CZ281786B6 - Inhibitor atherosklerotického ztluštění intimy - Google Patents

Abstract

Inhibitor atheroskletorického zhuštění intimy, který obsahuje účinné množství látky vzorce (I), kde X je fenyl, substituovaný fenyl nebo 5ti- či 6tičlenný hetrerocyklický aryl;každý R.sup.1 .n.a R.sup.2.n., které jsou nezávislé na sobě, je vodík, C.sub.1.n.-.sub.8 .sub..n.alkyl, C.sub.3.n.-.sub.7 .n.cykloalkyl, C.sub.1.n.-.sub.3 .n.alkoxy, n-butoxy, i-butoxy, sek-butoxy, terc-butoxy, R.sup.20.n.R.sup.21.n.N- (kde každý R.sup.20 .n.a R.sup.21.n., které jsou nezávislé na sobě, je vodík nebo C.sub.1.n.-.sub.3 .n.alkyl),trifluormethyl, trifluormethoxy, difluormethoxy, fluor, chlor, brom, fenyl, fenoxy, benzyloxy, hydroxy, trimethylsilyloxy, difenyl-terc-butylsilyloxy, hydroxymethyl nebo -O(CH.sub.2.n.).sub.e.n.OR.sup.22 .n.(kde R.sup.22 .n.je vodík nebo C.sub.1.n.-.sub.3 .n.alkyl a kde e je 1, 2 nebo 3); nebo R.sup.1 .n.a R.sup.2 .n.spolu tvoří -CH=CH-CH=CH- nebo methylendioxy když jsou navzájem v o-poloze;substituenty R.sub.3.n., Y a Z jsou vysvětleny v popise.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutického přípravku proti aterosklerotickému ztlušťování intimy, t j. vnitřní vrstvy cévní stěny. Tento farmaceutický přípravek má silný inhibiční účinek vůči HMG-CoA reduktase a vůči proliferaci buněk hladkého svalstva aortové intimy (I-SMC) v procesu aterosklerotického ztluštování intimy, s účinkem proti migraci buněk hladkého svalstva aortové medie (M-SMC) a proti adhezi krevních buněk, jako jsou lymfocyty, leukocyty a makrofágy, k endotělovým buňkám.

Dosavadní stav techniky

Ztluštění intimy koronární arterie je jakožto spouštěcí mechanismus považováno za jednu z hlavních příčin infarktu myokardu a angíny pectoris. Předpokládá se, že toto aterosklerotické ztluštění intimy začíná adhesí monocytů anebo krevních destiček k endothelovým buňkám se současnou sekrecí cytokininů a hromaděním lipidů a že postupuje cestou migrace M-SMC z medie do intimy a proliferaci buněk hladkého svalstva v intimě a nárůstem mimobuněčné matrice způsobeným patologickou a proliferativní aktivací anebo modulaci buněk hladkého svalstva. Těmto aktivacím buněk napomáhají rizikové faktory jako je hyperlipidemie. Bylo publikováno, že v modelových pokusech na zvířatech inhibitory HMG-CoA reduktasy potlačují aterosklerotické ztluštění intimy díky svému silnému působení vedoucímu ke snížení sérového cholesterolu (Biochim. Bipophys. Acta, 960, 294-302, (1988), ale toto působení nebylo adekvátní v klinických pokusech.

Z těchto důvodů je žádoucí hledat jako inhibitor aterosklerotického ztluštění intimy lék schopný působit přímo na aterosklerotické lese. Až dosud byly popsány inhibiční účinky, které na buňky hladkého svalstva vykazuje lék na bázi růstového faktoru odvozeného od krevních destiček (FGF) (Life Science, 28, 1641-1646, (1981); J. Pharm. Exp. Ther., 248, 1167-1174, 91989)), inhibiční účinky antagonistů vápníku na migraci buněk hladkého svalstva působením PDGF, tromboxanu B₄ a interleukinu-1 (Atherosclerosis, 72, 213-219, (1988)), inhibiční účinky RGD peptidů na adhesi buněk (J. Cell. Biol., 112, 335-344, (1991)) a inhibiční účinky inhibitoru syntézy tromboxanu na reathenosu po PTCA (Atherosclerosis, 18, 661-665, (1990)). Tyto účinky se však omezují na krevní destičky nebo stimulační faktory, jako jsou cytokininy, ale zatím nebyl nalezen lék přímo působící na aterosklerotické patologické buňky hladkého svalstva.

Migrační faktor odvozený od buněk hladkého svalstva a vylučovaný buňkami hladkého svalstva stimuluje migraci silněji než PDGF a předpokládá se, že je v těsné souvislosti se začátkem a postupem aterosklerosy (Atherosclerosis, 72, 213-226, (1991)), zatím však nebyl nalezen žádný lék, který by inhiboval migraci buněk hladkého svalstva. Dále se předpokládá, že proliferativní charakter I-SMC, který nelze potlačit prostaglandinem I₂ (Atherosclerosis, 73, 67-69 (1988)), hraje důležitou roli v ateroskle

-1CZ 281786 B6 rose. Dosud však nebyl nalezen žádný lék, který by inhiboval tento proliferativní charakter.

Bylo popsáno, že inhibitory HMG-CoA reduktasy mají inhibiční účinek na proliferaci buněk pokud jde o fibroblasty, buňky hladkého svalstva a lymfocyty (J. Biol. Chem., 259, 1546-1551 (1984); ibid. 255, 5134-5140; Biochim. Biophys. Acta, 1051,

138-143, (1990)), a že rovněž potlačují aktivaci lymfocytů (Int. J. Immunopharmac., 11, 863-869, (1989)). Avšak tyto inhibiční účinky nejsou plně uspokojující a je žádoucí najít lék, který by byl účinnější a selektivně působil na cílové buňky, zejména na I-SMC, makrofágy a monocyty.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je farmaceutický přípravek proti aterosklerotickému ztlušťování intimy, který jako účinnou látku obsahuje sloučeninu obecného vzorce I ve kterém kruh

(I)

v nichž

R^4a značí vodík, Cj^alkyl, fluor, chlor a brom, R⁴b značí C1_4alkyl a fenyl, R⁵^ značí C1_₄alkyl, R^4c a R^5c značí vodík a C₁_₄alkyl,

R¹ je vodík nebo fluor,

R³ je C₃_₅alkyl nebo C₃_₅cykloalkyl,

Y je -CH₂CH2₂ nebo -CH=CH- a

Z je -CH(OH)-CH₂-CH(OH)-CH₂-CO₂R¹², kde R¹² je sodík, draslík nebo jednovazný ekvivalent vápenatého iontu, nebo skupina

-2CZ 281786 B6

ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem a/nebo jinou farmaceutickou pomocnou látkou.

Jedno výhodné provedení farmaceutického přípravku podle tohoto vynálezu obsahuje jako účinnou látku sloučeninu obecného vzorce la

(la) ve kterém všechny substituenty mají shora uvedené významy.

Jiné výhodné provedení farmaceutického přípravku podle vynálezu obsahuje jako účinnou látku sloučeninu obecného vzorce Ib

_R5b (Ib) ve kterém všechny substituenty mají shora uvedené významy.

Další výhodné provedeni farmaceutického přípravku podle vynálezu obsahuje jako účinnou látku sloučeninu obecného vzorce Ic

-3CZ 281786 B6

ve kterém všechny substítuenty mají shora uvedené významy.

Výhodné jsou sloučeniny obecného vzorce la, v němž R³ je cyklopropyl, Y je -CH=CH- a ostatní substítuenty mají shora uvedené významy.

Další výhodné sloučeniny jsou sloučeniny obecného vzorce lb, v němž R³ je cyklopropyl, R⁴¹⁾ a R^5b jsou methyly, Y je -CH=CHa ostatní substítuenty mají shora uvedené významy.

K výhodným patří též sloučeniny obecného vzorce Ic, v němž R³ je cyklopropyl, R^4c je ethyl, R^5c je methyl, Y je -CH=CHa ostatní substítuenty mají shora uvedené významy.

Výhodné jsou rovněž sloučeniny obecného vzorce la, v němž Z je skupina -CH(OH)-CH₂-CH(OH)-CH₂-CO₂-l/2Ca, tj. s jednovazným ekvivalentem vápenatého iontu.

Farmaceutický přípravek podle vynálezu obsahuje aktivní látku v dávce alespoň 0,03 mg/kg/den.

Farmaceutický přípravek obsahuje obvykle 0,01 až 20,0 mg aktivní látky a 50 až 99,9999 % hmotnostních pomocné látky nebo vody.

Tablety farmaceutického přípravku obsahují 0,05 až 40,0 % hmotnostních aktivní látky, 42,5 až 95,95 % hmotnostních pomocné látky, 2,5 až 10,0 % hmotnostních pojivá, 1,0 až 5,0 % hmotnostních desintegrátoru a 0,5 až 2,5 % hmotnostních maziva.

Tuhé kapsle farmaceutického přípravku podle tohoto vynálezu obsahují 0,05 až 40,0 % hmotnostních aktivní látky, 57,5 až 99,45 % hmotnostních pomocné látky a 0,5 až 12,5 % hmotnostních maziva.

Elastické kapsle farmaceutického přípravku podle vynálezu obsahují 0,05 až 40,0 % hmotnostních aktivní látky, 59,0 až 99,85 % hmotnostních pomocné látky a 0,1 až 1,0 % hmotnostní rozpouštědla .

Farmaceutický přípravek ve formě čípků obsahuje 0,01 až

-4CZ 281786 B6 % hmotnostních aktivní látky, 59,0 až 99,89 % hmotnostních pomocné látky a 0,1 až 1,0 % hmotnostní rozpouštědla.

Injekce přípravku podle vynálezu obsahují 0,0001 až 5,0 % hmotnostních aktivní látky a 95,0 až 99,9999 % hmotnostních destilované vody pro injekce.

Granulová forma přípravku podle vynálezu obsahuje 0,05 až 40,0 hmotnostních aktivní látky, 47,5 až 96,95 % hmotnostních pomocné látky, 2,5 až 10,0 % hmotnostních pojivá a 0,5 až 2,5 % hmotnostní maziva.

Pyridinové sloučeniny, jež tvoří účinnou látku ve farmaceutickém přípravku podle tohoto vynálezu, mohou mít alespoň jeden nebo dva asymetrické uhlíkové atomy a tedy nejméně dva nebo více optických isomerů. Sloučeniny shora uvedeného obecného vzorce I tudíž zahrnují všechny takové isomery a jejich směsi.

Sloučenina podle tohoto vynálezu muže být silným inhibitorem adhese krevních buněk (jakými jsou monocyty, makrofágy) k endothelovým buňkám a může potlačovat odpovědí na ranou fázi ztluštění intimy. Navíc může inhibovat migraci buněk hladkého svalstva aortové medie PDGF a upraveným mediem buněk hladkého svalstva (SMC-CM), které může obsahovat migrační faktor autokrinního stimulačního systému odvozený od buněk hladkého svalstva. Navíc sloučenina podle tohoto vynálezu inhibuje spotřebu ³H-thymidinu v buňkách hladkého svalstva a tak replikaci DNA čímž zřejmě je účinné inhibována proliferace buněk. Tyto účinky jsou silnější v I-SMC než v M-SMC.

Jak vyplývá z předchozího předpokládá se, že sloučenina podle tohoto vynálezu inhibuje proliferaci buněk hladkého svalstva v aortové intimě, což je nejdůležitější fáze aterosklerotického ztluštění intimy. Tento vynález je postaven na objevu, že sloučenina podle tohoto vynálezu má tyto účinky na aterosklerotické ztluštění intimy.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu, tedy mevalonolaktony, vzorce (I) mohou být připraveny těmito reakcemi.

V reakčnich vzorcích jsou R¹, R², R³, R¹², R¹⁴ a jádro X definovány jak uvedeno výše podle vzorce (I) a R¹⁷ je nižší Ci-₄alkyl, jako je methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl nebo n-butyl.

Ze sloučenin vzorce (I) ty, které odpovídají vzorcům (Vila), (Vllb) a (Vile) mohou být připraveny metodami uvedenými v zveřejněné japonské přihlášce č. 279866/1989 před ověřováním (odpovídající EP 304063 a USP 5011930), zveřejněné v japonské patentové přihlášce č. 275878/1990 před ověřováním (odpovídající EP 339358 a USP 5024999) a v zveřejněné japonské patentové přihlášce č. 7290/1991 před ověřováním (odpovídající EP 367235 a USP 5026698).

-5CZ 281786 B6

[Vila]

[VI lb]

-6CZ 281786 B6

-7CZ 281786 B6

[1-4]

-8CZ 281786 B6

-9CZ 281786 B6

Stupeň A je redukce esteru na primární alkohol, která se nejlépe provede pomocí různých kovových hydridů, s výhodou pomocí hydridu diisobutylhlinitého, v rozpouštědle jakým je tetrahydrofuran, toluen nebo methylenchlorid při teplotě od - 20 ’C do 20 °C, nejlépe od - 10 °C do 10 ’C.

Stupeň B je oxidace primárního alkoholu na aldehyd, kterou lze provést pomocí různých oxidačních činidel. S výhodou se užije metody při níž se reakce provede s použitím chlorochromanu pyridinu v methylenchloridu při teplotě od 0 °C do 25 ’C, metody v níž reakce (Swernova oxidace) se provede oxalylchloridem, dimethylsulfoxidem a terciárním aminem (jako je triethylamin) a metody podle niž se reakce provede s použitím komplexu kysličník sírový-pyridin.

Stupeň C je syntéza 3-ethoxy-l-hydroxy-2-propenového derivátu, jež lze získat reakcí látky (V) na lithiovou sloučeninu předem připravenou působením butyllithia v tetrahydrofuranu na cis-l-ethoxy-2-(tri-n-butylcín)ethylen. Pokud jde o reakční teplotu je výhodné použít nízké teploty od - 60 ’C do - 78 ’C.

Stupeň D je syntéza enalu hydrolýzou kyselinou. S použitím kyselého katalyzátoru, nejlépe kyseliny p-toluensulfonové, kyseliny chlorovodíkové anebo kyseliny sírové, lze reakci provést ve smési vody s tetrahydrofuranem nebo ethanolem při teplotě od 10 ’C do 25 °C.

3-Ethoxy-l-hydroxy-2-propen získaný ve stupni C lze použít ve stupni D bez přečištění prostě tak, že se odstraní tetra-n-butylcín vzniklý současné s derivátem.

Stupeň E je adiční reakce mezi enalem (III) a esterem kyseliny acetoctové. Reakce se nejlépe provede s použitím hydridu sodného a n-butyllithia ve formé báze v tetrahydrofuranu při teplotě od - 80 ’C do 0 ’C, nejlépe od - 30 ’C do - 10 °C.

Stupeň F je reakce v níž ester ketokarboxylové kyseliny (II) je redukován různými činidly.

Existuje reakce, kterou se karbonylová skupina redukuje s použitím např. borohydridu sodného, kyanoborohydridu sodného, borohydridu zinečnatého, disiamylboranu, diboranu, terc-butylaminoboranu, komplexu pyridinu s boranem, dicyklohexylboranu, thexylboranu, 9-borabicyklo[3.3.1]nonanu, diisokamfenylboranu nebo tri-sek-butylborohydridu lithného na odpovídající ester dihydroxykarboxylové kyseliny (1-1).

Tuto reakci lze provést v jednom z rozpustidel jakými jsou uhlovodík, halogenovaný uhlovodík, C₁_₄alkohol, ether a jeho směsi, při teplotě od - 100 C do 50 C, nejlépe při teplotě od - 78 ’C do 30 ’C.

Jinak, jak zveřejněno v J. Am. Chem. Soc., 105, 593, (1983), trialkylboran, jako např. tri-n-butylboran nebo triethylboran a borohydrid sodný mohou být použity při nízké teplotě.

-10CZ 281786 B6

Dále, jak uvedeno v Tetrahedron Letters, 28, 155, (1987), lze přednostně získat erythroprodukt s vyšší biologickou aktivitou s použitím alkoxydialkylboranu jakým jsou methoxydiethylboran nebo ethoxydiethylboran.

Tuto reakci lze provést ve směsi C₁_₄alkoholu a tetrahydrofuranu při teplotě od - 80 °C do - 50 °C, nejlépe od - 72 ’C do - 68 'C.

Stupeň G je hydrolýza esteru a tuto reakci lze provést s použití ekvimolárního množství báze, nejlépe hydroxidu draselného nebo hydroxidu sodného, ve směsi vody s methanolem nebo ethanolem při teplotě od 10 ’C do 25 ’C.

Takto získaná volná kyselina se pak nechá reagovat s vhodnou bází, aby vznikla sůl.

Ve stupni H se volná hydroxykyselina (1-2) podrobí dehydratační reakci na mevalolakton, tuto reakci lze provést refluxováním s benzenem nebo toluenem za současného odstraňování vody přídavkem vhodného dehydratačního činidla jakým je např. molekulární síto.

Jinak lze reakci provést s použitím laktonotvorných činidel jakými jsou karbodiimid, nejlépe ve vodě rozpustný karbodiimid jakým je např. N-cyklohexyl-N’-[2’-(methylmorfolinium)ethyl]karbodiimid p-toluensulfonát v suchém methylenchloridu při teplotě od 10 ’C do 35 ’C, nejlépe od 20 “C do 25 ’C.

Stupeň J je hydrogenace dvojné vazby spojující mevalolaktonovou část s heterojádrem, kterou lze provést s použitím katalytického množství paladiumuhlíku nebo rhodiumuhlíku v rozpustidle jakým je methanol, ethanol, tetrahydrofuran nebo acetonitril při teplotě od 5 ’C do 50 ’C, nejlépe od 10 ’C do 25 ’C.

Stupeň K je je reakce, na získání δ,β-nenasyceného ketonu selektivní oxidací esteru dihydroxykarboxylové kyseliny, kterou lze provést aktivovaným kysličníkem manganičitým v rozpouštědle jakým je ethyleter, tetrahydrofuran, benzen nebo toluen při teplotě od 20 ’C do 80 “C, nejlépe od 40 X do 80 ’C.

Jinak lze sloučeninu vzorce (1-6) syntetizovat z aldehydu vzorce (V) Wadsworth-Emmonsovou kopulačni reakcí (J. Am. Chem. Soc., 107, 3731, (1985).

Látka může být dále syntetizována z enalu vzorce (III) (Tetrahedron Letters, 26, 2951, (1985)). Rovněž lze sloučeninu vzorce (1-7) získat adicí dvojitého aniontu acetoctového esteru stejným způsobem jak popsáno ve stupni E na aldehyd (VIII), syntetizovaný z aldehydu vzorce (V) kontinuální Wittigovou reakcí (WO—8402131), aby byl získán ester ketokarboxylové kyseliny (IX), v němž se karbonylová skupina redukuje způsobem popsaným ve stupni F.

Sloučeniny uvedené v Tabulkách 1 až 4 včetně těch, které jsou uvedeny v následných příkladech, jsou spíše specifickými příklady látky podle tohoto vynálezu. Ve vzorcích je substituent

-11CZ 281786 B6

-Y-Z uveden v Tabulce 1 a ostatní substituenty v Tabulkách 2 až 4.

V následující prezentaci substituentů jsou pro jejich znázornění použity různé symboly. Tak n- značí normální, i- značí iso, sek- značí sekundární, terč- značí terciární, c- značí cyklo, Me značí methyl, Et značí ethyl, Pr značí propyl, Bu značí butyl, Pent značí pentyl, Hex představuje hexyl a Ph představuje fenyl.

Tabulka 1

Látka

-Y-Z

OH OH

OH OH

OH OH

-12cz 281786 B6

Tabulka 1 - pokračování

Látka

-Y-2

I-β (R¹²=Et)

1-7 (R¹²=Et)

1-8 (R¹²=H)

OH OH

Z-9 (R¹²=Na)

CO₂R¹²

OH O

IX (R¹²=Et)

OH O

-13CZ 281786 B6

Tabulka 2

R4a	RSa	R1	R2	R3	R6a
6-OMe	H	H	H	i-Pr	H
6-OMe	H	4-F	H	i-Pr	H
6-Br	H	4-F	H	i-Pr	H
6-Me	8-Me	4-F	H	i-Pr	H
7-OMe	8-OMe	4-F	H	i-Pr	H
6-Br	H	2-F	H	i-Pr	H
6,7-CH=CH-	•CH=CH-	4-F	H	i-Pr	H
H	H	4-F	H	c-Hex	H
H	H	4-Ph	H	i-Pr	H
H	H	4-PhCH,	H	i-Pr	H
6-C1	H	4-F	H	c-Pr	H
6—Cl	H	4-F	H	sek-Bu	H
6—OCH,Ph	H	4-F	H	i-Pr	H
H	H	4-F	H	i-Bu	H
H	H	4-F	H	c-Pent	H
6—Cl	H	4-F	H	c-Pent	H
6-Me2N	H	4-F	H	i-Pr	H
6-Me	H	4-F	H	c-Pr	H
6-i-Pr	H	4-F	H	i-Pr	H
7-Me	H	4-F	H	c-Pr	H

-14CZ 281786 B6

Tabulka 2 - pokračování

R4a	R5a	R1	R2	R3	R6a
6-OMe	H	4-F	H	c-Pr	H
6-Br	H	4-F	H	c-Pr	H
6-i-Pr	H	4-F	H	c-Pr	H
6-C1	8-C1	4-F	H	c-Pr	H
5-F	6-Br	4-F	H	i-Pr	8-Br
6-OMe	7-OMe	4-F	H	i-Pr	8-OMe
6-Me	7-Me	4-F	H	i-Pr	8-Me
6-C1	7-C1	4-F	H	i-Pr	8-C1
H	H	4-F	H	c-Bu	H
H	H	4-F	H	c-Hex	H
6-OMe	7-OMe	H	H	i-Pr	H
6-OMe	7-OMe	4-C1	H	i-Pr	H
6-OMe	7-OMe	H	H	c-Pr	H
6-OMe	7-OMe	4-C1	H	c-Pr	H
6-OMe	7-OMe	4-F	H	c-Pr	H
6-Me	H	H	H	i-Pr	H
6-Me	H	4-C1	H	i-Pr	H
6-Me	H	H	H	c-Pr	H
6-Me	H	4-C1	H	c-Pr	H
6-Me	H	4-F	H	c-Pr	H
6-C1	H	H	H	i-Pr	H
6-C1	H	4-C1	H	i-Pr	H
6-C1	H	H	H	c-Pr	H
6-C1	H	4-Cl	H	c-Pr	H
6-C1	H	4-F	H	c-Pr	H
H	H	H	H	i-Pr	H
H	H	4-C1	H	i-Pr	H
H	H	H	H	c-Pr	H
H	H	4-C1	H	c-Pr	H
H	H	4-F	H	c-Pr	H
H	H	4-Me	H	c-Pr	H
H	H	4-n-Pent	H	c-Pr	H
H	H	4-c-Pr	H	c-Pr	H
H	H	4-c-Hex	H	c-Pr	H
H	H	4-MeO	H	c-Pr	H
H	H	4-n-BuO	H	c-Pr	H
H	H	4-NMe	H	c-Pr	H
H	H	4-NHEt	H	c-Pr	H
H	H	4-CF3	H	c-Pr	H
H	H	4-CF3O	H	c-Pr	H
H	H	4-C1	H	c-Pr	H
H	H	4-Br	H	c-Pr	H
H	H	4-PhO	H	c-Pr	H
H	H	4-PhCH,0	H	c-Pr	H
H	H	4-OH	H	c-Pr	H
H	H	4-OCH2OH2OH	H	c-Pr	H
H	H	3,4-CH=CH-CH=CH-	H	c-Pr	H
H	H	3,4-OCH,O-	H	c-Pr	H
H	H	H Z	H	c-Pr	H
H	H	H	H	H	H

-15CZ 281786 B6

Tabulka 2 - pokračováni

R4a	R5a	R1	R2	R3	R6a
H	H	H	H	n-Pr	H
H	H	H	H	n-Pent	H
H	H	H	H	-ch=ch2	H
H	H	H	H	-ch=chch3	H
H	H	H	H	3-c-Pentenyl	H
H	H	H	H	Ph	H
H	H	H	H	4-Me-Ph	H
H	H	H	H	4-MeO-Ph	H
H	H	H	H	4-MeS-Ph	H
H	H	H	H	4-Cl-Ph	H
H	H	H	H	4-CF3-Ph	H
H	H	H	H	4-PhO-Ph	H
H	H	H	,H	4-OH-Ph	H
H	H	H	H	4-CH20H-Ph	H
H	H	H	H	PhCH2-	H
H	H	H	H	PhCH(Me)	H
6-n-Pent	H	4-F	H	c-Pr	H
6-c-Pr	H	4-F	H	c-Pr	H
6-n-BuO	H	4-F	H	c-Pr	H
6-CF-.	H	4-F	H	c-Pr	H
6-F	H	4-F	H	c-Pr	H
6-Ph	H	4-F	H	c-Pr	H
6-OH	H	4-F	H	c-Pr	H
6-HOCH2	H	4-F	H	c-Pr	H
6-MeOCH2	H	4-F	H	c-Pr	H
6,7-OCH2O-	H	4-F	H	c-Pr	H

-16CZ 281786 B6

Tabulka 3

R4b	R5b	R1	R2	R3
H	2-Ph	4-F	H	i-Pr
H	1-Me	4-F	H	i-Pr
H	2-Me	4-F	H	i-Pr
H	1-i-Pr	4-F	H	i-Pr
H	1-terc-Bu	4-F	H	i-Pr
H	l-(4-Cl-Ph)	4-F	H	i-Pr
H	l-(4-Me-Ph)	4-F	H	i-Pr
H	l-(4-MeO-Ph)	4-F	H	i-Pr
H	l-(4-F-Ph)	4-F	H	i-Pr
H	l-CH,Ph	4-F	H	i-Pr
Me	2-Me	4-F	H	i-Pr
Me	1-Et	4-F	H	i-Pr
Me	1-i-Pr	4-F	H	i-Pr
Me	l-(4-Cl-Ph)	4-F	H	i-Pr
Me	l-(4-Me-Ph)	4-F	H	i-Pr
Me	l-(4-F-Ph)	4-F	H	i-Pr
Me	l-(2'-pyridyl)	4-F	H	i-Pr
Et	1-Me	4-F	H	i-Pr
Et	1-Et	4-F	H	i-Pr
Et	1-i-Pr	4-F	H	i-Pr
Et	1-Ph	4-F	H	i-Pr
c-Pr	1-Et	4-F	H	i-Pr
c-Pr	1-i-Pr	4-F	H	i-Pr
c-Pr	1-terc-Bu	4-F	H	i-Pr
i-Pr	1-Me	4-F	H	i-Pr
i-Pr	2-Me	4-F	H	i-Pr
i-Pr	1-Et	4-F	H	i-Pr
i-Pr	1-i-Pr	4-F	H	i-Pr
i-Pr	1-terc-Bu	4-F	H	i-Pr
i-Pr	2-Ph	4-F	H	i-Pr
i-Pr	1-Ph	4-F	H	i-Pr
terc-Bu	1-Me	4-F	H	i-Pr
terc-Bu	2-Me	4-F	H	i-Pr
terc-Bu	1-Et	4-F	H	i-Pr
terc-Bu	1-i-Pr	4-F	H	i-Pr
terc-Bu	1-terc-Bu	4-F	H	i-Pr
terc-Bu	1-Ph	4-F	H	i-Pr
Ph	1-Et	4-F	H	i-Pr
Ph	1-i-Pr	4-F	H	i-Pr

-17CZ 281786 B6

Tabulka 3 - pokračování

R4b	R5b	R1	R2	R3
Ph	1-terc-Bu	4-F	H	i-Pr
Ph	1-Ph	4-F	H	i-Pr
4-Cl-Ph	1-Et	4-F	H	i-Pr
4-Cl-Ph	1-Ph	4-F	H	i-Pr
4-Me-Ph	1-Me	4-F	H	i-Pr
4-MeO-Ph	1-Me	4-F	H	i-Pr
H	1-Ph	4-C1	H	i-Pr
H	1-Me	4-C1	H	i-Pr
H	1-Et	4-C1	H	i-Pr
H	1-i-Pr	4-C1	H	i-Pr
H	1-terc-Bu	4-C1	H	i-Pr
H	1-Ph	4-C1	H	i-Pr
H	l-(4-Cl-Ph)	4-C1	H	i-Pr
H	l-(4-Me-Ph)	4-C1	H	i-Pr
H	l-(4-MeO-Ph)	4-C1	H	i-Pr
H	l-(4-F-Ph)	4-C1	H	i-Pr
H	l-CH,Ph	4-C1	H	i-Pr
Me	1-Me	4-C1	H	i-Pr
Me	1-Et	4-C1	H	i-Pr
Me	1-i-Pr	4-C1	H	i-Pr
Me	l-(4-Cl-Ph)	4-C1	H	i-Pr
Me	l-(4-Me-Ph)	4-C1	H	i-Pr
Me	1—(4-MeO-Ph)	4-C1	H	i-Pr
Me	l-(4-F-Ph)	4-C1	H	i-Pr
Me	1-terc-Bu	4-C1	H	i-Pr
Me	1-Ph	4-C1	H	i-Pr
Me	l-CH2Ph	4-C1	H	i-Pr
Me	l-(2’-pyridyl)	4-C1	H	i-Pr
Et	1-Me	4-C1	H	i-Pr
Et	1-Et	4-C1	H	i-Pr
Et	1-i-Pr	4-C1	H	i-Pr
Et	1-Ph	4-C1	H	i-Pr
c-Pr	1-Me	4-C1	H	i-Pr
c-Pr	1-Et	4-C1	H	i-Pr
c-Pr	1-i-Pr	4-C1	H	i-Pr
c-Pr	1-terc-Bu	4-C1	H	i-Pr
i-Pr	1-Me	4-C1	H	i-Pr
i-Pr	1-Et	4-C1	H	i-Pr
i-Pr	1-i-Pr	4-C1	H	i-Pr
i-Pr	1-terc-Bu	4-C1	H	i-Pr
i-Pr	1-Ph	4-C1	H	i-Pr
terc-Bu	1-Me	4-C1	H	i-Pr
terc-Bu	1-Et	4-C1	H	i-Pr
terc-Bu	1-i-Pr	4-C1	H	i-Pr
terc-Bu	1-terc-Bu	4-C1	H	i-Pr
terc-Bu	1-Ph	4-C1	H	i-Pr
Ph	1-Et	4-C1	H	i-Pr
Ph	1-i-Pr	4-C1	H	i-Pr
Ph	1-terc-Bu	4-C1	H	i-Pr
Ph	1-Ph	4-C1	H	i-Pr
4-Cl-Ph	1-Me	4-C1	H	i-Pr

-18CZ 281786 B6

Tabulka 3 - pokračování

R4b	R5b	R1	R2	R3
4-Cl-Ph	1-Et	4-C1	H	i-Pr
4-Cl-Ph	1-Ph	4-Cl	H	i-Pr
4-Me-Ph	1-Me	4-C1	H	i-Pr
4-MeO-Ph	1-Me	4-C1	H	i-Pr
H	1-Ph	H	H	i-Pr
H	1-Me	H	H	i-Pr
H	1-Et	H	H	i-Pr
H	1-i-Pr	H	H	i-Pr
H	1-terc-Bu	H	H	i-Pr
H	l-(4-Cl-Ph)	H	H	i-Pr
H	l-(4-Me-Ph)	H	H	i-Pr
H	1—(4-MeO-Ph)	H	H	i-Pr
H	l-(4-F-Ph)	H	H	i-Pr
H	1-CHnPh	H	H	i-Pr
Me	1-Me	H	H	i-Pr
Me	1-Et	H	H	i-Pr
Me	1-i-Pr	H	H	i-Pr
Me	l-(4-Cl-Ph)	H	H	i-Pr
Me	l-(4-Me-Ph)	H	H	i-Pr
Me	l-(4-MeO-Ph)	H	H	i-Pr
Me	l-(4-F-Ph)	H	H	i-Pr
Me	1-terc-Bu	H	H	i-Pr
Me	1-Ph	H	H	i-Pr
Me	l-CH2Ph	H	H	i-Pr
Me	l-(2’-pyridyl)	H	H	i-Pr
Et	1-Me	H	H	i-Pr
Et	1-Et	H	H	i-Pr
Et	1-i-Pr	H	H	i-Pr
Et	1-Ph	H	H	i-Pr
c-Pr	1-Me	H	H	i-Pr
c-Pr	1-Et	H	H	i-Pr
c-Pr	1-i-Pr	H	H	i-Pr
c-Pr	1-terc-Bu	H	H	i-Pr
i-Pr	1-Me	H	H	i-Pr
i-Pr	1-Et	H	H	i-Pr
i-Pr	1-i-Pr	H	H	i-Pr
i-Pr	1-terc-Bu	H	H	i-Pr
i-Pr	1-Ph	H	H	i-Pr
terc-Bu	1-Me	H	H	i-Pr
terc-Bu	1-Et	H	H	i-Pr
terc-Bu	1-i-Pr	H	H	i-Pr
terc-Bu	1-terc-Bu	H	H	i-Pr
terc-Bu	1-Ph	H	H	i-Pr
Ph	1-Et	H	H	i-Pr
Ph	1-i-Pr	H	H	i-Pr
Ph	1-terc-Bu	H	H	i-Pr
Ph	1-Ph	H	H	i-Pr
4-Cl-Ph	1-Me	H	H	i-Pr
4-Cl-Ph	1-Et	H	H	i-Pr
4-Cl-Ph	1-Ph	H	H	i-Pr
4-Me-Ph	1-Me	H	H	i-Pr

-19CZ 281786 B6

Tabulka 3 - pokračování

R4b	R5b	R1	R2	R3
4-MeO-Ph	1-Me	H	H	i-Pr
H	1-Ph	4-F	H	c-Pr
H	2-Ph	4-F	H	c-Pr
H	1-Me	4-F	H	c-Pr
H	2-Me	4-F	H	c-Pr
H	1-Et	4-F	H	c-Pr
H	1-i-Pr	4-F	H	c-Pr
H	1-terc-Bu-	4-F	H	c-Pr
H	l-(4-Cl-Ph)	4-F	H	c-Pr
H	l-(4-Me-Ph)	4-F	H	c-Pr
H	l-(4-MeO-Ph)	4-F	H	c-Pr
H	l-(4-F-Ph)	4-F	H	c-Pr
H	l-CH0Ph	4-F	H	c-Pr
Me	2-Me	4-F	H	c-Pr
Me	1-Et	4-F	H	c-Pr
Me	1-i-Pr	4-F	H	c-Pr
Me	l-(4-Cl-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me	l-(4-Me-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me	l-(4-MeO-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me	l-(4-F-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me	1-Ph	4-F	H	c-Pr
Me	2-Ph	4-F	H	c-Pr
Me	l-CH2Ph	4-F	H	c-Pr
Me	l-(2'-pyridyl)	4-F	H	c-Pr
Et	1-Me	4-F	H	c-Pr
Et	1-Et	4-F	H	c-Pr
Et	1-i-Pr	4-F	H	c-Pr
Et	1-Ph	4-F	H	c-Pr
c-Pr	1-Me	4-F	H	c-Pr
c-Pr	1-Et	4-F	H	c-Pr
c-Pr	1-i-Pr	4-F	H	c-Pr
c-Pr	1-Ph	4-F	H	c-Pr
i-Pr	1-Me	4-F	H	c-Pr
i-Pr	2-Me	4-F	H	c-Pr
i-Pr	1-Et	4-F	H	c-Pr
i-Pr	1-i-Pr	4-F	H	c-Pr
i-Pr	1-terc-Bu	4-F	H	c-Pr
i-Pr	2-Ph	4-F	H	c-Pr
i-Pr	1-Ph	4-F	H	c-Pr
terc-Bu	1-Me	4-F	H	c-Pr
terc-Bu	2-Me	4-F	H	c-Pr
terc-Bu	1-Et	4-F	H	c-Pr
terc-Bu	1-i-Pr	4-F	H	c-Pr
terc-Bu	1-terc-Bu	4-F	H	c-Pr
terc-Bu	1-Ph	4-F	H	c-Pr
Ph	1-Et	4-F	H	c-Pr
Ph	1-i-Pr	4-F	H	c-Pr
Ph	1-Ph	4-F	H	c-Pr
4-Cl-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-Cl-Ph	1-Et	4-F	H	c-Pr
4-Cl-Ph	1-Ph	4-F	H	c-Pr

-20CZ 281786 B6

Tabulka 3 - pokračování

R4b	R5b	R1	R2	R3
4-Me-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-MeO-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
H	1-Ph	4-C1	H	c-Pr
H	1-Me	4-C1	H	c-Pr
H	1-Et	4-C1	H	c-Pr
H	1-i-Pr	4-C1	H	c-Pr
H	1-terc-Bu	4-C1	H	c-Pr
H	1-Ph	4-C1	H	c-Pr
H	l-(4-Cl-Ph)	4-C1	H	c-Pr
H	l-(4-Me-Ph)	4-C1	H	c-Pr
H	l-(4-MeO-Ph)	4-C1	H	c-Pr
H	l-(4-F-Ph)	4-C1	H	c-Pr
H	1-CH,Ph	4-C1	H	c-Pr
Me	1-Me	4-C1	H	c-Pr
Me	1-Et	4-C1	H	c-Pr
Me	1-i-Pr	4-C1	H	c-Pr
Me	l-(4-Cl-Ph)	4-C1	H	c-Pr
Me	l-(4-Me-Ph)	4-C1	H	c-Pr
Me	l-(4-MeO-Ph)	4-C1	H	c-Pr
Me	l-(4-F-Ph)	4-C1	H	c-Pr
Me	1-terc-Bu	4-C1	H	c-Pr
Me	1-Ph	4-C1	H	c-Pr
Me	l-CH2Ph	4-C1	H	c-Pr
Me	l-(2'-pyridyl)	4-C1	H	c-Pr
Et	1-Me	4-C1	H	c-Pr
Et	1-Et	4-C1	H	c-Pr
Et	1-i-Pr	4-C1	H	c-Pr
Et	1-Ph	4-C1	H	c-Pr
c-Pr	1-Me	4-C1	H	c-Pr
c-Pr	1-Et	4-C1	H	c-Pr
c-Pr	1-i-Pr	4-C1	H	c-Pr
c-Pr	1-terc-Bu	4-C1	H	c-Pr
i-Pr	1-Me	4-C1	H	c-Pr
i-Pr	1-Et	4-C1	H	c-Pr
i-Pr	1-i-Pr	4-C1	H	c-Pr
i-Pr	1-terc-Bu	4-C1	H	c-Pr
i-Pr	1-Ph	4-C1	H	c-Pr
terc-Bu	1-Me	4-C1	H	c-Pr
terc-Bu	1-Et	4-C1	H	c-Pr
terc-Bu	1-i-Pr	4-C1	H	c-Pr
terc-Bu	1-terc-Bu	4-C1	H	c-Pr
terc-Bu	1-Ph	4-C1	H	c-Pr
Ph	1-Et	4-C1	H	c-Pr
Ph	1-i-Pr	4-C1	H	c-Pr
Ph	1-terc-Bu	4-C1	H	c-Pr
Ph	1-Ph	4-C1	H	c-Pr
4-Cl-Ph	1-Me	4-Cl	H	c-Pr
4-Cl-Ph	1-Et	4-C1	H	c-Pr
4-Cl-Ph	1-Ph	4-C1	H	c-Pr
4-Me-Ph	1-Me	4-C1	H	c-Pr
4-MeO-Ph	1-Me	4-C1	H	c-Pr
H	1-Ph	H	H	c-Pr

-21CZ 281786 B6

Tabulka 3 - pokračování

R4b	RSb	R1	R2	R3
H	1-Me	H	H	c-Pr
H	1-Et	H	H	c-Pr
H	1-i-Pr	H	H	c-Pr
H	1-terc-Bu	H	H	c-Pr
H	l-(4-Cl-Ph)	H	H	c-Pr
H	l-(4-Me-Ph)	H	H	c-Pr
H	l-(4-MeO-Ph)	H	H	c-Pr
H	l-(4-F-Ph)	H	H	c-Pr
H	l-CH,Ph	H	H	c-Pr
Me	1-Me	H	H	c-Pr
Me	1-Et	H	H	c-Pr
Me	1-i-Pr	H	H	c-Pr
Me	l-(4-Cl-Ph)	H	H	c-Pr
Me	l-(4-Me-Ph)	H	H	c-Pr
Me	l-(4-MeO-Ph)	H	H	c-Pr
Me	l-(4-F-Ph)	H	H	c-Pr
Me	1-terc-Bu	H	H	c-Pr
Me	1-Ph	H	H	c-Pr
Me	l-CH2Ph	H	H	c-Pr
Me	l-(2'-pyridyl)	H	H	c-Pr
Et	1-Me	H	H	c-Pr
Et	1-Et	H	H	c-Pr
Et	1-i-Pr	H	H	c-Pr
Et	1-Ph	H	H	c-Pr
c-Pr	1-Me	H	H	c-Pr
c-Pr	1-Et	H	H	c-Pr
c-Pr	1-i-Pr	H	H	c-Pr
c-Pr	1-terc-Bu	H	H	c-Pr
i-Pr	1-Me	H	H	c-Pr
i-Pr	1-Et	H	H	c-Pr
i-Pr	1-i-Pr	H	H	c-Pr
i-Pr	1-terc-Bu	H	H	c-Pr
i-Pr	1-Ph	H	H	c-Pr
terc-Bu	1-Me	H	H	c-Pr
terc-Bu	1-Et	H	H	c-Pr
terc-Bu	1-i-Pr	H	H	c-Pr
terc-Bu	1-terc-Bu	H	H	c-Pr
terc-Bu	1-Ph	H	H	c-Pr
Ph	1-Et	H	H	c-Pr
Ph	1-i-Pr	H	H	c-Pr
Ph	1-terc-Bu	H	H	c-Pr
Ph	1-Ph	H	H	c-Pr
4-Cl-Ph	1-Me	H	H	c-Pr
4-Cl-Ph	1-Et	H	H	c-Pr
4-Cl-Ph	1-Ph	H	H	c-Pr
4-Me-Ph	1-Me	H	H	c-Pr
4-MeO-Ph	1-Me	H	H	c-Pr
n-okt	1-Me	4-F	H	c-Pr
MeO	1-Me	4-F	H	c-Pr
n-BuO	1-Me	4-F	H	c-Pr
c-Hex	1-Me	4-F	H	c-Pr

-22CZ 281786 B6

Tabulka 3 - pokračování

R4b R5b		R1	R2	R3
-CH=CH2 1-Me		4-F	H	c-Pr
-CH=CHCH3 1-Me		4-F	H	c-Pr
α-naftyl 1-Me		4-F	H	c-Pr
β-naftyl 1-Me		4-F	H	c-Pr
3-pyridyl 1-Me		4-F	H	c-Pr
2-thienyl 1-Me		4-F	H	c-Pr
2-furyl 1-Me		4-F	H	c-Pr
F 1-Me		4-F	H	c-Pr
Cl 1-Me		4-F	H	c-Pr
Br	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-n-Hex-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-n-BuO-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-MeS-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-Me2N-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-ClCH2-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-CF3O-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-PhO-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-OH-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-HOCH2-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
3,4-OCH2O-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-Ph-Ph	1-Me	4-F	H	c-Pr
Ph-CH=CH-	1-Me	4-F	H	c-Pr
PhCH2-	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-Me-PhCH2-	1-Me	4-F	H	c-Pr
4-Cl-PhCH2	1-Me	4-F	H	c-Pr
PhCH(Me)-	1-Me	4-F	• H	c-Pr
MeOCH2-	1-Me	4-F	H	c-Pr
MeOCH9CH9-	1-Me	4-F	H	c-Pr
Me	1-H	4-F	H	c-Pr
Me	1-n-Hex	4-F	H	c-Pr
Me	i-cf3	4-F	H	c-Pr
Me	1-c-Pr	4-F	H	c-Pr
Me	1-c-Hex	4-F	H	c-Pr
Me	1-a-naftyl	4-F	H	c-Pr
Me	Ι-β-naftyl	4-F	H	c-Pr
Me l-(3*	-pyridyl)	4-F	H	c-Pr
Me l-(2’	-pyridyl)	4-F	H	c-Pr
Me l-(2'	-thienyl)	4-F	H	c-Pr
Me 1-(21	-furyl)	4-F	H	c-Pr
Me 1-(4-	MeS-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me l-(4-	Me2N-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me l-(4-	C1CH2-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me l-(4-	CF3O-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me l-(4-	PhO-Ph)	4-F	H	c-Pr

-23CZ 281786 B6

Tabulka 3	- pokračování
R4b	R5b	R1	R2	R3
Me	l-(4-OH-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me	1-(4-HOCH2-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me	l-(3,4-OCH2O-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me	l-(4-Ph-Ph)	4-F	H	c-Pr
Me	l-(4-Me-PHCH2)	4-F	H	c-Pr
Me	1-(4-Cl-PhCH2)	4-F	H	c-Pr
Me	l-PhCH(Me)	4-F	H	c-Pr
Me	l-MeOCH2-	4-F	H	c-Pr
Me	l-MeOCH2CH2-	4-F	H	c-Pr

Tabulka 4

[lc]

r4C	R5c	R1	R2	R3
H	H	H	H	i-Pr
H	H	4-F	H	i-Pr
H	H	4-C1	H	i-Pr
H	H	3-Me	4-F	i-Pr
H	H	H	H	c-Pr
H	H	4-F	H	c-Pr
H	H	4-C1	H	c-Pr
H	H	3-Me	4-F	c-Pr
Me	H	H	H	i-Pr
Me	H	4-F	H	i-Pr
Me	H	4-C1	H	i-Pr
Me	H	3-Me	4-F	i-Pr
Me	H	H	H	c-Pr
Me	H	4-F	H	c-Pr
Me	H	4-C1	H	c-Pr
Me	H	3-Me	- 4-F	c-Pr
Et	H	H	H	i-Pr
Et	H	4-F	H	i-Pr
Et	H	4-C1	H	i-Pr
Et	H	3-Me	4-F	i-Pr
Et	H	H	H	c-Pr

-24CZ 281786 B6

Tabulka 4 - pokračování

R4c	r5c	R1	R2	R3
Et	H	4-F	H	c-Pr
Et	H	4-C1	H	c-Pr
Et	H	3-Me	4-F	c-Pr
Et	Me	H	H	i-Pr
Et	Me	4-F	H	i-Pr
Et	Me	4-C1	H	i-Pr
Et	Me	3-Me	4-F	i-Pr
Et	Me	H	H	c-Pr
Et	Me	4-F	H	c-Pr
Et	Me	4-C1	H	c-Pr
Et	Me	3-Me	4-F	c-Pr
n-Pr	H	H	H	i-Pr
n-Pr	H	4-F	H	i-Pr
n-Pr	H	4-C1	H	i-Pr
n-Pr	H	3-Me	4-F	i-Pr
n-Pr	H	H	H	c-Pr
n-Pr	H	4-F	H	c-Pr
n-Pr	H	4-C1	H	c-Pr
n-Pr	H	3-Me	4-F	c-Pr
i-Pr	H	H	H	i-Pr
i-Pr	H	4-F	H	i-Pr
i-Pr	H	4-C1	H	i-Pr
i-Pr	H	3-Me	4-F	i-Pr
i-Pr	H	H	H	c-Pr
i-Pr	H	4-F	H	c-Pr
i-Pr	H	4-C1	H	c-Pr
i-Pr	H	3-Me	4-F	c-Pr
n-Bu	H	H	H	i-Pr
n-Bu	H	4-F	H	i-Pr
n-Bu	H	4-C1	H	i-Pr
n-Bu	H	3-Me	4-F	i-Pr
n-Bu	H	H	H	c-Pr
n-Bu	H	4-F	H	c-Pr
n-Bu	H	4-C1	H	c-Pr
n-Bu	H	3-Me	4-F	c-Pr
i-Bu	H	H	H	i-Pr
i-Bu	H	4-F	H	i-Pr
i-Bu	H	4-C1	H	i-Pr
i-Bu	H	3-Me	4-F	i-Pr
i-Bu	H	H	H	c-Pr
i-Bu	H	4-F	H	c-Pr
i-Bu	H	4-C1	H	c-Pr
i-Bu	H	3-Me	4-F	c-Pr
c-Pent-Me	H	H	H	i-Pr
c-Pent-Me	H	4-F	H	i-Pr
c-Pent-Me	H	4-C1	H	i-Pr
c-Pent-Me	H	3-Me	4-F	i-Pr
c-Pent-Me	H	H	H	c-Pr
c-Pent-Me	H	4-F	H	c-Pr
c-Pent-Me	H	4-C1	H	c-Pr
c-Pent-Me	H	3-Me	4-F	c-Pr
c-Pr	H	H	H	i-Pr
c-Pr	H	4-F	H	i-Pr

-25CZ 281786 B6

Tabulka 4	- pokračování
R4c	R5c	R1	R2	R3
c-Pr	H	4-C1	H	c-Pr
c-Pr	H	4-C1	H	i-Pr
c-Pr	H	3-Me	4-F	i-Pr
c-Pr	H	H	H	c-Pr
c-Pr	H	4-F	H	c-Pr
c-Pr	H	3-Me	4-F	c-Pr
H	Ph	H	H	i-Pr
H	Ph	4-F	H	i-Pr
H	Ph	4-C1	H	i-Pr
H	Ph	3-Me	4-F	i-Pr
H	Ph	H	H	c-Pr
H	Ph	4-F	H	c-Pr
H	Ph	4-C1	H	c-Pr
H	Ph	3-Me	4-F	c-Pr
Ph	Me	H	H	i-Pr
Ph	Me	4-F	H	i-Pr
Ph	Me	4-C1	H	i-Pr
Ph	Me	3-Me	4-F	i-Pr
Ph	Me	H	H	c-Pr
Ph	Me	4-F	H	c-Pr
Ph	Me	4-C1	H	c-Pr
Ph	Me	3-Me	4-F	c-Pr
H	Me	H	H	i-Pr
H	Me	4-F	H	i-Pr
H	Me	4-C1	H	i-Pr
H	Me	3-Me	4-F	i-Pr
H	Me	H	H	c-Pr
H	Me	4-F	H	c-Pr
H	Me	4-C1	H	c-Pr
H	Me	3-Me	4-F	c-Pr
H	i-Pr	H	H	i-Pr
H	i-Pr	4-F	H	i-Pr
H	i-Pr	4-C1	H	i-Pr
H	i-Pr	3-Me	4-F	i-Pr
H	i-Pr	H	H	c-Pr
H	i-Pr	4-F	H	c-Pr
H	i-Pr	4-C1	H	c-Pr
H	i-Pr	3-Me	4-F	c-Pr
H	Et	H	H	i-Pr
H	Et	4-F	H	i-Pr
H	Et	4-C1	H	i-Pr
H	Et	3-Me	4-F	i-Pr
H	Et	H	H	c-Pr
H	Et	4-F	H	c-Pr
H	Et	4-C1	H	c-Pr
H	Et	3-Me	4-F	c-Pr
H	n-Pr	H	H	i-Pr
H	n-Pr	4-F	H	i-Pr
H	n-Pr	4-CI	H	i-Pr
H	n-Pr	3-Me	4-F	i-Pr
H	n-Pr	H	H	c-Pr
H	n-Pr	4-F	H	c-Pr

-26CZ 281786 B6

Tabulka 4 - pokračování

r4c	r5c	R1	R2	R3
H	n-Pr	4-C1	H	c-Pr
H	n-Pr	3-Me	4-F	c-Pr
H	n-Bu	H	H	i-Pr
H	n-Bu	4-F	H	i-Pr
H	n-Bu	4-C1	H	i-Pr
H	n-Bu	3-Me	4-F	i-Pr
H	n-Bu	H	H	c-Pr
H	n-Bu	4-F	H	c-Pr
H	n-Bu	4-C1	H	c-Pr
H	n-Bu	3-Me	4-F	c-Pr
Me	Me	H	H	i-Pr
Me	Me	4-F	H	i-Pr
Me	Me	4-C1	H	i-Pr
Me	Me	3-Me	4-F	i-Pr
Me	Me	H	H	c-Pr
Me	Me	4-F	H	c-Pr
Me	Me	4-C1	H	c-Pr
Me	Me	3-Me	4-F	c-Pr
c-Pent-Me	Me	H	H	i-Pr
c-Pent-Me	Me	4-F	H	i-Pr
c-Pent-Me	Me	4-C1	H	i-Pr
c-Pent-Me	Me	3-Me	4-F	i-Pr
c-Pent-Me	Me	H	H	c-Pr
c-Pent-Me	Me	4-F	H	c-Pr
c-Pent-Me	Me	4-C1	H	c-Pr
c-Pent-Me	Me	3-Me	4-F	c-Pr
n-Pr	Et	H	H	i-Pr
n-Pr	Et	4-F	H	i-Pr
n-Pr	Et	4-C1	H	i-Pr
n-Pr	Et	3-Me	4-F	i-Pr
n-Pr	Et	H	H	c-Pr
n-Pr	Et	4-F	H	c-Pr
n-Pr	Et	4-C1	H	c-Pr
n-Pr	Et	3-Me	4-F	c-Pr
n-Bu	n-Pr	H	H	i-Pr
n-Bu	n-Pr	4-F	H	i-Pr
n-Bu	n-Pr	4-C1	H	i-Pr
n-Bu	n-Pr	3-Me	4-F	i-Pr
n-Bu	n-Pr	H	H	c-Pr
n-Bu	n-Pr	4-F	H	c-Pr
n-Bu	n-Pr	‘ 4-C1	H	c-Pr
n-Bu	n-Pr	3-Me	4-F	c-Pr
Cl	Me	H	H	i-Pr
Cl	Me	4-F	H	i-Pr
Cl	Me	4-C1	H	i-Pr
Cl	Me	3-Me	4-F	i-Pr
Cl	Me	H	H	c-Pr
Cl	Me	4-F	H	c-Pr
Cl	Me	4-C1	H	c-Pr
Cl	Me	3-Me	4-F	c-Pr
Cl	i-Pr	H	H	i-Pr
Cl	i-Pr	4-F	H	i-Pr
Cl	i-Pr	4-C1	H	i-Pr

-27CZ 281786 B6

Tabulka 4 - pokračování

R4c	R5c	R1	R2	R3
Cl	i-Pr	3-Me	4-F	i-Pr
Cl	i-Pr	H	H	c-Pr
Cl	i-Pr	4-F	H	c-Pr
Cl	i-Pr	4-C1	H	c-Pr
Cl	i-Pr	3-Me	4-F	c-Pr
MeO	Me	H	H	i-Pr
MeO	Me	4-F	H	i-Pr
MeO	Me	4-C1	H	i-Pr
MeO	Me	3-Me	4-F	i-Pr
MeO	Me	H	H	c-Pr
MeO	Me	4-F	H	c-Pr
MeO	Me	4-C1	H	c-Pr
MeO	Me	3-Me	4-F	c-Pr
MeO	i-Pr	H	H	i-Pr
MeO	i-Pr	4-F	H	i-Pr
MeO	i-Pr	4-C1	H	i-Pr
MeO	i-Pr	3-Me	4-F	i-Pr
MeO	i-Pr	H	H	c-Pr
MeO	i-Pr	4-F	H	c-Pr
MeO	i-Pr	4-C1	H	c-Pr
MeO	i-Pr	3-Me	4-F	c-Pr
Me2N	Me	H	H	i-Pr
Me2N	Me	4-F	H	i-Pr
Me2N	Me	4-C1	H	i-Pr
Me2N	Me	3-Me	4-F	i-Pr
Me2N	Me	H	H	c-Pr
Me2N	Me	4-F	H	c-Pr
Me2N	Me	4-C1	H	c-Pr
Me2N	Me	3-Me	4-F	c-Pr
Cl	Cl	H	H	i-Pr
Cl	Cl	4-F	H	i-Pr
Cl	Cl	4-C1	H	i-Pr
Cl	Cl	3-Me	4-F	i-Pr
Cl	Cl	H	H	c-Pr
Cl	Cl	4-F	H	c-Pr
Cl	Cl	4-C1	H	c-Pr
Cl	Cl	3-Me	4-F	c-Pr
H	Br	H	H	i-Pr
H	Br	4-F	H	i-Pr
H	Br	4-C1	H	i-Pr
H	Br	3-Me	4-F	i-Pr
H	Br	H	H	c-Pr
H	Br	4-F	H	c-Pr
H	Br	4-C1	H	c-Pr
H	Br	3-Me	4-F	c-Pr
H	Hex	H	H	i-Pr
H	Hex	4-F	H	i-Pr
H	Hex	4-C1	H	i-Pr

-28CZ 281786 B6

Tabulka 4 - pokračování
R4c	r5c	R1	R2	R3
H	Hex	3-Me	4-F	i-Pr
H	Hex	H	H	c-Pr
H	Hex	4-F	H	c-Pr
H	Hex	4-C1	H	c-Pr
H	Hex	3-Me	4-F	c-Pr
H	-ch=ch2	H	H	i-Pr
H	-ch=ch2	4-F	H	i-Pr
H	-ch=ch2	4-C1	H	i-Pr
H	-ch=ch2	3-Me	4-F	i-Pr
H	-ch=ch2	H	H	c-Pr
H	-ch=ch2	4-F	H	c-Pr
H	-ch=ch2	4-C1	H	c-Pr
H	-CH=CH,	3-Me	4-F	c-Pr
PhCH2	Ph	H	H	i-Pr
PhCH2	Ph	4-F	H	i-Pr
PhCH2	Ph	4-C1	H	i-Pr
PhCH2	Ph	3-Me	4-F	i-Pr
PhCH2	Ph	H	H	c-Pr
PhCH2	Ph	4-F	H	c-Pr
PhCH2	Ph	4-C1	H	c-Pr
PhCH2	Ph	3-Me	4-F	c-Pr
2-naftyl	Me	H	H	i-Pr
2-naftyl	Me	4-F	H	i-Pr
2-naftyl	Me	4-C1	H	i-Pr
2-naftyl	Me	3-Me	4-F	i-Pr
2-naftyl	Me	H	H	c-Pr
2-naftyl	Me	4-F	H	c-Pr
2-naftyl	Me	4-C1	H	c-Pr
2-naftyl	Me	3-Me	. 4-F	c-Pr
3-Pyridyl	Me	H	H	i-Pr
3-Pyridyl	Me	4-F	H	i-Pr
3-Pyridyl	Me	4-C1	H	i-Pr
3-Pyridyl	Me	3-Me	4-F	i-Pr
3-Pyridyl	Me	H	H	c-Pr
3-Pyridyl	Me	4-F	H	c-Pr
3-Pyridyl	Me	4-C1	H	c-Pr
3-Pyridyl	Me	3-Me	4-F	c-Pr
H	H	H	H	H
H	H	4-F	H	H
H	H	4-C1	H	H
H	H	3-Me	4-F	H
H	H	H	H	Me
H	H	4-F	H	Me
H	H	4-C1	H	Me

-29CZ 281786 B6

Tabulka 4 - pokračování

r4c	R5c	R1	R2	R3
H	H	3-Me	4-F	Me
H	H	H	H	Et
H	H	4-F	H	Et
H	H	4-C1	H	Et
H	H	3-Me	4-F	Et
H	H	H	H	n-Pr
H	H	4-F	H	n-Pr
H	H	4-C1	H	n-Pr
H	H	3-Me	4-F	n-Pr
H	H	H	H	n-Hex
H	H	4-F	H	n-Hex
H	H	4-C1	H	n-Hex
H	H	3-Me	4-F	n-Hex
H	H	H	H	-c(ch3)=ch2
H	H	4-F	H	-c(ch3)=ch2
H	H	4-C1	H	-c(ch3)=ch2
H	H	3-Me	4-F	-C(CH-,)=CH9
H	H	H	H	c-Hex
H	H	4-F	H	c-Hex
-ch=ch-ch3	Me	4-F	H	c-Pr
c-Hex	Me	4-F	H	c-Pr
n-BuO	Me	4-F	H	c-Pr
4-MeO-Ph	Me	4-F	H	c-Pr
4-Cl-Ph	Me	4-F	H	c-Pr
4-Me-Ph	Me	4-F	H	c-Pr
3-CF3-Ph	Me	4-F	H	c-Pr
2-pyrimidyl	Me	4-F	H	c-Pr
2-thienyl	Me	4-F	H	c-Pr
2-furyl	Me	4-F	H	c-Pr
PhO	Me	4-F	H	c-Pr
4-MeO-PhO	Me	4-F	H	c-Pr
4-Cl-PhO	Me	4-F	H	c-Pr
4-MeO-PhO	Me	4-F	H	c-Pr
3-CF3-PhO	Me	4-F	H	c-Pr
-NHCH2Ph	Me	4-F	H	c-Pr
piperazyl	Me	4-F	H	c-Pr
4-Me-PhCH2	Me	4-F	H	c-Pr
4-MeO-PhCH2	Me	4-F	H	c-Pr
4-Cl-PhCH2	Me	4-F	H	c-Pr
3-CF3-PhCH2	Me	4-F	H	c-Pr
PhCH2CH2	Me	4-F	H	c-Pr
-(CH2)2-CH(Ph)CH	2	4-F	H	c-Pr
-(ch2)2-ch(c-Pr)ch2-	4-F	H	c-Pr
-ch2-ch=ch-ch2-		4-F	H	c-Pr
-(CH2)2N(CH2Ph)CH2-	4-F	H	c-Pr

-30CZ 281786 B6

Dále podobným způsobem lze připravit farmakologicky přijatelné soli, jako např. draselné soli či půlsoli vápníku, estery jako např. methylestery, n-propylestery, i-propylestery, c-propylestery, n-butylestery, i-butylestery, sek-butylestery, terc-butylestery, n-pentylestery, i-pentylestery nebo n-hexylestery a amonné soli, trimetylamonné soli, diethylamonné soli, piperazinové soli, morfolinové soli, piperidinové soli, auraminové soli, diauraminové soli nebo trometaminové soli těchto látek.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu nejen že mají vysoké inhibiční aktivity vůči biosyntéze cholesterolu, kde HMG-CoA reduktasa působí jako enzym ovlivňující rychlost reakce, ale mají i inhibiční účinky na migraci M-SMC, proliferaci I-SMC a adhesi krevních buněk na endothelové buňky, jak ukázaly výsledky testů zde uvedené. Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou tedy užitečnými léky na hyperlipidemii, hyperlipoproteinemii a aterosklerosu.

Látky lze upravit do různých formulací podle toho jak mají být podávány. Sloučeniny podle tohoto vynálezu lze podávat ve founě volných kyselin nebo ve formě esterů a laktonů, fyziologicky hydrolyzovatelných a přijatelných, a ve formě farmaceuticky přijatelných solí.

Léková forma sloučenin podle tohoto vynálezu je podávána nejlépe orálně jako látka sama podle tohoto vynálezu ve formě prášků, granulí, tablet nebo kapslí připravených smísením látky podle tohoto vynálezu s vhodným, farmaceuticky přijatelným nosičem, jakým je např. hydroxypropylcelulóza, sirup, arabská guma, želatina, sorbitol, tragakantová guma, polyvinylpyrolidon nebo CMC-Ca, vehikulum jako je laktosa, cukr, kukuřičný škrob, fosfát vápenatý, sorbitol, glycin nebo celulózový prášek v krystalické formě, masťový základ jako je stearát hořečnatý, talek, polyethylenglykol a silika, a desintegrátor jako např. bramborový škrob.

Léková forma podle tohoto vynálezu není však omezena na orální podávání a látka je vhodná i pro parenterálni aplikaci. Tak např. lze ji podat ve formě čípků zformulovaných z olejového základu jakým je kakaové máslo, polyetylenglykol, lanolin nebo triglycerid mastné kyseliny, jako transdermální terapeutická formulace na bázi kapalného parafinu, bílé vazelíny, vyššího alkoholu, Macrogolové masti, hydrofilní masti nebo hydrogelu, jako injekční preparát formulovaný na bázi jednoho nebo více materiálů vybraných ze skupiny zahrnující polyethylenglykol, hydrogelový základ, destilovanou vodu, destilovanou vodu pro injekce a vehikulum jakým je laktosa nebo kukuřičný škrob, jako formulaci určenou pro aplikaci cestou slizničních membrán, jako jsou membrána oční sliznice, membrána nosní sliznice a membrána ústní sliznice.

Dále lze sloučeniny podle tohoto vynálezu kombinovat s bázickými iontoměničovými pryskyřicemi, které jsou schopné vázat žlučové kyseliny a přitom nejsou absorbovány v gastrointestinálním traktu.

Denní dávka sloučeniny vzorce I je od 0,05 do 500 mg, nejlépe od 0,5 do 50 mg, pro dospělé. Je podávána jednou až třikrát denně. Dávku lze samozřejmě měnit podle věku, váhy a stadia nemoci pacienta.

-31CZ 281786 B6

Vynález bude nyní popsán detailně s odvoláním na příklady, které ukazují inhibiční účinky látek podle tohoto vynálezu na aterosklerotické ztluštění intimy. Chemické struktury testovaných látek podle tohoto vynálezu (testovací látky 1 až 3) a srovnávací látky (Pravastatin, jak uveden ve zveřejněné japonské patentové přihlášce č. 185275/1982 před ověřováním nebo v EP65835, a Simvastatin jak uveden v japonské zveřejněné patentové přihlášce č. 122373/1981 před ověřováním nebo v EP33536) jsou tyto:

Referenční příklad (E)-trans-6-(2'4''-(4'’'(fluorfenyl)-1'¹,3''-dimethyl-6''-ď ' '-methylethyl)pyrazol[3,4-b]pyridin-5 ' ’-yl)ethenyl)4-hydroxy~3/4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-on (Látka I-3b-l)

Tato látka byla připravena s použitím methyl-2-cyklopropyl-5-ethyl-3-(4'-fluorfenyl)-6-methylthienol[2,3-b]pyridin-3-karboxylátu (Látka Vllb-l) jakožto výchozího materiálu pomoci následujících postupů A až H.

Stejným způsobem byly testovací látky 1,2a 3 připraveny z následujících meziproduktů (VIIa-1, VIIb-2 a VIIc-1):

Látka VIIa-1

Methyl 2-cyklopropyl-4-(4'-fluorfenyl)chinolin-3-yl-karboxylát

-32CZ 281786 B6

Látka VIIb-2

Methyl 6-cyklopropyl-l,3-dimethyl-4-(4'-fluorfenylJpyrazol[3,4-b]pyridin-5-y1-karboxylát

Látka VIIc-1

Methyl 6-cyklopropyl-3-ethyl-4-[4'-fluorfenyl)-2-methylthien[2,3-b]pyridin-5-yl-karboxylát

Me

Et v:zc-i Me<V

S--x

Testovací látka 1 (I-3a-l) (E)-Trans-6-(2¹-[2''-cyklopropyl-4''-(4'''-fluorfenyl)chinolin-3''-yl]ethenyl)-4-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-on

Testovací látka 2 (I-3b-2) (E)-Trans-6-(2'-[6''-cyklopropyl-1'',3''-dimethy1-4-(4'·'— -fluorfenyl)pyrazol[3,4-b]pyridin-5’'-yl]ethenyl)-4-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2—on

-33CZ 281786 B6

Testovací látka 3 (I-3c-1) (E) -Trans-6-(2’-[2''-cyklopropyl-5'’-ethyl-3'’(-4'''-fluorfenyl)-6' '-methylthienol[2,3-b]pyridin-3’’-yl]ethenyl-4-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-on

Stupeň A

4-(4'-fluorfenyl)-5-hydroxymethyl-l,3-dimethyl-6-( 1'-methylethyl)pyrazol[3,4-b]pyridin (Látka VI-b-1)

Pod dusíkem se 5,0 g (0,014 mol) látky VIlb-1 rozpustí v suchém toluenu a zchladí na 0 ’C v ledové lázni. K tomuto roztoku se přidá po kapkách 35 ml toluenového roztoku obsahujícího 16 % hmotnostních hydridu diizobutylhlinitého a smés se míchá h při 0 ’C. Potom co se ověří chromatografií v tenké vrstvě, že látka VIIb-1 zcela vymizela, se přidá nasycený roztok chloridu amonného při O 0 ’C, aby se reakce ukončila. K reakční směsi se přidá ethylether a oddělí se organická fáze. K vzniklému gelu se přidá vodný roztok hydroxidu sodného, aby se gel rozpustil a roztok se pak vytřepe ethyleterem. Ethyleterové extrakty se spojí, vysuší nad síranem hořečnatým a zfiltrují. Po odstranění rozpouštědla destilací se získá 3,9 g nažloutlého žádaného produktu. Výtěžek 88 %, teplota tání 174-175 C.

Podobným způsobem se připraví následující látky.

[VI]

-34CZ 281786 B6

	X	Teplota tání
vza-1	a	120-126
VIb-2	Me MeNA	168-170
VIc-1	Et	118-1-20

Stupeň B [4-(4 »-fluorfenyl)-1,3-dimethyl-6-(1'-methylethyl)pyrazol[3,4-b]pyridin-5-yl)karboxyaldehyd (Látka Vb-1)

Chlorochroman pyridinu (4,2 g, 19 mmol), 0,69 g bezvodého octanu sodného a 3,8 g (12 mmol) látky VIb-1 se suspenduje v 50 ml suchého dichlormethanu při laboratorní teplotě. Reakční směs se míchá jednu hodinu, pak se přidá 100 ml ethyleteru a důkladné se promíchá. Pak se reakční směs zfiltruje za sníženého tlaku vrstvou ceritu a filtrát se odpaří k suchu za ‘sníženého tlaku. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií na silikagelu (eluce chloroformem) a poskytne 2,9 g nažloutlého žádaného produktu. Výtěžek 78 %, teplota tání 144-146 ’C.

Podobným způsobem se připraví následující látky.

-35CZ 281786 B6

	X	Teplota tání
Va-1	a Me	150.1-151.6
Vb-2	MeN	149-151
	Et	•
Vc-1	Me^X	174-176

Stupeň C a D (E)-3-[4'-(4’'-fluorfenyl)-1',3'-dimethyl-6'-(1''-methylethyl)pyrazol[3,4-b]pyridin-5'-yl]propenaldehyd (Látka IIIb-1)

Stupeň C

Cis-l-ethoxy-2-(tri-n-butylcín)ethylen (1,45 g, 40 mmol) se rozpustí v 50 ml suchého tetrahydrofuranu a roztok se zchladí na -78 ’C v proudu dusíku. Pak se k tomuto roztoku přidá po kapkách 26 ml (40 mmol) roztoku obsahujícího 15 % hmotnostních n-butyllithia v n-hexanu. Pak se k reakční směsi přikapává roztok 2,5 g (8 mmol) látky Vb-1 ve 20 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá jednu hodinu při - 78 ’C a pak se na ukončení reakce přidá 26 ml nasyceného roztoku chloridu amonného. Organická fáze se vytřepe do ethyletheru a etherový extrakt se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysuší nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se oddestiluje za sníženého tlaku a zbytek se roztřepe mezi n-hexan a acetonitril. Acetonitrilová vrstva se destiluje za vakua, aby se odstranilo rozpouštědlo a aby byla získána vpodstatě čistá látka IVb-1.

Stupeň D

Látka IVb-1 získaná ve stupni C byla rozpuštěna v 70 ml tetrahydrofuranu a pak bylo přidáno 20 ml vody a 3 g kyseliny p-toluensulfonové. Směs byla míchána při laboratorní teplotě 2 h. Pak byla reakční směs opatrně zneutralizována vodným roztokem hydroxidu sodného a pak vytřepána pětkrát etherem. Extrakt byl promyt nasyceným roztokem chloridu sodného a vysušen na bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo pak oddestilováno za sníženého tlaku. Zbytek byl přečištěn sloupcovou chromatografii na silikagelu (eluent ethylacetát/n-hexan=l/9 (obj./obj.)) a poskytl žlutý žádaný produkt. Množství 2,2 g (výtěžek 79 %), teplota tání 133-134 ’C.

-36CZ 281786 B6

Stejným způsobem byly připraveny následující látky.

Teplota tání

141.3-144 .

Me

136-138

Stupeň E

Ethyl ester (E)-7-[4'-(4’’-fluorfenyl)-l', 3 '-dimethyl-6'-(1''-methylethyl)pyrazol[3,4-b]pyridin-5-yl]-5-hydroxy-3-oxohept-6-en kyseliny (Látka IIB-1)

Hydrid sodný (60%ní hmotn., 1,25 g) byl promyt suchým petroletherem, vysušen v proudu dusíku a pak suspendován v 200 ml suchého tetrahydrofuranu. Suspenze byla zchlazena na - 15 °C v proudu dusíku a pak bylo přikapáno 3,9 ml (30 mmol) acetoctanu ethylnatého. Směs byla míchána 15 min. Pak k ní bylo přidáno po kapkách 20 ml (30 mmol) roztoku obsahujícího 15 % hmotnostních n-butyllithia v n-hexanu a směs byla míchána 30 min. Pak byl do směsi přikapán roztok 2,1 g (6,1 mmol) látky IIIb-1 v suchém tetrahydrofuranu a směs byla míchána jednu hodinu. Po přidání 10 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného při- 15 C byla směs vytřepána třikrát diethyletherem. Etherová vrstva byla promyta nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysušena nad síranem

-37CZ 281786 B6 horečnatým a pak odpařena k suchu za sníženého tlaku. Zbytek byl přečištěn sloupcovou chromatografii na silikagelu (eluent ethylacetát/chloroform-1/9 (obj./obj.)) a poskytl 2,5 g (výtěžek 89 %) bílého žádaného produktu. Teplota tání 95-98 ’C.

Stejným způsobem byly připraveny následující sloučeniny.

X

Teplota tání

Me

ZZb-2

olejovitá látka

Stupeň F

Ethyl ester (E)-7-[4¹-(4''-fluorfenyl)-l',3'-dimethyl-6'-(1'’-methylethyl)pyrazol[3,4-b]pyridin-5'-yl]-3,5-dihydroxy-hept-6-en kyseliny (Látka I-lb-1) »

Látka IIb-1 (2,32 g, 4,96 mmol) byla rozpuštěna v 20 ml ethanolu pod dusíkem a roztok byl zchlazen na 0 °C. Pak bylo přidáno 740 mg (20 mmol) borohydridu sodného a smés byla míchána jednu hodinu. Směs byla pak opatrné zneutralizována 10%ním hmotn. vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Reakční směs byla pak třikrát vytřepána etherem. Etherový extrakt byl promyt nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušen nad síranem hořečnatým. Pak byl roztok odpařen k suchu za sníženého tlaku. Olejovitý zby

-38CZ 281786 B6 tek byl přečištěn sloupcovou chromatografii na silikagelu (eluent ethanol/chloroform=3/97 (obj./obj.)) a poskytl čistý žádaný produkt ve formě bezbarvého vazkého oleje. Množství 1,81 g (výtěžek 78 %).

NMR (8ppm CDC1₃)

1,28 (t, J=8Hz, 3H), 1,32 (d, J=8Hz, 6H), 1,4-1,8 (m, 1H), 1,92 (S, 3H), 2,2-2,6 (m, 3H), 2,9-3,8 (m, 2H), 3,42 (7 heptalet, J=8Hz), 4,06 (s, 3H), 4,1-4,6 (m, 4H), 5,1-5,5 (m, 1H), 6,4-6,7 (m, 1H), 6,9-7,3 (m, 4H)

Stejným způsobem byly připraveny následující sloučeniny.

Teplota tání (V?

Z-Xa-1

100-104

Me

Me

105-108

Stupeň G

Sodná sůl (E)-7-[4'-(4’’-fluorfenyl)1’,3¹-dimethyl-6'-(i''-methylethyl)pyrazol[3,4-b]pyridin-5’-yl]3,5-dihydroxyhept-6-en kyseliny (Látka I-5b-l)

Látka I-lb-1 (200 mg, 0,43 mmol) byla rozpuštěna v 2 ml ethanolu a pak bylo po kapkách přidáno 0,85 ml vodného roztoku 0,5 N hydroxidu sodného. Smés byla míchána jednu hodinu při labora

-39CZ 281786 B6 torní teplotě. Pak byl ethanol oddestilován za sníženého tlaku a ke zbytku byly přidány 2 ml vody. Smés byla pak vytřepána ethyletherem. Vodná vrstva byla lyofilizována a poskytla 180 mg (91 %) hygroskopického nažloutlého prášku. Teplota táni 258-264 °C (za rozkladu).

Stejným způsobem byly připraveny následující sloučeniny.

Teplota tání. (IQ)

197-199 (s rozkladem )

230-237 (s rozkladem)

212-216 (s rozkladem) (E)-7-[4'-(4’'-fluorfenyl)-1',3'-dimethyl-6'-(1''-methylethyl)pyrazol[3,4-b]pyridin-5'-yl]-3,5-dihydroxyhept-6-en kyselina (Látka I-2b-l)

K látce I-lb-1 v množství 0,25 g (0,53 mmol), rozpuštěné v 3 ml ethanolu, bylo přidáno po kapkách 1,06 ml vodného 0,5 N roztoku hydroxidu sodného. Ethanol byl oddestilován za sníženého tlaku a pak byly přidány ke zbytku 3 ml destilované vody. Směs byla vytřepána ethyletherem. Vodná vrstva byla opatrně neutralizována l%ní hmotn. kyselinou chlorovodíkovou a pak vytřepána ethyletherem. Etherová vrstva byla vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým a pak destilována za sníženého tlaku, aby byl získán požadovaný produkt. Množství 0,21 g (výtěžek 90 %).

-40CZ 281786 B6

P-NMR(DMSO-d⁶) δρρπι:

1,29 (d, J=7Hz, 6H), 1,83 (s, 3H), 2,1-2,3 (m, 2H), 2,4-2,6 (m, 1H), 3,0-3,6 (m, 4H), 3,96 (s, 3H), 4,3-4,8 (m, 2H),

5,2-5,6 (m, 1H), 6,3-6,6 (m, 1H), 7,2-7,4 (m, 4H) , 11,5-12 (bs, 1H)

Stupeň H (E)-trans-6-(2'4'·-(4’’’-fluorfenyl]-l’’ ,3’’-dimethyl-6’’-1'''-methylethyl)pyrazol[3,4-b]pyridin-5''-yl]ethenyl)-4-hydroxy-3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran—2-on (Látka I-3b-l)

Látka I-2b-l v množství 130 mg (0,29) mmol byla rozpuštěna v 6 ml dichlormethanu a pak bylo k tomuto roztoku přidáno 125 mg (0,29 mmol)

N-cyklohexyl-N'-(2'·-methylmorfolinoethyl)karbodiimid p-toluensulfonátu. Směs byla míchána za laboratorní teploty 2 h, pak bylo rozpouštědlo oddestilováno za sníženého tlaku k suchu. Olejovitý zbytek byl přečištěn chromatografií v tenké vrstvě (eluent hexan/ethylacetát=9/l (obj./obj.)) a poskytl žádaný produkt ve formě bezbarvého vazkého oleje. Množství 48 mg (výtěžek 39 %).

P-NMR (CDCl-j) δppm:

1,33 (d, J=6,8Hz), 1,4-1,5 (m, 1H), 1,6-1,7 (m, 2H), 1,93 (S, 3H), 2,5-2,6 (m, 1H), 2,68 (dd, J=18Hz, J=5Hz, 1H),

3,39 (heptalet, J=6,8Hz, 1H), 4,07 (s, 3H), 4,1-4,2 (m,

1H), 5,1-5,2 (m, 1H), 5,31 (dd, J=16Hz, J=6Hz, 1H), 6,61 (dd, J=16HZ, J=1,5HZ, 1H), 7,1-7,3 (m, 4H)

Stejným způsobem byly připraveny následující sloučeniny.

-41CZ 281786 B6

Teplota tání (X?)

199-201

Me

Me'

122-127

164-166

Příklad 1

Inhibiční účinky na migraci buněk hladkého svalstva medie aorty (M-SMC)

Inhibiční účinky látek podle tohoto vynálezu na migraci M-SMC byly měřeny následujícími metodami.

Řezy aortové medie připravené z hrudní (thorakální) aorty samců krys kmene Sprague Dawley byly kultivovány v Eaglové mediu modifikovaném Dulbeccem (DME) obsahujícím 10%ní fetální hovězí sérum (FBS) při 37 ’C v atmosféře obsahující 95 % obj. vzduchu a 5 % obj. kysličníku uhličitého po 3 až 4 týdny. Buňky hladkého svalstva aortové medie vyrostlé z řezů aortové medie byly subkultivovány po naředéní buněčné hustoty 1 : 2 tak, aby byla získána stabilní podkultura. Po třech až čtyřech subkultivacích byly buňky v konfluentním stavu trypsinizovány a pak suspendovány ve shora uvedeném mediu při hustotě buněk 500 000 buněk na ml. Testovaná látka rozpuštěná v dimethylsulfoxidu (DMSO) byla pak přidána k suspensi buněk tak, aby výsledná koncentrace DMSO byla 0,2 % obj. a susperise buněk byla preinkubována při 37 °C po 30 min. DMSO ve stejné koncentraci byl použit jako kontrola. Do dolního oddílu Boydenovy komůrky oddělené nitrocelulózovou membránou bylo naplněno 10 ng/ml růstového faktoru odvozeného z krevních destiček (PDGF) nebo DME medium obsahující 10%ní obj. SMC-kondiciované DME medium (SMC-CM) získané 48-h kondicionaci jako migrační faktor. Do horní komůrky byl naplněn 1 ml buněčné suspenze a pak bylo inkubováno při 37 ’C po 4 h za podmínek kultivace. Ve slepém pokuse bylo do dolní komůrky naplněno DME medium bez migračního faktoru. Po čtyřech hodinách inkubace buňky ulpélé na horní straně nitrocelulózové membrány byly odstraněny a buňky, které odmigrovaly na spodní stranu membrány byly fixovány a obarveny roztokem Diff Quik. Počet odmigrovaných buněk byl počítán v 10 polích pod optickým mikroskopem při 400 x HPF.

Získané výsledky byly vyjádřeny jako průměrná hodnota počtu

-42CZ 281786 B6 buněk ve třech komůrkách a % inhibice bylo počítáno s použitím následujícího vztahu:

Inhibice (%) = 100 - <(T-B)/(C-B) x 100} kde B je počet buněk ve slepém pokuse, C počet buněk v kontrolním vzorku, a T počet buněk nalezených v pokuse s testovanou látkou.

Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 5. Látky podle tohoto vynálezu vykazovaly silné inhibiční účinky na migraci M-SMC v porovnání se srovnávací sloučeninou.

Tabulka 5

Inhibice (%)
	PDGF	SMC-CM
Látka Koncentrace (M)	10~5	105
Testovací látka 1	77,8	28,4
Testovací látka 2	98,2	32,8
Testovací látka 3	100	41,7
Pravastatin	61,8	26,2

Příklad 2

Inhibiční účinky na proliferaci buněk hladkého svalstva aortové intimy a medie (I-SMC a M-SMC)

Inhibiční účinky látek podle tohoto vynálezu na proliferaci I-SMC a M-SMC byly měřeny následujícími metodami.

Řezy aortové medie připravené ze zdravého japonského králíka a řezy aortové intimy z intimových lesí izolovaných z medie aorty aterosklerotického japonského králíka pěstovaného na l%ní hmotn. cholesterolové dietě po 3 měsíce byly kultivovány v DME mediu obsahujícím 10 % obj. FBS a antibiotikum způsobem popsaným v příkladu 1. Po dvojí či trojí subkultivaci byly konfluentni buňky trypsinizovány a suspendovány ve shora uvedeném mediu tak, aby hustota buněk byla 20 000 buněk/ml. Pak bylo 10 000 buněk vyseto a kultivováno na destičce s 24 jamkami. Po 6 h inkubaci bylo medium nahrazeno 0,5 ml kontrolního media anebo media obsahujícího testovanou látku. Přitom byly i spočítány buňky původně přichycené k destičce a jejich počet považován za výchozí počet buněk (I). Testovací látka byla přidána do media způsobem popsaným v příkladu 1. Jako kontrola byl použit DMSO ve výsledné koncentraci 0,2 % obj. Medium bylo měněno každé 2 dny a 1., 2., 3., 5. a 7. den byly buňky trypsinizovány, rozpuštěny v Isotonu a počet buněk stanoven s pomocí Coulterova počítače.

Získané výsledky byly vyjádřeny jako průměrný počet buněk ve třech jamkách a % inhibice jako násobek počtu buněk od 2. do 5. dne bylo počítáno s použitím následujícího vztahu.

Inhibice (%) = 100 - {(T5/T2)/(C5/C2) X 100}

-43CZ 281786 B6 kde T2 as T5 je počet buněk druhý resp. pátý den v mediu obsahujícím testovací látku, a C2 a C5 počet buněk druhý resp. pátý den v kontrolním mediu.

Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 6. Látky podle tohoto vynálezu vykazovaly silné inhibiční účinky na proliferaci jak I-SMC, tak i M-SMC v porovnání se srovnávací sloučeninou. Navíc inhibiční účinek na proliferaci I-SMC byl vyšší než na proliferaci M-SMC.

Tabulka 6

Inhibice (%) Intima	Media
Látka Koncentrace (M)	106	105	106	ΙΟ”5
Testovací látka	1	36,4	98,1	6,3	91,5
Testovací látka	2	84,6	98,2	4,7	86,5
Testovací látka	3	100	100	31,5	100
Pravastatin		1,3	1,3	8,7	-11,7

Příklad 3

Inhibiční účinek na spotřebu ³H-thymidinu v buňkách hladkého svalstva aortové intimy a medie (I-SMC a M-SMC).

Inhibiční účinky látky podle tohoto vynálezu na spotřebu ³H-thymidinu v I-SMC a M-SMC byly měřeny následujícími metodami.

M-SMC a I-SMC byly získány z aortové medie zdravého japonského králíka a z aortové intimy aterosklerotického japonského králíka jak uvedeno v příkladu 2. Po třech anebo čtyřech subkultivacích byly konfluentní buňky trypsinizovány a suspendovány v DME mediu obsahujícím 10 % obj. FBS a antibiotikum tak, aby hustota buněk byla 40 000 buněk na ml. Po 4 dnech kultivace bylo medium nahrazeno kontrolním mediem anebo mediem obsahujícím testovací látku popsanou v příkladu 2 a v kultivaci bylo pokračováno 24 h. Pak bylo přidáno 1 p.Ci (37 MBq) ³H-thymidinu a v kultivaci bylo pokračováno 3 h. Buňky byly promyty třikrát fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem (PBS) a opracovány vychlazenou 5%ní obj. kyselinou trichloroctovou (TCA). Nerozpustná frakce byla promyta vychlazenou TCA a pak rozpuštěna ve vodném 0,5 M roztoku hydroxidu draselného. Radioaktivita ³H byla měřena na kapalném scintilátoru a byl stanoven obsah bílkovin.

Získané výsledky byly počítány jako radioaktivita na 1 mg bílkoviny a vyjádřeny průměrnou hodnotou pro 3 jamky. Inhibice (%) byla počítána podle následujícího vztahu.

Inhibice (%) = 100 - T/C x 100

Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 7. Látky podle tohoto vynálezu vykazovaly silný inhibiční účinek na spotřebu ³H-thymidinu ve frakci v DNA v buňkách hladkého svalstva intimy a medie v porovnání se srovnávací látkou.

-44CZ 281786 B6

Tabulka 7

Inhibice (%)
	Intima	Media
Látka	Koncentrace (M)	10~6 10'	5 10~6 10~5

Testovací	látka	1	32,2	83,1	46,7	90,8
Testovací	látka	2	11,7	91,5	36,4	88,4
Testovací	látka	3	69,9	94,1	53,6	92,2
Pravastatin		-7,0	-7,2	8,7	-34,3

Příklad 4

Inhibice adhese leukemických buněk (HL-60)

Inhibiční účinky látek podle tohoto vynálezu na adhesi HL-60 buněk byly měřeny následujícími metodami. HL-60 buňky byly pěstovány v RPMI mediu obsahujícím 10% obj. FBS a antibiotikum při 37 ’C v atmosféře obsahující 95 % obj. vzduchu a 5 % obj. kysličníku uhličitého a pak byly vysety do 6 jamek vícejamkové destičky v množství 2 ml na jamku při hustotě buněk 1 000 000 buněk na ml. Testovací látka rozpuštěná v DMSO byla dána tak, aby výsledná koncentrace DMSO byla 0,2 % obj. a pak byla provedena h preinkubace. Pak bylo vyseto 500 000 buněk do 24 jamek vícejamkové destičky a byl přidán 0,02 M ethanolový roztok forbol myristát-acetátu v množství 1/250 (obj./obj.) do kultivačního media. V kultivaci pak bylo pokračováno 12 h. Po této době byly buňky promyty PBS a buňky přichycené ke stěnám jamky byly seškrábnuty, trypsinizovány a suspendovány v Isotonu. Počet buněk byl spočítán s pomocí Coulterova počítače. V kontrolním pokuse byl přidán pouze DMSO.

Získané výsledky byly vyjádřeny jako průměrná hodnota počtu buněk ve třech jamkách v době preinkubace a inhibice (%) byla vypočítána podle následujícího vztahu.

Inhibice adhese (%) = 100 - T/C x 100 kde T je počet buněk v mediu obsahujícím testovací látku a C počet buněk v kontrolním mediu. Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 8. Látky podle tohoto vynálezu vykazovaly zřetelně silný inhibiční účinek na adhesi HL-60 buněk indukovanou v porovnání se srovnávací sloučeninou.

Tabulka 8

Inhibice (%)
Látka Koncentrace (M)	107	10-6	10“5
Testovací látka 1	1,0	12,3	98,7
Testovací látka 3	4,8	92,2	96,4
Pravastatin			-2,8

-45CZ 281786 B6

Příklad 5

Inhibice adhese J774 makrofágů (J774-M0)

Inhibiční účinky látek podle tohoto vynálezu na adhesi J774-M0 byly měřeny následujícími metodami.

Buňky v počtu 1 000 000 byly vysety do 6 jamek vícejamkové destičky a kultivovány v 1 ml media obsahujícího 10 % obj· FBS a antibiotikum při 37 ’C v atmosféře obsahující 95 % obj. vzduchu a 5 % obj. kysličníku uhličitého 2 dny. Kultivace pak pokračovala s kontrolním mediem obsahujícím 0,2 % obj. DMSO anebo s mediem obsahujícím testovací látku (48 h preinkubace). Buňky pak byly seškrábnuty s pomocí gumové tyčinky a byly suspendovány ve svrchu uvedeném mediu. Buňky v počtu 200 000 byly vysety do 24 jamek více jamkové destičky a kultivovány 12 h. Pak byly buňky přichycené na stěnách jamky seškrábnuty s pomocí gumové tyčinky a jejich počet stanoven s pomocí Coulterova počítače.

Získané výsledky byly vyjádřeny jako průměrná hodnota počtu buněk ve třech jamkách v době preinkubace pro každý případ a inhibice (%) adhese byla spočítána s pomocí následujícího vztahu.

Inhibice (%) adhese = 100 - T/C x 100 kde T je počet buněk v mediu obsahujícím testovací látku a C počet buněk v kontrolním mediu. Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 9. Látky podle tohoto vynálezu vykazovaly silné inhibiční účinky na adhesi J774-M0.

Tabulka 9

Inhibice (%)
Látka Koncentrace (M)	10“6M	10_5M
Testovací látka 1	53,0	74,2
Testovací látka 2	92,2	92,4
Pravastatin	40,0	41,3
Simvastatin	48,5	48,6

Látky podle tohoto vynálezu mají inhibiční účinky na HMG-CoA reduktasu a inhibují aterosklerotické ztlušťování intimy a tak se stávají užitečnými léky pro prevenci koronárních srdečních chorob, jakými jsou angína pectoris, infarkt myokardu, reatenosa po PTCA, cerebrovaskulární kontrakce po sabarachnoidnim krvácení a uzavírací sklerozující arteritis.

Byly provedeny testy s dalšími sloučeninami podle vynálezu, a to s následujícími sloučeninami 1 až 10:

-46CZ 281786 B6

OH OH

Z je ••'ÍH-CH₂-CH-CH₂-COO.l/2Ca

Z je testovaná sloučenina 4

testovaná sloučenina 5

-47CZ 281786 B6

F

F

OH OH

Z je niCH-CH₂-CH-CH₂-COONa

testovaná sloučenina 9

OH ^H

Z je mu CH-CH₂-CH-CH₂-COONa testovaná sloučenina 10

-48CZ 281786 B6

Se shora uvedenými sloučeninami byly provedeny stejné testy jako v příkladě 1 a jejich výsledky jsou shrnuty v tabulce 10.

Tabulka 10

Inhibice (%)
	PDGF	SMC-CM
Koncentrace (M)	10“ 5	105
Testovaná sloučenina 4	90,9	67,5
Testovaná sloučenina 5	98,3	24,4
Testovaná sloučenina 6	100	58,3
Testovaná sloučenina 7	89,7	45,2
Testovaná sloučenina 8	100	46,2
Testovaná sloučenina 9	95,6	85,3
Testovaná sloučenina 10	100	68,9
Pravastatin	67,2	14,3

Se sloučeninami 4 až 8 byly provedeny stejné testy jako v příkladě 2 a jejich výsledky jsou uvedeny v tabulce 11.

Tabulka 11

		Inhibice (%)
		Intima	Media
Koncentrace (M)		10~6	10-5	106	10“5
Testovaná sloučenina	4	11,6	55,1	15,3	52,7
Testovaná sloučenina	5	93,8	81,0	-20,2	37,5
Testovaná sloučenina	6	93,3	90,6	-11,6	41,9
Testovaná sloučenina	7	3,4	88,0	12,1	13,8
Testovaná sloučenina	8	18,4	91,2	24,2	51,6
Pravastati		0,9	14,2	-13,4	—4,0

Dále byly testovány shora uvedené sloučeniny 4 až 8 postupem podle příkladu 3. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 12.

Tabulka 12

		Inhibice (%)
		Intima	Media
Koncentrace (M)		10“6	10-5	10-6	10“5
Testovaná sloučenina	4	31,2	80,0	—	—
Testovaná sloučenina	5	68,0	93,5	36,2	84,2
Testovaná sloučenina	6	48,8	88,0	42,3	88,7
Testovaná sloučenina	7	33,6	50,8	37,0	44,9
Testovaná sloučenina	8	25,4	64,5	36,5	67,5
Pravastatin		4,8	23,7	10,0	15,5

-49CZ 281786 B6

Příklady formulace přípravků

Dále se uvádějí formulační příklady tablet, tuhých kapslí, elastických kapslí, čípků, injekcí a granulí.

1. Tableta obsahuje 5 % hmotnostních sloučeniny č. 4, 60 % hmotnostních laktosy, 20 % hmotnostních kukuřičného škrobu, 5 % hmotnostních hydroxypropylmethylcelulozy,· 9 % hmotnostních CMC-Ca soli a 1 % hmotnostní magnesiumstearátu.

2. Tuhé kapsle obsahují 10 % hmotnostních sloučeniny č. 4, 30 % hmotnostních laktosy, 59 % hmotnostních mikrokrystalické celulózy a 1 % hmotnostní magnesiumstearátu.

3. Elastické kapsle obsahují 6,7 % hmotnostních sloučeniny č. 4, 92,6 % hmotnostních triglyceridu C₄_₁₀alifatické kyseliny a 0,7 % hmotnostních Polysorbatu 80 (tj. polyoxyethylen 20 sorbitan monooleát, definovaný japonským lékopisem).

4. Čípky obsahují 1,0 % hmotnostní sloučeniny č. 4, 98,5 % hmotnostních tuhého tuku (triglyceridu Cg_₁₈alifatické kyseliny, definovaného japonským lékopisem) a 0,5 % hmotnostního Polysorbátu 80.

5. Injekce obsahují 0,01 % hmotnostního sloučeniny č. 4 a 99,99 % hmotnostních destilované vody pro injekce.

6. Granule obsahují 5 % hmotnostních sloučeniny č. 4, 60 % hmotnostních laktozy, 20 % hmotnostních kukuřičného škrobu, 5 % hmotnostních hydroxypropylmethylcelulozy a 10 % hmotnostních CMC-Ca soli.

Množství podávaných sloučenin podle tohoto vynálezu bylo vyhodnoceno následujícím experimentem a klinickým testem týkajícím se cholesterolu v séru.

Byly zkoumány inhibiční účinky předmětných sloučenin na ztlušťování intimy a cholesterol v séru modelem endoteliálního poškození balonovým katetrem u králíků. Byli použiti japonští bílí králíci o hmotnosti 2,5 až 2,9 kg, jímž bylo podáváno 100 g normální potravy a 250 ml vody.

Testovaná sloučenina č. 4 se suspenduje v roztoku 0,5%ní hmotn. karboxymethylcelulozy ve vodě a suspenze se podává králíkům v 9 hodin dopoledne jednou denně.

Kontrolním králíkům se podává vodný roztok 0,5%ní hmotn. karboxymethylcelulozy.

Po 8 dnech podávání se do levé hlavní karotidní aorty králíka vsune katetr 3F Fogarty a endoterium se obnaží třikrát za stálého balonového tlaku.

V podávání se pokračuje dále po tři týdny, načež se králíci usmrtí a karotidní aorta se vyjme. Karotidní aorta se ihned fixuje 10%ním hmotn. formalinovým neutrálním pufrovacím roztokem.

-50CZ 281786 B6

Vzorky karotidní aorty vyjmuté ze čtyř částí karotidní aorty se patologicky vybarví s elastica van gison (EVG).

Rozsah ztlušténí intimy se měří počítačovou obrazovou analýzou a výsledky jsou uvedeny na připojeném obrázku 1.

Na druhé straně se měří sérový cholesterol za použití komerčně dostupného enzymového prostředku. Výsledky získané po 11 dnech jsou znázorněné na obrázku 2.

Sloučenina č. 4 byla podávána také 7 dospělým mužům, majícím alespoň 220 mg/dl sérového cholesterolu, v množství 1 mg denně po 2 týdny. Výsledky jsou shrnuté v následující tabulce:

Sérový cholesterol na počátku podávání	Sérový cholesterol po 2 týdnech podávání	Snížení množství sérového cholesterolu
220,9 mg/dl	170,0 mg/dl	23 %

Na přiloženém výkrese jsou znázorněny účinky sloučeniny č. 4 podle vynálezu zjištěné na králících při jejím orálním podávání, a to na obr. 1 je znázorněn inhibiční účinek sloučeniny č. 4 na ztlušťování intimy (*p 0,05) a na obr. 2 je znázorněn inhibiční účinek sloučeniny č. 4 na cholesterol v séru u králíků ( p 0,01).

Z výsledků testů provedených na králících, znázorněných na obrázku 1, je zřejmé, že sloučeniny podle tohoto vynálezu působí jako inhibitor aterosklerotického intimálního ztlušťování účinně při podávání v množství alespoň 0,3 mg/kg/den.

Rovněž z výsledků testů provedených na králících, znázorněných na obrázku 2, jasně vyplývá, že sloučenina podle tohoto vynálezu popisovaná v evropském patentovém spise č. 304 063 (22. února 1989) působí jako HMG-CoA reduktasový inhibitor účinné při podávání v množství alespoň 0,3 mg/kg/den.

Ze shora uvedených testů na lidech pak vyplývá, že sloučenina podle tohoto vynálezu působí jako HMG-CoA reduktasový inhibitor účinné při podávání v množství alespoň 0,02 mg/kg/den (kalkulace je založena na předpokladu, že průměrná hmotnost lidí je 60 kg).

Bylo tudíž vyhodnoceno, že účinná podávaná dávka sloučeniny podle tohoto vynálezu, působící jako inhibitor aterosklerotického ztlušťování intimy u lidí, je alespoň 0,03 mg/kg/den.

Claims (16)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Farmaceutický přípravek proti aterosklerotickému ztlušťování

   intimy, vyznačující s látku obsahuje sloučeninu obecného R¹ e tím, vzorce I že jako účinnou o (I) A ^Y-Z ( X CJ- -.R³

   ve kterém kruh X znamená skupiny vzorců v nichž

   R^4a značí vodík, C₁_₄alkyl, fluor, chlor a brom,

   R^4b značí C1_4alkyl a fenyl, R^5b značí C1_₄alkyl,

   R^4c a R^5c značí vodík a C₁_₄alkyl,

   R¹ je vodík nebo fluor,

   R³ je C₃_₅alkyl nebo C₃_₅cykloalkyl,

   Y je -CH₂CH2₂ nebo -CH=CH- a

   Z je -CH(OH)-CH₂-CH(OH)-CH₂-CO₂R¹², kde R¹² je sodík, draslík nebo jednovazný ekvivalent vápenatého iontu, nebo skupina ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem a/nebo jinou farmaceutickou pomocnou látkou.

   -52CZ 281786 B6
2. 2. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující

   s e ného tím, že jako účinnou látku obsahuje sloučeninu obec- vzorce Ia R¹ ifS 1 (Ia) r⁴V z-Y-Z ^SR³

   ve kterém všechny substituenty mají významy uvedené v nároku 1.
3. 3. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje sloučeninu obecného vzorce lb (lb) ve kterém všechny substituenty mají významy uvedené v nároku 1.
4. 4. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje sloučeninu obecného vzorce lc

   -53CZ 281786 B6 ve kterém všechny substituenty mají významy uvedené v nároku 1.
5. 5. Farmaceutický přípravek podle nároku 2, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje sloučeninu shora uvedeného obecného vzorce la, v němž R³ je cyklopropyl, Y je -CH=CH a ostatní substituenty mají významy uvedené v nároku 1.
6. 6. Farmaceutický přípravek podle nároku 3, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje sloučeninu shora uvedeného obecného vzorce lb, v němž R³ je cyklopropyl, R^4b a R jsou methyly, Y je -CH=CH- a ostatní substituenty mají významy uvedené v nároku 1.
7. 7. Farmaceutický přípravek podle nároku 3, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje sloučeninu shora uvedeného obecného vzorce Ic, v němž R³ je cyklopropyl, R^4c je ethyl, R^5c je methyl, Y je -CH=CH- a ostatní substituenty mají významy uvedené v nároku 1.
8. 8. Farmaceutický přípravek podle nároku 5, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje sloučeninu shora uvedeného obecného vzorce la, v němž Z je skupina -CH(OH)-CH₂-CH(OH)—CH₂-CO₂. jednovazný ekvivalent vápenatého iontu.
9. 9.

   Farmaceutický přípravek podle nároků 1 až 8, jící se tím, že obsahuje účinnou alespoň 0,03 mg/kg/den.

   vyznačulátku v dávce
10. 10. Farmaceutický přípravek podle nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že jako absolutní množství obsahuje 0,01 až 100 mg účinné látky a 50 až 99,9999 % hmotnostních pomocné látky nebo vody, vztaženo na celkovou hmotnost přípravku .
11. 11. Farmaceutický přípravek podle nároků laž 10, vyznačující se tím, že je ve formě tablety obsahující 0,05 až 40,0 % hmotnostních účinné látky, 42,5 až 95,95 % hmotnostních pomocné látky, 2,5 až 10,0 % hmotnostních poji

    -54CZ 281786 B6 va, 1,0 až 5,0 % hmotnostních desintegrátoru a 0,5 až 2,5 % hmotnostních maziva.
12. 12. Farmaceutický přípravek podle nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že je ve formě tuhé kapsle obsahující 0,05 až 40,0 % hmotnostních účinné látky, 57,5 až 99,45 % hmotnostních pomocné látky a 0,5 až 12,5 % hmotnostních maziva.
13. 13. Farmaceutický přípravek podle nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že je ve formě elastické kapsle obsahující 0,05 až 40,0 % hmotnostních účinné látky, 59,0 až 99,85 % hmotnostních pomocné látky a 0,1 až 1,0 % hmotnostní rozpouštědla.
14. 14. Farmaceutický přípravek podle nároků 1 až 10, vyzna- čující se tím, že je ve formě čípku obsahujícího 0,01 až 40,0 % hmotnostních účinné látky, 59,0 až 99,89 % hmotnostních pomocné látky a 0,1 až 1,0 % hmotnostní rozpouštědla .
15. 15. Farmaceutický přípravek podle nároků 1 až 10, vyzna- čující se tím, že je ve formě injekce obsahující 0,0001 až 5,0 % hmotnostních účinné látky a 95,0 až

    99,9999 % hmotnostních destilované vody pro injekce.
16. 16. Farmaceutický přípravek podle nároků 1 až 10, vyzna- čující se tím, že je ve formě granule obsahující 0,05 až 40,0 % hmotnostních účinné látky, 47,5 až 96,95 % hmotnostních pomocné látky, 2,5 až 10,0 % hmotnostních pojivá a 0,5 až 2,5 % hmotnostních maziva.

    1 výkres