KR20010053136A

KR20010053136A - 치환된 트리아졸로-피리다진 유도체 및 이로부터 제조된약제학적 조성물

Info

Publication number: KR20010053136A
Application number: KR1020007014680A
Authority: KR
Inventors: 칼링윌리엄로버트; 카스트로피네이로호세루이스; 코우든캐머론존; 데이비스안토니존; 메딘앤드류; 맥케이브제임스프랜시스; 피어스가레스에드워드스티븐; 스트리트레슬리조셉
Original assignee: 더블유. 지. 콜; 머크 샤프 앤드 돔 리미티드
Priority date: 1998-06-24
Filing date: 1999-06-15
Publication date: 2001-06-25
Also published as: GEP20033143B; ES2196824T3; EA200100071A1; US6630471B1; CO5031239A1; CA2335328C; NO20006576L; BR9911563A; NO20006576D0; TWI222449B; GB9813576D0; MY124341A; EP1090004A1; CN1138779C; PE20000710A1; IS2258B; IL139775A; IS5730A; CA2335328A1; EP1090004B1

Abstract

7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 특히 α2 및/또는 α3 서브유닛에 대한 친화성이 높은, GABA_A수용체에 대한 선택적 리간드이며, 따라서 불안증 및 경련을 포함하는 중추 신경계 장애의 치료 및/또는 예방에 유용하다.

Description

치환된 트리아졸로-피리다진 유도체 및 이로부터 제조된 약제학적 조성물 {A substituted triazolo-pyridazine derivative, pharmaceutical compositions made therefrom}

본 발명은 치환된 트리아졸로-피리다진 유도체 및 이의 치료용 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 GABA_A수용체 리간드이며, 따라서 심각한 정신 질환의 치료에 유용한, 특정의 치환된 1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진 유도체에 관한 것이다.

주요 억제성 신경전달물질인 감마-아미노부티르산(GABA)의 수용체는 두가지 주요 종류로 나뉘어진다: (1) 리간드-게이팅(gating)된 이온 채널 상과(上科)의 구성원인 GABA_A수용체 및 (2) G-단백질 결합된 수용체 상과의 구성원일 수 있는 GABA_B수용체. 각각의 GABA_A수용체 서브유닛을 암호화하는 제1 cDNA는 클로닝되므로, 포유류 과의 공지된 구성원의 수는 늘어나서 6개 이상의 α 서브유닛, 4개의 β 서브유닛, 3개의 γ 서브유닛, 하나의 δ 서브유닛, 하나의 ε 서브유닛 및 2개의 ρ 서브유닛을 포함한다.

GABA_A수용체 유전자 족의 다양성에 대한 지식은 이러한 리간드-게이팅된 이온 채널의 이해를 진척시키는데 큰 발판이 되지만, 아류형 다양성의 정도에 대한 통찰은 여전히 초기 단계에 머물러 있다. α 서브유닛, β 서브유닛 및 γ 서브유닛은 cDNA를 세포로 일시적으로 형질감염시켜 발현되는 완전 기능성 GABA_A수용체를 형성하기 위한 최소 요건을 구성하는 것으로 지시되어 있다. 위에서 지시한 바와 같이, δ, ε 및 ρ 서브유닛이 존재하지만, GABA_A수용체 집단에 적은 정도로만 존재한다.

전자 현미경 검사에 의한 수용체 크기 및 가시화에 대한 연구에 의해, 리간드-게이팅된 이온 채널 족의 다른 구성원과 마찬가지로, 본래의 GABA_A수용체는 오량체 형태로 존재한다는 결론에 이른다. 17가지 레퍼토리로부터 하나 이상의 α, 하나의 β 및 하나의 γ 서브유닛의 선택은 10,000개 이상 오량체 서브유닛 조합의 가능한 존재를 허용한다. 또한, 이 계산은 이온 채널 주위에서 서브유닛의 배열이 제한된 경우에 가능한 추가의 순열을 간과한 것이다(즉, 5가지 상이한 서브유닛으로 이루어진 수용체에 대해 120가지 가능한 변이체가 존재할 수 있다).

실제로 존재하는 수용체 아류형 어셈블리는 많은 다른 것 중에서 α1β2γ2, α2β2/3γ2, α3βγ2/3, α2βγ1, α5β3γ2/3, α6βγ2, α6βδ 및 α4βδ를 포함한다. α1 서브유닛을 함유하는 아류형 어셈블리는 뇌의 가장 많은 영역에 존재하며, 래트에서 GABA_A수용체의 40% 이상을 차지하는 것으로 생각된다. α2 및 α3 서브유닛을 함유하는 아류형 어셈블리는 래트에서 각각 GABA_A수용체의 약 25% 및 17%를 차지하는 것으로 생각된다. α5 서브유닛을 함유하는 아류형 어셈블리는 주로 해마 및 피질에서 발현되며, 래트에서 GABA_A수용체의 약 4%를 나타낸다고 생각된다.

모든 공지된 GABA_A수용체의 특징적 특성은 다수의 조절 부위의 존재이며, 이중에서 하나는 벤조디아제핀(BZ) 결합 부위이다. BZ 결합 부위는 가장 많이 연구되는 GABA_A수용체 조절 부위이며, 불안 완화 약물(예: 디아제팜 및 테마제팜)이 효과를 발휘하는 부위이다. GABA_A수용체 유전자 족이 클로닝되기 전에, 벤조디아제핀 결합 부위는 방사리간드 결합 연구에 근거하여, 두가지 아류형, BZ1 및 BZ2로 역사적으로 세분된다. BZ1 아류형은 α1 서브유닛을 β 서브유닛 및 γ2와 함께 포함하는 GABA_A수용체에 약리학적으로 동일하게 나타났다. 이는 가장 풍부한 GABA_A수용체 아류형이며, 뇌에서 모든 GABA_A수용체의 거의 반을 나타낸다고 믿어진다.

두가지 다른 주요 집단은 α2βγ2 및 α3βγ2/3 아류형이다. 이들은 함께 전체 GABA_A수용체 레퍼토리의 추가의 35%를 대략 구성한다. 약리학적으로 이러한 조합은 방사리간드 결합에 의해 미리 정의된 바와 같이, BZ2 아류형과 동일한 것으로 나타나지만, BZ2 아류형은 특정한 α5 함유 아류형 어셈블리를 포함할 수도 있다. 이들 아류형의 생리학적 역할은 지금까지 불명확했는데, 충분히 선택적인 효능제 또는 길항제가 공지되지 않았기 때문이다.

본 발명에 이르러, α1βγ2, α2βγ2 또는 α3βγ2 서브유닛에서 BZ 효능제로서 작용하는 제제는 바람직한 불안 완화 특성을 갖는다고 믿어진다. BZ 효능제로서 작용하여 GABA_A수용체의 벤조디아제핀 결합 부위의 조절제인 화합물은 이후로는 "GABA_A수용체 효능제"로서 언급된다. α1-선택적 GABA_A수용체 효능제 알피뎀 및 졸피뎀은 임상적으로 최면제로서 처방되며, 이는 BZ1 결합 부위에서 작용하는 공지된 불안 완화 약물과 연관된 진정의 적어도 일부가 α1 서브유닛을 함유하는 GABA_A수용체를 통해 매개됨을 암시한다. 따라서, α1보다 α2 및/또는 α3 서브유닛과 더욱 유리하게 상호작용하는 GABA_A수용체 효능제는 진정을 유발하는 성향을 감소시켜 불안증의 치료에 유효한 것으로 고려된다. 또한, α1에서 길항제이거나 반대로 효능제인 제제는 사용되어 α1 효능제에 의해 유발된 진정 또는 최면을 반전시킬 수 있다.

따라서, GABA_A수용체에 대한 선택적 리간드인 본 발명의 화합물은 중추 신경계의 다양한 장애의 치료 및/또는 예방에 유용하다. 이러한 장애는 불안증 장애, 예를 들어, 광장 공포증을 동반하거나 동반하지 않는 공황 장애, 공황 장애 병력이 없는 광장 공포증, 사회 공포증을 포함하여 동물 및 다른 공포증, 강박 장애, 외상 후 및 급성 스트레스 장애를 포함하는 스트레스 장애, 및 일반화되거나 물질-유도된 불안증 장애; 신경증; 경련; 편두통; 우울증 또는 이극성 장애, 예를 들어, 단일 에피소드 또는 재발성 주요 우울증 장애, 기분변조 장애, 이극성 I 및 이극성 II 조증 장애, 및 순환기질성 장애; 정신분열증을 포함한 정신병적 장애; 뇌 허혈로부터 발병하는 신경변성 장애; 주의력 결핍 활동항진 장애; 및 예를 들어, 시차병 또는 교대 근무의 영향으로 고생하는 환자에서의 24시간 주기 리듬의 장애를 포함한다.

GABA_A수용체에 대한 선택적 리간드가 유리할 수 있는 다른 장애는 통증 및 외상 수용; 급성, 지발성 및 예기성 구토, 특히 화학요법 또는 방사선에 의해 유도되는 구토를 포함한 구토 뿐만 아니라 수술 후 구역질 및 구토; 신경성 식욕부진 및 신경성 대식을 포함한 식욕 장애; 월경전 증후군; 예를 들어, 대마비 환자에서의 근육 경련 또는 경직; 및 청각 상실을 포함한다. GABA_A수용체에 대한 선택적 리간드는 또한 마취 또는 위 내시경검사법을 포함한 내시경검사법과 같은 소수 절차 전에 예비 투약으로서 유효할 수 있다.

제WO 98/04559호에는 불안증 및 경련을 포함한 신경학적 장애의 치료 및/또는 예방에 유리한 GABA_A수용체에 대한 선택적 리간드로서 언급되는 치환된 및 7,8-환 융합된 1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진 유도체의 종류가 기술되어 있다.

본 발명은 각종 GABA_A수용체 아류형에서 바람직한 결합 특성을 갖는, 특정한 트리아졸로-피리다진 유도체 및 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 본 발명에 따르는 화합물은 사람 GABA_A수용체의 α2 및/또는 α3 서브유닛에 대한 리간드로서 우수한 친화성을 갖는다. 본 발명의 화합물은 α1 서브유닛보다 α2 및/또는 α3 서브유닛과 더욱 유리하게 상호작용한다. 실제로, 본 발명의 화합물은 α1 서브유닛에 비해서 α2 및/또는 α3 서브유닛에 대한 선택적 효능에 의한 기능적 선택성을 나타낸다.

본 발명의 화합물은 이후에 기술된 검정에서 측정된 바와 같이, α2 및/또는 α3 서브유닛에 대해 1nM 미만의 결합 친화성(Ki)을 갖는 GABA_A수용체 아류형 리간드이다. 또한, 본 발명에 따른 화합물은 α1 서브유닛에 비해서 α2 및/또는 α3 서브유닛에 대한 선택적 효능 측면에서 기능적 선택성을 나타낸다. 또한, 본 발명에 따른 화합물은 특히 개선된 경구 생물학적 유용성 측면에서 흥미로운 약력학적 특성을 갖는다.

본 발명은 화학식 I의 7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진 및 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:

본 발명에 따른 화합물은 제WO 98/04559호의 포괄적 범위내에 포함된다. 그러나, 여기에는 위에 도시한 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에 대해 특별히 기술되어 있지 않다.

약제에 사용하기 위해서는, 위의 화학식 I의 화합물의 염은 약제학적으로 허용되는 염이다. 그러나, 다른 염이 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 제조에 유용할 수 있다. 화학식 I의 화합물의 적합한 약제학적으로 허용되는 염은, 예를 들어, 화학식 I의 화합물의 용액을 약제학적으로 허용되는 산(예: 염산, 황산, 메탄설폰산, 푸마르산, 말레산, 석신산, 아세트산, 벤조산, 옥살산, 시트르산, 타르타르산, 탄산 또는 인산)의 용액과 혼합하여 형성될 수 있는 산 부가염을 포함한다.

또한, 본 발명에 의해 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 불안증의 치료가 필요한 환자에게 투여함을 포함하여, 불안증을 치료 및/또는 예방하는 방법이 제공된다.

또한, 본 발명에 의해 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 경련의 치료가 필요한 환자에게 투여함을 포함하여, (예: 간질 또는 관련 장애로 고생하는 환자에서) 경련을 치료 및/또는 예방하는 방법이 제공된다.

사람 GABA_A수용체의 α3 서브유닛에 대한 본 발명에 따른 화합물의 결합 친화성(Ki)은 통상적으로 다음에 기술된 검정에서 측정하는 바와 같다. 본 발명의 화합물의 α3 서브유닛 결합 친화성(Ki)은 1nM 미만이다.

본 발명에 따른 화합물은, 사람 GABA_A수용체의 α1 서브유닛을 발현하는 안정하게 형질감염된 재조합 세포주에서 유도된 GABA EC₂₀반응의 상승작용보다는 사람 GABA_A수용체의 α3 서브유닛을 발현하는 안정하게 형질감염된 재조합 세포주에서 GABA EC₂₀반응의 선택적 상승작용을 유도한다.

사람 GABA_A수용체의 α3 및 α1 서브유닛을 발현하는 안정하게 형질감염된 세포주에서 GABA EC₂₀반응의 상승작용은 문헌에 기술된 프로토콜과 유사한 방법에 의해 통상적으로 측정할 수 있다[참조: Wafford et al., Mol. Pharmacol., 1996, 50, 670-678]. 이러한 방법은 안정하게 형질감염된 진핵생물 세포, 전형적으로 안정하게 형질감염된 마우스 Ltk 섬유아세포의 배양물을 사용하여 적절하게 수행한다.

본 발명에 따른 화합물은 엘리베이티드 플러스 미로 시험(the elevated plus maze test) 및 음주의 조건 억제 시험에서의 양성 반응에 의해 입증된 바와 같이, 불안 완화 활성을 나타낸다[참조: Dawson et al., Psychopharmacology, 1995, 121, 109-117]. 또한, 본 발명의 화합물은 반응 감수성으로부터 수득된 적합한 결과(사슬-당기기)에 의해 확인된 바와 같이, 실질적으로 비-진정성이다[참조: Bayley et al., J. Psychopharmacol., 1996, 10, 206-213].

본 발명에 따른 화합물은 또한 항경련 활성을 나타낼 수 있다. 이는 래트 및 마우스에서, 문헌에 기술된 바와 유사한 프로토콜에 따라 펜틸렌테트라졸-유도된 발작을 차단하는 능력에 의해 입증될 수 있다[참조: J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 279, 492-501].

이들은 거동 효과를 유도하므로, 본 발명의 화합물은 명백히 뇌-침투성이며; 즉, 이들 화합물은 소위 "혈액-뇌 장벽"을 방해할 수 있다. 유리하게는, 본 발명의 화합물은 경구 경로에 의해 투여한 후 유리한 치료 작용을 나타낼 수 있다.

본 발명은 또한, 하나 이상의 본 발명의 화합물을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 이들 조성물은 경구, 비경구, 비내, 설하 또는 직장 투여하기 위해 또는 흡입 또는 통기시켜 투여하기 위해 단위 용량 형태(예: 정제, 환제, 캡슐제, 산제, 과립제, 멸균 비경구 액제 또는 현탁제, 계량 에어로졸 또는 액상 분무제, 점적제, 앰풀제, 자동 주사기 장치 또는 좌제)로 존재한다. 고체 조성물(예: 정제)를 제조하기 위해서, 기본적인 활성 성분을 약제학적 담체, 예를 들어, 통상적인 타정 성분(예: 옥수수 전분, 락토스, 수크로스, 소르비톨, 탈크, 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트, 인산이칼슘 또는 고무), 및 다른 약제학적 희석제(예: 물)와 혼합하여 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 균질 혼합물을 함유하는 고체 예비제형 조성물을 형성한다. 이러한 균질 예비제형 조성물이란, 활성 성분이 조성물 전체에 걸쳐 균질하게 분산되어 조성물이 동일하게 유효한 단위 용량 형태(예: 정제, 환제 및 캡슐제)로 용이하게 세분될 수 있음을 의미한다. 이어서, 이러한 고체 예비제형 조성물은 본 발명의 활성 성분 0.1 내지 약 500mg을 함유하는 상기한 종류의 단위 용량 형태로 세분된다. 통상의 단위 용량 형태는 활성 성분을 1 내지 100mg, 예를 들어, 1, 2, 5, 10, 25, 50 또는 100mg 함유한다. 신규한 조성물의 정제 또는 환제는 제피되거나 달리 배합되어 연장된 작용 잇점을 제공하는 용량 형태를 제공할 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 환제는 내부 용량 성분과 외부 용량 성분을 포함할 수 있으며, 후자는 전자 상에 덮혀 있는 피막 형태로 존재한다. 두가지 성분은 위에서 붕해되지 않도록 막아주고 내부 성분이 손상되지 않은 채로 십이지장으로 통과하거나 서방출되도록 하는 작용을 하는 장용 층에 의해 분할될 수 있다. 다양한 물질이 이러한 장용 층 또는 피막에 사용될 수 있으며, 이러한 물질은 다수의 중합체 산 및 중합체 산과 셸락, 세틸 알콜 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 물질과의 혼합물을 포함한다.

본 발명의 신규한 조성물이 경구 또는 주사 투여하기 위해 혼입될 수 있는 액상 제형은 수성 액제, 적합하게는 방향성 시럽, 수성 또는 유성 현탁액, 및 식용 오일, 예를 들어, 면실유, 호마유, 코코넛 오일 또는 낙화생유를 포함하는 방향성 유액 뿐만 아니라 엘릭시르제 및 유사한 약제학적 비히클을 포함한다. 수성 현탁액에 위한 적합한 분산제 또는 현탁제는 합성 및 천연 고무, 예를 들어, 트라가칸트, 아카시아, 알기네이트, 덱스트란, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 폴리비닐-피롤리돈 또는 젤라틴을 포함한다.

불안증의 치료시에, 적합한 용량 수준은 약 0.01 내지 250mg/kg/day, 바람직하게는 약 0.05 내지 100mg/kg/day, 특히 약 0.05 내지 5mg/kg/day이다. 화합물은 화합물은 하루에 1 내지 4회 섭생으로 투여할 수 있다.

위에 도시한 화학식 I의 화합물은 화학식 III의 화합물과 화학식 IV의 화합물을 반응시킴을 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있다:

위의 화학식 III 및 IV에서,

L¹은 적합한 이탈 그룹이다.

이탈 그룹 L¹은 일반적으로 할로겐 원자, 특히 클로로이다.

화학식 III의 화합물과 화학식 IV의 화합물 간의 반응은 통상적으로 반응물을 적합한 용매 속에서 염기의 존재하에 교반하여 수행한다. 전형적으로, 용매는 N,N-디메틸포름아미드이고, 염기는 강염기(예: 수소화나트륨)이다. 바람직하게는, 용매는 디메틸 설폭사이드이고, 염기는 탄산세슘이다. 더욱 바람직하게는, 용매는 1-메틸-2-피롤리디논이며, 염기는 수산화나트륨이며, 이 경우에 반응은 0℃ 부근에서 수행하는 것이 유리하다.

위의 화학식 III의 중간체는 화학식 V의 화합물을 실질적으로 등몰량의 화학식 VI의 하이드라진 유도체와 반응시킨 후, 필요한 경우, 수득된 이성체 혼합물을 통상적인 수단에 의해 분할시켜 제조할 수 있다:

위의 화학식 V 및 VI에서,

L¹은 위에서 정의한 바와 같고,

L²는 적합한 이탈 그룹이다.

이탈 그룹 L²는 일반적으로 할로겐 원자, 특히 클로로이다. 화학식 V의 중간체에서, 이탈 그룹 L¹및 L²는 동일하거나 상이할 수 있지만, 적합하게는 동일하며, 바람직하게는 둘다 클로로이다.

화학식 V의 화합물과 화학식 VI의 화합물 간의 반응은 통상적으로 반응물을 양성자 공급원(예: 트리에틸아민 염산염)의 존재하에, 일반적으로 불활성 용매(예: 크실렌 또는 1,4-디옥산) 중에 환류시키면서 가열하여 수행한다.

또는, 위의 화학식 III의 중간체는 화학식 VII의 하이드라진 유도체를 화학식 VIII의 알데히드 유도체와 반응시킨 후, 이렇게 하여 수득한 중간체 쉬프(Schiff) 염기를 폐환시켜 제조할 수 있다:

위의 화학식 VII 및 VIII에서,

L¹은 위에서 정의한 바와 같다.

화학식 VII의 화합물과 화학식 VIII의 화합물 간의 반응은 통상적으로 산성 조건하에, 예를 들어, 무기산(예: 염산)의 존재하에 수행한다. 이어서, 수득한 쉬프 염기 중간체의 폐환 반응은 통상적으로 적합한 용매, 예를 들어, 알콜성 용매(예: 에탄올) 속에서 승온, 일반적으로 60 내지 70℃ 부근의 온도에서 염화철(III)로 처리하여 수행할 수 있다.

위의 화학식 VII의 중간체는 위에서 정의한 바와 같은 적합한 화학식 V의 화합물과 하이드라진 수화물을, 일반적으로 이소부틸 알콜 중에 승온에서, 예를 들어, 90℃ 부근의 온도에서 또는 1,4-디옥산 중에 용매의 환류 온도에서 반응시킨 후, 필요한 경우, 수득한 이성체 혼합물을 통상적인 수단에 의해 분할시켜 제조할 수 있다.

또다른 방법으로, 위의 화학식 III의 중간체는 위에서 정의된 바와 같은 화학식 VII의 하이드라진 유도체를 화학식 IX의 화합물과 반응시킨 후, 이렇게 하여 수득한 화학식 X의 하이드라진 유도체를 폐환시켜 제조할 수 있다:

위의 화학식 IX 및 X에서,

Q는 반응성 카복실레이트 잔기이고,

L¹은 위에서 정의한 바와 같다.

반응성 카복실레이트 잔기 Q에 적합한 대가물은 에스테르, 예를 들어, C_1-4알킬 에스테르; 산 무수물, 예를 들어, C_1-4알카노산과의 혼합 무수물; 산 할라이드, 예를 들어, 산 클로라이드; 및 아실이미다졸을 포함한다. 적합하게는, Q는 산 클로라이드 잔기를 나타낸다.

화학식 VII의 화합물과 화학식 IX의 화합물 간의 반응은 통상적으로 염기성 조건하에, 예를 들어, 트리에틸아민의 존재하에, 적합하게는 불활성 용매(예: 디에틸 에테르) 중에, 일반적으로 0℃ 부근의 온도에서 수행한다. 이어서, 수득한 화학식 X의 화합물의 폐환 반응은 염기(예: 트리에틸아민)의 존재하에, 적합하게는 불활성 용매(예: 아세토니트릴) 중에, 일반적으로 0℃ 부근의 온도에서 1,2-디브로모-1,1,2,2-테트라클로로에탄 및 트리페닐포스핀으로 처리하여 통상적으로 수행할 수 있다.

바람직한 방법에서, 화학식 VII의 화합물과 IX의 화합물 간의 반응은 반응물을 용매(예: 1-메틸-2-피롤리디논) 중에 0℃ 부근의 온도에서 혼합하여 수행할 수 있으며, 이렇게 하여 수득한 화학식 X의 화합물의 폐환 반응은 동일 반응계내에서 반응 혼합물을 130℃ 부근의 온도에서 가열하여 수행할 수 있다.

화학식 V의 화합물과 하이드라진 수화물 또는 화학식 VI의 화합물 간의 반응은 위에서 지시한 바와 같이, 하이드라진 질소원자가 이탈 그룹 L¹또는 L²를 대체하는가에 따라서 이성체 생성물의 혼합물을 생성할 수 있다. 따라서, 필요한 화학식 III 또는 VII의 생성물 이외에, 또다른 이성체가 어느 정도로 수득될 수 있다. 이러한 이유로, 수득한 이성체 혼합물을 통상적인 방법(예: 크로마토그래피)에 의해 분할하는 것이 필요할 수 있다.

다른 방법에서, 위에서 도시한 화학식 I의 화합물은 화학식 XI의 화합물(또는 이의 1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진-6-온 토토머)을 화학식 XII의 화합물과 반응시킴을 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있다:

위의 화학식 XI 및 XII에서,

L³는 적합한 이탈 그룹이다.

이탈 그룹 L³는 적합하게는 할로겐 원자, 일반적으로 클로로 또는 브로모이다.

화학식 XI의 화합물과 화학식 XII의 화합물 간의 반응은 통상적으로 반응물을 강염기(예: 수산화나트륨)의 존재하에 적합한 용매, 일반적으로 N,N-디메틸포름아미드 속에서 교반하여 수행한다.

위의 화학식 XI의 중간체는 통상적으로 위에서 정의한 바와 같은 화학식 III의 화합물을 알칼리 금속 수산화물(예: 수산화나트륨)과 반응시켜 제조할 수 있다. 반응은 불활성 용매(예: 수성 1,4-디옥산) 속에서, 이상적으로는 용매의 환류 온도에서 통상적으로 수행한다.

다른 방법에서, 위에서 도시한 화학식 I의 화합물은 트리메틸아세트산과 화학식 XIII의 화합물을 질산은 및 과황산암모늄의 존재하에 반응시킴을 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있다:

반응은 통상적으로 적합한 용매, 예를 들어, 물 또는 수성 아세토니트릴 중에, 임의로 산성 조건하에, 예를 들어, 트리플루오로아세트산 또는 황산을 사용하여, 일반적으로 승온에서 수행한다.

화학식 XIII의 중간체는 위에서 도시한 바와 같은 화학식 I의 화합물(여기서, 7 위치의 3급-부틸 치환체는 부재한다)에 상응하며, 따라서 화학식 XIII의 중간체는 화학식 I의 화합물을 제조하기 위해 상기한 바와 유사한 방법에 의해 제조할 수 있다.

또다른 방법에서, 위에서 도시한 바와 같은 화학식 I의 화합물은 화학식 XIV의 화합물과 화학식 XV의 화합물을 전이 금속 촉매의 존재하에 반응시킴을 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있다:

위의 화학식 XIV 및 XV에서,

M은 -B(OH)₂또는 -Sn(Alk)₃(여기서, Alk는 C_1-6알킬 그룹, 일반적으로 n-부틸이다)이고,

L⁴는 적합한 이탈 그룹이다.

이탈 그룹 L⁴는 적합하게는 할로겐 원자, 예를 들어, 브로모이다.

화학식 XIV의 화합물과 화학식 XV의 화합물 간의 반응에 사용되는 적합한 전이 금속 촉매는 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 또는 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)을 포함한다.

화학식 XIV의 화합물과 화학식 XV의 화합물 간의 반응은 통상적으로 불활성 용매(예: N,N-디메틸포름아미드) 중에, 일반적으로 승온에서 수행한다.

화학식 XIV의 중간체는 위에서 정의한 바와 같은 화학식 IV의 화합물과 화학식 XVI의 화합물을 화학식 III의 화합물과 화학식 IV의 화합물 간의 반응에 대해 상기한 바와 유사한 조건하에 반응시켜 제조할 수 있다:

위의 화학식 XVI에서,

L¹및 L⁴는 위에서 정의한 바와 같다.

위의 화학식 IV의 중간체는 EP-A 제0421210호에 기술된 방법에 의해 또는 이와 유사한 방법에 의해 제조할 수 있다. 적합한 방법은 첨부된 실시예에 기술되어 있다.

위의 화학식 V의 중간체는 트리메틸아세트산과 화학식 XVII의 화합물을 질산은 또는 과황산암모늄의 존재하에 트리메틸아세트산과 화학식 XIII의 화합물 간의 반응에 대해 상기한 바와 유사한 조건하에 반응시켜 제조할 수 있다:

위의 화학식 XVII에서,

L¹및 L²는 위에서 정의한 바와 같다.

화학식 XVII의 화합물에서, L¹과 L²가 둘다 클로로인 경우, 반응은 유리하게는 트리플루오로아세트산의 존재하에 수행한다.

이들이 시판품이 아닌 경우, 화학식 VI, VIII, IX, XII, XV, XVI 및 XVII의 출발 물질은 첨부된 실시예에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 또는 당해 분야에 익히 공지된 표준 방법에 의해 제조할 수 있다.

상기 합성 순서 동안에, 관련된 분자에 대한 감수성 또는 반응성 그룹을 보호하는 것이 필요하고/하거나 바람직할 수 있다. 이는 통상적인 보호 그룹, 예를 들어, 문헌에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다[참조: Protective Groups in Organic Chemistry, ed. J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973; 및 T.W. Greene ＆ P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley ＆ Sons, 1991]. 보호 그룹은 당해 분야에서 공지된 방법을 사용하여 통상의 순차적 단계로 제거할 수 있다.

7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진의 4가지 무수 다형체, 2가지 용매화물 및 이수화물이 합성되고 특성화되었다. 모든 다형체 및 용매화물은, 물 중의 현탁액으로서 교반한 후, 열역학적으로 가장 안정한 형태인 다형체 A(형성 및 특성화에 대해서는 실시예 3 참고)로 전환된다. 다형체 A의 이수화물은 상승된 습도에서만 안정하다.

실시예

다음 실시예는 본 발명에 따른 화합물의 제조방법을 예시한다.

본 발명에 따른 화합물은 Ltk 세포에서 안정하게 발현된 α2 또는 α3 서브유닛을 함유하는 사람 GABA_A수용체의 벤조디아제핀 결합 부위로의 [³H]-플루마제닐의 결합을 유효하게 억제한다.

시약

인산염 완충된 식염수(PBS).

검정 완충액: 10mM KH₂PO₄, 100mM KCl, 실온에서 pH 7.4.

검정 완충액 중의 [³H]-플루마제닐(α1β3γ2 세포에 대해 18nM; α2β3γ2 세포에 대해 18nM; α3β3γ2 세포에 대해 10nM).

검정 완충액 중의 플루니트라제팜 100μM.

검정 완충액에 재현탁시킨 세포(10ml에 1트레이).

세포 수집

상등액을 세포로부터 제거한다. PBS(약 20ml)를 첨가한다. 세포를 긁어내어, 50ml 용량의 원심분리 튜브에 넣는다. 이러한 과정을 추가로 10ml의 PBS를 사용하여 반복 수행하여 대부분의 세포를 확실히 분리시킨다. 세포를 벤치탑 원심분리기에서 3000rpm으로 20분 동안 원심분리시켜 펠릿화한 다음, 필요한 경우, 냉동시킨다. 펠릿을 세포 트레이(25cm x 25cm)당 10ml의 완충액에 재현탁시킨다.

검정

검정은 깊은 96웰 플레이트에서 또는 튜브에서 수행할 수 있다. 각각의 튜브는 다음을 함유한다:

300μl의 검정 완충액,

50μl의 [³H]-플루마제닐(α1β3γ2에 대한 최종 농도: 1.8nM; α2β3γ2에 대해 1.8nM; α3β3γ2에 대해 1.0nM),

화합물이 10% DMSO(전체)에 용해되는 경우, 50μl의 완충액 또는 용매 캐리어(예: 10% DMSO); (비-특이적 결합을 측정하기 위해서) 시험 화합물 또는 플루니트라제팜, 10μM 최종 농도,

100μl의 세포.

검정물을 1시간 동안 40℃에서 배양한 다음, GF/B 필터 상에서 톰텍(Tomtec) 또는 브랜델(Brandel) 세포 수집기를 사용하여 여과한 후, 빙냉 검정 완충액(3 x 3ml)으로 세척한다. 필터를 건조시키고, 액체 신틸레이션 계수법에 의해 계수한다. 전체 결합에 대한 예상값은 전체 계수에 대해 3000 내지 4000dpm이고, 액체 신틸레이션 계수법을 사용하는 경우, 비-특이적 결합에 대해 200dpm 미만이거나, 또는 전체 계수에 대해 1500 내지 2000dpm이고 멜티렉스 고체 신틸런트로 계수하는 경우, 비-특이적 결합에 대해 200dpm 미만이다. 결합 파라미터는 비선형 최소 정방형 회귀 분석에 의해 측정되며, 이로부터 억제 상수 Ki는 각각의 시험 화합물로부터 계산할 수 있다.

실시예에 수반된 화합물은 상기 검정으로 시험하며, 사람 GABA_A수용체의 α2 및/또는 α3 서브유닛으로부터 [³H]-플루마제닐의 편위에 대한 Ki 값을 갖는다고 밝혀졌다.

실시예 1

7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진

a) 3,6-디클로로-4-(1,1-디메틸에틸)피리다진

진한 황산(53.6ml, 1.0mol)을 물(1.25L) 중의 3,6-디클로로피리다진(50.0g, 0.34mol)의 교반된 현탁액에 조심해서 첨가한다. 이어서, 이 혼합물은 70℃(내부 온도)로 가열한 후, 트리메틸아세트산(47.5ml, 0.41mol)을 첨가한다. 그후, 물(20ml) 중의 질산은(11.4g, 0.07mol)의 용액을 약 1분에 걸쳐서 첨가한다. 이에 의해 반응 혼합물의 외관이 유백색으로 된다. 이어서, 물(0.63L) 중의 과황산암모늄(230g, 1.0mol)의 용액을 20 내지 30분에 걸쳐서 첨가한다. 내부 온도가 약 85℃로 상승한다. 첨가하는 동안에 생성물이 점착성 침전물로서 형성된다. 첨가가 완료되면, 반응물을 추가로 10분 동안 교반한 후, 실온으로 냉각시킨다. 이어서, 혼합물을 얼음에 붓고, 필요한 경우, 다량의 얼음을 첨가하여 온도를 10℃ 이하로 유지하면서, 진한 수성 암모니아로 염기성화시킨다. 수성 물질을 디클로로메탄(3 x 300ml)으로 추출한다. 합한 추출물을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 증발시켜 조 생성물 55.8g을 오일로서 수득한다. 이를 용출제로서 헥산 중의 0 내지 15% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 목적하는 화합물 37.31g(53%)을 수득한다. 표제 화합물에 대한 데이터:¹H NMR (360 MHz, d₆-DMSO) δ1.50 (9H, s), 7.48 (1H, s); MS (ES⁺) m/e 205 [MH]⁺, 207 [MH]⁺.

b) 6-클로로-7-(1,1-디메틸에틸)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진

디옥산(1.2L) 중의 3,6-디클로로-4-(1,1-디메틸에틸)피리다진(20g, 0.097mol), 2-플루오로벤즈하이드라지드(22.6g, 0.145mol) 및 트리에틸아민 염산염(20g, 0.0145mol)의 혼합물을 교반하고, 질소류하에 4일 동안 환류 가열한다. 냉각시에 휘발성 물질을 진공제거시키고, 잔사를 디클로로메탄(20ml)로 연마하고, 여과하고, 진공하에 농축시킨다. 잔사를 실리카겔 상에서 0%→25% 에틸 아세테이트/디클로로메탄으로 용출시켜 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물(12.95g, 44%)을 백색 고체로서 수득한다. 표제 화합물에 대한 데이터:¹H NMR (360 MHz, CDCl₃) δ1.57 (9H, s), 7.26-7.35 (2H, m), 7.53-7.60 (1H, m), 7.89-7.93 (1H, m), 8.17 (1H, s); MS (ES⁺)m/e 305 [MH]⁺, 307 [MH]⁺.

c) (2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일)메탄올

실온에서 DMF(150ml) 중의 1,2,4-트리아졸(10g, 0.145mol)의 용액에 수소화나트륨(오일 중의 60% 분산액 6.4g, 0.16mol)을 15분에 걸쳐서 소량씩 나누어 첨가한다. 첨가가 완료되면, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 빙욕에서 냉각시키고, 요오도에탄(14ml, 0.174mol)을 10분에 걸쳐서 적가한다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 3시간 동안 교반한 후, 용매를 고 진공하에 제거하여 잔사를 남기고, 이를 물(300ml)과 에틸 아세테이트(3 x 300ml) 사이에 분배한다. 합한 유기 층을 포화 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 진공하에 농축시키면 오일상 잔사가 잔류하며, 이를 증류에 의해(120℃@∼ 약 20mmHg) 정제시켜 약 15% DMF로 오염된 1-에틸-1,2,4-트리아졸을 수득한다(2.4g). 조 생성물(2.4g, 0.025mol)을 무수 THF(35ml)에 용해시키고, -40℃로 냉각시키고, n-부틸리튬(헥산 중의 1.6M 용액 16.2ml, 0.026mol)을, 온도를 일정하게 유지하면서 20분에 걸쳐 서서히 첨가한다. 이어서, DMF(2.03ml, 0.026mol)를 첨가하고, 15분 후에 반응 혼합물을 2시간에 걸쳐서 서서히 실온으로 가온시킨다. 반응 혼합물에 메탄올(20ml)을 첨가한 후, 수소화붕소나트륨(1g, 0.026mol)을 첨가하여, 용액을 14시간 동안 교반한다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔사를 염수(50ml)와 디클로로메탄(6 x 50ml) 사이에 분배한다. 합한 유기 층을 건조시키고(MgSO₄), 여과하고, 진공하에 농축시켜 잔사를 남기고, 이를 용출제로서 디클로로메탄 중의 0 내지 5% 메탄올을 사용하여 실리카겔 크로마토그래피로 정제시켜 표제 화합물을 회백색 고체로서 수득한다(0.5g, 3%). 표제 화합물에 대한 데이터:¹H NMR (250 MHz, CDCl₃) δ1.48 (3H, t, J=7.3Hz), 4.25 (2H, q, J=7.3Hz), 4.75 (2H, s), 5.14 (1H, br s), 7.78 (1H, s).

d) 7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진

DMF(10ml) 중의 (2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일)메탄올(0.094g, 0.74mmol) 및 6-클로로-7-(1,1-디메틸에틸)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진(0.15g, 0.49mmol)의 용액에 수소화나트륨(오일 중의 60% 분산액 0.024g, 1.1mol 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한다. 이 시간 후에, 반응 혼합물을 물(80ml)로 희석시키고, 침전된 고체를 여과시켜 수집하고, 소결 펀넬 속에서 물로 수차례 세척한다. 고체를 에틸 아세테이트/헥산으로부터 재결정시켜 순수한 표제 화합물을 수득한다(0.085g, 44%). 표제 화합물에 대한 데이터:¹H NMR (250 MHz, CDCl₃) δ1.40-1.47 (12H, m), 4.14 (2H, t, J=7.3Hz), 5.26 (2H, s), 7.26-7.38 (2H, m), 7.53-7.58 (1H, m), 7.86-7.90 (1H, m), 7.93 (1H, s), 7.99 (1H, s); MS (ES⁺) m/e 396 [MH]⁺.

C₂₀H₂₂FN₇O의 원소분석

계산치 : C, 60.75; H, 5.61; N, 24.79%

실측치 : C, 61.02; H, 5.45; N, 24.75%

실시예 2

7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진: 대체 합성 경로

a) 3,6-디클로로-4-(1,1-디메틸에틸)피리다진

10L 용량의 플라스크 내의 디클로로피리다진(100g, 0.67mol), 트리메틸아세트산(96g, 0.94mol) 및 물(800ml)의 혼합물을 상부 교반하면서 55℃로 가온하여 2상 용액을 수득한다. 물(125ml) 중의 AgNO₃(11.4g, 0.134mol)의 용액을 한번에 첨가하여 불투명한 용액을 수득한다. 트리플루오로아세트산(10.3ml, 0.134mol)을 한번에 첨가한다. 과황산암모늄(245g, 1.07mol)을 물(500ml)에 용해시키고, 45 내지 60분에 걸쳐서 현탁액에 적가하여 발열반응을 일으킨다(일반적으로 온도는 75 내지 80℃로 증가하고, 과황산염 첨가 속도에 의해 조절될 수 있다). 온도는 75℃에서 1시간 동안 유지한 다음, 실온으로 냉각시킨다. 반응 혼합물을 이소부틸 알콜(1L)로 추출하고, 수성 층을 폐기한다. 유기 층을 물(250ml)로 세척하고, 수성 분획을 폐기한다. HPLC 분석 수율은 134g(97%)이다. 이소부틸 알콜 용액은 다음 단계에 그대로 사용한다.

b) 6-클로로-5-(1,1-디메틸에틸)피리다진-3-일하이드라진

하이드라진 수화물(95ml, 1.95mol)을 3L 플라스크내의 단계 a로부터의 이소부틸 알콜 용액에 첨가하고, 90℃에서 20시간 동안 가열한다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 하부 수성 층을 폐기한다. 반응 혼합물을 물(450ml)로 세척하고, 수성 분획을 폐기한다. 반응 혼합물을 감압하에, 생성물이 결정화되기 시작할 때까지 증류시킨 다음, 1-메틸-2-피롤리디논(NMP)(550ml)을 첨가한다. 증류를 계속하여 이소부틸 알콜의 나머지를 제거한다. 용액을 다음 단계에 그대로 사용한다.

c) 6-클로로-7-(1,1-디메틸에틸)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진

2-플루오로벤조일 클로라이드(103g, 0.65mol)를, 내부 온도＜ 5℃를 유지하면서 단계 b로부터의 냉각된(0℃) NMP용액에 적가한다. 첨가 후에, 반응 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 가열한다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켜 생성물을 결정화시킨다. 물(1.3L)을 30분에 걸쳐서 적가한다. 슬러리를 10℃로 냉각시키고, 고체를 여과하여 분리한 다음, 감압하에 건조시켜 생성물을 수득한다(145g, 3,6-디클로로피리다진으로부터의 수율 71%).

d) 1-에틸-1,2,4-트리아졸

무수 THF(950ml) 중의 1,2,4-트리아졸(100.0g, 1.45mol)을 0℃로 냉각시키고, 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]운데크-7-엔(DBU)(220g, 1.45mol)을 한번에 첨가한다. 반응 혼합물을, 완전한 용해가 관찰될 때까지, 30분 동안 교반한다. 빙/수 냉각욕을 유지하면서, 요오도에탄(317g, 2.03mol)을 15분에 걸쳐서 적가하여, 내부 온도를 30℃로 상승시킨다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반한 후, DBU 하이드로요오다이드를 여과시켜 제거한다. 여액 용액은 다음 단계에 그대로 사용한다.

e) (2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일)메탄올

선행 단계로부터의 교반 용액을 고체 CO₂/아세톤 슬러리 욕 속에서 -75℃ 내부 온도로 냉각시킨다. 헥실리튬(헥산 중의 33% 용액 458ml)을, 내부 온도를 -55℃ 이하로 유지하면서 25분에 걸쳐서 적가한다. 반응 혼합물을 30분 동안 (-75℃로 다시) 숙성시킨 다음, 순수한 DMF(108ml, 1.39mol)을, 내부 온도를 -60℃ 이하로 유지하면서 10분에 걸쳐서 적가한다. 반응 혼합물을 -70℃에서 90분 동안 숙성시킨 후, 냉각욕을 제거하고, 반응 혼합물을 0℃로 30분에 걸쳐서 가온시킨다. 공업용 메틸화 주정(340ml)을 10분에 걸쳐서 첨가한다. 이어서, 수소화붕소나트륨 (26.3g, 0.695mol)을, 내부 온도를 6℃ 이하로 유지하면서 적가한다. 첨가 후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 이 온도에서 1시간 동안 교반한다. 반응물을 2M H₂SO₄(200ml)를 조심해서 첨가하여 급냉시킨 다음, 실온에서 20시간 동안 교반한다. 반응 혼합물을 675ml로 농축시키고, 황산나트륨(135g)을 한번에 첨가한다. 반응 혼합물을 35℃로 가온하고, 15분 동안 교반한다. 용액을 따뜻한(45℃) 이소부틸 알콜(2 x 675ml)로 추출한다. 합한 유기 분획을 감압하에 450ml로 농축시키면, 이 시점에서 생성물이 결정화된다. 헵탄(1.25L)을 첨가하고, 슬러리를 감압하에 농축시켜 대부분의 이소부틸 알콜을 제거한다. 헵탄을 첨가하여 최종 슬러리 용적을 680ml로 한다. 0℃로 냉각시킨 후, 여과하여 표제 화합물을 수득한다(137g, 1,2,4-트리아졸로부터 74%).

f) 7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진

방법 A

6-클로로-7-(1,1-디메틸에틸)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진(255g, 0.819mmol), (2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일)메탄올(125g, 0.983mmol) 및 탄산세슘(640g, 1.966mol)을 상부 교반기가 장치된 10L 용량의 플라스크에 충전한다. 디메틸 설폭사이드(2.5L)를 한번에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반한다. 생성물이 결정화된다. 반응 혼합물을 ＜25℃에서 유지하면서, 물(5L)을 45분에 걸쳐서 교반된 현탁액에 적가한다. 10℃로 냉각시킨 후, 생성물을 여과시켜 분리하고, 케이크를 물(1.75L)로 세척한다. 50℃에서 진공건조시켜 표제 화합물(317g, 98%)을 백색 고체로서 수득한다.

방법 B

6-클로로-7-(1,1-디메틸에틸)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진(10g, 32.12mmol) 및 (2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일)메탄올(5.01g, 38.55mmol)을 상부 교반기가 장치된 500ml 용량의 플라스크에 충전한다. NMP(100ml)를 한번에 첨가하고, 반응 혼합물을 완전한 용해가 성취될 때까지 교반한다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 48% w/w 수산화나트륨 용액(4.02g, 46mmol)을 한번에 첨가한다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 생성물이 결정화된다. 물(100ml)을 15분에 걸쳐서 적가하고, 슬러리를 30분 동안 숙성시킨다. 생성물을 여과시켜 분리하고, 케이크를 물(100ml)로 세척한다. 50℃에서 진공건조시켜 표제 화합물(12.50g, 98%)을 백색 고체로서 수득한다.

실시예 3

7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진의 다형체 및 용매화물의 형성 및 특성화

7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진(이후, 화학식 I의 화합물이라 함)을 유기 용매를 선택하여 재결정시키고, 수득한 고체를, 달리 언급하지 않는 한, 진공 중에 밤새 60℃에서 건조시킨다. 이어서, 각각의 뱃치를 광학 현미경, 시차 주사 열량법(DSC), 열중량 분석(TGA) 및 X선 분말 회절(XRPD)에 의해 특성화한다. 4가지 상이한 무수 다형체, 수화물 및 2가지 용매화물이 표 1에 요약된 바와 같이 특성화되었다.

화학식 I의 화합물의 다형체

다형체	재결정화 용매	결정 성향	융점(℃)
A	메탄올에틸 아세테이트아세토니트릴아세톤아세트산/H₂O	가늘고 긴 장방형 또는불규칙형	약 186
B	이소부탄올	가늘고 긴 장방형 또는불규칙형	약 181
C	디메틸포름아미드테트라하이드로푸란	침상	약 170
D	이소프로판올이소부탄올	침상	약 170
메탄올 용매화물	메탄올(공기-건조)	불규칙형	약 186
에탄올 용매화물	에탄올	불규칙형	약 186

다형체 A

다형체 A는 불규칙하거나 가늘고 긴 장방형 복굴절 결정으로 이루어진다. 이는 DSC에 의하면 약 186℃에서 용융으로 인해 하나의 주요 흡열을 나타낸다. 제조된 몇가지 샘플의 경우에, 이 용융물은 용융 흡열에 대한 숄더로 대표되는, 이 안에서 일어나는 다수의 반응을 나타낸다. 다형체 A는 무수 물질이며, TGA에 의한 손실을 나타내지 않는다. 이는 2θ7.3。에서 두개의 피크에 의해 대표되는, 독특한 XRPD 회절 기록도를 갖는다.

다형체 B

다형체 B는 불규칙하거나 가늘고 긴 장방형 복굴절 결정으로 이루어진다. 다형체 B는 DSC에 의하면 약 181℃에서 용융으로 인해 하나의 주요 흡열을 나타낸다. 이는 무수 물질이며, TGA에 의한 중량 손실을 나타내지 않는다. 이는 독특한 XRPD 회절 기록도를 갖는다.

다형체 C

다형체 C는 침상 복굴절 결정으로 이루어진다. 다형체 C의 DSC 온도 기록도는 약 170℃에서 흡열을, 약 173℃에서 발열을, 약 181℃에서 소량의 흡열을 나타내고, 약 186℃에서 용융으로 인해 흡열을 나타낸다. 손실은 열중량 분석에서 관찰되지 않는다.

다형체 D

다형체 D는 침상 복굴절 결정으로 이루어진다. 다형체 D의 XRPD 회절 기록도는 다형체 C의 것과 패턴이 유사하다. 그러나, 중요한 차이로서, 특히 2θ=9.861, 15.113, 18.015 및 22.224에서 추가 피크가 관찰된다. 다형체 D의 DSC 흔적은 약 108℃에서 매우 광범위한 발열을 나타낸 후, 다형체 C에서와 같이 170℃ 및 173℃에서 흡열 및 발열을 나타낸다. 주요 용융이 약 181℃에서 관찰되며, 다수의 반응이 용융 흡열내에서, 186℃에서 소량 용융되면서 일어나는 것으로 보인다. 손실은 TGA에 의해 관찰되지 않는다.

메탄올 용매화물

메탄올 용매화물의 DSC 온도 기록도는 약 157℃에서 메탄올의 손실에 기인한 하나의 흡열과 186℃에서 용융에 기인한 하나의 흡열을 나타낸다. 점차적 손실은 TGA에 의해 약 150℃까지 관찰되며, 이 시점에서 스텝 손실이 관찰되고, 동시에 흡열이 DSC에 의해 관찰된다. 이러한 스텝 손실은 특정한 경우에 하나 이상의 반응으로 이루어지며, 양은 재결정된 샘플에 따라 변하고, 화학양론적 용매화물에 상응하게 나타나지 않는다. 그러나, 다형체 A에 대한 메탄올 증기 수착 연구는 별도의 반용매화물의 존재를 나타낸다. 용매화물의 XRPD 회절 기록도는 독특하다.

에탄올 용매화물

에탄올 용매화물은 이의 DSC 온도 기록도에 의해 대표되며, 이는 약 111℃에서 에탄올의 손실에 기인한 하나의 흡열과 약 186℃에서 용융에 기인한 흡열을 나타낸다. TGA는 상이하게 재결정된 샘플에서 약 4 내지 6.5%로 가변성인 손실을 나타내며, 화학양론적 용매화물에 상응하지 않는다. XRPD 회절 기록도는 독특하다.

다형체 A의 수화물

도 1은 25℃에서 화학식 I의 화합물의 다형체 A의 흡착/탈착 등온선을 도시한다. 이들 수증기 수착 연구는 25℃, 80% 이상의 상대 습도(RH)에서 이수화물이 형성됨을 나타낸다. 수화물 형성의 히스테리시스 지표는 약 60% RH 이하에서 일어나는 탈착과 함께 일어나는 것으로 보인다.

도 2는 화학식 I의 무수 화합물의 다형체 A 및 다형체 A의 이수화물의 XRPD 회절 기록도를 나란히 전개하여 도시한다. 다형체 A의 습윤 샘플에서 수득된 이수화물의 XRPD 회절 기록도는 두가지 형태 사이에서 관찰된 분명한 차이를 입증한다. 회절의 주요 변화는 2θ= 11.2°에서 피크의 손실 및 2θ= 11.9°및 12.3°에서 두가지 주요 피크의 출현인 것으로 나타낼 수 있다.

화학식 I의 화합물의 다형체의 다형체 A로의 전환

물에 슬러리화하는 경우, 상기한 모든 다형체 및 용매화물은 1 내지 4일의 기간에 걸쳐서 실온에서 가장 안정한 형태인 다형체 A로 전환된다. 이러한 전환율은 슬러리화된 매우 과량의 고체 화합물에 대한 화학식 I의 화합물의 낮은 수용성으로 인해 낮다.

X선 분말 회절 데이터

도 3은 화학식 I의 무수 화합물의 다형체 A, B, C 및 D, 메탄올 및 에탄올 용매화물의 및 다형체 A의 이수화물의 XRPD 회절 기록도를 나란히 전개하여 도시한다. 이와 연관된 많은 데이터가 다음에 제시된다.

화학식 I의 화합물의 다형체 A : X선 분말 회절 데이터

화학식 I의 화합물의 다형체 B : X선 분말 회절 데이터

화학식 I의 화합물의 다형체 C : X선 분말 회절 데이터

화학식 I의 화합물의 다형체 D : X선 분말 회절 데이터

화학식 I의 화합물의 메탄올 용매화물 : X선 분말 회절 데이터

화학식 I의 화합물의 에탄올 용매화물 : X선 분말 회절 데이터

화학식 I의 화합물의 다형체 A의 수화물 : X선 분말 회절 데이터

Claims

7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진.
본원 명세서에 규정된 7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진의 다형체 A.
7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 약제학적 조성물.
불안증 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한, 7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진의 용도.
(A) 화학식 III의 화합물과 화학식 IV의 화합물을 반응시키거나,

(B) 화학식 XI의 화합물(또는 이의 1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진-6-온 토토머)과 화학식 XII의 화합물을 반응시키거나,

(C) 트리메틸아세트산과 화학식 XIII의 화합물을 질산은 및 과황산암모늄의 존재하에 반응시키거나,

(D) 화학식 XIV의 화합물과 화학식 XV의 화합물을 전이 금속 촉매의 존재하에 반응시킴을 포함하여, 7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진을 제조하는 방법.

화학식 III

화학식 IV

화학식 XI

화학식 XII

화학식 XIII

화학식 XIV

화학식 XV

위의 화학식 III과 IV 및 XI 내지 XV에서,

L¹은 적합한 이탈 그룹이고,

L³는 적합한 이탈 그룹이며,

M은 -B(OH)₂또는 -Sn(Alk)₃(여기서, Alk는 C_1-6알킬 그룹이다)이고,

L₄는 적합한 이탈 그룹이다.
제5항에 있어서, 반응(A)가 1-메틸-2-피롤리디논 속에서 수산화나트륨의 존재하에 0℃ 부근의 온도에서 수행되는 방법.
유효량의 7-(1,1-디메틸에틸)-6-(2-에틸-2H-1,2,4-트리아졸-3-일메톡시)-3-(2-플루오로페닐)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진을 불안증의 치료가 필요한 환자에게 투여함을 포함하여, 불안증을 치료 및/또는 예방하는 방법.