CZ291409B6

CZ291409B6 - Substituovaný triazolopyridazinový derivát

Info

Publication number: CZ291409B6
Application number: CZ20004872A
Authority: CZ
Inventors: William Robert Carling; Pineiro Jose Luis Castro; Cameron John Cowden; Antony John Davies; Andrew Madin; James Francis Mccabe; Gareth Edward Stephen Pearce; Leslie Joseph Street
Original assignee: Merck Sharp & Dohme Limited
Priority date: 1998-06-24
Filing date: 1999-06-15
Publication date: 2003-03-12
Also published as: YU77800A; WO1999067245A1; SK19552000A3; NZ508290A; PL204650B1; CN1138779C; ID27771A; BR9911563A; TWI222449B; RS49746B; ES2196824T3; ZA200007485B; EA200100071A1; EA003332B1; NO317992B1; BG105152A; IL139775A0; HUP0102894A3; CO5031239A1; NO20006576L

Abstract

Substituovan² triazolopyridazinov² deriv t 7-(1,1-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-1,2,4-triazol-3-ylmethoxy)-3-(2-fluorfenyl)-1,2,4-triazol[4,3-b]pyridazin a jeho soli jsou l tky s proti·zkostn²m · inkem a je proto mo no je pou t ve form farmaceutick ho prost°edku pro l en r zn²ch ·zkostn²ch stav v etn panick²ch reakc . Pops ny jsou rovn zp soby v²roby uveden²ch · inn²ch l tek.\

Description

Substituovaný triazolopyridazinový derivát

Oblast techniky

Vynález se týká substituovaných triazolopyridazinových derivátů a použití těchto látek k léčebným účelům. Zvláště běží o substituované l,2,4-triazolo[4,3-b]pyridazinové deriváty, které jsou ligandy pro receptor GABA_a a z tohoto důvodu je možno je použít k léčení různých chorobných psychických stavů.

Dosavadní stav techniky

Receptory pro hlavní inhibiční nervový přenašeč, kyselinu gama-aminomáselnou, GABA se dělí na dvě hlavní skupiny: (1) receptor GABA_a, které náleží do širší skupiny ligandů iontových kanálů a (2) receptory GABAb, které náleží do širší skupiny receptorů pro proteiny G. Od té doby, kdy byly klonovány první typy cDNA s kódovou sekvencí pro jednotlivé receptory GABA_a, byla zjištěna řada známých členů těchto látek, uvedená skupina zahrnuje nejméně 6 podjednotek alfa, 4 podjednotky beta, 3 podjednotky gama, 1 podjednotku delta, 1 podjednotku epsilon a 2 podjednotky ró.

Přestože bylo dosaženo značných pokroků ve znalosti genů pro receptory GABA_a, zbývá ještě vysvětlit řadu dalších nejasností, takže znalosti různých podtypů se stále nachází téměř na začátku. Předpokládá se, že podjednotka alfa, podjednotka beta a podjednotka gema jsou nejmenším požadavkem pro vytvoření plně funkčního receptoru GABA_a, k jehož expresi dochází po přechodné transfekci buněk příslušnou cDNA. Jak již bylo uvedeno svrchu, existují ještě podjednotky delta, epsilon a ró, tyto podjednotky se však v uvedených receptorech vyskytují pouze v menším množství.

Ze studií velikosti receptorů a jejich pozorováním v elektronovém mikroskopuje možno usoudit, že nativní receptory GABA_a existují vpentamemí formě stejně jako ostatní receptory této skupiny pro iontové kanály. Při výběru nejméně 1 jednotky alfa, 1 jednotky beta a 1 jednotky gama ze 17 možností celkem, je možno vytvořit více než 10 000 pentamemích kombinací podjednotek. Mimo to při tomto výpočtu není brána v úvahu další možnost permutací, která by padala v úvahu v případě, že by uspořádání podjednotek kolem iontového kanálu nebylo nijak omezeno, v tomto případě by existovalo 120 možných variant pro receptor, tvořený 5 odlišnými podjednotkami.

Sestavy podtypů receptorů, o nichž je známo, že existují, zahrnují mimo jiné alfalbeta2gama2, alfa2beta2/3gama2, alfa3betagama2/3, alfa5beta3gama2/3, alfa6betagama2, alfaóbetadelta a alfa4betadelta. Sestavy podtypů, které obsahují podjednotku alfal, se nacházejí ve většině oblastí mozku a jsou přítomny patrně ve více než 40% receptorů GABA_a u krys. Sestavy podtypů, které obsahují podjednotky alfa2 a alfa 3, jsou přítomny přibližně ve 25 a 17% receptorů GABA_a u krys. Sestavy podtypů s obsahem podjednotky alfa5 se nacházejí především v hippocampu a mozkové kůře ajsou přítomny přibližně ve 4 % receptorů GABA_a u krys.

Charakteristickou vlastností všech známých receptorů GABA_a je přítomnost řady modulačních míst, jedním z těchto míst je vazné místo pro benzodiazepin BZ. Vazné místo pro BZ je nejčastěji využívaným modulačním místem receptoru GABA_a, jde o místo, přes nějž vykonává svůj účinek například řada protiúzkostných látek, jako diazepam a temazepam. Před klonováním genů pro receptory GABA_a bylo místo působení benzodiazepinu děleno na dva podtypy BZ1 aBZ2 na bází studií s radioaktivními látkami. Podtyp BZ1 byl farmakologickým ekvivalentem receptoru GABAa s obsahem alfal podjednotky v kombinaci s podjednotkou beta a s podjednotkou gama2. Jde o nejčastější podtyp receptoru, který patrně tvoří téměř polovinu všech mozkových receptorů GABA_a.

-1 CZ 291409 B6

Dvěma dalšími hlavními skupinami jsou podtypy alfa2betagama2 a alfa3betagam2/3. Společně tvoří tyto podtypy přibližně dalších 35 % celkového množství receptorů GABA_a. Farmakologicky je tato kombinace ekvivalentní receptorům podtypu BZ2, přestože tyto podty py mohou také obsahovat některé receptory, obsahující podjednotku alfa5. Fyziologická úloha těchto podtypů byla až dosud nejasná vzhledem k tomu, že nebyly známy dostatečně selektivní agonistické nebo antagonistické látky pro tyto receptory.

Nyní se předpokládá, že látky, působící jako agonistické látky BZ na podjednotkách alfal betagama2, alfa2betagama2 a alfa3betagama2 budou mít žádoucí protiúzkostný účinek. Sloučeniny, které jsou modulátory benzodiazepinového vazného místa na receptoru GABA_a a jsou tedy agonisty BZ, budou dále označovány jako látky s agonistickým účinkem na GABA_a. Látky tohoto typu, selektivní pro receptor alfal jsou například alpidem a zolpidem, které se klinicky užívají jako hypnotické látky. Je také pravděpodobné, že určitá část uklidňujícího účinku, spojeného se známými protiúzkostnými látkami, působícími na vazném místě BZ1, je zprostředkována receptory GABA_a, obsahujícími podjednotku alfal. Předpokládá se tedy, že látky s agonistickým účinkem na receptorech GABA_a, jejichž účinek je příznivější při interakci s podjednotkami alfa2 a/nebo alfa3 než na receptorech s podjednotkami alfal budou mít protiúzkostný účinek se sníženou tendencí vyvolávat uklidňující účinek. Také látky, které mají antagonistický účinek nebo inverzní agonistický účinek na receptorech s podjednotkami alfal, by mohly být použity k potlačení sedativního nebo hypnotického účinku, vyvolaného agonistickými látkami na receptorech s podjednotkami alfal.

Sloučeniny podle vynálezu jsou selektivními ligandy pro receptory GABA_a a je tedy možno je použít k léčení a/nebo prevenci řady poruch centrálního nervového systému. Tyto poruchy zahrnují úzkostné poruchy, jako panické poruchy, popřípadě sagorafobií, agorafobií bez panických poruch, fóbie, týkající se živočichů a dalších fóbií včetně asociální fóbie, obsesivních a nutkavých poruch, poruch v souvislosti se stresem, například posttraumatickým stresem, léčit je možno také generalizované úzkostné poruchy, které mohou být také vyvolány některými látkami, neurózy, křečové stavy, migrénu, depresivní nebo bipolámí poruchy, například návratné deprese, dystymické poruchy, bipolámí manické poruchy I a II a cyklotymické poruchy, psychotické poruchy včetně schizofrenie, neurodegenerativní poruchy, vyvolané ischemií mozku, poruchy, spojené s hyperaktivitou a nedostatkem pozornosti a poruchy denního rytmu, například u osob, které trpí důsledky nočních směn a podobně.

Dalšími poruchami, které mohou být příznivě ovlivněny ligandy pro receptory GABA_a, jsou bolestivé stavy, všechny typy zvracení, včetně zvracení po chemoterapii nebo ozařování, pooperačního zvracení a poruch, při nichž se střídá přijímání potravy a zvracení a také bulimia nervosa, dále je možno těmito látkami léčit premenstruální syndrom, svalové křeče nebo sklon k těmto křečím, například u paraplegických nemocných, a ztráty sluchu. Tyto látky mohou být použitelné také jako premedikace před operačními výkony nebo pro malé zákroky, jako je endoskopie včetně žaludeční endoskopie.

V mezinárodní patentové přihlášce WO 98/04 559 se popisuje skupina substituovaných l,2,4-triazolo[4,3-b]pyridazinových derivátů se 7,8-kondenzovaným kruhem, které jsou selektivními ligandy receptorů GABA_a, použitelnými pro léčení a/nebo prevenci neurologických poruch včetně úzkostných a křečových stavů.

Podstata vynálezu

Vynález se týká specifického triazolopyradizinového derivátu a jeho farmaceuticky přijatelných solí. Tyto látky mají žádoucí vazné vlastnosti na různých podtypech receptoru BAGA_a. Uvedené látky mají dobrou afinitu jako ligandy pro podjednotky alfa2 a/nebo alfa3 lidského receptoru GABA_a. Reagují příznivěji s podjednotkami alfa2 a/nebo alfa3 než s podjednotkou alfal. Mají tedy selektivní účinnost pro podjednotky alfa2 a/nebo alfa3 vzhledem k podjednotce alfal.

-2CZ 291409 B6

Sloučeniny podle vynálezu jsou ligandy pro podtyp receptorů GABA_a s vaznou afinitou K, pro podjednotky alfa2 a/nebo alfa3 nižší než 1 nM, měřeno dále popsaným postupem. Mimo to jsou tyto látky funkčně selektivní pro podjednotky alfa2 a/nebo alfa3. Tyto látky mají zajímavé 5 farmakokinetické vlastnosti včetně dobré biologické dostupnosti při perorálním podání.

Podstatu vynálezu tvoří 7-(l,l-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l,2,4-triazol-3-ylmethoxy)-3(2-fluorfenyl)-l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazin vzorce I

(I) a jeho farmaceuticky přijatelné soli.

Uvedené látky spadají genericky do látek, uváděných v dokumentu WO 98/04 559. V tomto dokumentu se však specificky neuvádí ani sloučenina vzorce I ani její farmaceuticky přijatelné soli.

Pro použití v lékařství budou solemi sloučeniny vzorce I farmaceuticky přijatelné soli. Další soli však mohou být použitelné při výrobě sloučeniny vzorce I nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí. Vhodnými farmaceuticky přijatelnými solemi sloučeniny vzorce I jsou například adiční soli s kyselinami, které je možno vytvořit například smísením roztoku sloučeniny vzorce I s roztokem 20 farmaceuticky přijatelné kyseliny, jako kyseliny chlorovodíkové, sírové, methansulfonové, fumarové, maleinové, jantarové, octové, benzoové, šťavelové, citrónové, vinné, uhličité nebo fosforečné.

Uvedené látky je možno použít k léčení a/nebo prevenci úzkostných stavů, podává se účinné 25 množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli.

Obdobným způsobem je možno léčit také křečové stavy, například u nemocných, trpících epilepsií a příbuznými poruchami.

Vazná afinita K, pro sloučeniny podle vynálezu alfa3 lidského receptoru GABA_a se stanoví dále uvedeným způsobem. Vazná afinita pro sloučeniny podle vynálezu a podjednotku alfa3 je nižší než 1 nM.

Sloučeniny podle vynálezu vyvolávají selektivní potenciaci odpovědi EC₂o GABA 35 u rekombinantních buněčných linií po stálé transfekcí, u nichž dochází k expresi podjednotky alfa3 lidského receptoru GABA_a ve srovnání s potenciaci odpovědi EC₂₀ GABA u buněčných linií, u nichž dochází k expresi podjednotky alfal lidského receptoru GABA_a.

-3 CZ 291409 B6

Potenciace odpovědi EC20 GABA u buněčných linií po stálé transfekci, u nichž dochází k expresi podjednotek alfa a alfal lidského receptoru GABA_a se měří způsobem podle publikace Wafford a další, Mol. Pharmacol., 1996, 50, 670-678. Postup se s výhodou provádí při použití kultur eukaryotických buněk po stálé transfekci, typicky jde o buňky nižších fibroblastů Ltk’.

Sloučeniny podle vynálezu mají protiúzkostný účinek, jak je možno prokázat kladnou odpovědí na obvyklé testy, zejména na potlačení pití podle publikace Dawson a další, Psychopharmacology, 1995, 121, 109-117. Mimo to nemají sloučeniny podle vynálezu v podstatě žádný sedativní účinek, jak je možno prokázat výsledkem testu podle publikace Bayley a další, J. Psychopharmacol., 1996, 10, 206-213.

Sloučeniny podle vynálezu mají také protikřečový účinek. Tento účinek je možno prokázat schopností blokovat záchvaty křečí, vyvolané pentylentetrazolem u krys a u myší podle publikace Bristow a další, J. Pharmcol. Exp. Ther., 1996, 279, 492-501.

Vzhledem ke svým účinkům je zřejmé, že sloučeniny podle vynálezu pronikají mozkovou bariérou. Uvedené látky jsou výhodné zejména z toho důvodu, že jsou účinné i po perorálním podání.

Součást podstaty vynálezu tvoří rovněž farmaceutický prostředek, který jsou svou účinnou složku obsahuje nejméně jednu sloučeninu podle vynálezu spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem. Tento prostředek má s výhodou tvar lékové formy pro jednotlivé podání, jako jsou tablety, pilulky, kapsle, prášky, granuláty, sterilní roztoky nebo suspenze pro parenterální podání, aerosoly se stanovenou dávkou nebo sprejem, kapky, ampule nebo čípky, tyto lékové formy mohou být určeny pro perorální nebo parenterální podání, podání nosní sliznicí, pod jazyk nebo pro rektální podání nebo také pro podání inhalací nebi insuflací. při výrobě pevných lékových forem, například tablet, se účinná složka mísí s farmaceutickým nosičem, jako běžnými složkami tablet, například kukuřičným škrobem, laktózou, sacharózou, sorbitolem, mastkem, kyselinou stearovou, stearanem hořečnatý, hydrogenfosfátem vápenatým nebo různými gumami a dalšími farmaceutickými ředidly, jako je voda za vzniku pevné předběžné směsi, která je homogenní směsí sloučeniny podle vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelné soli s pomocnými látkami. V případě, že se tyto předběžné směsi označují za homogenní, rozumí se pod tímto pojmem, že účinná složka je rovnoměrně dispergována ve směsi, takže směs je možno okamžitě dělit na stejně účinné dávky, jako tablety, pilulky nebo kapsle. Tyto lékové formy mohou obsahovat 0,+ až 500 mg účinné látky podle vynálezu. Typicky obsahují lékové formy 1 až 100 mg, například 1, 2, 5, 10, 25, 50 nebo 100 mg účinné složky. Tablety nebo pilulky je možno k prodlouženému uvolňování účinné látky. Tableta nebo pilulka může například obsahovat vnitřní složku a vnější složku, která tvoří obal vnitřní složky. Obě složky mohou být od sebe odděleny enterosolventní vrstvu nebo povlak je možno použít různé materiály, jako různé polymemí kyseliny a směsi těchto kyselin s dalšími materiály, jako je šelak, cetylalkohol a acetáty celulózy.

Kapalné lékové formy podle vynálezu je možno podávat perorálně nebo injekčně. Může jít o vodné roztoky, ochucené sirupy, suspenze ve vodě nebo v oleji a ochucené suspenze v jedlých olejích, jako je olej z bavlníkových semen, sezamový olej, kokosový olej nebo arašídový olej, může jít také o elixíry a podobné prostředky. Vhodná dispergační a suspenzní činidla pro vodné suspenze zahrnují syntetické a přírodní gumy, jako je tragakant, akacie, alginát, dextran, sodná sůl karboxymethylcelulózy, methylcelulóza, polyvinylpyrrolidon nebo želatina.

Při léčbě úzkostných stavů se vhodná dávka pohybuje v rozmezí 0,01 až 250 mg/kg denně, s výhodou 0,05 až 100 a zvláště 0,05 až 5 mg/kg denně. Tyto sloučeniny je možno podávat v uvedeném množství také rozděleně, obvykle 1 až 4krát denně.

Sloučeniny vzorce I je možno připravit tak, že se nechá reagovat sloučenina obecného vzorce III se sloučeninou vzorce IV

-4CZ 291409 B6

.OH _nA_n^ch₂ch₃ \ / '—n (ΙΠ), (IV), kde L¹ znamená odštěpitelnou skupinu.

Odštěpitelnou skupinou ve významu L¹ je typicky atom halogenu, zvláště chloru.

Reakce se s výhodou provádí tak, že se reakční složky smísí ve vhodném rozpouštědle v přítomnosti báze. Typickým rozpouštědlem je Ν,Ν-dimethylformamid, vhodnou bází jako silná báze, například hydrid sodíku. Dalším výhodným rozpouštědlem je dimethylsulfoxid a vhodnou bází uhličitan cezný. Ve velmi výhodném provedení je rozpouštědlem 1-methyl, 2-pyrrolidinon a jako báze se použije hydroxid sodný, v tomto případě se reakce s výhodou provádí při teplotě v blízkosti 0 °C.

Meziprodukty obecného vzorce III je možno připravit reakcí sloučeniny obecného vzorce V s v podstatě ekvimolámím množstvím hydrazinového derivátu vzorce VI

kde L¹ má svrchu uvedený význam a L² znamená vhodnou odštěpitelnou skupinu, po ukončení reakce je možno v případě potřeby oddělit jednotlivé izomery výsledné směsi obvyklými postupy.

Odštěpitelnou skupinou ve významu L² je typicky atom halogenu, s výhodou atom chloru. V meziproduktech obecného vzorce V mohou být odštěpitelné skupiny L¹ a L² stejné nebo odlišné, obvykle však jsou stejné a s výhodou obě znamenají atom chloru.

Reakce mezi sloučenina vzorce V a VI se obvykle uskuteční zahříváním reakčních složek v přítomnosti zdroje protonů, jako je triethylaminhydrochlorid, reakce typicky probíhá při teplotě varu inertního rozpouštědla, jako xylenu nebo 1,4-dioxanu pod zpětným chladičem.

Meziprodukty obecného vzorce III je také možno připravit tak, že se nechá reagovat hydrazinový derivát obecného vzorce VII s aldehydovým derivátem vzorce VIII

-5CZ 291409 B6

kde L¹ má svrchu uvedený význam, s následnou cyklizací Schiffovy báze, která se při tomto postupu získá jako meziprodukt.

Reakce mezi sloučeninami vzorce VII a VIII se běžně provádí v kyselém prostředí, například v přítomnosti anorganické kyseliny, jako kyseliny chlorovodíkové. Cyklizace Schiffovy báze, získané jako meziprodukt, se snadno uskuteční působením chloridu železitého ve vhodném rozpouštědle, jako alkoholu, např. ethanolu při vyšší teplotě, typicky při teplotě v rozmezí 60 až 70 °C.

Meziprodukty obecného vzorce VII je možno připravit tak, že se nechá reagovat příslušná sloučenina obecného vzorce V ve svrchu uvedeném významu s hydrazinhydrátem, typicky v izobutylalkoholu při vyšší teplotě, například v blízkosti 90 °C, nebo v 1,4-dioxanu při teplotě varu pod zpětným chladičem. Po ukončení reakce se výsledný produkt popřípadě rozdělí na své izomery' běžným způsobem.

Meziprodukty svrchu uvedeného obecného vzorce III je také možno připravit tak, že se nechá reagovat hydrazinový derivát obecného vzorce VII se sloučeninou IX

F

(IX), kde Q znamená reaktivní karboxylátovou skupinu, s následnou cyklizací takto získaného hydrazidového derivátu obecného vzorce X

-6CZ 291409 B6 kde L' má svrchu uvedený význam.

Vhodným významem pro reaktivní karboxylátovou skupinu Q jsou například estery, jako alkylestery s alkylovou částí o 1 až 4 atomech uhlíku, anhydridy kyselin, například směsné anhydridy s alkankyselinami o 1 až 4 atomech uhlíku, halogenidy kyselin, například chloridy kyselin a acylimidazoly. Vhodným významem pro Q je chlorid kyseliny.

Reakce mezi sloučeninami vzorce VII a IX se snadno uskuteční za bazických podmínek, například v přítomnosti triethylaminu, obvykle v inertním rozpouštědle, jako diethyletheru atypicky při teplotě v blízkosti 0 °C. Cyklizaci výsledné sloučeniny vzorce X je pak možno snadno uskutečnit působením l,2-dibrom-l,l,2,2-tetrachlorethanu a trienylfosfinu v přítomnosti báze, jako triethylaminu a v interním rozpouštědle, jako acetonitrilu, typicky při teplotě v blízkosti 0 °C.

Při výhodném provedení tohoto postupu je možno reakci mezi sloučeninami vzorce VII a IX uskutečnit tak, že se reakční složky smísí v rozpouštědle, například l-methyl-2-pyrrolidinonu při teplotě v blízkosti 0 °C, cyklizace takto získané sloučeniny vzorce X se pak provádí přímo v reakční směsi jejím zahřátím na teplotu přibližně 130 °C.

Při reakci mezi sloučeninami vzorce V a hydrazinhydrátem nebo sloučeninou vzorce VI může, jak již bylo svrchu uvedeno, vzniknout směs izomemích produktů v závislosti na tom, zda atom dusíku hydrazinu nahradí odštěpitelnou skupinu L¹ nebo L². To znamená, že kromě požadovaného produktu vzorce III nebo VII může ještě v určitém množství vzniknout alternativní izomer. V tomto případě může být vhodné rozdělit výslednou směs izomerů běžnými postupy, například chromatografií.

Podle dalšího možného postupu je možno sloučeninu vzorce I připravit tak, že se nechá reagovat sloučenina vzorce XI nebo její l,2,4-triazolo[4,3-b]pyridazin-6-onový tautomer se sloučeninou obecného vzorce XII

(XI), (XII), kde L³ znamená vhodnou odštěpitelnou skupinu.

Odštěpitelnou skupinou L³ je s výhodou atom halogenu, typicky atom chloru nebo bromu.

Reakce mezi sloučeninami vzorce XI a XII se obvykle provádí tak, že se reakční složky smísí ve vhodném rozpouštědle, typicky Ν,Ν-dimethylformamidu v přítomnosti silné báze, například hydridu sodíku.

Meziprodukty vzorce XI je možno snadno připravit tak, že se sloučenina obecného vzorce III ve svrchu uvedeném významu nechá reagovat s hydroxidem alkalického kovu, například s hydroxidem sodným. Reakce se obvykle provádí v inertním rozpouštědle, jako vodném 1,4-dioxanu, ideálně při teplotě varu použitého rozpouštědla pod zpětným chladičem.

Podle dalšího postupu je možno sloučeninu vzorce I připravit tak, že se nechá reagovat kyselina trimethyloctové se sloučeninou vzorce XIII

(ΧΠΙ), v přítomnosti dusičnanu stříbrného a persíranu amonného.

Reakce dobře probíhá ve vhodném rozpouštědle, například ve směsi vody a acetonitrilu nebo pouze ve vodě, popřípadě v kyselém prostředí, například v přítomnosti kyseliny trifluoroctové nebo sírové, typicky při vyšší teplotě.

Meziprodukt obecného vzorce XIII odpovídá sloučenině obecného vzorce I, v níž chybí terc.-butylová skupina v poloze 7, takže meziprodukt vzorce XIII je možno připravit analogickými postupy jako výslednou látku vzorce I.

Podle ještě dalšího možného postupu se sloučenina vzorce I připravuje reakcí sloučeniny obecného vzorce XIV se sloučeninou obecného vzorce XV

(XIV) (XV), kde M znamená skupinu -B(OH)₂ nebo -Sn(Alk)₃, kde alk znamená Cl-C6alkyl, typicky n-butyl a

L⁴ znamená vhodnou odštěpitelnou skupinu, v přítomnosti katalyzátoru na bázi přechodného kovu.

Odštěpitelnou skupinou ve významu L⁴ je s výhodou atom halogenu, například atom bromu.

-8CZ 291409 B6

Vhodným katalyzátorem na bázi přechodného kovu pro reakci mezi sloučeninami vzorce XIV a XV je například dichlor bis (trifenylfosfinj-palladium (II) nebo tetrakis(trifenylfosfin)palladium(O).

Reakce mezi sloučeninami vzorce XIV a XV se běžně provádí v inertním rozpouštědle, jako Ν,Ν-dimethylformamidu, typicky při vyšší teplotě.

Meziprodukty obecného vzorce XIV je možno připravit reakcí sloučeniny vzorce IV ve svrchu uvedeném významu se sloučeninou obecného vzorce XVI

kde L¹ a L⁴ mají svrchu uvedený význam, za podmínek, analogických podmínkám, uvedeným pro reakci mezi sloučeninami vzorce III a IV.

Meziprodukt vzorce IV je možno připravit způsobem podle EP-A-0 421 210 nebo analogickými postupy. Vhodné postupy jsou popsány v následujících příkladech.

Meziprodukty vzorce V je možno připravit tak, že se nechá reagovat kyselina trimethyloctová se sloučeninou obecného vzorce XVII l?

(XVII), kde L¹ a L² mají svrchu uvedený význam, v přítomnosti dusičnanu stříbrného a persíranu amonného za podmínek, analogických podmínkám, popsaným svrchu pro reakci mezi kyselinou trimethyloctovou a sloučeninou vzorce XIII.

V případě, že L¹ a L² ve sloučenině XVII znamenají atomy chloru, provádí se reakce s výhodou v přítomnosti kyseliny trifluoroctové.

-9CZ 291409 B6

V případě, že se výchozí látky obecného vzorce VI, VIII, IX, XII, XV, XVI a XVII běžně nedodávají, je možno je připravit postupy, analogickými těm, které budou uvedeny v následujících příkladech nebo běžnými známými postupy.

V průběhu některého ze svrchu uvedených syntetických postupů může být zapotřebí a/nebo může být žádoucí chránit některé citlivé nebo reaktivní skupiny v kterékoliv sloučenině. To je možno uskutečnit vazbou běžných ochranných skupin, tak jak je shrnuto v publikaci Protective Groups in Organic Chemistry, ed. J. F. W. McOmie, Plenům Press, 1973 a T. W. Greene & P. G. M. Wuts, Protectie Groups in Organic Synthesis, Ohn Wiley & Sons, 1991. Ochranné skupiny je možno odstranit známým způsobem v jakémkoliv vhodném následujícím stupni.

Byly připraveny a charakterizovány 4 bezvodé polymorfní formy, 2 solváty a 1 dihydrát 7-( 1, l-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l ,2,4-triazol-3-ylmethoxy)-3-(2-fluorfenyl)-l ,2,4-triazol[4,3-b]pyridazinu vzorce I. Všechny polymorfní formy a solváty se postupně mění na termodynamicky nejstálejší formu, polymorfní formu A, která bude dále uvedena v příkladu 3, zejména v případě míchání ve formě suspenze ve vodě. Dihydrát polymorfní formy A je stálý, avšak pouze při vyšší vlhkosti.

Sloučeniny podle vynálezu jsou účinnými inhibitory vazby ³H-flumazenilu na vazné místo pro benzodiazepin lidského receptorů GABA_a s obsahem podjednotky alfa2 nebo aifa3 v buňkách po stálé transfekci Ltk'.

Reakční činidla

- fyziologický roztok chloridu sodného s fosfátovým pufrem PBS, pufr k provedení zkoušek: 10 mM KH₂PO₄, 100 mM KC1, pH 7,4 při teplotě místnosti,

- ³H-flumazenil, 18 nM pro buňky alfalbeta3gama2, 18nM pro buňky alfa2beta3gama2 a 10 nM pro buňky alfa3beta3gama2 v pufru k provedení zkoušek,

- flunitrazepam 100 mikroM v pufru k provedení zkoušek,

- buňky, uvedené do suspenze v pufru k provedení zkoušek (1 plotna na 10 ml).

Oddělení buněk

Od buněk se oddělí supematant. Přidá se přibližně 20 ml PBS. Buňky se oddělí a uloží do zkumavky pro odstředění s objemem 50 ml. Postup se opakuje při použití dalších 10 ml PBS, aby bylo zajištěno úplné oddělení buněk. Pak se buňky odstředí 20 minut při 3000 otáčkách za minutu, načež se popřípadě zmrazí. Usazenina buněk se znovu uvede do suspenze v 10 ml pufru na plotnu s rozměrem 25 x 25 cm.

Provedení zkoušky

Zkoušku je možno uskutečnit na plotnách s 96 vyhloubeními nebo ve zkumavkách. Každá zkumavka obsahuje:

- 300 mikrolitrů pufru k provedení zkoušek, - 50 mikrolitrů ³H-flumazenilu v konečné koncentraci pro alfalbeta3gama2 1,8 nM, pro alfa2beta3gama2 1,8 nM a pro alfa3beta3gama2 1,0 nM,

- 50 mikrolitrů pufru nebo rozpouštědla jako nosného prostředí, například 10% DMSO, zkoumaná látka nebo flunitrazepam ke stanovení nespecifické vazby v konečné koncentraci 10 mikroM,

- 100 mikrolitrů buněk.

-10CZ 291409 B6

Vzorky se inkubují 1 hodinu při teplotě 40 °C a pak se zfiltrují při použití zařízení Tomtec nebo Brandel a filtrů GF/B, načež se buněčný materiál promyje 3 x 3 ml chladného pufru k provedení zkoušek. Filtry se suší a radioaktivita se stanoví kapalinou scintilací. Očekávaná hodnota pro úplnou vazbu je 3000 - 4000 dpm a méně než 200 dpm pro nespecifickou vazbu při použití kapalinové scintilace nebo 1500- 2000 dpm celkem a méně než 200 dpm pro nespecifickou vazbu při použití pevného scintilačního materiálu meltilex. Parametry vazby se stanoví nelineární analýzou regrese nejmenších čtverců, ze získaných hodnot je možno vypočítat pro každou zkoumanou látku inhibiční konstantu Ki.

Uvedeným testem byly podrobeny zkouškám sloučeniny z následujících příkladů a bylo zjištěno, že tyto látky mají hodnotu K; pro náhradu ³H-flumazenil na podjednotce alfa2 a/nebo lidského receptorů GABA_a nižší než 1 nM.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

7-( 1, l-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l ,2,4-triazol-3-ylmethoxy)-3-(2-fluorfenyl)-1,2,4—triazol[4,3-b]pyridazin

a) 3,6-dichlor-4-( 1,1 -dimethylethyljpyridazin

53,6 ml 1,0 mol koncentrované kyseliny sírové se opatrně přidá k míchané suspenzi 50,0 g, 0,34 mol 3,6-dichlorpyridazinu v 1,25 1 vody. Výsledná směs se pak zahřívá na teplotu 70 °C a při této teplotě se přidá 47,5 ml, 0,41 mol kyseliny trimethyloctové. Pak se v průběhu přibližně 1 minuty přidá ještě roztok 11,4 g, 0,07 mol dusičnanu stříbrného ve 20 ml vody. Po tomto přidání se reakční směs mléčně zakalí. Pak se v průběhu 20 až 30 minut přidá roztok 230 g, 1,0 mol persíranu amonného v 0,63 1 vody. Vnitřní teplota směsi se zvýší na přibližně 85 °C. V průběhu přidávání se vytváří výsledná látka jako lepkavá sraženina. Po ukončení přidávání se reakční směs míchá ještě 10 minut a pak se nechá zchladnout na teplotu místnosti. Pak se směs vlije do ledu a alkalizuje se koncentrovaným vodným amoniakem, přičemž se popřípadě přidává další led k udržení teploty pod 10 °C. Vodná směs se extrahuje 3 x 300 ml dichlormethanu. Extrakty se spojí, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltrují a odpaří, čímž se získá 55,8 g, surového produktu ve formě oleje. Tento olej se čistí chromatografií na silikagelu při použití 0 až 15 % ethylacetátu v hexanu jako elučního činidla, čímž se ve výtěžku 53 % získá 37,31 g výsledného produktu.

’H NMR (360 MHz, d₆-DMSO) delta 1,50 (9H, s), 7,48 (IH, s), ME (ES⁺) m/e 205 [MH]⁺.

b) 6-chlor-7-( 1, l-dimethylethyl)-3-(2-fluorfenyl)-l ,2,4-triazol[4,3-b]pyridazin

Směs 20 g, 0,097 mol 3,6-dichIor-4-(l,l-dimethylethyl)pyridazinu, 22,6 g, 0,145 mol 2-fluorbenzhydrazidu a 20 g, 0,0145 mol triethylaminhydrochloridu v 1,2 I dioxanu se míchá a zahřívá na teplotu varu pod zpětným chladičem 4 dny pod proudem dusíku. Po zchlazení se těkavý podíl odstraní ve vakuu a zbytek se rozetře se 200 ml dichlormethanu, směs se zfiltruje a odpaří ve vakuu. Odparek se čistí chromatografií na silikagelu, jako eluční činidlo se užije 0% až 25% ethylacetát v dichlormethanu, čímž se ve výtěžku 44 % získá 12,95 g produktu ve formě bílé pevné látky.

-11 CZ 291409 B6 'H NMR (360 MHz, CDC1₃) delta 1,57 (9H, s), 7,26-7,35 (2H, m), 7,53-7,60 (1H m), 7,89-7,93 (1H, m), 8,17 (1H, s), MS (ES⁺) m/e 305 [MH]⁺, 307 [MH]⁺.

c) (2-ethyl-2H-l ,2,4-triazol-3-yl)methanol

K roztoku 10 g, 0,145 mol 1,2,4-triazolu ve 150 ml DMF se při teplotě místnosti přidá 6,4 g, 0,16 mol hydridu sodíku ve formě 60% disperze voleji po jednotlivých podílech v průběhu 15 minut. Po skončeném přidávání se reakční směs nechá zchladnout na teplotu místnosti, načež se zchladí na ledové lázni a v průběhu 10 minut se po kapkách přidá 14 ml, 0,174 mol jodethanu. Pak se reakční směs nechá zteplat na teplotu místnosti a ještě 3 hodiny se míchá, načež se rozpouštědlo odpaří ve vysokém vakuu na odparek, který se dělí mezi 300 ml vody a 3 x 300 ml ethylacetátu. Organické vrstvy se spojí, promyjí se nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší síranem hořečnatým, načež se zfiltrují a odpaří ve vakuu na olejovitý zbytek, který se čistí destilací při teplotě 120 °C a tlaku přibližně 2,6 kPa, čímž se získá 2,4 g 1 -ethyl-1,2,4—triazolu, znečištěného přibližně 15 % DMF. 2,4 g, 0,025 mol surového produktu se rozpustí ve 35 ml bezvodého THF, zchladí na -40 °C a pak v průběhu 20 minut pomalu přidá 16,2 ml, 0,026 mol n-butyllithia ve formě 1,6 M roztoku v hexanu, přičemž teplota se udržuje na stálé hodnotě. Pak se přidá ještě 2,03 ml, 0,025 mol DMF a po 15 minutách se reakční směs nechá pomalu zteplat v průběhu 2 hodin na teplotu místnosti. Pak se k reakční směsi přidá 2 ml methanolu a pak ještě 1 g, 0,026 mol hydroborátu sodíku, načež se roztok ještě 14 hodin míchá. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a odparek se dělí mezi 50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a 6 x 50 ml dichlormethanu. Organické vrstvy se spojí, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltrují a odpaří ve vakuu na odparek, který se čistí chromatografií na silikagelu při použití 0 až 5% methanolu v dichlormethanu jako elučního činidla, čímž se ve výtěžku 3 % získá výsledný produkt ve formě 0,5 g špinavě bílé pevné látky.

’H NMR (250 MHz, CDC1₃) delta 1,48 (3H, t_? J=7,3 Hz), 4,25 (2H, q, J=7,3 Hz), 4,75 (2H, s), 5,14 (1H, brs), 7,78 (1H, s).

d) 7-( 1, l-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l ,2,4-triazol-3-ylmethoxy)-3-(2-fluorfenyl)-l ,2,4-triazol[4,3-b]pyridazin

K roztoku 0,094 g, 0,74 mmol (2-ethyl-2H-l,2,4-triazol-3-yl)methanolu a 0,15 g, 0,49 mmol

6- chlor-7-(l,l-dimethylethyl)-3-(2-fluorfenyl)-l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazinu v 10 ml DMF se přidá 0,024 g, 1,1 molámího ekvivalentu hydridu sodíku ve formě 60% disperze v oleji a pak se reakční směs 30 minut míchá při teplotě místnosti. Po této době se reakční směs zředí 80 ml vody, vysrážená pevná látka se odfiltruje a několikrát se promyje na nálevce se sintrem vodou. Pak se pevná látka nechá překrystalovat ze směsi ethylacetátu a hexanu, čímž se ve výtěžku 44 % získá 0,085 g čistého výsledného produktu:

'H NMR (250 MHz, CDC1₃) delta 1,40-1,47 (12H, m), 4,14 (2H, t, J=7,3 Hz), 5,26 (2H, s), 7,26-7,38 (2H, m), 7,53-7,58 (1H, m), 7,86-7,90 (1H, m), 7,93 (1H, s), 7,99 (1H, s,), MS (ES⁺) m/e 396 [MH]⁺.

Analýza pro C20H22FN7O:

vypočteno: C 60,75 H5,61 N 24,79% nalezeno: C 61,02 H 5,45 N 24,75%.

Příklad 2

7- ( 1, l-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l ,2,4-triazol-3-ylmethoxy)-3-(2-fluorefenyl)-l ,2,4-tri azol[4,3-b]pyridazin, alternativní způsob výroby

-12CZ 291409 B6

a) 3,6-dichlor-4-(l,l-dimethylethyl)pyridazin

Směs 100 g, 0,67 mol dichlorpyridazinu, 96 g, 0,94 mol kyseliny triomethyloctové a 800 ml vody v nádobě s objemem 10 litrů, opatřené míchadlem, se zahřeje na 55 °C, čímž vznikne dvoufázový roztok. Ke směsi se přidá roztok 11,4 g, 0,134 mol dusičnanu stříbrného ve 125 ml vody v jediném podílu, čímž vznikne zakalený roztok. Pak se najednou přidá ještě 10,3 ml, 0,134 mol kyseliny trifluoroctové. Pak se po kapkách přidá ještě roztok 245 g, 1,07 mol persíranu amonného v 500 ml vody v průběhu 45 až 60 minut, čímž vznikne v suspenzi exotermní reakce, při níž se teplota obvykle zvýší na hodnotu 75 až 80 °C a je možno ji řídit rychlostí přidávání persíranu. Teplota se udržuje na 75 °C a ještě další hodinu a pak se směs zchladí na teplotu místnosti. Reakční směs se pak extrahuje 1 litrem izobutylalkoholu a vodná vrstva se odloží. Organická vrstva se promyje 250 ml vody, která se odloží. Výtěžek je 97 %, to znamená 134 g produktu při HPLC. Roztok produktu v izobutylalkoholu se použije jako takový v následujícím stupni.

b) 6-chlor-5-(l,l-dimethylethyl)pyridazin-3-ylhydrazin ml, 1,95 mol hydrazinhydrátu se přidá k roztoku ze stupně (a) v izobutylalkoholu v nádobě s objemem 3 litry a vzniklá směs zchladí na teplotu místnosti a spodní vodná vrstva se odloží. Zbývající podíl se promyje 450 ml vody a voda, použitá k promytí se odloží. Reakční směs se pak nechá destilovat za sníženého tlaku tak dlouho, až počne krystalizovat výsledný produkt, načež se přidá 550 ml l-methyl-2-pyrrolidinonu, NMP. V destilaci se dále pokračuje k odstranění posledních zbytků izobutylalkoholu. Výsledný roztok se užije jako takový v následujícím stupni.

c) 6-chlor-7-(l,l-dimethylethyl)-3-(2-fluorfenyl)-l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazin

103 g, 0,65 mol 2-fluorbenzoylchloridu se po kapkách přidá k roztoku ze stupně (b) v NMP, zchlazenému na 0 °C, přičemž vnitřní teplota roztoku se udržuje na hodnotě nižší než 5 °C. Po skončení přidávání se reakční směs 2 hodiny zahřívá na teplotu 130 °C. Pak se reakční směs zchladí na teplotu místnosti, čímž dojde ke krystalizaci produktu. V průběhu 30 minut se po kapkách přidá 1,3 litru vody. Výsledná suspenze se zchladí na 10 °C a pevný podíl se odfiltruje a pak suší za sníženého tlaku, čímž se ve výtěžku 71 %, vztaženo a výchozí 3,6-dichlorpyridazin získá celkem 145 g produktu.

d) l-ethyl-l,2,4-triazol

100,0 g, 1,45 mol 1,2,4-triazolu v 950 ml bezvodého THF se zchladí na 0 °C a najednou se přidá 220 g, 1,45 mol l,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-enu, DBU. Reakční směs se míchá 30 minut až do úplného rozpuštění složek. Stále ještě na chladicí lázni se směsí vody a ledu se po kapkách v průběhu 15 minut přidá 317 g, 2,03 mol jodethanu, čímž vnitřní teplota směsi stoupne na 30 °C. Pak se reakční směs míchá ještě 16 hodin při teplotě místnosti, po této době se hydrojodid DBU odfiltruje. Zfiltrovaný roztok se použije jako takový v následujícím stupni.

e) (2-ethyl-2H-l ,2,4-triazol-3-yl)methanol

Míchaný roztok z předchozího stupně se zchladí na vnitřní teplotu -75 °C v lázni s acetonem a pevným oxidem uhličitým. Pak se po kapkách v průběhu 25 minut přidá 458 ml hexyllithia ve formě 33% roztoku v hexanech, přičemž se vnitřní teplota směsi udržuje na hodnotě nižší než 55 °C. Reakční směs se nechá stát 30 minut a současně se teplota znovu sníží na -75 °C, načež se v průběhu 10 minut po kapkách přidá 108 ml, 1,39 mol čistého DMF, přičemž vnitřní teplota směsi nechá stát ještě 90 minut při teplotě -70 °C, Pak se chladicí lázeň odstraní a směs se nechá zteplat v průběhu 30 minut až na 0 °C. V průběhu 10 minut se ke směsi přidá 340 ml průmyslového methylovaného ethanolu. Pak se po částech přidává 26,3 g, 0,695 mol hydroborátu sodného, přičemž vnitřní teplota se udržuje pod 6 °C. Po skončeném přidávání se reakční směs

-13 CZ 291409 B6 nechá zteplat na teplotu místnosti a při této teplotě se míchá ještě 1 hodinu. Pak se reakce zastaví opatrným přidáním 200 ml 2 M kyseliny sírové, pak se směs míchá ještě 20 hodin při teplotě místnosti. Po této době se reakční směs zkoncentruje na 675 ml a najednou se přidá 135 g síranu sodného. Reakční směs se zahřeje na 35 °C a míchá ještě 15 minut. Roztok se pak extrahuje 5 2 x 675 ml izobutylalkoholu s teplotou 45 °C. Organické frakce se spojí, za sníženého tlaku se odpaří na objem 450 ml, čímž dojde ke krystalizaci produktu. Přidá se 1,125 litrů heptanu a suspenze se stále koncentruje za sníženého tlaku k odstranění zbytků izobutylalkoholu. Pak se směs doplní heptanem na objem 680 ml. Po zchlazení na 0 °C se ve výtěžku 74 %, vztaženo na výchozí 1,2,4-triazol získá 137 g výsledného produktu.

f) 7-( 1, l-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l ,2,4-triazol-3-ylmethoxy)-3-(2-fluorfenyl)-l ,2,-

4-triazol [4,3-b] pyridazin

Postup A

255 g, 0,819 mol, 6-chlor-7-(l,l-dimethylethyl)-3-(2-fluorfenyl)-l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazinu, 125 g, 0,983 mol (2-ethyl-2H-l,2,4-triazol-3-yl)methanolu a 640 g, 1,966 mol uhličitanu česného se vloží do nádoby s objemem 10 litrů, opatřené míchadlem. Ke směsi se najednou přidá 2,5 litru dimethylsulfoxidu a reakční směs se míchá 20 hodin při teplotě místnosti. Tím dojde ke 20 krystalizaci produktu. Reakční směs se udržuje na teplotě nižší než 25 °C a po kapkách se přidává v průběhu 45 minut celkem 5 litrů vody. Po zchlazení na 10 °C se produkt ze suspenze oddělí filtrací a filtrační koláč se promyje 1,75 kutry vody. Sušením při teplotě 50 °C ve vakuu se získá ve výtěžku 98 % celkem 317 g produktu ve formě bílé pevné látky .

Postup B g, 32,12 mmol 6-chlor-7-(l,l,-dimethylethyl)-3-(2-fluorfenyl)-l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazinu, a 5,01 g, 38,55 mmol (2-ethyl-2H-l,2,4-triazol-3-yl)methanolu se vloží do nádoby s objemem 500 ml, opatřené míchadlem. Pak se najednou přidá 100 ml NMP a reakční směs se 30 míchá až do úplného rozpuštění složek. Pak se reakční směs zchladí na 0 °C a přidá se 4,02 g, mmol hydroxidu sodného jako roztok z koncentrací 48% hmotnostních v jediném podílu. Směs se míchá ještě 1 hodinu při teplotě 0 °C, v průběhu této doby počne produkt krystalizovat. Pak se v průběhu 15 minut po kapkách přidá 100 ml vody a suspenze se nechá stát ještě 30 minut. Produkt se odfiltruje a filtrační koláč se promyje 100 ml vody. Sušením ve vakuu při teplotě 35 50 °C se ve výtěžku 98 % získá 12,50 g produktu ve formě bílé pevné látky.

Příklad 3

Tvorba a vlastnosti polymorfních forem a solvátů 7-(l,l-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l,2,4triazol-3-ylmethoxy)-3-(2-fluorfenyl)-l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazinu

7-( 1, l-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l ,2,4-triazol-3-ylmethoxy)-3-(2-fluorfenyl)-l ,2,4—triazol[4,3-b]pyridazin, který bude dále uváděn jako sloučenina vzorce 1, byl překrystalován 45 z několika organických rozpouštědel a výsledné pevné látky byly sušeny ve vakuu přes noc při teplotě 60 °C, pokud není uvedeno jinak. Každý vzorek byl pak sledován v optickém mikroskopu, diferenciální kalorimetrií DSC a byly provedeny také gravimetrické analytické zkoušky TGA a difrakce v rtg-záření ve formě prášku, XRPD. Byly prokázány 4 odlišné bezvodé polymorfní formy, 1 hydrát a 2 solváty, výsledky jsou shrnuty v tabulce 1.

- 14CZ 291409 B6

Tabulka 1. Polymorfní formy sloučeniny I

Polymorfní forma	Rozpouštědlo pro překrystalování	Tvar krystalků	Teplota tání (°C)
A	methanol ethylacetát aceton itril aceton kyselina octová/voda	Podlouhlé, pravoúhlé nebo nepravidelné	~ 186
B	izobutanol	Podlouhlé, pravoúhlé nebo nepravidelné	~ 181
C	dimethylformamid tetrahydrofuran	jehlicovité	~ 170
D	izopropanol izobutanol	jehlicovité	~ 170
Solvát s methanolem	methanol (sušený vzduchem)	nepravidelné	~ 186
Solvát s ethanolem	ethanol	nepravidelné	- 186

Polymorfní forma A

Polymorfní forma A je tvořena nepravidelnými nebo podlouhlými pravoúhlými dvojlomnými krystaly. Má jeden hlavní endotermní vrchol v DSC při teplotě přibližně 186 °C, v této oblasti tato polymorfní forma taje. V případě některých vzorků této formy není tání kontinuální a vznikají nepravidelné křivky, na nichž je možno pozorovat hrby. Polymorfní forma A je bezvodá a při TGA není možno prokázat ztráty. Forma má typický difraktogram při XRPD s dvěma vrcholy při 20 ~ 7,3°.

Polymorfní forma B

Polymorfní forma B je tvořena nepravidelnými nebo podlouhlými pravoúhlými dvojlomnými krystalky. Má jeden hlavní endotermní vrchol při DSC přibližně 181 °C, kdy tato forma taje. Forma je bezvodá a není možno prokázat ztráty hmotnosti při TGA. Difraktogram XRPD je charakteristický.

Polymorfní forma C

Polymorfní forma C je tvořena jehličkovitými dvojlomnými krystalky. Termogramy při DSC mají endotermní vrchol při 170 °C, exotermní fázi při 173 °C a malý endotermní vrchol při 181 °C, další endotermní vrchol při tání při teplotě 186 °C. Při gravimetrické analýze nebyly pozorovány ztráty.

Polymorfní forma D

Polymorfní forma D je tvořena jehličkovitými dvojlomnými krystalky. Dikraktogram XRPD je podobný difraktogramu polymorfní formy C. Je však možno pozorovat významná rozdíly, zejména přídatné vrcholy při hodnotě 2Θ = 9,861, 15,113, 18,015 a 22,224. Při DSC polymorfní formy D je možno pozorovat velmi široký exotermní vrchol při 108 °C, následovaný endotermní fází a dalšími exotermními vrcholy při 170 a 173 °C stejně jako v případě polymorfní formy C. Hlavní exotermní vrchol pro teplotu tání se nachází přibližně při 181 °C, je ještě možno pozorovat menší vrchol pro teplotu tání při teplotě 186 °C. Při TGA nebyly pozorovány žádné ztráty.

-15CZ 291409 B6

Solvát s methanolem

Termogram tohoto solvátu při DSC má jednu endotermní fázi při teplotě přibližně 157 °C vzhledem ke ztrátě methanolu a další při 186 °C vzhledem k tání, při TGA je možno pozorovat postupnou ztrátu až do teploty 150 °C, když je možno pozorovat rychlejší ztrátu, která odpovídá endotermní fázi, pozorované při DSC. Tato rychlejší ztráta může mít několik fází, výsledek je odlišný u překrystalovaných vzorků, které přesně neodpovídají stechiometrickému solvátu. Sledování methanolových par u polymorfní formy A naznačuje přítomnost hemisolvátu. Difraktogram XRPD pro tuto formuje charakteristický.

Solvát s ethanolem

Tento solvát je charakteristický termogramem při DSC, který má endotermní fázi přibližně při 111 °C, odpovídající ztrátě ethanolu a další při 186 °C, kdy dochází k tání. Ztráty při TGA jsou variabilní pro různě překrystalované vzorky a pohybují se v rozmezí 4 až 6,5 %, což neodpovídá stechiometrickému solvátu. Difraktogram XRPD je charakteristický.

Hydrát polymorfní formy A

Na obr. 1 je znázorněna Izoterma pro adsorpci a desorpci polymorfní formy A sloučeniny vzorce I při teplotě 25 °C. Toto sledování sorpce par prokazuje tvorbu dihydrátu nad relativní vlhkostí RH 80 % při teplotě 25 °C. Dochází k hysterezi, prokazující tvorbu hydrátu, k desorpci dochází při RH přibližně 60 %.

Na obr. 2 jsou znázorněny difraktogramy XRPD pro polymorfní formu A sloučeniny vzorce I v bezvodé formě a pro její dihydrát. Difraktogram dihydrátu byl získán při použití zvlhčeného vzorku polymorfní formy A a prokazuje podstatné rozdíly mezi oběma formami. Hlavní změnou v difrakci je ztráta vrcholu při 2θ = 11,2° a vznik dvou hlavních vrcholů při 2θ = 11,9 a 12,3°.

Přeměna polymorfních forem sloučeniny vzorce I na polymorfní formu A

V případě, že se uvedou do suspenze ve vodě, mění se všechny polymorfní formy a solváty, tak jak byly svrchu popsány, na polymorfní formu A v průběhu 1 až 4 dnů, což prokazuje, že běží o nejstálejší formu při teplotě místnosti. Přeměna je pomalá vzhledem k malé rozpustnosti sloučeniny vzorce I ve vodě v poměru k velkému množství pevné látky v suspenzi.

Údaje při difrakci v rtg-záření ve formě prášku

Na obr. 3 jsou znázorněny difraktogramy XRPD polymorfních forem A, B, C a D bezvodé sloučeniny vzorce I, difraktogramy solvátů s methanolem a ethanolem a difraktogram dihydrátu polymorfní formy A. Odpovídající číselné údaje jsou dále uvedeny.

-16CZ 291409 B6

Polymorfní forma A: difrakce v rtg-záření

Úhel 20	Hodnota d 1.10'¹⁰m	Intenzita	Intenzita %	Úhel 2Θ	Hodnota d 1.10‘¹⁰m	Intenzita	Intenzita %
7,243	12,19523	2214	88,5	22,885	3,88289	195	7,8
7,559	11,68660	613	24,5	23,621	3,76351	307	12,3
8,601	10,27227	50	2	23,67	3,75587	256	10,2
9,694	9,11647	211	8,4	23,767	3,74068	253	10,1
10,703	8,25928	270	10,8	24,12	3,68684	102	4,1
11,027	8,01719	213	8,5	24,518	3,62778	281	11,2
11,239	7,86640	1464	58,5	25,223	3,52803	162	6,5
12,943	6,83420	2501	100	25,275	3,52082	185	7,4
13,441	6,58218	41	1,6	25,478	3,49324	808	32,3
14,497	6,10492	740	29,6	26,088	3,41292	2178	87,1
15,178	5,83251	1211	48,4	26,686	3,33787	86	3,4
15,376	5,75802	187	7,5	27,093	3,28857	138	5,5
15,42	5,74169	144	5,8	27,74	3,21330	186	7,4
15,854	5,58536	391	15,6	28,056	3,17789	87	3,5
16,081	5,50706	236	9,4	28,607	3,11788	248	9,9
16,134	5,48931	250	10	28,703	3,10770	155	6,2
16,419	5,39437	135	5,4	29,135	3,06255	131	5,2
16,76	5,28552	36	1,4	29,267	3,04911	284	11,4
17,165	5,16167	304	12,1	29,353	3,04034	193	7,7
17,199	5,15149	235	9,4	29,787	2,99703	71	2,8
17,24	5,13933	329	13,2	30,357	2,94205	106	4,2
17,355	5,10550	281	11,2	30,954	2,88666	38	1,5
18,556	4,77774	213	8,5	31,436	2,84243	52	2,1
18,829	4,70917	85	3,4	32,618	2,74309	163	6,5
19,27	4,60224	372	14,9	32,773	2,73047	161	6,5
19,499	4,54892	233	2,3	33,254	2,69202	64	2,6
20,203	4,39192	118	4,7	33,897	2,62445	66,4	2,7
20,635	4,30098	238	9,5	34,014	2,62417	162	6,5
21,584	4,11385	250	10	36,522	2,45827	53	2,1
21,689	4,09416	704	28,2	38,532	2,33459	40	1,6
21,867	4,06119	1621	64,8	38,859	2,31564	78	3,1
22,28	3,98692	154	6,2	39,594	2,27434	47	1,9

-17CZ 291409 B6

Polymorfní forma B: difrakce v rtg-záření

Úhel 20	Hodnota d 1.10‘°m	Intenzita	Intenzita %	Úhel 20	Hodnota d 1.10'°m	Intenzita	Intenzita %
7,379	11,97023	651	49,2	20,179	4,39705	119	9
10,096	8,75424	481	36,4	20,9	4,24699	54	4,1
10,821	8,16974	1323	100	21,71	4,08884	1300	98,3
12,482	7,08575	61	4,6	22,285	3,98602	44,6	33,7
12,739	6,94328	149	11,3	22,96	3,87033	87	6,6
13,036	6,78588	194	14,7	23,304	3,81394	111	8,4
13,475	6,56586	123	9,3	24,018	3,70224	73	5,5
13,828	6,39890	69	5,2	24,459	3,63648	75	5,7
14,815	5,97480	322	24,3	24,081	3,54765	141	10,7
15,078	5,87109	307	23,2	25,837	3,44555	47	10,7
15,584	5,68147	86	6,5	26,204	3,39810	193	14,6
16,082	5,50675	391	29,6	27,078	3,29031	176	13,3
16,979	5,21789	147	11,1	28,449	3,13490	91	6,9
17,02	5,20548	163	12,3	28,889	3,08812	51	3,9
17,287	5,12570	257	19,4	29,84	2,99177	166	12,6
17,616	5,03052	72	5,4	29,922	2,98380	121	9,1
18,125	4,89033	83,1	6,3	30,227	2,95440	58	4,4
18,161	4,88081	129	9,7	31,94	2,79975	70,5	5,3
18,192	4,87269	143	10,8	32,837	2,72528	117	8,8
19,022	4,66174	69	5,2	33,295	2,68885	40	3
19,542	4,53891	119	9	34,407	2,60440	52	3,9
19,68	4,50748	70,5	5,3	38,876	2,32472	27	2

Polymorfní forma C: difrakce v rtg-záření

Úhel20	Hodnota d 1.10'^lom	Intenzita	Intenzita %	Úhel 2Θ	Hodnota d 1.10^wm	Intenzita	Intenzita %
7,254	12,17653	25	0,6	24,647	3,60908	75	1,8
8,023	11,01169	798	19,3	24,961	3,56448	398	9,6
9,686	9,12421	4130	100	25,341	3,51181	182	4,4
10,489	8,42726	64	1,5	25,549	3,48378	617	14,9
10,813	8,17559	107	2,6	25,981	3,42671	832	20,1
11,277	7,83989	31	0,8	26,794	3,32466	328	7,9
12,193	7,25327	48	1,2	27,782	3,20863	166	4
12,961	6,82506	40	1	27,985	3,18576	158	3,8
14,357	6,16430	146	3,5	28,257	3,15573	241	5,8
14,497	6,10512	213	5,2	28,788	3,09868	257	6,2
15,225	5,81495	35	0,8	29,242	3,05164	322	7,8
16,007	5,53248	917	22,2	29,301	3,04560	322	7,8
16,545	5,35385	681	16,5	29,56	3,01950	111	2,7
16,951	5,22646	61	1,5	30,544	2,92444	158	3,8
17,672	5,01479	402	9,7	30,942	2,88768	70	1,7
18,337	4,83428	536	13	31,839	2,80834	156	3,8
18,578	4,77228	533	12,9	32,457	2,75628	157	3,8
19,396	4,57272	3486	84,4	32,745	2,73271	369	8,9
20,034	4,42851	57	1,4	34,246	2,61626	150	3,6
20,913	4,24430	193	4,7	34,979	2,56310	76	1,8
21,189	4,18959	1917	46,4	35,42	2,53225	74	1,8
21,523	4,12543	476	11,5	35,753	2,50941	92	2,2
21,876	4,05969	329	8	36,71	2,44615	91	2,2
22,654	3,92185	151	3,7	37,036	2,42537	145	3,5
23,207	3,82968	463	11,2	37,549	2,39339	137	3,3
23,238	3,82472	462	11,2	38,915	2,31247	74	1,8
24,316	3,65757	87	2,1	39,41	2,28465	166	4

-18CZ 291409 B6

Polymorfní forma D: difrakce v rtg-záření

Úhel 2Θ	Hodnota d 1.10’¹⁰m	Intenzita	Intenzita %	Úhel 20	Hodnota d 1.10’*°m	Intenzita	Intenzita %
8,024	11,00971	501	33,4	22,224	3,99690	414	27,6
9,664	9,14458	1501	100	22,654	3,92192	112	7,5
9,861	8,96259	502	33,5	23,22	3,82757	322	21,5
10,497	8,42115	38	2,5	24,052	3,69702	89	5,9
10,8	8,18489	229	15,3	24,313	3,65791	295	19,7
11,462	7,71362	40	2,7	24,948	3,56619	272	18,1
12,105	7,30563	216	14,4	25,3	3,51744	120	8
12,951	6,83035	573	38,2	25,543	3,4855	304	20,3
13,312	6,64558	107	7,1	25,977	3,42728	362	24,1
13,817	6,40392	39	2,6	26,036	3,41965	416	27,7
14,478	6,11305	282	18,8	26,789	3,32518	539	35,9
14,823	5,97145	76	5,1	27,479	3,24329	173	11,5
15,113	5,85746	162	10,8	27,754	3,21176	198	13,2
16	5,53485	396	26,4	28,019	3,18199	170	11,3
16,533	5,35742	774	51,6	28,261	3,15525	314	20,9
16,952	5,22613	72	4,8	28,478	3,13170	144	9,6
17,661	5,01784	509	33,9	28,809	3,09646	205	13,7
18,015	4,92003	479	31,9	29,257	3,05012	176	11,7
18,316	4,83994	545	36,3	29,83	2,99276	178	11,9
18,46	4,80255	512	34,1	30,533	2,92545	157	10,5
18,543	4,78110	498	33,2	30,904	2,89114	96	6,4
19,239	4,60966	196	13,1	31,818	2,81015	131	8,7
19,41	4,56957	775	51,6	32,454	2,75655	119	7,9
20,005	4,43493	158	10,5	32,744	2,73282	182	12,1
20,525	4,32367	82	5,5	33,654	2,66094	94	6,3
20,798	4,26748	386	25,7	34,22	2,61823	95	6,3
20,882	4,25060	416	27,7	34,526	2,59568	80	5,3
21,188	4,18982	1344	89,5	34,934	2,56632	99	6,6
21,509	4,12810	1313	87,5	36,998	2,42775	122	8,1
21,853	4,06378	296	19,7	34,545	2,39366	97	6,5

-19CZ 291409 B6

Solvát s methanolem: difrakce v rtg-záření

Úhel 2Θ	Hodnota d 1.10^l0m	Intenzita	Intenzita %	Úhel 2Θ	Hodnota d 1.10'^lom	Intenzita	Intenzita %
7,357	12,00677	9,531	90,4	21,153	4,19677	224	2,1
7,608	11,61023	260	2,5	22,081	4,02236	10545	100
9,616	9,19052	260	2,5	22,588	3,93327	526	5
9,755	9,05958	433	4,1	22,825	3,89290	1150	10,9
10,943	8,07881	1145	10,9	23,14	3,84065	362	3,4
11,274	7,84189	406	3,9	23,742	3,74460	291	2,8
12,36	7,15546	3517	33,4	24,295	3,66064	440	4,2
12,942	68351	472	4,5	24,818	3,58463	3357	31,8
12,981	6,81447	530	5	25,424	3,49921	933	8,8
14,42	6,13754	440	4,2	25,967	3,42863	2020	19,2
14,69	6,02552	3179	30,1	26	3,42428	2000	19
15,196	5,82583	371	3,5	26,761	3,32860	402	3,8
15,651	5,65758	767	7,3	27,151	3,28169	230	2,2
15,913	5,56476	954	9	28,642	3,11415	273	2,6
16,507	5,36597	379	3,6	28,951	3,08162	298	2,8
16,539	5,35556	426	4	29,56	3,01950	1793	17
16,871	5,25102	1070	10,1	30,365	2,94130	455	4,3
17,226	5,14355	237	2,2	31,319	2,85382	313	3
18,226	4,86354	372	3,5	32,074	2,78834	173	1,6
18,613	4,76331	112	1,1	32,739	2,73323	134	1,3
19,283	4,59933	291	2,8	33,77	2,65210	344	3,3
19,545	4,53827	195	1,8	35,185	2,54858	129	1.2
19,961	4,44452	1703	16,2	37,166	2,41715	145	1,4
20,675	4,29264	161	1,5	37,694	2,38454	218	2,1

Solvál s ethanole: difrakce v rtg-záření

Úhel 20	Hodnota d 1.10^l0m	Intenzita	Intenzita %	Úhel 20	Hodnota d 1.10’¹⁰m	Intenzita	Intenzita %
7,357	12,00679	943	52,5	25,061	3,55045	462	25,7
9,541	9,26191	201	11,2	25,341	3,51184	1795	100
9,809	9,00980	208	11,6	25,712	3,46196	290	16,2
10,951	8,07238	1365	76,1	26,055	3,41713	463	25,8
12,031	7,35019	1500	83,6	26,235	3,39415	401	22,4
12,499	7,07637	115	6,4	26,599	3,34857	178	9,9
14,158	6,25067	245	13,7	27,054	3,29329	159	8,9
14,707	6,01841	236	13,2	28,355	3,14498	311	17,3
15,719	5,63302	428	23,8	28,491	3,13034	190	10,6
15,899	5,5690	657	36,6	28,667	3,11154	150	8,4
16,304	5,43218	869	48,4	29,029	3,07353	142	7,9
16,895	5,24359	1076	60	29,658	3,00975	207	11,5
18,227	4,86334	500	27,9	29,819	2,99388	604	33,7
19,109	4,64073	148	8,2	30,421	2,93596	132	7,4
19,49	4,55085	1045	58,2	30,609	2,91837	133	7,4
20,998	4,22731	211	11,8	31,383	2,84817	131	7,3
21,177	4,19195	168	9,3	32,048	2,79050	154	8,6
21,982	4,04035	1230	68,6	32,116	2,78480	146	8,1
22,124	4,01471	1146	63,9	33,78	2,65134	233	13
22,82	3,89385	904	50,4	35,079	2,55608	119	6,6
23,017	3,86082	475	26,5	35,267	2,54289	123	6,9
23,321	3,81127	295	16,5	36,866	2,43614	89	5
23,459	3,78909	282	15,7	37,84	2,37564	88	4,9
23,961	3,71094	701	39,1	39,182	2,29730	102	5,7
24,159	3,68094	1504	83,8	39,406	2,28477	104	5,8

-20CZ 291409 B6

Hydrát polymorfní formy A: difrakce v rtg-záření

Úhel 20	Hodnota d 1.10’^lom	Intenzita	Intenzita %	Úhel 20	Hodnota d 1.10'^lom	Intenzita	Intenzita %
7,261	12,16414	44	100	18,657	4,75222	48,4	10,8
9,1	9,70988	25,6	5,7	18,779	4,72155	35,7	8
9,626	9,18058	31	6,9	18,859	4,70171	43,7	9,8
10,796	8,18860	283	63,2	19,276	4,60089	82	18,3
11,858	7,45707	170	38	19,504	4,54766	46	10,3
12,218	7,23806	51,8	11,6	20,22	4,38821	28	6,3
12,261	7,21317	79,4	17,7	20,655	4,29677	133	29,7
12,302	7,18922	78	17,4	21,68	4,09588	163	36,4
12,97	6,82039	173	38,7	21,86	4,06263	223	49,8
14,462	6,11993	132	29,5	22,316	3,98062	88,8	19,8
14,518	6,09637	138	30,8	22,537	3,94207	254	56,7
15,19	5,82798	229	51,2	22,579	3,93478	281	62,7
15,402	5,74824	114	25,6	22,901	3,88013	78	17,4
15,866	5,58141	222	49,6	23,673	3,75541	84	18,8
15,906	5,56750	196	43,9	24,507	3,62946	46	10,3
16,08	5,50763	102	22,7	25,469	3,49445	203	45,4
16,127	5,49137	117	26,1	26,087	3,41311	128	28,6
16,178	5,47423	112	25,1	27,754	3,21175	56	12,5
16,221	5,46004	78	17,4	28,613	3,11725	65	14,5
16,357	5,41482	65,9	14,7	29,291	3,04663	57	12,7
16,418	5,39480	71,3	15,9	29,935	2,98248	43	9,6
17,189	5,15467	146	32,6	32,747	2,73253	63	14,1
17,345	5,10866	105	23,5	34,176	2,62146	32	7,2
18,57	4,77428	71	15,9	38,848	2,31630	31	6,9

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. 7-( 1, l-Dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l ,2,4-triazol-3-y!methoxy)-3-(2-fluorfenyl)-l ,2,4-triazol[4,3-b]pyridazin.

2. Polymorfní forma A (7-l,l-dimethy!ethyl)-6-(2-ethyl-2H-l,2,4-triazol-3-ylmethoxy)-3(2-fluorfenyl)-l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazinu.

3. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že jako svou účinnou složku obsahuje 7-(l,l-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l,2,4-triazol-3-ylmethoxy)-3-(2-fluorfenyl)l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazin spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.

4. Použití 7-( 1,1 -dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l ,2,4-triazol-3-yImethoxy)-3-(2-fluorfenyl)-l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazinu pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení a/nebo prevenci úzkostných stavů.

5. Způsob výroby 7-(l,l-dimethylethyl)-6-(2-ethyl-2H-l,2,4-triazol-3-ylmethoxy}-3-(2fluorenyl)-l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazinu, vy z n a č u j í c í se tím, že se (A) nechá reagovat sloučenina vzorce III

-21 CZ 291409 B6 (ΠΙ), kde L¹ znamená vhodnou odštěpitelnou skupinu se sloučeninou vzorce IV .OH _nA_n^ch₂ch₃ nebo se (B) nechá reagovat sloučenina vzorce XI (Xi), nebo její l,2,4-triazol[4,3-b]pyridazin-6-onový tautomer se sloučeninou vzorce XII (Xii),

10 kde L³ znamená vhodnou odštěpitelnou skupinu, nebo se

-22CZ 291409 B6 (C) nechá reagovat kyselina trimethyloctová se sloučeninou vzorce XIII (ΧΠΙ), v přítomnosti dusičnanu stříbrného a persíranu amonného, nebo se (D) nechá reagovat sloučenina vzorce XIV kde L⁴ znamená vhodnou odštěpitelnou skupin, se sloučeninou XV

F (XV), kde M znamená skupinu -B(OH)₂ nebo -Sn(Alk)₃, kde Alk znamená Cl-C6alkyl, v přítomnosti katalyzátoru na bázi přechodného kovu.

-23CZ 291409 B6

6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že se reakce (A) provádí v l-methyl-2-pyrrolidinonu v přítomnosti hydroxidu sodného při teplotě 0 °C.