CZ273698A3 - Farmaceutický prostředek s obsahem peptidu potlačujícího chuť k jídlu, jeho použití k léčbě onemocnění asociovaných s narušenou regulací chuti k jídlu - Google Patents
Farmaceutický prostředek s obsahem peptidu potlačujícího chuť k jídlu, jeho použití k léčbě onemocnění asociovaných s narušenou regulací chuti k jídlu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ273698A3 CZ273698A3 CZ982736A CZ273698A CZ273698A3 CZ 273698 A3 CZ273698 A3 CZ 273698A3 CZ 982736 A CZ982736 A CZ 982736A CZ 273698 A CZ273698 A CZ 273698A CZ 273698 A3 CZ273698 A3 CZ 273698A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- arg
- peptide
- lys
- appetite
- glp
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 64
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 28
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 title claims description 24
- 230000036528 appetite Effects 0.000 title claims description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims description 18
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 230000003893 regulation of appetite Effects 0.000 title 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 101800000221 Glucagon-like peptide 2 Proteins 0.000 claims description 60
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 claims description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- TWSALRJGPBVBQU-PKQQPRCHSA-N glucagon-like peptide 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 TWSALRJGPBVBQU-PKQQPRCHSA-N 0.000 claims description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 claims description 23
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 claims description 22
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 claims description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 claims description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 12
- 235000019627 satiety Nutrition 0.000 claims description 11
- 230000036186 satiety Effects 0.000 claims description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 10
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 claims description 10
- 235000021229 appetite regulation Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 6
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 5
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 4
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 claims description 4
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 4
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 claims description 4
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 claims description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 4
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 claims 1
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 claims 1
- 102400000326 Glucagon-like peptide 2 Human genes 0.000 claims 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 56
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 28
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 15
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 15
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 11
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 11
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 10
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 10
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 10
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 10
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 101500028771 Homo sapiens Glucagon-like peptide 2 Proteins 0.000 description 7
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 7
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 5
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 5
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000035554 Proglucagon Human genes 0.000 description 5
- 108010058003 Proglucagon Proteins 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 5
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 4
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108010024044 Glucagon-Like Peptide-2 Receptor Proteins 0.000 description 4
- 102100032879 Glucagon-like peptide 2 receptor Human genes 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 4
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 210000001511 glucagon-secreting cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 3
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 3
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 3
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 3
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101500026175 Rattus norvegicus Glucagon-like peptide 2 Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 101150021650 gluA gene Proteins 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-(octadecanoyloxy)propyl octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034042 Alcohol dehydrogenase 1C Human genes 0.000 description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 2
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 2
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 2
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 101000796894 Coturnix japonica Alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 108010086246 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100032882 Glucagon-like peptide 1 receptor Human genes 0.000 description 2
- 206010018404 Glucagonoma Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 101000780463 Homo sapiens Alcohol dehydrogenase 1C Proteins 0.000 description 2
- 101000801742 Homo sapiens Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 102100033598 Triosephosphate isomerase Human genes 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 2
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001539 anorectic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002830 appetite depressant Substances 0.000 description 2
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002660 insulin-secreting cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- DDYAPMZTJAYBOF-ZMYDTDHYSA-N (3S)-4-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-4-amino-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-4-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-4-amino-1-[[(2S)-4-amino-1-[[(2S,3S)-1-[[(1S)-1-carboxyethyl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical class [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DDYAPMZTJAYBOF-ZMYDTDHYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800002326 Adipokinetic hormone Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 208000000103 Anorexia Nervosa Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004580 Aspartic Acid Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010017640 Aspartic Acid Proteases Proteins 0.000 description 1
- 241001513093 Aspergillus awamori Species 0.000 description 1
- 241000228257 Aspergillus sp. Species 0.000 description 1
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 description 1
- 101150071434 BAR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 description 1
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 1
- 241000193422 Bacillus lentus Species 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000149420 Bothrometopus brevis Species 0.000 description 1
- 101100280051 Brucella abortus biovar 1 (strain 9-941) eryH gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 108010063919 Glucagon Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100040890 Glucagon receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010088406 Glucagon-Like Peptides Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100295959 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) arcB gene Proteins 0.000 description 1
- 241000125500 Hedypnois rhagadioloides Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001039966 Homo sapiens Pro-glucagon Proteins 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 1
- 108700001097 Insect Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000235087 Lachancea kluyveri Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 241001490312 Lithops pseudotruncatella Species 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000256010 Manduca Species 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 101100235161 Mycolicibacterium smegmatis (strain ATCC 700084 / mc(2)155) lerI gene Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000221960 Neurospora Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 101100378536 Ovis aries ADRB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000194109 Paenibacillus lautus Species 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 1
- 101500026178 Rattus norvegicus Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 101100319895 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) YAP3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100160515 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) YPS1 gene Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 241001468239 Streptomyces murinus Species 0.000 description 1
- 101500014015 Sus scrofa Glucagon-like peptide 2 Proteins 0.000 description 1
- 101150033985 TPI gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 241000223258 Thermomyces lanuginosus Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101500022170 Ustilago maydis (strain 521 / FGSC 9021) Rep1-3 Proteins 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 101150069003 amdS gene Proteins 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000000578 anorexic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 101150008194 argB gene Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- BSBSDQUZDZXGFN-UHFFFAOYSA-N cythioate Chemical compound COP(=S)(OC)OC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 BSBSDQUZDZXGFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 1
- 235000021061 dietary behavior Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 235000005686 eating Nutrition 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108010061330 glucan 1,4-alpha-maltohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 230000009229 glucose formation Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940074045 glyceryl distearate Drugs 0.000 description 1
- 229940075507 glyceryl monostearate Drugs 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 239000000859 incretin Substances 0.000 description 1
- MGXWVYUBJRZYPE-YUGYIWNOSA-N incretin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 MGXWVYUBJRZYPE-YUGYIWNOSA-N 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 206010022498 insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 101150039489 lysZ gene Proteins 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000006151 minimal media Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 101150095344 niaD gene Proteins 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 101150054232 pyrG gene Proteins 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004739 secretory vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 101150080369 tpiA gene Proteins 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000001515 vagal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/26—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Navrhovaný vynález se týká použití farmaceutického prostředku s obsahem peptidu potlačujícího chuť k jídlu, nebo s obsahem peptidové frakce potlačující chuť k jídlu, stejně jako způsobu regulování chuti k jídlu pomocí zmíněného peptidu.
DOSAVADNÍ STAV TECHNIKY
Glukagon je produkován pankreatickými buňkami A a je uvolňován do oběhu v odpověď na snížení hladiny krevního cukru. Hlavním zásahovým místem glukagonu jsou játra, ve kterých stimuluje i·’ *· produkci glukózy. Je tudíž hlavním hormonem, působícím proti účinku inzulínu při udržování stálé hladiny krevního cukru (Unger Ř. H. a Orci L. (1990), Glucagon, v: Diabetes Mellitus, 4th ed. New York, Elsevier, pp. 104-120).
Glukagon vzniká z většího prekurzoru limitovaným proteolytickým štěpením. Molekulárním klonováním genu pro glukagon bylo * . .1? ' , ’ prokázáno, že prekurzor proglukagonu obsahuje ještě dva další peptidy podobné glukagonu, a to GLP-1 a GLP-2. Vzhledem k tomu, že GLP-1 a GLP-2 jsou kódovány odlišnými exony, předpokládá se, že mají i různé biologické aktivity. Později bylo prokázáno, že prekurzor proglukagonu podléhá různým typům úpravy ve třech různých typech tkání, produkujících proglukagon: v A-buňkách pankreatu, v L-buňkách tenkého střeva a v centrálním nervovém systému (CNS). Glukagon vzniká selektivním sestřihem z prekurzoru pouze v pankreatických A-buňkách, zatímco GLP-1 a GLP-2 jsou selektivně uvolňovány v tenkém střevu a v CNS (shrnuto v Unger R. H. a Orci L. (1990) Glucagon, v: Diabetes Mellitus, 4th ed, New York, Elsevier, pp. 104-120).
Byly identifikovány specifické GLP-1 receptory (Thorens B. (1992) Proč. Nati. Acad. Sci. USA 89: 8641-8645) které jsou zřetelně odlišné od glukagonových receptorů (Jelínek L. J. a kol. (1993) Science 259: 1614-1616) a jsou přítomny v různých typech tkání (Campos R.V. a kol. (1994) Endocrinology 134: 2156-2164). GLP-1 je po jídle uvolňován v L-buňkách tenkého střeva kde působí jako hormon inkretin (tj. zvyšuje glukózou indukované uvolňování inzulínu z B-buněk pankreatu). GLP-1 receptory jsou tudíž exprimovány ve vysoké míře právě na povrchu pankreatických B-buněk (Moens K. a kol. (1996) Diabetes 45: 257261).
Bylo prokázáno, že GLP-2 indukuje proliferaci epiteliálních buněk tenkého střeva (Drucker D. J. a kol. (1996) Proč Nati. Acad. Sci. USA 93: 7911-7916) a byl objeven způsob léčby gastrointestinálních poruch pomocí buněk rostoucích v médiu s přídavkem GLP-2 (Drucker D. J. a Keneford J. R., WO 96/32414). Dosud nebul popsán žádný GLP-2 receptor.
Peptidy odvozené od proglukagonu a potravní chování
Jíž dříve byly u krys popsány vznik a progrese transplantovatelných anorektických glukagonomů (Madsen O. D. a kol. (1993) Endocrinology 133: 2022-2030), stejně jako hypoglykemických inzulinomů (Madsen O. D. a kol. (1988) Proč.
* · » ··»* »»«» * * ··· · · ·· « «« A * · ·· ·* · * * • · · »·· * * * ·· · »«··· ·· ·*
Nati. Acad. Sci. USA 85: 6652-6656). Takové tumory mohou být odvozeny od běžných pluripotentních klonů MSL-buněk (Matsen O. D. a kol. (1986) J. Cell. Biol. 103: 2025-2034) a odráží proces maturace pluripotentních buněk na A-buňky resp. na B-buňky (Madsen O. D. a kol. (1993) Endocrinology 133: 2022-2030).
S glukagonomem asociovaná anorexie je velmi těžké onemocnění: propuká velmi náhle a po několika dnech vede k úplnému zastavení příjímání potravy. Nebezpečnost anorexie je jen těžko srovnatelná s ostatními experimentálními tumory u hlodavců. Předpokládá se že glukagonom produkuje velmi silný faktor sytosti, který působí i při periferním způsobu podání. Již dříve bylo prokázáno, že glukagonomy asociované s anorexií vykazují nefyziologický procesing proglukagonu jehož výsledkem je tvorba jak glukagonu, tak GLP-1 (Madsen O. D. a kol. (1993) Endocrinology 133: 20222030). Navíc je známo, že glukagonom, který neprovází anorexie není schopen posttranslační úpravy preglukagonu (Madsen O. D. a kol. (1995) Scand. J. Clin. Lab. Invest. 55 (220): 27-36). Úbytek hmotnosti je popisován též jako jeden z příznaků glukagonom syndromu u Člověka (Holst J. J. (1985) Glucagon-producing tumors, v: Hormone-producing tumors of the gastrointestinal tract. New York, Churchil Livingstone. pp. 57-84), i když s vysokým stupněm variability mezi jednotlivými pacienty (Bhathena S. J. a kol. (1981) Glucagonoma and Glucagonoma Syndrome, v: Glucagon. Physiology, patophysiology and morphology of the pancreatic A-cells., New York, Elsevier. 413-438).
Glukagon
Bylo prokázáno, že se glukagon účastní regulace spontánního příjmu potravy u krys, ale že jeho celkový účinek je minimální a • « · ♦· 9 9 9 · ♦ ♦ *99 ··· 9 9 99 φ 9« 9 99 99 ·· · · *
999 999 * * *
9 99999 · · · · projevuje se vagovou vazbou na játra (Geary N. a kol. (1993) Am. J. Physiol. 264: R116-R122). Tento efekt byl pozorován pouze v případě infuze glukagonu vrátnicovou jaterní žilou, zatímco intraperitoneáíní podání farmakologické dávky nemělo na příjem potravy u hladovějících krys žádný vliv (Madsen O. D. a kol. (1993) Endocrinology 133: 2022-2030).
GLP-1
Poměrně nedávno byla prokázána klíčová role GLP-1 v regulaci příjmu potravy (Turton M. D. a kol. (1996) Nátuře 379: 69-72). íntracerebroventrikulární (ICV) podání GLP-1 inhibovalo u hladovějících krys příjem potravy. A znovu periferní podání GLP-1 opět nemělo na příjem potravy žádný vliv. (Turton M. D. a kol. (1996) Nátuře 379: 69-72); (Madsen O. D. a kol. (1993) Endocrinology 133: 2022-2030), z čehož vyplývá, že GLP-1, produkovaný tumorem nemůže významně přispívat ke vzniku anorexie.
PODSTATA VYNÁLEZU
Bylo zjištěno, že při periferním podání je GLP-2 velmi účinným inhibitorem příjmu potravy.
Předpokládá se, že GLP-2, který je normálně uvolňován spolu s GLP-1 L-buňkami tenkého střeva, má svou vlastní jedinečnou roli jako periferní faktor sytosti.
V souladu s výše zmíněnými poznatky se navrhovaný vynález týká farmaceutického prostředku, který se skládá z farmaceuticky přijatelného vehikula nebo nosiče a HPLC frakce extraktu z glukagonomu (tumoru produkujícího glukagon), připravené kyselou • · ··· «· ethanolovou extrakcí, gelovou filtrací a preparativní HPLC. Zmíněná frakce je zobrazena jako frakce G4H9 na obr. 2. Hlavní složkou frakce G4H9 je Glukagonu podobný peptid 2 (GLP-2) (tvoří více než 40 %). Zmíněný farmaceutický prostředek může obsahovat místo zmíněné frakce i jen jednu z jejích složek nebo kombinaci dvou a více jejích jednotlivých složek.
Dále se vynález týká použití farmaceutického prostředku s obsahem glukagonu podobného peptidu - 2 (GLP-2) nebo jeho vhodného homologu pro prevenci a léčbu onemocnění nebo poruch spojených s narušenou regulací chuti k jídlu.
Dále se vynález týká použití farmaceutického prostředku obsahujícího peptid s následující aminokyselinovou sekvencí:
x‘hxzdgsfsdemntx3ldx4lax5x6dfinwlx’x’tkitdx9 kde X1 je NHZ, DFPEEVAIVEELGRR, DFPEEVTIVEELGRR, DFPEEVNIVEELRRR, nebo jejich fragment,
X2 je Ala nebo Gly,
X3 je Ile nebo Val,
X4 je Asň, Ser nebo His,
X5 je Ala nebo Thr,
X6 je Arg nebo Lys,
X7 je Ile nebo Leu,
X8 je Gin nebo His a
X9 je OH, Lys, Arg, Arg-Lys, Lys-Arg, Arg-Arg nebo Lys-Lys pro prevenci a léčbu onemocnění nebo poruch asociovaných s narušenou regulací chuti k jídlu.
• fe
Dále se vynález týká způsobu léčby onemocnění nebo poruch asociovaných s narušenou regulací chuti k jídlu založeného na podání takového množství peptidu, tak jak byl popsán, které je dostatečné pro snížení chuti k jídlu nebo navození pocitu sytosti u pacienta.
Vynález se konečně týká také použití peptidu, tak, jak byl výše popsán při výrobě léčiva pro prevenci a léčbu onemocnění nebo poruch asociovaných s narušenou regulací chuti k jídlu.
Detailní popis vynálezu
Termínem „peptid“ v tomto textu označujeme maturovaný GLP-2 peptid nebo jeho prekurzor, stejně jako jejich funkční fragment vykazující stejnou aktivitu jako peptid plné délky. Dále jsou termínem „peptid“ označeny homology zmíněného peptidu. Takové homology mají aminokyselinovou sekvenci vykazující nejméně 50% stupeň identity, raději však nejméně 75%, nej raděj i potom nejméně 90% stupeň identity s aminokyselinovou sekvencí lidského GLP-2. Stupeň identity může být určen kteroukoliv z běžných metod, viz. např. Altshul a kol., (1986) Bull.Math. Bio. 48:603-616; Heinkoff a Heinkoff (1992) Proč. Nati. Acad. Sci. USA 89:10915-10919. Homology navrhovaného peptidu mohou obsahovat jednu nebo více aminokyselinových záměn (substitucí), delecí nebo adicí. Tyto změny se mohou projevit jen minimálně, mezi takové patří konzervativní aminokyselinové substituce, které významně neovlivní ani sekundární strukturu, ani aktivitu peptidu, dále krátké delece, typicky jedno až pěti aminokyselinové, krátké amino- nebo karhoxyterminální extenze, to se týká například aminoterminálního methioninu, a dále krátké spojovací peptidy (až 15 aminokyselin) a nebo krátké extenze usnadňující purifikaci,
«· · · * • · 1 ·· ·· jako například polyhistidinová koncová sekvence, antigenní epitop nebo vazebná doména.Obecně je toto téma zpracováno v Ford a kol., Protein Expression and Purification 2: 95-107, 1991. Konzervativními substitucemi myslíme takové substituce, kdy je jedna aminokyselina nahrazena jinou patřící do stejné skupiny bazických aminokyselin (lyzin, histidin, arginin), kyselých aminokyselin (kyselina glutamová a kyselina asparagová), polárních aminokyselin (glutamin a asparagin), hydrofobních aminokyselin (leucin, izoleucin, valin), aromatických aminokyselin (fenylalanin, tryptofan, tyrozin) a nebo malých aminokyselin (glycin, alanin, serin, threonin, methionin).
Homologem může být i alelická varianta, tj. alternativní forma genu vzniklá mutací, nebo alternativní peptid kódovaný mutovaným genem, ale mající v podstatě stejnou aktivitu jako nativní GLP-2 peptid. Takové mutace mohou být bud’ tiché (tj. mutace se neprojeví v aminokyselinové sekvenci), nebo mohou vést ke změně aminokyselinové sekvence.
Homologem navrhovaného peptidu může být také druhový homolog, tj. peptid srovnatelné aktivity pocházející z jiného druhu. Příklady druhových homologů GLP-2 jsou lidský, hovězí, krysí, morčecí, křeččí a prasečí GLP-2 peptidy.
Preferovaným peptidem podle navrhovaného vynálezu je GLP-2 peptid, pro který platí, že X1 je NH2> X2 je Ala, X3 je Ile, X4 je Asn, X5 je Ala, X6 je Arg, X7 je Ile, X8 je Gin nebo X’ je OH. Konkrétně jde tedy o peptid s následující aminokyselinovou sekvencí;
HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD (lidský GLP-2), nebo
0 0 w 0 » »
0 0 0 · ♦»
0 ·· 0000 0 0 0 0 0 0 0
000 00 0· ·*
H ADGSF SDEMNTILDNLATRDFIN WLIQTKITD (krysí GLP-2), nebo
H ADGSFSDEMNT VLDNL ATRDFIN WLLHTKITD (prasečí GLP-2).
Izolace homologu peptidů může zahrnovat například přípravu genomové nebo cDNA knihovny z buněk druhu, který je předmětem našeho zájmu, a dále testování knihovny na přítomnost DNA sekvencí, kódujících celý hledaný homolog, nebo jeho část, pomocí syntetických oligonukleotidových sond za použití standardních technik, viz. např. Sambrook a kol., Molecular Clonig; A Laboratory Manual, 2nd Ed. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989. Dále mohou být požadované homology izolovány’ pomocí polymerázové řetězcové reakce (PCR) za použití specifických primerů tak, jak je to popsáno v Sambrook a kol., viz výše.
Navrhovaný vynález se dále týká prostředku s obsahem některé varianty GLP-2 peptidů. Variantou GLP-2 peptidů myslíme takový peptid, ve kterém došlo k jedné nebo více aminokyselinovým záměnám. Zvláště preferovanou variantou je peptid, u kterého došlo k záměně Ala v pozici 2 (u maturovaného peptidů) za glycin. Očekává se, že tato varianta bude vykazovat ve srovnání s nativním peptidem delší poločas v plazmě, což je velmi výhodná vlastnost, neboť umožňuje snížit dávku, potřebnou k dosažení odpovídajícího účinku na snížení chuti k jídlu nebo dosažení pocitu sytosti.
GLP-2 peptid, nebo jeho homology či varianty, tak jak byly výše popsány mohou být připraveny i pomocí technik rekombinantí DNA běžně používanými molekulárně genetickými metodami.
Konkrétně, DNA sekvence, kódující GLP-2 peptid může být izolována nebo syntetizována na základě publikované .DNA sekvence lidského proglukagonu (cf. White J.W. a kol., Nucleic Acids Res. 14, 1986, 4719-4730; Bell G. I. a kol., Nátuře 304, 1983, 368-371), získané například z genomické nebo cDNA knihovny z odpovídající tkáně otestováním na přítomnost DNA sekvencí, kódujících celý GLP-2 peptid, nebo jeho část, pomocí hybridizace se syntetickými oligonukleotidovými sondami za použití standardních technik (Sambrook a kol., Molecular Clonig: A Laboratory Manual, 2nd Ed. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). V našem případě je DNA sekvence kódující GLP-2 peptid nejraději lidského původu.
DNA konstrukt kódující GLP-2 peptid může .být připraven i synteticky a to pomocí zavedených standardních technik, například fosfoamiditovou metodou popsanou v Beaucage a Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859-1869, nebo metodou popsanou v Matthes a kol., EMBO Journal 3 (1984), 801-805. Podle této metody jsou oligonukleotidy syntetizovány v automatickém DNA syntetizéru, dále jsou purifikovány a podrobeny teplotní hybridizaci, ligovány a klonovány do vhodného vektoru.
DNA konstrukt může být ale i smíšený, tj, smíšený synteticko genomický, smíšený syntetický a cDNA, nebo smíšený genomický a cDNA připravený ligací fragmentů syntetického, genomického a cDNA původu odpovídajících různým částem celkové výsledné sekvence za použití standardních molekulárně genetických technik. DNA konstrukt může být dále připraven pomocí polymerázové řetězcové reakce (PCR) za použití specifických primerů, tak je to « 0 • ·
·.·· ·’
0 · 0 *00 · · · 0 * · 0 0 ··0 · · • · · · · ·
00* ·· «· 0* popsáno např. v US 4,683,202 nebo Saiki a kol., Science 239 (1988), 487-491, nebo Sambrook a kol, viz. výše.
Preferovaný. DNA konstrukt podle vynálezu obsahuje DNA sekvenci zobrazenou na obr. 3 v Bell G. I. a kol., Nátuře 304, 1983, 368-371, stejně jako DNA sekvenci kódující lidský GLP-2 lišící se od DNA sekvence z obr. 3 v Bell a kol. viz výše. následkem degenerace genetického kódu. DNA konstrukt dále zahrnuje sekvenci, která hybridizuje s molekulou nukleové kyseliny (genomovou, cDNA, syntetickou nebo RNA) kódující lidský GLP-2 a to za vysoce stringentních podmínek (předvlhčení v 5x SSC a prehybrydízace 1 hod. při asi 40 °C v roztoku 20% formamidu s 5x Dernhardtovým roztokem, 50 mM fosforečnanem sodným pH 6,8 a 50 pg denaturované sonikované telecí thymové DNA, s následnou hybridizací ve stejném roztoku, doplněném 100 μΜ ATP po dobu 18 hodin při 40 °C. Nakonec následuje promytí při teplotě 45 °C v 0,4x SSC). To může být případ například DNA sekvencí kódujících GLP-2 jiných druhů, tj. krysí, hovězí, prasečí, křeččí nebo morčecí GLP-2.
Pro expresi GLP-2 je DNA konstrukt kódující GLP-2 peptid klonován do odpovídajícího rekomhinantnícho vektoru. Tím může být jakýkoliv vektor, který je vhodný pro techniky rekombinantní v DNA a jeho výběr závisí především na hostitelské buňce, do které k
bude vložen. Vektorem v tomto případě může být autonomně se replikující vektor, tj. vektor, existující jako extrachromozomální entita, replikující se nezávisle na buněčné DNA, tj. plazmid. Alternativně může být vektorem i DNA, která se po vložení do buňky integruje do hostitelského chromozomu a replikuje se spolu s ním.
00 · ·· 00 0 0 0
0 0
0·
Podle navrhovaného vynálezu je vektorem přednostně expresní vektor, ve kterém je DNA sekvence kódující GLP-2 peptid operativně spojena s dalšími segmenty nezbytnými pro transkripci DNA. Obecně je expresní vektor odvozen od plazmidové nebo virové DNA, nebo může obsahovat sekvence obou zmíněných DNA. Termín „operativně spojena“ značí, že segmenty jsou uspořádány tak, že na sebe funkčně navazují, tj. transkripce začíná na promotorové sekvenci a pokračuje přes DNA sekvenci kódující požadovaný peptid.
Promotorem může být jakákoliv DNA sekvence, která vykazuje transkripční aktivitu v hostitelské buňce a může být odvozena z genů kódujících jak proteiny homologní s proteiny hostitelské buňky, tak proteiny heterologní.
Příklady promotorů vhodných pro řízení transkripce DNA kódující GLP-2 peptid v savčích buňkách jsou SV40 promotor (Subramani a kol. Mol. Cell Biol. 1 (1981) 854-864), MT-1 (gen pro metallothionein) promotor (Palmiter a kol., Science 222 (1983), 809-814) nebo hlavní pozdní promotor adenoviru 2.
Příkladem promotorů vhodných pro řízení transkripce DNA kódující GLP-2 peptid v hmyzích buňkách jsou polyhedrinový promotor (US 4,745,051; Vasuvedan a kol. FEBS Lett. 311, (1992) 7-11), P10 promotor (Vlak J. M. a kol., J. Gen. Virology 69, 1988, 765-766), promotor hlavního proteinu mnohostěnného viru Autographa californica (EP 397 485), PÍ promotor časných genů bakulovirů (US 5,15,037; US 5,162,222),nebo 39K opožděný promotor časných genů bakuloviru (US 5,155,037; US 5,162,222). Mezi promotory, vhodné pro použití v kvasničných hostitelských buňkách patří promotory kvasničných glykolytických genů • » · · · *· . 9 9 · · ♦·· · *
9 9 9 9 · • 99 9· *· ·* (Hitzeman a kol,, J. Biol. Chem. 255 (1980), 12073-12080; Alber and Kawasaki, J. Mol. Appl. Gen. (1982), 419-434) nebo promotor genu pro alkohol dehydrogenázu (Young a kol., in Genetic Engineering of Microorganisns for Chemicals (Hollaender et al, eds.), Plenům Press, New York 1982), nebo TPI1 promotor (US 4,599,311) nebo ADH2-4c promotor (Russel a kol., Nátuře 304 (1983), 652-654).
Mezi promotory, vhodné pro použití v hostitelských buňkách vláknitých hub patří například ADH3 promotor (McKnight a kol., The EMBO Journal 4 (1985) 2093-2099), nebo tpiA promotor. Další vhodné promotory jsou odvozeny z genů kódujících TAKA amylázu u A. oryzae, asparagovou proteínázu u Rhizomukor meihei, neutrální nebo v kyselém prostředí stabilní α-amylázy u A. niger, glukoamylázu (gluA) u A. niger a A. awamori, lipázu u Rhizomukor meihei, alkalickou proteázu u A. oryzae, trióza fosfát izomerázu u A. oryzae, nebo acetamylázu u A. nidulans. Preferovanými jsou promotory pro TAKA-amylázu a gluA.
Mezi promotory, vhodné pro použití v bakteriálních hostitelských buňkách patří například promotor genu pro maltogenní amylázu u Bacillus stearothermophillus, promotor genu pro alfa-amylázu u Bacillus licheniformis, promotor genu proBAN amylázu u Bacillus amyloliquefaciens, promotor genu pro alkalickou proteázu u Bacillus subtilis, promotor genu pro xylosidázu u Bacillus pumilus, nebo promotory PL nebo Pr bakteriofágu λ, a nebo lac, trp nebo tac promotory E. coli.
DNA sekvence, kódující GLP-2 peptid může být dále operativně spojena (pokud je to nezbytné) s vhodným terminátorem, jako je například terminátor genu pro lidský růstový hormon (Palmiter a ♦ · ·· · ♦ · · kol., viz výše), nebo, v případě houbových hostitelských buněk, TPI1 (Alber and Kawasaki, J, Mol. Appl. Gen. (1982), 419-434) či ADH3 (McKnight a kol., The EMBO Journal 4 (1985) 2093-2099) terminátory. Vektor může dále obsahovat takové elementy, jako jsou např. polyadenylační signál (např. z viru SV40 nebo z adenoviru 5 Elb oblasti), sekvence zesilující transkripci (opět např. z viru SV40) a sekvence zesilující translaci (např. ty kódující RNA adenoviru VA).
Rekombinantní vektor může dále obsahovat DNA sekvence umožňující replikaci v hostitelské buňce. V případě savčích hostitelských buněk to může být například oři SV40 (počátek replikace viru SV40).
Je-li hostitelskou buňkou kvasinka, jsou vhodnými sekvencemi, jež umožňují replikaci vektoru geny REP1-3 a počátek replikace z kvasinkového plazmidu 2μ.
Vektor může dále obsahovat sekvenci umožňující selekci pozitivních kmenů, tj. gen, jehož produkt komplementuje defekt hostitelské buňky, například gen pro dihydrofolát reduktázu nebo TPI gen ze Schyzosacharomyces pombe (Russel P. R., Gene 40, 1985, 125-130), nebo gen nesoucí rezistenci k antibiotikům jako * jsou ampicilin, kanamycin, tetracyklin, chloramfenikol, neomycin, hygromycin nebo methotrexát. V případě vláknitých hub mohou být indikátory selektivity amdS, pyrG, argB, niaD, nebo sC.
Aby byla zajištěna sekrece GLP-2 peptidu hostitelskou buňkou, může být do rekombinantního vektoru vnesena tzv. signální sekvence (známá také jako vedoucí sekvence, preprosekvence nebo presekvence). Sekreční signální sekvence musí být s DNA sekvencí kódující peptid ve stejném čtecím rámci. Signální sekreční • * « • · · t4----— sekvence bývá obvykle umístěna na 5' konci DNA sekvence kódující peptid. Signální sekvence může být buď ta, která je přirozeně asociovaná s peptidem, nebo to může být signální sekvence jiného sekretovaného proteinu.
V případě kvasničných hostitelských buněk může sekreční signální sekvence kódovat jakýkoliv signální peptid, který zajistí účinné nasměrování exprimovaného peptidu na sekreční dráhu buňky. Signálním peptidem může být buď přirozeně se vyskytující signální peptid nebo jeho funkční část, nebo to může být syntetický peptid. Bylo zjištěno, že vhodnými signálními peptidy mohou být např. signální peptid α-faktoru (US 4,870,008), signální peptid myší amylázy ze slin (Hagenbuchle O, a kol., Nátuře 289, 1981,643-646), modifikovaný signální peptid karboxypeptidázy (Valls L. A. a kol., Cell 48, 1987, 887-897), kvasničný BARI signální peptid (WO 87/02670) nebo signální peptid kvasničné proteázy YAP3 (Egel-Mitani M. a kol., Yeast 6, 1990, 127-137).
Pro účinnou sekreci v kvasničných hostitelských buňkách může být součástí vektoru dále i vedoucí sekvence umístěná po směru transkripce od signální sekvence a proti směru transktipce od kódující sekvence GLP-2 peptidu. Funkcí vedoucího peptidu je nasměrovat exprimovaný peptid z endoplazmatického retikula do Golgiho aparátu a dále do sekrečních váčků, které zajistí sekreci peptidu do kultivačního média, tj. exportovat peptid přes buněčnou stěnu, nebo alespoň přes buněčnou membránu do periplazmatického prostoru kvasničné buňky. Vedoucím peptidem může být například vedoucí peptid kvasničného α-faktoru (jeho použití je popsáno v US 4,546,082, EP 16 201, EP 123 294, EP • · · • · * • · * • fe fe ·· • · *· • •fe · · • · « • fe »·
123 544 a EP 163 529). Alternativně může být vedoucím peptidem syntetický peptid, což je vedoucí peptid, jaký se přirozeně nevyskytuje. Konstrukce syntetických vedoucích peptidů je popsána například v WO 89/02463 nebo WO 92/11378.
Signální peptidy pro použití v buňkách vláknitých hub mohou být odvozeny např. od genů kódujících amylázu nebo glukoamylázu u Aspergillus sp., lipázu nebo proteázu u Rhizomukor miehei a nebo lipázu u Humicola lanuginosa. Signální peptid je přednostně odvozen od genu kódujícího TAKA amylázu u A. oryzae, neutrální nebo v kyselém prostředí stabilní α-amylázy u A. niger a glukoamylázu (gluA) u A. niger.
Signální peptid pro použití v hmyzích buňkách bývá odvozen od hmyzích genů (WO 90/05783). Příkladem může být prekurzor signálního peptidu adipokinetického hormonu motýla Manduca sota (US 5,023,328).
Metody, použité k ligaci DNA sekvencí kódujících GLP-2 peptid, promotor a případně terminátor a/nebo sekreční signální peptid, a k vložení těchto sekvencí do vhodného vektoru při zachování informace, nezbytné pro replikaci, jsou odborníkům dobře známé (viz. např. Sambrook a kol.).
DNA sekvence kódující GLP-2 peptid může být pro hostitelskou buňku buď homologní, nebo heterologní. Je-li DNA sekvence homologní, tj. přirozeně produkovaná hostitelskou buňkou, je typicky operativně spojena s jinou promotorovou sekvencí, nebo, je-li použita, i s jinou sekreční signální sekvencí a/nebo terminátorovou sekvencí, než s jakými je spojena přirozeně. Termín „homologní“ se týká cDNA sekvenci kódující polypeptid, vlastní hostitelské buňce. Termín „heterologní“ se týká DNA *« ě • · ·· 444 4 4 sekvencí, které nejsou v hostitelské buňce přirozeně exprimovány, tj. DNA sekvence může pocházet z odlišného organizmu, nebo může být syntetického původu.
Hostitelskou buňkou, do které je rekombinantní vektor nebo DNA konstrukt podle vynálezu vložen, může být jakákoliv buňka schopná produkovat peptid podle vynálezu, tj. bakterie, kvasinka, buňka hub i vyšších eukaryot.
Mezi bakteriální hostitelské buňky schopné produkovat GLP-2 peptid patří grampozitivní bakterie rodu Bacillus jako např. B. subtilis, B. licheniformis, B. lentus, B. brevis, B. stearoíhermophilus, B. alkalophilus, B. amyloliquefaciens, B. coagulans, B. circulans, B. lautus, B.megatherium, B. thurigiensis nebo bakterie rodu Streptomyces jako např. 5. lividans či S. murinus, nebo gramnegativní bakterie E. coli. Transformace bakterií může být uskutečněna buď jako transformace protoplastů, nebo za použití kompetentních buněk (obecně známá metodika, viz. např. Sambrook a kol., supra).
Při expresi peptidů v bakteriích, jako je např. E. coli může zůstávat peptid v cytoplazmě, typicky ve formě nerozpustných granulí (známé jako „inclusion bodies“), nebo může být buněčným sekrečním aparátem směrován do periplazmatického prostoru. V prvním případě jsou buňky dále lyžovány, granule jsou separovány, denaturovány a peptid je renaturován odstraněním denaturačního Činidla. Ve druhém případě je peptid získáván přímo rozrušením buněk například sonikací nebo osmotickým šokem, čímž je uvolněn obsah periplazmatického prostoru a peptid může být izolován přímo z média.
• · · • · * • · · «· é
Mezi vhodné savčí buněčné linie patří COS (ATCC CRL 1650), BHK (ATCC CRL 1632, ATCC CLL 10), CHL (ATCC CCL39) nebo CHO (ATCC CCL 61) linie. Metody transfekce savčích buněk a exprese DNA sekvencí do nich vložených jsou popsány například v Kaufman and Sharp, J. Mol.. Biol. 159, (1982), 601-621; Southern and Berk, J. Mol. Appl. Genet. 1, (1982), 327-341; Loyter a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 79, (1982), 422-426; Wigler a kol., Cell 14, (1978), 725; Corsaro and Pearson, Somatic Cell Genetics 7, (1981), 603; Graham and van der Eb, Virology 52, (1973), 456 a Neumann a kol., EMBO J. 1, (1982), 841-845.
Mezi vhodné kvasničné buňky patří buňky rodů Saccharomyces spp. nebo Schyzosaccharomyces spp., konkrétně kmeny Saccharomyces cerevisiae nebo Saccharomyces kluyveri. Metody transformace kvasničných buněk heterologní DNA a produkce heterologních polypeptidů kvasinkami jsou popsány např. v US 4,599,311; US 4,931,373; US 4,870,008; US 5,037,743 a US 4,845,075. Transformované buňky jsou selektovány na základě fenotypu, určeného odpovídajícím selekčním ukazatelem, jakým obvykle bývá rezistence k antibiotiku nebo schopnost růst i v nepřítomnosti některého nutričního přídavku, například leucinu. Preferovaným vektorem, používaným pro kvasinky je vektor POTÍ popsaný v US 4,931,373. DNA sekvenci kódující GLP-2 peptid může předcházet signální sekvence a případně i vedoucí sekvence, tak jak již bylo popsáno. Dalšími vhodnými hostitelskými buňkami jsou kvasinku rodu Kluyveromyces, např. K. lactis; Hansenula, např. H. polymorpha nebo Pichia, např. P. pastoris (Gleeson a kol., J. Gen. Microbiol. 132, 1986, 3459-3465; US 4,882,279).
Mezi vhodné hostitelské buňky patří i buňky vláknitých hub, např. Aspergillus spp., Neurospora spp., Fusarium spp. nebo Trichoderma spp., konkrétně A. oryzae, A. nidulans nebo A. řHger.Použití Aspergillus spp. pro expresi proteinů je popsáno například v EP 272 277 a EP 230 023. Metoda transformace F. oxysporum je popsána například v Malardier a kol., Gene 78, 1989, 147-156.
Je-li jako hostitelská buňka použita buňka vláknité houby, může být transformována DNA konstruktem kódujícím GLP-2 peptid nej raděj i integrací DNA konstruktu do hostitelského chromozómu, čímž vzniká rekombinantní hostitelská buňka. Integrace DNA konstruktu do hostitelského chromozómu je obecně považována za výhodnou, neboť v integrovaném stavu je DNA stabilnější a je vyšší pravděpodobnost jejího udržení v buňce. Integrace DNA konstruktů do hostitelského chromozómu se provádí běžnými metodami, tj. např. homologní nebo heterologní rekombinací. Transformace hmyzích buněk a produkce heterologního peptidu ve hmyzích buňkách může být uskutečněna např. tak, jak je to popsáno v US 4,745,051; US 4,879,236; US 5,155,037; US 5,162,222; nebo EP 397,485. Mezi vhodné hostitelské buňky patří hmyzí buněčné linie řádu Lepidoptera, jako např. Spodoptera frugiperda nebo Trichoplusia ni (US 5,077,214). Vhodné kultivační podmínky byly popsány např. v WO 89/01029 nebo WO 89/01028, nebo ve výše citovaných odkazech.
Transformované nebo transfektované hostitelské buňky jsou dále kultivovány ve vhodném médiu za podmínek, umožňujících expresi GLP-2 peptidu. Následuje izolace GLP-2 peptidu.
ϊ ..·’···
Pro kultivaci buněk může být použito kterékoliv běžné médium vhodné pro růst hostitelských buněk včetně minimálních médií nebo komplexních médií s odpovídajícími přídavky. Vhodná média jsou buď komerčně dostupná, nebo mohou být připravena podle publikovaných předpisů (např. katalogy American Type Culture Collection). GLP-2 peptid produkovaný buňkami je dále získáván z kultivačního média běžně používanými technikami zahrnujícími separaci hostitelských buněk od média centrifugací nebo filtrací, precipitaci proteinů ze supernatantu nebo filtrátu vysolením, nejčastěji síranem amonným a purifikaci některou z mnoha chromatografických metod, např. iontoměniěovou chromatografií, gelovou filtrací, afinitní chromatografií atd.
Pro výrobu farmaceutického přípravku podle vynálezu s obsahem GLP-2 peptidu může být použita některá z běžných metod používaných pro výrobu farmaceutických přípravků, které jsou popsány například v Remingtonů Pharmaceutical Sciences, 1985. Prostředek může být připraven např. ve formě vhodné pro podávání systémovou injekcí, nebo infůzí. V takovém případě je součástí přípravku vhodný tekutý nosič jako např. sterilní voda, fyziologický roztok nebo roztok glukózy. Přípravky jsou sterilizovány některou z běžně používaných sterilizačních metod. Výsledné roztoky mohou být buď baleny pro konečné použití, nebo filtrovány za aseptických podmínek a lyofilizovány. Lyofilizovaný přípravek je potom před podáním smíšen se sterilní vodou. Prostředek může dále obsahovat farmaceuticky přijatelné pomocné složky, tak, jak to vyžadují fyziologické podmínky, tj. pufrační látky, ionizační látky atp., například octan sodný, chlorid sodný, chlorid draselný, chlorid vápenatý atd.
* »
»· • *· ·»· « • « ♦ · ♦·
Farmaceutické prostředky podle navrhovaného vynálezu mohou být dále uzpůsobeny i pro pernasální, transdermální, pulmonální nebo rektální způsob podávání. Farmaceuticky přijatelným nosičem nebo rozpouštědlem může být v tomto případě kterýkoliv běžný pevný nosič. Mezi takové nosiče patří například laktóza, terra alba,, sacharóza, talek, želatina, agar, pektin, arabská guma, stearát hořečnatý a kyselina stearová. Dále může nosič nebo rozpouštědlo obsahovat látky usnadňující uvolňování jako glyceryl monostearát či glyceryl distearát a to buď samostatně, nebo smíšené s voskem. Je s výhodou, je-li přípravek podle vynálezu ve formě, usnadňující uvolňování účinné látky. V takovém případě je prostředek připraven ve formě mikrokapslí nebo mikročástic s obsahem GLP-2 peptídu, kdy je GLP-2 peptid dispergován ve vhodném farmaceuticky přijatelném biodegradovatelném polymeru jakými jsou například kyselina polymléčná, kyselina poíyglykolóvá, nebo jejich kopolymer. Pro případ podávání nosem je přípravek upraven tak, že GLP-2 peptid je rozpuštěn nebo suspendován v tekutém nosiči (například vodném) a upraven pro aplikaci ve formě aerosolu. Nosič může obsahovat aditiva jako například solubilizační látky, tj. např. propylenglykol, povrchově aktivní látky, látky posilující absorpci jako lecitin nebo cyklodextrin a konzervační látky, např. parabeny.
Obecně jsou látky podle vynálezu rozděleny ve formě jednotkových dávek obsahujících v jedné dávce 0,5 - 500 mg peptidu spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.
Očekáváme, že GLP-2 peptid bude s výhodou používán pro snížení chuti k jídlu nebo pro navození pocitu sytosti při prevenci a léčení onemocnění nebo poruch spojených s narušenou regulací chuti k jídlu. Příklady takových onemocnění mohou být obezita nebo diabetes II typu. Dávka GLP-2 peptidu podávaného pacientovi je různá v závislosti na typu a závažnosti onemocnění, ale obvykle se pohybuje v rozmezí od 10 pg/kg do asi 5 mg/kg tělesné hmotnosti pacienta.
Ve farmaceutických prostředcích podle vynálezu může být GLP-2 peptid kombinován i s jinými látkami snižujícími chuť k jídlu nebo navozujícími pocit sytosti. Příkladem takové látky může být například GLP-1, u kterého byl prokázán jistý vliv na snížení chuti k jídlu (Turton M. D., Nátuře 379, 1996, 69-72).
Dále se předpokládá, že GLP-2 peptid ve vhodně značené formě (například radioaktivně značený) může být použit pro identifikaci GLP-2 receptorů za použití tkáně (tkání), ve kterých se předpokládá jejich přítomnost, např. hypothalamus. Pokud by byl pomocí GLP-2 receptor lokalizován, mohl by být dále klonován. Expresní klonování zahrnuje přípravu cDNA knihovny dané tkáně, klonování cDNA do odpovídajícího vektoru a vnesení vektoru do vhodné hostitelské buňky, která umožní expresi cDNA. Klon, exprimující receptor je identifikován vazbou s GLP-2. Klon stabilně exprimující GLP-2 receptor může být používán pro vyhledávání GLP-2 agonistů (látek, působících na receptor a vyvolávajících pocit sytosti nebo snižujících chuť k jídlu) či antagonistů (tj. látek, které působí proti účinkům GLP-2, tj. látek, které mohou být použity pro léčbu onemocnění jako jsou nádorová anorexie nebo anorexia nervosa).
Vynález je blíže popsán následujícími příklady, které však nejsou v žádném případě limitující.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Extrakce nádorové tkáně kyselým ethanolem.
U krys byl vyvolán anorektický nádor tak, jak bylo dříve popsáno (Madsen O. D. a kol., (1993) Endocrinology 133, 2022-2030). Padesát nádorů 12C3AN (MSL-G-AN) (při -80 °C) odpovídajících 50,07 g mokré tkáně bylo homogenizováno při +4 °C se 700 ml kyselého ethanolu (96% ethanol / 0,7 M HCI, 3/1, v/v). Vzorek byl homogenizován maximální rychlostí po dobu 5 min. v předem vychlazeném (4 °C) 2 litrovém homogenizátoru (Waring
Commercial Blender). Po homogenizaci byla směs míchána 16 hodin při 4 °C. Poté byla směs centrifugována (9000 RPM, 4 °C, 1 hod). Objem supernatantu byl zahuštěn na 20 % pomocí vakuové centrifugace. Během tohoto procesu, při kterém je odstraněna většina ethanolu, vzniká sraženina. Ta je odstraněna centrifugací (4°C, 20 000 RPM, 1 hod). Supernatant, který stále obsahuje jisté množství lipidického materiálu je přefiltrován a aplikován na kolonu LiChroprep RP-18 (2,5 x 10 cm) (Merk), ekvilibrovanou 0,1% TFA při průtokové rychlosti 2 ml/min. Kolona je dále promyta 100 ml 0,1% TFA při průtokové rychlosti 4 ml/min. Navázaný vzorek je eluován 400 ml 0,1% TFA obsahující 70 % (v/v) acetonitrilu. Acetonitril byl odstraněn vakuovou centrifugací a výsledná směs byla lyofilizována. Po lyofilizaci byl materiál rozpuštěn v 50 ml vody a pH bylo upraveno na 5,3 přidáním 425 μΐ 1N NaOH. Další titrace směsi na pH 6,0 vedla ke vzniku precipitátu. Při zpětné titrací na pH 5,3 byl precipitát opět rozpuštěn. Proto bylo pH upraveno na 5,3 a směs byla lyofilizována.
i
Celkový výtěžek lyofilizovaného materiálu z 50 nádorů byl 359 mg suchého materiálu.
Příklad 2: První purifikační krok: gelová filtrace na Sephadexu G-75.
Lyofilizovaný materiál (278 mg) po extrakci 38 nádorů kyselým ethanolem byl znovu rozpuštěn ve 20 ml 1 M kyseliny octové a vzorek byl aplikován na kolonu Sephadex G-75 (5 x 50 cm). Kolona byla ekvilibrována a vzorek byl eluován 1M kyselinou octovou průtokové rychlosti 55 ml/h a byly sbírány 10 ml frakce. V každé frakci byla změřena absorpce při 280 nm. Odpovídající chromatogram je zobrazen na obr. 1. Jednotlivé frakce byly spojeny do pěti frakcí následujícím způsobem: G1 (frakce 30-39), G2 (frakce 40-45), G3 (frakce 46-66), G4 (frakce 67-91) a G5 (frakce 92-118), lyofilizovány a použity pro biologické testování.
Příklad 3: Druhý purifikační krok: preparativní HPLC frakce G4.
Chuť k jídlu suprimující aktivita byla zjištěna ve frakci G4 a tato frakce byla dále rozdělena pomocí preparativní HPLC. Lyofilizovaná frakce G4 (odpovídající 80 tumorům) byla znovu rozpuštěna v 15 ml 0,1% TFA a vzorek byl aplikován na kolonu Vydac 214TP1022 C4 (2,2 x 25 cm), equilibrovanou 0,1% TFA. Kolona byla promyta 20 ml 0,1% TFA, dále 100 ml MeCN/HíO/TFA (10:89,9:0,1; v/v/v). Navázaný materiál byl eluován při 25 °C při průtokové rychlosti 4 ml/min lineárním gradientem MeCN/HjO/TFA od (10:79,9:0,1; v/v/v) do (65,0:34,9:0,1; v/v/v) po dobu 110 min. UV absorpce při 214 a 280
ΙΑ ί nm byla monitorována a výsledný chromatogram (při 280 nm) je zobrazen na obr. 2. 10 hlavních frakcí bylo vytvořeno tak jak je to zobrazeno na obr. 2. Objem frakcí byl zredukován vakuovou centrifugací na přibližně 25 %, frakce byly lyofilizovány a byla testována jejich biologická aktivita.
Aktivita snižující chuť k jídlu byla pozorována ve frakci G4H9 (příklad 6) a u peptidu z této frakce byla provedena aminokyselinová analýza a MS analýza.
Příklad 4: Chemická charakterizace peptidů frakce G4H9
Analýza aminokyselinové sekvence byla provedena automatickou Edmanovou degradací za použití sekvenátoru Applied Biosystems Model 477 přesně podle metodiky popsané výrobcem. Hmotové spektrum bylo analyzováno za použití API III LC/MS/MS systému (Sciex, Thornhill, Ont., Canada). Trojnásobně kvadrupolový hmotový spektrometr má hmotnostní rozsah do 2400 a je spojen s pneumaticky ovládanou elektrosprejovou částí spektrometru. (Bruins A.P., Covey T.R., and Henion J.D., (1987), Anal. Chem. 59, 2642-2646. a Covey T.R., Bonner R.F., Shushan B.I. a Henion J.D. (1988), Rapid Commun. Mass. Spectrom. 2, 249-256). Vzorek byl aplikován pomocí infúzní pumpy s jehlou (Sage Instruments, Cambridge, MA) přes kapiláru (75 mm i.d.) při průtokové rychlosti nastavené na 0,5-1 ml/min. Rozsah m/z přístroje byl kalibrován lx nabitými amoniovými adukčními ionty poly(propylenglykolů) (PPG) při jednotkovém rozlišení. Přesnost měření hmotového spektra byla obecně lepší než 0,02 %.
« 4 ♦ ·
« *··
Frakce G4H9:
Dominantním peptidem této frakce byl peptid s aminokyselinovou sekvencí:
HAD G S F S DEMNTILDNL A TRDFIN WLIQ-TKI TD . molekulová hmotnost tohoto peptidu určená pomocí MS je: 3796. Tento peptid je identický s krysím GLP-2 (1-33). Dále frakce obsahovala minoritní množství následujících dvou peptidů: DFPEE VAIAEELGRRHADGSF SDEMNTILDNLA TRDFIN WLIQTKITD a
HDEFERHAEGTFTSDVS SYLEGQAAKEFIAWLV KGR. Tyto peptidy jsou shodné s krysím GLP-2, který byl Nterminálně prodloužen oddělovacím peptidem 2 a s krysím GLP-1 (1-36) resp.
Příklad 5; Testovací metoda pro měření redukce chuti k jídlu u myší.
Myším bylo po dobu dvou dnů odebráno jejich normálním krmivo, ale první den hladovění měly volný přístup k 20% roztoku sacharózy.Po dvoudenním období hladovění bylo myším intraperitoneální injekcí podáno 0,5 ml roztoku s obsahem testované látky. 30 min po injekci byly myši po jedné umístěny v jednom z osmi testovacích boxů 15 cm2 s leštěným ocelovým dnem a skleněnou sací trubičkou, která směřovala do boxu. Sací trubička byla spojena s nádrží obsahující 20% roztok sacharózy a uvnitř trubičky byla umístěna elektroda umožňující stanovit kontakt pijící myši s roztokem měřením slabého (neznatelného) elektrického napětí na myši pomocí elektronického aparátu připojeného k elektrodě v sací trubičce a ocelovému dnu boxu. Konzumace • 00 « ·· ‘ • 00 0 f
9 *
0« ·· roztoku sacharózy byla měřena během 10 minutové periody tak, že bylo elektronicky zaznamenáno celkové množství kontaktů s roztokem sacharózy během testované periody. Stupeň redukce chuti k jídlu zapříčiněný danou testovanou látkou byl určen statistickým porovnáním doby konzumace sacharózy mezi kontrolní (myš, které byl podán jen nosič testované látky) myší a myší, které byla podána testovaná látka. Stupeň redukce chuti k jídlu u testované skupiny myší byl vyjádřen v procentech odpovědi kontrolní skupiny.
Příklad 6: Testování redukce chuti k jídlu u myší způsobené frakcemi s obsahem GLP-2.
Redukce chuti k jídlu byla u myší měřena (viz příklad 5) po podání testované látky. Testovaná látka se skládala z extraktu z anorektického glukagonomu připraveného podle příkladu 3 (gelová filtrace, frakce G4), nebo podle příkladu 4 (HPLC frakce G4H9) rozpuštěného ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku. Testovaný roztok obsahující lyofilizovaný materiál z frakce G4 (po gelové filtraci) ze 3,3 tumorů snížil konzumaci roztoku sacharózy o 72 %. Z 10 HPLC sub-frakcí frakce G4 (viz příklad 4 obr. 2) vykazovala statisticky významné výsledky pouze frakce obsahující GLP-2 (G4H9), která, při podání lyofilizovaného materiálu odpovídajícího 5,3 tumorům, snížila konzumaci roztoku sacharózy o 49 %.
0 · *** • · · . · · , ·♦· ·· ·· ·’
0«
0*0 « 0 0
0« 0
Příklad 7: Testování redukce chuti syntetickým GLP-2.
Redukce chuti k jídlu byla u myší měřena (viz příklad 5) po podání testované látky s obsahem syntetického prasečího GLP-2 rozpuštěného ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku. Prasečí GLP-2 má následující aminokyselinovou sekvenci: HADGSFSDEMNTVLDNLATRDFINWLLHTRITD Intraperitoneální injekce testovaného roztoku s obsahem 50 mikrogramů syntetického prasečího GLP-2 snížila příjem sacharózy o 38 %.
k jídlu u myší způsobené
Příklad 8: Metoda testování redukce chuti k jídlu u myší.
Tato metoda je shodná s metodou popsanou v příkladu 5,ale na místo 20% roztoku sacharózy byl použit roztok mléka pro kojence (Complan). Testovaná látka byla rozpuštěna ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku s obsahem 1% albuminu. Takto připravená byla látka podávána buď íntravenózní injekcí (IV) v objemu 100 mikrolitrů, nebo intracerebroventrikulárně (ICV) v objemu 10 mikrolitrů.
i ·
Příklad 9: Metoda testování redukce chuti k jídlu u myší po podání syntetického GLP-2.
Myši byly testovány na redukci chuti k jídlu tak jak bylo popsáno v příkladu 8 a to po podání testované látky s obsahem syntetického lidského GLP-2, jehož aminokyselinová sekvence je následující: HADGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD IV injekce testované látky s obsahem 3 mikrogramů syntetického lidského GLP-2 snížila příjem mléka o 24 % zatímco ICV injekce • 4 ·* ···<
mikrogramů a 10 mikrogramů syntetického lidského GLP-2 snížily konzumaci mléka o 32 % a 35 % resp.
Claims (24)
1. Použití farmaceutického prostředku s obsahem peptidu s následující aminokyselinovou sekvencí:
x^x^gsfsdemntxTdxTax^dfinwlx^tkitdx9 kde X1 je NH2, DFPEEVAIVEELGRR, DFPEEVTIVEELGRR, DFPEEVNIVEELRRR, nebo jejich fragment,
X2 je Ala nebo Gly,
X3 je Ile nebo Val,
X4 je Asn, Ser nebo His,
X5 je Ala nebo Thr,
X6 je Arg nebo Lys,
X7 je Ile nebo Leu,
X8 je Gin nebo His a
X9 je OH, Lys, Arg, Arg-Lys, Lys-Arg, Arg-Arg nebo Lys-Lys spolu s farmaceuticky přijatelným masťovým základem nebo nosičem pro redukci chuti k jídlu nebo navození pocitu sytosti.
2. Použití prostředku podle nároku 1, kde X1 je NH2.
3. Použití prostředku podle nároku 1, kde X2 je Ala.
4. Použití prostředku podle nároku 1, kde X3 je Ile.
5. Použití prostředku podle nároku 1, kde X4 je Asn, « · —5 • · ♦ ·· · •í ·.
• · ·· · ·· '•a# ' '· ?1ν·
6. Použití prostředku podle nároku 1, kde X5 je Ala.
'! ·<* ' , 7/
Ti
7. Použití prostředku podle nároku 1, kde X6 je Arg.
8. Použití prostředku podlé nároku 1, kde X7 je Ile.
-· -.T. ·.·
9. Použití prostředku podle nároku 1, kde X8 je Gin.
10. Použití prostředku podle nároku 1, kde X9 je OH.
11. Použití prostředku podle nároku 1, kde sekvence použitého peptidu je: , < / .... 7T' V·.., -, < '7 /7,
HAD G S F S D E Μ N TIL D N L A A R D FIN W LIQ T KIT D, ' j . RGs-RG -1/=- <.,
H A D G S F S D E Μ N TIE D N L A T R D 'r . /' ··777/ -' '/-V/77/ '·'/ 7-iT 7-7-nebo .· /--7, 7-- 7''7' '77 77 7 777 -7/7-7' Ϋ -•/./Ta - 7/7.' - / t ’77·/- · -//7' .
H A D G S F S D E Μ N T V L D N L A T R D FINĚW L L HT-KIT D
7 7, 7' 'f'.
, . ' - ' . ' ,-T' . ' T'TU4:-/7;<
12. Použití prostředku podle kteréhokoliv z nároků 1-11 pro prevenci a léčbu onemocnění nebo poruch spojených s narušenou
7 ' ‘ > i- *. \ ' regulací chuti k jídlu. 7 * . ,
13. Použití prostředků’ podle kteréhokoliv z nároků 1-11 pro prevenci a léčbu obezity nebo diabetů II typů.
:h
14. F armaceutický prostředek v y z n a č u j í c i se tím , ž e •V* 7y +ť ' · : ’ . · obsahuje peptid s následující aminokyselinovou sekvencí:
X1HX2DGSFSDEMNTX3LDX4LAX5X6DFrNWLX7X8TKITDX9 toto to • · · · ♦ * to · · tototo « · · • » toto kde X1 je NH2, DFPEEVAIVEELGRR, DFPEEVTIVEELGRR, DFPEEVNIVEELRRR, nebo jejich fragment,
X2 je Ala nebo Gly,
X3 je Ile nebo Val,
X4 je Asn, Ser nebo His,
X5 je Ala nebo Thr,
X6 je Arg nebo Lys,
X7 je Ile nebo Leu,
X8 je Gin nebo His a
X9 je OH, Lys, Arg, Arg-Lys, Lys-Arg, Arg-Arg nebo Lys-Lys, v kombinaci s jinou látkou redukující chuť k jídlu nebo navozující pocit sytosti. i ' ‘ . .. S , ' 1 ‘ , ,'·'. r' ' < · ‘ 4. Λ - ' \
15. Farmaceutický’ prostředek podle nároku 14 vyznačující se t í,m, ž e zmíněnou látkou redukující chuť k jídlu nebo navozující pocit sytosti je glukagonu podobný peptid-1.
16. Způsob léčby onemocnění nebo poruch spojených s narušenou regulací chuti k jídlu vy z n a č uj í c í se tím, že zahrnuje podání peptidu s následující aminokyselinovou sekvencí:
xihx2dgsfsdemntx3ldx4lax5x6dfinwlx7x‘tkitdx’ kde X1 je NH2, DFPEEVAIVEELGRR, DFPEEVTIVEELGRR, DFPEEVNIVEELRRR, nebo jejich fragment,
X2 je Ala nebo Gly,
X3 je Ile nebo Val, • to · • toto « · ·.
• toto toto »
Ϊ· ♦· 1 • · ·* • to · to 1
X4 je Asn, Ser nebo His,
X5 je Ala nebo Thr,
X6 je Arg nebo Lys,
X7 je Ile nebo Leu,
X8 je Gin.nebo His a
X9 je OH, Lys, Arg, Arg-Lys, Lys-Arg, Arg-Arg nebo Lys-Lys, pacientu v takovém množství, které je postačující ke snížení chuti k jídlu nebo k navození pocitu sytosti u zmíněného pacienta.
17. Způsob podle nároku 16 vyznačující se tím, že zmíněným onemocněním je obezita či diabetes II typu.
18. Způsob podle nároku 16 vyznačující se tím, že dávka peptidu podaná pacientovi je v rozmezí od 10 pg/kg tělesné hmotnosti do 5 mg/kg tělesné hmotnosti.
19. Způsob léčby onemocnění nebo poruch spojených s narušenou regulací chuti k jídlu v y z n a Č uj í c í se tím, že zahrnuje podání peptidu s aminokyselinovou sekvencí:
HADGSFS DEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD,
H AD GS F SDEMNTILDNL ATRDFIN WLIQTKITD, nebo
HADGSFSDÉMNTVLDNL ATRDFIN WLLHTKITD pacientovi, který potřebuje takovou léčbu v množství, které je postačující ke snížení chutí k jídlu nebo k navození pocitu sytosti u zmíněného pacienta.
20. Způsob podle nároku 19 vyznačující se tím, že zmíněným onemocněním je obezita či diabetes II typu.
21. Způsob podle nároku 19 vyznačující se tím, že dávka peptidu podaná pacientovi je v rozmezí od 10 pg/kg tělesné hmotnosti do 5 mg/kg tělesné hmotnosti.
22. Způsob léčby onemocnění nebo poruch spojených s narušenou regulací chuti k jídlu v y z n a č uj í c í se tím, že zahrnuje podání HPLC frakce extraktu z glukagonomu, připravené extrakcí kyselým ethanolem, gelovou filtrací a následnou HPLC, obsahující jako hlavní složku GLP-2, nebo jakoukoliv jednotlivou složku zmíněné HPLC frakce, nebo kombinaci dvou či více složek zmíněné HPLC frakce a to v množství, které je postačující ke snížení chuti k jídlu nebo k navození pocitu sytosti u pacienta.
23. Způsob podle nároku 22 vyznačující se tím, že zmíněným onemocněním je obezita Či diabetes II typu.
24. Použití peptidu podle kteréhokoliv z nároků 1 - 11 k přípravě léčiva pro prevenci a léčbu onemocnění nebo poruch spojených s narušenou regulací chuti k jídlu.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK23196 | 1996-03-01 | ||
| DK23096 | 1996-03-01 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ273698A3 true CZ273698A3 (cs) | 1998-12-16 |
| CZ297338B6 CZ297338B6 (cs) | 2006-11-15 |
Family
ID=26063575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0273698A CZ297338B6 (cs) | 1996-03-01 | 1997-02-27 | Peptid potlacující chut k jídlu, farmaceutický prostredek jej obsahující a jeho pouzití |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (4) | EP1975177B1 (cs) |
| JP (1) | JP4064460B2 (cs) |
| KR (1) | KR100611130B1 (cs) |
| CN (1) | CN1112367C (cs) |
| AT (3) | ATE395359T1 (cs) |
| AU (1) | AU710818B2 (cs) |
| BR (1) | BR9707807A (cs) |
| CA (1) | CA2246733C (cs) |
| CY (2) | CY2619B2 (cs) |
| CZ (1) | CZ297338B6 (cs) |
| DE (3) | DE69738695D1 (cs) |
| DK (2) | DK0891378T3 (cs) |
| ES (3) | ES2306685T3 (cs) |
| FR (1) | FR13C0009I2 (cs) |
| HU (1) | HU229234B1 (cs) |
| IL (1) | IL125805A0 (cs) |
| NO (2) | NO323043B1 (cs) |
| PL (1) | PL187095B1 (cs) |
| PT (1) | PT1975177E (cs) |
| RU (1) | RU2197261C2 (cs) |
| UA (1) | UA70283C2 (cs) |
| WO (1) | WO1997031943A1 (cs) |
Families Citing this family (61)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5990077A (en) * | 1995-04-14 | 1999-11-23 | 1149336 Ontario Inc. | Glucagon-like peptide-2 and its therapeutic use |
| US6184201B1 (en) | 1995-04-14 | 2001-02-06 | Nps Allelix Corp. | Intestinotrophic glucagon-like peptide-2 analogs |
| US5834428A (en) | 1995-04-14 | 1998-11-10 | 1149336 Ontario Inc. | Glucagon-like peptide-2 and its therapeutic use |
| US6852690B1 (en) | 1995-08-22 | 2005-02-08 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Method and composition for enhanced parenteral nutrition |
| DE69738695D1 (de) * | 1996-03-01 | 2008-06-26 | Novo Nordisk As | Peptid zur Appetitzügelung, dessen Zusammensetzungen und Verwendung |
| AU733857B2 (en) | 1996-04-12 | 2001-05-31 | 1149336 Ontario Inc. | Glucagon-like peptide-2 analogs |
| US6458924B2 (en) | 1996-08-30 | 2002-10-01 | Novo Nordisk A/S | Derivatives of GLP-1 analogs |
| US7235627B2 (en) | 1996-08-30 | 2007-06-26 | Novo Nordisk A/S | Derivatives of GLP-1 analogs |
| UA65549C2 (uk) | 1996-11-05 | 2004-04-15 | Елі Ліллі Енд Компані | Спосіб регулювання ожиріння шляхом периферійного введення аналогів та похідних glp-1 (варіанти) та фармацевтична композиція |
| AU4863797A (en) * | 1996-11-12 | 1998-06-03 | Novo Nordisk A/S | Use of glp-1 peptides |
| US6051557A (en) * | 1997-05-16 | 2000-04-18 | 1149336 Ontario Inc. | Methods of enhancing functioning of the upper gastrointestinal tract |
| JP2001516765A (ja) * | 1997-09-12 | 2001-10-02 | ヴォルフ ゲオルグ フォースマン | 真性糖尿病及び肥満の治療のための組成物 |
| JP2001525371A (ja) * | 1997-12-05 | 2001-12-11 | イーライ・リリー・アンド・カンパニー | Ｇｌｐ−１製剤 |
| AU2610599A (en) * | 1998-02-27 | 1999-09-15 | Novo Nordisk A/S | N-terminally truncated glp-1 derivatives |
| WO1999043707A1 (en) * | 1998-02-27 | 1999-09-02 | Novo Nordisk A/S | N-terminally modified glp-1 derivatives |
| AU2712899A (en) * | 1998-02-27 | 1999-09-15 | Novo Nordisk A/S | Glp-2 derivatives with helix-content exceeding 25 percent, forming partially structured micellar-like aggregates |
| AU3087599A (en) * | 1998-03-19 | 1999-10-11 | Bionebraska, Inc. | Human appetite control by glucagon-like peptide receptor binding compounds |
| US6998387B1 (en) | 1998-03-19 | 2006-02-14 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Human appetite control by glucagon-like peptide receptor binding compounds |
| GB2355657B (en) | 1999-10-27 | 2004-07-28 | Phytopharm Plc | Inhibitors Of Gastric Acid Secretion |
| GB2363985B (en) | 2000-06-30 | 2004-09-29 | Phytopharm Plc | Extracts,compounds & pharmaceutical compositions having anti-diabetic activity and their use |
| US7371721B2 (en) | 2000-09-18 | 2008-05-13 | Sanos Bioscience A/S | Use of GLP-2 and related compounds for the treatment, prevention, diagnosis, and prognosis of bone-related disorders and calcium homeostasis related syndromes |
| US7186683B2 (en) | 2000-09-18 | 2007-03-06 | Sanos Bioscience A/S | Use of GLP for the treatment, prevention, diagnosis, and prognosis of bone-related and nutrition-related disorders |
| EP1326630B1 (en) * | 2000-09-18 | 2008-05-28 | Sanos Bioscience A/S | Use of glp-2 peptides |
| CA2430934C (en) | 2000-12-01 | 2011-06-21 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | A method of producing sustained-release preparations of a bioactive substance using high-pressure gas |
| GB0121709D0 (en) * | 2001-09-07 | 2001-10-31 | Imp College Innovations Ltd | Food inhibition agent |
| CA2484556A1 (en) | 2001-12-21 | 2003-07-24 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
| CA2471363C (en) | 2001-12-21 | 2014-02-11 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
| US7411039B2 (en) | 2002-10-14 | 2008-08-12 | Novo Nordisk A/S | GLP-2 compounds, formulations, and uses thereof |
| DE602004031927D1 (de) | 2003-02-04 | 2011-05-05 | Novo Nordisk As | Injektionsvorrichtung mit drehbarer dosiseinstellungsvorrichtung |
| JP4865565B2 (ja) | 2003-12-09 | 2012-02-01 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | Ｇｌｐ−１アゴニストを用いた食物選択の制御 |
| ATE550041T1 (de) | 2004-01-21 | 2012-04-15 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Transglutaminase-vermittelte konjugation von peptiden |
| NZ548612A (en) | 2004-02-09 | 2009-11-27 | Human Genome Sciences Inc | Albumin fusion proteins comprising tandem GLP-1 |
| US7456254B2 (en) | 2004-04-15 | 2008-11-25 | Alkermes, Inc. | Polymer-based sustained release device |
| EP2409707B8 (en) | 2004-04-15 | 2015-05-06 | Alkermes Pharma Ireland Limited | Polymer-based sustained release device |
| JP2008501765A (ja) | 2004-06-11 | 2008-01-24 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | Ｇｌｐ−１アゴニストを用いた薬剤誘発性肥満の中和 |
| US11246913B2 (en) | 2005-02-03 | 2022-02-15 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Suspension formulation comprising an insulinotropic peptide |
| PL1877435T5 (pl) † | 2005-05-04 | 2021-09-27 | Zealand Pharma A/S | Analogi peptydu glukagonopodobnego 2 (GLP-2) |
| ES2336575T3 (es) | 2005-09-22 | 2010-04-14 | Biocompatibles Uk Limited | Polipeptidos de fusion glp-1 (peptido-1 similar al glucagon) con resistencia aumentada a la peptidasa. |
| DE602006009631D1 (de) | 2006-05-10 | 2009-11-19 | Biocompatibles Uk Ltd | GLP-1 Peptide enthaltende kugelförmige Mikrokapseln, deren Produktion und deren Verwendung |
| EP2359808B1 (en) | 2006-08-09 | 2013-05-22 | Intarcia Therapeutics, Inc | Osmotic delivery systems and piston assemblies |
| WO2008056155A1 (en) | 2006-11-08 | 2008-05-15 | Zealand Pharma A/S | Selective glucagon-like-peptide-2 (glp-2) analogues |
| EP2157967B1 (en) | 2007-04-23 | 2013-01-16 | Intarcia Therapeutics, Inc | Suspension formulations of insulinotropic peptides and uses thereof |
| EP2187933A4 (en) * | 2007-08-16 | 2010-12-08 | St Vincents Hosp Sydney | AGENTS AND METHODS FOR MODULATING MACROPHAGE INHIBITORY CYTOKINE ACTIVITY (MIC-1) |
| CA2726861C (en) | 2008-02-13 | 2014-05-27 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Devices, formulations, and methods for delivery of multiple beneficial agents |
| ES2360782B1 (es) * | 2009-07-28 | 2012-03-12 | Grifols, S.A. | Medios para cultivo de células de mamíferos que comprenden sobrenadante de etapas del fraccionamiento de Cohn y uso de los mismos. |
| EP3323423B1 (en) | 2009-09-28 | 2020-06-17 | Intarcia Therapeutics, Inc | Rapid establishment and/or termination of substantial steady-state drug delivery |
| US20120208755A1 (en) | 2011-02-16 | 2012-08-16 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Compositions, Devices and Methods of Use Thereof for the Treatment of Cancers |
| JP6298044B2 (ja) | 2012-05-03 | 2018-03-20 | ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ | グルカゴン様ペプチド−２（ｇｌｐ−２）類似体 |
| EP2873422A4 (en) | 2012-07-10 | 2015-12-30 | Takeda Pharmaceutical | PHARMACEUTICAL PREPARATION FOR INJECTION |
| US9889085B1 (en) | 2014-09-30 | 2018-02-13 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Therapeutic methods for the treatment of diabetes and related conditions for patients with high baseline HbA1c |
| KR101576126B1 (ko) | 2014-12-29 | 2015-12-11 | 부경대학교 산학협력단 | αＡＬ１４ 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 신규 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물 |
| KR101669140B1 (ko) | 2015-04-28 | 2016-10-26 | (주)케어젠 | 항비만 및 항당뇨 효능을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
| MA44390A (fr) | 2015-06-03 | 2019-01-23 | Intarcia Therapeutics Inc | Systèmes de mise en place et de retrait d'implant |
| US10188135B2 (en) * | 2015-11-04 | 2019-01-29 | Stokley-Van Camp, Inc. | Method for inducing satiety |
| KR101887576B1 (ko) * | 2016-04-15 | 2018-08-13 | (주)케어젠 | 항비만 및 항당뇨 효능을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
| SG11201810102SA (en) | 2016-05-16 | 2018-12-28 | Intarcia Therapeutics Inc | Glucagon-receptor selective polypeptides and methods of use thereof |
| USD860451S1 (en) | 2016-06-02 | 2019-09-17 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Implant removal tool |
| USD840030S1 (en) | 2016-06-02 | 2019-02-05 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Implant placement guide |
| KR102502040B1 (ko) | 2016-12-09 | 2023-02-24 | 질랜드 파마 에이/에스 | 아실화 glp-1/glp-2 이중 효능제 |
| CN110225762A (zh) | 2017-01-03 | 2019-09-10 | 因塔西亚制药公司 | 包括glp-1受体激动剂的连续施用和药物的共同施用的方法 |
| WO2020223761A1 (en) * | 2019-05-06 | 2020-11-12 | The University Of Sydney | Methods for the fractionation of proteins |
Family Cites Families (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4203570A (en) | 1978-08-23 | 1980-05-20 | The Western States Machine Company | Power-operated loading gate for centrifugal machines incorporating an auxiliary drive device |
| US4546082A (en) | 1982-06-17 | 1985-10-08 | Regents Of The Univ. Of California | E. coli/Saccharomyces cerevisiae plasmid cloning vector containing the alpha-factor gene for secretion and processing of hybrid proteins |
| US4599311A (en) | 1982-08-13 | 1986-07-08 | Kawasaki Glenn H | Glycolytic promotersfor regulated protein expression: protease inhibitor |
| DE3382547D1 (de) | 1983-01-12 | 1992-05-27 | Chiron Corp | Sekretorische expression in eukaryoten. |
| JPS60501140A (ja) | 1983-04-22 | 1985-07-25 | アムジエン | 酵母による外因性ポリペプチドの分泌 |
| NZ207926A (en) | 1983-04-25 | 1988-04-29 | Genentech Inc | Use of yeast #a#-factor to assist in expression of proteins heterologus to yeast |
| US4745051A (en) | 1983-05-27 | 1988-05-17 | The Texas A&M University System | Method for producing a recombinant baculovirus expression vector |
| US4870008A (en) | 1983-08-12 | 1989-09-26 | Chiron Corporation | Secretory expression in eukaryotes |
| US4879236A (en) | 1984-05-16 | 1989-11-07 | The Texas A&M University System | Method for producing a recombinant baculovirus expression vector |
| US4931373A (en) | 1984-05-25 | 1990-06-05 | Zymogenetics, Inc. | Stable DNA constructs for expression of α-1 antitrypsin |
| DK58285D0 (da) | 1984-05-30 | 1985-02-08 | Novo Industri As | Peptider samt fremstilling og anvendelse deraf |
| US4766073A (en) | 1985-02-25 | 1988-08-23 | Zymogenetics Inc. | Expression of biologically active PDGF analogs in eucaryotic cells |
| US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| JP2523562B2 (ja) | 1985-10-25 | 1996-08-14 | ザイモジェネティックス インコーポレーテッド | 外来タンパク質を分泌することを目的としたｂａｒ１の使用法 |
| US4882279A (en) | 1985-10-25 | 1989-11-21 | Phillips Petroleum Company | Site selective genomic modification of yeast of the genus pichia |
| AU607690B2 (en) | 1985-12-24 | 1991-03-14 | Marion Laboratories, Inc. | Use of synthetic sulfated saccharides to enhance wound healing |
| US4935349A (en) | 1986-01-17 | 1990-06-19 | Zymogenetics, Inc. | Expression of higher eucaryotic genes in aspergillus |
| US5024947A (en) | 1987-07-24 | 1991-06-18 | Cetus Corporation | Serum free media for the growth on insect cells and expression of products thereby |
| WO1989001029A1 (en) | 1987-07-24 | 1989-02-09 | Cetus Corporation | Airlift insect cell culture |
| DK463887D0 (da) | 1987-09-07 | 1987-09-07 | Novo Industri As | Gaerleader |
| US5037743A (en) | 1988-08-05 | 1991-08-06 | Zymogenetics, Inc. | BAR1 secretion signal |
| AU4647889A (en) | 1988-11-18 | 1990-06-12 | Cetus Corporation | Insect signal peptide mediated secretion of recombinant proteins |
| GB8910962D0 (en) | 1989-05-12 | 1989-06-28 | Natural Environment Res | Novel baculovirus expression vectors and use thereof in the expression of foreign proteins in insects or insect cells |
| US5162222A (en) | 1989-07-07 | 1992-11-10 | Guarino Linda A | Use of baculovirus early promoters for expression of foreign genes in stably transformed insect cells or recombinant baculoviruses |
| US5077214A (en) | 1989-07-07 | 1991-12-31 | The Texas A&M University System | Use of baculovirus early promoters for expression of foreign genes in stably transformed insect cells |
| US5023328A (en) | 1989-08-04 | 1991-06-11 | The Texas A&M University System | Lepidopteran AKH signal sequence |
| US5155037A (en) | 1989-08-04 | 1992-10-13 | The Texas A&M University System | Insect signal sequences useful to improve the efficiency of processing and secretion of foreign genes in insect systems |
| DK300090D0 (da) | 1990-12-19 | 1990-12-19 | Novo Nordisk As | Fremgangsmaade til fremstilling af leadersekvenser |
| DK36392D0 (da) * | 1992-03-19 | 1992-03-19 | Novo Nordisk As | Anvendelse af kemisk forbindelse |
| US5990077A (en) * | 1995-04-14 | 1999-11-23 | 1149336 Ontario Inc. | Glucagon-like peptide-2 and its therapeutic use |
| DE69738695D1 (de) * | 1996-03-01 | 2008-06-26 | Novo Nordisk As | Peptid zur Appetitzügelung, dessen Zusammensetzungen und Verwendung |
-
1997
- 1997-02-27 DE DE69738695T patent/DE69738695D1/de not_active Revoked
- 1997-02-27 WO PCT/DK1997/000086 patent/WO1997031943A1/en active IP Right Grant
- 1997-02-27 EP EP08103786A patent/EP1975177B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-27 AU AU18715/97A patent/AU710818B2/en not_active Expired
- 1997-02-27 PT PT08103786T patent/PT1975177E/pt unknown
- 1997-02-27 JP JP53052497A patent/JP4064460B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-27 UA UA98084651A patent/UA70283C2/uk unknown
- 1997-02-27 DK DK97905000T patent/DK0891378T3/da active
- 1997-02-27 CZ CZ0273698A patent/CZ297338B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-02-27 ES ES01122701T patent/ES2306685T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-27 CA CA2246733A patent/CA2246733C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-27 IL IL12580597A patent/IL125805A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-02-27 HU HU9902670A patent/HU229234B1/hu unknown
- 1997-02-27 ES ES08103786T patent/ES2364705T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-27 EP EP10180925A patent/EP2295453A3/en not_active Withdrawn
- 1997-02-27 CN CN97193525A patent/CN1112367C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-27 EP EP01122701A patent/EP1231218B1/en not_active Revoked
- 1997-02-27 DE DE69740176T patent/DE69740176D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-27 DK DK08103786.3T patent/DK1975177T3/da active
- 1997-02-27 PL PL97328732A patent/PL187095B1/pl unknown
- 1997-02-27 AT AT01122701T patent/ATE395359T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-02-27 ES ES97905000T patent/ES2187756T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-27 AT AT08103786T patent/ATE505485T1/de active
- 1997-02-27 RU RU98117915/14A patent/RU2197261C2/ru active
- 1997-02-27 EP EP97905000A patent/EP0891378B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-27 BR BR9707807A patent/BR9707807A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-02-27 DE DE69717092T patent/DE69717092T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-27 KR KR1019980706861A patent/KR100611130B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-02-27 AT AT97905000T patent/ATE227737T1/de active
-
1998
- 1998-08-31 NO NO19984005A patent/NO323043B1/no not_active IP Right Cessation
-
2012
- 2012-10-12 CY CY201200011A patent/CY2619B2/el unknown
-
2013
- 2013-02-12 FR FR13C0009C patent/FR13C0009I2/fr active Active
- 2013-02-27 CY CY2013008C patent/CY2013008I2/el unknown
- 2013-03-12 NO NO2013006C patent/NO2013006I1/no unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ273698A3 (cs) | Farmaceutický prostředek s obsahem peptidu potlačujícího chuť k jídlu, jeho použití k léčbě onemocnění asociovaných s narušenou regulací chuti k jídlu | |
| US5912229A (en) | Use of a pharmaceutical composition comprising an appetite-suppressing peptide | |
| KR102002783B1 (ko) | 포도당 의존성 인슐리노트로핀 폴리펩타이드 유사물질, 이의 약학적 조성물 및 응용 | |
| AU2004273573B2 (en) | Albumin-binding derivatives of therapeutic peptides | |
| KR101193722B1 (ko) | 엑센딘 융합 단백질 | |
| TW201427993A (zh) | 用於治療肥胖之升糖素與ｇｌｐ－１共促效劑 | |
| US20060205037A1 (en) | Modified transferrin fusion proteins | |
| CA2196876C (en) | Trefoil peptide dimer | |
| KR20160007295A (ko) | 인슐린 아날로그 | |
| KR20190017017A (ko) | 프로테아제-내성 모노-지질화된 펩타이드 | |
| EP3888667A1 (en) | Glucagon analogs and methods of use thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20170227 |
|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20220227 |