CN1289341A - 凝血酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式A－B－D－E－F化合物,其中A、B、D、E和F的定义同说明书所述,及其制备方法。本发明新化合物适于制备药物。

Description

凝血酶抑制剂
本发明涉及新的5元杂环脒、其制备方法、和其作为类胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶尤其是凝血酶、和激肽原酶例如激肽释放酶竞争性抑制剂的应用。本发明还涉及含有所述化合物作为活性组分的药物组合物，以及所述化合物作为凝血酶抑制剂、抗凝剂和抗炎剂的应用。
凝血酶属于丝氨酸蛋白酶，并在血液凝结级联中作为终末酶起中心作用。内部和外部凝结级联都会通过多个放大步骤导致由凝血酶原生成凝血酶。凝血酶催化纤维蛋白原裂解成纤维蛋白，从而引发血液凝结和血小板聚集，而血小板由于与血小板因子3和凝结因子ⅩⅢ、以及大量高活性介体结合又促进了凝血酶形成。
在白色、动脉血栓和红色、静脉的形成中，凝血酶的形成和作用都是中心因素，并且因此是药物潜在的有效攻击点。与肝素相反，凝血酶抑制剂能完全独立地不依赖辅因子的存在同时抑制游离凝血酶和与血小板结合的凝血酶的作用。它们能在经皮经腔冠状动脉成形术(PTCA)和松解术之后防止发生急性血栓栓塞，并在体外循环(心肺机械装置，血液透析)中起抗凝剂作用。它们通常还可用来预防血栓形成，例如在外科手术后预防血栓形成。
已知合成的精氨酸衍生物能通过与凝血酶的活性丝氨酸残基相互作用来影响凝血酶的活性。经证实，其中N-末端氨基酸是D构型的基于Phe-Pro-Arg的肽具有特别好的效果。D-Phe-Pro-Arg异丙基酯作为竞争性凝血酶抑制剂被描述过(C.Mattson等人，FoliaHaematol,109(1983)43-51)。
将精氨酸在C-末端衍生为醛可增强其抑制作用。因此，人们已公开了大量能在半缩醛中结合“活性”丝氨酸的羟基的arginals(EP185390、479489、526877、542525；WO93/15756、93/18060)。
肽酮、氟化烷基酮、酮酸酯、硼酸衍生物、磷酸酯以及α-酮甲酰胺的凝血酶抑制活性可同样用这种丝氨酸相互作用来解释(EP118280、195212、362002、364344、410411、471651、589741、293881、503203、504064、530167；WO92/07869、94/08941)。
J.Oleksyszyn等人在《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)37(1994)226-231中描述的肽-4-脒基苯基甘氨酸膦酸二苯酯是不可逆凝血酶抑制剂，其对于其它丝氨酸蛋白酶具有不适当的选择性。
DE3108810、WO93/11152和EP601459描述了不能与丝氨酸蛋白酶中的活性丝氨酸相互作用的胍丁胺和精氨酸衍生物。
WO94/29336、EP0601459和WO95/23609代表了其中胍丁胺被芳基脒残基替代的进展。
EP0672658不仅描述了连接有胍丁胺或苄脒残基的凝血酶抑制剂，还描述了具有脒基噻吩的凝血酶抑制剂(实施例65)。
激肽原酶是能从激肽原释放出称为激肽的血管活性肽(缓激肽、胰激肽、和Met-Lys-缓激肽)的丝氨酸蛋白酶。激肽原是在凝结和发炎级联反应中存在的多功能蛋白。作为抑制剂，它们保护细胞免受半胱氨酸蛋白酶的损害(Muller Esterl,FEBS Lett.182(1985)310-314)。重要的激肽原酶有血浆激肽释放酶、组织激肽释放酶和肥大细胞类胰蛋白酶。
激肽例如缓激肽和胰激肽是影响大量生物过程的血管活性肽。它们在发炎过程中起重要作用。通过增加血管渗透性，激肽会导致低血压和水肿。此外，激肽是非常有力的在体内天然产生的疼痛产生物质，并且在哮喘、变应性鼻炎和关节炎的病生理中作为细胞介质起非常重要的作用(K.D.Bhoola,C.D.Figueroa,K.Worthy,Pharmacological Reviews44(1)(1992)1-80)。
不论发炎过程的机理如何，在循环血液中含有所有蛋白系统的流体从血管中流出。这意味着疾病例如哮喘、鼻炎和炎性体内疾病涉及血浆从血管中流出。此外，尤其在变应性过程中会释放肥大细胞类胰蛋白酶(Salomonsson等人，Am.Rev.Respir.Dis.146(1992)1535-1542)。
Kettner和Shaw已经将精氨酸氯甲基酮H-(D)-Pro-Phe-Arg-CH2Cl和H-(D)-Phe-Phe-Arg-CH2-Cl作为血浆激肽释放酶抑制剂描述过(《生物化学》(Biochem.)17(1978)4778-4784和Meth.Enzym.80(1981)826-842)。
据证明多种合成的苄脒和苄胺衍生物是血浆激肽释放酶抑制剂，其中苄脒衍生物具有更强的抑制作用(F.Markward,S.Drawert,P.Walsmann，《生化药理学》(Biochemical Pharmacology)23(1974)2247-2256 )。
N-(反-4-氨基甲基环己基羰基)-L-苯丙氨酸4-羧甲基酰苯胺盐酸盐-PKSI-527也是该激肽原酶的有效抑制剂(Wanaka,Ohamoto等人，《血栓形成研究》(Thromb.Res.),57(6)(1990)889-895)。
式Ⅰ化合物及其与生理可接受酸成的盐
A-B-D-E-F    Ⅰ其中A、B、D、E和F的定义如下：A：其中m是0、1或2，n是0、1或2，R1是HOOC-、C1-6-烷基-OOC-、芳基-C0-4-烷基-OOC或-OH，R2是H-,C1-4-烷基-或R1-(CH2)m-，且R3是H-、或C1-4-烷基-，B：其中R4是H-、C1-4-烷基-或R1-(CH2)m-(其中R1和m的定义同上)，p是0或1，R5是H-或C1-4-烷基-，R6是H-；C1-8-烷基-；2-噻吩基-；3-噻吩基-；3-吲哚基-；4-咪唑基-；2-吡啶基-；3-吡啶基-；4-吡啶基-；苯基-，其中所述苯基可具有高达3个选自C1-4-烷基-、CF3-、C1-4-烷氧基-、HO-、BnO-、F-或Cl-的相同或不同取代基；C3-8-环烷基-，所述C3-8-环烷基-可携带高达4个相同或不同的C1-4-烷基-和/或环中有一个或两个C-C单键可被C=C双键替代和/或可稠合有苯环；C7-C12-二环烷基-；或C10-三环烷基-，或者R4与R6一起形成亚乙基或亚丙基，R7是H-、C1-8-烷基-、苯基-、或C3-8-环烷基-，其中所述苯基可具有高达3个选自C1-4-烷基-、CF3-、C1-4-烷氧基-、F-或Cl-的相同或不同取代基，所述C3-8-环烷基-可携带高达4个相同或不同的C1-4-烷基-，其R8是H-或C1-4-烷基-，D：
Figure 9980239600251
其中R20是H、C1-4-烷基、Bn或BnOC(O)-，其中如果D是Ⅱ、Ⅲ或Ⅺ，则E具有下述定义：其中a)当X=S、O、NH或NR12时，则Y是-CR13=、-CH=，且Z是-CR14=，或者Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者b)当X=NR12时，则Y是-CH=，且Z是-CH=，或者c)当X=S、O或NH时，则Y是-CR15=，且Z是-N=，或者Y是-N=，且Z是-CR15=，或者d)当X=NR12-时，则Y是-N=，且Z是-CR16=、-N=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，且R9是H-或C1-3-烷基-，R10是H-或C1-4-烷基-，R11是H-或C1-4-烷基-，R12是CH3-或C2H5-，R13是Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，R14是Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，R15是CF3-或C1-4-烷基-，R16是H-、CF3-或C1-4-烷基-，R20的定义同上，或者，当D是Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ或Ⅹ时，则E具有下述定义：其中X是O、S或-NR17-，且Y是-N=，且Z是-CR16=或-N=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者Y是-CR18=，且Z是-CR19=，并且R9、R10、R11、R16和R20的定义同上，R17是H、CH3-或C2H5-，R18是H-、Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，R19是H-、Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，或者当D是Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ或Ⅺ时，则E具有下述定义：
Figure 9980239600281
或者 其中a)当X=S时，则Y是-CR18=，且Z是-CR19=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者b)当X=O或-NR12-时，则Y是-N=、-CR16=，且Z是-N=、-CR18=，并且R9、R10、R11、R12、R16、R18、R19和R20的定义同上，F：
Figure 9980239600283
或者
Figure 9980239600284
B代表的氨基酸衍生物优选具有(D)构型；在D中的氮杂环丁烷甲酸、脯氨酸和2-哌啶酸(Pipecolins_ure)优选具有(L)构型。
优选的式Ⅰ化合物是其中A-E具有下述定义的式Ⅰ化合物及其与生理可接受酸成的盐：A：HOOC-(CH2)t-(t=1、2或3)、(HOOC-CH2)2-CH-、HOOC-CH2-CH(COOH)-、HOOC-CH(C1-4-烷基)-、HOOC-CH(C1-4-烷基)2-、C1-6-烷基-OOC-(CH2)t-，B是
Figure 9980239600291
p是0或1，R4是H-、C1-4-烷基、或HOOC-(CH2)m-(m=1、2或3)，R5是H-、甲基-，R6是H-；C1-8-烷基-；2-噻吩基-；3-噻吩基-；3-吲哚基-；4-咪唑基-；2-吡啶基-；3-吡啶基-；4-吡啶基-；苯基-，其中所述苯基可具有高达3个选自CH3-、CF3-、CH3-O-、HO-、BnO-、F-或Cl-的相同或不同取代基；C3-8-环烷基-，所述C3-8-环烷基-可携带高达4个甲基；二环[2.2.2]辛基；二环[2.2.1]庚基；金刚烷基；二氢化茚基；十氢萘基，R7是H、C1-8-烷基-、苯基、或C3-8-环烷基-，其中所述苯基可具有高达3个选自CH3-、CF3-、CH3-O-、F-或Cl-的相同或不同取代基，所述C3-8-环烷基-可携带高达4个甲基，R8是H-、C1-4-烷基-，D：
Figure 9980239600301
其中R20是H、CH3-、Bn或BnOC(O)-，其中如果D是Ⅱ、Ⅲ或Ⅺ，则E具有下述定义：
Figure 9980239600302
其中a)当X=S、O、或NR17时，则Y是-CR13=或-CH=，且Z是-CR14=，或者Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者b)当X=NR12时，则Y是-CH=，且Z是-CH=，或者c)当X=S、O或NH时，则Y是-CR15=，且Z是-N=，或者Y是-N=，且Z是-CR15=，或者d)当X=NR12时，则Y是-N=，且Z是-CR16=、-N=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，且R12是CH3-或C2H5-，R13是Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，R14是Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，R15是CF3-或C1-4-烷基-，R16是H-、CF3-或C1-4-烷基-，R17是H,CH3-或C2H5-R20的定义同上，或者，当D是Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ或Ⅹ时，则E具有下述定义：其中X是O、S或-NR17，且Y是-N=，且Z是-CR16=或-N=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者Y是-CR18=，且Z是-CR19=，并且R16、R17、R20的定义同上，R18是H-、Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，且R19是H-、Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，或者当D是Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ或Ⅺ时，则E具有下述定义：或者
Figure 9980239600322
其中a)当X=S时，则Y是-CR18=，且Z是-CR19=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者b)当X=O或-NR12-时，则Y是-N=或-CR16=，且Z是-N=或-CR18=，并且R12、R16、R18、R19和R20的定义同上，F：
Figure 9980239600331
或者
B代表的氨基酸衍生物优选具有(D)构型；在D中的氮杂环丁烷甲酸、脯氨酸和2-哌啶酸优选具有(L)构型。
尤其优选的式Ⅰ化合物是其中A、B、D、E和F具有下述定义的式Ⅰ化合物及其与生理可接受酸成的盐：A：HOOC-CH2、HOOC-CH2-CH2、HOOC-CH(CH3)、HOOC-CH(C2H5)，B是
Figure 9980239600333
p是0或1，R4是H-、CH3-，R5是H-、CH3-，R6是C1-8-烷基-；C5-8-环烷基-，所述C5-8-环烷基-可携带高达4个甲基；2-噻吩基-；3-吲哚基-；4-咪唑基-；2-吡啶基-；3-吡啶基-；4-吡啶基-；苯基-，其中所述苯基可具有高达3个选自CH3-、CF3-、CH3-O-、HO-、BnO-、F-或Cl-的相同或不同取代基；二环[2.2.2]辛基；二环[2.2.1]庚基；金刚烷基；二氢化茚基；十氢萘基，尤其是环戊基、环己基和环庚基，R7是H-、CH3-，R8是H-、CH3-，D：
Figure 9980239600341
其中R20是H、BnOC(O)-，其中如果D是Ⅱ、Ⅲ或Ⅺ，则E具有下述定义：
Figure 9980239600342
其中X是-S-，且Y是-CH=，且Z是-CR13=，或者Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者Y是-CR15=，且Z是-N=，或者Y是-N=，且Z是-CR15=，以及R13是Cl-,CF3-或CH3-R15是CF3-或CH3-以及R20具有以上定义或者当D是Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ或Ⅹ时，则E具有下述定义：其中X是S，且Y是-N=，且Z是-CR16=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者Y是-CH=，且Z是-CR13=，或者Y是-CH=，且Z是-CH=，并且R13、R20的定义同上，R16是H-、CF3-或CH3-，或者当D是Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ或Ⅺ时，则E具有下述定义：
Figure 9980239600361
或者
Figure 9980239600362
其中a)当X=S时，则Y是-CH=，且Z是-CR18=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者Y是-CR18=，且Z是-CH=，或者b)当X=O或NCH3时，则Y是-CH=，且Z是-CR16=，或者Y是-CR16=，且Z是-CH=，或者c)当X=-NR12-时，则Y是-N=，且Z是-CR18=，且R12是CH3-或C2H5-，且R18是H、Cl-、CF3-、或CH3-，且R16和R20的定义同上，F：或者
Figure 9980239600372
B代表的氨基酸衍生物优选具有(D)构型；在D中的氮杂环丁烷甲酸、脯氨酸和2-哌啶酸优选具有(L)构型。
非常尤其优选的式Ⅰ化合物是其中A、B、D、E和F具有下述定义的式Ⅰ化合物及其与生理可接受酸成的盐：A：HOOC-CH2、HOOC-CH2-CH2、HOOC-CH(CH3)、HOOC-CH(C2H5)，B是
Figure 9980239600373
p是0或1，R4是H-，R5是H-，R6是C1-8-烷基-；2-噻吩基；3-吲哚基-；4-咪唑基；2-吡啶基-；3-吡啶基-；4-吡啶基-；C5-8-环烷基-，所述C5-8-环烷基-可携带高达4个甲基；苯基-，其中所述苯基可具有高达3个选自CH3-、CF3-、CH3-O-、HO-、BnO-、F-或Cl-的相同或不同取代基；二环[2.2.2]辛基；二环[2.2.1]庚基；金刚烷基；二氢化茚基；十氢萘基，尤其是环戊基、环己基和环庚基，R7是H，R8是H，D：
Figure 9980239600381
其中如果D是Ⅱ、Ⅲ或Ⅺ，则E具有下述定义：其中X是S，且Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者Y是-CH=，且Z是-CR13=，或者Y是-CR15=，且Z是-N=，或者Y是-N=，且Z是-CR15=，且R13是Cl-、CF3-、或CH3-，且R15是CF3-、或CH3-，或者当D是Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ或Ⅹ时，则E具有下述定义：
Figure 9980239600391
其中X是S，且Y是-N=，且Z是-CR16=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者Y是-CH=，且Z是-CR13=，或者Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者Y是-CH=，且Z是-CH=，并且R13的定义同上，R16是H-、CF3-或CH3-，或者当D是Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ或Ⅺ时，则E具有下述定义：其中a)当X=S时，则Y是-CH=，且Z是-CR18=，或者Y是-CR18=，且Z是-CH=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者b)当X=O或NCH3时，则Y是-CH=，且Z是-CR16=，或者Y是-CR16=，且Z是-CH=，或者c)当X=NCH3时，则Y是-N=，且Z是-CR16=，且R16的定义同上，R18是H、Cl、CF3-、或CH3-，且F：
Figure 9980239600411
或者
Figure 9980239600412
B代表的氨基酸衍生物优选具有(D)构型；在D中的氮杂环丁烷甲酸、脯氨酸和2-哌啶酸优选具有(L)构型。
除了在实施例中提及的化合物以外，可特别提及的化合物如下：HOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-5-(2-am-3-CF3)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(2-am-3-CF3)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-5-(2-am-4-Me)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-5-(2-am-4-Cl)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-5-(2-am-4-CF3)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(2-am-4-Me)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(2-am-4-Cl)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(2-am-4-CF3)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(2-am-3,4-Me2)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-2-(4-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(5-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-2-(4-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(4-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-2-(5-am-3-Me)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(5-am-3-Me)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-2-(5-am-3-Cl)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(5-am-3-Cl)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-2-(5-am-4-Me)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(5-am-4-Me)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-2-(5-am-4-Cl)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(5-am-4-Cl)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chea-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cpa-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-Me)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-Cl)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-CF3)-thiophHOOC-CH2-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiophHOOC-CH2-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chea-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cpa-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cheg-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cpg-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thiophHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-2-(4-am)-thiazMeOOC-CH2-(D)-Cpa-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-(D)-Cpg-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-(D)-Chea-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-(D)-Cheg-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiazHOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-Me)-thiazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-Me)-thiazHOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-CF3)-thiazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-CF3)-thiazHOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(5-am-4-Me)-thiazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(5-am-4-Me)-thiazHOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(5-am-4-CF3)-thiazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(5-am-4-CF3)-thiazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(3-am)-isoxHOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-oxazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-oxazHOOC-CH2-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(3-am)-furHOOC-CH2-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-5-(3-am)-furHOOC-CH2-(D)-Chea-Pro-NH-CH2-5-(3-am)-furHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-5-(3-am)-furHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-5-(3-am)-furHOOC-CH2-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-5-(3-am)-furHOOC-CH2-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-5-(3-am)-furHOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-5-(3-am)-furHOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-5-(3-am)-furHOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-2-(4-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-2-(4-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-2-(4-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(4-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-2-(5-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-2-(5-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(5-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-2-(5-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-2-(5-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-4-(2-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-4-(2-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-4-(2-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-4-(2-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-4-(2-am-1-Me)-pyrrHOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-5-(3-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-5-(3-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(3-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-5-(3-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pic-NH-CH2-5-(3-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-3-(5-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-3-(5-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-3-(5-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-3-(5-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Cha-PiC-NH-CH2-3-(5-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Chg-PiC-NH-CH2-3-(5-am-1-Me)-pyrazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(3-am)-oxadiaztBuOOC-CH2-N-BOC-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-oxazHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(3-am-4-Cl)-thiophEtOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(3-am-4-Cl)-thiophHOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(3-am-4-Me)-thiophEtOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(3-am-4-Me)-thiophtBuOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-ham)-thiophtBuOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-4-(2-ham)-thiophtBuOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-4-(2-ham)-thiophtBuOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-4-(2-ham)-thiophtBuOOCCH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-ham)-thiaztBuOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-4-(2-ham)-thiaztBuOOC-CH2-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-4-(2-ham)-thiaztBuOOC-CH2-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-4-(2-ham)-thiaz各缩写符号的含义如下：Adaala：金刚烷基丙氨酸Adagly：金刚烷基甘氨酸AIBN：氮杂双异丁腈Ac：乙酰基am：脒基Aze：氮杂环丁烷甲酸Bn：苄基bs：宽单峰Boc：叔丁氧基羰基Bu：丁基Cbz：苄氧基羰基Cha：环己基丙氨酸Chea：环庚基丙氨酸Cheg：环庚基甘氨酸Chg：环己基甘氨酸Cog：环辛基甘氨酸Cpa：环戊基丙氨酸Cpg：环戊基甘氨酸d：双重峰TLC：薄层色谱法DCC：二环己基碳化二亚胺Dch：二环己基丙氨酸Dcha：二环己基胺DCM：二氯甲烷Dep：4,5-去氢2-哌啶酸DMF：二甲基甲酰胺DIPEA：二异丙基乙胺Dpa：二苯基丙氨酸EDC:N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐Et：乙基Eq：当量Gly：甘氨酸fur：呋喃ham：羟基脒基HOSucc：羟基琥珀酰亚胺HPLC：高效液相色谱法imi：咪唑iPr：异丙基isox：异噁唑Leu：亮氨酸Lsg：溶液Me：甲基α-MeCha:α-甲基环己基丙氨酸β,β-Me2Cha:2-氨基-3-环己基-3-甲基丁酸或β,β-二甲基环己基丙氨酸4-MeCha:(4-甲基环己-1-基)丙氨酸γ-MeCha:(1-甲基环己-1-基)丙氨酸3,3-Me2Cha:(3,3-二甲基环己-1-基)丙氨酸4-MeChg:(4-甲基环己-1-基)甘氨酸3,3-Me2Chg:(3,3-二甲基环己-1-基)甘氨酸MPLC：中压液相色谱法MTBE：甲基叔丁基醚NBS:N-溴琥珀酰亚胺Nog：降冰片烷基甘氨酸Ohind:(2)-八氢吲哚-2-甲酸Oxadiaz:1,2,4-噁二唑Oxaz：噁唑Ph：苯基Phe：苯丙氨酸Pic:2-哌啶酸PPA：丙基膦酸酐Pro：脯氨酸Py：吡啶pydaz:(35)-2,3,4,5-四氢哒嗪-3-甲酸Pyr:3,4-去氢脯氨酸pyraz：吡唑pyrr：吡咯pyzo-3:(3S)吡唑烷-3-甲酸q：四重峰RT：室温RP-18：反相C-18s：单峰sbr：宽单峰t：三重峰t：叔tBu：叔丁基tert：叔TBAB：溴化四丁基铵TEA：三乙胺TFA：三氟乙酸TFFA：三氟乙酸酐thiaz：噻唑thioph：噻吩Thz-2：噻唑烷-2-甲酸Thz-4：噻唑烷-4-甲酸5,5-Me2Thz-4:(45)-5,5-二甲基噻唑烷-4-甲酸TOTU:O-(氰基乙氧基羰基亚甲基)氨基-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸盐triaz:1,2,4-三唑z：苄氧基羰基
在本申请说明书和权利要求书中，下述定义适用于各取代基：
术语“环烷基”自身或作为另一取代基的一部分包括具有给定数目碳原子的饱和环状烃基。C3-8-环烷基是指具有3-8个碳原子的饱和脂环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、4-甲基环己基、环庚基或环辛基。
术语“烷基”自身或作为另一取代基的一部分是指具有给定链长的直链或支链烷基。因此，C1-4-烷基是，例如甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丙基、1-丁基、2-丁基，C1-6-烷基是例如C1-4-烷基、戊基、1-戊基、2-戊基、3-戊基、1-己基、2-己基、3-己基、4-甲基-1-戊基或3,3-二甲基丁基。除了C1-4-烷基所给出的基团以外，C1-8-烷基是指例如C1-6-烷基、庚基或辛基。
术语“烷氧基”自身或作为另一取代基的一部分是指具有给定链长、并通过氧原子与各自的主体化合物结合的直链或支链烷基。因此，C1-4-烷氧基是指例如甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、2-甲基-2-丙氧基、2-甲基-1-丙氧基、1-丁氧基、2-丁氧基。
本发明还涉及包含下述结构单元的化合物，其中D和E的定义同上，并且在结构单元D的氮原子上有氢原子、保护基、未取代或取代的天然或非天然氨基酸、未取代或取代的羧酸、或未取代或取代的烷基。该结构单元是丝氨酸蛋白酶抑制剂、尤其是凝血酶和激肽释放酶抑制剂的有价值部分。
本发明还涉及包含下述结构单元的化合物，其中E的定义同上，并且在结构单元NR9的氮原子上有氢原子、保护基、未取代或取代的天然或非天然氨基酸、未取代或取代的羧酸、或未取代或取代的烷基。
本发明还涉及包含下述结构单元之一的化合物：其中Q是CH3或Cl；T是NCH3、O或S；且W是NCH3或S。
本发明还涉及式Ⅴa和Ⅴb中间体A-B-D-E-CN       Ⅴa,A-B-D-E-CSNH2    Ⅴb,其中A、B、D和E的定义同上。
本发明新中间体可用于制备式Ⅰ化合物，并且是用于合成丝氨酸蛋白酶抑制剂的有价值的结构单元。
式Ⅰ化合物可以以其本身形式或与生理可接受酸成的盐的形式存在。所述生理可接受酸的实例有：盐酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、磷酸、甲磺酸、乙酸、甲酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、羟基琥珀酸、硫酸、戊二酸、天冬氨酸、丙酮酸、苯甲酸、葡萄糖醛酸、草酸、抗坏血酸、和乙酰甘氨酸。
在式Ⅰ化合物中，如果R等于C1-6-烷基-OOC、芳基-C0-4-烷基-OOC和/或F等于羟基脒，则这些化合物可在体内作为前药，其中通过酶的作用可由其形成相应的羧酸R1=HOOC-或相应的脒F=-C(=NH)-NH2。
式Ⅰ化合物的前药是指能在体内代谢成有药理活性的式Ⅰ化合物的化合物。前药可通过例如在肝脏中的首过效应而代谢成活性药物。
式Ⅰ新化合物是类胰蛋白酶丝氨酸蛋白酶尤其是凝血酶、和激肽原酶例如激肽释放酶的竞争性抑制剂。它们可用于治疗下述适应征：-其致病机制直接或间接基于凝血酶的蛋白水解作用的疾病，-其致病机制基于受体的凝血酶依赖性激活和信号传导的疾病，-与体细胞中基因表达的刺激(例如通过PAI-1、PDGF(血小板衍生生长因子)、P-选择蛋白、ICAM-1、组织因子的刺激)或抑制(例如平滑肌细胞中的NO合成)有关的疾病，-基于自凝血酶致有丝分裂效应的疾病，-基于自上皮细胞(例如血管内皮细胞)的收缩性和渗透性中的凝血酶依赖性改变的疾病，-凝血酶依赖性血栓栓塞病症例如深度静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞或脑梗塞、心房纤维性颤动、旁路闭塞，-弥漫性血管内凝血(DIC)，-与血栓溶解剂例如链激酶、尿激酶、尿激酶原、t-PA、APSAC、动物唾液腺分泌的纤溶酶原激活物、以及所有这些物质的重组和突变型一起使用来治疗再闭塞和减少再灌注时间，-PTCA后的早期再闭塞和后期再狭窄，-凝血酶依赖性平滑肌细胞增殖，-在CNS(例如在阿尔茨海默氏病中)中活性凝血酶的积聚，-肿瘤生长和防止肿瘤细胞粘着及转移。
本发明新化合物尤其可用于治疗和预防凝血酶依赖性血栓栓塞病症例如深度静脉血栓形成、肺栓塞、心肌或脑梗塞和不稳定绞痛，以及可用于治疗弥漫性血管内凝血(DIC)。本发明化合物还适于与血栓溶解剂例如链激酶、尿激酶、尿激酶原、t-PA、APSAC、和其它纤溶酶原激活物联合使用来缩短再灌注时间和延长再闭塞时间。
本发明化合物的优选应用领域是预防经皮经腔冠状动脉成形术后的凝血酶依赖性早期再闭塞和后期再狭窄、预防凝血酶诱导的平滑肌细胞增生，预防CNS(例如在阿尔茨海默氏病中)中活性凝血酶的积聚、控制肿瘤以及防止肿瘤细胞粘着和转移。
本发明新化合物还可用于涂敷人造表面例如血液透析膜和管系统及其所需线路，可用于涂敷血管外循环中的氧合器、斯滕特印模和心脏瓣膜。
本发明化合物还可用于治疗其致病机制直接或间接源自激肽原酶、尤其是激肽释放酶的蛋白水解作用的疾病，例如炎性疾病如哮喘、胰腺炎、鼻炎、关节炎、荨麻疹以及其它炎性疾病。
本发明化合物可通过常规方法口服或非胃肠道给药(皮下给药、静脉内给药、肌内给药、腹膜内给药、直肠给药)。还可以用吸入剂或喷雾剂通过鼻咽给药。
给药剂量与患者年龄、病症和体重以及给药方式有关。对于口服给药，每个患者活性物质的日剂量一般是约10-2000mg，对于非胃肠道给药一般是约1-200mg。所述日剂量可以以贮存形式在一天内分成2-4次给药，或者一次给药。
本发明新化合物可以以常规固体或液体剂型使用，例如未包衣或(膜)包衣片剂、胶囊剂、粉剂、粒剂、糖包衣片剂、栓剂、溶液剂、软膏剂、霜剂、或喷雾剂。这些制剂可通过常规方法制得。可将活性物质与常用药物辅料例如片剂粘合剂、填充剂、防腐剂、片剂崩解剂、流动调节剂、增塑剂、湿润剂、分散剂、乳化剂、溶剂、缓释剂、抗氧化剂和/或推进气体混合(参见H.Sucker等人：制药技术，Thieme-Verlag,Stuttgart,1978)。以这种方式制得的给药剂型通常含有0.1％-99％重量的活性物质。实验部分
式Ⅰ化合物可如反应方案Ⅰ-Ⅲ所示制得。
结构单元A、B、D和E优选预先分别制备，并以适当保护的形式使用(见反应方案Ⅰ-Ⅲ)。反应方案Ⅰ
Figure 9980239600511
(p=保护基，    (P)=保护基或H)
反应方案Ⅰ描述了通过下述途径来线性装配分子Ⅰ：将胺H-E-CN与N-保护氨基酸P-D-OH偶合以生成P-D-E-CN，除去N-末端保护基以生成H-D-E-CN，与N-保护氨基酸P-B-OH偶合以生成P-B-D-E-CN，除去保护基P以生成H-B-D-E-CN，然后用未保护或保护的(P)-A-U结构单元(U=离去基团)烷基化，或者用(P)-A’-U结构单元(U=醛、酮)进行还原烷基化，或者用合适的(P)-A”-C=C-衍生物进行迈克尔加成，以生成(P)-A-B-D-E-CN。可通过经典的Pinner合成(R.Boder,D.G.Neilson,Chem.Rev.61(1962)179)或其中以亚氨基硫酯盐作为中间体的改进的Pinner合成(H.Vieweg等人，Pharmazie39(1984)226)或直接通过方法A将腈官能团转化成脒基。然后除去、优选通过酸水解除去分子中仍然存在的保护基。
如果结构单元E作为H-E-CONH2参与该合成，则在其中一个保护的中间体上酰胺会脱水形成腈官能团或转化成硫代酰胺官能团。或者，在该合成中可以使用H-E-CSNH2形式的结构单元E。反应方案Ⅱ
反应方案Ⅱ描述了通过下述途径来线性装配分子Ⅰ：通过烷基化、还原胺化或迈克尔加成将H-B-P加到合适的未保护或保护的结构单元A上，以生成(P)-A-B-P，除去C-末端保护基以生成(P)-A-B-OH，与H-D-P偶合以生成(P)-A-B-D-P，除去C-末端保护基以生成(P)-A-B-D-OH，与H-E-CN偶合以生成(P)-A-B-D-E-CN，如反应方案Ⅰ所述将该中间体进行反应以获得终产物。
当化合物(P)-A-B-P在B上仍具有游离NH官能团时，在除去C-末端保护基之前必须将该NH官能团用适当保护基保护。每次所用的保护基必须彼此呈正交关系。
作为H-E-CN结构单元的替代，也可使用H-E-CONH2、H-E-CSNH2、H-E-C(NH)NH2、H-E-C(NP)NH2、、H-E-C(NP)NHP，其中偶合的中间体(P)-A-B-D-E-CONH2首先脱水形成(P)-A-B-D-E-CN，或者通过例如Lawesson’s试剂直接转化成(P)-A-B-D-E-CSNH2。反应方案Ⅲ
Figure 9980239600531
反应方案Ⅲ描述了通过汇集合成来制备化合物Ⅰ的高效方法。将适当保护的结构单元(P)-A-B-OH和H-D-E-CN偶合在一起，并如反应方案Ⅰ所述将所得中间体(P)-A-B-D-E-CN反应来获得终产物。
还可以使用H-D-E-CONH2或H-D-E-CSNH2作为H-D-E-CN的替代对象，其中偶合的中间体(P)-A-B-D-E-CONH2首先脱水形成(P)-A-B-D-E-CN，或者转化成(P)-A-B-D-E-CSNH2。
所采用的N-末端保护基是Boc、Cbz或Fmoc，优选Boc，所采用的C-末端保护基是甲基、叔丁基或苄基。如果在分子中存在多个保护基，那么如果这些保护基没有被同时除去的话，它们必须彼此呈正交关系。
所需的偶合反应与用于引入和消除保护基的其它反应可在肽化学标准条件下进行(参见M.Bodanszky，A.Bodanszky“肽合成实践”，第2版，Springer Verlag Heidelberg,1994)。
Boc保护基是用二氧杂环己烷/HCl或TFA/DCM除去，Cbz保护基是通过氢解或用HF除去的。酯官能团的水解是用LiOH在醇类溶剂或在二氧杂环己烷/水中进行的。TFA或HCl被用于裂解叔丁基酯。
通过TLC检查反应，通常使用下述流动相：A．    DCM/MeOH             95∶5B．    DCM/MeOH             9∶1C．    DCM/MeOH             8∶2D．    DCM/MeOH/50％HOAc    40∶10∶5E．    DCM/MeOH/50％HOAc    35∶15∶5
当提及通过柱色谱法分离时，是采用上述流动相用硅胶进行分离。
用乙腈/水和HOAc缓冲液进行反相HPLC分离。
所有反应都是在氮气氛下以常规方式进行的。
可通过下述方法制备原料化合物：
用于烷基化的结构单元A的实例有α-溴乙酸叔丁酯、β-溴丙酸叔丁酯、α-溴丙酸叔丁酯、γ-溴丁酸叔丁酯、α-溴丁酸叔丁酯、THP-保护的溴乙醇、THP-保护的γ-溴丙醇、α-溴-γ-丁内酯，用于还原胺化的结构单元A的实例有二羟基丙酮、丙酮二羧酸二叔丁酯，用于迈克尔加成的结构单元A的实例有丙烯酸叔丁酯、异丁烯酸叔丁酯、富马酸二叔丁酯。不能购得的所述叔丁酯可通过类似于G.Uray,W.Lindner，《四面体》(Tetrahedron),44 1988 4357-4362的方法制得。B结构单元：
对于氨基酸的一般合成和具体合成，文献中记载了多种可能的方法。尤其是Houben-Weyl,Volume E16d/Part1，第406页与下述文献等等提供了其回顾评论。
常用的前体是二苯甲酮亚胺乙酸乙酯、乙酰氨基丙二酸二乙酯、和异腈乙酸乙酯。
多种外消旋甘氨酸和丙氨酸衍生物是通过例如用异腈乙酸乙酯和适当的酮或醛制得的(参见H.-J.Pratorius,J.Flossdorf,M.-R.Kula Chem.Ber.108(1975)3079)。
环辛基甘氨酸、环庚基甘氨酸、2-降冰片烷基甘氨酸、金刚烷基丙氨酸、γ-甲基环己基丙氨酸、4-异丙基-1-环己基丙氨酸、4-甲基-1-环己基丙氨酸、4-甲基-1-环己基甘氨酸、环庚基丙氨酸和环戊基丙氨酸的合成是经由相应的2-甲酰基氨基丙烯酸乙酯(U.Schollkopf和R.Meyer,Liebigs Ann.Chem.1977,1174和H.-J.Pratorius,J.Flossdorf,M.-R.Kula Chem.Ber.108(1985)3079)、用异氰基乙酸乙酯和相关的羰基化合物环辛酮、环庚酮、2-降冰片烷酮、1-甲酰基金刚烷、1-甲酰基-1-甲基环己烷、1-甲酰基-4-异丙基环己烷、1-甲酰基-4-甲基环己烷、和4-甲基环己烷、甲酰基环己烷以及甲酰基环戊烷作为原料、通过下述常规方法进行的：合成2-甲酰基氨基丙烯酸乙酯的常规方法
在0--10℃，将100mg异氰基乙酸乙酯在50ml THF中的溶液滴加到100mg叔丁醇钾在150ml THF内的溶液中。15分钟后，在同一温度下加入100mmol适当羰基化合物在50ml THF中的溶液，将该反应混合物的温度缓慢地升至室温，把溶剂在旋转蒸发仪中汽提出。将残余物与50ml水、100ml乙酸和100ml DCM混合，把产物用DCM萃取。将DCM相用硫酸钠干燥，把溶剂在旋转蒸发仪中汽提出。所得产物几乎是纯的，但是如果需要的话，可通过硅胶色谱法(流动相：乙醚/石油醚混合物)进一步纯化。用2-甲酰基氨基丙烯酸乙酯制备氨基酸盐酸盐的常规方法
将100mg 2-甲酰基氨基丙烯酸乙酯在200ml冰醋酸中用Pd/C(10％)和氢气氢化，直至反应完全。然后滤出催化剂，在旋转蒸发仪中尽可能快地将乙酸汽提出，把残余物在200ml 50％浓盐酸中回流5小时。把盐酸在旋转蒸发仪中汽提出，将产物在50℃减压干燥，然后用乙醚洗涤数次。所得盐酸盐为苍白色晶体。
用18.9g(150mmol)环辛酮制得了25.0g环辛基甘氨酸盐酸盐。用22.4g(200mmol)环庚酮制得了36.2g环庚基甘氨酸盐酸盐。用16.5g(150mmol)2-降冰片烷酮制得了26.6g 2-降冰片烷基甘氨酸盐酸盐。用19.7g(120mmol)1-甲酰基金刚烷制得了26.0g金刚烷基丙氨酸盐酸盐。用12.6g(100mmol)1-甲酰基-1-甲基环己烷制得了16.6g γ-甲基环己基丙氨酸盐酸盐。用16.8g(150mmol)4-甲基环己酮制得了25.9g 4-甲基环己基甘氨酸盐酸盐。用15g反-1-甲酰基-4-甲基环己烷制得了18g反-4-甲基-1-环己基丙氨酸盐酸盐。用9g 3,3-二甲基-1-甲酰基环己烷制得了10g 3,3-二甲基-1-环己基丙氨酸盐酸盐。
上述合成所需的醛1-甲酰基-3,3-二甲基环己烷是通过基于Moskal和Lensen的方法(Rec.Trav.Chim.Pays-Bas106(1987)137-141)的方法制得的。
在-60℃、搅拌下，用10分钟将正丁基锂的正己烷溶液(72ml,115mmol)滴加到异氰基甲基膦酸二乙酯(17ml,105mmol)在280ml无水乙醚内的溶液中。然后将所得悬浮液在-60℃搅拌15分钟，用10分钟加入3,3-二甲基环己酮(13g,105mmol)在100ml无水乙醚中的溶液，同时将温度保持在-45℃以下。将该反应混合物的温度升至0℃，在0℃搅拌90分钟后，小心地加入150-200ml 38％强度的盐酸。将该混合物在室温剧烈搅拌15小时以使水解完全。分离出有机相，依次用200ml水、200ml饱和碳酸氢钠溶液、和200ml饱和氯化钠溶液洗涤。用硫酸镁干燥，过滤，在旋转蒸发仪中浓缩以除去溶剂。所得残余物无需进一步纯化而直接作为合成氨基酸的原料。
环戊基甘氨酸是通过用6N盐酸将N-乙酰基-(D,L)-环戊基甘氨酸水解制得的，其中N-乙酰基-(D,L)-环戊基甘氨酸是如J.T.Hill和F.W.Dunn在《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)30(1965),1321中所述制得的。Boc-(D)-α-甲基环己基丙氨酸
在250mg 5％Rh/Al2O3存在下、在10巴压力、50℃温度下，将3.4g(12.2mmol)Boc-(D)-α-甲基-Phe-OH在100ml甲醇中用氢气氢化24小时。过滤，并把溶剂汽提出，获得了2.8g Boc-(D)-α-甲基-Cha-OH。1H-NMR(DMSO-d6,δin ppm):12(sehr breites Signal,COOH)；1,7-0,8(25H；1,35(s,Boc),1,30(s,Me))
Boc-(3-Ph)-Pro-OH是通过类似于J.Y.L.Chung等人(J.Y.L.Chung等人，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)55(1990),270)的方法合成的。制备Boc-1-四氢萘基甘氨酸
Boc-1-四氢萘基甘氨酸是用1,2-二氢化萘制得的。先用HBr将1,2-二氢化萘转化成1-四氢萘基溴(类似于《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)37(1994),1586的方法)。然后将该溴化物与乙酰氨基丙二酸二乙酯反应，水解裂解后，在标准条件下将所得α-氨基酸转化成Boc-保护型氨基酸。E.Reimann和D.Voss描述了另一种可能的制备方法(E.Reimann,D.Voss,《药物文献》(Arch.Pharm.)310(1977),102)。制备Boc-(D,L)-Dch-OH
将Boc-(D,L)-Dpa-OH(1mmol)与催化量的5％Rh/Al2O3在12ml甲醇中于5巴压力下氢化。过滤，将溶剂减压除去，以一定量产率制得了产物。制备H-(D,L)-Chea-OH
在惰性气氛下，将由环庚基甲醇和甲磺酰氯制得的4.0g甲磺酸环庚基甲酯(19.39mmol)与4.9g二苯甲酮亚胺甘氨酸乙酯(18.47mmol)、8.9g无水碳酸钾细粉末(64.65mmol)和1g溴化四丁基铵(3mmol)在50ml无水乙腈中回流10小时。然后滤出碳酸钾，将滤液蒸发至干，把粗产物通过与20ml 2N盐酸在40ml乙醇中于室温搅拌1.5小时来直接水解。将反应溶液稀释，然后用乙酸乙酯在酸性范围内提取二苯甲酮，之后用DCM在碱性范围内(pH=9)提取H-D,L-Chea-OEt，把溶液用硫酸镁干燥，在旋转蒸发仪中蒸发。获得了3.7g产物，产率约为95％。
Boc-(D,L)-(3,4,5-(MeO)3)Phe-OH是通过用三甲氧基苄基氯将二苯甲酮亚胺甘氨酸乙酯烷基化，然后引入Boc保护基并将酯水解制得的。
H-(D,L)-β,β-Me2Cha-OH是通过U.Schollkopf,R.Meyer,L.Ann.Chem.(1977)1174-82的方法制得的。
在每一情况下，通过常规方法在水/二氧杂环己烷中用二碳酸二叔丁酯将所述氨基酸转化成Boc-保护型氨基酸，然后用乙酸乙酯/己烷混合物重结晶，或通过硅胶色谱法(流动相：乙酸乙酯/石油醚混合物)纯化。
如反应方案Ⅰ所示，使用Boc-保护的氨基酸作为B结构单元。
在有些情况下，将作为B结构单元的所述氨基酸转化成苄基酯，并与适当保护的A结构单元连接。对于具有仍然游离的N-H官能团的化合物，通过氢化将苄酯基除去，并通过重结晶、盐沉淀或柱色谱法纯化结构单元A-B-OH。下面以tBuOOC-CH2-(Boc)(D)Cha-OH作为实例描述该途径。合成(D)-环己基丙氨酸苄酯
用水分离器将100g(481mmol)(D)-环己基丙氨酸盐酸盐、104g(962mmol)苄醇和109.7g(577mmol)对甲苯磺酸酯一水合物在2200ml甲苯中的悬浮液缓慢地加热至回流。在80-90℃观察到释放出了氯化氢，并且该悬浮液溶解了，获得了澄清溶液。当不再有水分离出时(约4小时)，蒸馏出500ml甲苯，将该反应混合物过夜冷却，滤出所得残余物，并用己烷洗涤2次，每次用1000ml己烷。然后把所得残余物(195g)悬浮在2000ml二氯甲烷中，加入1000ml水后，通过在搅拌下逐步加入50％强度的氢氧化钠溶液来将pH调节至9-9.5。分离出有机相，用水洗涤2次，每次用500ml水，用硫酸钠干燥，并过滤以除去干燥剂，将滤液浓缩，获得了115g(94％)本标题产物，为苍白色油状物。N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酸苄酯
将115g(440mmol)(D)-环己基丙氨酸苄酯溶解在2000ml乙腈中，在室温加入607.5g(4.40mol)碳酸钾和94.3g(484mol)溴乙酸叔丁酯，将该混合物在室温搅拌3天。滤出碳酸盐，用乙腈洗涤，将母液浓缩(30℃,20mbar)，把所得残余物置于1000ml甲基叔丁基醚中，将有机相用5％强度的柠檬酸和饱和碳酸氢钠溶液萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤以除去干燥剂，浓缩，把所得油状物(168g)直接用于下一反应。N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酸苄酯
将上述合成中获得的油状物(168g,447mmol)溶解在1400ml乙腈中，加入618g(4.47mmol)碳酸钾粉末和107.3g(492mmol)二碳酸二叔丁酯后，在室温搅拌6天。抽滤出碳酸钾，用约1000ml乙腈洗涤，将滤液浓缩。获得了230g所需产物。N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酸环己基铵盐
将115g N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酸苄酯溶解在1000ml纯乙醇中，在9g 10％披钯活性炭存在下、在大气压、25-30℃温度下用氢气氢化2小时。过滤，并在旋转蒸发仪中除去溶剂，获得了100g(260mmol)黄色油状物，将该油状物置于1600ml丙酮中，并加热至回流。移去加热浴，通过滴液漏斗迅速加入27g(273mmol)环己基胺的丙酮溶液。在将该反应混合物冷却至室温的过程中，结晶出了所需的盐。滤出固体，用200ml丙酮洗涤，为了进行最终纯化，用丙酮再重结晶一次。将残余物在真空烘箱中于30℃干燥，获得了70.2g所需盐，为白色粉末。
以类似方式用环己基甘氨酸作为前体制得了N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酸环己基铵盐。N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环庚基甘氨酸和N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环戊基甘氨酸衍生物是用相应的环庚基甘氨酸和环戊基甘氨酸化合物制得的。N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚乙基)-(D)-环己基丙氨酸环己基铵盐：a)3-溴丙酸叔丁酯
在逆流氮气下，在-30℃，将16.64g(109mmol)溴丙酸、150ml浓缩2-甲基丙烯和2ml浓硫酸加到高压玻璃容器中，将该高压反应器紧密密封，把混合物在室温搅拌72小时。为了进行后处理，把该反应容器再一次冷却至-30℃，将反应溶液小心地倒入200ml冰冷的饱和碳酸氢钠溶液中。在搅拌下蒸发掉过量的2-甲基丙烯，将残余物用二氯甲烷萃取3次，每次用50ml二氯甲烷，合并有机相，用硫酸钠干燥，过滤以除去干燥剂，在水泵真空下浓缩。将该油状残余物通过柱色谱法纯化(流动相：正己烷，之后是正己烷/乙醚9∶1)。获得了18.9g本标题化合物。b)N-(叔丁氧基羰基亚乙基)-(D)-环己基丙氨酸苄酯
将49.4g(189mmol)(D)-环己基丙氨酸苄酯溶解在250ml乙腈中，在室温用31.6g(151mmol)溴丙酸叔丁酯处理该溶液，将混合物回流5天。把混合物过滤以除去形成的沉淀物，用乙腈反复洗涤，将滤液在水泵真空下浓缩，把残余物置于350ml二氯甲烷中，将该有机相用5％强度的柠檬酸和饱和碳酸氢钠溶液萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤以除去干燥剂，并浓缩。把该油状残余物通过柱色谱法纯化(流动相：二氯甲烷，之后是二氯甲烷/甲醇95∶5)。获得了稍微不纯的油状物，将其直接用于下一反应。c)N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚乙基)-(D)-环己基丙氨酸苄酯
将在上述合成中获得的油状物(30g，最多70mmol)溶解在150ml乙腈中，将该溶液用28ml(160mmol)二异丙基乙胺和19.2g(88mmol)二碳酸二叔丁酯处理，并在室温搅拌3天。把该反应混合物在旋转蒸发仪中于水泵真空下浓缩，将残余物置于正己烷中，把该混合物用5％强度的柠檬酸溶液(每次用3ml)洗涤5次，合并有机相，用硫酸钠干燥，过滤以除去干燥剂，并浓缩，将该残余物通过柱色谱法分离(流动相：己烷/乙酸乙酯95∶5)。获得了32.66g(64mmol)所需产物。d)N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚乙基)-(D)-环己基丙氨酸环己基铵盐
将32.66g(64mmol)N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚乙基)-(D)-环己基丙氨酸苄酯溶解在325ml纯乙醇中，并在3g 10％披钯活性炭存在下、在25-30℃、大气压下用氢气氢化14小时。将该溶液经由Celite_过滤，用乙醇洗涤Celite_，在旋转蒸发仪中将溶剂除去，获得了26.7g黄色油状物，将其置于丙酮中，并加热至回流。除去加热浴，通过滴液漏斗迅速加入7g(70mmol)环己基胺的丙酮溶液。在将该反应混合物冷却至室温的过程中，所需盐结晶了出来。滤出固体，用25ml丙酮洗涤，为了进行最终纯化，用丙酮再重结晶一次。将该残余物在真空烘箱中于30℃干燥，获得了26.6g(54mmol)所需盐，为白色粉末。N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基-3,4-去氢脯氨酸：a)将N-Boc-Pyr-OH(5g,23.45mmol)溶解在甲醇(50ml)中，加入HCl的二氧杂环己烷溶液(4N,30ml)。然后将该混合物加热回流12小时。在旋转蒸发仪中除去溶剂，获得了产物H-Pyr-OMe盐酸盐。产量：3.84g(100％)。b)在-10℃，将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-OH(8g,20.75mmol)溶解在二氯甲烷(75ml)中，加入乙基二异丙基胺(15.5ml,89.24mmol)。将该混合物在室温搅拌5分钟后，滴加H-Fyr-OMe盐酸盐(3.4ml,20.75mmol)在二氯甲烷(25ml)中的溶液。然后滴加丙烷膦酸酐在乙酸乙酯中的溶液(50％强度，20ml,26.96mmol)，并在-10℃-0℃搅拌2小时。将该反应混合物用二氯甲烷稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(2×80ml)、5％强度的柠檬酸溶液(2×15ml)和饱和氯化钠溶液(1×20ml)洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，把溶剂在旋转蒸发仪中除去。通过快速色谱法(硅胶，二氯甲烷/甲醇=95/5)纯化粗产物。产量：6.2g(60％)。c)将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OMe(5.5g,11.12mmol)溶解在二氧杂环己烷(40ml)中，加入氢氧化钠水溶液(1N,22.2ml,22.24mmol)，将该混合物在室温搅拌2小时。将二氧杂环己烷在旋转蒸发仪中除去，把水相用乙酸乙酯洗涤，并用硫酸氢钾溶液(20％强度)酸化至pH1-2。将水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，并用硫酸钠干燥。产量：5g(94％)，为无色泡沫状物。在用水饱和的正己烷中重结晶，获得了相应的羧酸，为无色晶体(熔点=158-160℃)。N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基-3,4-去氢脯氨酸：
以类似方式用N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酸和3,4-去氢脯氨酸甲酯合成了该化合物。N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酸：a)将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-OH(20g,51.88mmol)溶解在无水二氯甲烷(100ml)中。冷却至-5℃后，滴加N-乙基二异丙基胺(90ml,518.88mmol)，并继续搅拌5分钟。然后在-5℃加入H-Pro-OBn×HCl(12.54g,51.88mmol)，将该混合物搅拌5分钟后，用30分钟滴加用二氯甲烷(45ml)稀释的50％强度的丙烷膦酸酐乙酸乙酯溶液(45.1ml,62.26mmol)。将该混合物在0-5℃搅拌1小时后，将其缓慢地升至室温，并在室温搅拌12小时。将该混合物用二氯甲烷稀释，并依次用饱和碳酸氢钠溶液、5％强度的柠檬酸溶液和饱和氯化钠溶液洗涤。用硫酸钠干燥后，将溶剂在真空中蒸馏掉。产量：28.9g(浅黄色油状物，97％)。b)将a)中所得产物(28.5g,49.76mmol)溶解在甲醇(650ml)中，加入10％披钯炭(1.8g)，将该混合物在室温、1个大气压下氢化。然后经由Celite_过滤以除去催化剂，将滤液真空浓缩。产量：22.2g(无色泡沫状物，92％)。N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酸：
以类似方式用N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酸和脯氨酸甲酯合成了该化合物。D结构单元：
用作D结构单元的化合物(L)-脯氨酸、(L)-2-哌啶酸和(L)-氮杂环丁烷丁酸是以游离氨基酸、Boc-保护的化合物、或相应的甲酯的形式商购获得的。如果使用(L)-3,4-去氢脯氨酸或(D,L)-4,5-去氢2-哌啶酸或它们相应的衍生物作为D结构单元，则一般是在最后的步骤中将制得的化合物氢化来生成相应的脯氨酸衍生物。(L)-3,4-去氢脯氨酸(H-Pyr-OH)可商购获得，(D,L)-4,5-去氢2-哌啶酸(H-(D,L)-Dep-OH)可通过A.Burgstahler,C.E.Aiman《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)25(1960),489或者C.Herdeis,W.EngelArch.pharm 326(1993),297的方法制得。E结构单元是如下合成的：5-氨基甲基-2-氰基噻吩：
该结构单元是如WO95/23609所述合成的。4-氨基甲基-2-氰基噻吩：a)2-溴-4-甲酰基噻吩
将36g(320mmol)3-甲酰基噻吩溶解在600ml二氯甲烷中，把该溶液冷却至5℃，以少量多次方式加入100g(750mmol)三氯化铝，然后将该反应混合物回流。用45分钟滴加59g(19ml,360mmol)溴在40ml二氯甲烷中的溶液，将该混合物在回流状态下后反应4小时。冷却后，将该反应溶液倒入600g冰水中，并用二氯甲烷萃取，将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，在旋转蒸发仪中真空浓缩。获得了64.5g粗产物，将其通过柱色谱法(硅胶，二氯甲烷/石油醚)纯化。总共获得了56.5g稍微不纯的产物。b)2-氰基-4-甲酰基噻吩
将7.6g(85mmol)氰化亚铜(Ⅰ)加到13.53g(70.82mmol)2-溴-4-甲酰基噻吩在25ml DMF内的溶液中，将该反应混合物回流3.5小时，期间起初呈浅绿色的悬浮液转变成了黑色溶液。加入水后，将该反应混合物用乙酸乙酯反复萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，在轻度减压条件下浓缩。用乙醚处理该残余物(7g)，获得了1.6g纯产物。将母液与得自其它批料中的粗产物一起通过柱色谱法(硅胶，二氯甲烷/石油醚)纯化。将全部56.5g2-溴-4-甲酰基噻吩反应以生成2-氰基-4-甲酰基噻吩，获得了12.6g纯产物(产率为31％)。c)2-氰基-4-羟基甲基噻吩
将3.47g(91.8mmol)硼氢化钠以少量多次方式加到12.6g(91.8mmol)2-氰基-4-甲酰基噻吩在200ml乙醇内的悬浮液中，并在室温搅拌2小时，期间该反应混合物缓慢地变成了澄清溶液。真空浓缩后，将残余物置于乙酸乙酯中，依次用饱和氯化钠溶液、5％强度的柠檬酸和饱和氯化钠溶液洗涤，将有机相用硫酸钠干燥，并真空浓缩。获得了11.7g几乎纯的产物(产率为91.5％)。d)4-溴甲基-2-氰基噻吩
在室温将11.7g(84.07mmol)2-氰基-4-羟基甲基噻吩与24.1g(91.87mmol)三苯基膦溶解在100ml THF中，在冷却(冰浴)条件下以少量多次方式加入30.47g(91.87mmol)四溴甲烷。在室温搅拌3小时后，将该混合物真空浓缩，通过硅胶色谱法(二氯甲烷/石油醚)纯化。获得了仍含有石油醚的18.8g浅黄色结晶产物。e)4-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-2-氰基噻吩
将18.81g 4-溴甲基-2-氰基噻吩(粗产物，最多84.07mmol)溶解在160ml THF中，将该溶液冷却至5℃，以少量多次方式加入3.07g(102.4mmol)80％的氢化钠悬浮液。然后在5℃滴加溶解在160ml THF中的22.25g(102.4mmol)亚氨基二甲酸二叔丁酯，之后将该混合物在室温搅拌过夜。因为TLC显示该反应不完全，所以将该混合物在30-35℃加热4.5小时。冷却至0-5℃后，缓慢地滴加33ml饱和氯化铵溶液，在真空中将THF蒸馏掉，把所得残余物用乙酸乙酯反复萃取，将该乙酸乙酯相用饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥，在旋转蒸发仪中蒸发。将该红色粘性残余物(34.61g)作为粗产物直接用于下一反应。f)4-氨基甲基-2-氰基噻吩盐酸盐
将34.61g 4-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-2-氰基噻吩(粗产物，最多84.07mmol)溶解在600ml乙酸乙酯中，将该溶液冷却至0-5℃，用HCl气体饱和，并升至室温。3小时后，将所得悬浮液在旋转蒸发仪中蒸发，把产物与二氯甲烷反复共蒸馏，将残余物在搅拌下用乙醚萃取，并真空干燥。获得了13.85g粗产物，为苍白色粉末。两步产率：94.3％。2-氨基甲基-4-氰基噻吩a)4-氰基噻吩-2-甲醛
将49.3g(258.05mmol)4-溴噻吩-2-甲醛和27.8g(310.41mmol)氰化亚铜(Ⅰ)悬浮在130ml无水DMF中，将该悬浮液回流8小时。把溶剂在旋转蒸发仪中于40℃真空蒸发，将所得残余物悬浮在乙酸乙酯中，把该悬浮液转移到索格利特萃取器中。将残余物萃取过夜，把该黄色溶液用硫酸钠干燥，并在旋转蒸发仪中真空蒸发，将所得黄色固体用乙醚重结晶。获得了25.3g产物(产率为80％)。b)4-氰基噻吩-2-甲肟(carbaldehyd-oxim)
将11.6g(84.6mmol)4-氰基噻吩-2-甲醛溶解在140ml甲醇中，加入12.3g(116.1mmol)碳酸钠。然后在15℃的冷却温度下，以少量多次方式加入6.5g(93.5mmol)盐酸羟基胺，将该混合物在10℃搅拌2小时。加入80ml水后，将该反应混合物用乙醚萃取5次，每次用50ml乙醚，将有机相用硫酸钠干燥，把溶剂真空除去。获得了12.5g(产率为96％)所需产物，为黄色晶体粉末。c)2-氨基甲基-4-氰基噻吩盐酸盐
将11.22g(171.64mmol)细锌粉以少量分批方式小心地加到冷却至0-5℃的、4.65g(30.60mmol)4-氰基噻吩-2-甲肟在50ml三氟乙酸内的溶液中，其中使温度不能超过15℃。在室温搅拌3小时后，倾出过量的锌，把大多数三氟乙酸真空(油泵)除去，将剩余油状物冷却至0℃，有少量多次方式加入预冷却至0℃的150ml 3N氢氧化钠水溶液与21二氯甲烷的混合物。滤除不溶物后，分离出有机相，将水相用20ml二氯甲烷萃取8次，合并有机相，用硫酸钠干燥，然后在冰冷却下加入20ml 6M的氯化氢甲醇溶液。期间产物以盐酸盐形式沉淀了出来，为白色固体，将该悬浮液在4℃过夜冷却以使结晶完全。获得了2.2g(产率为50％)产物，为无色针状物。5-氨基甲基-3,4-二甲基噻吩-2-甲酰胺盐酸盐
将19g(105.42mmol)5-氰基-3,4-二甲基噻吩-2-甲酰胺悬浮在760ml甲醇中，加入110ml 2N盐酸和9.5g披钯炭(10％)，将该混合物在室温氢化。通入了4.71氢气后(4小时)，将甲醇真空蒸馏掉，把水相用乙酸乙酯萃取3次，然后冷冻干燥。获得了16.3g(产率为70.4％)所需产物，为白色固体。5-氨基甲基异噁唑-3-甲酰胺a)5-氯甲基异噁唑-3-甲酸乙酯
在搅拌下，将21.2g(210mmol)三乙胺滴加到冷却至10-15℃的、30g(198mmol)2-氯-2-羟基亚氨基乙酸乙酯和150ml炔丙基氯的混合物中，继续在室温搅拌1小时，然后加入水，将该混合物用乙醚萃取，把有机相用硫酸镁干燥，并在旋转蒸发仪中真空蒸发。把残余物在0.5托真空中蒸馏，产物沸点为116-122℃。b)5-氯甲基异噁唑-3-甲酸
将14g(250 mmol)氢氧化钾加到47.3g(250mmol)5-氯甲基异噁唑-3-甲酸乙酯在150ml乙醇内的溶液中，将该反应混合物在60-70℃搅拌6小时。冷却后，将该混合物真空浓缩，把残余物置于水中，并用乙醚萃取，用盐酸将水相酸化，然后用乙醚反复萃取，把乙醚相用硫酸钠干燥，并真空浓缩(油泵，50℃)。获得了31g(产率为77％)所需产物。c)5-氯甲基异噁唑-3-甲酰氯
将120g(743mmol)5-氯甲基异噁唑-3-甲酸与500ml亚硫酰氯和2滴吡啶一起回流10小时，然后真空浓缩，之后在20托蒸馏。产物沸点为125-133℃。获得了78g(产率为58％)产物。d)5-氯甲基异噁唑-3-甲酰胺
在10-15℃，向10g(55.56mmol)5-氯甲基异噁唑-3-甲酰氯在100ml二氯甲烷内的溶液中通1小时氨气，然后继续在室温搅拌1小时。将该溶液冷却至0℃后，抽滤出沉淀，用少量冷的二氯甲烷洗涤，通过与水搅拌将残余物提取2次，以除去铵盐。真空干燥，获得了6.58g(产率为74％)纯产物，为苍白色粉末。e)5-氨基甲基异噁唑-3-甲酰胺盐酸盐
将2.44g(15.2mmol)5-氯甲基异噁唑-3-甲酰胺加到100ml浓氨水与72ml甲醇的混合物中，把该反应溶液加热至40℃，在此期间持续用氨气饱和。6小时后，前体反应了。将甲醇真空除去，把水相用二氯甲烷萃取2次，然后在旋转蒸发仪中在温和条件下真空蒸发至干。将所得白色残余物作为粗产物直接用于偶合反应。
2-氨基甲基噁唑-4-硫代甲酰胺和2-氨基甲基噻唑-4-硫代甲酰胺是通过G.Videnov,D.Kaier,C.Kempter和G.Jung Angew.Chemie(1996)108,1604的方法制得的，其中所描述的N-Boc-保护的化合物是用乙醚合盐酸在二氯甲烷中脱保护的。4-氨基甲基噻唑-2-硫代甲酰胺a)一硫代乙二酰胺(monothiooxals_urediamid)
一硫代乙二酰胺是通过W.Walter,K.-D.Bode Liebigs Ann.Chem.660(1962),74-84的方法由硫代草氨酸乙酯制得的。b)2-氨基甲酰基-4-氯甲基噻唑
将10g(96mmol)硫代草氨酸乙酯加到170ml正丁醇中，加入26g(204mmol)1,3-二氯丙酮，将该混合物在氮气氛下于112℃加热90分钟。然后将该反应混合物真空浓缩，通过与正己烷(120ml)搅拌来萃取残余物。获得了10g纯产物。c)4-Boc-氨基甲基-2-氨基甲酰基噻唑
将10g(56.6mmol)2-氨基甲酰基-4-氯甲基噻唑加到350ml甲醇和80ml 25％强度氨水的氨饱和溶液中。将该反应混合物在40-42℃加热6小时，同时继续用氨饱和，然后真空浓缩，并与甲醇共蒸馏，之后通过先与乙醚、然后与丙酮搅拌来依次萃取残余物。分离到了仍含有少量氯化铵的7.6g粗产物。为了除去该副产物，将粗产物在二氧杂环己烷水溶液中与(Boc)2O反应，把该保护的化合物通过柱色谱法纯化。获得了4.95g纯产物。d)4-Boc-氨基甲基-2-氰基噻唑
将4.95g(19.24mmol)4-Boc-氨基甲基-2-氨基甲酰基噻唑加到90ml二氯甲烷和16.7ml(97.44mmol)二异丙基乙胺的混合物中，将该混合物冷却至0℃，在0-5℃滴加6.35ml三氟乙酸酐在10ml二氯甲烷中的溶液，然后将该混合物升至室温(TLC检查)。之后加入25ml水，将该混合物在室温搅拌30分钟，并用10％强度的柠檬酸溶液将pH调节至2.5，将有机相反复洗涤，用硫酸镁干燥，并真空浓缩。获得了5.4g粘性浅棕色粗产物，将其不进行纯化直接用于下一步反应。e)4-Boc-氨基甲基-2-硫代氨基甲酰基噻唑
将d)所得粗产物(最多19.24mmol)溶解在65ml吡啶和5ml三乙胺中，用硫化氢饱和，并室温放置周末。然后将该反应混合物在旋转蒸发仪中真空蒸发，把残余物置于乙醚和乙酸乙酯的混合物中，将该混合物用10％强度的柠檬酸溶液和水洗涤，用硫酸镁干燥，并在旋转蒸发仪中真空蒸发。获得了6.0g浅黄色泡沫状固体。f)4-氨基甲基-2-硫代氨基甲酰基噻唑盐酸盐
将上一实验所得产物置于100ml二氯甲烷中，加入30ml约5摩尔氯化氢乙醚溶液，将该混合物在室温搅拌过夜。然后将该反应混合物在旋转蒸发仪中真空蒸发至干，与乙醚反复共蒸馏，然后通过与二氯甲烷搅拌来进行萃取。获得了4.15g所需产物，为浅黄色无定形物。4-脒基-2-(N-Boc-氨基甲基)-5-甲基噻唑×HOAca)α-乙酰基甘氨酸甲酯盐酸盐
将叔丁基钾(17.8g,157.9mmol)加到THF(120ml)中，在-70℃加入N-二苯基亚甲基甘氨酸甲酯(40g,157.9mmol)。在该温度下将此淡黄色溶液搅拌30分钟后，在-70℃将其滴加到乙酰氯(12.4g,157.9mmol)的THF(70ml)溶液中。将该混合物在此温度下搅拌1.75小时后，加入3N盐酸(160ml)，将该淡黄色悬浮液在室温搅拌10分钟。用旋转蒸发仪在室温除去THF，剩余水相用乙醚洗涤3次。将水相冷冻干燥，通过与甲醇搅拌来萃取残余物。在35℃用旋转蒸发仪将产物的甲醇溶液浓缩。产量：26.4g(157.9mmol，定量，淡黄色固体)。b)Boc-Gly-(α-乙酰基-Gly)-OMe
将Boc-Gly-OH(24.5g,137.27mmol)加到THF(400ml)中，加入三乙胺(13.87g,137.19mmol)。将该无色溶液冷却至-20℃，在该温度下滴加氯甲酸异丁酯(18.75g,137.28mmol)的THF(20ml)溶液。将该无色悬浮液在-20℃搅拌30分钟，然后分批加入α-乙酰基甘氨酸甲酯盐酸盐(23.0g,137.3mmol)。将该混合物在-20℃搅拌30分钟后，用45分钟滴加三乙胺(13.87g,137.19mmol)的THF(20ml)溶液。将该混合物在-20℃搅拌4小时后，继续在室温搅拌12小时。抽滤出残余物，用THF洗涤，合并THF相，用旋转蒸发仪浓缩。产量：44.1g(浅棕色油状物)。1H-NMR(270MHz,CDCl3)δ=1.45(s,9H),2.40(s,3H),3.85(s,3H),3.90(d,J=6.5Hz,2H),5.25(d,J=6.5Hz,1H),7.30(sbr,1H).c)2-(N-Boc-氨基甲基)-5-甲基噻唑-4-甲酸甲酯
将Boc-Gly-(α-乙酰基-Gly)-OMe(39.8g,138.2mmol)加到THF(400ml)中，在室温滴加Lawesson’s试剂(96.6g,238.8mmol)。然后将该淡黄色溶液回流1.5小时。用旋转蒸发仪除去THF。将该残余物(淡红棕色油状物)通过与乙醚(600ml)搅拌来萃取。把乙醚相从未溶解的淡棕色油状物中倾出，依次用5％强度的柠檬酸(2×)、饱和碳酸氢钠溶液(9×)和水(2×)洗涤。干燥(硫酸镁)后，用旋转蒸发仪将溶剂除去。产量：22.0g(77mmol,56％，淡棕色固体)。1H-NMR(270MHz,CDCl3)δ=1.50(s,9H),2.75(s,3H),3.95(s,3H),4.55(d,J=6.5Hz,2H),5.45(t,J=6.5Hz,1H).(Hauptrotamer bzgl.BOC-Gruppe)d)2-(N-Boc-氨基甲基)-5-甲基噻唑-4-甲酸
将2-(N-Boc-氨基甲基)-5-甲基噻唑-4-甲酸甲酯(22.0g,77mmol)溶解在乙醇(100ml)中，加入LiOH(2.2g,92mmol)的水(50ml)溶液。将该混合物在室温搅拌30分钟后，用旋转蒸发仪将乙醇除去，把剩余溶液用水(70ml)稀释。将该水相用乙酸乙酯(3×)洗涤，并用20％强度的硫酸氢钠溶液将pH调节至2，期间析出了浅棕色油状物。将该水相用二氯甲烷萃取，合并有机萃取液，干燥(硫酸镁)，并真空浓缩。将该浅棕色残余物通过与二异丙基醚搅拌来萃取。抽滤出剩余的无色沉淀，并用二异丙基醚洗涤。产量：6.9g(25.4mmol,33％，无色固体)。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6)δ=1.40(s,9H),2.65(s,3H),4.30(d,J=6.5Hz,2H),7.80 (t,J=6.5Hz,1H).e)2-(N-Boc-氨基甲基)-5-甲基噻唑-4-甲酰胺
将2-(N-Boc-氨基甲基)-5-甲基噻唑-4-甲酸(6.8g,25mmol)溶解在THF(100ml)中，加入三乙胺(2.53g,25mmol)。将该混合物冷却至-20℃后，滴加氯甲酸异丁酯(3.41g,25mmol)的THF(10ml)溶液。将该混合物在-20℃搅拌30分钟后，向该浅棕色悬浮液中通45分钟氨气。然后将该混合物升至室温。抽滤出残余物，并用THF洗涤，将滤液浓缩。产量：6.9g(25mmol，定量)。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6)δ=1.40(s,9H),2.65(s,3H),4.30(m,2H),7.40(sbr,1H),7.50(sbr,1H),7.80(t,J=6.5Hz,1H).f)4-氰基-2-(N-Boc-氨基甲基)-5-甲基噻唑
将2-(N-Boc-氨基甲基)-5-甲基噻唑-4-甲酰胺(6.8g,25mmol)置于二氯甲烷(120ml)中。将该混合物冷却至0℃后，滴加二异丙基乙胺(15.84g,122.8mmol)。然后，在-5℃用30分钟滴加三氟乙酸酐(8.25g,39.3mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。将该混合物在0℃搅拌30分钟后，将其升至室温，并继续搅拌12小时。将该混合物用二氯甲烷(100ml)稀释，并依次用20％强度的柠檬酸、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤。将该有机相干燥(硫酸镁)，并真空浓缩。产量：6.3g(25mmol，定量)。g)4-脒基-2-(N-Boc-氨基甲基)-5-甲基噻唑×CH3COOH
将4-氰基-2-(N-Boc-氨基甲基)-5-甲基噻唑(5.5g,21.74mmol)溶解在甲醇(15ml)中，加入N-乙酰基半胱氨酸(4.1g,25.12mmol)。然后将该混合物加热至60℃，通入22小时氨气。将混合物用甲醇稀释，并流过乙酸根离子交换剂。用旋转蒸发仪除去甲醇，将残余物通过与丙酮搅拌来萃取。抽滤出无色残余物，并真空干燥。产量：4.75g(14.4mmol,66％，无色固体)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ=1.40(s,9H),1.80(s,3H),2.60(s,3H),4.35(d,J=6.5Hz,2H),7.90(t,J=6.5Hz,1H).2-氨基甲基-5-脒基-4-甲基噻唑×2HCla)N-Boc-甘氨硫代酰胺
将N-Boc-甘氨腈(12.0g,76.8mmol)和二乙基胺(0.16ml,2.1mmol)溶解在甲苯(100ml)中。将该溶液冷却至-10℃，用硫化氢饱和，然后在室温搅拌过夜。抽滤出形成的沉淀，用甲苯洗涤。将产物在45℃真空干燥。产量：13.2g(69.4mmol,90.3％，淡黄色固体)。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6)δ=1.40(s,9H),3.80(d,J=7Hz,2H),7.05(t,J=7Hz,1H),9.0(sbr,1H),9.65(sbr,1H).b)2-(N-Boc-氨基甲基)-4-甲基噻唑-5-甲酸甲酯
将N-Boc-甘氨硫代酰胺(10.0g,52.6mmol)加到甲醇(70ml)中，加入2-氯乙酰乙酸甲酯(7.9g,52.6mmol)。将该混合物在60℃加热2小时，然后在室温搅拌48小时。用旋转蒸发仪除去甲醇，把残余物通过与丙酮/乙醚搅拌来萃取。抽滤出剩余的沉淀，将滤液浓缩。从滤液中获得的固体是产物(通过TLC和HPLC证明是纯的)。产量：8.7g(30.4mmol,57.8％)。ESI-MS:287(M+H+)。c)2-(N-Boc-氨基甲基)-4-甲基噻唑-5-甲酸
将2-(N-Boc-氨基甲基)-4-甲基噻唑-5-甲酸甲酯(2.8g,9.74mmol)溶解在1,4-二氧杂环己烷(30ml)中，加入1N的氢氧化钠溶液(19ml)。将该混合物在室温搅拌4小时后，用旋转蒸发仪除去1,4-二氧杂环己烷。将残余物用水稀释，并用乙酸乙酯洗涤。将水相用20％强度的硫酸氢钾溶液酸化，抽滤出析出的沉淀，并用水洗涤。将获得的产物在真空干燥烘箱中于40℃干燥。产量：2.5g。d)2-(N-Boc-氨基甲基)-4-甲基噻唑-5-甲酰胺
将2-(N-Boc-氨基甲基)-4-甲基噻唑-5-甲酸(12.6g,46.27mmol)溶解在二氯甲烷(460ml)和二甲基甲酰胺(0.4ml)中。将该混合物冷却至0℃后，用30分钟滴加草酰氯(6.46g,50.90mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液。将该混合物在0℃搅拌2小时后，把其冷却至-20℃，在该温度下通入氨气直至反应完全。然后将该混合物升至室温，并用水洗涤。抽滤出析出的沉淀。将有机相用5％强度的柠檬酸溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，并用旋转蒸发仪浓缩。把所得溶液与前面滤出的沉淀合并，并在真空干燥烘箱中于50℃干燥。产量：9.8g(36.12mmol,78％)。e)2-(N-Boc-氨基甲基)-5-氰基-4-甲基噻唑
将2-(N-Boc-氨基甲基)-4-甲基噻唑-5-甲酰胺(11.13g,41.02mmol)悬浮在二氯甲烷(75ml)中，并冷却至0℃。在该温度下先加入乙基二异丙基胺(17.86ml,102.55mmol)，然后缓慢地加入三氟乙酸酐(6.56ml,47.17mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。搅拌1小时后，将该混合物用二氯甲烷稀释，用5％强度的柠檬酸溶液洗涤。干燥(硫酸镁)后，将溶剂用旋转蒸发仪除去，通过快速色谱法纯化粗产物。产量：6.5g(25.66mmol,63％)。f)2-(N-Boc-氨基甲基)-4-甲基噻唑-5-硫代甲酰胺
将2-(N-Boc-氨基甲基)-5-氰基-4-甲基噻唑(7.5g,29.61mmol)溶解在吡啶(30ml)中，加入三乙胺(27ml)。在0℃将该溶液用硫化氢饱和，然后在室温放置48小时。用旋转蒸发仪除去溶剂，把残余物置于乙酸乙酯中，用20％强度的硫酸氢钾溶液洗涤，用硫酸镁干燥。用旋转蒸发仪除去溶剂，把粗产物溶于二氯甲烷，并用石油醚沉淀。抽滤出沉淀产物，在真空干燥烘箱中于40℃干燥。产量：7.1g(24.7mmol,83％)。g)5-脒基-2-(N-Boc-氨基甲基)-4-甲基噻唑×HOAc
将2-(N-Boc-氨基甲基)-4-甲基噻唑-5-硫代甲酰胺(7.1g,24.70mmol)溶解在二氯甲烷(40ml)中，加入碘甲烷(17.5g,123.52mmol)。将该混合物在室温搅拌56小时后，用旋转蒸发仪除去溶剂。把残余物溶于10％强度的乙酸铵甲醇溶液(29ml)，并在40℃搅拌直至反应完全。用旋转蒸发仪除去溶剂，将残余物通过与二氯甲烷搅拌来萃取，抽滤出所得固体，并用二氯甲烷洗涤。把该残余物溶于甲醇，并通过乙酸根离子交换剂将其转化成相应的乙酸盐。用旋转蒸发仪除去溶剂，把所得浅红棕色油状物通过与二氯甲烷搅拌来萃取。在此期间，获得了产物，为无色固体，将其在40℃真空干燥。产量：5.3g(16.04mmol,65％)。h)5-脒基-2-氨基甲基-4-甲基噻唑×2HCl
将5-脒基-2-(N-Boc-氨基甲基)-4-甲基噻唑×HOAc(1.6g,4.84mmol)悬浮在二氯甲烷(20ml)中，在室温加入4M的HCl 1,4-二氧杂环己烷溶液(4.84ml,19.37mmol)，并将该混合物在室温搅拌3小时。滤出产物，用二氯甲烷洗涤，在40℃真空干燥。产量：0.73g(3.00mmol,62％)。2-氨基甲基-5-脒基-4-三氟甲基噻唑×2Hcla)2-(N-Boc-氨基甲基)-4-三氟甲基噻唑-5-甲酸乙酯
将N-Boc-甘氨硫代酰胺(5.0g,26.28mmol)溶解在乙腈(60ml)中，在5-10℃滴加2-氯-4,4,4-三氟乙酰乙酸乙酯(6.38g,26.28mmol)溶液。然后将该混合物在5℃搅拌30分钟，并在室温搅拌12小时。将该混合物冷却至0℃，滴加三乙胺(12ml,86.77mmol)。将该混合物在0℃搅拌20分钟后，此黄色悬浮液已经变成了澄清的浅红棕色溶液。然后在0℃缓慢地滴加亚硫酰氯(2.1ml,28.89mmol)。将该混合物在0℃搅拌20分钟后，把其在室温反应1小时。用旋转蒸发仪除去溶剂，把残余物置于水(100ml)中，并用乙酸乙酯反复萃取。合并有机相，干燥(硫酸钠)并浓缩。将粗产物通过色谱法(硅胶，MeOH:DCM=2:98)纯化。产量：2.2g(6.4mmol,24.5％)。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6)δ=1.30(t,J=6.5Hz,3H),1.45(s,9H),4.35(q,J=6.5Hz,2H),4.45(d,J=6.5Hz,2H),7.95(t,J=6.5Hz,1H).b)2-(N-Boc-氨基甲基)-4-三氟甲基噻唑-5-甲酰胺
将2-(N-Boc-氨基甲基)-4-三氟甲基噻唑-5-甲酸乙酯(15g,42.33mol)溶解在甲醇中。在室温向该溶液中通入氨气直至所有的酯都转化成了甲酰胺。用旋转蒸发仪除去溶剂，将粗产物通过快速色谱法纯化。产量：4.6g(14.14mmol,33％)。c)2-(N-Boc-氨基甲基)-5-氰基-4-三氟甲基噻唑
将2-(N-Boc-氨基甲基)-4-三氟甲基噻唑-5-甲酰胺(4.6g,14.14mmol)溶解在二氯甲烷(30ml)中，并冷却至-5℃。在该温度下加入乙基二异丙基胺(4.6g,35.35mmol)和三氟乙酸酐(3.4g,l6.26mmol)在二氯甲烷(10ml)中的溶液。然后，将该混合物在0℃搅拌2小时。将混合物依次用饱和碳酸氢钠溶液和5％强度的柠檬酸溶液洗涤。干燥(硫酸镁)后，用旋转蒸发仪除去溶剂。将粗产物通过与乙醚/石油醚搅拌来萃取。从油中分离出上清液，用旋转蒸发仪浓缩。产量：1.9g(6.18mmol,44％)。d)2-(N-Boc-氨基甲基)-4-三氟甲基噻唑-5-硫代甲酰胺
将2-(N-Boc-氨基甲基)-5-氰基-4-三氟甲基噻唑(4.6g,14.97mmol)溶解在吡啶(20ml)中，加入三乙胺(24ml)，把该溶液用硫化氢饱和。在室温反应2天后，用旋转蒸发仪除去溶剂。把粗产物置于乙酸乙酯中，并依次用20％强度的硫酸氢钠溶液和水洗涤。干燥(硫酸镁)后，用旋转蒸发仪除去溶剂。将粗产物通过快速色谱法纯化。产量：2.5g(7.32mmol,49％)。e)5-脒基-2-(N-Boc-氨基甲基)-4-三氟甲基噻唑
将2-(N-Boc-氨基甲基)-4-三氟甲基噻唑-5-硫代甲酰胺(2.5g,7.32mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)中，加入碘甲烷(10.4g,73.24mmol)。然后将该混合物在室温搅拌48小时。用旋转蒸发仪除去溶剂后，把残余物置于甲醇(5ml)中，加入10％强度的乙酸铵甲醇溶液(8.5ml,10.98mmol)。将该混合物在室温搅拌4天后，把该粗产物溶液流过乙酸根离子交换剂。用旋转蒸发仪除去溶剂，通过快速色谱法纯化粗产物。产量：0.8g(2.08mmol,28％)。f)5-脒基-2-氨基甲基-4-三氟甲基噻唑×2HCl
将5-脒基-2-(N-Boc-氨基甲基)-4-三氟甲基噻唑(0.8g,2.08mmol)溶解在二氯甲烷中，加入4M的HCl 1,4-二氧杂环己烷溶液(2.1ml,4.2mmol)。将该混合物在室温搅拌1小时后。用旋转蒸发仪除去溶剂。将所得粗产物不纯化直接用于下述反应。产量：0.6g(2.0mmol,97％)。ESI-MS:225(M+H+)。5-氨基甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈a)5-甲酰基-3-甲基噻吩-2-甲腈：
用20分钟将正丁基锂(179mmol)的正己烷(112ml)溶液加到冷却至-78℃的、25.1ml(179mmol)二异丙基胺在400ml四氢呋喃内的溶液中。将该溶液升至-35℃，然后再冷却至-78℃，在该温度下缓慢地滴加20.0g(162mmol)2-氰基-3-甲基噻吩在80ml四氢呋喃中的溶液。在此期间，溶液的颜色变成了暗红色。继续搅拌45分钟，缓慢地滴加63ml(811mmol)二甲基甲酰胺，将该混合物再搅拌30分钟。为了进行后处理，在-70℃加入27g柠檬酸在160ml水中的溶液。将该混合物用旋转蒸发仪浓缩，加入540ml饱和氯化钠溶液，将混合物用乙醚萃取3次(每次用250ml)。合并有机萃取液，用硫酸镁干燥。滤出干燥剂后，在水泵真空下将溶剂蒸馏掉，将残余物通过柱色谱法(洗脱液：己烷/乙酸乙酯4/1)纯化。获得了23g(94％)本标题化合物。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=2.4(s,3H),8.0(s,1H),9.8(s,1H),b)5-羟基甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈：
在室温将5.75g(152mmol)硼氢化钠分批加到23g(152mmol)5-甲酰基-3-甲基噻吩-2-甲腈在300ml无水乙醇内的溶液中。将该反应混合物搅拌5分钟，在水泵真空下浓缩，把残余物置于乙酸乙酯中，用5％强度的柠檬酸溶液和饱和氯化钠溶液萃取，将有机相用硫酸镁干燥，滤出干燥剂，在室温水泵真空下将溶剂蒸馏掉。获得了24g本标题化合物，为暗红色油状物，其仍然含有溶剂，将其不进行进一步纯化直接用于下述反应。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=2.4(s,3H),4.7(m,2H),5.9(m,1H),7.0(s,1H).c)5-溴甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈：
将44g(167mmol)三苯基膦加到24g(152mmol)5-羟基甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈在180ml四氢呋喃内的溶液中。然后，加入55g(167mmol)四溴甲烷在100ml四氢呋喃中的溶液。将该混合物在室温搅拌90分钟。在水泵真空下用旋转蒸发仪将该反应混合物浓缩，将残余物通过柱色谱法(洗脱液∶己烷∶乙酸乙酯8∶2)纯化。获得了34g仍含有少量溶剂的本标题化合物。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=2.4(s,3H),5.0(s,2H),7.3(s,1H).d)5-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈：
将5.0g(167mmol)氢化钠(80％矿物油悬浮液)分批加到33.8g(152mmol)5-溴甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈在255ml四氢呋喃内的溶液中，并冷却至0℃。然后，滴加36.4g(167mmol)亚氨基二甲酸二叔丁酯在255ml四氢呋喃中的溶液，在此期间使温度不能超过5℃。将该混合物升至室温，并搅拌过夜。为了使反应完全，将该混合物在35℃温热3小时，然后冷却至室温，缓慢地加入510ml饱和氯化铵溶液。在水泵真空下将溶剂蒸馏掉，把残余物用乙酸乙酯反复萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，用旋转蒸发仪浓缩。获得了57.6g油状残余物，其仍含有亚氨基二甲酸二叔丁酯，把其作为粗产物直接用于下述反应。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6)：δ=1.45(s,18H),2.35(s,3H),4.85(s,2H),7.05(s,1H).e)5-氨基甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈盐酸盐
将52.6g 5-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈(d粗产物，不超过139mmol)溶解在950ml乙酸乙酯中，将该溶液冷却至0℃。将该溶液用氯化氢气体饱和，在此期间10分钟后析出了白色沉淀。将该混合物在室温搅拌2小时，在30℃搅拌1小时，然后将所得悬浮液用旋转蒸发仪浓缩，把残余物通过与乙醚搅拌来提取，滤除溶剂，把固体残余物在室温真空干燥。获得了24.7g(94％)本标题化合物，为白色粉末。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=2.4(s,3H),4.25(s,2H),7.3(s,1H),8.8-9.0(bs,3H).13C-NMR(DMSO-d6):15.0(CH3),36.4(CH2),104.8(C-2),113.8(CN),131.5(C-4),142.8(C-5),149.6(C-3).5-氨基甲基-3-氯噻吩-2-甲腈盐酸盐
按照合成5-氨基甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈的方法，用3-氯-2-氰基噻吩合成了该化合物，其中3-氯-2-氰基噻吩是通过用三氟乙酸酐将3-氯噻吩-2-甲酰胺脱水制得的。5-氨基甲基-4-甲基噻吩-3-硫代甲酰胺a)2-氨基-3-氰基-4-甲基噻吩-5-甲酸乙酯
按照在“Rrganikum”[有机化学]，第19版，Dt.Verlag derWissenschafen,Leipzig,Heidelberg,Berlin,1993，第6章，第374-375中描述的方法，用130g(1.0mol)乙酰乙酸乙酯、66g(1.0mol)丙二腈、32g(1.0mol)硫和80 g(0.92mol)吗啉制得了2-氨基-3-氰基-4-甲基噻吩-5-甲酸乙酯。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=1.25(t,3H),2.3(s,3H),4.2(q,2H),7.9(bs,2H).b)4-氰基-3-甲基噻吩-2-甲酸乙酯
将20.5g(97.5mmol)2-氨基-3-氰基-4-甲基噻吩-5-甲酸乙酯在600ml乙腈和二甲基甲酰胺的1∶1混合物中的溶液冷却至5℃，滴加15.7g(146mmol)亚硝酸叔丁酯，在此期间反应混合物的温度上升了，并且剧烈地释放出了气体。将该混合物在室温搅拌7小时，用旋转蒸发仪在高度真空下浓缩，把残余物通过柱色谱法(洗脱液：二氯甲烷)纯化，获得了9.1g(48％)所需化合物，为黄色油状物。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=1.3(t,3H),2.55(s,3H),4.3(q,2H),8.8(s,1H).c)5-羟基甲基-4-甲基噻吩-3-甲腈：
在0℃，将2.44g(64mmol)氢化锂铝分批加到25.1g(129mmol)3-氰基-4-甲基噻吩-5-甲酸乙酯在400ml四氢呋喃内的溶液中。将该混合物在室温搅拌5小时，加入0.5 N盐酸来破坏过量的还原剂，将该反应混合物在水泵真空下浓缩，把残余物用水稀释，并用乙酸乙酯提取3次。合并有机相，然后用0.5N盐酸和饱和氯化钠溶液各洗涤一次。将该有机相用硫酸镁干燥，滤出干燥剂，在室温、水泵真空下将溶剂蒸馏掉。将残余物通过柱色谱法(洗脱液：二氯甲烷/甲醇95∶5)纯化，获得了16.1g(83％)所需化合物，为浅黄色油状物。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=2.2(s,3H),4.6(d,2H),5.7(m,1H),8.35(s,1H).d)5-溴甲基-4-甲基噻吩-3-甲腈：
在5℃，将30g(115mmol)三苯基膦加到16g(104mmol)5-羟基甲基-4-甲基噻吩-3-甲腈在300ml四氢呋喃内的溶液中。然后加入38g(115mmol)四溴甲烷在100ml四氢呋喃中的溶液。将该混合物在室温搅拌过夜。用旋转蒸发仪在水泵真空下将该反应混合物浓缩，把残余物通过柱色谱法(洗脱液∶石油醚∶二氯甲烷1∶1)纯化。获得了17g(76％)本标题化合物，为黄色油状物。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=2.25(s,3H),5.0(s,2H),8.5(s,1H).e)5-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲基噻吩-3-甲腈：
将3.5g(103mmol)氢化钠(不含油)分批加到17.2g(79.5mmol)5-溴甲基-4-甲基噻吩-3-甲腈在250ml四氢呋喃内的溶液中，并冷却至0℃。然后，滴加22.5g(103mmol)亚氨基二甲酸二叔丁酯在100ml四氢呋喃中的溶液，在此期间使温度不能超过5℃。将该混合物升至室温，并搅拌2小时。缓慢地加入400ml饱和氯化铵溶液。在水泵真空下将溶剂蒸馏掉，把残余物用少量水稀释，用乙酸乙酯萃取3次。合并有机相，用饱和氯化铵溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，用旋转蒸发仪浓缩。获得了28g油状物，其仍含有亚氨基二甲酸二叔丁酯，把其作为粗产物直接用于下述反应。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=1.4(s,9H),1.45(s,9H),2.3(s,3H),4.8(s,2H),8.4(s,1H).f)5-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲基噻吩-3-硫代甲酰胺
将e)所得粗产物(不超过79mmol)溶解在280ml吡啶和140ml三乙胺中，在室温将该溶液用硫化氢饱和。溶液的颜色从开始时的黄色变成了绿色。将该混合物在室温搅拌过夜。为了使反应完全，在通15分钟硫化氢，并继续在室温搅拌2小时。使用洗涤塔借助于氮气流将过量硫化氢排出。然后用旋转蒸发仪将该反应混合物浓缩，把浓缩物置于乙酸乙酯中，用20％强度的硫酸氢钠溶液反复洗涤，用硫酸镁干燥，并用旋转蒸发仪浓缩。获得了27g浅黄色泡沫状固体，将其不进行进一步纯化而直接用于下述反应。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=1.4(s,18H),2.15(s,3H),4.8(s,2H),7.5(s,1H),9.3(bs,1H),9.75(bs,1H).g)5-氨基甲基-4-甲基噻吩-3-硫代甲酰胺盐酸盐
将27g 5-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲基噻吩-3-硫代甲酰胺(f粗产物，不超过70mmol)溶解在400ml乙酸乙酯中，将该溶液冷却至0℃。将该溶液用氯化氢气体饱和，在此期间10分钟后析出了白色沉淀。将该混合物在室温搅拌2小时，滤出沉淀物并用乙酸乙酯洗涤，把所得固体残余物在室温真空干燥。获得了13.6g(87％)本标题化合物，为白色粉末。EI-MS:M+=186。5-氨基甲基-4-氯噻吩-3-硫代甲酰胺a)5-甲酰基-4-氯噻吩-3-甲腈：
在室温，将35g(325mmol)亚硝酸叔丁酯滴加到53.0g(250mmol)2-氨基-4-氯-5-甲酰基噻吩-3-甲腈(DB3738910中描述了该化合物的合成)在600ml乙腈和二甲基甲酰胺的1∶1混合物内的溶液中，在此期间反应混合物的温度20℃上升到了37℃，并且开始剧烈地释放出了气体。将该混合物冷却至25℃，并在室温搅拌7小时，用旋转蒸发仪在高度真空下将该黑色溶液浓缩，把残余物通过柱色谱法(洗脱液∶二氯甲烷)纯化，获得了29g(68％)所需化合物，为黄色油状物。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=9.1(s,1H),10.0(s,1H).b)5-羟基甲基-4-氯噻吩-3-甲腈：
在5℃将6.3g(166mmol)硼氢化钠分批加到28.5g(166mmol)5-甲酰基-4-氯噻吩-3-甲腈在400ml无水乙醇内的溶液中。将该反应混合物的温度稍微增加，其颜色变成了暗红色。观察到剧烈地释放出了气体。10分钟后，将该反应混合物在水泵真空下浓缩，把残余物置于200ml乙酸乙酯中，用200ml 1N盐酸提取，用水和饱和氯化钠溶液洗涤2次，每次用250ml，将有机相用硫酸镁干燥，滤出干燥剂，在室温水泵真空下将溶剂蒸馏掉。获得了22g(76％)本标题化合物，为暗红色油状物，将其不进行进一步纯化直接用于下述反应。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=4.65(bs,1H),5.95(t,2H),8.6(s,1H).c)5-溴甲基-4-氯噻吩-3-甲腈：
在5℃，将36.1g(137mmol)三苯基膦加到21.7g(125mmol)5-羟基甲基-4-氯噻吩-3-甲腈在250ml四氢呋喃内的溶液中。然后加入45.6g(137mmol)四溴甲烷在100ml四氢呋喃中的溶液。将该混合物在室温搅拌过夜。滤出沉淀，用旋转蒸发仪在水泵真空下将滤液浓缩，把残余物通过柱色谱法(洗脱液∶石油醚∶二氯甲烷1∶1)纯化。获得了26.0g(88％)本标题化合物，为油状物。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=4.95(s,2H),8.8(s,1H).d)5-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-4-氯噻吩-3-甲腈：
将6.9g(159mmol)氢化钠(不含油)分批加到25.0g(106mmol)5-溴甲基-4-氯噻吩-3-甲腈在300ml四氢呋喃内的溶液中，并冷却至0℃。然后，滴加34.4g(159mmol)亚氨基二甲酸二叔丁酯在100ml四氢呋喃中的溶液，在此期间使温度不能超过5℃。将该混合物升至室温，并搅拌2小时。缓慢地加入300ml饱和氯化铵溶液。在水泵真空下将溶剂蒸馏掉，把残余物用少量水稀释，用乙酸乙酯萃取3次。合并有机相，用饱和氯化铵溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，用旋转蒸发仪浓缩。获得了51.3g油状物，其仍含有亚氨基二甲酸二叔丁酯和溶剂残余物，把其作为粗产物直接用于下述反应。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=1.4(s,9H),1.45(s,9H),4.8(s,2H),8.65(s,1H).e)5-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-4-氯噻吩-3-硫代甲酰胺
将d)所得粗产物(39.4g，不超过106mmol)溶解在400ml吡啶和40ml三乙胺中，在室温将该溶液用硫化氢饱和。溶液的颜色从开始时的黄色变成了绿色。将该混合物在室温搅拌过夜。使用洗涤塔借助于氮气流将过量的硫化氢排出。然后将该反应混合物倒入冰冷的20％强度硫酸氢钠溶液中，并用乙酸乙酯萃取3次。然后将有机相用20％强度的硫酸氢钠溶液反复洗涤，用硫酸镁干燥，并用旋转蒸发仪浓缩。获得了49.0g含有溶剂的残余物，将其不进行进一步纯化而直接用于下述反应。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=1.4,1.45(s,18H),4.8(s,2H),7.75(s,1H),9.4(bs,1H),10.0(bs,1H).f)5-氨基甲基-4-氯噻吩-3-硫代甲酰胺盐酸盐
将38.0g步骤e)粗产物(不超过93mmol)溶解在400ml乙酸乙酯中，并冷却至0℃。将该溶液用氯化氢气体饱和，在此期间10分钟后析出了白色沉淀。因为反应仍不完全，加入200ml乙酸乙酯，将该混合物再次用氯化氢气体饱和，并在室温搅拌过夜。滤出沉淀物，用乙酸乙酯洗涤，在室温真空干燥。获得了21.1g本标题化合物，为仍含有氯化铵杂质的白色粉末。FI-MS:M+=206。5-氨基甲基-1-甲基-1H-[1,2,4]-三唑-3-甲酰胺a)氨基硫代乙酸乙酯
在0℃，向29.1g(294mmol)氰基甲酸乙酯和0.4g(0.57ml,5.1mmol)二乙胺在20ml苯内的溶液中通入氯化氢，在此期间该溶液变为橙色。将该混合物在室温搅拌过周末，把该反应混合物冷却至0℃，滤出形成的沉淀(29.1g)，并用冷的苯洗涤。将母液浓缩并再冷却至0℃。将该混合物过滤，把残余物用石油醚洗涤，又获得了5.7g本标题化合物，为浅黄色固体(Rf=0.7，二氯甲烷/甲醇9∶1)。总产率：89％。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=1.25(t,J=7Hz,3H),4.2(q,J=7Hz,2H)9.9(bs,1H,NH),10.4(bs,1H,NH).b)甲基腙基草氨酸乙酯(Methyloxamidrazoncarbons_ureethylester)
在室温，将11.93g(13.61ml,259mmol)甲基肼在100ml乙醇中的溶液滴加到34.5g(259mmol)氨基硫代乙酸乙酯在400ml乙醇内的溶液中，在此期间，该反应混合物的温度稍微增加了一点。将该混合物在室温搅拌3小时，浓缩，将所得残余物并进行进一步纯化而直接用于反应c)。c)氨基[(2-叔丁氧基羰基氨基乙酰基)甲基]腙基乙酸乙酯活化Boc-Gly-OH并与b)反应：
在室温，将37.7g(51.7ml,373mmol)三乙胺加到54.46g(311mmol)Boc-甘氨酸在400ml四氢呋喃内的溶液中。将该混合物冷却至-5℃，用40分钟缓慢地滴加40.47g(35.5ml,311mmol)氯甲酸乙酯在100ml四氢呋喃中的溶液。将该混合物在-5℃搅拌30分钟，滤出所得沉淀，并用少量四氢呋喃洗涤，通过在室温直接缓慢地滴加b)所得残余物(259mmol)在300ml四氢呋喃中的溶液将滤液直接进行进一步反应。将该混合物搅拌过夜，并用旋转蒸发仪减压浓缩至干，把所得残余物通过柱色谱法(硅胶，二氯甲烷/甲醇95∶5,Rf=0.26)纯化。获得了15.7g油状物，将其置于乙醚中，滤出沉淀(8.5g,11％)。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=1.25(t,J=7Hz,3H),1.35(s,9H),2.9(s,3H),3.6(d,J=5Hz,2H),4.3(q,J=7Hz,2H)6.6(t,J=5Hz 1H),7.3(bs,2H).d)5-氨基甲基-1-甲基-1H-[1,2,4]-三唑-3-甲酸乙酯
将7.0g(23.2mmol)氨基[(2-叔丁氧基羰基氨基乙酰基)甲基]腙基乙酸乙酯悬浮在30ml二甲苯中，将该悬浮液在预热至180℃的硅油浴中沉浸10分钟。然后将溶剂直接从该反应混合物中蒸馏掉，将残余物在180℃搅拌10分钟。在50℃、高度真空下除去溶剂残余物，获得了6.8g(＞95％)深色油状物，将其不进行进一步纯化而直接用于下一反应。将样本经由硅胶过滤，并进行NMR光谱测定。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=1.25(t,J=7Hz,3H),1.35(s,9H),3.9(s,3H),4.2-4.4(m,4H),7.5(t,J=5Hz,1H).e)5-氨基甲基-1-甲基-1H-[1,2,4]-三唑-3-甲酰胺
在-10℃，向6.8 g(不超过23.2 mmol)5-氨基甲基-1-甲基-1H-[1,2,4]-三唑-3-甲酸乙酯在200ml乙醇内的溶液中通20分钟氨气。在0℃搅拌1小时，在室温搅拌过夜。因为反应不完全，所以将上述通氨气操作再重复2次，并将该混合物在0℃搅拌过夜。用旋转蒸发仪将该混合物浓缩，把残余物通过柱色谱法纯化(二氯甲烷+5-10％甲醇，在二氯甲烷/甲醇9∶1中Rf=0.3)。获得了4.71 g无色油状物。
1H-NMR(270 MHz,DMSO-d6):δ=1.4(s,9H),3.85(s,3H),4.3(d,J=5 Hz,3H),7.4(bs,1H),7.6(bs,1H),7.65(bs,J=5Hz,1H).f)5-氨基甲基-1-甲基-1H-[1,2,4]-三唑-3-甲酰胺盐酸盐
在5℃，向4.7g(不超过18.4mmol)5-氨基甲基-1-甲基-1H-[1,2,4]-三唑-3-甲酰胺在600ml乙酸乙酯内的溶液中通入氯化氢直至饱和，在此期间形成了白色沉淀。将该混合物在室温搅拌过夜，用旋转蒸发仪浓缩，加入乙醚，将该混合物再次浓缩，把残余物置于乙醚中，滤出沉淀并干燥。获得了3.7g仍含有氯化铵的白色固体。
1H-NMR(270MHz,DMSO-d6):δ=3.95(s,3H),4.3(bs,2H),7.6(bs,1H),7.75(bs,1H),8.7-8.9(m,2H).5-氨基甲基-3-氰基呋喃盐酸盐a)5-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-3-氰基呋喃
在0℃、搅拌下，用30分钟将冷却至0℃的、20.5 g(0.11mol)5-溴甲基-3-氰基呋喃(L.M.Pevzner,V.M.Ignat’ev,B.I.Ionin,Russ.J.of Gen.Chem.1994,64,2,125-128)在50ml四氢呋喃中的溶液加到4.8g(0.12mol)氢化钠(60％矿物油悬浮液)在30ml四氢呋喃内的溶液中。然后滴加26.2g(121mmol)亚氨基二甲酸二叔丁酯在50ml四氢呋喃中的溶液，在此期间使温度不能超过5℃。将该混合物在5-10℃搅拌3小时，升至室温并搅拌过夜。缓慢地加入150ml饱和氯化铵溶液。将溶剂在水泵真空下蒸馏掉，把残余物用乙酸乙酯萃取4次(每次用60ml)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤2次，用硫酸镁干燥，并在旋转蒸发仪中浓缩。在室温真空(1mmHg)干燥3小时后，获得了33.2g仍含有亚氨基二甲酸二叔丁酯的深色浆状物，将其作为粗产物用于下一反应。
1H-NMR(250MHz,d6-DMSO):δ=1,40,1,45(s,18H),4,70(s,2H),6,70(s,1H),8,6(s,1H).b)5-氨基甲基-3-氰基呋喃盐酸盐
将12.89g 5-N,N-二(叔丁氧基羰基)氨基甲基-3-氰基呋喃(a所得粗产物)溶解在80ml乙酸乙酯中，并冷却至-10℃。将该混合物用氯化氢气体饱和，15分钟后析出了白色沉淀。将该混合物升至室温并搅拌2小时，然后将所得悬浮液在旋转蒸发仪中浓缩，通过与乙醚搅拌来提取该残余物(7g)，滤出溶剂，将所得残余物在室温真空干燥。获得了5g(79％)本标题化合物，为浅赭色粉末。1H-NMR(250MHz,d6-DMSO):δ=4,15(bs,2H),7,0(s,1H),8,6-8,9(m,4H).5-氨基甲基-1-甲基吡咯-2-甲腈：a)5-氰基-1-甲基吡咯-2-甲醛
将1-甲基吡咯通过与异氰酸氯磺酰酯和二甲基甲酰胺在乙腈中反应来转化成2-氰基-1-甲基吡咯(参见，例如C.E.Loader等人的Can.J.Chem.(1981),59,2673-6)。
在氮气氛下，将二异丙基胺(17.5ml,124.38mmol)加到THF(100ml)中。在-78℃滴加正丁基锂的己烷溶液(15％强度，75.9ml,124.38mmol)。在该温度下滴加1-甲基吡咯-2-甲腈(12g,113.07mmol)在THF(50ml)中的溶液。在-78℃搅拌45分钟后，滴加DMF(43.9ml,546.46mmol)，将该混合物在该温度下搅拌2小时。加入柠檬酸一水合物(20.56g)后，将该混合物升至室温，加入水(112ml)。将THF在旋转蒸发仪中除去，把水相用氯化钠饱和，并用乙酸乙酯萃取(3×200ml)。合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥。在旋转蒸发仪中除去溶剂，将粗产物通过快速色谱法(硅胶，二氯甲烷)纯化。产量：8.25g(54％)。1FH-NMR(CDCl3)δ=4,1(s,3H),6,8(d,1H),6,9(d,1H),9,7(s,1H).b)5-羟基甲基-1-甲基吡咯-2-甲腈
将a)中所得产物(8.2g,61.1mmol)溶解在乙醇(200ml)中，在-10℃加入硼氢化钠(2.31g,61.13mmol)。在0-5℃搅拌1.5小时后，将溶剂在旋转蒸发仪中除去，把冰水和20％强度的硫酸氢钠溶液加到该残余物中。将该水相用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤至中性，用硫酸钠干燥。在旋转蒸发仪中除去溶剂，把所得粗产物通过快速色谱法(硅胶，二氯甲烷/甲醇=97.5/2.5)纯化。产量：7.6g(91％)。1H-NMR(CDCl3)δ=1,9(t,1H),3,75(s,3H),4,6(d,2H),6,1(d,1H),6,7(d,1H).c)5-叠氮基甲基-1-甲基吡咯-2-甲腈
将b)中所得产物(7.5g,55.08mmol)溶解在DMF(220ml)中，在0℃加入三苯基膦(43.34g,165.25mmol)。在该温度下搅拌5分钟后，加入四溴甲烷(54.8g,165.25mmol)。然后将该混合物在0℃搅拌30分钟，在室温搅拌1.5小时。冷却至0℃后，加入叠氮化钠(4.37g,67.21mmol)。然后将该混合物在室温搅拌4.5小时。在0℃滴加饱和氯化钠溶液，将该混合物用乙酸乙酯稀释。分离出有机相，将水相用乙醚萃取。合并有机相，用水洗涤，用硫酸钠干燥。在旋转蒸发仪中除去溶剂，把所得粗产物通过快速色谱法(硅胶，乙酸乙酯/己烷=1/20)纯化。产量：5.6g(63％)。1H-NMR(CDCl3)δ=3,75(s,3H),4,35(s,2H),6,2(d,1H),6,7(d,1H).d)5-氨基甲基-1-甲基吡咯-2-甲腈
将c)中所得产物(4.71g,29.25mmol)溶解在甲醇(100ml)中，加入披钯炭(10％,1g)。然后在1个大气压下将该混合物用氢气氢化4小时。通过经由Celite_过滤除去催化剂，将滤液在旋转蒸发仪中蒸发。把残余物通过与二氯甲烷/乙醚=1/1搅拌来提取。抽滤出产物，在真空干燥烘箱中于35℃干燥。产量：2.7g(68％)。1H-NMR(CDCl3)δ=3,75(s,3H),3,85(s,2H),6,05(d,1H),6,7(d,1H).4-氨基甲基-1-甲基吡咯-2-甲腈a)5-氰基-1-甲基吡咯-3-甲醛
将三氯化铝(24.24g,180.86mmol)溶解在硝基甲烷/二氯甲烷(1/1,320ml)中，将该溶液冷却至-20℃，加入1-甲基吡咯-2-甲腈(8g,75.36mmol)。然后滴加溶解在二氯甲烷(42ml)中的α,α-二氯甲醚(10.4g,90.43mmol)。在0℃搅拌4小时后，将该混合物倒入冰(200g)中。将该水相用乙醚萃取。合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液、水和饱和氯化钠溶液洗涤至中性。用硫酸钠干燥后，在旋转蒸发仪中将溶剂除去。将所得粗产物不进行进一步纯化而直接用于下一反应。产量：9.2g(91％)。1H-NMR(CDCl3)δ=3,8(s,3H)；7,2(s,1H)；7,4(s,1H)；9,85(s,1H).b)按照类似于合成5-氨基甲基-1-甲基吡咯-2-甲腈的方法，用5-氰基-1-甲基吡咯-3-甲醛制得了4-氨基甲基-1-甲基吡咯-2-甲腈。然而，将4-叠氮基甲基-1-甲基吡咯-2-甲腈在Staudinger反应中(参见S.Nagarajan等人的《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)1987,52,5044-6)中还原是有利的。1H-NMR(DMSO-d6)δ=3,77(s,3H),3,84(sbr,2H),7,00(sbr,1H),7,26(s,1H),8,05(sbr,2H).5-氨基甲基-1-甲基吡咯-3-甲腈a)4-氰基-1-甲基吡咯-2-甲醛
将1-甲基吡咯-2-甲醛(10g,91.6mmol)溶解在乙腈(100ml)中，并冷却至-45℃。用40分钟滴加异氰酸氯磺酰酯(38.9g,274.9mmol)的乙腈(40ml)溶液。然后将该混合物在室温搅拌12小时。滴加二甲基甲酰胺(35ml)后，将该混合物在50℃温热1小时。冷却至室温后，将该反应混合物倒入冰(200ml)和2N氢氧化钠溶液(286ml)中。抽滤出形成的沉淀。将滤液用乙醚萃取。合并有机相，用稀的碳酸氢钠溶液和水洗涤至中性，用硫酸钠干燥。将溶剂在水泵真空下蒸馏掉，把残余物与前面获得的沉淀合并。用石油醚重结晶，获得了4-氰基-1-甲基吡咯-2-甲醛(4.3g)(参见，例如C.E.Loader等人的Can.J.Chem.(1981),59,2673-6)。1-H-NMR(CDCl3)δ=4,0(s,3H)；7,2(s,1H)；7,3(s,1H)；9,6(s,1H).13-C-NMR(CDCl3)δ=37,4；94,1；114,7；125,8；132,2；135,8；179,7.b)按照类似于合成5-氨基甲基-1-甲基吡咯-2-甲腈的方法，用4-氰基-1-甲基吡咯-2-甲醛制得了5-氨基甲基-1-甲基吡咯-3-甲腈。1H-NMR(DMSO-d6)δ=3,6(s,3H),3,8(s,2H),4,2(sbr,2H),6,4(s,1H),7,6(s,1H).5-氨基甲基-3-氰基-1,2,4-噁二唑盐酸盐a)N-Boc-5-氨基甲基-3-氰基-1,2,4-噁二唑
将N-Boc-5-氨基甲基-1,2,4-噁二唑-2-甲酸乙酯(S.Borg等人的《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)1995,60,3112-20)溶解在甲醇(50ml)中。在-10℃-室温，向该溶液中通入氨气直至反应完全。将溶剂在旋转蒸发仪中除去。把所得粗产物溶于二氯甲烷(70ml)，在-5℃加入二异丙基乙胺(2.9ml,16.55mmol)。然后滴加溶解在二氯甲烷(10ml)中的三氟乙酸酐(1.06ml,7.61mmol)。在0℃搅拌1.5小时后，将该混合物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次，用5％强度的柠檬酸溶液洗涤2次，用饱和氯化钠溶液洗涤1次，然后用硫酸钠干燥。将溶剂在旋转蒸发仪中除去，把粗产物通过色谱法(硅胶，二氯甲烷∶甲醇=97.5∶2.5)纯化。产量：1.2g(80％)。b)5-氨基甲基-3-氰基-1,2,4-噁二唑盐酸盐
将a)中所得产物(0.9g,4.0mmol)溶解在二氯甲烷(45ml)中，在室温加入4M的氯化氢二氧杂环己烷溶液(3.9ml,15.61mmol)。在室温搅拌16小时后，将溶剂在旋转蒸发仪中除去。产量：645mg(100％)1-H-NMR(DMSO-d6)δ=4,6(s,2H),9,2(s,3H).1-甲基-5-氨基甲基吡唑-3-甲酰胺a)1-甲基-5-甲酰氨基吡唑-3-甲酸甲酯
将1-甲基-3-甲氧基羰基吡唑-5-甲酰氯(由3.7g、20.09mmol1-甲基-3-甲氧基羰基吡唑-3-甲酸制得的，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)1989,54,428)溶解在甲苯中，并将该溶液冷却至-10℃。在-10℃-0℃，向该溶液中通入氨气直至反应完全。将溶剂在旋转蒸发仪中除去。把残余物置于乙醇中。搅拌15分钟后，将乙醇在旋转蒸发仪中除去，把残余物溶解在温水中，通过将该溶液冷却至0℃来沉淀出产物。抽滤出沉淀，用丙酮洗涤，在45℃真空干燥。产量：1.5g(41％)。b)1-甲基-5-氰基吡唑-3-甲酸甲酯
将a)中所得产物(1.5g,8.19mmol)置于二氯甲烷(20ml)中。在-10℃加入二异丙基乙胺(3.85ml,22.11mmol)，在该温度下用45分钟滴加三氟乙酸酐(1.3ml,9.44mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液。然后在0℃搅拌1小时。将该混合物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次，用5％强度的柠檬酸溶液洗涤2次，用饱和氯化钠溶液洗涤1次。用硫酸钠干燥后，将溶剂在旋转蒸发仪中除去。产量：1.35g(100％)。c)1-甲基-5-氰基吡唑-3-甲酰胺
将b)中所得产物(1.35g,8.19mmol)置于甲醇(50ml)中，并冷却至-10℃。向其中通入8小时氨气。在室温搅拌12小时后，前体已经全部反应。抽滤出沉淀出的产物，用冷的甲醇洗涤，并真空干燥。产量：1.22g(100％)。1-H-NMR(DMSO-d6)δ=4,0(s,3H),7,4(s,1H),7,5(s,1H),7,8(s,1H).d)1-甲基-5-氨基甲基吡唑-3-甲酰胺
将c)中所得产物(0.4g,2.66mmol)溶解在乙酸(30ml)中，加入10％披钯炭(78mg)。然后在1个大气压下将该混合物氢化直至反应完全。通过经由Celite_过滤来除去催化剂，将滤液在旋转蒸发仪中蒸发。产量：0.4g(100％),FAB-MS(M+H+):155。1-甲基-3-氨基甲基吡唑-5-甲酰胺a)1-甲基-3-甲酰氨基(amido)吡唑-5-甲酸甲酯
将1-甲基-5-甲氧基羰基吡唑-3-甲酰氯(由4.17g、22.6mmol1-甲基-5-甲氧基羰基吡唑-3-甲酸制得的，《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)1989,54,428)溶解在甲苯中，并将该溶液冷却至-10℃。在-10℃-0℃，向该溶液中通入氨气直至反应完全。将溶剂在旋转蒸发仪中除去。把残余物置于乙醇中。将该混合物搅拌15分钟后，把乙醇在旋转蒸发仪中除去，把残余物溶解在温水中，通过将该溶液冷却至0℃来沉淀出产物。抽滤出沉淀，用丙酮洗涤，在45℃真空干燥。产量：3.36g(18.4％)。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6)δ=3.85(s,3H),4.15(s,3H),7.20(s,1H),7.4(sbr,1H),7.7(sbr,1H).b)1-甲基-3-氰基吡唑-5-甲酸甲酯
按照类似于合成1-甲基-5-氰基吡唑-3-甲酸甲酯的方法，用a)中所得产物(3.36g,18.4mmol)进行反应。产量：2.59g(15.7mmol,85％)。1H-NMR(250MHz,DMSO-d6)δ=3.90(s,3H),4.15(s,3H),7.60(s,1H).c)1-甲基-3-氰基吡唑-5-甲酰胺
按照类似于合成1-甲基-5-氰基吡唑-3-甲酰胺的方法，用b)中所得产物(2.56g,15.5mmol)进行反应。产量：2.3g(15.3mmol,99％)。1H-NMR(250MHz,DMSO-d6)δ=4.15(s,3H),7.45(s,1H),7.70(sbr,1H),8.15(sbr,1H).d)1-甲基-3-氨基甲基吡唑-5-甲酰胺×HCl
按照类似于合成1-甲基-5-氨基甲基吡唑-3-甲酰胺的方法，用c)中所得产物(1.0g,6.7mmol)进行反应。产量：1.5g(5.6mmol,83％)。1H-NMR(270MHz,DMSO-d6)δ=4.00(q,J=6.5Hz,2H),4.10(s,3H),6.90(s,1H),7.60(sbr,1H),8.05(sbr,1H),8.25(sbr,3H).
通过用HCl的1,4-二氧杂环己烷溶液反复处理，然后将该混合物浓缩，可将该产物转化成相应的盐酸盐。
实施例1:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[2-(4-脒基)噻唑基甲基]酰胺盐酸盐a)N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-CSNH2)-thiaz
将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH(2.0g,4.14mmol)、2-H2N-CH2-thiaz-4-CSNH2(1.0g,4.56mmol)和二异丙基乙胺(5.5ml,32.53mmol)溶解在25ml二氯甲烷中，将该溶液冷却至0℃，滴加4.8ml(6.21mmol)50％强度的丙烷膦酸酐的乙酸乙酯溶液。将该反应混合物在0℃搅拌1小时，在室温搅拌1小时，然后真空浓缩，把残余物置于水中，还该混合物用乙醚反复萃取，将有机相用硫酸镁干燥，并真空浓缩。因为有少量杂质，所以将产物通过硅胶色谱法纯化。把纯的收集部分用乙醚重结晶。总共获得了1.9g所需产物。b)N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-C(SCH3)NH)-thiaz盐酸盐：将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-CSNH2)-thiaz(1.7g,2.67mmol)与3.7ml碘甲烷一起在30ml二氯甲烷中于室温搅拌过夜，然后在温和的条件下真空浓缩，将产物以粗产物形式用于下一反应(2.08g，最多2.67mmol)。c)N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-C(NH2)NH)-thiaz乙酸盐将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-C(SCH3)NH)-thiaz盐酸盐(2.08g，最多2.67mmol)溶解在20ml乙腈中，加入0.6g(8.01mmol)乙酸铵，将该混合物在40-50℃搅拌1.5小时。将溶剂在旋转蒸发仪中真空蒸发掉以后，把残余物置于二氯甲烷中，滤除不溶的过量乙酸铵，将该二氯甲烷溶液浓缩，把残余物置于乙醚中，用正己烷结晶出所需产物，为无定形固体。将该粗产物(2.1g)溶解在20ml甲醇中，用乙酸根离子交换剂(3.7g，产品号00402)将其转化成相应的乙酸盐。d)HOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz二盐酸盐将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-C(NH2)NH)-thiaz×CH3COOH(2.0g，最多2.67mmol)在10ml二氧杂环己烷和20ml 5N盐酸的混合物中于40-50℃加热4小时，然后将该混合物用二氯甲烷反复萃取，将水相在真空中进行轻度浓缩，然后冷冻干燥。获得了1.4gHOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz二盐酸盐，为白色无定形固体，FAB-MS(M+H+):465实施例2：N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺乙酸盐a)N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-CN)-thioph
按照与实施例1相似的方法，将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH(6.35g,13.17mmol)、和4-H2N-CH2-thioph-2-CN(2.3g,13.17mmol)偶合，以生成N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-CN)-thioph，通过色谱法纯化后，获得了6.95g所需产物。b)N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-CSNH2)-thioph
将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-CN)-thioph(6.95g,11.53mmol)溶解在40ml吡啶和7ml三乙胺中，在0-5℃将该溶液用硫化氢饱和(绿色溶液)，在室温放置周末。在35℃/35mbar真空浓缩后，将所得黄色油状物置于200ml乙醚中，并用20％强度的硫酸氢钠溶液洗涤4次(每次20ml)，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次(每次20ml)，用20ml水洗涤l次，将该有机相用硫酸钠干燥，并真空浓缩，获得了6.74g黄色油状泡沫状物。c)N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-C(SCH3)NH)-thioph氢碘酸盐
将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-CSNH2)-thioph粗产物(6.74g,10.58mmol)置于65ml二氯甲烷中，加入9.01g(4.0ml,63.5mmol)碘甲烷，将该混合物在室温放置过夜。之后在温和的条件下真空浓缩，获得了8.36g黄色泡沫状固体。d)N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-C(NH2)NH)-thioph氢碘酸盐将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-C(SCH3)NH)-thioph氢碘酸盐粗产物(8.36g，最多10.58mmol)与16.3g(21.16mmol)10％强度的乙酸铵溶液在甲醇中于室温搅拌过夜。因为前体没有完全反应，再加入1.63g 10％强度的乙酸氨溶液，将该混合物再搅拌过夜。在旋转蒸发仪中将溶剂真空蒸发掉以后，把残余物置于二氯甲烷中，滤除不溶的过量乙酸铵，将滤液再次真空浓缩，获得了7.12g所需产物，为黄色泡沫状固体。e)HOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thioph乙酸盐
将在上述实验中获得的N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-C(NH2)NH)-thioph氢碘酸盐粗产物溶解在100ml二氯甲烷中，加入24.5ml氯化氢乙醚溶液(约5N)，将该混合物在室温搅拌过夜。把所得悬浮液真空浓缩，与二氯甲烷共蒸馏2次，用乙酸根离子交换剂(3.7g，产品号00402)将残余物转化成乙酸盐，获得了4.92g产物，将其中的2.5g通过MPLC(RP-18，乙腈/水)纯化，将收集部分冷冻干燥。获得了1.23g目标产物，为无定形白色固体。FAB-MS(M+H+):464实施例3:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基2-哌啶酸-[5-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺氢化乙酸盐(hydroacetat)a)H-Pic-NH-CH2-5-(2-CN)-thioph
将Boc-Pic-OH(10.1g,44.05mmol)和5-H2N-CH2-thioph-2-CN盐酸盐(8.45g,44.88mmol)溶解在二氯甲烷(150ml)中，在0℃加入乙基二异丙基胺(53.2ml,311.08mmol)和50％强度的丙烷膦酸酐乙酸乙酯溶液(46ml,217mmol)。将该反应混合物在0℃搅拌1小时和在室温搅拌1小时后，用二氯甲烷稀释，依次用20％强度的硫酸氢钠溶液(4×)、碳酸氢钠溶液(3×)和饱和氯化钠溶液(1×)洗涤。用硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，然后将溶剂在水泵真空下蒸馏掉。为了除去Boc基团，将残余物(18.41g)用200ml异丙醇和50ml 6.8N的氯化氢异丙醇溶液处理，将该混合物在室温搅拌过夜。然后将该混合物蒸发至干，把残余物与乙醚一起搅拌以进行提取。获得了12.7g所需产物，为浅棕色粉末。b)HOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-5-(2-am)-thioph氢化乙酸盐
该化合物是按照类似于实施例2a)的方法，将两个结构单元N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-OH和H-Pic-NH-CH2-5-(2-CN)-thioph偶合而制得的。按照类似于实施例2b)-d)的方法进行反应，制得了终产物HOOC-CH2-(D)-Cha-Pic-NH-CH2-5-(2-am)-thioph氢化乙酸盐，FAB-MS(M+H+):478实施例4:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[2-(4-脒基)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐a)HOOC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-CH2-4-(2-am)-thioph二盐酸盐
该化合物是通过类似于实施例2和3的几个步骤，由Boc-Pyr-OH、4-H2N-CH2-thioph-2-CN×HCl和N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-OH制得的。b)HOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thioph二盐酸盐
将1.1g(2.11mmol)HOOC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-CH2-4-(2-am)-thioph二盐酸盐溶解在30ml水和10ml冰醋酸的混合物中，加入0.5g 10％披钯活性炭，将该混合物在轻度高压下于室温氢化8小时。交换催化剂后，继续氢化8小时，抽滤出催化剂，将该混合物经由Celite_过滤，然后将水-有机相冷冻干燥。获得了0.86g所需产物，为白色无定形固体。FAB-MS(M+H+):450
作为所述方法的替代方法，可直接使用Boc-脯氨酸以代替Boc-(L)-3,4-去氢脯氨酸，这意味着可省却氢化步骤。实施例5:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[2-(4-脒基)噻唑基甲基]酰胺
按照类似于实施例1的方法，用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-OH和2-H2N-CH2-thiaz-4-CSNH2可制得该化合物。实施例6:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物可按照类似于实施例2的方法，用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH和4-H2N-CH2-thioph-2-CN制得，或者可按照类似于实施例4的方法，通过将HOOC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-CH2-4-(2-am)-thioph氢化来制得。实施例7:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(2-脒基-3,4-二甲基)噻唑基甲基]酰胺
该化合物可这样制得：按照类似于实施例2a)的方法，用5-H2N-CH2-(3,4-Me2)-thioph-2-CONH2和N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH可制得N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-5-(2-CONH2-3,4-Me2)-thioph。将该酰胺在二氯甲烷中用三氟乙酸酐和二异丙基乙胺脱水以生成腈官能团后，可按照类似于实施例2的方法生成脒官能团，然后可除去保护基。实施例8a:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环庚基甘氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺乙酸盐实施例8b:N-(羟基羰基亚甲基)-(L)-环庚基甘氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺乙酸盐
这两个化合物可按照类似于实施例3的方法，用4-H2N-CH2-thioph-2-CN、Boc-Pyr-OH和N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D,L)-Cheg-OH来制备，在最后的步骤中按照类似于实施例4的方法进行氢化，然后通过MPLC(RP18，乙腈/水)分离。如果在合成中使用Boc-Pro-OH来代替Boc-Pyr-OH，则该氢化步骤可省却。实施例9a:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环戊基甘氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺乙酸盐实施例9b:N-(羟基羰基亚甲基)-(L)-环戊基甘氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺乙酸盐
这两个化合物可按照类似于实施例3的方法，用4-H2N-CH2-thioph-2-CN、Boc-Pyr-OH和N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D,L)-Cpg-OH来制备，在最后的步骤中按照类似于实施例4的方法进行氢化，然后通过MPLC(RP18，乙腈/水)分离。如果在合成中使用Boc-Pro-OH来代替Boc-Pyr-OH，则该氢化步骤可省却。实施例10:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基)噻唑基甲基]酰胺
该化合物可按照类似于实施例1的方法，用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH和4-H2N-CH2-thiaz-2-CSNH2制得。实施例11:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基)噻唑基甲基]酰胺
该化合物可按照类似于实施例1的方法，用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-OH和4-H2N-CH2-thiaz-2-CSNH2制得。实施例12:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基)异噁唑基甲基]酰胺
该化合物可这样制得：按照类似于实施例2a)的方法，用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH和5-H2N-CH2-isox-3-CONH2可制得N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-5-(3-CONH2)-isox。将该酰胺在二氯甲烷中用三氟乙酸酐和二异丙基乙胺脱水后，可按照类似于实施例20的方法，通过与氨和乙酰基半胱氨酸反应来生成脒官能团，然后可除去保护基。实施例13:1-[N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基]氮杂环丁烷-2-羧基[5-(3-脒基)噻吩基甲基]酰胺a)1-[N-(叔丁氧基羰基)-(D)-环己基甘氨酰基]氮杂环丁烷-2-羧基[5-(3-氰基)噻吩基甲基]酰胺
在-5℃，将5.9g(45.8mmol)二异丙基乙胺和11.5ml(14.9mmol)50％强度的丙烷膦酸酐乙酸乙酯溶液依次滴加到3.9g(11.5mmol)1-[N-(叔丁氧基羰基)-(D)-环己基甘氨酰基]氮杂环丁烷-2-甲酸(WO9429336)和2g(11.5mmol)5-氨基甲基-3-氰基噻吩盐酸盐在40ml二氯甲烷内的溶液中。将该混合物搅拌2小时，在此期间反应混合物的温度上升到了10℃。将该有机相依次用水5％强度的碳酸氢钠溶液和5％强度的柠檬酸溶液洗涤，用硫酸镁干燥并蒸发至干。将残余物通过柱色谱法(硅胶，洗脱液∶乙酸乙酯)纯化，获得了4.5g(产率为85％)白色无定形粉末，FAB-MS:461(M+H+)。b)1-[N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基]氮杂环丁烷-2-羧基[5-(3-氰基)噻吩基甲基]酰胺
将4.5g(3.8mmol)上述化合物溶解在70ml异丙醇中，加入12.3ml 4N的氯化氢二氧杂环己烷溶液，将该混合物在室温放置过夜。将溶剂蒸馏掉以后，把残余物溶解在二氯甲烷中，将该混合物用水萃取(3×)。合并水萃取液，用1N氢氧化钠溶液碱化，将分离出的油状碱用二氯甲烷萃取(3×)，然后把溶剂蒸馏掉。剩余2.9g(8mmol)油状物。将该油状物溶解在50ml二氯甲烷和10ml乙腈中，加入2.1g(16mmol)二异丙基乙胺和1.5g(7.6mmol)溴乙酸叔丁酯后，将该混合物在室温放置24小时。
将有机相用5％强度的柠檬酸溶液、5％强度的碳酸氢钠溶液和水分别洗涤2次，用硫酸钠干燥，将溶剂蒸馏掉。获得了3.3g(产率为92％)浅黄色油状物，FAB-MS:475(M+H+)。c)1-[N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基]氮杂环丁烷-2-羧基-[5-(3-脒基)噻吩甲基]酰胺
按照类似于实施例2的方法将上述产物转化成脒。所得脒粗产物含有大量副产物，依次必须通过柱色谱法(硅胶，洗脱液∶二氯甲烷/甲醇/乙酸=24∶6∶1.5)进行纯化。分离到了0.9g白色无定形粉末。通过将该粉末在3N盐酸中放置12小时来除去Boc保护基和叔丁酯基。通过加入甲苯蒸馏而最后除去盐酸后，通过硅胶柱色谱法(洗脱液：甲醇/25％氨水(50/2.5))将盐酸盐残余物转化成甜菜碱。获得了0.45g白色无定形粉末，FAB-MS:463(M+H+)。实施例14:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基)呋喃基甲基]酰胺乙酸盐a)脯氨酰基-[5-(3-氰基)呋喃基甲基]酰胺盐酸盐
在室温，将3.05g(14mmol)Boc-Pro-OH和6.11g(47.3mmol)乙基二异丙基胺加到2.5g(15.8mmol)5-氨基甲基-3-氰基呋喃盐酸盐在50ml二氯甲烷内的溶液中。在5℃、轻度冷却下，滴加15.8ml(74.5mmol)50％强度的丙烷膦酸酐乙酸乙酯溶液。在室温搅拌30分钟后，将该混合物用乙酸乙酯稀释，并依次用5％强度的柠檬酸溶液洗涤3次，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，用饱和氯化钠溶液洗涤1次。用硫酸钠干燥后，通过过滤除去干燥剂，将溶剂在水泵真空下蒸馏掉。获得了4.3g(86％)浅黄色油状物，将其直接用于下-反应。
将a)中所得油状物(4.3g,13.5mmol)溶解在40ml乙酸乙酯中以除去Boc基团，在0℃用氯化氢饱和。将该反应混合物搅拌过夜，在旋转蒸发仪中蒸发至干。获得了3.4g(99％)本标题化合物。b)N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(N-Boc)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-氰基)呋喃基甲基]酰胺
将2.85g(6.7mmol)t-BuO2C-CH2-Boc-(D)-Cha-OH和1.7g(6.7mmol)脯氨酰基-[5-(3-氰基)呋喃基甲基]酰胺盐酸盐悬浮在20ml二氯甲烷中，加入3.45g(26.8mmol)乙基二异丙基胺。将该反应混合物冷却至约5℃，滴加6.7ml 50％强度的丙烷膦酸酐乙酸乙酯溶液，在此期间溶液变澄清了。在室温搅拌过夜后，将该混合物用乙酸乙酯稀释，然后用20％强度的硫酸氢钠溶液洗涤3次，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，用饱和氯化钠溶液洗涤1次。用硫酸钠干燥后，除去干燥剂，将溶剂在水泵真空下蒸馏掉。获得了3.7g所需产物，为油状物。c)N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(N-Boc)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-氨基硫代羰基)呋喃基甲基]酰胺
将b)中所得产物溶解在吡啶(30ml)和三乙胺(15ml)中。在室温将该反应混合物用硫化氢饱和，并在室温搅拌过夜。通入氮气除去过量硫化氢，将该反应混合物倒入300ml冰冷的5％强度的硫酸氢钠溶液中。将该混合物用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用5％强度的硫酸氢钠溶液洗涤1次以上。用硫酸钠干燥后，将溶剂在水泵真空下蒸馏掉。把所得粗产物(3.3g)不进行进一步纯化而直接用于下一反应。d)N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(N-Boc)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-S-甲基亚氨基硫代羰基)呋喃基甲基]酰胺氢碘酸盐
将c)中所得粗产物溶解在50ml丙酮中，加入8.3g(58.7mmol)碘甲烷。在室温搅拌过夜后，将溶剂在水泵真空下蒸馏掉。将残余物溶于少量乙酸乙酯中，把该溶液滴加到二异丙基醚中，在此期间析出了沉淀，抽滤出沉淀，并用二异丙基醚洗涤。在室温真空干燥，获得了3.3g泡沫状固体。e)N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(N-Boc)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基)呋喃基甲基]酰胺乙酸盐
将d)中所得粗产物(3.3g,4.3mmol)溶解在40ml乙基中，加入0.99g(12.9mmol)乙酸铵，将该混合物在40℃搅拌2小时。然后将溶剂在水泵真空下蒸馏掉，把残余物置于乙醚中，抽滤出盐，将滤液浓缩。通过反相HPLC(乙腈/水和乙酸缓冲液)将粗产物纯化，获得了991mg黄色泡沫状固体。f)N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基)呋喃基甲基]酰胺乙酸盐
将20ml 1N盐酸加到d)所得粗产物(991mg,1.68mmol)中。在45℃搅拌3小时后，将该混合物用水稀释，把所得混合物冷冻干燥。将所得粗产物溶解在甲醇中，用离子交换剂(3.7g，产品号00402)将其转化成相应的乙酸盐。获得了484mg所需产物。FAB-MS(M+H+):446实施例15:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基)呋喃基甲基]酰胺氢化乙酸盐：FAB-MS(M+H+):434
按照类似于实施例14的方法，用N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(N-Boc)-(D)-环己基甘氨酸代替N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(N-Boc)-(D)-环己基丙氨酸可制得该化合物。实施例16:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[5-(2-脒基)吡咯基甲基]酰胺：a)将N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酸(2.5g,5.18mmol)溶解在无水二氯甲烷(30ml)中，冷却至-10℃，在该温度下加入N-乙基二异丙基胺(3.9ml,22.27mmol)。搅拌5分钟后，加入5-氨基甲基-1-甲基吡咯-2-甲腈(0.7g,5.18mmol)在二氯甲烷(15ml)中的溶液。然后用20分钟滴加50％强度的丙烷膦酸酐乙酸乙酯溶液(4.61ml,6.21mmol)。在-10℃-0℃搅拌90分钟后，将该混合物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次(每次15ml)，用5％强度的柠檬酸溶液洗涤2次(每次15ml)，用水(15ml)洗涤1次。用硫酸钠干燥后，将该混合物真空浓缩，将粗产物通过色谱法纯化(硅胶，二氯甲烷∶甲醇=95∶5)。产量：2.3g(74％)。b)将a)中所得产物(2.3g,3.83mmol)溶解在无水二氯甲烷和甲醇的混合物(1∶1,50ml)中，加入盐酸羟基胺(644mg,9.56mmol)和N-乙基二异丙基胺(4ml,23.0mmol)，将该混合物在40℃搅拌7小时，然后在室温搅拌48小时。将溶剂真空蒸馏掉，把水加到残余物中，用乙酸将该混合物的酸化至pH5。将该水溶液用二氯甲烷(2×)和乙酸乙酯(1×)萃取。合并有机相，用硫酸钠干燥，将溶剂真空蒸馏掉。将粗产物通过色谱法纯化(硅胶，二氯甲烷∶甲醇=95∶5)。产量：1.6g(白色泡沫状物，66％)，FAB-MS(M+H+):633c)将b)中所得产物(1.6g,2.53mmol)溶解在无水甲醇(35ml)中，加入乙酸(0.3ml,5.06mmol)和阮内镍(84mg)，将该混合物在1个大气压下于50℃氢化(2.5小时)。冷却后，经由Celite_过滤除去催化剂，将滤液真空浓缩。产量：1.7g(白色泡沫状物，99％)，FAB-MS(M+H+):617d)将c)中所得产物(1.7g,2.50mmol)溶解在无水二氯甲烷(50ml)中。将该溶液冷却至0℃，用干燥的HCl气体饱和。搅拌2小时后，将溶剂真空蒸馏掉，把粗产物通过色谱法纯化(RP18，加入0.1％乙酸的乙腈∶水=1∶9)。产量：760mg(57％)，熔点：184-185℃,FAB-MS(M+H+):617实施例17：按照类似于实施例16的方法制得了N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[2-(4-脒基-1-甲基)吡咯基甲基]酰胺，FAB-MS(M+H+):461实施例18：按照类似于实施例16的方法制得了N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基-1-甲基)吡咯基甲基]酰胺。实施例19：按照类似于实施例1的方法，用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH和2-氨基甲基-4-硫代甲酰氨基噁唑制得了N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(N-Boc)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[2-(4-脒基)噁唑基甲基]酰胺盐酸盐。实施例20:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-1-甲基)吡唑基甲基]酰胺盐酸盐：a)N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(N-Boc)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-甲酰氨基-1-甲基)吡唑基甲基]酰胺
将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH(1.25g,2.59mmol)加到二氯甲烷(30ml)中。在-10℃滴加二异丙基乙胺(1.95ml,11.16mmol)。然后加入1-甲基-5-氨基甲基吡唑-3-甲酰胺(0.4g,2.59mmol)的四氢呋喃(20ml)溶液。搅拌5分钟后，用5分钟滴加50％强度的丙烷膦酸酐乙酸乙酯溶液(2.36ml,3.11mmol)和二氯甲烷(5ml)。在0℃搅拌45分钟后，将该混合物在室温放置12小时。将溶剂在旋转蒸发仪中除去，把残余物置于二氯甲烷中，将该混合物用饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次，用5％强度的柠檬酸溶液洗涤2次，用饱和氯化钠溶液洗涤1次。用硫酸钠干燥后，将溶剂在旋转蒸发仪中除去。将粗产物通过色谱法(RP-18，乙腈，水)纯化。产量：220mg(14％)，FAB-MS(M+H+):619b)N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(N-Boc)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-氰基-1-甲基)吡唑基甲基]酰胺
将a)所得产物(220mg,0.36mmol)溶解在二氯甲烷(15ml)中，在-10℃加入二异丙基乙胺(0.17,0.96mmol)。搅拌5分钟后，滴加三氟乙酸酐(0.057ml,0.41mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液。在0℃反应1小时后，将该混合物用饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次，用5％强度的柠檬酸溶液洗涤2次，用饱和氯化钠溶液洗涤1次。用硫酸钠干燥后，将溶剂在旋转蒸发仪中除去。产量：180mg(84％)，c)N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(N-Boc)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-1-甲基)吡唑基甲基]酰胺氢化乙酸盐
将b)所得产物(180mg,0.3mmol)溶解在甲醇(1ml)中，加入乙酰半胱氨酸(52.8mg,0.32mmol)。然后在35℃向该溶液中通入氨气直至反应完全。将溶剂在旋转蒸发仪中除去，用离子交换剂(负载在聚合载体上的乙酸盐，Fluka00402)将粗产物转化成乙酸盐。将粗产物通过色谱法(RP-18，乙腈，水)纯化。产量：50mg(16％),FAB-MS(M+H+):618。d)N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-1-甲基)吡唑基甲基]酰胺盐酸盐
将c)所得产物(50mg,0.081mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)中，加入5M的氯化氢乙醚溶液(0.147ml)。在室温搅拌12小时后，将溶剂在旋转蒸发仪中除去，把产物置于水中并冷冻干燥。产量：40mg(92％),FAB-MS(M+H+):462。实施例21：按照类似于实施例20的方法，用t-BuO2C-CH2-(Boc)-(D)-Cha-Pro-OH和5-氨基-3-氰基-1,2,4-噁二唑制得了N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基)-1,2,4-噁二唑基甲基]酰胺盐酸盐。实施例22:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[5-(2-脒基-3-甲基)噻吩基甲基]酰胺：
按照类似于实施例2a)-e)的方法，用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-OH和5-氨基甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈盐酸盐制得了该化合物。FAB-MS(M+H+):464实施例23:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(2-脒基-3-甲基)噻吩基甲基]酰胺：
按照类似于实施例2a)-e)的方法，用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH和5-氨基甲基-3-甲基噻吩-2-甲腈盐酸盐制得了该化合物。FAB-MS(M+H+):478实施例24:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-1-甲基)三唑基甲基]酰胺：
该化合物是用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OH和5-氨基甲基-1-甲基-1H-[1,2,4]三唑-3-甲酰胺制得的。首先按照实施例20a)-d)所述方法，制得了N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基去氢脯氨酰基-[5-(3-脒基-1-甲基)三唑基甲基]酰胺，然后按照类似于实施例4b)的方法将该化合物转化成本标题化合物。FAB-MS(M+H+):463实施例25:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-1-甲基)三唑基甲基]酰胺：
该化合物是用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pyr-OH和5-氨基甲基-1-甲基-1H-[1,2,4]三唑-3-甲酰胺制得的。首先按照实施例20a)-d)所述方法,制得了N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基去氢脯氨酰基-[5-(3-脒基-1-甲基)三唑基甲基]酰胺，然后按照类似于实施例4b)的方法将该化合物转化成本标题化合物。FAB-MS(M+H+):449实施例26:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-4-氯)噻吩基甲基]酰胺：
按照类似于实施例1a)-d)的方法，用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH和5-氨基甲基-4-氯噻吩-3-硫代甲酰胺盐酸盐制得了该化合物。FAB-MS(M+H+):498实施例27:N-(乙氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-4-氯)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物是这样制得的：向冷却至0℃的、100mg(0.186mmol)N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-4-氯)噻吩基甲基]酰胺(上述实施例26)在10ml乙醇内的溶液中通入氯化氢，并在室温搅拌5小时。将该混合物浓缩，并与甲苯共蒸馏3次(每次用少量甲苯)以除去残余的氯化氢。将残余物(89mg,85％)溶于乙醇，并通过乙酸根离子交换剂(Fluka，产品号00402)将其转化成相应的乙酸盐。FAB-MS(M+H+):506实施例28:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-4-甲基)噻吩基甲基]酰胺：
按照类似于实施例1a)-d)的方法，用N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH和5-氨基甲基-4-甲基噻吩-3-硫代甲酰胺盐酸盐制得了该化合物。FAB-MS(M+H+):478实施例29:N-(乙氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-4-甲基)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物是这样制得的：向冷却至0℃的、100mg(0.186mmol)N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(3-脒基-4-甲基)噻吩基甲基]酰胺(上述实施例28)在10ml乙醇内的溶液中通入氯化氢，并在室温搅拌5小时。将该混合物浓缩，并与甲苯共蒸馏3次(每次用少量甲苯)以除去残余的氯化氢。将残余物(89mg,85％)溶于乙醇，并通过乙酸根离子交换剂(Fluka，产品号00402)将其转化成相应的乙酸盐。FAB-MS(M+H+):506实施例30:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[5-(2-脒基-3-氯)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物可通过下述反应路线制得：将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH和5-H2N-CH2-(2-CN-3-Cl)-thioph偶合，以生成N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-5-(2-CN-3-Cl)-thioph，按照类似于实施例2所述的方法形成脒，然后除去保护基。实施例31:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[5-(2-脒基-3-氯)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物可通过下述反应路线制得：将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-OH和5-H2N-CH2-(2-CN-3-Cl)-thioph偶合，制得了N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-5-(2-CN-3-Cl)-thioph，按照类似于实施例2所述的方法形成脒，然后除去保护基。实施例32:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物是通过除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)由N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thioph制得的。实施例33:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物是通过除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)由N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-4-(2-am)-thioph制得的。实施例34:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基氮杂环丁烷-2羧基4-(2-脒基)噻吩基甲基酰胺
该化合物是通过除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)由N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-4-(2-am)-thioph制得的。实施例35:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基氮杂环丁烷-2羧基2-(4-脒基)噻吩基甲基酰胺
该化合物是通过除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)由N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-4-(2-am)-thioph制得的。实施例36:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[2-(4-脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)由N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz制得的。实施例37:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[2-(4-脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)由N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz制得的。实施例38:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基2-(4-脒基)噻唑基甲基酰胺
该化合物是通过除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)由N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz制得的。实施例39:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基2-(4-脒基)噻唑基甲基酰胺
该化合物是通过除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)由N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz制得的。实施例40:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基(室温，在二氯甲烷中用HCl)制得的。实施例41:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)制得的。实施例42:N-(乙氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在乙醇中用HCl)制得的。实施例43:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基(室温，在二氯甲烷中用HCl)制得的。实施例44:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)制得的。实施例45:N-(乙氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在乙醇中用HCl)制得的。实施例46:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基(室温，在二氯甲烷中用HCl)制得的。实施例47:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)制得的。实施例48:N-(乙氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在乙醇中用HCl)制得的。实施例49:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基(室温，在二氯甲烷中用HCl)制得的。实施例50:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)制得的。实施例51:N-(乙氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基4-(2-羟基脒基)噻吩基甲基酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-(2-CN)-4-thioph与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在乙醇中用HCl)制得的。实施例52:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基(室温，在二氯甲烷中用HCl)制得的。实施例53:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)制得的。实施例54:N-(乙氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基脯氨酰基-[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在乙醇中用HCl)制得的。实施例55:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基(室温，在二氯甲烷中用HCl)制得的。实施例56:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)制得的。实施例57:N-(乙氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基脯氨酰基-[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在乙醇中用HCl)制得的。实施例58:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基(室温，在二氯甲烷中用HCl)制得的。实施例59:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)制得的。实施例60:N-(乙氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-Aze-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在乙醇中用HCl)制得的。实施例61:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基氮杂环丁烷-2羧基[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基(室温，在二氯甲烷中用HCl)制得的。实施例62:N-(甲氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在甲醇中用HCl)制得的。实施例63:N-(乙氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基氮杂环丁烷-2-羧基[2-(4-羟基脒基)噻唑基甲基]酰胺：
该化合物是通过将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Aze-NH-CH2-(4-CN)-2-thiaz与盐酸羟基胺反应(甲醇，二异丙基乙胺，室温)，然后除去保护基和酯交换(室温，在乙醇中用HCl)制得的。实施例64:N-(羟基羰基亚甲基)-(R)-环己基丙氨酰基-(3S)-2,3,4,5-四氢哒嗪-3-羧基[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐：a)N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基-(3S)-2,3,4,5-四氢哒嗪-3-甲酸
在-5℃，将3.3g(25.8mmol)二异丙基乙胺和1.5g(12.3mmol)二甲基氨基吡啶加到99.5g(25.8mmol)N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酸、7.4g(25.8mmol)(S)-4-苄基-3-[(S)-2,3,4,5-四氢-3-哒嗪基]-2-噁唑烷酮(Y.Nakamura,C.Shin,Chem.Lett.1991,1953)和7.4g(38.7mmol)EDC盐酸盐在80ml二氯甲烷内的溶于中，将该混合物在-5℃搅拌2小时，在室温搅拌12小时。
将该反应溶液用200ml乙醚稀释，依次用5％强度的柠檬酸溶液、5％强度的碳酸氢钠溶液和水洗涤，将该混合物干燥并将溶剂汽提出之后，把残余物通过柱色谱法(二氯甲烷/丙酮=50/2.5)纯化。获得了4.0g(产率为24％)淡黄色油状物，FAB-MS(M+H+):655。将该油状物溶于80ml THF和27ml水中，在0℃依次滴加2.8ml 30％强度的过氧化氢和12.6ml 1N氢氧化钠，并继续搅拌2.5小时。加入15g饱和Na2S2O3水溶液之后，将该混合物用乙醚萃取，分离出碱相，并用1M硫酸氢钾溶液酸化。用乙醚重复萃取后，干燥并通过蒸馏除去溶剂，获得了2.2g白色无定形粉末。b)HOOC-CH2-(D)-Cha-(3S)-2,3,4,5-四氢哒嗪-3-羧基[2-(4-am)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐
将0.7g(1.4mmol)所述酸和0.3g 2-氨基甲基-4-脒基噻吩二盐酸盐悬浮在4ml DMF中。在0℃加入0.145g(1.44mmol)N-甲基吗啉，几乎形成了完全的溶液，加入0.475g(1.45mmol)O-[(氰基乙氧基羰基亚甲基)氨基]-N,N,N’,N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TOTU)。将该反应混合物在氮气氛下于0℃搅拌3小时，然后在35℃的浴温和约1mbar压力下将大多数DMF蒸馏出来。将残余物通过柱色谱法(洗脱液∶二氯甲烷/甲醇45/5，要结束时加入0.7份50％强度的乙酸)纯化。获得了0.75g淡黄色无定形粉末。
将所得粉末溶解在5ml二氯甲烷和10ml三氟乙酸中，将该溶液在室温放置过夜。加入30ml甲苯后，将该混合物真空浓缩，把残余物用乙醚处理，然后通过硅胶柱(洗脱液∶甲醇/25％强度氨水，50/2)将其转化成甜菜碱。把所得甜菜碱溶解在20ml水中，用1N盐酸将其pH调节至4.5，冷冻干燥。获得了0.36g无定形粉末，FAB-MAS(M+H+):476。实施例65:N-(羟基羰基亚甲基)-(R)-环己基丙氨酰基-(3S)-吡唑烷-3-羧基[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐
将8.36 g(21.7mmol)N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酸和5g(21.7mmol)(3S)---1-叔丁氧基羰基吡唑烷-3-甲酸甲酯(H.O.Kim,C.Lum,M.S.Lee(1997),THL38(28),4935)溶解在60ml二氯甲烷中，在-8℃、搅拌下加入6.1g(31.8mmol)EDC.HCl,20分钟后，加入4.0g(31mmol)二异丙基乙胺。在该温度下搅拌40分钟后，加入0.8g DMAP，将该混合物在室温放置2天。加入200ml乙醚后，将该混合物依次用5％强度的柠檬酸、5％强度的碳酸氢钠溶液和水洗涤，干燥后，将乙醚蒸馏出。通过柱色谱法(洗脱液∶二氯甲烷/丙酮，50/2)纯化后，分离到了8.2g(产率为63％)白色无定形粉末。水解：将8.0g(13.4mmol)上述酯溶解在60ml二氧杂环己烷和12ml水中，在10℃加入15ml 1N氢氧化钠溶液。1.5小时后，将1N盐酸将pH调节至8，蒸馏出二氧杂环己烷，把残余物用250ml水稀释，用乙醚萃取。将乙醚汽提出后，获得了7.7g无定形酸。将样本用水饱和的正己烷重结晶，其熔点为115-120℃，其旋光角[α]D 20为+112.4°(CHCl3,c=1)。
按照类似于实施例64步骤b)的方法将其与4-氨基甲基-2-脒基噻吩二盐酸盐偶合。通过柱色谱法(洗脱液∶二氯甲烷/甲醇50％强度的乙酸，40/10/0.7)后，由4.15g上述酸获得了4g N-Boc-N-(叔丁氧基羰基亚甲基)-(R)-环己基丙氨酰基-(3S)-吡唑烷-3-甲酸[4-(2-脒基)噻唑基甲基]酰胺乙酸盐。裂解保护基：将上述化合物溶解在12ml二氧杂环己烷中，加入20ml1N盐酸，将该混合物在75℃加热4.5小时。将该溶液用50ml水稀释，用离子交换剂(3-A4树脂，BioRad)将pH调至4，蒸馏出水。通过柱色谱法(洗脱液∶二氯甲烷/甲醇50％强度的乙酸，35/15/7)后，把残余物溶解在水中，用1N盐酸将pH调节至4，冷冻干燥。获得了1.6g无定形盐酸盐，FAB-MS(M+H+):465实施例66:N-(羟基羰基亚甲基)-(R)-环己基丙氨酰基-(3R)-吡唑烷-3-羧基[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐白色无定形粉末。FAB-MS(M+H+):465实施例67:N-(羟基羰基亚甲基)-(R)-环己基甘氨酰基-(3R)-吡唑烷-3-羧基[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐白色无定形粉末。FAB-MS(M+H+):451实施例68:N-(羟基羰基亚甲基)-(R)-环己基甘氨酰基-(3S)-吡唑烷-3-羧基[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐白色无定形粉末。FAB-MS(M+H+):451实施例69:N-(羟基羰基亚甲基)-(R)-环己基甘氨酰基-(-)-噻唑烷-2-羧基[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐原料：(-)-噻唑烷-2-甲酸甲酯(R.L.Johnson,E.E Smissman(1978),《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)21 165)实施例70:N-(羟基羰基亚甲基)-(R)-环己基丙氨酰基-(-)-噻唑烷-2-羧基[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐白色无定形粉末。FAB-MS(M+H+):482实施例71:N-(羟基羰基亚甲基)-(R)-环己基丙氨酰基-(L)-八氢吲哚-2-羧基[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐白色无定形粉末。FAB-MS(M+H+):518实施例72:N-(羟基羰基亚甲基)-(R)-环己基甘氨酰基-(L)-八氢吲哚-2-羧基[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺盐酸盐白色无定形粉末。FAB-MS(M+H+):504实施例73:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基丙氨酰基-(45)-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基[2-(4-脒基)噻吩基甲基]酰胺
该化合物可通过下述反应路线制得：将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-OH和(5)-5,5-Me2-thz-4-OMe(J.Samanen u.a.(1990),Int.J.Peptide Protein Res.35,501(1990))偶合，以生成N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-(2,2-Me2-thz-4)-OMe，将该甲酯用碱水解，把所得酸与H2N-CH2-(2-CN)-2-thioph偶合，以生成N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-(2,2-Me2-thz-4)-NH-CH2-2-(4-CN)-thioph，按照类似于实施例2b-e所述的方法形成脒，然后除去保护基。FAB-MS(M+H+):505；熔点184-7℃(分解温度)实施例74:N-(羟基羰基亚甲基)-(D)-环己基甘氨酰基-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基[4-(2-脒基)噻吩基甲基]酰胺
该化合物可通过下述反应路线制得：将N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-OH和5,5-Me2-thz-4-OMe偶合，以生成N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-(2,2-Me2-thz-4)-OMe，将该甲酯用碱水解，把所得酸与H2N-CH2-(2-CN)-4-thioph偶合，以生成N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Chg-(5,5-Me2-thz-4)-NH-CH2-4-(2-CN)-thioph,按照类似于实施例2b-e所述的方法形成脒，然后除去保护基。FAB-MS(M+H+):491；熔点164-166℃(分解温度)
实施例75-90
下述化合物是按照类似于WO98/06741实施例14中所述的方法，用相应的A-B-D-和E-F-单元合成的：75．HOOC-CH2-(D)-(p-OMe-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thioph76．HOOC-CH2-(D)-(p-OMe-m-Cl-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thioph77．HOOC-CH2-(D)-(p-OMe-Phe)-Pro-NH-CH2-5-(2-am-3-Me)-thioph78．HOOC-CH2-(D)-(p-CF3-Phe)-Pro-NH-CH2-5-(2-am-3-Me)-thioph79．HOOC-CH2-(D)-(p-Cl-m-Cl-phe)-pro-NH-CH2-5-(2-am-3-Me)-thioph80．HOOC-CH2-(D)-(p-CF3-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thioph81．HOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-Me)-thiaz82．HOOC-CH2-(D)-Chg-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-Me)-thiaz83．HOOC-CH2-(D)-(p-OMe-phe)-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-Me)-thiaz84．HOOC-CH2-(D)-(p-OMe-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz85．HOOC-CH2-(D)-(p-CF3-Phe)-pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz86．HOOC-CH2-(D)-(p-CF3-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(4-am-5-Me)-thiaz87．HOOC-CH2-(D)-(p-ipr-m-Me-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz88．HOOC-CH2-(D)-(p-OMe-m-Cl-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz89．HOOC-CH2-(D)-(p-Cl-m-Cl-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(4-am)-thiaz90．HOOC-CH2-(D)-(p-Cl-m-Cl-Phe)-Pro-NH-CH2-2-(5-am-4-Me)-thiaz
实施例91
下述化合物可按照类似于实施例20的方法，用相应的E-单元和N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH制得的：HOOC-CH2-(D)-Cha-Pro-NH-CH2-3-(5-am-1-Me)-pyraz实施例92
按照类似于实施例3的方法，用Boc-Thz-4-OH、5-H2N-CH2-thioph-2-CN和N-(t-BuO2C-CH2)-N-Boc-(D)-Cha-Pro-OH制得了HOOC-CH2-(D)-Cha-Thz-4-NH-CH2-5-(2-am)-thioph。药理实施例
实施例A激肽释放酶抑制剂的产色测试试剂：人血浆激肽释放酶(No.K3126,Sigma,Deisenhofen,Germany)测试物：Cbromozym GK(No.709875,Boehringer,Mannheim,Germany)缓冲剂：20mM Tris(HCl pH=8.50)实验操作：
在微板上进行确定激肽释放酶活性的产色测试。将2μl测试物在DMSO中的溶液加到93μl缓冲剂中，与终浓度为0.01单位/ml激肽释放酶混合。在20-25℃培养10分钟。通过加入100μl测试物(测试物终浓度为500μmol/l)来开始测试。培养30分钟后，用光度计在405nm测定吸收度。
实施例B凝血酶时间试剂：凝血酶试剂(No.126594,Boehringer,Mannheim,Germany)制备柠檬酸盐血浆：
将9份从头部静脉中提取的人静脉血与1份柠檬酸钠溶液(0.11mol/l)混合。然后将该混合物离心。将血浆在-20℃贮存。实验操作：
将50μl测试物溶液与50μl柠檬酸血浆在37℃培养2分钟(CL8，球型，Bender & Hobein,Munich,FRG)。然后加入100μl凝血酶试剂(37℃)。确定到形成纤维蛋白凝块为止所过去的时间。
实施例C凝血酶抑制剂的产色测试试剂：人血浆凝血酶(No.T-8885,Sigma,Deisenhofen,Germany)测试物：H-D-Phe-Pig-Arg-pNA2HCl(S-2238,Chromogenix,Molndahl,Sweden)缓冲剂：Tris50 mmol/l,NaCl 154mmol/l,pH=8.0实验操作：
在微滴定板上进行该产色测试。将10μl测试物在DMSO中的溶液与凝血酶(终浓度为0.1 NIH单位/ml)加到250μl缓冲剂中，将该混合物在20-28℃培养5分钟。通过加入50μl测试物在缓冲剂中的溶液(测试物终浓度为100μmol/l)来开始测试。将该混合物在28℃培养，5分钟后，加入50μl柠檬酸(35％强度)来中止培养。用光度计在405/630nm测定吸收度。
实施例D富含血小板的血浆中的血小板聚集试剂：人血浆凝血酶(No.T-8885,Sigma,Deisenhofen,Germany)制备富含柠檬酸盐和血小板的血浆
从健康、未用药治疗的个体的头部静脉采集静脉血样。将血样与0.13摩尔柠檬酸三钠以9∶1的比例混合。富含血小板的血浆(PRP)是通过以250×g的转速离心(在室温离心10分钟)制得的。贫血小板的血浆(PPP)是通过以3600×g的转速离心20分钟制得的。将PRP和PPP可在密封的PE容器中于室温贮存3小时。用血细胞计数器测定血小板浓度，其浓度应当为2.5-2.8×108/ml。实验操作：
血小板聚集是在37℃通过比浊度测定的(PAP4,BiodataCorporation,Horsham,PA,USA)。在加入凝血酶之前，将215.6μlPRP与2.2μl测试物培养3分钟，然后将该混合物以1000rpm搅拌2分钟。在0.15NIH单位/ml的终浓度下，2.2μl凝血酶溶液导致了最大聚集效应(在37℃/1000rpm)。通过比较含有将不同浓度测试物的样本的凝血酶聚集比例与不加测试物的样本的凝血酶聚集比例(倾斜度)来确定测试物的抑制作用。

Claims (13)

1．式Ⅰ化合物及其与生理可接受酸成的盐
A-B-D-E-F    Ⅰ其中A、B、D、E和F的定义如下：A：
Figure 9980239600021
其中m是0、1或2，n是0、1或2，R1是HOOC-、C1-6-烷基-OOC-、芳基-C0-4-烷基-OOC或-OH，R2是H-C1-4-烷基-或R1-(CH2)m-，且R3是H-、或C1-4-烷基-，B：
Figure 9980239600022
其中R4是H-、C1-4-烷基-或R1-(CH2)m-(其中R1和m的定义同上)，p是0或1，R5是H-或C1-4-烷基-，R6是H-；C1-8-烷基-；2-噻吩基-；3-噻吩基-；3-吲哚基-；4-咪唑基-；2-吡啶基-；3-吡啶基-；4-吡啶基-；苯基-，其中所述苯基可具有高达3个选自C1-4-烷基-、CF3-、C1-4-烷氧基-、HO-、BnO-、F-或Cl-的相同或不同取代基；C3-8-环烷基-，所述C3-8-环烷基-可携带高达4个相同或不同的C1-4-烷基-和/或环中有一个或两个C-C单键可被C=C双键替代和/或可稠合有苯环；C7-C12-二环烷基-；或C10-三环烷基-，或者R4与R6一起形成亚乙基或亚丙基，R7是H-、C1-8-烷基-、苯基-、或C3-8-环烷基-，其中所述苯基可具有高达3个选自C1-4-烷基-、CF3-、C1-4-烷氧基-、F-或Cl-的相同或不同取代基，所述C3-8-环烷基-可携带高达4个相同或不同的C1-4-烷基-，其R8是H-或C1-4-烷基-，D：
Figure 9980239600031
其中R20是H、C1-4-烷基、Bn或BnOC(O)-，其中如果D是Ⅱ、Ⅲ或Ⅺ，则E具有下述定义：其中a)当X=S、O、NH或NR12时，则Y是-CR13、-CH=，且Z是-CR14=，或者Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者b)当X=NR12时，则Y是-CH=，且Z是-CH=，或者c)当X=S、O或NH时，则Y是-CR15=，且Z是-N=，或者Y是-N=，且Z是-CR15=，或者d)当X=NR12-时，则Y是-N=，且Z是-CR16=、-N=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，且R9是H-或C1-3-烷基-，R10是H-或C1-4-烷基-，R11是H-或C1-4-烷基-，R12是CH3-或C2H5-，R13是Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，R14是Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，R15是CF3-或C1-4-烷基-，R16是H-、CF3-或C1-4-烷基-，R20的定义同上，或者，当D是Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ或Ⅹ时，则E具有下述定义：
Figure 9980239600051
其中X是O、S或-NR17-，且Y是-N=，且Z是-CR16=或-N=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者Y是-CR18=，且Z是-CR19=，并且R9、R10、R11、R16和R20的定义同上，R17是H、CH3-或C2H5-，R18是H-、Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，R19是H-、Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，或者当D是Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ或Ⅺ时，则E具有下述定义：
Figure 9980239600061
或者
Figure 9980239600062
其中a)当X=S时，则Y是-CR18=，且Z是-CR19=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者b)当X=O或-NR12-时，则Y是-N=、-CR16=，且Z是-N=、-CR18=，并且R9、R10、R11、R12、R16、R18、R19和R20的定义同上，F：或者
2．权利要求1的式Ⅰ化合物及其与生理可接受酸成的盐，其中A-E具有下述定义：A：HOOC-(CH2)t-(t=1、2或3)、(HOOC-CH2)2-CH-、HOOC-CH2-CH(COOH)-、HOOC-CH(C1-4-烷基)-、HOOC-CH(C1-4-烷基)2-、C1-6-烷基-OOC-(CH2)t-，B是p是0或1，R4是H-、C1-4-烷基、或HOOC-(CH2)m-(m=1、2或3)，R5是H-、甲基-，R6是H-；C1-8-烷基-；2-噻吩基-；3-噻吩基-；3-吲哚基-；4-咪唑基-；2-吡啶基-；3-吡啶基-；4-吡啶基-；苯基-，其中所述苯基可具有高达3个选自CH3-、CF3-、CH3-O-、HO-、BnO-、F-或Cl-的相同或不同取代基；C3-8-环烷基-，所述C3-8-环烷基-可携带高达4个甲基；二环[2.2.2]辛基；二环[2.2.1]庚基；金刚烷基；二氢化茚基；十氢萘基，R7是H、C1-8-烷基-、苯基、或C3-8-环烷基-，其中所述苯基可具有高达3个选自CH3-、CF3-、CH3-O-、F-或Cl-的相同或不同取代基，所述C3-8-环烷基-可携带高达4个甲基，R8是H-、C1-4-烷基-，D：其中R20是H、CH3-、Bn或BnOC(O)-，其中如果D是Ⅱ、Ⅲ或Ⅺ，则E具有下述定义：其中a)当X=S、O、或NR17时，则Y是-CR13=或-CH=，且Z是-CR14=，或者Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者b)当X=NR12时，则Y是-CH=，且Z是-CH=，或者c)当X=S、O或NH时，则Y是-CR15=，且Z是-N=，或者Y是-N=，且Z是-CR15=，或者d)当X=NR12时，则Y是-N=，且Z是-CR16=、-N=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，且R12是CH3-或C2H5-，R13是Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，R14是Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，R15是CF3-或C1-4-烷基-，R16是H-、CF3-或C1-4-烷基-，R17是H,CH3-或C2H5-，R20的定义同上，或者，当D是Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ或Ⅹ时，则E具有下述定义：
Figure 9980239600091
其中X是O、S或-NR17-，且Y是-N=，且Z是-CR16=或-N=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者Y是-CR18=，且Z是-CR19=，并且R16、R17、R20的定义同上，R18是H-、Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，且R19是H-、Cl-、CF3-或C1-4-烷基-，或者当D是Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ或Ⅺ时，则E具有下述定义：
Figure 9980239600101
或者
Figure 9980239600102
其中a)当X=S时，则Y是-CR18=，且Z是-CR19=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者b)当X=O或-NR12-时，则Y是-N=或-CR16=，且Z是-N=或-CR18=，并且R12、R16、R18、R19和R20的定义同上，F：或者
3．权利要求1或2的式Ⅰ化合物及其与生理可接受酸成的盐，其中A、B、D、E和F具有下述定义：A：HOOC-CH2、HOOC-CH2-CH2、HOOC-CH(CH3)、HOOC-CH(C2H5)，B是p是0或1，R4是H-、CH3-，R5是H-、CH3-，R6是C1-8-烷基-；C5-8-环烷基-，所述C5-8-环烷基-可携带高达4个甲基；2-噻吩基-；3-吲哚基-；4-咪唑基-；2-吡啶基-；3-吡啶基-；4-吡啶基-；苯基-，其中所述苯基可具有高达3个选自CH3-、CF3-、CH3-O-、HO-、BnO-、F-或Cl-的相同或不同取代基；二环[2.2.2]辛基；二环[2.2.1]庚基；金刚烷基；二氢化茚基；十氢萘基，尤其是环戊基、环己基和环庚基，R7是H-、CH3-，R8是H-、CH3-，D：
Figure 9980239600121
其中R20是H、BnOC(O)-，其中如果D是Ⅱ、Ⅲ或Ⅺ，则E具有下述定义：其中X是-S-，且Y是-CH=，且Z是-CR13=，或者Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者Y是-CR15=，且Z是-N=，或者Y是-N=，且Z是-CR15=，以及R13是Cl-,CF3-或CH3-R15是CF3-或CH3-以及R20具有以上定义或者当D是Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ或Ⅹ时，则E具有下述定义：
Figure 9980239600131
其中X是S，且Y是-N=，且Z是-CR16=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者Y是-CH=，且Z是-CR13=，或者Y是-CH=，且Z是-CH=，并且R13、R20的定义同上，R16是H-、CF3-或CH3-，或者当D是Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ或Ⅺ时，则E具有下述定义：或者
Figure 9980239600142
其中a)当X=S时，则Y是-CH=，且Z是-CR18=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者Y是-CR18=，且Z是-CH=，或者b)当X=O或NCH3时，则Y是-CH=，且Z是-CR16=，或者Y是-CR16=，且Z是-CH=，或者c)当X=-NR12-时，则Y是-N=，且Z是-CR18=，且R12是CH3-或C2H5-，且R18是H、Cl、CF3-、或CH3-，且R16和R20的定义同上，F：
Figure 9980239600151
或者
Figure 9980239600152
4．权利要求1-3任一项的式Ⅰ化合物及其与生理可接受酸成的盐，其中A、B、D、E和F具有下述定义：A：HOOC-CH2、HOOC-CH2-CH2、HOOC-CH(CH3)、HOOC-CH(C2H5)，B是p是0或1，R4是H-，R5是H-，R6是C1-8-烷基-；2-噻吩基-；3-吲哚基-；4-咪唑基-；2-吡啶基-；3-吡啶基-；4-吡啶基-；C5-8-环烷基-，所述C5-8-环烷基-可携带高达4个甲基；苯基-，其中所述苯基可具有高达3个选自CH3-、CF3-、CH3-O-、HO-、BnO-、F-或Cl-的相同或不同取代基；二环[2.2.2]辛基；二环[2.2.1]庚基；金刚烷基；二氢化茚基；十氢萘基，尤其是环戊基、环己基和环庚基，R7是H，R8是H，D：其中如果D是Ⅱ、Ⅲ或Ⅺ，则E具有下述定义：其中X是S，且Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者Y是-CH=，且Z是-CR13=，或者Y是-CR15=，且Z是-N=，或者Y是-N=，且Z是-CR15=，且R13是Cl-、CF3-、或CH3-，且R15是CF3-、或CH3-，或者当D是Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ或Ⅹ时，则E具有下述定义：其中X是S，且Y是-N=，且Z是-CR16=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者Y是-CH=，且Z是-CR13=，或者Y是-CR13=，且Z是-CH=，或者Y是-CH=，且Z是-CH=，并且R13的定义同上，R16是H-、CF3-或CH3-，或者当D是Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ或Ⅺ时，则E具有下述定义：
Figure 9980239600181
其中a)当X=S时，则Y是-CH=，且Z是-CR18=，或者Y是-CR18=，且Z是-CH=，或者Y是-CR16=，且Z是-N=，或者b)当X=O或NCH3时，则Y是-CH=，且Z是-CR16=，或者Y是-CR16=，且Z是-CH=，或者c)当X=NCH3时，则Y是-N=，且Z是-CR16=，且R16的定义同上，R18是H、Cl、CF3-、或CH3-，且F：或者
5．包含下述结构单元的化合物，
Figure 9980239600193
其中D和E的定义同权利要求1-4所述，并且在结构单元D的氮原子上有氢原子、保护基、未取代或取代的天然或非天然氨基酸、未取代或取代的羧酸、或未取代或取代的烷基。
6．包含下述结构单元的化合物，
Figure 9980239600194
其中E的定义同权利要求1-4所述，并且在NR9的氮原子上有氢原子、保护基、未取代或取代的天然或非天然氨基酸、未取代或取代的羧酸、或未取代或取代的烷基。
7．包含下述结构单元的化合物：其中Q是CH3或Cl；T是NCH3、O或S；且W是NCH3或S。
8．含有如权利要求1-4任一项所述的化合物或如权利要求5-7任一项所述的化合物和常规辅料以及赋形剂的药物。
9．如权利要求1-4任一项所述的式Ⅰ化合物或如权利要求5-7任一项所述的化合物在制备用于治疗下述疾病的药物中的应用：-其致病机制直接或间接源自凝血酶的蛋白水解作用的疾病，-其致病机制源自受体的凝血酶依赖性激活和信号传导的疾病，-与体细胞中基因表达的刺激或抑制有关的疾病，-基于凝血酶致有丝分裂效应的疾病，-基于上皮细胞的收缩性和渗透性中的凝血酶依赖性改变的疾病，-凝血酶依赖性血栓栓塞病症，-弥漫性血管内凝血，-与血栓溶解剂一起使用来治疗再闭塞和减少再灌注时间，-PTCA后的早期再闭塞和后期再狭窄，-凝血酶依赖性平滑肌细胞增殖，-在CNS中活性凝血酶的积聚，-肿瘤生长和防止肿瘤细胞粘着及转移。
10．如权利要求1-4任一项所述的式Ⅰ化合物或如权利要求5-7任一项所述的化合物在制备用于治疗下述疾病的药物中的应用：-其致病机制直接或间接源自激肽原酶、尤其是激肽释放酶的蛋白水解作用的疾病，-炎性疾病，例如哮喘、胰腺炎、鼻炎、关节炎、荨麻疹以及其它涉及激肽释放酶的体内疾病。
11．用于表面涂敷的如权利要求1-4任一项所述的化合物。
12．式Ⅴa或Ⅴb化合物A-B-D-E-CN       Ⅴa,A-B-D-E-CSNH2    Ⅴb,其中A、B、D和E的定义同权利要求1-4所述。
13．如权利要求1-7任一项所述的化合物在制备适于用作凝血酶抑制剂的药物中的应用。
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