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 600 (M+)
Elemanalízis C33H39N5O6CI2-ra: (%) számított: C, 58,93; H, 5,84; N, 10,41 mért: C, 58,64; H, 6,00; N, 10,63
C) (C2H5)2CHCO-(y-OBn)-Glu-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz előállítása
1,3 g (2 mmol) (y-OBn)-Glu-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NHCbz.2HCI-t 50 ml tetrahidrofurán
HU 227 356 Β1 és 50 ml víz elegyében oldunk, és az elegyhez keverés mellett 1,38 g (10 mmol) K2CO3-ot, majd 0,3 g (2,2 mmol) 2-etil-butiril-kloridot adunk. Az illő anyagokat 10 percnyi kevertetés után vákuumban eltávolítjuk. A kapott maradékot 100 ml etil-acetáttal és 100 ml vízzel osztjuk meg. A rétegeket elkülönítjük, és a szerves fázist telített, vizes ammónium-kloriddal és sós vízzel kétszer-kétszer mossuk, majd MgSO4-tal szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk, melynek eredményeképpen 1,45 g végtermékhez jutunk (kitermelés: 100%).
1H-NMR
FD-MS, m/e 698 (M+)
Elemanalízis C3gH47N5O7-ra: (%) számított: C, 67,13; H, 6,79; N, 10,04 mért: C, 67,11; H, 6,70; N, 9,74
D) (C2H5)2CHCO-Glu-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI előállítása
A 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 425 mg (C2H5)2CHCO-Glu-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 45%). A terméket HPLC-vel tisztítjuk (2. módszer A/B=98/2, A/B=75/25-ig haladva 150 perc alatt). 1H-NMR
FAB-MS, m/e 474,3 (MH+)
Elemanalízis C24H35N5O5.1,5HCI.1,1H2O-ra: (%) számított: C, 51,10; H, 6,91; N, 12,41; Cl, 9,43 mért: C, 51,10; H, 6,81; N, 12,41; Cl, 9,62
91. példa: (C2H5)2CHCO-Met(O2)-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI
A 90. példában leírtakkal lényegében azonos módon 530 mg (C2H5)2CHCO-Met(O2)-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő.
1H-NMR
FAB-MS, m/e 508,2 (MH+)
Elemanalízis C24H37N5O5S.1,1HCI-ra: (%) számított: C, 52,63; H, 7,01; N, 12,79; Cl, 7,12 mért: C, 52,42; H, 7,03; N, 12,80; Cl, 6,99
92. példa: MeSO2CH2CO-D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI(N-(metil-szulfonilacetil)-L-ciklohexil-alanil-N-{[4-(amino-imino-metil)fenil]-metil}-L-prolinamid-hidroklorid)
Az 1G) és 18F) példában leírtakkal lényegében azonos módon 550 mg MeSO2CH2CO-D-Cha-Pro-pNHCH2C6H4C(NH)NH2.HCI-t állítunk elő (kitermelés: 45%).
1H-NMR
FAB-MS, m/e 520,5 (MH+)
Elemanalízis C25H37N5O5S.1,2HCI.H2O-ra: (%) számított: C, 51,64; H, 6,97; N, 12,04; Cl, 7,32 mért: C, 51,58; H, 6,84; N, 12,18; Cl, 7,61
Általános kísérleti eljárások
A tömegspektrumokat a Finnigan MÁT TSQ 700 háromszoros négypólusú elektrospray interfaceszel (FAB-MS) ellátott tömegspektrométerrel és VG Platform 11 elektrospray interface-szel (LC-MS) ellátott tömegspektrométerrel készítettük el. Az 1H-NMR- és 13C-NMR-méréseket BRUKER ACP 300 és Varian UNITY plus 400 és 500 spektrométerrel végeztük el, amely 1H-nál 300,13, 399,96 és 499,82 MHz frekvencián, illetve 13C-nál 75,46, 100,58 és 125,69 MHz frekvencián üzemel.
93. példa
Ch-(R, S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HCI (i) Boc-Aze-OH
13,75 g (63 mmol) di(terc-butil)-dikarbonátot szobahőmérsékleten keverés közben hozzáadunk 5,777 g (57 mmol) L-azetidin-2-karbonsav (H-Aze-OH) és 6,04 g (57 mmol) nátrium-karbonát 50 ml vízben és 100 ml THF-ben készült elegyéhez. 60 óra múlva a THF-et vákuumban eltávolítjuk, és az elegyet vízzel hígítjuk, majd 2 M kálium-hidrogén-szulfáttal savanyítjuk. Metilén-kloriddal való extrakció után magnézium-szulfát felett szárítjuk, és az oldószer elpárologtatása után kapott maradékot metilén-klorid:hexán elegyéből átkristályosítjuk, így 10,87 g (95%) színtelen kristályokat kapunk.
1H-NMR (300 MHz; CDCI3): δ 4,85-4,7 (br s,
1H), 4,0-3,75 (m, 2H), 2,65-2,35 (m, 2H), 1,4 (s,
9H).
(ii) Boc-Aze-Pab(Z)
13,5 g (70 mmol) EDC-t adunk szobahőmérsékleten 10,87 g (70 mmol) (i) lépésben kapott Boc-Aze-OH, 18,31 g (57 mmol) H-Pab(Z)xHCI (készült a WO 94/29336 számú nemzetközi szabadalmi bejelentés szerint) és 9,9 g (81 mmol) DMAP 270 ml acetonitrilben készült elegyéhez. 16 óra múlva az oldószert vákuumban eltávolítjuk és etil-acetáttal helyettesítjük. Az elegyet vízzel és citromsav vizes oldatával mossuk. A szerves réteget magnézium-szulfát felett szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékból 17,83 g Boc-Aze-Pab(Z)-t kapunk metilén-klorid, toluol, diizopropil-éter és petroléter elegyéből való átkristályosítás után.
1H-NMR (300 MHz; CDCI3): δ 7,85-7,75 (d, 1H),
7.45- 7,2 (m, 7H), 5,2 (s, 2H), 4,7 (t, 1H), 4,6^1,4 (m, 2H), 3,95-3,8 („q”, 1H), 3,8-3,7 (q, 1H), 2,5-2,3 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).
(iii) H-Aze-Pab(Z)
2,44 g (5,2 mmol) (ii) lépés szerint kapott Boc-AzePab(Z)-t feloldunk 10 ml trifluor-ecetsav és 10 ml metilén-klorid elegyében. 30 perc múlva az oldószert és a trifluor-ecetsavat vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot metilén-kloridban oldjuk. A szerves fázist 10%-os nátrium-karbonát-oldattal mossuk és kálium-karbonáttal szárítjuk. Az oldószer vákuumban történő eltávolítása után kapott maradékot metilén-kloriddal átkristályosítjuk. így 1,095 g (57%) H-Aze-Pab(Z)-t kapunk színtelen kristályok alakjában.
1H-NMR (300 MHz; CD3OD): δ 76,85-7,75 (d, 2H),
7.45- 7,25 (m, 7H), 5,2 (s, 2H), 4,5 (s, 2H), 4,3 (d
1H), 3,65 (q, 1H), 3,4-3,3 (m, 1H), 2,7-2,5 (m, 1H),
2,4-2,2 (m, 1H).
HU 227 356 Β1 (iv) Ch-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
Kelly és LaCour [Synth. Comm. 22, 859 (1992)] módszere szerint járunk el a következőképpen; 0,30 g (1,9 mmol) (R,S)-hexahidromandulasav, katalitikus mennyiségű DMAP és 0,31 g (3,9 mmol) piridin 5 ml metilén-kloridban készült elegyéhez 0,42 g (3,9 mmol) TMSCI-t adunk cseppenként. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 4 órát keverjük. A reakciót 0 °C-ra hűtjük, és katalitikus mennyiségű DMF-et (3 csepp egy 2 ml-es fecskendőből) adunk hozzá, 2,25 g (2,0 mmol) oxalil-klorid hozzáadását követően. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük 0 °C-on, hozzáadjuk 0,67 g (18 mmol) (iii) lépésben kapott H-Aze-Pab(Z) és 0,50 g (6,3 mmol) piridin elegyét, és a reakciót hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, majd éjszakán át keverjük. 6 ml metanolban oldott 10%-os citromsavoldatot adunk hozzá. 30 perc múlva választótölcsérbe öntjük és 30 ml etil-acetáttal hígítjuk, majd a vizes fázist etil-acetáttal extraháljuk. A vegyes szerves réteget telített nátriumhidrogén-karbonát-oldattal majd sóoldattal mossuk, majd Na2SO4-tal szárítjuk. Bepárlás és eluensként metilén-klorid:metanol 99:1-92:8 arányú elegyével szilikagélen végzett kromatografálás után 60 mg (6%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (300 MHz; CDCI3): δ 1,0-1,9 (m, 11H),
2,4-2,7 (m, 2H), 3,80 (d, 1H), 4,05-4,25 (m, 1H),
4,3-4,5 (m, 2H), 4,85-5,0 (m, 1H), 5,18 (s, 2H),
7,1-7,5 (m, 7H), 7,65-7,8 (m, 2H), 7,86 (bt, 1H, kevés diasztereomer és/vagy rotamer), 8,33 (bt, 1H, főleg diasztereomer és/vagy rotamer). 13C-NMR (75 MHz, CDCI3) amidin és karbonil-szén: δ 174,8, 170,6, 168,0 és 164,5.
(v) Ch-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HCI mg (0,12 mmol), (iv) lépésben kapott Ch-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)-t feloldunk 5 ml etanolban, és 5% Pd/C-t és 0,1 ml cc. HCI-t adunk hozzá. Az elegyet atmoszferikus nyomáson 2 órán át hidrogénezzük. Szűrés és bepárlás után a terméket preparatív RPLC segítségével tisztítjuk (0,005 M NH4OAc, 0,005 M HOAc) és CH3CN 4:1 arányú elegyét használva eluensként. Fagyasztva szárítás után HCI-t (aq) adunk hozzá, és az oldatot fagyasztva szárítjuk. A cím szerinti termék hozama 15 mg (31%).
1H-NMR (300 MHz; D2O); a spektrum a diasztereomerek és a rotamerek miatt komplikált: δ 0,7-2,0 (m, 1H), 2,25-2,4 (m, 1H), 2,65-2,9 (m, 1H), 3,79 (d, 1H, minor), 4,03 (d, 1H, major), 4,05-4,15 (m, 2H, minor), 4,35-4,45 (m (bt)), 2H, major), 4,5-4,6 (m, 2H), 5,20 (m, 1H, minor, a major jelet elfedi a HÓD jel), 7,5-7,65 (m, 2H), 7,75-7,85 (m, 2H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3), amidin és karbonil-szén (diasztereomerek és/vagy rotamerek): δ 176,3, 175,4, 173,7, 173,3, 167,2 és 167,0.
94. példa (Et)2C(OH)-C(O)-Aze-Pab*HCI (i) H-Aze-Pab(Z)*2HCI
Az alcím szerinti vegyületet Boc-Aze-Pab(Z) és gáz alakú HCI-lel telített EtOAc reakciójával [lásd 93(ii) példát] állítjuk elő. A reakcióelegyet fél óra múlva bepároljuk, és így H-Aze-Pab(Z)*2HCI keletkezik kvantitatív hozammal.
(ii) (Et)2C(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
0,13 g (0,80 mmol) dietil-glikolsav, 0,39 g (0,88 mmol), az (i) lépésben kapott H-Aze-Pab(Z)x2HCI és 0,28 g (0,88 mmol) TBTU 15 ml DMF-ben oldott elegyét jégfürdőn hűtjük. 0,41 g (3,2 mmol) DIPEA-t adunk hozzá, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten éjszakán át keverjük. A keletkező elegyet 500 ml vízbe öntjük és etil-acetáttal háromszor extraháljuk. A kombinált szerves fázist vizes NaHCO3 és víz elegyével mossuk, Na2SO4 felett szárítjuk és bepároljuk. A nyersterméket szilikagélen kromatografáljuk eluensként metilénklorid :THF-et használva. Hozam: 30 mg (8%).
1H-NMR (400 MHz; CDCI3): δ 8,04 (bt, 1H), 7,77 (d,
2H), 7,40 (d, 2H), 7,35-7,2 (m, 5H), 5,17 (s, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,46 (dd, 1H), 4,39 (dd, 1H), 4,3-4,2 (m, 2H), 2,66 (m, 1H), 1,8-1,5 (m, 4H), 0,9-0,75 (m, 6H).
(iii) (Et)2C(OH)-C(O)-Aze-Pab*HCI
A cím szerinti vegyületet a 93(v) példában leírt módon állítjuk elő 30 mg (0,063 mmol) (ii) lépésben kapott (Et)2C(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)-ből. Hozam: 19 mg (79%).
1H-NMR (300 MHz; D2O; a spektrum a rotamerek miatt bonyolult): δ 7,80 (d, 2H), 7,65-7,5 (m, 2H), 5,43 (m, 1H, minor rotamer), 4,90 (m, 1H, major rotamer), 4,6-4,5 (m, 3H), 4,11 (m, 1H, rotamer), 3,70 (m, 1H, rotamer), 2,8-2,55 (m, 1H), 2,35-2,15 (m,4H), 1,0-0,75 (m, 6H).
13C-NMR (75 MHz; D2O) amidin és karbonil-szén (rotamerek): δ 178,3, 177,4, 175,0, 173,5, 167,2.
95. példa n-C6H13-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HCI (i) n-C6H13-(R, S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
Az alcím szerinti vegyületet a 94(ii) példa szerint állítjuk elő 0,13 g (0,80 mmol) (R,S)-2-hidroxi-oktánsavból. A hozam 0,25 g (61%).
1H-NMR (400 MHz; CDCI3): δ 8,24 (bt, 1H, egy diasztereomer), 7,89 (bt, 1H, egy diasztereomer), 7,8-7,75 (m, 2H), 7,35-7,25 (m, 5H), 5,18 (s, 2H), 4,95-4,85 (m, 1H), 4,55^4,35 (m, 2H), 4,2^1,0 (m, 3H), 2,8-2,65 (m, 1H), 2,6-2,4 (m, 1H), 2,0-1,2 (m, 10H), 0,9-0,8 (m, 3H).
(\\) n-C6H13(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HCI A cím szerinti vegyületet a 93(v) példában leírt módon állítjuk elő 0,14 g (0,28 mmol) (i) lépésben kapott n-C6H13-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)-ből, hozam 88 mg (78%).
1H-NMR (400 MHz; D2O): δ 7,7-7,6 (m, 2H), 7,45-7,3 (m, 2H), 5,03 (m, 1H, egy diasztereomer), 4,74 (m, 1H, az egy diasztereomert elfedi a víz jele),
4,45-4,35 (m, 2H), 4,3-4,1 (m, 2H), 4,0-3,8 (m, 1H), 2,65-2,45 (m, 1H), 2,3-2,1 (m, 1H), 1,6-0,9 (m, 10H), 0,75-0,65 (m, 3H).
HU 227 356 Β1 13C-NMR (75 MHz, D20) amidin és karbonil-szén (diasztereomerek és rotamerek): δ 176,8, 176,4, 176,0, 173,5, 173,2, 167,2.
96. példa
Ph(4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pah*HCI (i) Ph(4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
Az alcím szerinti vegyületet a 94(ii) példában leírtak szerint állítjuk elő 0,34 g (2,0 mmol) (R,S)-4-hidroximandulasavból. Szilikagélen kromatografáljuk, EtOAc/EtOH 9/1 arányú elegyével, hozam 0,18 g (17%).
1H-NMR (400 MHz; CDCI3): δ 7,70 (d, 2H, minor diasztereomer/rotamer), 7,64 (d, 2H, major diasztereomer/rotamer), 7,5-7,0 (m, 7H), 6,82 (d, 2H, major diasztereomer/rotamer), 6,67 (d, 2H, minor diasztereomer/rotamer), 6,43 (d, 2H major diasztereomer/rotamer), 5,30, 5,26, 5,22, 5,21 (szinglettek, 2H, diasztereomerek/rotamerek), 4,95—4,8 (m, 2H), 4,15«,05 (m, 2H), 4,0-3,7 (m, 2H), 2,7-2,5 (m, 2H).
(n) Ph(4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HCI
Az alcím szerinti vegyületet a 93(v) példában leírtak szerint állítjuk elő 94 mg (0,18 mmol) (i) lépés szerinti Ph(4-OH)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)-ből. Hozam: 37 mg (49%) fehér por.
1H-NMR (600 MHz; D2O): δ 7,76, 7,72, 7,71, 7,68,
7,52, 7,47, 7,40, 7,35, 7,25, 7,19, 7,11, 6,97, 6,82,
6,76, 6,73, 6,71 (dublettek, 8H, diasztereomerek/rotamerek), 5,19 (s, 1H, diasztereomer/rotamer), 5,17 (s, 1H, diasztereomer/rotamer), 5,14 (s, 1H, diasztereomer/rotamer), 5,01 (m, 1H, diasztereomer/rotamer), 4,88 (m, 1H, diasztereomer/rotamer; ugyanazon protonból származó más jeleket a HDO jel elfedi), 4,6-3,8 (m, 4H), 2,77 (m, 1H, diasztereomer/rotamer), 2,62 (m, 1H, diasztereomer/rotamer), 2,49 (m, 1H, diasztereomer/rotamer), 2,3-2,1 (m, 1H).
13C-NMR (75 MHz; D2O), amidin és karbonil-szén (diasztereomerek és rotamerek), δ 175,9, 174,8,
173,3, 173,2, 172,9,167,1.
97. példa
Ph-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HCI (i) H-Aze-OMe*HCI
200 ml MeOH-t -40 °C-ra hűtünk argongáz-atmoszféra alatt. 47,1 g (0,396 mól) tionil-kloridot adunk hozzá cseppenként, és a reakcióelegyet -10 °C-on 35 percig keverjük. 10,0 g (0,099 mól) H-Aze-OH-t adunk hozzá, és az elegyet szobahőmérsékleten éjszakán át keverjük. A reakcióelegyet fokozatosan bepároljuk, a cím szerinti vegyület hozama 16,1 g (100%).
1H-NMR (400 MHz; CDCI3); δ 5,12-5,24 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 2,65-2,87 (m, 2H).
(ii) Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-OMe
Az alcím szerinti vegyületet a 93(ii) példában leírtak szerint állítjuk elő 0,60 g (3,6 mmol) R(-)-a-metoxi-fenil-ecetsavból és 0,55 g (3,6 mmol) (i) lépésben kapott H-Aze-OMexHCI-ből, 0,32 g (34%) hozammal. 1H-NMR (400 MHz; CDCI3): δ 7,29-7,48 (m, 5H),
4,71-5,08 (m, 2H), 3,92^4,31 (m, 2H), 3,69-3,83 (m, 3H), 3,19-3,46 (m, 3H), 2,13-2,65 (m, 2H).
(iii) Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-OH
0,32 g (1,2 mmol) (ii) lépésben kapott
Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-OMe 10 ml THF-ben készült oldatához 0,071 g (1,7 mmol) lítium-hidroxid-monohidrát 6 ml vízben készült oldatát adjuk. A reakcióelegyet 3 órán át keverjük és fokozatosan bepároljuk. A maradékot vízben oldjuk és toluollal extraháljuk. A vizes réteg pH-ját 3-ra állítjuk be vizes HCI-lel, majd etilacetáttal négyszeri extrakciót végzünk. A szerves réteget bepároljuk, és így 0,28 g (92%) cím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (300 MHz; CDCI3): δ 7,30-7,50 (m, 5H), 4,95-5,10 (m, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,10-4,35 (m, 2H), 3,40 (s, 3H), 2,40-2,80 (m, 2H).
(iv) Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-Pab(Z)
Az alcím szerinti vegyületet a 93(ii) példában leírtak szerint állítjuk elő 0,36 g (1,0 mmol) H-Pab(Z)xHCI-ből és 0,25 g (1,0 mmol) (iii) lépésben kapott Ph-CH(OMe)C(O)-Aze-OH-ból. így 0,39 g (76%) terméket kapunk fehér por formájában.
1H-NMR (400 MHz; CDCI3): δ 8,29 (m, 1H), 7,45 (d,
2H), 7,4-7,2 (m, 10H), 5,22 (s, 2H), 4,93 (m, 1H),
4,69 (s, 1H), 4,44 (m, 2H), 4,15 (m, 2H), 3,35 (s,
3H), 2,69 (m, 1H), 2,42 (m, 1H).
(v) Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-Pab*HCI
A cím szerinti vegyületet a 93(v) példában leírtak szerint állítjuk elő 0,15 g (0,29 mmol), a (iv) lépésben kapott Ph-(R)CH(OMe)-C(O)-Aze-Pab(Z)-ből. Fehér por formájában kapjuk a terméket, hozam 50,4 mg (41%).
1H-NMR (400 MHz; CD3OD; az Azé α-hidrogénjét és a mandelát benziles hidrogénjét a CD3OD-jel megzavarja), δ 7,8-7,6 (m, 2H), 7,6-7,4 (m, 2H), 7,4-7,1 (m, 5H), 4,6-4,4 (m, 2H), 4,3X0 (m, 2H), 3,29 (s, 2H), 2,7-2,5 (m, 1H), 2,4-2,1 (m, 1H).
98. példa
Ph(3-Me)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HOAc (i) (R,S)-3-Metil-mandulasav
12,0 g (0,1 mól) 3-metil-benzaldehid és 1,23 g (0,005 mól) benzil-trietil-ammónium-klorid 16 ml CHCI3-ban készült keverékét 56 °C-on keverjük. 25 g NaOH 25 ml vízben készült oldatát cseppenként a keverékhez adjuk. Amikor a hozzáadás befejeződött, a reakcióelegyet 1 órán át keverjük. Ezután 400 ml vízzel hígítjuk és 3x50 ml dietil-éterrel extraháljuk. Az elegy pH-ját 10-re állítjuk be tömény H2SO4-tal, majd 6x50 ml dietil-éterrel extraháljuk. A vegyes szerves réteget MgSO4 felett szárítjuk és bepároljuk. A nyersterméket (11,6 g) toluolból átkristályosítjuk, így 8,47 g (51 %) cím szerinti vegyületet kapunk.
LC-MS m/z 165 (M-1)-, 331 (2M-1)
HU 227 356 Β1 1H-NMR (600 MHz; CD3OD): δ 7,10-7,28 (m, 4H),
5,08 (s, 1H), 2,32 (s, 3H).
(ii) Ph(3-Me)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
Az alcím szerinti vegyületet a 94(ii) példában leírtak szerint állítjuk elő, az (i) lépésben kapott 0,22 g (1,3 mmol) (R,S)-3-metil-mandulasavból. Hozam 0,37 g (54%).
LC-MS m/z 515 (M+1)+ 1H-NMR (400 MHz; CDCI3): δ 8,11-8,21 (t, NH),
6.97- 7,89 (m, 13H), 5,18-5,24 (m, 2H), 4,83-5,00 (m, 2H), 4,37-4,58 (m, 2H), 3,50-4,11 (m, 2H),
2,39-2,71 (m, 2H), 2,27-2,38 (m, 3H).
(iii) Ph(3-Me)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HOAc
0,105 g (0,20 mmol) (ii) lépésben kapott
Ph(3-Me)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z), 0,012 g (0,20 mmol) ecetsav és 0,14 g 5%-os Pd/C 12 ml etanolban készült elegyét atmoszferikus nyomáson 6 órán át hidrogénezzük. A reakcióelegyet szűrjük, és a szűrletet bepároljuk. A 97 mg nyersterméket vízben oldjuk és fagyasztva szárítjuk, így nyúlós terméket kapunk. A terméket HOAc-ben oldjuk és ismét fagyasztva szárítjuk, javulás nincsen. A terméket vízben oldjuk, HPLC szűrőn szűrjük és fagyasztva szárítjuk. A cím szerinti termék hozama 67 mg (76%).
LC-MS m/z 381 (M+1)+ 1H-NMR (400 MHz; D2O) δ 6,89-7,72 (m, 8H),
4,79-5,23 (m, 2H), 3,76^4,51 (m, 4H), 2,38-2,82 (m,2H), 2,15-2,27 (m, 3H).
13C-NMR (75,5 MHz; D2O; a diasztereomerek/rotamerek miatt bonyolult) amidin és karbonil-szén; δ
181,21, 175,43, 174,38, 173,84, 173,23, 173,06,
172,16, 167,0.
99. példa
Ph(3-OPr(n))-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HOAc (i) (R,S)-3-Allil-oxi-mandulasav
504 g (3,0 mmol) (R,S)-3-hidroxi-mandulasavat 25 ml száraz acetonban nitrogén alatt feloldunk. 0,907 g (7,5 mmol) alIil-bromidot és 1,037 g (7,5 mmol) száraz K2CO3-ot adunk hozzá, és a reakcióelegyet nitrogénatmoszférában 16 órán át keverjük. Az elegyet fokozatosan bepároljuk. A maradékot 25 ml vízben és 6 ml acetonban oldjuk, és az elegyet 2 órán át keverjük (a reakciót HPLC-vel követjük). Az elegyet bepároljuk, és a vizes réteget etil-acetáttal extraháljuk. A vizes réteg pH-ját vizes KHSO4-tal 2-re állítjuk be és etil-acetáttal 3-szor extraháljuk. A vegyes szerves réteget vízzel mossuk, Na2SO4 felett szárítjuk és bepároljuk. így 0,175 g (28%) alcím szerinti vegyületet kapunk.
1H-NMR (500 MHz; CDCI3): δ 6,87-7,30 (m, 4H),
5.97- 6,10 (m, 1H), 5,26-5,44 (m, 2H), 5,20 (s, 1H),
4,51-4,55 (d, 2H).
(ii) Ph(3-OCH2CH=CH2)-(R,S)CH(OH)-C(O)-AzePab(Z)
Az alcím szerinti vegyületet a 94(ii) példában leírtak szerint 0,167 g (0,8 mmol) (i) lépésben kapott (R,S)-3allil-oxi-mandulasavból állítjuk elő. Hozam 260 mg (58%).
1H-NMR (500 MHz; CDCI3): δ 8,09-8,17 (t, NH),
6,79-7,87 (m, 13H), 5,94-6,09 (m, 1H), 5,20-5,44 (m, 4H), 4,86-5,02 (m, 2H), 4,32-4,62 (m, 4H),
3,54-4,15 (m, 2H), 2,30-2,74 (m, 2H).
(iii) Ph(3-OPr(n))-(R,S)CH(OH)-C(O)-AzePab*HOAc
A cím szerinti vegyületet a 98(iii) példában leírtak szerint a (ii) lépésben kapott 0,06 g (0,1 mmol) Ph(3-OCH2CH=CH2)-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)böl állítjuk elő. Hozam 47 mg (97%).
LC-MS m/z 425 (M+1)+, 423 (M-1) 1H-NMR (500 MHz; D2O): δ 6,70-7,71 (m, 8H),
4,70-5,25 (m, 2H), 3,78-4,53 (m, 6H), 2,05-2,80 (m, 2H), 1,56-1,75 (m, 2H), 0,82-0,95 (m, 3H).
100. példa
2-Naftil-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HOAc (i) (R,S)-(2-Naftil)-glikolsav
Az alcím szerinti vegyületet a 98(i) példában leírtak szerint 15,6 g (100 mmol) 2-naftaldehidböl állítjuk elő. Hozam 12,37 g (61%).
LC-MS m/z 201 (M-1)+, 403 (2M-1 )~ 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7,43-7,98 (m, 7H),
5.29- 5,35 (m, 1H).
(ii) 2-Naftil-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)
Az alcím szerinti vegyületet a 94(ii) példában leírtak szerint az (i) lépésben kapott 0,162 g (0,8 mmol) (R,S)(2-naftil)-glikolsavból állítjuk elő. Hozam 266 mg (60%). LC-MS m/z 551 (M+1)+ 1H-NMR (400 MHz; CDCI3): δ 7,18-7,91 (m, 16H),
4,86-5,26 (m, 3H), 4,05^4,60 (m, 3H), 3,52-3,78 (m, 2H), 2,24-2,73 (m, 2H).
(iii) 2-Naftil-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab*HOAc
A cím szerinti vegyületet a 98(iii) példában leírtak szerint az (ii) lépésben kapott 0,266 g (0,48 mmol) 2-naftil-(R,S)CH(OH)-C(O)-Aze-Pab(Z)-ből állítjuk elő. Hozam 202 mg (88%).
LC-MS m/z 417 (M+1)+ 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7,28-7,96 (m, 11H),
5.30- 5,40 (m, 1H), 3,95^4,82 (m, 5H), 2,09-2,59 (m, 2H).
Rövidítések
| aq | = vizes |
| Azé | = azetidin-2-karbonsav |
| Boc | = terc-butil-oxi-karbonil |
| Ch | = ciklohexil |
| DIPEA | = diizopropil-etil-amin |
| DMAP | = N,N-dimetil-amino-piridin |
| DMF | = dimetil-formamid |
| EDC | = 1 -(3-d i meti l-ami no-propi I )-3-eti Ikarbodiimid-hidroklorid |
| Et | = etil |
| EtOH | = etanol |
| HCI | = hidroklorid |
HU 227 356 Β1
| HOAc | = ecetsav |
| H-Pab | = 1-amidino-4-amino-metil-benzol |
| H.Pab(Z) | = 4-amino-metil-1 -(N-benzoil-oxikarbonil-amidino)-benzol |
| HPLC | = nagynyomású folyadékkromatográfia |
| Me | = metil |
| Ph | = fenil |
| RPLC | = fordított fázisú nagynyomású folyadékkromatográfia |
| TBTU | = N,N,N’,N”-tetrametil-O-benztriazol1 -il-urónium-tetrafluoro-borát |
| THF | = tetrahidrofurán |
| TMS | = trimetil-szilil |
| Z | = benzil-oxi-karbonil |
Nézetünk szerint a találmány szerinti vegyületek képesek a trombin szelektív gátlására más, a vér koagulációjában részt vevő proteinázokon és nem enzim jellegű proteineken anélkül, hogy a test természetes vérrögbontó képességét jelentősen befolyásolnák (a vegyületek alacsony inhibíciós hatást mutatnak fibrinolízis esetében). Továbbá szerintünk ez a szelektivitás lehetővé teszi a vegyületek trombolitikus szerekkel együtt történő alkalmazását úgy, hogy az a trombolízisre és a fibrinolízisre lényegesebb hatást nem gyakorol. Továbbá a jelen találmány szerinti vegyületek nézetünk szerint orálisan aktív szerek.
A találmány ebben a vonatkozásában megoldást nyújt az emlősökben történő trombin inhibícióra, beleértve a kezelésre szoruló emlősnek történő (I) általános képletű vegyület trombingátló hatású dózisának beadását.
A jelen találmányban ismertetett trombin inhibíciót kiváltó készítmény segítségével gyógyszerterápiás és/vagy megelőző kezelést is lehet végezni.
Elvárás a találmány szerinti vegyületekkel szemben, hogy alkalmasak legyenek az állatokban, valamint az emberben a vérben és a szövetekben előforduló trombózis és hiperalvadásos állapot kezelésére, illetve megelőzésére. A vegyületek hasznos alkalmazási területei azok a kórállapotok, ahol lehetőség van a vérben és a szövetekben előforduló trombózis és hiperalvadásos állapot kezelésére vagy megelőzésére. Azok közé a betegségek közé, melyeknél a vegyületeket hasznosan alkalmazhatjuk a kezelés és/vagy kórmegelőzés során, tartozik a vénás trombózis és tüdőembólia, arteriális trombózis, így például a miokardiális ischaemia, miokardiális infarktus, labilis torokgyulladás, trombózis okozta roham, valamint a perifériális arteriális trombózis. További elvárás a vegyületekkel szemben, hogy alkalmazhatók legyenek arteroszklerózisos megbetegedések, mint például koronaér-megbetegedések, agyérmegbetegedések, valamint perifériás érmegbetegedések esetén. További elvárás a vegyületekkel szemben, hogy alkalmazhatók legyenek miokardiális infarktus esetén, trombolitikumokkal együtt. További elvárás a vegyületekkel szemben, hogy felhasználhatók legyenek a trombolízis, bőr alatti transzluminális angioplasztika, valamint koronaérbypass műtétek utáni ér-újraelzáródás kezelésére vagy megelőzésére. További elvárás a vegyületekkel szemben, hogy alkalmasak legyenek a mikrosebészi beavatkozások után újból jelentkező trombózis megelőzésére. További elvárás a vegyületekkel szemben, hogy alkalmasak legyenek a mesterséges szervek, illetve szívszelepek antikoaguláns kezelésére. További elvárás a vegyületekkel szemben, hogy alkalmasak legyenek hemodialízis és a kiterjedt intravaszkuláris koaguláció kezelésére. További elvárás a vegyületekkel szemben, hogy alkalmasak legyenek a páciensekben alkalmazott katéterek és gépek öblítésére in vivő, valamint antikoagulánsként a vér, plazma vagy más vérkészítmények konzerválására in vitro. További elvárás a vegyületekkel szemben, hogy olyan betegségeknél is alkalmazhatók legyenek, ahol a vérkoaguláció alapvető járulékos módszer vagy másodlagos patológiai forrás, mint például a rákmegbetegedés, beleértve az áttételeket, valamint a gyulladásos megbetegedéseket, beleértve az ízületi gyulladást, valamint a diabéteszt. Az antikoaguláns vegyületet orálisan vagy parenterálisan adjuk be, így például intravénás infúzió (iv.), intramuszkuláris injekció (im.) vagy bőr alá adott injekció (se.) formájában.
A találmány szerinti vegyület beadott - a kezelésben vagy megelőzésben hatásos - adagjának pontos mennyisége természetesen az adott körülményeknekígy például a vegyület fajtájának, az adagolás mértékének, valamint a kezelt állapotnak - megfelelően kerül megállapításra.
A fenti alkalmazási lehetőségeknél alkalmazható jellemző napi adag körülbelül 0,01 mg/kg és 1000 mg/kg értékek közé esik. Az adag szedési rendszeressége változó lehet, így például megelőző használat esetén napi egy adag vagy napi többszöri - 3- vagy 5-szöri adag is megfelelő lehet. Kritikus kezelési esetekben a találmány szerinti vegyületek intravénás infúzió útján, körülbelül 0,01 mg/kg/óra és 20 mg/kg/óra, előnyösen körülbelül 0,1 mg/kg/óra és 5 mg/kg/óra mennyiségben juttathatók be a szervezetbe. A találmány szerinti módszert a gyakorlatban valamilyen vérrögoldó szerrel, így például szövet plazminogén aktivátorral (t-PA), módosított szövet plazminogén aktivátorral (m-t-PA), sztreptokinázzal vagy urokinázzal együtt is alkalmazzák. Azoknál az eseteknél, ahol vérrögképződés, valamint ennek következtében részleges vagy teljes artéria- vagy vénaelzáródás jelentkezik, általában vérrögoldó szert alkalmazunk. Egy, a találmány szerinti vegyület alkalmazható közvetlenül az oldószer előtt vagy azzal együtt vagy annak használata után önmagában, és a továbbiakban előnyösen aszpirinnel együtt adjuk be a vérrögök újraképződésének megakadályozására.
A találmány szerinti hatóanyagokat a gyakorlatban valamilyen vérlemezke glikoprotein receptor (llb/llla) antagonistával - mely a vérlemezkék aggregációját akadályozza - együtt is alkalmazzák. Egy, a találmány szerinti vegyület alkalmazható közvetlenül a lla/lllb antagonista előtt vagy azzal együtt vagy annak használata után önmagában a vérrögök újraképződésének megakadályozására.
A találmány szerinti módszert a gyakorlatban aszpirinnel együtt is alkalmazzák. Egy, a találmány szerinti vegyület alkalmazható közvetlenül az aszpirin előtt
HU 227 356 Β1 vagy azzal együtt vagy annak használata után önmagában a vérrögök újraképződésének megakadályozására. Mint azt a fentiekben már említettük, egy, a találmány szerinti vegyületet előnyösen vérrögoldó szerrel és aszpirinnel együtt alkalmazzuk.
A találmány további tárgyát a fent említett kezelési módszerekre alkalmazható gyógyszerkészítmények képezik. A találmány szerinti gyógyszerkészítmények az (I) általános képletű vegyület trombingátló hatású mennyiségét tartalmazzák, valamilyen gyógyászatilag alkalmas hordozóval, kötőanyaggal vagy oldószerrel együtt. Orális adagolás céljából a trombózisgátló vegyületet zselatinkapszulákká vagy tablettákká formálják, melyek kötőanyagokat, így például kapcsolóanyagokat, kenőanyagokat, lebontószereket és hasonlókat tartalmazhatnak. Parenterális beadás céljából a trombózisgátló vegyületet gyógyászatilag elfogadható oldattá alakítják, így például fiziológiás sóoldattá (0,9%-os), 5%-os dextrózzá, Ringer-oldattá és hasonlóvá.
A találmány szerinti vegyületet egységadagokká is alakíthatják, melyek egyenként körülbelül 0,1-1000 mg-nyi hatóanyagadagot tartalmaznak. A vegyület előnyösen gyógyászatilag elfogadható só, így például szulfátsó, acetátsó vagy foszfátsó formájában van jelen. Az egységadag egyik formája például 5 g találmány szerinti vegyületet tartalmaz gyógyászatilag elfogadható só formájában egy 10 ml-es, steril üvegampullában. Egy másik egységadagnál 10 mg találmány szerinti vegyület van jelen 20 ml izotóniás sóoldat formájában, steril ampullában.
A vegyületeket számos úton beadhatjuk, beleértve az orális, rektális, bőrön alá történő, intravénás, intramuszkuláris és intranazális módszereket is. A találmány szerinti vegyületeket előnyösen közvetlenül beadás előtt készítjük el. Ezért a találmány egy további megvalósítási lehetősége egy olyan gyógyszerkészítmény, mely az (I) általános képletű vegyület, vagy annak gyógyászatilag elfogadható sójának vagy oldatának hatásos mennyiségét tartalmazza, valamilyen gyógyászatilag elfogadható hordozóval, oldószerrel vagy kötőanyaggal együtt.
Az ilyen készítmények aktív összetevői a készítmény tömegének 0,1-99,9%-át teszik ki. A „gyógyászatilag elfogadható’’ kifejezés alatt azt értjük, hogy a hordozó, oldószer vagy kötőanyagnak a készítmény többi alkotójával összeférhetőnek kell lennie, és nem lehet a befogadóra ártalmas.
A jelen gyógyászati készítmények ismert módon, készen kapható alkotókból kerülnek előállításra. A találmány szerinti készítmények előállításánál az aktív összetevőt rendszerint összekeverik a hordozóval, vagy feloldják a hordozóban, vagy bezárják a hordozóba, mely lehet kapszula, tasak, zacskó, papír vagy más tartó. Abban az esetben, ha a hordozóanyag egyben oldószer is, az lehet szilárd, félszilárd vagy folyékony anyag is, mely az aktív összetevő vivőanyagaként, kötőanyagaként vagy közegeként is szolgálhat. így a készítmények lehetnek tabletta, pirula, por, szögletes tabletta, tasak, ostyakapszula, elixír, szuszpenzió, emulzió, oldat, szirup, aeroszol (szilárd anyag folyékony közegben), lágy- és keményzselatin-kapszula, kúp, steril injektálható oldat, sterilen csomagolt por és hasonló formájúak. A találmány szerinti készítmények - elkészítésüktől függően - lehetnek gyors, állandó vagy késleltetett hatóanyag-kibocsájtásúak a szakemberek számára ismert módszerekkel történő beadás után.
A következő készítménypéldák csak bemutató jellegűek, és ebben a formájukban semmilyen módon nem korlátozzák a találmány tárgyi körét. „Hatóanyag” alatt természetesen a találmány szerinti (I) általános képletű vegyületeket, vagy azok gyógyászatilag alkalmas sóját vagy oldatát értjük.
1. készítmény
Keményzselatin-kapszulákat készítünk az alábbi összetevőkből:
Összetevő Mennyiség (mg/kapszula)
Hatóanyag 250
Keményítő (szárított) 200
Magnézium-sztearát 10
Összesen 460
2. készítmény
Tablettát készítünk az alábbi összetétel szerint: Összetevő Mennyiség (mg/kapszula)
Hatóanyag 250
Cellulóz (mikrokristályos) 400
Füstölt szilikon-dioxid 10
Sztearinsav 5
Összesen 665
Az alkotókat és azokból egyenként 665 mg súlyú tablettákat préselünk.
3. készítmény
Aeroszololdatot készítünk az alábbi összetétel szerint:
Összetevő Tömeg
Hatóanyag 0,25
Etanol 25,75
Hajtóanyag 22 (klór-difluor-metán) 70,00
Összesen 100,00
A hatóanyagot összekeverjük etanollal, és a keverékhez hozzáadjuk a hajtóanyag 22 egy részét, -30 °C-ra hűtjük és a töltőkészülékbe rakjuk. A kívánt mennyiséget rozsdamentes acél tartóba töltjük, és felhígítjuk a maradék hajtóanyaggal, végül a tartályra rászereljük a szelepet.
4. készítmény
Egyenként 60 mg hatóanyagot tartalmazó tablettákat állítunk elő az alábbi összetétel szerint:
Összetevő Tömeg (mg)
Hatóanyag 60
Keményítő 45
Mikrokristályos cellulóz 35
Polivinil-pirrolidon (10%-os vizes oldat) 4
Nátrium-karboxi-metil-keményítő 4,5
Magnézium-sztearát 0,5
Talkum 1_
Összesen 150
HU 227 356 Β1
A hatóanyagot, a keményítőt és a cellulózt amerikai szabvány szerinti 45-ös lyukméretű szitán engedjük át és alaposan összekeverjük. A kapott port elkeverjük a poli(vinil-pirrolidon)-t tartalmazó vizes oldattal, és a keveréket amerikai szabvány szerinti 14-es lyukméretű szitán engedjük át. Az így kapott szemcséket 50 °C-on szárítjuk, majd amerikai szabvány szerinti 18-as lyukméretű szitán engedjük át. A nátrium-karboxi-metilkeményítőt, magnézium-sztearátot és talkumot, melyeket előzőleg amerikai szabvány szerinti 60-as lyukméretű szitán engedtünk át, összekeverjük a szemcsékkel, és az így kapott keverékből tablettakészítő gépen egyenként 150 mg-os tablettákat készítünk.
5. készítmény
Egyenként 80 mg hatóanyagot tartalmazó kapszulát állítunk elő az alábbi összetétel szerint:
Összetevő Tömeg (mg)
Hatóanyag 80
Keményítő 59
Mikrokristályos cellulóz 59
Magnézium-sztearát 2
Összesen 200
A hatóanyagot, a cellulózt, a keményítőt és a magnézium-sztearátot összekeverjük, amerikai szabvány szerinti 45-ös lyukméretű szitán engedjük át, és keményzselatin-kapszulákba töltjük, egyenként 200 mg-os mennyiségben.
6. készítmény
Egyenként 225 mg hatóanyagot tartalmazó kúpot állítunk elő az alábbi összetétel szerint:
Összetevő Tömeg (mg)
Hatóanyag 225
Telített zsírsav-gliceridek 2000
Összesen 2225
A hatóanyagot amerikai szabvány szerinti 60-as lyukméretű szitán engedjük át, majd szuszpendáljuk a telített zsírsavakat tartalmazó gliceridekben, melyek felolvasztásánál a minimálisan szükséges melegítést alkalmazzuk. A keveréket 2 g névleges kapacitású kúphüvelybe töltjük, és hagyjuk kihűlni.
7. készítmény ml-es adagjaiban egyenként 50 mg hatóanyagot tartalmazó szuszpenziókat készítünk, az alábbi összetétel szerint:
Összetevő Mennyiség
Hatóanyag 50 mg
Nátrium-karboxi-metil-cellulóz 50 mg
Szirup 1,25 ml
Benzoesavoldat 0,10 ml
Színezőanyag ízanyag
Tisztított víz összesen 5 ml
A hatóanyagot amerikai szabvány szerinti 45-ös lyukméretű szitán engedjük át, és a sziruppal és a karboxi-metil-keményítővel összekeverve lágy pépet kapunk. A benzoesavoldatot, a szín- és ízanyagot a víz egy részével hígítjuk, és keverés közben a péphez adjuk, majd ezután az elegyhez a kívánt térfogat eléréséig vizet adunk.
8. készítmény
Intravénás készítményt állítunk elő az alábbi összetétel szerint:
Összetevő Mennyiség
Hatóanyag 100 mg
Izotóniás sóoldat 1,000 ml
A fenti összetevőket tartalmazó oldatot az alanyba általában intravénás úton, 1 ml/perc sebességgel juttatjuk be.
A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek orálisan aktívak, és az emlősökben szelektív trombingátló hatásúak.
A jelen találmány szerinti vegyületek hatásosságát és orális aktivitását lényegében az alábbi vizsgálatok kiértékelése mutatja be.
A trombininhibíciót a trombin amidáz aktivitásának in vitro inhibíciója segítségével mutatjuk be egy olyan vizsgálat során, ahol a trombin hidrolizálja a kromogén anyagot, az N-benzoil-L-fenil-alanil-L-valil-L-arginil-pnitro-anilidet.
A vizsgálat során 50 μΙ puffért (0,03 M Tris, 0,15 M NaÖl, pH=7,4) 25 μΙ ökör- vagy emberi trombinoldattal (0,21 mg/ml trombosztát trombin, Parke-Davis vagy tisztított emberi trombin, Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana, körülbelül 8 NIH egység/ml, ugyanabban a pufferban) és 25 μΙ, oldószerben (50 tf%-os vizes metanol) oldott tesztvegyületet keverünk össze. A keverékhez a kromogén anyag 0,25 mg/ml-es oldatának 150 μΙ-jét adjuk, és az anyag hidrolízisét 405 nm-en a reakcióban képződő p-nitro-anilint figyelve vizsgáljuk. Standardgörbéket készítünk a szabad trombin koncentrációt a hidrolízis értékének függvényében ábrázolva. A tesztvegyületekkel a megfelelő vizsgálatok során megfigyelt hidrolízisértékeket ezután a standardgörbék segítségével szabad trombin értékekre számítjuk át. A kötött trombin (a tesztvegyülethez kötött) mennyiségét úgy kapjuk meg, ha az egyes vizsgálatokban megfigyelt szabad trombin mennyiségét levonjuk a vizsgálatban használt kiindulási trombinmennyiségből. A szabad inhibitor mennyiségét a kötött trombin móljainak számát az alkalmazott inhibitor (tesztvegyület) móljainak számából levonva kapjuk meg. A Kass-érték a trombin és az „I” tesztvegyület közti reakció hipotetikus egyensúlyi állandója.
Trombin+I Trombin-I Kass=[Trombin—l]/[(Trombin)x(l)]
A Kass-értéket egy sor tesztvegyület-koncentrációra meghatározzuk, és a középértéket adjuk meg liter/mól értékben.
Az emberi trombinra fent leírt módszerhez hasonlóan, másik emberi vérkoagulációs rendszeri szerin proteázt és a fibrinolitikus rendszer proteázait a megfelelő, alább leírt kromogén vegyülettel alkalmazva vizsgáljuk a találmány szerinti vegyületek szelektivitását a koagulációs faktor szerin proteázok és a fibrinolitikus rendszer szerin proteázok, valamint a fibrinolitikus rendszer szerin proteázaival való kölcsönhatásuk alapos hiánya vonatkozásában. A trombininhibitorokkal előnyösen elke53
HU 227 356 Β1 rülhető az urokináz, szövet plazminogén aktivátor (t-PA) és a sztreptokináz által kiváltott fibrinolízis. Ez fontos lehet az ilyen szerek sztreptokináz, t-PA és urokináz melletti járulékos alkalmazása szempontjából trombolitikus kezelés esetén, valamint az endogén fibrinolízis elkerülése érdekében (tekintettel a t-PA-ra és az urokinázra), antitrombotikus szerként történő alkalmazásuk szempontjából. A fibrinolitikus proteázok amidáz aktivitásával való kölcsönhatás hiánya mellett az ilyen fibrinolitikus rendszer elkerülése tanulmányozható az emberi vérrögök, valamint azok megfelelő fibrinolitikus plazminogén aktivátorral történő lízise útján.
A X, Xa, IXa, Xla és Xlla emberi faktorokat az Enzyme Laboratories (South Bend, Indiana) cégtől, az urokinázt a dán Leó Pharmaceuticals cégtől vásároltuk, a rekombináns aktivált Protein C az Eli Lilly and Companynál készült a 4,981,952 számú amerikai szabadalommal teljesen megegyező módon.
Kromogén anyagok:
N-benzoil-lle-Glu-Gly-Arg-p-nitro-anilid (a Xa faktorhoz)
N-Cbz-D-Arg-Gly-Arg-p-nitro-anilid (a IXa faktor vizsgálatokhoz, mint Xa faktor anyag)
Piroglutamil-Pro-Arg-p-nitro-anilid (a Xla faktorhoz és az aPC-hez)
H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitro-anilid (a Xlla faktorhoz)
Piroglutamil-Gly-Arg-p-nitro-anilid (az urokinázhoz).
Ezeket a vegyületeket a Kabi Vitrum (Stockholm, Svédország) vagy a Midwest Biotech (Fishers, Indiana) cégtől vásároltuk. Az ökörtripszint a Worthington Biochemicals (Freehold, New Jersey), az emberi plazma kallikreint a Kabi Vitrum (Stockholm, Svédország) cégtől szereztük. A H-D-Pro-Phe-Arg-p-nitro-anilidet a plazma kallikreinhez a Kabi Vitrumnál (Stockholm, Svédország) vásároltuk. Az N-benzoil-Phe-Val-Arg-pnitro-anilidet, az emberi trombin és tripszin számára szükséges anyagot a találmány szerinti vegyületek számára a fent leírt módszerekkel állítottuk elő általánosan kapható vagy a Midwest Biotech (Fishers, Indiana) cégtől vásárolt reagensekből ismert peptidkapcsolási módszereket alkalmazva.
A humán plazmint a Boehringer Mannheimtől (Indianapolis, Indiana), az nt-PA-t egyszálú aktivitási referenciaként az American Diagnosticától (Greenwich, Connecticut) vásároltuk. A módosított t-PA6-ot az Eli Lilly and Companynál állítjuk elő szakember számára ismert módon [lásd Burok et al., J. Bioi. Chem., 265, 5120-5177 (1990)].
A H-D-Val-Leu-Lys-p-nitro-anilid plazmin kromogén anyagot és a H-D-lle-Pro-Arg-p-nitro-aniIid szövet plazminogén aktivátor (t-PA) anyagot a Kabi Vitrum cégtől (Stockholm, Svédország) szereztük be.
A fent leírt kromogén anyagoknál az Ile, Glu, Gly, Pro, Arg, Phe, Val, Leu és Lys hárombetűs szimbólumok a megfelelő izoleucin, glutaminsav, glicin, prolin, arginin, fenil-alanin, valin, leucin, illetve lizin aminosavcsoportokat jelentik.
Az 1. számú táblázat a jelölt, (I) általános képletű vegyülettel kapott Kass-értékeket tartalmazza.
1. számú táblázat Inhibíciós tulajdonságok Kass*106 (l/mol)
| Példa száma | Emberi trombin | Xa | Tripszin | Plazmin | t-PA |
| 1. | 3,3 | 0,0017 | 0,38 | 0,010 | 0,082 |
| 2. | 4,4 | 0,0092 | 1,00 | 0,045 | 0,023 |
| 3. | 2,1 | 0,0021 | 0,24 | 0,0046 | 0,033 |
| 4. | 13 | 0,0057 | 0,076 | 0,0033 | 0,074 |
| 5. | 0,035 | 0,00039 | 0,00015 | 0,00022 | <0,001 |
| 6. | 2,3 | 0,00024 | 0,0016 | 0,00023 | <0,001 |
| 7. | 1,9 | 0,0041 | 0,0081 | 0,00022 | 0,0037 |
| 8. | 5,3 | 0,00038 | 0,022 | 0,00080 | 0,0012 |
| 9. | 0,033 | 0,00058 | 0,00017 | <0,001 | <0,001 |
| 10. | 1,4 | 0,000024 | 0,077 | 0,0045 | 0,00055 |
| 11. | 0,064 | 0,000068 | 0,0036 | 0,0060 | <0,001 |
| 12. | 0,44 | 0,000042 | 0,0022 | 0,00087 | 0,000042 |
| 13. | 0,49 | 0,00098 | 0,00066 | 0,00011 | <0,001 |
| 14. | 0,021 | 0,00014 | 0,000056 | 0,000046 | <0,001 |
| 15. | 220 | 0,0070 | 2,6 | 0,017 | 0,004 |
| 16. | 0,97 | 0,0051 | 0,02 | 0,0017 | 0,0012 |
| 17. | 33 | 0,049 | 3,8 | 0,024 | 0,0034 |
| 18. | 180 | 0,21 | 14 | 0,085 | 0,0094 |
HU 227 356 Β1
1. táblázat (folytatás)
| Példa száma | Emberi trombin | Xa | Tripszin | Plazmin | t-PA |
| 19. | 11 | 0,14 | 41 | 0,16 | 0,0056 |
| 20. | 10 | 0,10 | 19 | 0,10 | 0,0077 |
| 21. | 3,6 | 0,62 | 0,96 | 0,031 | 0,002 |
| 22. | 3 | 0,043 | 8,5 | 0,042 | 0,004 |
| 23. | 770 | 0,14 | 21 | 0,44 | 0,31 |
| 24. | 0,78 | <0,001 | 0,03 | <0,001 | <0,001 |
| 25. | 0,43 | <0,001 | 0,01 | <0,001 | 0,01 |
| 26. | 13 | 0,01 | 0,21 | 0,01 | 0,01 |
| 27. | 0,29 | 0,02 | 0,02 | <0,001 | 0,02 |
| 28. | 0,95 | 0,01 | 0,11 | <0,001 | <0,001 |
| 29. | 0,76 | 0,02 | 0,02 | <0,001 | <0,001 |
| 30. | 0,55 | 0,02 | 0,03 | <0,001 | <0,001 |
| 31. | 0,07 | 0,14 | 0,05 | <0,001 | <0,001 |
| 32. | 0,13 | 0,03 | 0,04 | <0,001 | 0,01 |
| 33. | 0,04 | 0,04 | 0,02 | <0,001 | <0,001 |
| 34. | 0,65 | <0,001 | 0,49 | 0,01 | 0,01 |
| 35. | 0,09 | <0,001 | 0,04 | <0,001 | <0,001 |
| 36. | 0,06 | <0,001 | 0,01 | <0,001 | <0,001 |
| 37. | 0,02 | <0,009 | |||
| 38. | 1,1 | <0,001 | 0,07 | <0,001 | |
| 39. | 0,12 | <0,001 | <0,02 | <0,001 | |
| 40. | 0,03 | <0,001 | 0,01 | <0,001 | |
| 41. | 0,01 | <0,001 | <0,001 | <0,001 | |
| 42. | 38 | 0,07 | 43 | 0,12 | 0,01 |
| 43. | 1,4 | 0,05 | 100 | 0,3 | 0,01 |
| 44. | 630 | 0,66 | 2600 | 1,8 | 0,04 |
| 45. | 610 | 1,5 | 110 | 1,1 | 0,77 |
| 46. | 240 | 0,07 | 48 | 0,13 | 0,01 |
| 47. | 45 | 0,04 | 82 | 0,18 | 0,01 |
| 48. | 4100 | 5,5 | 250 | 0,43 | 0,05 |
| 49. | 400 | 3,4 | 940 | 0,84 | 0,04 |
| 50. | 40 | 4,3 | 2200 | 1,8 | 0,04 |
| 51. | 1300 | 0,84 | 27 | 0,13 | 0,01 |
| 52. | 700 | 0,46 | 47 | 0,11 | 0,01 |
| 53. | 0,36 | <0,001 | 0,1 | <0,001 | <0,001 |
| 54. | 2,8 | <0,001 | 0,52 | 0,01 | <0,001 |
| 55. | 0,01 | <0,001 | 0,01 | <0,001 | <0,001 |
| 56. | 490 | 0,2 | 3,6 | 0,01 | <0,001 |
| 57. | 39 | 0,01 | 0,24 | 0,01 | <0,001 |
| 58. | 0,6 | <0,001 | 0,4 | <0,001 | <0,001 |
| 59. | 1,1 | <0,001 | 0,21 | <0,001 | <0,001 |
| 60. | 0,24 | <0,001 | 0,03 | <0,001 | <0,001 |
| 61. | 63 | 0,03 | 1 | 0,004 | 0,008 |
| 62. | 7,6 | ||||
| 63. | 0,31 |
HU 227 356 Β1
1. táblázat (folytatás)
| Példa száma | Emberi trombin | Xa | Tripszin | Plazmin | t-PA |
| 64. | 15 | 0,01 | |||
| 65. | 4500 | 570 | |||
| 66. | 120 | 4,6 | |||
| 67. | 11 | ||||
| 68. | 600 | ||||
| 69. | 340 | 3,7 | |||
| 70. | 430 | 9,8 | |||
| 71. | 1400 | 240 | |||
| 72. | 2300 | 280 | |||
| 73. | 28 | ||||
| 74. | 29 | ||||
| 75. | 0,45 | ||||
| 76. | 12 | 0,36 | |||
| 77. | 11 | ||||
| 78. | 11 | 8,6 | |||
| 79. | 2 | 0,24 | |||
| 80. | 1700 | 90 | |||
| 81. | 5,3 | 2,1 | |||
| 82. | 5 | ||||
| 83. | 2,4 | 0,03 | |||
| 84. | 2,9 | 0,07 | |||
| 85. | 265 | 30,8 | |||
| 86. | 200 | 0,63 | |||
| 87. | 30 | 2,5 | |||
| 88. | 410 | 3,9 | |||
| 89. | 0,14 | 0,071 | |||
| 90. | 0,61 | 0,002 | |||
| 91. | 3,6 | 0,007 | |||
| 92. | 130 | 7,7 |
Úgy találtuk, hogy nem várt módon azok a vegyületek, ahol X D-ciklohexil-alanil-láncot tartalmaz, jobb trombininhibíciós hatást mutattak, és különösen meglepő módon kiemelkedően jó hatást mutattak a Xa faktor inhibíciója terén, ha például egy olyan, megfelelő vegyülettel párosítottuk, ahol X fenil-alanil-láncot tartalmazott.
Anyagok
Kutya plazmát öntudatuknál lévő, keverék vadászkutyákból vettünk (mindkét nem, Hazelton LRE, Kalamazzo, Michigan, USA) 3,8 százalék citrátba történő vénás vérvétellel. A frissen nyert kutya plazmából fibrinogént állítunk elő, valamint emberi fibrinogént állítunk elő frissen vett ACD emberi vérből I-2 frakcióként az előző módszerek és leírások szerint. Smith, Biochem. J., 185, 1-11 (1980), és Smith, et al., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). Emberi fibrinogént (98% tiszta/plazminmentes) az American Diagnosticától (Green60 wich, Connecticut) szereztünk. A fibrinogén I-2 készítmények radioaktív jelzését korábban már ismertetett módszerrel végeztük. Smith, et al., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). Urokinázta dán Leó Pharmaceuticalstól vettünk, 2200 Ploug egység/fiola kiszerelésben. Sztreptokinázt a Hoechst-Roussel Pharmaceuticalstól (Sommerville, New Jersey) vásároltunk.
Módszerek- a t-PA hatása az emberi vérrögök lízisére
Mikrotesztcsövekben 50 μΙ trombin (73 NIH egység/ml) és 100 μΙ emberi vér-mely 0,0229 μθ l125-tel jelzett fibrinogént tartalmaz - összeöntésével emberi vérrögöket képzünk. A vérrögökre 50 μΙ urokinázt vagy sztreptokinázt öntünk (50, 100 vagy 1000 egység/ml), majd 20 órai szobahőmérsékleten történő inkubálás közben tanulmányozzuk a vérrögök oldódását. Az inkubálás után a csöveket Beckman Microfuge centrifugán centrifugáljuk. Közben 1 ml-nyi 0,03 m trisz/0,15 M
HU 227 356 Β1
NaCI pufferba gamma-számlálás céljából 25 μΙ Supernate-et adunk. A trombint kihagyva és pufferral helyettesítve 100%-os lízisértéket kapunk. A trombininhibitorokat a fibrinolízissel történő lehetséges kölcsönhatásra az ezeket 1, 5 és 10 pg/ml koncentrációban tartalmazó borítóoldatokkal együtt vizsgáljuk. Az IC50-értékek durva közelítését a kapott pontokból lineáris extrapolációval végezzük egy olyan értékre, mellyel a fibrinolitikus szer egy meghatározott koncentrációja esetén 50%-os lízist kapunk.
Antikoaguláns aktivitás
Anyagok
Kutya plazmát öntudatuknál lévő, keverék vadászkutyákból (mindkét nem, Hazelton LRE, Kalamazzo, Michigan, USA), patkány plazmát altatott, hím Sprague-Dawley patkányokból (Harlan Sprague-Dawley Inc., Indianapolis, Indiana) vettünk 3,8 százalék citrátba történő vénás vérvétellel. Frissen vett ACD emberi vérből I-2 frakcióként az előző módszerek és leírások szerint fibrinogént állítunk elő. Smith, Biochem. J., 185, 1-11 (1980), és Smith, et al., Biochemistry, 11, 2958-2967, (1972). Emberi fibrinogént (98% tiszta/plazminmentes) az American Diagnosticától (Greenwich, Connecticut) szereztünk. Az ACTIN és Tromboplastin koagulációs reagensek és az emberi plazma a Baxter Healthcare Corp., Dade Division (Miami, Florida) cégtől származik. A plazmában lejátszódó vérkoagulációs vizsgálatokra a Parke-Davis (Ann Detroit, Michigan) cégtől vásárolt ökörtrombint használtuk.
Módszerek
Antikoagulációs meghatározások
A koagulációs vizsgálatoknál a korábbról már ismert módszereket alkalmazzuk. Smith et al., Thrombosis Research, 50, 163-174 (1988). Az összes koagulációs vizsgálati mérésnél COAScreener koagulációs berendezést (American LABor, Inc.) használtunk. A protrombin idő (PT) vizsgálatokat úgy végeztük, hogy a tesztplazmához 0,05 ml sóoldatot és 0,05 ml Thromboplastin-C reagenst adtunk. Az aktivált részleges tromboplasztin idő (APTT) vizsgálatoknál a tesztplazma 0,05 ml-ét az ehhez 120 másodperc alatt adott 0,05 ml Actin reagenssel, majd ezt követően hozzáadott 0,05 ml 0,02 M-os CaCI2-dal inkubáltuk. A trombin idő (TT) vizsgálatoknál 0,05 ml tesztplazmához 0,05 ml sóoldatot és 0,05 ml trombint (10 NIH egység/ml) adtunk. Az (I) általános képletű vegyületeket széles koncentrációtartományban az emberi vagy állati plazmához adtuk az APTT, PT és TT vizsgálatokra gyakorolt prolongációs hatás megállapítása céljából. Az egyes vizsgálatoknál a vérrögképződés idejének megkétszerezéséhez szükséges koncentrációkat lineáris extrapolációval kaptuk meg.
Állatok
Hím Sprague-Dawley patkányokat (350-450 gm, Harlan Sprague-Dawley Inc., Indianapolis, Indiana) 20 mg/kg (se.) xilazinnal és 120 mg/kg (se.) ketaminnal altattunk, és 37 °C-os, fűtött vízágyon tartottuk őket.
A nyaki vénába kanült helyeztünk infúzió bevezetése céljából.
Arteriovénás összeköttetéses modell
A bal oldali nyaki vénába és a jobb oldali nyaki artériába 20-20 cm hosszú polietilén PE 60-as csövet vezettünk be. Egy nagyobb, PE 190-es cső 6 cm-es darabját, melynek belsejében 5 cm-es gyapjúszál található, a hosszabb csövek közé csúsztattunk, ezzel bezárva az arteriovénás összeköttetéses kört. A körön 15 percen keresztül vért áramoltattunk át, majd a fonalat óvatosan kiemeltük és megmértük. A nedves fonal súlyát levontuk a vérrög és a fonál együttes súlyából [lásd J. R. Smith, Br. J. Pharmacol., 77, 29 (1982)].
Ha az arteriovénás összeköttetéses modellben a 48. példában előállított vegyületet D-MePhe-Pro-ArgH-val kombináltuk, azt tapasztaltuk, hogy az antitrombotikus képesség állandó intravénás infúzió esetén 9-szer nagyobb volt. A vérrögök tömegének ugyanilyen arányú (körülbelül a kontroll 20%-ára) csökkentésére a 48. példában előállított vegyület a plazma trombin időt körülbelül 3-szorosára hosszabbította meg, míg ez a standard vegyület infúziója során több mint 20-szoros volt. A PT és az APTT csak körülbelül a kontroll 120%áig nőttek (pár másodperc) a 48. példa szerinti vegyület infúziója során.
Az arteriális sérülés FeCI3-modellje
A nyaki artériákat középvonalas hasi oldalon nyaki bemetszéssel izoláltuk. Minden artéria alá termoelemet helyeztünk, és a véredények hőmérsékletét folyamatosan regisztráltuk vonalas diagram készüléken. Minden nyaki artéria köré, közvetlenül a termoelem fölé, hosszában elvágott csődarabkákat (0,058 ID*0,077 ODx4 mm, Baxter Med. Grade Silicone) helyeztünk el. FeCI3-hexahidrátot oldottunk vízben, és a koncentrációt (20%) csak az aktuális FeCI3-tömegre vonatkoztatva fejeztük ki. Az artéria felsértésére és a trombózis kiváltására a csődarabkákba 2,85 μΙ-t pipettáztunk az artéria kimosására a termoelemminta fölé. Az arteriális elzáródást a gyors hőmérséklet-változás jelzi. Az elzáródás! időt percben mértük, mely a FeCI3 beadása és a gyors hőmérséklet-változás között eltelt időt jelenti [lásd K. D. Kurz, Thromb. Rés., 60, 269(1990)].
Spontán trombolízis modell
In vitro adatok alapján arra a következtetésre jutottunk, hogy a peptid trombin inhibitorok gátló hatást fejtenek ki a trombinra és más szerin proteázokra, mint például a plazmin vagy szövet plazminogén aktivátor. Hogy megmondhassuk, hogy a vegyületek a fibrinolízist in vivő gátolják-e, a spontán trombolízis mértékét úgy határoztuk meg, hogy egy ép, jelzett vérrögöt juttattunk a tüdő keringésébe. 1 ml patkányvért gyorsan ökörtrombinnal (4 IU, Parke-Davis) és l125-tel jelzett emberi fibrinogénnel (5 pCi, ICN) kevertünk össze, és azonnal szilasztikus csőbe szívattuk fel, majd 37 °C-on 1 órán át inkubáltuk. Az idős vérrögöt 1 cm-es részekre vágtuk, normál sóoldattal háromszor mostuk, és minden egyes szegmenst gamma-számlálóban mértünk.
HU 227 356 Β1
Egy ismert számlálási értékű szegmenst katéterbe engedtünk, melyet közvetlenül ezután a nyaki vénába ültettünk be. A katéter csúcsát a jobb átrium felé közelítettük, majd a vérrögöt kilökve azt a tüdő vérkeringésébe juttattuk. Egy órával a beültetés után a szívet és a tüdőt eltávol ítottuk, és külön-külön számoltuk. A trombolízist százalékban fejeztük ki, ahol
Trombolízis (%)= ((injektált cpm/tüdő cpm)/injektált cpm)x100
A beültetett vérrög oldódása időfüggőén játszódik le [lásd J. P. Clozel, Cardiovas. Pharmacol., 12, 520 (1988)].
Koagulációs paraméterek
A plazma trombin időt (TT) és az aktivált tromboplasztin időt (APTT) fibrométerrel mértük. A vérmintákat nyaki katéterből vettük, és nátrium-citrátot tartalmazó fecskendőbe gyűjtöttük (3,8%-os nátrium-citrát; 9 rész vérhez 1 rész nátrium-citrát). A TT méréséhez 0,1 ml patkányvért kevertünk össze 0,1 ml sóoldattal és 0,1 ml ökörtrombinnal (30 U/ml, TRIS pufferben; ParkeDavis) 37 °C-on. Az APTT vizsgálathoz 0,1 ml plazmát és 0,1 ml APTT oldatot (Organon Teknika) 5 percig 37 °C-on inkubáltunk, melyhez 0,01 ml 0,025 M CaCI2-ot adtunk hozzá a koaguláció megindítására. Minden vizsgálatot kétszer végeztünk el, és a mérések átlagát vettük.
Biológiai hozzáférhetőségi index
A biológiai aktivitás és a plazma trombin idő (TT) mérésével az ősvegyülettel történő vizsgálatot helyettesítettük, abból a megfontolásból kiindulva, hogy a TT-nél kapott trombininhibíciós növekedés csak az ősvegyülettől származhat. A trombininhibitor TT-re gyakorolt hatásának időbeli lefolyását az orvosság altatott patkányoknak intravénásán, illetve eszméletüknél lévő, éheztetett patkányoknak orálisan történő beadása után állapítottuk meg. A korlátozottan rendelkezésre álló vérmennyiség, valamint a pontok száma miatt - melyekből a kezelés időlefolyását állapítottuk meg, amíg a kapott értékek vissza nem álltak a kezelés előtti értékekre - két patkánypopulációt használtunk fel a kísérletekhez. Mindegyik mintapopuláció váltakozó egymást követő pontokat adott. Az eltelt idő során kapott átlagos TT értéket a görbe alatti területből (AUC) számoltuk ki. A biológiai hozzáférhetőségi értéket az alábbi képlet alapján számoltuk ki, és relatív aktivitás %-ban fejeztük ki. A plazma TT időlefutás-görbéje alatti területet (AUC) megállapítottuk és a dózishoz igazítottuk. Ezt a biológiai hozzáférhetőségi indexet „relatív aktivitás %”-ként nevezzük és a következőképpen számoljuk:
Relatív aktivitás %= (AUC po./AUC iv.)x(iv. dózis/po. dózis)x100
Vegyületek
A vegyületek oldatait mindennap frissen készítettük el normál sóoldattal, és vagy egy adagban fecskendeztük be, vagy infúziósán adtuk be 15 perccel a kísérleti zavarás előtt kezdve és annak teljes ideje alatt - mely az arteriovénás összeköttetéses modell esetében perc, az artériás sérülés FeCI3 modelljénél és a spontán trombózis modellnél pedig 60 perc - folyamatosan. Az egyszeri befecskendezés mennyisége intravénás esetben 1 ml/kg, orális esetben 5 ml/kg, és az infúziós adagolási mennyiség 3 ml/óra.
Statisztika
Az eredményeket középérték +/- standard mérési hibaként adtuk meg. A statisztikusan szignifikáns eltérések detektálását a variancia egyutas analízisével végeztük, majd az eltérő értékek megállapítására Dunnett-tesztet alkalmaztunk. Az egyenlő értékek nullhipotézisének elvetésénél a szignifikanciaszintre p<0,05 teljesül.
Állatok
A hím kutyákat (1,5-2 éves, 12-13 kg súlyú vizslák, Marshall farms, North Rose, New York 14516) éjszakánként éheztetjük és a Purina által igazolt előírt diéta (Purina Mills, St. Louis, Missouri) szerint etetjük az adagolás után 240 perccel. Víz korlátlan mennyiségben áll rendelkezésre. A szoba hőmérsékletét 66-74 °F, relatív nedvességtartalmát 45-50% közötti értéken tartjuk, a világítást reggel 6 és este 6 óra között üzemeltetjük.
Farmakokinetikus modell
A tesztvegyületet közvetlenül a beadás előtt állítjuk elő, steril, 0,9%-os sóoldatban 5 mg/ml-es koncentrációig hígítva. A kutyáknak a tesztvegyületből szájon át egyszeri 2 mg/kg-os dózist adtunk. Vérmintákat egyenként 4,5 ml - az adagolást követő 0,25, 0,5, 0,75, 1,2, 3, 4 és 6 óra eltelte után vettünk a feji vénából, cifráit Vacutainer csövekbe gyűjtöttük, közvetlenül a centrifugálással plazmává történő redukció előttig jégen tároltuk. A plazmamintákat dinitro-fenil-hidrazinnal reagáltatjuk és HPLC-n elemezzük (Zorbax SB-C8 oszlop) az elúciót metanol/500 mM nátrium-acetát - melynek pH-ját foszforsavval 7-re állítjuk be (60/40 tf%) eleggyel végezve. A tesztvegyület plazmakoncentrációját regisztráljuk, és ezt használjuk fel a farmakokinetikus paraméterek - Ke eliminációs állandó, Clt teljes tisztítás, Vq megoszlási térfogat, Tmax maximális plazma tesztvegyület koncentráció elérésének ideje, Cmax a Tmax -hoz tartozó maximális tesztvegyület-koncentráció, t0,5 a plazma élettartamának fele, AUC a görbe alatti terület és F az abszorbeált tesztvegyület frakciójának - kiszámításához.
A koronaér-elzáródás kutyamodellje
A kutyák sebészeti előkészítését és műszerezését Jackson et al., Circulation, 82, 930-940, (1990) szerint végezzük. Keverék kutyákat (6-7 hónapos, mindkét nemű kutyák, Hazelton-LRE, Kalamazzo, Ml, USA) altatunk intravénásán beadott 30 mg/kg-nyi nátrium-pentobarbitallal, inkubálunk és szobai levegővel hűtjük őket. A ki- és belégzett mennyiséget és a légzési értékeket úgy szabályozzuk, hogy a vér PO2-, PCO2- és pH-értéke a normális határértékek között maradjon. Ólom II ECG felvétele céljából bőr alatti tűelektródákat helyeztünk el.
HU 227 356 Β1
A bal nyaki vénát és a szokásos nyaki artériát bal oldali mediolaterális bemetszéssel izoláljuk. Az artériás vérnyomást (ABP) a nyaki artériába helyezett, előkalibrált Millar átalakítóval (MPC-500-as modell, Millar Instruments, Houston, TX, USA) folyamatosan mérjük. 5 A nyaki vénába tűt vezetünk a kísérlet alatti vérvétel céljából. Ezenfelül a két hátsó láb combi vénáiba is tűt vezetünk, melyeken keresztül a tesztvegyületet adagoljuk.
A mellkas bal oldalát az ötödik bordaköznél felnyit- 10 juk, és a szívet perikardiális bölcsőbe helyezzük. A bal circumflex koronaartéria (LCX) 1-2 cm-es darabját az első, fő diagonális ventrikuláris elágazás közelében izoláljuk. Egy 3-4 mm hosszú, 26-os méretű, tűhegyű drót anód elektródot (Teflon®-bevonatú, 30-as méretű 15 ezüstözött rézdrót) az LCX-be helyezünk és érintkezésbe hozunk az artéria belső falával. A stimuláló áramkört a katódnak a bőr alatti részbe juttatásával fejezzük be. Egy állítható műanyag zárószelepet helyezünk az artéria köré az elektróda feletti térségbe. Az 20 LCX-re az anód közelében a koronaér-véráram (CBF) mérésére előkalibrált elektromágneses áramlásmérőt (Carolina Medical Electronics, King, NC, USA) erősítünk. A zárószelepet úgy állítjuk be, hogy az LCX 10 s-os mechanikus szűkítése után megfigyelt hiperé- 25 miás véráramlást 40-50%-ban gátolja. Az összes hemodinamikus és ECG-mérést regisztráljuk, és azokat adatgyűjtő rendszer (M 3000-es modell, Modular Instruments, Malvern, PA, USA) segítségével értékeljük ki.
Vérrögképződési és vegyületadagolási rend
Az LCX belső falának sérülését az anódra adott 100 μΑ-es egyenárammal (DC) idézzük elő. Az áramot 60 percen keresztül tartjuk fenn, majd megszüntetjük attól függetlenül, hogy a véredény elzáródott-e, vagy 35 sem. A vérrögképződés spontán módon folytatódik, míg az LCX teljesen el nem záródik (melyet 0 CBF értékként és az S-T szegmens növekedéseként észlelhetünk). A vegyületadagolást az elzáródást okozó vérrög egy órán át tartó érése után indítottuk meg. A talál- 40 mány szerinti vegyületek - 0,5 és 1 mg/kg/h értékek melletti - 2 órás infúzióját valamely trombolitikus szer (így például szövet plazminogén aktivátor, sztreptokináz, APSAC) infúziójával egyidejűleg indítottuk meg. A reperfúziót a tesztvegyület adagolása után három órán át folytattuk. A koronaartériák sikeres trombolízis utáni újraelzáródása, melyet 0 CBF értékként definiáltunk, 30 perc vagy annál hosszabb idő alatt következett be.
Hematológiai és vágási vérzési idő megállapítása
Ép vérsejtek beütésszámát, hemoglobin- és hematokritértékét határozzuk meg 40 μΙ 3,8%-os citrátos (1 rész citrát, 9 rész vér) vérmintában hematológiás elemzőberendezéssel (Cell-Dyn 900, Sequoia-Turner, Mount-View, CA, USA). Fogíny vágásos vérzési időket állapítottunk meg Simplate II vérzési idő műszerrel (Organon Teknika, Durham, NC, USA). A készülék két vízszintes bemetszést ejtett a kutya alsó vagy fölső állkapcsának ínyén. Mindegyik vágás 3 mm széles és 2 mm mély volt. A bemetszés után stopperrel mértük, hogy a vérzés meddig észlelhető. A sebből szivárgó vért gyapjúronggyal itattuk fel. A vágási vérzési idő a bemetszéstől a vérzés elállásáig eltelt idő. A vérzési időket közvetlenül a tesztvegyület beadása előtt (0 perc), 60 percnyi infúzió után, a tesztvegyület adagolásának végén (120 perc) és a kísérlet végén mértük.
A szignifikanciaszint megállapítására az összes adatot egyutas variancia analízissel (ANOVA) és ezt követően Student-Neuman-Kuels post hoc t-teszttel értékeltük ki. A kísérletek közti időpontok szignifikáns eltéréseinek megállapítására ismételt méréses ANOVA-t alkalmaztunk. Az értékeket legalább p<0,05 szint esetén mondtuk statisztikusan eltérőnek. Minden értéket középérték +/- standard mérési hiba formában adtunk meg. Minden mérést az American Physiological Society vezérelvei szerint végeztünk el. A módszerekre vonatkozó további részletekért lásd Jackson et al., J. Cardiovasc. Pharmacol., 21,587-599 (1993).
2. számú táblázat Emberi plazma antikoaguláció
| Példa száma | 2*vérrögképződési idő | Orális/intravénás aktivitás (%) (patkány) | ||
| TT | APTT | PT | ||
| 1. | 250 | nem mért | nem mért | 8 |
| 2. | 170 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 3. | 590 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 4. | 230 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 5. | 30 000 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 6. | 390 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 7. | 490 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 8. | 130 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 9. | >91 000 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 10. | 420 | nem mért | nem mért | nem mért |
HU 227 356 Β1
2. táblázat (folytatás)
| Példa száma | 2xvérrögképződési idő | Orális/intravénás aktivitás (%) (patkány) | ||
| TT | APTT | PT | ||
| 11. | 8 800 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 12. | 1 700 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 13. | 660 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 14. | 21 000 | nem mért | nem mért | nem mért |
| 15. | 9 | 89 | 200 | 4 |
| 16. | 650 | 8 600 | 8 500 | nem mért |
| 17. | 26 | 370 | 400 | 15 |
| 18. | 7 | 79 | 170 | 12 |
| 19. | 58 | 300 | 540 | nem mért |
| 20. | 62 | 550 | 600 | 23 |
| 21. | 160 | 2 000 | 1 000 | nem mért |
| 22. | 170 | 2 300 | 1 000 | nem mért |
| 23. | 7 | 86 | 120 | 12 |
| 24. | 1 000 | 25 900 | 25 000 | nem mért |
| 25. | 1 430 | 34 600 | 40 400 | nem mért |
| 26. | 37 | 870 | 750 | NC1 |
| 27. | 1 940 | 27 800 | 27 000 | nem mért |
| 28. | 520 | 8 100 | 8 300 | nem mért |
| 29. | 750 | 9 800 | 15 800 | nem mért |
| 30. | 1 000 | 14 000 | 14 400 | nem mért |
| 31. | 10 800 | 34 500 | 30 000 | nem mért |
| 32. | 3 100 | 28 500 | 47 800 | nem mért |
| 33. | 18 900 | 59 300 | 70 900 | nem mért |
| 34. | 530 | 4 900 | 5 500 | nem mért |
| 35. | 4 500 | 50 400 | 78 400 | nem mért |
| 36. | 7 700 | >91 000 | >91 000 | nem mért |
| 37. | >9 000 | >9 000 | >9 000 | nem mért |
| 38. | 540 | 6 100 | 11 000 | nem mért |
| 39. | 5 300 | 69 200 | 78 600 | nem mért |
| 40. | 35 100 | >91 000 | >91 000 | nem mért |
| 41. | 82 200 | >91 000 | >91 000 | nem mért |
| 42. | 20 | 270 | 320 | NC2 |
| 43. | 280 | 1 100 | 930 | nem mért |
| 44. | 4 | 100 | 170 | nem mért |
| 45. | 8 | 200 | 330 | NC2 |
| 46. | 2 | 67 | 77 | NC3 |
| 47. | 12 | 140 | 270 | NC2 |
| 48. | 2 | 33 | 59 | 22 |
| 49. | 5 | 130 | 130 | NC2 |
| 50. | 35 | 460 | 420 | nem mért |
| 51. | 2 | 48 | 110 | nem mért |
| 52. | 6 | 80 | 170 | nem mért |
| 53. | 1 400 | 33 800 | 34 500 | nem mért |
HU 227 356 Β1
2. táblázat (folytatás)
| Példa száma | 2><vérrögképződési idő | Orális/intravénás aktivitás (%) (patkány) | ||
| TT | APTT | PT | ||
| 54. | 140 | 3 300 | 2 200 | nem mért |
| 55. | 55 800 | >91 000 | >91 000 | nem mért |
| 56. | 5 | 160 | 200 | nem mért |
| 57. | 14 | 360 | 340 | nem mért |
| 58. | 710 | 14 300 | 11 400 | nem mért |
| 59. | 420 | 5 500 | 7 000 | nem mért |
| 60. | 3 200 | 22 200 | 77 700 | nem mért |
| 61. | 45 | 679 | 756 | nem mért |
| 62. | 54 | nem mért | ||
| 63. | 680 | nem mért | ||
| 64. | 23 | 900 | 650 | NC3 |
| 65. | 1 | 48 | 85 | nem mért |
| 66. | 7,9 | 180 | 270 | nem mért |
| 67. | 34 | 1 800 | 1 300 | nem mért |
| 68. | 4 | 49 | 190 | nem mért |
| 69. | 5 | 110 | 220 | nem mért |
| 70. | 2 | 160 | 180 | nem mért |
| 71. | 1 | 89 | 150 | NC1 |
| 72. | 1 | 160 | 160 | NC1 |
| 73. | 21 | 340 | 330 | nem mért |
| 74. | 20 | 420 | 350 | nem mért |
| 75. | nem mért | |||
| 76. | 29 | 490 | 560 | nem mért |
| 77. | 53 | 1 600 | 890 | nem mért |
| 78. | 46 | 430 | 760 | nem mért |
| 79. | 140 | 1 700 | 2 400 | nem mért |
| 80. | 4 | 40 | 130 | nem mért |
| 81. | 110 | 1 500 | 2 700 | nem mért |
| 82. | 130 | 3 800 | 3 000 | nem mért |
| 83. | 91 | 1 000 | 1 300 | nem mért |
| 84. | 110 | 1 500 | 1 900 | nem mért |
| 85. | 4,9 | 100 | 197 | nem mért |
| 86. | 4 | 81 | 180 | nem mért |
| 87. | 9 | 260 | 310 | nem mért |
| 88. | 4 | 100 | 200 | nem mért |
| 89. | 570 | 51 000 | 37 000 | nem mért |
| 90. | 330 | 14 500 | 14 600 | nem mért |
| 91. | 63 | 3 000 | 3 500 | nem mért |
| 92. | 8,9 | 210 | 340 | nem mért |
NC1 jelentése: a vizsgálatot nem fejeztük be, alacsony vagy nagyon alacsony aktivitásértékeket figyeltünk meg 20 mg/kg orális adagolás esetén
NC2 jelentése: a vizsgálatot nem fejeztük be, alacsony vagy nagyon alacsony aktivitásértékeket figyeltünk meg 60 mg/kg orális adagolás esetén
NC3 jelentése: a vizsgálatot nem fejeztük be, alacsony vagy nagyon alacsony aktivitásértékeket figyeltünk meg 50 mg/kg orális adagolás esetén
Claims (19)
1. (I) általános képletű vegyületek, ahol
X jelentése homoprolinilgyök,
Rm-(CH2)g-NH-CH2-C(O), (a), (b), (e) vagy (f) általános képletű csoport, ahol
Rd jelentése karboxi- vagy metil-szulfonil-csoport,
Rc 1-10 szénatomos alkilcsoport,
T 3-8 szénatomos cikloalkil-, 1-8 szénatomos alkilcsoport, (g) vagy (h) általános képletű csoport, a értéke 0, 1 vagy 2,
Q jelentése hidroxi-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy -NH-A általános képletű csoport, és
A hidrogénatom, R”SO2-, R”OC(O)-, R”C(O)vagy -(CH2)g-Rm általános képletű csoport, g értéke 1,2 vagy 3,
R’ hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport,
R” 1-4 szénatomos alkil-, —(CH2)d—Rm vagy olyan arilcsoport, ahol az arilcsoport 9 vagy 10 tagú, szubsztituált kondenzált biciklusos aromás heterociklusos csoport, mely egy nitrogénatomot tartalmaz, és ahol a nitrogénatom 1-4 szénatomos alkilcsoporttal lehet helyettesítve,
Rm -COOH vagy -SO2(1-4 szénatomos)-alkilcsoport, d értéke 1,2 vagy 3, és
Z hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy hidroxicsoport,
Y (i), (j), (k) vagy (I) általános képletű csoport, ahol
R9 -(CH2)p-L-(CH2)q-T általános képletű csoport,
RP hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkil- vagy -(CH2)p-L-(CH2)q-T’ általános képletű csoport, ahol p értéke 0, 1 vagy 2, L jelentése kötés vagy -O-atom, q értéke 0,1 vagy 2 és Γ jelentése fenil- vagy naftilcsoport,
RV -CH2- csoport,
Rz, RV csoporttal és a három, kapcsolódó szénatommal együtt telített, 5-8 tagú karbociklusos gyűrűt alkot, r értéke 1,2 vagy 3, és
G jelentése -(CH2)S-R általános képletű csoport, ahol s értéke 0-5, -CH=CH-(CH2)t-R általános képletű csoport, ahol t értéke 0-3, vagy
G jelentése (m), (n), (o), (p), (q) (r), (s), (t) vagy (u) általános képletű csoport, ahol
D és E egymástól függetlenül N-atom vagy CH-csoport,
M jelentése S- vagy O-atom, k értéke 0 vagy 1, és
R jelentése -NH2, -C(=NH)-NH2 (v),
-C(=NOH)-NH2 (z) vagy -NH-C(=NH)-NH2 (x) csoport, vagy
G jelentése (y) vagy (aa) képletű csoport, és ahol az (m), (r) és (s) általános képletű aromás vagy heteroaromás gyűrűk egyébként szubsztituálatlan szénatomjai fluoratommal lehetnek szubsztituálva, és ahol az Y csoportok jelentéseiben szereplő csillag (L)-konfigurációjú királis centrumot jelent, és ahol az X csoportok jelentéseiben szereplő csillag (D)- vagy (DL)-konfigurációjú királis centrumot jelent, és ahol az X csoportok jelentéseiben szereplő # L-konfigurációjú királis centrumot jelent, vagy ezen vegyületek gyógyászatilag elfogadható sói; vagy ezen vegyületek vagy sóik gyógyászatilag elfogadható szolvátjai;
azzal a feltétellel, hogy A hidrogénatomtól vagy t-butil-oxi-karbonil-csoporttól eltérő, ha G jelentése -(CH2)s-NH-C(NH)NH2 csoport, Y szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom és T jelentése (g) általános képletű csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy R aminocsoporttól vagy guanidinocsoporttól eltérő, ha r=1 és s=0, továbbá azzal a feltétellel, hogy A hidrogénatomtól, metil-szulfonil-csoporttól vagy -(CH2)g-Rm csoporttól eltérő, ha G jelentése -(CH2)S-R általános képletű csoport, melyben R jelentése -C(=NH)-NH2 csoport, Y (j) általános képletű szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom, R’ hidrogénatom, T ciklohexilcsoport, és Q jelentése -NH-A általános képletű csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy A jelentése R”SO2 csoporttól eltérő, ha G jelentése (p) képletű csoport, T jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport, (g) vagy (h) képletű csoport, és Q jelentése -NH-A csoport;
továbbá azzal a feltétellel, hogy ha X jelentése D-fenil-alanil-csoport és Y jelentése szubsztituálatlan prolinilcsoport, azaz RP hidrogénatomot jelent, akkor
a) G jelentése -CH=CH-CH2-NH-C(NH)-NH2 csoporttól eltérő, ha r értéke 1; és
b) G jelentése 4-fenil-NH-C=(NH)NH2 csoporttól eltérő, ha r értéke 1 vagy 2;
továbbá azzal a feltétellel, hogy ha X jelentése T-(CH2)a-C(R’)(Q)-C(O)-csoport és T jelentése ciklohexilcsoport,
R’jelentése H-atom, és
G jelentése -(CH2)S-R csoport, akkor
a) ha Y jelentése azetidin-2-karbonil-csoport vagy szubsztituálatlan prolinilgyök (RP jelentése H-atom),
R jelentése -C(NH)NH2 vagy -NH-C(NH)-NH2 csoport és (CH2)r(CH2)s lánc 2-6 szénatomos alkiléncsoportot jelent, akkor Q olyan -NH-A-csoporttól eltérő jelentésű, ahol A jelentése
a) H-atom vagy metil-szulfonil-csoport vagy b) -(CH2)g-COOH csoport; és
b) ha Y azetidin-2-karbonil- vagy szubsztituálatlan prolinilcsoport (RP jelentése H-atom), és
R jelentése -NH-C(NH)-NH2 csoport, a (CH2)r-(CH2)s lánc 2-6 szénatomos alkiléncsoportot jelent és Q jelentése -NH-A csoport, akkor A jelentése R”OC(O) csoporttól eltérő, ahol R” jelentése terc-butilcsoport;
továbbá azzal a feltétellel, hogy az (I) általános képletű vegyület eltér (i) N-[4-[(amino-imino-metiI)-amino]-butiI]-1 -[N-(metil-szulfonil)-D-fenil-alanil]-L-prolinamidtól és
HU 227 356 Β1 (ü) N-[[1 -(amino-imino-metil)-4-piperidinil]-metil]-1 D-fenil-alanil-L-prolinamidtól;
továbbá azzal a feltétellel, hogy ha Y azetidin-2karbonil- vagy szubsztituálatlan prolinilcsoport (RP jelentése H-atom), és
G jelentése 4-fenil-C(NH)NH2, 4-fenilNH-C(NH)NH2 csoport; olyan (p) általános képletű csoport, ahol R jelentése (v) csoport; (y) csoport; olyan (m) általános képletű csoport, ahol k értéke 0 és R jelentése NH2 csoport; vagy (t) vagy (n) általános képletű csoport, ahol a két utóbbi csoportban R jelentése -C(NH)NH2 csoport, ha k értéke 0 vagy 1, illetve R jelentése -NH-C(NH)NH2 csoport, ha k értéke 0, akkor
a) ha X jelentése T-(CH2)a-C(R’)(Q)-C(O)-csoport,
R’ H-atom és
Q NH-A csoportot jelent, ahol A jelentése H-atom,
R”SO2-, R”OC(O)-csoport (ahol R” 1-4 szénatomos alkilcsoportot jelent),
R”C(O)-csoport [ahol R” jelentése 1-4 szénatomos alkil-vaqy-(CH2)dCOOH csoport (ahol d értéke 1 vaqy 2)] vagy-(CH2)g-COOH, akkor a T-(CH2)a csoport jelentése (i) 1-4 szénatomos alkilcsoporttól, (ii) -(CH2)a-C5-C6 cikloalkilcsoporttól, (iii) -(CH2)a-fenil-csoporttól (ahol a fenilcsoport adott esetben 1-4 szénatomos alkilcsoporttal helyettesítve lehet), (iv) —CH2)a-fenil-csoporttól (ahol a értéke 0 vagy 1 és a fenilcsoport hidroxi- vagy 1-4 szénatomos alkoxicsoporttal van helyettesítve), vagy (v) -(CH2)a-naftil-csoporttól (ahol a értéke 0 vagy 1) eltérő; és
b) X jelentése homoprolinil- vagy (b) csoporttól eltérő; továbbá azzal a feltétellel, hogy ha Y azetidin-2karbonil-csoport vagy szubsztituálatlan prolinilgyök (RP jelentése H-atom), r értéke 1,
G 4-fenil-R vagy 4-ciklohexil-R általános képletű csoport, ahol
R jelentése -NH2, -C(=NH)NH2, -C(=NOH)NH2, -NH-C(=NH)NH2; vagy
G jelentése 4-piperidini l-R vagy 4-d i h id ropiridil-R általános képletű csoport, ahol R jelentése -C(=NH)NH2 vagy-C(=NOH)NH2;
akkor
a) ha X jelentése T-(CH2)a-C(R’)Q-C(O)- és R’ H-atom, akkor Q hidroxi-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy -NH-A csoporttól eltérő jelentésű, ezekben a csoportokban
A jelentése (i) H-atom;
(ii) R”C(O)-csoport, ahol R” 1-4 szénatomos alkilcsoport;
(iii) R”OC(O)-csoport, ahol R” 1-4 szénatomos alkil-vagy -(CH2)d-COOH;
(iv) R”SO2-, ahol R” 1-4 szénatomos alkil- vagy -(CH2)d-COOH; és
b) ha X jelentése
Rd-(CH2)2-CH[N(H)C(O)Rc]-C(O)- és Rd karboxicsoport, akkor Rc jelentése 1-6 szénatomos alkilcsoporttól eltérő jelentésű.
2. (I) általános képletű vegyületek, sóik vagy szolvátjaik, ahol
X jelentése homoprolinilgyök, (a), (b) általános képletű csoport, ahol
T 3-8 szénatomos cikloalkil-, 1-8 szénatomos alkilcsoport, (g) vagy (h) általános képletű csoport, a értéke 0 vagy 1,
Q jelentése hidroxi-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy -NH-A általános képletű csoport, és
A hidrogénatom, R”SO2-, R”OC(O)-, R”C(O)vagy-(CH2)g-COOH általános képletű csoport, g értéke 1, 2 vagy 3,
R’ hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport,
R” jelentése az 1. igénypont szerinti, d értéke 1, 2 vagy 3, és
Z hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy hidroxicsoport,
Y (i), (j), (k) vagy (I) általános képletű csoport, ahol
R9 -(CH2)p-L-(CH2)g-T általános képletű csoport,
RP hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkil- vagy -(CH2)p-L-(CH2)g-T általános képletű csoport, ahol p értéke 0, 1 vagy 2, L jelentése kötés vagy -0-, q értéke 0, 1 vagy 2, és T jelentése fenilcsoport,
Ry -CH2-csoport,
Rz, Ry csoporttal és a három, kapcsolódó szénatommal együtt telített, 5-8 tagú karbociklusos gyűrűt alkot, r értéke 1 vagy 2, és
G jelentése -(CH2)S-R általános képletű csoport, ahol s értéke 0-5, -CH=CH-(CH2)t-R általános képletű csoport, ahol t értéke 0-3, vagy
G jelentése (m), (n), (o), (p) vagy (q) általános képletű csoport, ahol
D és E egymástól függetlenül N vagy CH-csoport,
M jelentése S- vagy O-atom, k értéke 0 vagy 1, és
R jelentése -NH2, -C(=NH)-NH2, -C(=NOH)-NH2 vagy-NH-C(=NH)-NH2 csoport, és ahol az Y csoportok jelentéseiben szereplő csillag (L)-konfigurációjú királis centrumot jelent, és ahol az X csoportok jelentéseiben szereplő csillag (D)- vagy (DL)-konfigurációjú királis centrumot jelent, és ahol az X csoportok jelentéseiben szereplő # L-konfigurációjú királis centrumot jelent, vagy ezen vegyületek gyógyászatilag elfogadható sói; vagy ezen vegyületek vagy sóik gyógyászatilag elfogadható szolvátjai;
azzal a feltétellel, hogy A hidrogénatomtól vagy t-butil-oxi-karbonil-csoporttól eltérő, ha G jelentése -(CH2)s-NH-C(NH)NH2 csoport, Y szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom és T jelentése (g) általános képletű csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy R aminocsoporttól vagy guanidinocsoporttól eltérő, ha r=1 és s=0, továbbá azzal a feltétellel, hogy A hidrogénatomtól, metil-szulfonil-csoporttól vagy -(CH2)g-Rm csoporttól eltérő, ha G jelentése -(CH2)S-R általános képletű csoport, melyben R jelentése -C(=NH)-NH2 vagy
-NHC(=NH)-NH2 csoport, Y (j) általános képletű
HU 227 356 Β1 szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom, R’ hidrogénatom, T ciklohexilcsoport, és Q jelentése -NH-A általános képletű csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy R”SO2 jelentése aril-szulfonil-csoporttól eltérő, ha G jelentése -(CH2)s-R általános képletű csoport, melyben R -NH-C(=NH)-NH2 csoport, Y szubsztituálatlan prolinilgyök, azaz RP hidrogénatom és Q jelentése -NH-A csoport;
továbbá azzal a feltétellel, hogy A jelentése R”SO2 csoporttól eltérő, ha G jelentése (p) képletű csoport, T jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport, (g) vagy (h) képletű csoport, és Q jelentése -NH-A csoport, továbbá azzal a feltétellel, hogy ha X jelentése D-fenil-alanil-csoport és Y jelentése szubsztituálatlan prolinilcsoport, azaz RP hidrogénatomot jelent, akkor
a) G jelentése -CH=CH-CH2-NH-C(NH)-NH2 csoporttól eltérő, ha r értéke 1; és
b) G jelentése 4-fenil-NH-C=(NH)NH2 csoporttól eltérő, ha r értéke 1 vagy 2;
továbbá azzal a feltétellel, hogy ha X jelentése T-(CH2)a-C(R’)(Q)-C(O)-csoport és T jelentése ciklohexilcsoport,
R’ jelentése H-atom, és
G jelentése -(CH2)S-R csoport, akkor
a) ha Y jelentése azetidin-2-karbonil-csoport vagy szubsztituálatlan prolinilgyök (RP jelentése H-atom),
R jelentése -C(NH)NH2 vagy -NH-C(NH)-NH2 csoport és (CH2)r(CH2)s lánc 2-6 szénatomos alkiléncsoportot jelent, akkor Q olyan -NH-A-csoporttól eltérő jelentésű, ahol A jelentése
a) H-atom vagy metil-szulfonil-csoport vagy b) -(CH2)g-COOH csoport; és
b) ha Y azetidin-2-karbonil- vagy szubsztituálatlan prolinilcsoport (RP jelentése H-atom), és
R jelentése -NH-C(NH)-NH2 csoport, a (CH2)r(CH2)s lánc 2-6 szénatomos alkiléncsoportot jelent és Q jelentése -NH-A csoport, akkor A jelentése R”OC(O) csoporttól eltérő, ahol R” jelentése terc-butilcsoport;
továbbá azzal a feltétellel, hogy ha Y azetidin-2karbonil- vagy szubsztituálatlan prolinilcsoport (RP jelentése H-atom), és
G jelentése 4-fen il-C(N H)N H2,4-fenil-NH-C(NH)NH2 csoport, piperidinil-C(NH)NH2 csoport vagy ciklohexil(CH2)k-R általános képletű csoport, ahol R jelentése -C(NH)NH2 csoport, ha k értéke 0 vagy 1, illetve R jelentése -NH-C(NH)NH2 csoport, ha k értéke 0, akkor
a) ha X jelentése T-(CH2)a-C(R’)(Q)-C(O)-csoport,
R’ H-atom és
Q NH-A csoportot jelent, ahol A jelentése H-atom,
R”SO2-, R”OC(O)-csoport (ahol R” 1-4 szénatomos alkilcsoportot jelent),
R”C(O)-csoport [ahol R” jelentése 1-4 szénatomos alkil-vagy-(CH2)dCOOH csoport (ahol d értéke 1 vagy 2)] vagy jelentése -(CH2)g-COOH, akkor a T-(CH2)a csoport jelentése (i) 1-4 szénatomos alkilcsoporttól, (ii) -(CH2)a-C5-C6 cikloalkilcsoporttól, (iii) —(CH2)a-fenil-csoporttól (ahol a fenilcsoport adott esetben 1-4 szénatomos alkil-, hidroxi- vagy alkoxicsoporttal helyettesítve lehet), (iv) —(CH2)a-naftil-csoporttól (ahol a értéke 0 vagy 1) eltérő; és
b) X jelentése homoprolinil- vagy (b) csoporttól eltérő; továbbá azzal a feltétellel, hogy ha Y azetidin-2-karbonil-csoport vagy szubsztituálatlan prolinilgyök (RP jelentése H-atom), r értéke 1,
G 4-fenil-R vagy 4-ciklohexil-R általános képletű csoport, ahol
R jelentése -NH2, -C(=NH)NH2, -C(=NOH)NH2, -NH-C(=NH)NH2; vagy
G jelentése 4-piperidinil-R vagy 4-dihidropiridinil-R általános képletű csoport, ahol R jelentése -C(=NH)NH2 vagy -C(=NOH)NH2;
akkor ha X jelentése T-(CH2)a-C(R’)Q-C(O)- és R’ H-atom, akkor Q hidroxi-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy -NH-A csoporttól eltérő jelentésű, ezekben a csoportokban
A jelentése (i) H-atom;
(ii) R”C(O)-csoport, ahol R” 1-4 szénatomos alkilcsoport;
(iii) R”OC(O)-csoport, ahol R” 1-4 szénatomos alkil-vagy-(CH2)d-COOH;
(iv) R”SO2-, ahol R” 1-4 szénatomos alkil- vagy -(CH2)d-COOH.
3. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol
X jelentése homoprolinilgyök,
Rm-(CH2)g-NH-CH2-C(O)-, (a), (b), (e) vagy (f) általános képletű csoport, ahol
Rd jelentése karboxi- vagy metil-szulfonil-csoport,
Rc 1-10 szénatomos alkilcsoport,
T 3-8 szénatomos cikloalkil-, 1-8 szénatomos alkilcsoport, (g) vagy (h) általános képletű csoport, a értéke 0, 1 vagy 2,
Q jelentése -NH-A általános képletű csoport, és
A hidrogénatom, R”C(O)- vagy -(CH2)g-Rm általános képletű csoport, g értéke 1, 2 vagy 3,
R’ hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport,
R” -(CH2)d-Rm általános képletű csoport,
Rm -COOH vagy -SO2(1-4 szénatomos)-alkilcsoport, d értéke 1, 2 vagy 3, és
Z hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi- vagy hidroxicsoport,
Y (i), (j), (k) vagy (I) általános képletű csoport, ahol
R9 -(CH2)p-L-(CH2)g-T általános képletű csoport,
RP hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkil- vagy -(CH2)p-L-(CH2)q-T’ általános képletű csoport, ahol p értéke 0, 1 vagy 2, L jelentése kötés vagy -0-, q értéke 0, 1 vagy 2, és Γ jelentése fenil- vagy naftilcsoport,
RV -CH2-csoport,
Rz, R7 csoporttal és a három, kapcsolódó szénatommal együtt telített, 5-8 tagú karbociklusos gyűrűt alkot,
HU 227 356 Β1 r értéke 1,2 vagy 3, és
G jelentése -(CH2)S-R általános képletű csoport, ahol s értéke 0-5, -CH=CH-(CH2),-R általános képletű csoport, ahol t értéke 0-3, vagy
G jelentése (m), (n), (o), (p), (q), (r), (s), (t) vagy (u) általános képletű csoport, ahol
D és E egymástól függetlenül N-atom vagy CH-csoport,
M jelentése S- vagy O-atom, k értéke 0 vagy 1, és
R jelentése -C(=NOH)-NH2 csoport, vagy
G jelentése (y) képletű csoport, és ahol az (m), (r) és (s) általános képletű aromás vagy heteroatomás gyűrűk egyébként szubsztituálatlan szénatomjai fluoratommal lehetnek szubsztituálva, és ahol az Y csoportok jelentéseiben szereplő csillag (L)-konfigurációjú királis centrumot jelent, és ahol az X csoportok jelentéseiben szereplő csillag (D)- vagy (DL)-konfigurációjú királis centrumot jelent, és ahol az X csoportok jelentéseiben szereplő # L-konfigurációjú királis centrumot jelent, vagy ezen vegyületek gyógyászatilag elfogadható sói; vagy ezen vegyületek vagy sóik gyógyászatilag elfogadható szolvátjai.
4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti vegyület vagy annak sója vagy szolvátja, ahol az „alkil” kifejezés önmagában vagy más szubsztituensben metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, η-butil-, tercbutil-, izobutil- és szekunder butilcsoportot jelent, a „perfluor-alkil” kifejezés önmagában vagy más szubsztituensben trifluor-metil-, perfluor-etil-, perfluorη-propil-, perfluor-izopropil-, perfluor-n-butil-, perfluorterc-butil-, perfluor-izobutil- vagy perfluor-szek-butilcsoportot jelent, a „3-8 szénatomos cikloalkilcsoport” jelentése ciklopropil-, metil-ciklopropil-, ciklobutil-, ciklopentil-, ciklohexil-, 4-metil-ciklohexil- vagy ciklooktilcsoport, a „halogénatom” klór-, fluor-, bróm- vagy jódatomot jelent, az „5 vagy 6 tagú heterociklusos gyűrű” furil-, tienil-, pirrolil-, pirazolil-, oxazolil-, izoxazolil-, tiazolil-, izotiazolil-, piranil-, piridinil-, pirimidinil-, pirazinil-, oxazinilvagy tiazinilcsoportot jelent, a „9 vagy 10 tagú heterociklusos gyűrű” jelentése indolil-, benzotienil-, benzofuril-, benzoxazolil-, benzoizoxazolil-, benzopirazolil-, kinolinil-, izokinolinil-, benzimidazolil- vagy benzotiazolilcsoport, valamint ahol az Ar vagy R” jelentésénél felsorolt aromás vagy heteroaromás csoportok egymástól függetlenül szubsztituálatlanok vagy egy vagy két, stabil szerkezetet biztosító szubsztituenst viselnek, melyek jelentése egymástól függetlenül halogénatom, hidroxi-, 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi-, amino-, (-NH2), mono(1-4 szénatomos alkil)-amino-, -(CH2)jCOOH-, merkapto-, —S(O)h(1—4 szénatomos alkil)-, -NHS(O)h(1-4 szénatomos alkil)-, -NHC(O)(1-4 szénatomos alkil)-, -S(O)hNH2, -S(O)hNH(1-4 szénatomos alkil)- vagy -S(O)hN(1-4 szénatomos alkil)2-csoport, ahol h jelentése 0, 1 vagy 2, és j jelentése 0, 1,2, 3 vagy 4.
5. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti (I) általános képletű vegyület vagy annak sója vagy szolvátja, ahol
X jelentése (kk) általános képletű csoport, homoprolinil-, 1- vagy 3-Tiq- vagy 1- vagy 3-Piq-csoport, és
Y jelentése prolinilcsoport,
Q jelentése NHA-csoport, ahol
A jelentése hidrogénatom vagy R”SO2-csoport,
R’jelentése hidrogénatom,
Z jelentése hidrogénatom,
B jelentése hidrogénatom, és
R jelentése guanidino- vagy amidocsoport, és
R” az 1. igénypontban megadott.
6. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti (I) általános képletű vegyület vagy annak sója vagy szolvátja, ahol
G jelentése 4-amidino-fenil-csoport.
7. Az 1., 2. vagy 3. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület vagy annak sója vagy szolvátja, ahol
X jelentése (a) általános képletű csoport, ahol
T jelentése ciklohexilcsoport, a jelentése 1,
R’jelentése hidrogénatom, és
Q jelentése -NH-A képletű csoport, ahol
A jelentése hidrogénatom, R”SO2 vagy -(CH2)g-COOH csoport, és
R” az 1. igénypont szerinti.
8. A 7. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület vagy annak sója vagy szolvátja, ahol
A jelentése R”SO2 csoport, és
R” jelentése etilcsoport.
9. A 7. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület vagy annak sója vagy szolvátja, ahol
A jelentése -(CH2)g-COOH csoport, és g jelentése 1.
10. Az 1-4. vagy 7-9. igénypontok bármelyike szerinti vegyület vagy annak sója vagy szolvátja, ahol
Y jelentése (L)-prolinil-, (S)-cisz-oktahidro-IH-indol2-karbonil- vagy N-(2-fenil-etil)-glicil-csoport.
11. Az (I) általános képlet körébe tartozó (la) általános képletű - ahol a benzamidingyűrű szubsztituálatlan vagy egy vagy két fluorszubsztituenst visel;
(Ib) általános képletű vagy (le) általános képletű, ahol
D jelentése nitrogénatom vagy CH-csoport, és
X jelentése az 1-5., illetve 7-9. igénypontokban megadottak közül bármelyik, vegyületek vagy azok gyógyászatilag elfogadható sója vagy szolvátjai.
12. A 11. igénypont szerinti vegyület vagy annak sója vagy szolvátja, mely (la) általános képletű, ahol a benzamidingyűrű szubsztituálatlan.
13. A 11. vagy 12. igénypont szerinti vegyület vagy annak sója vagy szolvátja, ahol
X jelentése (a) általános képletű csoport, ahol
R’jelentése hidrogénatom, a jelentése 1,
HU 227 356 Β1
T jelentése ciklohexil- vagy fenilcsoport, és
Q jelentése -NH-A képletű csoport, ahol
A jelentése hidrogénatom, etil-szulfonil- vagy karboxi-metil-csoport.
14. Az 1. igénypont oltalmi körébe tartozó vegyület, mely
a) N-{[4-(amino-imino-metiI)-feηiI]-métiI}-1 {[(4aS,8aS)-dekahidro-1-(R)-izokinolinil]-karbonil}-Lprolinamid,
b) N-(etil-szulfonil)-D-fenil-alanil-N-{[4-(aminoimino-metil)-fenil]-metil}-L-prolinamid,
c) (S-cisz)-N-{[4-(amino-imino-metiI)-fenil]-metiI}-1 [N-(etil-szulfonil)-D-fenil-glicil]-oktahidro-1 H-indol-2karboxamid,
d) (S-cisz)-N-{[4-(am i no-i mi no-meti I )-feni l]-metil}-1 [N-(etil-szulfonil)-D-fenil-alanil]-oktahidro-1 H-indol-2karboxamid,
e) N-(karboxi-metil)-D-fenil-alanil-N-{[4-(aminoimino-metil)-fenil]-metil}-L-prolinamid,
f) (S-cisz)-N-{[4-(amino-imino-metiI)-fenil]-metiI}-1 [N-(karboxi-metil )-D-ciklohexil-alanil]-oktahid ro-1 Hindol-2-karboxamid,
g) N-(karboxi-metiI)-D-ciklohexil-alanil-N-{[ 1 -(aminoimino-metil)-hexahidropiridin-4-il]-metil}-L-prolinamid,
h) N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N{[5-(amino-imino-metil)-tiofén-2-il]-metil}-L-prolinamid,
i) N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N-{[5-(aminoimino-metil)-piridin-2-il]-metil}-L-prolinamid,
j) N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N-{[5-(aminoim ino-metil )-1,2,3,4-tetrahid ropi rid in-2-il]-metil}-Lprolinamid,
k) N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N-{[6-(aminoimino-metil)-piridazin-3-il]-metil}-L-prolinamid,
l) N-(karboxi-metiI)-D-ciklohexil-alanil-N-{[1 -(aminoim ino-metil )-1,2,3,6-tetrahid ropi rid in-4-il]-metil}-Lprolinamid,
m) N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N-{[4-(aminoimino-metil)-2-fluor-fenil]-metil}-L-prolinamid,
n) N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N-{[4-(aminoimino-metil)-2,6-difluor-fenil]-metil}-L-prolinamid,
o) N-(etil-szulfonil)-D-ciklohexil-alanil-N-{[4-(aminoimino-metil)-fenil]-metil}-L-prolinamid,
p) N-(karboxi-metil)-D-homofenil-alanil-N{[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil}-L-prolinamid,
q) N-(karboxi-metil)-D-homociklohexil-alanil-N{[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil}-L-prolinamid és
r) N-(metil-szulfonil-acetil)-L-ciklohexil-alanil-N{[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil}-L-prolinamid, annak sója vagy szolvátja.
15. Az 1. igénypont oltalmi körébe tartozó
i) (S-cisz)-N-{[4-(amino-imino-metil)-fenil]-metil}-1[N-(etil-szulfonil)-D-fenil-alanil]-1 H-indol-2-karboxamid, ii) N-(karboxi-metil)-D-fenil-alanil-N-{[4-(aminoimino-metil)-fenil]-metil}-L-prolinamid, iii) N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N{[5-(amino-imino-metil)-tiofén-2-il]-metil}-L-prolinamid, iv) N-(karboxi-metil)-D-ci klohexi l-alanil-N{[1-(amino-imino-metil)-1,2,3,6-tetrahidropiridi η-4-il]metil}-L-prolinamid,
v) N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N-{[4-(aminoimino-metil)-2-fluor-fenil]-metil}-L-prolinamid és vi) N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N{[4-(am i no-imino-meti l)-2,6-d ifi uor-fen i l]-fen i I }-Lprolinamid, annak sója vagy szolvátja.
16. A 2. igénypont szerinti N-(karboxi-metil)-D-ciklohexil-alanil-N-{[5-(amino-imino-metil)-tiofén-2-il]-metil}L-prolinamid vagy annak sója vagy szolvátja.
17. 1-16. igénypontok bármelyike szerinti (I), (la), (Ib) vagy (le) általános képletű vegyület vagy annak gyógyászatilag elfogadható sóját vagy szolvátját gyógyászatilag elfogadható hordozóval, oldószerrel vagy kötőanyaggal együtt tartalmazó gyógyszerkészítmény.
18. Eljárás az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti (I) általános képletű vegyület előállítására, azzal jellemezve, hogy
a) a megfelelő (II) általános képletű vegyületekből ahol (P) jelentése egy vagy több karboxi-védőcsoport, és (P)X csoportban
X karboxiesoportot tartalmaz, és
G(P) csoportban (P) jelentése egy vagy több amino-védőcsoport, a védőcsoportokat egyidejűleg vagy egymás után eltávolítjuk, vagy
b) az olyan (I) általános képletű vegyület hidrogénezésével, ahol
R jelentése (z) képletű csoport, olyan (I) általános képletű vegyületet állítunk elő, ahol
R jelentése (v) képletű csoport, és kívánt esetben az (I) általános képletű vegyület sójának előállítására egy gyógyászatilag megfelelő savval reagáltatunk.
19. Az 1-16. igénypontok bármelyike szerinti (I) általános képletű vegyületek, sóik és szolvátjaik alkalmazása emlősökben trombin gátlására alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US20655394A | 1994-03-04 | 1994-03-04 | |
| PCT/US1995/002558 WO1995023609A1 (en) | 1994-03-04 | 1995-03-03 | Antithrombotic agents |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9602408D0 HU9602408D0 (en) | 1996-11-28 |
| HUT76330A HUT76330A (en) | 1997-08-28 |
| HU227356B1 true HU227356B1 (en) | 2011-04-28 |
Family
ID=22766894
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9602408A HU227356B1 (en) | 1994-03-04 | 1995-03-03 | Peptide derivates containing four aminoacids at the most, process for preparing them and pharmaceutical compositions compriting them |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP1361212A1 (hu) |
| JP (1) | JP4081138B2 (hu) |
| KR (1) | KR100337271B1 (hu) |
| CN (2) | CN1134264C (hu) |
| AT (1) | ATE250028T1 (hu) |
| AU (1) | AU684918C (hu) |
| BR (1) | BR9506979A (hu) |
| CA (1) | CA2183464A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ294674B6 (hu) |
| DE (1) | DE69531753T2 (hu) |
| DK (1) | DK0672658T3 (hu) |
| ES (1) | ES2206479T3 (hu) |
| FI (1) | FI963451A0 (hu) |
| HU (1) | HU227356B1 (hu) |
| IL (1) | IL112795A (hu) |
| MX (1) | MX9603831A (hu) |
| MY (1) | MY119987A (hu) |
| NO (1) | NO309034B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ282588A (hu) |
| PE (1) | PE41696A1 (hu) |
| PL (1) | PL181306B1 (hu) |
| PT (1) | PT672658E (hu) |
| RU (1) | RU2148585C1 (hu) |
| SI (1) | SI0672658T1 (hu) |
| TW (1) | TW401403B (hu) |
| UA (1) | UA67715C2 (hu) |
| WO (1) | WO1995023609A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA951617B (hu) |
Families Citing this family (94)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4421052A1 (de) | 1994-06-17 | 1995-12-21 | Basf Ag | Neue Thrombininhibitoren, ihre Herstellung und Verwendung |
| DE4443390A1 (de) * | 1994-12-06 | 1996-06-13 | Basf Ag | Neue dipeptidische p-Amidinobenzylamide mit N-terminalen Sulfonyl- bzw. Aminosulfonylresten |
| KR19980702112A (ko) * | 1995-02-10 | 1998-07-15 | 페라 스타르크,요헨 카르크 | 트롬빈 억제제 |
| CN1198839C (zh) * | 1995-02-17 | 2005-04-27 | 艾伯特有限及两合公司 | 作为凝血酶抑制剂的新的二肽脒类 |
| US5629324A (en) * | 1995-04-10 | 1997-05-13 | Merck & Co., Inc. | Thrombin inhibitors |
| US5612369A (en) * | 1995-06-07 | 1997-03-18 | 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. | Thrombin inhibitors |
| SA96170106A (ar) * | 1995-07-06 | 2005-12-03 | أسترا أكتيبولاج | مشتقات حامض أميني جديدة |
| FR2739858B1 (fr) * | 1995-10-11 | 1997-11-14 | Synthelabo | Derives de n-sulfonyl- et n-sulfamoylpeptidylprolinamide, leur preparation et leur application en therapeutique |
| ATE228760T1 (de) * | 1995-10-24 | 2002-12-15 | Merck & Co Inc | Thrombininhibitoren |
| TW541316B (en) * | 1995-12-21 | 2003-07-11 | Astrazeneca Ab | Prodrugs of thrombin inhibitors |
| US6034067A (en) * | 1996-02-13 | 2000-03-07 | Akzo Nobel, N.V. | Serine protease inhibitors |
| IL120310A (en) | 1996-03-01 | 2002-02-10 | Akzo Nobel Nv | Serine protease inhibitors and pharmaceuticals containing them |
| IL120311A (en) * | 1996-03-01 | 2001-10-31 | Akzo Nobel Nv | Serine protease inhibitors and pharmaceuticals containing them |
| CA2200163A1 (en) * | 1996-03-22 | 1997-09-22 | Michael Robert Wiley | Antithrombotic diamides |
| US5811402A (en) * | 1996-03-22 | 1998-09-22 | Eli Lilly And Company | Antithrombotic diamides |
| SE9602263D0 (sv) | 1996-06-07 | 1996-06-07 | Astra Ab | New amino acid derivatives |
| US6200967B1 (en) | 1996-06-25 | 2001-03-13 | Eli Lilly And Company | Anticoagulant agents |
| EP1110968B1 (en) * | 1996-06-25 | 2003-10-01 | Eli Lilly & Company | Intermediate for the preparation of Thrombininhibitors as anticoagulant agents |
| US5863929A (en) | 1996-06-25 | 1999-01-26 | Eli Lilly And Company | Anticoagulant agents |
| SE9602646D0 (sv) | 1996-07-04 | 1996-07-04 | Astra Ab | Pharmaceutically-useful compounds |
| DE19632773A1 (de) * | 1996-08-14 | 1998-02-19 | Basf Ag | Neue Thrombininhibitoren |
| DE19632772A1 (de) | 1996-08-14 | 1998-02-19 | Basf Ag | Neue Benzamidine |
| IL121474A0 (en) * | 1996-08-23 | 1998-02-08 | Akzo Nobel Nv | Thrombin inhibitors |
| TW542822B (en) | 1997-01-17 | 2003-07-21 | Ajinomoto Kk | Benzamidine derivatives |
| US6214841B1 (en) | 1997-05-15 | 2001-04-10 | Eli Lilly And Company | Antithrombotic compound |
| AR013084A1 (es) | 1997-06-19 | 2000-12-13 | Astrazeneca Ab | Derivados de amidino utiles como inhibidores de la trombina, composicion farmaceutica, utilizacion de dichos compuestos para la preparacion demedicamentos y proceso para la preparacion de los compuestos mencionados |
| DE19734445A1 (de) * | 1997-08-08 | 1999-02-11 | Basf Ag | Lipophile polymere UV-Absorber |
| US6740682B2 (en) | 1997-08-29 | 2004-05-25 | Tularik Limited | Meta-benzamidine derivatives as serine protease inhibitors |
| WO1999011658A1 (en) * | 1997-08-29 | 1999-03-11 | Proteus Molecular Design Ltd. | Meta-benzamidine derivatives as serin protease inhibitors |
| SE9704543D0 (sv) | 1997-12-05 | 1997-12-05 | Astra Ab | New compounds |
| WO1999037611A1 (de) * | 1998-01-26 | 1999-07-29 | Basf Aktiengesellschaft | Heterocyclische amidine als kallikrein protease inhibitoren |
| BR9907112A (pt) * | 1998-01-26 | 2000-10-24 | Basf Ag | Composto, medicamento, e, uso de um composto |
| ATE223408T1 (de) * | 1998-02-09 | 2002-09-15 | Dimensional Pharm Inc | Heteroaryl-amidinen,-methylamidinen und - guanidinen als protease inhibitoren, insbesondere als urokinase inhibitoren |
| US6291514B1 (en) | 1998-02-09 | 2001-09-18 | 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. | Heteroaryl amidines, methylamidines and guanidines, preparation thereof, and use thereof as protease inhibitors |
| IL139162A0 (en) | 1998-04-24 | 2001-11-25 | Dimensional Pharm Inc | Amidinohydrazone, alkoxyguanidine and aminoguanidine derivatives, processes for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing the same |
| KR20010052694A (ko) * | 1998-06-08 | 2001-06-25 | 에가시라 구니오 | 벤즈아미딘 유도체 |
| SE9804313D0 (sv) | 1998-12-14 | 1998-12-14 | Astra Ab | New compounds |
| AU3127900A (en) * | 1998-12-23 | 2000-07-31 | Du Pont Pharmaceuticals Company | Thrombin or factor xa inhibitors |
| KR20000047461A (ko) * | 1998-12-29 | 2000-07-25 | 성재갑 | 트롬빈 억제제 |
| ES2295004T3 (es) | 1999-01-13 | 2008-04-16 | Astrazeneca Ab | Nuevos derivados amidinobencilaminicos y su uso como inhibidores de trombina. |
| CN1337961A (zh) * | 1999-02-09 | 2002-02-27 | 三维药物公司 | 用作蛋白酶抑制剂的杂芳基脒、甲基脒和胍 |
| CA2370267A1 (en) | 1999-04-09 | 2000-10-19 | Basf Aktiengesellschaft | Prodrugs of thrombin inhibitors |
| AR023510A1 (es) | 1999-04-21 | 2002-09-04 | Astrazeneca Ab | Un equipo de partes, formulacion farmaceutica y uso de un inhibidor de trombina. |
| FR2793248B1 (fr) * | 1999-05-03 | 2001-06-29 | Adir | Nouveaux derives de 2,3-methano-aminoacides, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| JP2003502373A (ja) * | 1999-06-23 | 2003-01-21 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | インテグリン受容体アンタゴニスト |
| KR100642953B1 (ko) * | 1999-10-28 | 2006-11-10 | 상꾜 가부시키가이샤 | 벤즈아미딘 유도체 |
| CN1172905C (zh) | 1999-12-14 | 2004-10-27 | 昭和电工株式会社 | 生产氰基苄胺盐的方法 |
| SE0000382D0 (sv) | 2000-02-07 | 2000-02-07 | Astrazeneca Ab | New process |
| SE0001803D0 (sv) | 2000-05-16 | 2000-05-16 | Astrazeneca Ab | New compounds i |
| US7129233B2 (en) | 2000-12-01 | 2006-10-31 | Astrazeneca Ab | Mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors |
| AR035216A1 (es) | 2000-12-01 | 2004-05-05 | Astrazeneca Ab | Derivados de acido mandelico ,derivados farmaceuticamente aceptables, uso de estos derivados para la fabricacion de medicamentos, metodos de tratamiento ,procesos para la preparacion de estos derivados, y compuestos intermediarios |
| US6528503B2 (en) | 2000-12-18 | 2003-03-04 | Merck & Co., Inc. | Thrombin inhibitors |
| WO2002050056A1 (en) | 2000-12-18 | 2002-06-27 | Merck & Co., Inc. | Benzylamine derivatives and their use as thrombin inhibitors |
| WO2002064559A2 (en) | 2001-02-09 | 2002-08-22 | Merck & Co., Inc. | Thrombin inhibitors |
| AR034517A1 (es) | 2001-06-21 | 2004-02-25 | Astrazeneca Ab | Formulacion farmaceutica |
| AU2003219039A1 (en) | 2002-03-11 | 2003-09-22 | Curacyte Ag | Urokinase inhibitors, production and use thereof |
| CN1642947A (zh) * | 2002-03-22 | 2005-07-20 | 株式会社Lg生命科学 | ( 2 S )－N－5－[氨基(亚氨基)甲基]－2－噻吩基甲基－1－( 2 R ) －2－[(羧甲基) 氨基]－3 ,3－二苯基丙酰－2－吡咯烷甲酰胺·nH2O的新晶形 |
| CN1642946A (zh) * | 2002-03-22 | 2005-07-20 | 株式会社Lg生命科学 | (2s)－n－{5－[氨基(亚氨基)甲基]－2－噻吩基}甲基－1－{(2r)－2－[(羧甲基)氨基]3，－二苯基丙酰}－2－吡咯烷甲酰胺的马来酸盐及其制备方法 |
| US7084134B2 (en) | 2002-05-02 | 2006-08-01 | Merk & Co., Inc. | Thrombin inhibitors |
| SE0201659D0 (sv) | 2002-05-31 | 2002-05-31 | Astrazeneca Ab | Modified release pharmaceutical formulation |
| SE0201661D0 (sv) | 2002-05-31 | 2002-05-31 | Astrazeneca Ab | New salts |
| DE10301300B4 (de) | 2003-01-15 | 2009-07-16 | Curacyte Chemistry Gmbh | Verwendung von acylierten 4-Amidino- und 4-Guanidinobenzylaminen zur Inhibierung von Plasmakallikrein |
| MXPA05010444A (es) * | 2003-04-03 | 2005-11-04 | Merck Patent Gmbh | Compuestos de carbonilo. |
| US7781424B2 (en) | 2003-05-27 | 2010-08-24 | Astrazeneca Ab | Modified release pharmaceutical formulation |
| DE10342108A1 (de) | 2003-09-11 | 2005-04-14 | Curacyte Chemistry Gmbh | Basisch-substituierte Benzylaminanaloga als Inhibitoren des Gerinnungsfaktors Xa, ihre Herstellung und Verwendung |
| FR2867780B1 (fr) * | 2004-03-19 | 2006-05-19 | Servier Lab | Nouveaux derives de 4-oxo-4,6,7,8-tetrahydropyrrolo (1,2-a) pyrazine-6-carboxamides, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| US7795205B2 (en) | 2004-04-12 | 2010-09-14 | Canyon Pharmaceuticals, Inc. | Methods for effecting regression of tumor mass and size in a metastasized pancreatic tumor |
| TWI396686B (zh) * | 2004-05-21 | 2013-05-21 | Takeda Pharmaceutical | 環狀醯胺衍生物、以及其製品和用法 |
| CA2612227C (en) | 2005-06-14 | 2014-04-22 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Pyrimidine compounds |
| US8193206B2 (en) | 2005-06-14 | 2012-06-05 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Pyrimidine compounds |
| DE102005044319A1 (de) | 2005-09-16 | 2007-03-22 | Curacyte Chemistry Gmbh | 2-(Aminomethyl)-5-Chlor-Benzylamid-Derivate und ihre Verwendung als Hemmstoffe des Gerinnungsfaktors Xa |
| KR101276847B1 (ko) | 2006-01-12 | 2013-06-18 | 엘지전자 주식회사 | 다시점 비디오의 처리 |
| WO2007081176A1 (en) | 2006-01-12 | 2007-07-19 | Lg Electronics Inc. | Processing multiview video |
| US7951823B2 (en) | 2006-05-23 | 2011-05-31 | Irm Llc | Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors |
| DE102006050672A1 (de) | 2006-10-24 | 2008-04-30 | Curacyte Discovery Gmbh | Hemmstoffe des Plasmins und des Plasmakallikreins |
| TW200827336A (en) | 2006-12-06 | 2008-07-01 | Astrazeneca Ab | New crystalline forms |
| RS51644B (en) * | 2007-01-10 | 2011-10-31 | Irm Llc. | UNITS AND PREPARATIONS AS CHANNEL INHIBITORS ACTIVATING PROSTHESES |
| KR101579999B1 (ko) | 2008-04-21 | 2015-12-23 | 타이젠 바이오테크놀러지 컴퍼니 리미티드 | 헤테로사이클릭 화합물 |
| CN101724016B (zh) * | 2008-10-28 | 2013-09-25 | 上海医药工业研究院 | 一类肽化合物、其制备方法及用途 |
| CN102924567B (zh) * | 2008-10-28 | 2014-06-04 | 上海医药工业研究院 | 一类肽化合物、其制备方法及用途 |
| US9023834B2 (en) | 2008-11-13 | 2015-05-05 | Taigen Biotechnology Co., Ltd. | Lyophilization formulation |
| CN102464701B (zh) | 2010-11-08 | 2015-10-21 | 上海医药工业研究院 | 一类新型化合物、其制备方法及用途 |
| CN103403018B (zh) * | 2010-12-21 | 2015-08-19 | 医药公司（莱比锡）有限公司 | 胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶抑制剂,它们的制备以及作为凝结因子IIa和Xa的选择性抑制剂的用途 |
| GB2494851A (en) * | 2011-07-07 | 2013-03-27 | Kalvista Pharmaceuticals Ltd | Plasma kallikrein inhibitors |
| GB201212081D0 (en) * | 2012-07-06 | 2012-08-22 | Kalvista Pharmaceuticals Ltd | New polymorph |
| GB2510407A (en) | 2013-02-04 | 2014-08-06 | Kalvista Pharmaceuticals Ltd | Aqueous suspensions of kallikrein inhibitors for parenteral administration |
| CN105218561B (zh) * | 2014-06-25 | 2018-10-30 | 上海艾力斯医药科技有限公司 | 稠合嘧啶环衍生物、其制备方法及应用 |
| GB201805174D0 (en) * | 2018-03-29 | 2018-05-16 | Univ Leeds Innovations Ltd | Compounds |
| CN109224139B (zh) * | 2018-05-09 | 2020-08-18 | 祖晓麟 | 热敏型心脏支架 |
| CN117964684A (zh) * | 2018-05-29 | 2024-05-03 | 奥默罗斯公司 | Masp-2抑制剂和使用方法 |
| CN114206852A (zh) | 2019-08-09 | 2022-03-18 | 卡尔维斯塔制药有限公司 | 血浆激肽释放酶抑制剂 |
| MX2022006750A (es) | 2019-12-04 | 2022-06-14 | Omeros Corp | Inhibidores de masp-2 y metodos de uso. |
| CN115052862A (zh) | 2019-12-04 | 2022-09-13 | 奥默罗斯公司 | Masp-2抑制剂和使用方法 |
| GB202107722D0 (en) | 2021-05-28 | 2021-07-14 | Lunac Therapeutics Ltd | Factor XIIA Inhibitors |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HU178398B (en) * | 1979-06-12 | 1982-04-28 | Gyogyszerkutato Intezet | Process for producing new agmatine derivatives of activity against haemagglutination |
| IL99527A (en) * | 1990-09-28 | 1997-08-14 | Lilly Co Eli | Tripeptide antithrombotic agents |
| SE9102462D0 (sv) * | 1991-08-28 | 1991-08-28 | Astra Ab | New isosteric peptides |
| ZA928581B (en) * | 1991-11-12 | 1994-05-06 | Lilly Co Eli | Antithrombotic agents |
| SE9103612D0 (sv) * | 1991-12-04 | 1991-12-04 | Astra Ab | New peptide derivatives |
| AU675981B2 (en) * | 1992-12-02 | 1997-02-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Guanidinyl-substituted heterocyclic thrombin inhibitors |
| SE9301916D0 (sv) | 1993-06-03 | 1993-06-03 | Ab Astra | New peptides derivatives |
| AU1025795A (en) | 1994-01-27 | 1995-08-03 | Mitsubishi Chemical Corporation | Prolineamide derivatives |
-
1995
- 1995-02-27 ZA ZA9501617A patent/ZA951617B/xx unknown
- 1995-02-27 IL IL11279595A patent/IL112795A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-03-02 MY MYPI95000543A patent/MY119987A/en unknown
- 1995-03-03 CZ CZ19962584A patent/CZ294674B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-03-03 BR BR9506979A patent/BR9506979A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-03-03 EP EP03011805A patent/EP1361212A1/en not_active Withdrawn
- 1995-03-03 DE DE69531753T patent/DE69531753T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-03 AT AT95301374T patent/ATE250028T1/de active
- 1995-03-03 UA UA96093453A patent/UA67715C2/uk unknown
- 1995-03-03 PT PT95301374T patent/PT672658E/pt unknown
- 1995-03-03 RU RU96120088A patent/RU2148585C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-03-03 AU AU19752/95A patent/AU684918C/en not_active Ceased
- 1995-03-03 EP EP95301374A patent/EP0672658B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-03 CN CNB951928996A patent/CN1134264C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-03 PL PL95320637A patent/PL181306B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1995-03-03 DK DK95301374T patent/DK0672658T3/da active
- 1995-03-03 HU HU9602408A patent/HU227356B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-03-03 JP JP52300795A patent/JP4081138B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-03 NZ NZ282588A patent/NZ282588A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-03-03 SI SI9530692T patent/SI0672658T1/xx unknown
- 1995-03-03 MX MX9603831A patent/MX9603831A/es unknown
- 1995-03-03 CA CA002183464A patent/CA2183464A1/en not_active Abandoned
- 1995-03-03 KR KR1019960704860A patent/KR100337271B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-03-03 WO PCT/US1995/002558 patent/WO1995023609A1/en active IP Right Grant
- 1995-03-03 PE PE1995263336A patent/PE41696A1/es not_active Application Discontinuation
- 1995-03-03 CN CNB031367569A patent/CN100491348C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-03 ES ES95301374T patent/ES2206479T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-04 TW TW084102067A patent/TW401403B/zh active
-
1996
- 1996-09-03 FI FI963451A patent/FI963451A0/fi not_active Application Discontinuation
- 1996-09-03 NO NO963684A patent/NO309034B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU227356B1 (en) | Peptide derivates containing four aminoacids at the most, process for preparing them and pharmaceutical compositions compriting them | |
| US5710130A (en) | Antithrombotic agents | |
| US5705487A (en) | Antithrombotic agents | |
| EP0670310B1 (en) | Bisulfite adducts of arginine aldehydes useful as thrombin inhibitors and as anticoagulants | |
| US5707966A (en) | Antithrombotic agents | |
| US5726159A (en) | Antithrombotic agents | |
| EP0672659B1 (en) | Antithrombotic agents | |
| EP0816376A1 (en) | Trombin inhibitors as anticoagulant agents | |
| EP0672657B1 (en) | Antithrombotic agents | |
| EP0673936B1 (en) | Antithrombotic agents | |
| US5914319A (en) | Antithrombotic agents | |
| CA2143542A1 (en) | Antithrombotic agents | |
| GB2287027A (en) | Tripeptide antithrombotic agents | |
| US5599793A (en) | Antithromobotic agents | |
| JPH07278092A (ja) | 抗血栓剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DGB9 | Succession in title of applicant |
Owner name: ASTRAZENECA AB,, SE |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |