Způsob přípravy mykofenolátu mofetilu

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu přípravy mykofenolátu mofetilu vzorce I

ve kterém

R¹ znamená 2-(4-morfolinyl)ethyl,

R² představuje atom vodíku.

Mykofenolát mofetilu vzorce I se používá jako imunosupresivum k profylaktické léčbě v kombinaci s dalšími imunosupresivy (cyklosporin A, prednison), případně k léčbě refraktemích rejekcí u nemocných po transplantaci ledviny. Chemicky je mykofenolát mofetilu 2-(4morfolinyl)ethylester kyseliny mykofenolové (R¹ = R² = H), který má cytostatický účinek. Inhibuje selektivně inosin monofosfát dehydrogenázu a tím de novo dráhu syntézy guanosin nukleotidů a jejich inkorporaci do DNK. Cytostatický účinek na lymfocyty je tak vyšší než na jiné buňky.

Dosavadní stav techniky

Syntéza mykofenolátu mofetilu vzorce I (R¹ = 2-morfolinoethyl, R² = H) je popsána v základním patentu EP 281 713 B1 (1987) a několika patentech: US 4 808 592 (1989), US 4 753 935 (1988), US 4 952 579 (1990), US 4 948 793 (1990), US 4 786 637 (1988). Podle těchto patentů je možno mykofenolát mofetilu připravit dvěma standardními esterifikačními postupy (viz Synthetic Organic Chemistry, R. B. Wagner aH. D. Zook (Wiley, New York), 1956, str. 479 až 532): reakcí chloridu kyseliny mykofenolové s nadbytkem 2-morfolinoethanolu a kondenzací pomocí dicyklohexylkarbodiimidu (DCC). Esterifikace via chlorid kyseliny je založena na reakci nadbytku 2-morfolinoethanolu s chloridem kyseliny mykofenolové, který byl připraven z kyseliny mykofenolové použitím vhodného chloračního činidla (thionylchlorid, oxalylchlorid apod.). Nevýhodou tohoto dvoustupňového procesuje použití nadbytku 2-morfolinoethanolu (až 3 ekvivalenty, tvorba dimérů cca 2 %, R¹ = H nebo 2-morfolinoethyl, R² = kyselina mykofenolová) a v neposlední řadě problémy s barevností produktu. Nevýhodou použití DCC jako aktivačního činidla v přípravě mykofenolátu mofetilu je vznik neúnosného množství nečistot a dicyklohexylmočoviny, kterou lze odstranit z reakční směsi pouze chromatografíí.

Americký patent US 5 247 083 z roku 1993 popisuje přípravu mykofenolátu mofetilu refluxem kyseliny mykofenolové a 2-morfolinoethanolu ve vhodném rozpouštědle nebo směsi rozpouštědel za azeotropického oddělování vznikající vody. V patentových nárocích a příkladech jsou uvedeny dichlormethan, benzen, toluen, xylen a vyšší uhlovodíky. Nej vhodnějšími rozpouštědly jsou toluen, xylen a jejich směs v poměru 1:1. Nevýhodou tohoto postupuje dlouhá reakční doba potřebná na dosažení postačující konverze (v závislosti na použitém rozpouštědle cca 60 až 100 h) a barevnost produktu (světle fialový krystal).

-1 CZ 292123 B6

Předmětem mezinárodní přihlášky vynálezu č. WO 00/34503 z roku 2000 je esterifikace kyseliny mykofenolové 2-morfolinoethanolem použitím enzymatické katalýzy. Takto je možno získat mykofenolát mofetilu ve vysokém výtěžku a čistotě, ale tento postup je nepoužitelný pro 5 průmyslovou výrobu. V témž patentu je rovněž popsán postup esterifikace kyseliny mykofenolové varem v 2-morfolinoethanolu bez rozpouštědla, ale vzhledem k ceně 2-morfolinoethanolu je i tento postup nevhodný.

ío Podstata vynálezu

Při optimalizaci přípravy mykofenolátu mofetilu přímou esterifikací kyseliny mykofenolové 2-morfolinoethanolem za azeotropického oddělování vody bylo překvapivě pozorováno, že na rozdíl od toluenu, resp. xylenu, použitím dibutyletheru se reakce mírně urychlí. Také problémy 15 s barevností produktu pozorované u toluenu a xylenu byly použitím vyšších etherů odstraněny.

Výhodou je rovněž nízká rozpustnost mykofenolátu mofetilu ve vyšších etherech, což usnadňuje izolaci produktu z vysokovroucího rozpouštědla. Z těchto důvodů navržený postup představuje výhodnější alternativu k postupu popsaném patentem US 5 247 083.

Postup podle vynálezu řeší přípravu mykofenolátu mofetilu následovně:

Kyselina mykofenolová je esterifikována refluxem v etherech (obecného vzorce R³OR⁴, v němž R³, R⁴ = alkyl, aryl), jejichž teplota varu je minimálně 120 °C, za azeotropického oddělování vody a za použití nadbytku 2-morfolinoethanolu (1,01 až 3 molámí ekvivalenty). Reakční čas se 25 pohybuje v rozsahu 5 až 50 h a reakční teplota je vyšší než 120 °C v závislosti na použitém rozpouštědle. Poměr kyselina mykofenolová: použité rozpouštědlo se pohybuje v rozsahu lg:2mlažlg:5 ml. Konverze je v rozsahu 80 až 98 %. Po rekrystalizaci surového produktu je získán mykofenolát mofetilu v čistotě min. 99,0 % a výtěžku min. 70 %.

Příklady provedení vynálezu

Vynález ilustrují následující příklady, jimiž se však rozsah patentu v žádném případě neomezuje.

Příklad 1

Mykofenolát mofetil; použití dibutyletheru jako rozpouštědla

Do reakční banky opatřené zpětným chladičem bylo předloženo 10 g kyseliny mykofenolové spolu s 20 ml dibutyletheru. Za intenzivního míchání byla směs ohřátá na teplotu 50 až 60 °C a poté bylo přikapáno 4 ml 2-morfolinoethanolu. Reakční směs byla zahřívána kvaru za azeotropického oddělování vody. Po 48 h byla směs ochlazena na laboratorní teplotu a naředěna 20 ml dichlormethanu. Roztok byl extrahován 2 x 10 ml 0,5 M vodného K₂CO₃ a jednou 10 ml 45 vody. Poté byl dichlormethan oddestilován za vakua a suspenze byla ochlazena na 10 až 15 °C. Vykrystalovaný mykofenolát mofetilu byl odsát a rekrystalován z ethyl acetátu. Po odsátí a vysušení krystalů bylo získáno lig (78 %) mykofenolátu mofetilu o čistotě > 99,0 % (HPLC).

-2CZ 292123 B6

Příklad 2

Mykofenolát mofetil; použití dipentyletheru jako rozpouštědla

Do reakční banky opatřené zpětným chladičem bylo předloženo 10 g kyseliny mykofenolové spolu s 20 ml dipentyletheru. Za intenzivního míchání byla směs ohřátá na teplotu 50 až 60 °C a poté bylo přikapáno 4 ml 2-morfolinoethanolu. Reakční směs byla zahřívána kvaru za azeotropického oddělování vody. Po 6 h byla směs ochlazena na laboratorní teplotu a naředěna 20 ml dichlormethanu. Roztok byl extrahován 2 x 10 ml 0,5 M vodného K2CO3 a jednou 10 ml vody. Poté byl dichlormethan oddestilován za vakua a suspenze byla ochlazena na 10 až 15 °C. Vykrystalovaný mykofenolát mofetilu byl odsát a rekrystalován z ethyl acetátu. Po odsátí a vysušení krystalů bylo získáno 10 g (71 %) mykofenolátu mofetilu o čistotě > 99,0 % (HPLC).