CZ24299A3 - Použití aminů k výrobě léčiv pro prevenci proliferace tumorových buněk - Google Patents

Description

(54) Název přihlášky vynálezu:

Použití aminů k výrobě léčiv pro prevenci proliferace tumorových buněk (57) Anotace:

Řešení se týká použití sloučenin, schopných vytěsnit tritiovaný cis-N-cyklohěxyl-N-ethyl[ 3- / 3-chlor-4-cyklohexyl-fenyl / allyl l-amin z Jeho receptoru, to pro přípravu farmaceutlckých kompozic, použitelných při prevenci buněčné proliferace.

CZ 242-99 A3 · ·*··

9 9 · ·· »

·

99····· · ·· ·

9

9 9 9

Použití aminů k výrobě léčiv pro prevenci proliferace tumorových buněk t

bia s t _ t -5 c hn iky

Vynález se týká nové možnosti využití sloučenin, majících dobrou afinitu pro receptoryp na které ss váže cis -rí - c y kl o he xy 1 -N - e t hy 1- - (3 - c hl or - 4 - c y kl o h exylfenyl)allylj-amin, jakož i dalších nových sloučenin, majících tytéž vlastnosti.

Dosavadní stav techniky cis-K-řyklohexyl-K-ethyl-¹[3-(3-chlor-4-cykiohexylfenyl)- allyij-spiin, známý též pod kodovscí zkratkou CM 3 1747 nebo SR 31747 - zde nadále SR 31747 - je popisován v SP 376 850, kde je rovněž zjištění imunosupresivní aktivity této látky» Bylo zjištěno, že SR 31747 brání kanc srogennrm buňkám v proliferaci a v důsledku toho by se mohl vyznačovat antitumorální účinností·. Navíc bylo zjištěno, že SR 31747 má v

receptorové místa pso takové buňky.

Posléze bylo zjištěno,· že produkt, schopný nahradit tritiovaný SR 31747 ns jeho receptorech na tumorálních buňkách rusí buněčnou proliferaci» Zvláště pak bylo zjištěno, Že sloučeniny, schopné nahradit tritiovaný SR 31747 (nadále zde 3

K-SR 31747) v jeho receptorových místech mají buněčnou antiproliferacní účinnost»

Takže podle jednoho aspektu se tento vynález týká využití sloučenin, schopných nahradit tritiovaný cis-N-cyklohexylN-ethyl-3-|ý3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-allyl (-amin ne jeho receptorech 'při přípravě farmaceutických kompozic, určených k bránění vývoje buněčné proliferace.

Kapacita sloučenin, předpokládaných k využití dle tohoto vynálezu při nahrazování tritiovaného SR 31747 na jeho receptorech může být snadno stanovena biochemickou cestou sa využití fí-SR 31747 a jeho· fixace na buňky.

• 00 0*0

0

0* ··

000«

Toto stanovení lze provést s tumorálními buňkami, zvolenými odpovídajícím způsobem, s výhodou mezi buněčnými vazbami, snadno proliferujícími in vitro,,například jako jsou myelomové lidské buňky, karcinomu ledvin nebo plic lidí, nebo dokonce karcinomnícti žena kého prsu,

V kontextu s tímto vynálezem, pak se zřetelem na možnost provedení stanovení se standardizovaných podmínek, dovolujících získat konstantní výsledky, reprodukovatelné, byla svolena sestava buněk lidského ženského tumoru MCR-T.

Rovněž se zřetelem na tento vynález byl pro srovnávání 3 zvolen H-SE 31747, va kterém je tritium vázáno na vinylenovou vazbu, ale SE 31747 může být značen jakýmkoli libovolným způsobem, protože značení neslouží k ničemu jinému, nes ke sledování vypuzení produktu z receptorů,

Stanovení kapacity nahradit H-SE 31747 na jeho receptorech přítomných na buňkách, zvláště sestavy buněčné iICF-7, se provádělo využitím testů vazeb totálních i specifických.

Podstata vy nálezu

Podle tohoto vynálezu každý produkt, který podle předběžných testů je schopný vypudit ^H-SR 31747 z jeho receptorů se může použít při přípravě farmaceutických kom* pozic s buněčnou atitiproliferací* Es prvém místě SE 31747 je schopný vypudit H-3R 31747 z jeho receptorů a má značnou inhibiční aktivitu se zřetelem na buněčnou proliferaci. Přesněji řečeno má tento vynález za cíl využít sloučeninu, schopnou nahradit cis-N-cyklohexyl-N-ethyl-^-(3-chlor-4-cyklohexylienyl)~allylj-amin, a to tritiovaný na jeho receptorech, a ta je zvolena ze skupiny tvoří , a) aminy obecného vzorce Ϊ

Rn (I)

-3ft · · · · ft » « · • · *· ftft ♦ · ftft ft

I · » « ft « · «ftft » · ·· ftft kde znamená vodík nebo halogen, mámená cyklohexylovou skupinu, :name uhlíku,

R_: £

R_Q znamená cykloalkylovou skupinu se třemi až šesti atomy znamená vodík, alkylovou skupinu s jedním až šesto atomy uhlíku nebo skupinu cykloalkylovou se třemi až šesti atomy uhlíku,

A znamená některou ze skupin dále uvedených vzorcůt -G0.CH._?-, -CH(Cl)-CH_?~, -CR(OH)-CH₉-, -CH._?-GH=GH-,

-C3Cb) farmaceuticky přijatelná soli aminů, obecného <>vzo co I kde

C)

R

Z la (II)

A_g znamená některou se skupin dále uvedených vzorců: -gh-ch₂-, -gh(oh)-ch₂~, -CK=CH-, -C^CR^_a ^zn3ínená vodík či halogen,

R~ znamená cyklohe.xylovou skupinu <- Q

d)

s) sdiční soli farmaceuticky přijatelné kyseliny s aminy obecného vzorce II aminy obecného vzorce III

-A_ta~CK₂-R kde (III)

4b

Rp_o znamená vodík nebo halogen

R^, znamená cyklohexylovou skupinu «44 4 »

4«

-4R znamená vodík nebo alkylovou skupinu s jedním až třemi atomy uhlíku,

R,, znamená alkylovou skupinu 3 jedním až třemi atomy uhlíku, shodnou či líaící se od skupiny alkylové dle E_b

R-_b a spolu dohromady a o dusíkovým atomem, na kterém jsou navázány tvoří heterocykličkou skupinu s pěti až sedmi Členy, zvolenou ze skupin piperiúinové, morfolinovs a pyrrolidinový,

A, znamená skuninu -GK_o.CK_n- nebo -GH=CHD ~ t_ ti

f) farmaceuticky vhodné soli kyselin s aminy obecného vzorce III

g) aminy obecného vzorce IV

kde

Ar^ znamená skupinu fenylovou, naftylovou či substituovanou fenylovou nebo substituovanou naftylovou, n znamená celé kladná císló od 1 až do 4

RB znamená skupinu alkylovou, a v takovém případě znamená

JI ne do RB a.

jednoduchou vazbu mezi RA. a RG, totožnými či lišícími se, znamenajícími nezávisle jeden na druhém vodík, nebo halogen, skupinu alkylovou, případně substituovanou jedním či více halogeny si alkoxy'lovou

RG tvoří dohromady můstek -(Crý) » kde p znamená

0, 1 nebo 2 a v takovém případě znamená RA skupinu hydroxylovou nebo alkoxylovou, umístěnou v poloze 5 odpovídajícího aromatického jádra nebo RA znamená vodík či halogen v jakékoli poloze aromatického cyklu, nebo

4494

4 4

-59 9 1

I ·9 99 1

RB a RC tvoří spolu dohromady můstek -CH=, přičemž vazba, kterou je vázán na aromatický cyklus, jest vazbou jednoduchou a v takovém případě znamená A skupinu CRB. s RA znamená vodík, skupinu hydroxylovou či alkoxylovou v poloze-5 aromatického jádra, ns které je umístěna, nebo

RB a RC tvoří soolu dohromady vazbu a tehdy A znamená * c seskupení

-C-CH=± n

s tím, že karbonylová skupina je vázána ns kyslík a vazba, spojující A s odpovídajícím uhlíkem bočného řetězce je vazbou dvojnou a v takovém případě znamená RA vodík nebo skupinunhydroxylovou nebo alkojíylovou, pokud R3 znamená skupinu alkylovou, znamenají X a Y vždy dva vodíkové atomy nebo tvoří spolu dohromady s uhlíkovým atomem, ns kterém jsou vázány, skupinu C-0 a RB znamená vodík nebo alkylovou skupinu, pokud R3 a RC tvoří můstek, X a Y znamenají dva atomy vodíku a RD, které neexistuje, jsou-li všechny vazby uhlíku^-., na kterém tato skupina, je, vazbami jednoduchými, znamená vodík, to s vysvětlením, že

Výrazy alkylová a alkoxylová skupina znamená takovou skupinu přímou nebo větvenou, obsahující jeden až šest atomů uhlíku, výraz substituovaný znamená substituenty na fenylovém nebo nsftylovém cyklu, a to jeden až tři, jako jsou skupiny hydroxylové, alkylové, případně substituované jedním či více halogeny,skupiny alkoxylové či halogeny,

h) soli a solváty farmaceuticky přijatelných solí aminů obecného vsorce IV,

i) ' (V)

kde •

ftft ·· • · « 4 · ·

-6 ·· >·· · · «· * ♦ · *·· ·** *·· · « «· ··« *· ·· kae

Ar₂ θ totožná Či různé, znamenají vzájemná nezávisle skupinu fenylovou, naftylovou, nebo fenylovou, subsstituovanou jednou až třikrát substituentem, jako je skupina hydroxylová, alkylová a jedním až šesti atomy uhlíku, alkoxylová, halogen a alkylová skupina, substituovaná jednou či vícekráte halogenem,

X* a Y* -znamenají každý po dvou atomech vodíku nebo tvoří spolu dohromady oxoskupinu,

-?Ů3 znamená alkylovou skupinu s jedním až šegti atomy uhlíku, jejich isomery ve formě Čisté nebo odpovídajících směsí,

j) soli a solváty farmaceuticky přijatelných aminů vzorce V

k) aminy obecného vzorce VI

(CKjm'-CH (CH?) ' £· X / «Λ (VI) kde

JC

Ώ lc znamená vodík nebo alkylovou skupinu s jedním až třemi atomy uhlíku, a R,> totožné či různé, znamenjí vodík, skupinu hydroxylovou, alkylovou s jedním as třemi atomy uhlíku, alkoxylovou s jedním až třemi atomy uhlíku, halogen nebo nitrilovou skupinu, V^ a tvoří dohromady dvojnou vazbu, vázanou na atom kyslíku nebo i na skupinu hydroxyiminovou- lí-OH nebo jsou spojeny dohromady za vzniku ethylendioxy-řetezce -O-CH₂-CH₂-O,

-7• · ·· 4 4 ·· ·· »44 4 * ·4 * 4 4 ·

4 4 4 4 · ♦ 4 44 4 « 4444 4444444«

znamená přímou vazbu, kyslíkový atom nebo skupinu methylenovou či ethylenovou, m znamená 0, 1 nebom2, n znamená celé kladné číslo οά 1 do 5

1) adicní soli farmaceuticky přijatelných kyselin s aminy vzorce VI '

m) aminy vzorce Vil (VII) (CÍL·,) , 2 n

kde r r f f m a n znamenají 1 nebo 2,

C., znamená cykloalkylovou skupinu se třemi až sedmi atomy v

uhlíku,

Ar^ znamená arylovou ci heterosrylovou skupinu, zvolenou mezi skupinami fenylovou, nsftylovou nebo thienylovou, případně mono- až triaubstituovanou halogenem, skulinou trifluormethylovou, alkylovou s jedním až třemi atom; uhlíku a alkoxylovou skupinou s jedním až třemi atomy uhlíku,

n) adiční soli farmaceuticky přijatelných a aminů obecného vzorce VII kyselin

o)

kde jeden ze symbolů L a i/snamená vodík a druhý je skupiny vodík, fluor, chlor nebo nitroskupina, zvolen ze nebo oba • 4

-*θ ·· ·»*· *

4 4 « 4 · · 4 · 4 · ·· 4*

4 4 4 * 4» ·

444 4·· • 4 »4 ůva uvedené symboly znamenají po atorau chloru, Z znamená skupinu ;

(i) struktury (l)

(1)

KCí

G^ znamená alkylovou skupinu s jedním sS šesti atomy uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se třemi az sedmi atomy uhlíku &2 znamená alkylovou skupinu s jedním až- šesti atomy uhlíku, cykloalkylalkylovou skupinu se třemi až šesti atomy uhlíku v cykloalkylové a s jedním as třemi atomy uhlíku v alkylové části, cykloalkylovou skupinu se třemi es sedmi atomy uhlíku, dále skupinu fenylovou, beazylovou, fenethylovou, případné substituovanou ns bazénovém jádře halogenem, methoxylovou skupinou nebo nitroskupinou nebo i G^ a 0^ spolu dohromady a s atomem dusíku, na kterém jsou vázány tvoří nasycený heterocyklus s jedním atomem dusíku, vázanou nebo charakteru spiro s obsahempěti až deseti atomu uhlíku, skupinu morfolinovou, piperasinovou, nesubstituovanou nebo substituovanou v poloze 4 alkylovou skupinou s jedním až čtyřmi atomy uhlíku, skupinou fenylovou, bensylovou nebo fenethylovou s tím, že fenylový zbytek může být případné substituován halogenem, methoxylovou skupinou nebo nitroskupinou, dále skupinku, svolenou s tšchto: 4-feny1-1,2,3,6-tetrshydropyridin-l-yl, 4-feny1piperidino, 4-benzylpiperidino, 4-fenethylpiperidino s tím že fenylový zbytek uvedených skupin může být nesubstituovaný nebo substituovaný halogenem, methoxylovou skupinou nebo nitroskupinou, (ii) struktury (2) » ftftftft ft « ftftft

-9(2) ·· ft· k ·· 4 ftftft ftft* • · ft· ··

G„ znamená vodík,

kde ‘4 nebo také G spolu dohromady tvoří vazbu nebo dvě vazby toho druhu, še tvoří s uhlíkovými atomy, na kterých jsou vázány skupinu vinylenovou nebo ethinylenovou,

G_ znamená některou z tehhbo skupin: fenylová, benzylová, fenethylová, přičemž fenylový zbytek těchto skupin může být nesubstituovaný nebo substituovaný halogenem, msthoxylcvou skupinou, Či nitroskupinou

Gr znamená skuoinu hvdroxylovou nebo vodík,

G- a Gy znamenají po vodíku nebo mohou dohromady tvořit vazbu, nebo. také

G^ ε Gg dohromady tvoří skupinu n-pentylenovou, (iii) struktury (3li.·

í.-ř!

oe

(3)

G^ a mají významy, jak byly zde uvedeny výše, alk znamená skupinu alkylovou s jedním až šesti atomy uhlíku nebo skupinu alkenylovou se třemi až šesti atomy uhlíku,

Gg znamená skupinu 1-adamantylbvou, cykloalkylovou se třemi až šesti atomy uhlíku, cykloalkylalkylovou se třemi až sedmi atomy uhlíku v cykloalkylové a ε jedním až třemi atomy uhlíku v alkylové části, nebo skupinu z tcbhto dalších: fenylovou, 'oenzylovou, 2-fenethylovou s tím, že benzenová jádra těchto skupin mohou být substituována halogenem, methoxylovou'skupinou nebo nitrokupinou, nebo právě tak alk a Gg, totožné Či různé, mohou znamenat skupinou alkylovou se čtyřmi as šesti atomy uhlíku, ale s tím, •10a ·

9999 9 I

9 9 9 1 »» a · ♦ · ♦ · · <99 999

9

99

9» že Gg neznamená cykloalkylovou skupinu ae třemi ež Šestí atomy“ uhlíku, pokud Lznamená vodík, atom chloru ci fluoru,

L^znamená vodík a alk znamená alkylovou skupinu 3 jedním až šesti atomy uhlíku,

p) farmaceuticky přijatelné seli a solváty aminů obecného vzorce VIII»

Sloučeniny, jejichž použití je nárokováno v tomto vynálezu, byly zčásti popsány v literatura»

Zvláště pak aminy obecného vzorce I a jejich farmaoeuticky přijatelné soli j3ou popsány v EP 376 850; .

Uvedená aminy lze připravit, jak se to v tomto podkladu popisuje a lze je potom izolovat ve formě odpovídajících bází, solí bází s/nebo solvátů. Aminy obecného vzorce (II) a jejich farmaceuticky přijatelné soli jsou popsány v EP 461 9S6, lže je připravit, jak to bylo popsáno v uvedeném podkladu a pak izolovat ve formě bází, solí ε/nebo solvátů. Aminy obecného vzorce III a jejich farmaceuticky přijatelné soli jsou popisovány ve Práno»pat.spise 2 249 859· Také tyto aminy je možno připravovat, jak to bylo popsáno a izolovat potom vo formě bází, solí a/nebo solvátů. Aminy obecného, vzorce (IV) a jejich farmaceuticky přijatelné soli jsou popsány v EP 702 010; uvedené aminy lze připravovat, jak to bylo popisováno v uvedeném podkladu s izolací va formo bání, solí a/nebo solvátů. Aminy pbecneho vzotce (V) a jejich farmaceuticky přijatelné soli byly popsány v EP 707 004,- lze je připravit, jak to bylo tamže popsáno a isolovat ve formě bází, solí a/nebo solvátů»

Aminy obecného vzorce (VI) a jejích farmaceuticky přijatelní soli jsou popisovány v EP 581 677, také tyto aminy lze připravit, jak.se to v podkladech popisuje a izolovat pak ve formě volných bází, solí a/nebo solvátů· Aminy obočného vzorce (VII) e jejich farmaceuticky přijatelné soli jsou popisovány v WO 95/15 948, lze ,j.e připravit, jak to bylo tanze popsáno a izolovat ve formě bází, solí a/nebo solvátů.

Sloučeniny skupin (o) a (p) jsou zvláště zajímavá, nóvá a představují jeden předmět tohoto vynálezu? · ·· 0«00 » 0 · • 0 ·0

-11*0 0«

I 0 0 0 » 0 0 0 ·»« 0·0 • 0 «0

Právě tak se vynález týká nových sloučenin, nahrazujících týmž způsobeni SE 31747 v jeho receptorech a o kterých se předpokládá, že nají pozoruhodné antiproliferacní vlastnosti a to se týká i farmaceutických kompozic, které je obsahují. Zvláště pak je předmětem tohoto vynálezu amin svolený mezi látkami (A) vzorce kde

(Vílí) jeden za symbolů L a L'znamená vodík a druhý je zvolen ze skupiny, kterou tvoří vodík, fluor, chlor nebo nitroskupina. nebo L a l' v obou případech mohou znamenat chlor,

Z znamená (i) skupinu struktury ¢1)

/“1 (1) až šesti atomy uhlíku cykloslkylalkylove u v cykloalkylová a s kde znamená alkylovou skupinu s· jedni:

nebo skupinu cykloalkylovou se třemi až sedmi atomy uhlíku, znamená alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku, skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku jedním as třemi atomy uhlíku v alkylosti, cykloalkylovou skupinu se třemi sa sedmi atomy uhlíku, skupenu fenylovou., benzylovou, fenethylovou, pří. ií pádně substituované na benzenovém jádře halogenem, methoxylovou skupinou ci nitroskupinou, nebo také

G, a spolu s dusíkovým atomem, na kterém jsou vázány, tvoří nasycený heterocyklus a jedním dusíkem v přemostění nebo typu spiro s obsahem pěti až deseti atomů uhlíku, skupinu morfolinovou, piperazinovou nesubstituovanou nebo substituova»· ···

-129 9 99 9

I 9 · · ** ··· • β

9 * * · · ·

999 »·· • « ·· ·· nou v poloze -4- alkylovou skupinou s jedním sž čtyřmi atomy uhlíku; skupinu fenylovou, benzylovou nebo fenethylovou, přičemž benzenový zbytek může být případně substituován halogenem, skupinou methoxylovou nebo nitroskupinou, dále skupintf zvolenou s těchto: 4-fenyl-l,2,3,6-tetrahydropyridin-l-ylovou, 4-fenylpiperidinovou, 4-benzylpiperidinovou, 4-fenethylpiperidinovou, přičemž fenylový zbytek těchto skupin může být nesubstituován nebe substituován jedním

.kos

G^ znamená vodík nebo hydroxylovou skupinu,

G, znamená vodík, nebo G^ a G^ spolu dohromady představují jedni: nebo dvě vazby toho druhu, že tvoří s atomy uhlíků, na kterých jsou vázány, vinylenovou nebo ethinylenovou skupinu,

G- znamená skupinu fenylovou, benzylovou, fenethylovou, když benzenové jádro těchto skupin může být nesubstituované nebo substituováno halogenem, methexylovou skupinou nebo nitroskupinou, ΰθ znamená skupinu hydroxylovou. nebo vodík, ^GS mámenají vodík nebo mohou spolu tvořit vazbu nebo G^ a G& tvoří dohromady skupinu n-pentylenovou,

Je-li G^ skupinou hydroxylovou, mohou G- a G? tvořit vazbiiu pouze v tom případě, znamená-li G^ jinou skupinu, než ben.zylovou nebo fenethylovou, připadne substituované, (iii) skupinu, struktury (3) g_q

(3)

Rdí

G^ a G^ mají významy, jak zde již byly výše uvedeny, alk znamená alkylovou-.skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku t* φφφφ • φ φφ··

Φ φφ φφ φ φ φ φ φ φ « φφφφ φ φ φφφ φφφ φ · φ φφφ · · · · nebo alkenylwau skupinu se třemi až šesti atomy uhlíku, znamená skupinu 1-adamantylovou, cykloalkylovou se třemi o sž sedmi atomy uhlíku, cykloalkylalkylovou se třemi aa- sedmi atomy uhlíku s cykloalkylové a ε jedním sš třemi' atomy uhlíku v alkylové části, nebo skupinu fenylovou, benzylovou, 2-fen ethylovou s tím, Že benzenové jádro těchto skupin může být nesubstituováno nebo substituováno halogenem, methoxylovou skupinou či nitroskupinou, nebo pokud alk 3 G_n, totožná či různé, znamenají skupinu

O glkylovou se čtyřmi e.ž šesti atomy uhlíku, Gg neznamená cykloalkylovou skupinu se třemi až šesti storny uhlíku, anamená-li L vodík nebo fluor ci chlor, L znamená vodík s alk znamená alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku.

(B) 3 vynález se týká solí a solvátu, farmaceuticky přijatelných, odvozených od sloučenin vzorce VIII.

V těchto nových sloučeninách vzorce VIII je halogenem s výhodou chlor nebo fluor, jeden ze symbolů L a L'znamená vodík a druhý fluor, chlor nebo nitroskupinu, jakož i L a i/ mohou být totožné a znamenají pak vodík nebo chlor. Tyto sloučeniny jsou. obzvláště výhodné. A mezí nimi jsounzcela obzvláště výhodné ty látky obecného vzorce VIII, kde Z zněměná (i) skupinu vzorce (1*) . OD

kde zněměná alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se třemi až sedmi atomy uhlíku, znamená alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku, cykloalkylalkylovou skupinu se třemi až sedmi atomy uhlíku v cykloalkylové části a s jedním až tíeipii v alkylové části nebo jednu ze skupin: fenylovou, benzylovou, 2-fenylethylovou s tím, že benzenové jádro těchto skupin může být substituováno případně halogenem, methoxylovou skupinu či nitroskupinou,

-14*· ···· 9 9 9 999 ·

« ·

I ·· ·*

9 9 4 9

9 9 9 4

9 999 999

9 9

499 «fe ·· nebo i G₁ a G₂ za tvorby kruhu s dusíkem, ku kterému jsou vázány, tvoří skupinu morfolinovou, pyrrolidinovou, piperidinovou, hexahydroazepinovou nebo některou ze skupin, jako je substituent 4-feny1-1,2,3,6-tetrahydropyridin1-ylový, 4-fenylpiperidinový, 4-benzylpiperidinový, 4-fenethylpiperidinový s tím, ze fenylová skupina těchto substituentů může být nesubstituována či substituována halogenemm skupinou methoxylovou nebo nitroskupinou, kde (ii)

G^ ' a G^'znamenají v obou případech vodík, nebo spolu tvoří vazbu v konfiruraci trans, nebo s výhodou cis,

Gg a G? 'tvoří spolu dohromady skupinu 1,5-pentylenovou, nebo (iii) skupinu vzorce (3*)

kde

G^*a G^*mají významy, jak zde #iž byly výše uvedeny, Alk znamená alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku,

Gq'znamená skupinu 1-adamantylovou, fenylovou, benzylovou nebo 2-fenylethylovou, nebo také Alk a G_& 'jako substi4 tuenty totožné znamenají v obou případech alkylovou skupinu se Čtyřmi až šesti atomy uhlíku, jakož i jejich soli a solváty farmaceuticky přijatelné lze označit za výhodné.

Tyto nové sloučeniny obecného vzorce VIII lze připravit postupem, který se vyznačuje, že se v * bud působí na funkční derivát kyseliny cyklopropankarboxylové vzorce IX • · ·· «·4· «

···

* «

··» • · · • » · ·« * ·

kde L a i/mají významy, jak zde již byly uvedeny, aminem obecného vzorce X

H-N

\ (X) ve kterém G^ a G^ mají zde již výše uvedené významy, načež se získaný amid obecného vzorce XI

(XI) redukuje za vzniku aminů obecného vzorce VIII, kde Z znamená skupinu struktury (1), a ty se isolují jako volné báze nebo ve formě odpovídajících farmaceuticky vhodných solí kyselin, anebo se působí na sloučeninu vzorce XII í

EU

kde L a ί/mají zde již uvedené významy, formaldehydem a aminem obecného vzorce XIII nebo XIV \/0₆ (XIII) .Z °5

HH alk

Z

(XIV & případně se takto získaný produkt obecného vzorce VIII,

A * 9

-16kde Z má strukturu (2) nebo (3), nebo G^ a G^ spolu dohromady znamenají dvě vazby tvořící s atomy, na kterých jsou vázány, skupinu ethinylenovou, hydrogenuje použitím dvou molů nebo jednoho molu vodíku s úmyslem izolovat sloučeninu odpovídající vzorce VIII, kde Z má strukturu (2) nebo (3), nebo G^ a G^ znamenají oba dva v tom kterém případě atom vodíku, nebo dohromady vazbu, tvořící se dvěma atomy uhlíku, na kterých jsou vázány, vinylenovou skupinu, nebo se takto získaný produkt struktury VIII, kde Z má strukturu (2) a G^ znamená fenylovou, G^ hydroxylovou skupinu a G? znamená vodík, dehydro genuje za vzniku sloučeniny vzorce VIII, kde Z má strukturu (2), kde G^ znamená fenylovou skupinu a Gg spolu s G? dohromady tvořá vazbu s tím, že tyto sloučeniny se mohou izolovat ve formě volných bází nebo jejich solí či solvátu, farmaceuticky přijatelných, anebo se působí na acetofenonový derivát vzorce (XV)

kde I a L*msjí zde již výše uvedené významy, formaldehyde, a aminem vzorce XIII nebo XIV, jak zde již byly výše uvedeny, načež s« takto získaný produkt vzorce XVI

·· *«*« fl · ·

·>

• «4 fl * · » · «« « ··fl • Á tfl fl · kde alkV G^» ^Gg, G? a Gg mají zde již výše popsané významy, redukuje v místě ketonické skupiny, tak, aby bylo možno izolovat sloučeninu, odpovídající vzorci VIII, kde Z má strukturu (2) nebo (3) nebo G^ znamená hydroxylovou skupinu a G^ znamená vodík, načež se případně produkt, kde v takto získané struktuře znamená Z strukturu (2) a G^ znamená fenylový zbytek, Gg hydroxy lovour.skupinu a G? vodík, dehydratuje za vzniku sloučeniny vzorce VIII, kde Z má strukturu (2), kde G,j znamená fenylový zbytek a Gg spolu s G^ tvoří vazbu. Uvedené sloučeniny lze získat ve formě bází volných nebo ve formě některé ze solí farmaceuticky přijatelných kyselin, nebo lze převést případně volné báze vzorce VIII na odpovídající farmaceuticky přijatelné soli.

Reakce funkčního derivátu kyseliny vzorce IX a aminu vzorce X se provádí podle klasických postupů takových amidů. Jako funkční derivát kyseliny vzorce IX jakákoli, látka, obvyklá v chemii peptidů, například chlorid, anhydrid nebo smíšený anhydrid, třeba s monoethylesterem kyseliny uhličité (získaný reakcí kyseliny vzorce IX s ethylesterem kyseliny chlormravenčí), může to být dále ester aktivovaný nebo aktivovaný amid. Pokud se jako funkční derivát použije odpovídající chlorid či anhydrid, může se s výhodou pracovat za přítomnosti terč,aminu, například trimethylaminu.

Redukci sloučeniny vzorce XI lze právě tak provést za klasických podmínek převádění amidu na amin za použití redukčního činidla hydridu kovu, třeba hydridu hlinitolithného nebo boritolithného. Reakce acetylenových derivátů vzorceXII nebo acetofenonových derivátů vzorce XV s aminy vzorců XIII a XV za přítomnosti formaldehydu se provádí za známých podmínek Mannich-ovy reakce.

Redukce sloučenin vzorce VIII, kde Z má jednu fce struktur (2) nebo (3), kde G^ a G^ tvoří dvě vazby, se provádí hydrogenaváním za použití 1 molu vodíku, má-li se připravit látka vzorce VIII (Z má strukturu 2 nebo 3, kde G^ a G^ znamenají vazbu v uspořádání cis, nebo použitím

I ♦

I · « β ·

-18.

•» **«· ·« β ♦ · · · · ·· • · · φ · * · • φ ♦ · · » • ♦ · · · φ·φφ *«* ·· *·· dvou molů vodíku, mají-li se získat látky nasycené

Redukce sloučenin vzorce XVI s úmyslem získat sloučeniny vzorce VIII, kde Z má jednu ze stri&ur (2) nebo (3) nebo G^ znamená hydroxylovou skupinu a G^ znamená vodík, se provádí klasickými postupy. Pokud se počítá se získáním sloučeniny s hydroxylovou skupinou se specifickým uspořádáním na chirálním uhlíkovém atomu, lze využít stereospetifického redukčního činidla·

Má-li být hydroxydeiivát dehydratován za vzniku sloučeniny vzorce VIII, kde Z má jednu ze struktur (2) nebo (3), kde G^ a G^ tvoří vazbu, nehraje zde stereochemie Žádnou úlohu a redukci sloučeniny vzorce XVI lze provést například hydridem boritosodným.

Případné dehydratování slouóenihy vzorce VIII, kde Z znamená strukturu (2) nebo (3), kde G^ znamená hydroxylovou skupinu a G^ znamená vodík, se provádí za přítomnosti činidla nebo přístroje, které podporují eliminování a/nebo odchycení vody, jako je například použití nástavce Dean-Stark.

Konfigurace takto získané sloučeniny vzorce VIII nena^ sycené má uspořádání trans. Tuto látku lze opět hydrogenovat při přípravě aminu vzorce VIII, kdesZ má jednu ze struktur (2) nebo (3), kde a G^ znamenají po vodíku·

Výchozí kyseliny vzorce IX a jejich, funkční deriváty, jakož tedy i amidy vzorce XI, jsou látkami novými, které lze připravit za použití kyseliny 4-(4-cyklohexyl)-3,5-L-l*-fenyl4-oxomáselné jako výchozí látky.

Lépe lze kyseliny vzorce IX získat redukcí keto-skupiny kyseliny 4-(4-cyklohexyl-3_>5-L-L*-fenyl)-4-oxomáselné, kde L a I* mají významy, zde již dříve uvedené, aby se tak získala kydelina 4-(4-cyklohexyl-3,5-L-L*-fenyl)-4-hydroxymáselná, a ta se převede na lakton· Posléze uvedený se chloruje a převede na ester kyseliny 4-bhlor-4-(4~cyklohexyl-3,5-L-l/-fenyů)-máselaé, ze ,terého se potom dále získá cyklizací kyse_ liny cyklopropankarboxylová IX,

Kyseliny 4-(4-cyklohexyl-3,5-h-l/-fenyl)-4-oxomáselné, kde 1 a L mají významy zde již výše uvedené, se připravují takto:

-19 · • · « · ♦ 9 9 ·

pokud L a I»'znamenají po vodíku, pak dle Buu-Hoi-e a spol., Bull.Soc.Chim.France 1944. 127, pokud L znamená vodík a I»'znamená chlor, pak dle Krausz-e a spol. Arzneimittelforsh. 24, 1364-1367 (1974), BE 750 233, pokud L znamená vodík a L'znamená nitroskupinu, podle BE 750 233,

Pokud L a L' znamenají v obou případech chlor, podle Krausz-e a spol., Arzneimitelforsch. 24, 1364-1367 (1974), pokud L znamená vodík a L'znamená fluor, pak katalytickou hydrogenaci kyseliny 3-(4-cyklohexyl-3-fluor)-benzoylakrylové dle JP 7 5770/71 a DE 2 103 749.

Právě tak lze připravit sloučeniny vzorce IX postupem, kdy se redukuje kyselina 4-oxomáselná vzorce XVII

-CQ-CI^CHgCOOH (XVII) kde L a L*mají zde již popsané významy, a to borohydridem alkalického kovu, a cyklisuje se takto získaná 4-hydroxyXVIII máselná kyselina vzorce > L

?^H

-CHCHgCHgCOOH (XVIII) zahříváním za odštěpení molekuly vody a na takto získaný lakton vzorce XIX

(XIX) se dále působí thionylehloridem s tím, že se izoluje po další reakcí s alkanolem s< jedním až čtyřmi atomy uhlíku ester vzorce XX

kde alk* znamená alkylovou iskupinu s jedním až čtyřmi atomy uhlíku. Dále se cyklizuje takto získaná sloučenina vzorce XX zahříváním za přítomnosti kalium-terc.-butylátu a izoluje se takto kyselina cyklopropankarboxylová vzorce IX.

Kyseliny vzorce IX, jejich soli, funkční deriváty, zvlásté pak chlorid, anhydrid a smíšený anhydrid s monoalkylesterem kyseliny uhličité s jedním až Čtyřmi atomy uhlíku v. alkylové skupině, jakož i amidy vzorce XI jsou látkami novými a představují jeden předmět dle tohoto vynálezu.

Rovněž se tento vynález týká sloučeniny vzorce XXI

L

O-Vf (XXI) kde L a I'mají významy, jak zde již byly uvedeny a W znamená skupinu hydroxylovou nebo vzorce kde

JJ

G, znamená alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku 1 _w nebo cykloalkylovou skupinu se třemi az sedmi atomy · uhlíku

G₂ znamená skupinu alkylovou s jedním až šesti atomy uhlíku, cykloalkylovou se třemi až sedmi atomy uhlíku, cyklon alkylalkylovou skupinu se třemi až šesti atomy uhlíku v ·* 4 4 4 ··

4 4 · 4 ·· 4 4 4 4

4 4 4 · 4 · 4 4 4 4

4 4 · « 4 · »4« 414 • 4 4 4 4 4 4

4444444 44 444 4 4 44

-21cykloalkylovém zbytku a jedním až třemi atomy uhlíku v alkylovem zbytku, dále skupinu fenylovou, beazylovou, fenethylcvou, případně substituovanou na aromatickém jádře halogenem, methoxylovou skupinou či nitroskupinou, nebo G^ a G^ tvoří spolu dohromady s dusíkovým atomem, na kterém jsou vázánygi nasycený heterocyklus s jedním atomem dusíku, s přemostěním nebo uspořádáním spiro s obsahem pěti až deseti atomů uhlíku, skupinu morfolinovou, piperazinovou nesubstitúovanou či substituovanou v poloze 4 alkylovou skupinou s jedním aŽ čtyřmi atomy uhlíku, skupinou fenylovou, benzylovou nebo fenethylovou s tím, že benzenové jádro může být substituováno halogenem, methoxylovou skupinou Či nitroskupinou, dále skupinu 4-feny1-1,2,3,6tetrahydropyridin-l-ylovou, 4-fenylpiperidinovou, 4-bengylpiperidinovou, 4-fenethylpiperidinovou s tím, že fenylové zbytky v těchto skupinách mohou být nesubstituované nebo substituované halogenem, methoxylovou skupinou či nitroskupinou,:, právě tak jako solí alkalických kovů, sekundárních a terciárních aminů, jakož i funkčních . derivátů kyselin vzorců XXI, kde W znamená hydroxylovou skupinu.

Ze solí alkalických kovů sloučenin vzorců XXI, kde W znamená skupinu hydroxylovou, lze uvést jako zvláště výhodnou sůl sodnou, tedy W = ONa, zatím co ze solí aminů sekundárních a terciárních lze uvést soli trimethylaminu, tedy W = O“N⁺(CH^)-j a triethyiaminu, tedy W = které lze označit za obzvláště výhodné. Z funkčních derivátů kyselin vzorce XXI, kde W znamená hydroxylovou skupinu, jsou výhodnými látkami zvláště chloridy, tedy W = Cl, anhydridy, smíšené anhydridy s nějakou karboxylovou či sulfonovou kyselinou, zvláště s monoalkylesterem kyseliny uhličité, kde alkylový podíl má jeden až čtyři atomy uhlíku, tedy W = -0-C00 alk*, kde alk*znamená alkylovou skupinu s jedním až čtyřmi atomy

-22444444 Μ 4 «* «4 • 44 4··· 4*44

4444 4 « 4 4*4 4 * 44* 4 4 4 444444

4 4 4 4 · 4 «444 *4« ·♦ 4«« 44 «· uhlíku, s výhodou pak skupinu ethylovou, nebo s kyselinou p-toluensulfonovou, přičemž aktivované estery jsou zvláště výhodné.

Sloučeniny vzorce 2X1, kde halogenem je s výhodou chlor nebo brom, a jeden ze symbolů L a L'znamená vodík a druhý fluor, chlor nebo nitroskupinu, nebo jsou 1 a L* totožné a znamenají oba vodík či chlor, jsou zvláště výhodné. Mezi posledními z uvedených sloučenin jsou výhodnými ty, kde ve vzorci 2X1 znamená W skupinu hydroxylovou, její sodnou sůl, sůl triethylaminu nebo alkylester s alkylovou skupinou s jedním až čtyřmi atomy uhlíku nebo skupinu -^HG1^G2·

Podle biochemických a farmakologických studií dostanou-li se sloučeniny, použitelné dle tohoto vynálezu do styku s normálními buňkami za těchže podmínek, které dovolují zjištění antiproliferativní aktivity kancerogenních bu^ něk, pak nevyvolávají tyto sloučeniny žádný škodlivý či zhoubný účinek dle všech testovaných kriterií, jako je třeba integrita struktur a buněčných funkcí nebo udržení životnosti buněk. Tyto produkty tedy reagují s velkou spev cifitou s buňkami tumorálními. Antitumorální aktivita byla sledována a zjištěna na větším počtu skupin tumorálních buněk lidských in vitro i in vivo ná myších. Všechny použité buňky v

byly pořízeny z mezinárodní sbírky ATCC. Buňky MCP-7 byly · použity pro realizování vazebných testů.

g

Membrány byly připraveny takto: 10 buněk MCP-7 bylo po 10 sekund homoge nWváno v Polytron-u” v 10 ml pufru Hepes, pH = 7, obsahujícím 210 mM L-mannitolu, 70 mM sacharosy, 1 mM kyseliny ethylendiamintetraoctové a 0,3 mM PMSP,

Homogenizovaná směs byla odstřelována po 15 minut při 650. xg, v

potom byla kapalina nad sedlinou přelita a odstředována hodinu za 100 OOOxg, Kulička byla umístěna do pufru Trie-HCl, pH _s 7,4 za koncentrace 1 mg/ml a uskladněna při -70°C.

fl ft · · · * · • ·

-23ft* fl • fl

Celkové navázání bylo provedeno v trubičce 5 ml, do které bylo vneseno 50 ul membránové suspenze s obsahem 10 až 50 ug proteinů, 175 pl pufru Tris 50 mM, pH = 7,4 a 25 p.

31747 20 nM v Tris 50 mM, pH - 7,4 + 0,1% SAV albuminu hovězího sera (Sérum albumine bovine).

Nespecifikované navázání bylo provedeno přidáním 25 yl 10~5 sr 31747 do předcházejícího roztoku (celkový objem 250 yl) s následným inkubováním 30 minut za teploty 25°C.

Frakce volné a vázané byly děleny nanesením 200 yl na kolonu 1 ml Sephadex-u LH 20, načež byla propočtena radioaktivita prvých 2 ml, získaných eluováním kolony za použití pufru Tris 50 mM, pH =. 7,4*

Sloučeniny, použité dle tohoto vynálezu a sloučeniny nové měly aktivitu ΟΙ^θ mezi ÍO“’¹'⁰ a ÍO^M.

Mezi dalšími použitými buňkami byly kultivovány rutinním způsobem v prostředí RPMI po přidání 10% séra plodového telecího (SVF, sérum de veau foetal) dále uvedené skupiny: lidské myelomy U266 a RPMX 8226 karcinom lidské ledviny 293 karcinom lidských plic A 549 karcinom lidský,, samičí MCF-7 lidský lymfocytárnx leukemický faktor MCF-7.

Antitumorální aktivita byla měřena postupem kolorimetrickým za použití MTT 3-(4,5-dimethylthiazoiy2,5-difenyltetrazoliumbromidu, jak to popsal Mosmann T., J.of imm.Methods 65. 55 (1983).

Kolorimetrické vyhodnocení dovoluje kvantitativně vyhodnotit aktitumorovou aktivitu roztoku s obsahem sloučeniny,použité dle tohoto vynálezu,

Fodle použitého postupu byly buňky v suspenzi (tskové, jako myelomové buňky) vsunuty do 2.105 buněk/ml v ml definovaného prostředí. Další buňky, jako MCF-7 byly vsunuty do 5.104 buněk/ml v . 1 ml prostředí RPMi + 0,5% «9 ·*Μ • 9 ·

9 9 na dobu jedné noci. Na další den byla vrstvička buněk promyta dvakrát a nahrazena definovaným prostředím, odpovídajícím RPMI + 10 jug/ml insulinu + 10 pg lidského transferrinu.

Při provádění tohoto testu byly buňky udržovány za přítomnosti roztoku scobsahem sloučeniny, použité dle tofeoto vynálezu a to po 5 dní, potom byl přidán do prostředí kultury MTT.

Doba 5ti dnů, jež byla zvolena, odpovídá době optimálnínz hlediska aktivity. Po 5ti dnech kultivování byla změřena proliferace buněk zde popsaným testem. Měří se optická hustota při 570 nm. Modré zbarvení se projeví v dávkách, kde jsou ještě žijící buňky; intenzita zbarvení je úměrná množství žijících buněk. ·

Výsledky jsou uvedeny v následující tabulceA.

.254 4 · 44 4 · • 4 « · «

4 4 4 4 4

4 4 4 4

4 4 4 • 44 44 *· 4444

4 4 4 4

4 »44 444 • 4 4

444 »» «·

Tabulka A

Vliv SR 31747 ηθ různé skupiny lidských tumorových buněk po 5ti-denním působení· Výsledky jsou vyjádřeny v procentech buněčného přoliferování ve vztahu ke kontrole bez zásahu, vyjádřené jako 100% ιί

SR 31747	U266	RPMI 8226	MCP-7	293	A549
10 pM	11	6	5	7	10
1 uM	52	9	34	10	14
100 nM	67	54	58	36	38
10 nM	82	66	75	43	50
1 nM	95	79	83	80	56
100 pM	100	91	100	84	88
10 pM	100	100	100	100	100

Je jasně zřejmé, že koncentrace tak nízké, jako 1 nM až 1 pM dostačují k zastavení růstu z 50% a tento výsledek byl získán při použití všech testovahých tumorových buněk·

Účinek zjištěný in vitro na itáibování skupiny buněk MCP-7 byl studován in vivo na myši ”nude” za použití intraperitoneálního způaobu a dávek mezi 3 až 100 mg/kg způsobem, který popsal Neri C, a spol·, Cancer Research 50. 5892-5897 (1990) a Berebbi a spol·, Oncogene 5.,.505509 (1990).

Jiná studia byla rovněž zaměřena na stanovení účinku SR 31747 na růst in vitro i in vivo epitheliélních tumorových buněk ženské prsu i mužské prostaty.

Studie spočívala ve vyhodnocení antitumorální aktivity potenciální SR 317 47 na růst různých ěpitheliálních kancerogenních buněk dělohy· Studie' byla sledována in vitro na buněčných kulturách, jakož i in vivo po inokulaoi

I

-26» 9·9· β 9 • 999 ♦ ♦ • 9 ·

skupia tumorálních buněk prsu athymickým myším ”nude”.

Buněčné skupiny, který byly použity, jsou tyto:

Skupina MCF-7, sensibilní na hormony z jileurální afuza adenocarcinomu dělohy. Buňky MCP-7LY2, antiestrogenně-resistentní, byly získány ze skupiny IflCF-7 selektivním tlakem za přítomnosti antiestrogenu vysoké aktivity.

Skupiny MCF-7LCC1 a MCG-7LCG2 byly pořízeny na myši po inokulování buněk MCF-7. Obě skupiny jsou nezávislé na estrogenech, buňky MCF-7LGC2 jsou rovněž antiestrógenně resistentní.

Skupina MCF-7AZTD5 se vyvinula ze skupiny MCF-7 po átabilní transfekci ohkogenem H-ras. Buňky MCF-7AZTD5 jsou in vitro antiestrógenně resistentní. Tyto dvě skupiny byly společně udržovány na DMEU/F )L:1, obj/obj) s obsahem fatálního telecího sera jako dekomplementu a 16 ng/ml lidského insulinu. Skupina HCF-7LCC2 se kultivuje za přítomnosti - trvalé •*7 v ' M hydroxy-tamoxifenu. Epitheliální buňky tumorální ženského prsu jsou estrogenní a antiestrogenne-nesensibilní. Byly kultivovány v prostředí L15 s dodatem 10% FCS, 1% zásadních aminokyselin a 10 pg/ml lidského insulinu.

Epitheliální skupiny inCaP, Ρθ3 a BU145 jsou výsledkem prostatického aděnokarcinomu. Pouze benky LnCaP jsou sensibilní na hormony. Tyto 3 skupiny byly kultivovány na RPMi s dódatkera 10% FCS.

Všechny skupiny byly udržovány za teploty 37°C v atmosteře vlhkého vzduchu a oxidu uhličitého (95% na 5%)» s výjimkou buněk MDA-MB231, které byly kultivovány bez oxidu uhličitého. Celulární buněčné skupiny se kontrolují pravidelně, prosté mykoplasmů.

Inokulování a zacházení se zvířaty je toto:

Použitá zvířata jsou athymické myši ¹¹ nudě” ženského rodu, oplodněné či nikoli, stáří asi 4 týdny (Janvier R.)

Před inokulováním hormono-sensibilních prsních buněk (MCF-7, • · fe# #♦ • · · · • · · · »· · ··· • · »· 49

MCP-7AZTD5) dostala zvířátka 10 pl ethanolického roztoku estradiolu ÍO^-^ použitím perkutánní aplikace. Tento postup se opakuje třikrát během týdne. Milion buněk v suspensi v 100 pl PBS/Ca⁺⁺ se subkutánně inokuluje každého z kyčli. Dalšího dne dostala zvířátka 200 jíl injekčního roztoku složení ethanol/Tween 80/ fyziologické sérum, 1 : 1 i 18 vše objemově s obsahem lišících se reaktivních složek za koncentrací předběžně definovaných Injekce se podávají intraperitoneálne a obnovují se denně.

Výsledky

Aktivita in vitro SR 317 47 na proliferaci řízných epitheliálních skupin tumorálních (z dělohy).

Výsledky, týkající se účinku SR 31747 na proliferaci epitheliálních prsních buněk v kultuře jsou uvedeny v tabulce B. Aktivita SR 31747 byla vyhodnocena za přítomnosti různých koncentrací séra. Za přítomnosti snížených koncentrací .. séra se vyznačuje SR 317 47 inhibičním působením na proliferaci všech skupin epitheliálně,tumorálních. Zvýšená množství séra v prostředí kultury antagonisují částečně nebo totálně inhibiční aktivitu SR 31747 na buněčný růst.

Pro uvedení sérové koncentrace kapacita SR 31747 z hlediska inhibování proliferování kolísá v závislosti na uvažované skupině. Za přítomnosti 0,1% PCS, což dovoluje udržet minimální buněčnou proliferaci a pozorovat v důsledku toho aktivitu SR 317 47, ΙΟ^θ, stanovené pro skupiny hormonosensibilní MCP-7 (MCP-7, MCP-7AZ, MCP-7 22ΉΤΒ) se mění od 2,10^-¾ až k 7.10^-¾. Podobné hodnoty ΙΟ^θ byly získány rovněž pro buňky MDA-MB231 a MCP-71CC, Naopak, se buňky MCP-7AZTDS a MCP-7LY2 vyznačují důležitějšími sensibilitami na inhibiční působení SR 31747, protože stanovené hodnoty IC^₀ jsou v těchto případech 2.10“l° a 5.10^-^¾..

Ve všech případech byly pozorovány takřka totální inhibice buněčného proliferování za přítomnosti 10 M,..

-7 ' a někdy i 10 ‘M SR 317 47, a jsou mimo jakoukoli pochybu

-2800 0 0 00 »· • 00 * · 0 »000 0 · »000

Β · 0 ··

0 0 ·

0 0 0

000 000

0 dokladem cytotoxického účinku

Získané výsledky současně naznačují, ze SR 31747 není schopen zvrátit stimulační působení estradiolu na hormonosensibilní skupinu MCF-7.

Tabulka B

Vliv SR 3174$ na proliferování epitgeliálních prsních buněk. Stanovení hodnoty ΙΟ^θ Za 6 dní po aplikaci. Prostředí vyměněno každých 48 hodin

Buňky £	Sensibilita	10%	PBS 0,5% 0,1% 0%
MCP7 p23-25	hormonosens.		2,5.10-¾ 10-¾	2.10- 9“ 2.10- 811	3.
MCP7 RPMI p6-7	lt			7.10-¾
MCP7 AAHTB RPSn -p+4	II			2.10-¾
LY2 p22-23	antiestr. resist	nad 10-7M nad 1O-7M		5,	1071¾ io-12m
MCF7 A Z TDS	H-ras transf resist.	6.10-¾		(2.10-1θΜ
SE 47/p4	norm.buňky	nad 1O°M	4.10
MGP AZ	horm.sens.	nad 10“οΜ		M.io“sm
MCP7 + E2 10-9M	II		4.10- ¾ 3.10- ¾ 4.10- ¾	5.10- 10M 2.10- ¾ 2.10-¾
MDA MB231 p!31	11	5.10-¾ 4.10-¾		2.10-¾ 2.10-¾
LCC1 p23-24	estrog... r nezávislý	. 5% PBS 10-¾		2.1O9M
L0C2 p26-27	tl antiestr. resist.	5% DČfí 4.10fM 3.10-¾		0,1%qDCC 2,10-¾ 2.10-¾

-3M

-29• ft «ftftft ftft ftftft ftftft • ftftft · · • ftftftft ft · · · ftft ftft • ftft · • ftft · ♦ ftft ftft* • · ftft ftft

Vliv SR 31747 in vivo na frekvenci i stav tumorů vyvinutých po inokulování epitheliálních prsních tumorálních skupin myším.

Ka vyóbr, 1 a 2 je zachycen vliv SR 31747, který se projeví na myších tumorech po vyněií vaječníků za použití buněk MDA-MB231

Každé myšce je podáno 5.10^ buněk MDA-MB231 nad každou hýždi (tedy to jsou 2 místa inokulace pro myš). Každodenně pak myšky dostávají intraperitoneálně 500 ug SR 31747 + 0,003 ug B2 (použito 20 myší). Kontrolní skupina (20 myší) dostává 0,003 yg Ξ2 .Množství ( v % naočkovaných nádorů) a rozsah vyvinutých nádorů byly stanovovány v různých dobách během postupování. Na jeho konci (den 92) byla zvířátka usmrcena a zvážena, tumory byly odebrány a rovněž zváženy.

Z vyobrazení je zřejmé, že SR 31747 má tendenci snížit rozsah, váhu i frekvenci tumorů, jak se vyvinuly u myší s vyjmutými vajecníky, byly-li použity buňky MDA-MB 231. V souvislosti s tím se hladiny velikosti a hmotnosti nádorů mezi skupinu kontrolní a SR 31747 nezdají být z hlediska rozdílnosti závazné což je způsobeno válkou variabilitou při pozorování dělohy každé skupiny.

Takže SR 31747 in vitro se vyznačuje antiproliferativním účinkem na proliferaci celku epiteliálních tumorálních prsních buněk, jak byly studovány. Tato aktivita je především nápadná za přítomnosti snížených koncentrací séra^ a mění se ve funkci uvažovaných skupin. Takže jestliže ve většině případů hodnoty IC_5Q, změřené v 0,1% PBS kolísají mezi 2.10^ a 2.10“⁸ M, lze .pozorovat extrémní citlivost buněk MCP-7LY2 nebo SR 31747.

Obecná tendence SR 31747 snížit současné velikost, hmotnost i frekvenci tumorů, vyvinutých z buněk MDA-MB231, byla tedy pozorována.

Tento vynález se právě tak týká způsobu zobrazení in vivo tumorů, který využívá jako terč, totiž pro sloučeniny použité dle tohoto vynálezu, radioaktivně značené použitím například ^⁸P, receptory, na kterých se fixuje SR 31747. Ve skutečnosti v důsledku toho vede vysoká hustota těchto receptorů v tumorálních buňkách k domněnce, že

-3099 4*·· • 9 9

9 9 9 9 * ·

99 99 ·· 9 9«9

9 9 9 9 · 999 999

9 9

999 99 99 že by se mohly s výhodou využít pro fixování radioligandů za použití postupu PET (positron emission tomography) a SPÉCT (single protůn emission tomography)_o

Tento vynález tedy současně zahrnuje použití sloučenin, radioaktivně značených pomocí dobře známých isotopů jako činidel pro zobrazení použitím značení radioaktivními látkamic

Jinak pochopitelně se mohou jiné postupy značení použít, pokud umožňují intervenci komplexu antilátky se radioznačeným antigenem₀ Tyto postupy zahrnují - ale bez jakéhokoli omezování - postup SPÉCT nebo způsob označevaný pojmenováním PET.

Použití sloučenin dle tohoto vynálezu zahrnuje rovněž přípravu léčiv, určených pro therspii, zahrnující využití radioaktivně značených produktů jako látek, uvolňujících radiaci v blízkosti nebo v samotném tumoru 2a využití takových sloučenin k usměrnění radioaktivně značených produktů do vlastního tumoru nebo jeho okolí v bezprostřední blízkosti, aby totiž byly tumorální buňky vystaveny radiaci, vysílané uvedenými radio-značenými produkty.

Využití sloučenin podle tohoto vynálezu může právě tak zahrnovat úsek rádiotherapie, kde buňky ve styku s látkami, které jsou nositeli ionizující radiace,čitaje v to například paprsky Λ , X nebo Částečky A mohou,být doručeny vnějším zdrojem, jako je tomu v případě paprsků X nebo , nebo přímo podávanými radioníkleidy, které jsou podávány přímo pacientovi, jak se to popisuje například v Principles of Radiation Therapy in Cancer, Principles and Practice of Oncology, Devita V.T. a spol.,vydavatelné, vydání 4., Lippincott J.B, Co., Philadelphie 15. 248-275 (1993).

Sloučeniny se právě tak mohou podávat spolu s jinými antikancerogenními Činidly, jak je to odborníkům dobře známo.

-31• φ Φφφφ · φ • Β » * φ • · φ · · » φ φφφφ φ φφφ » V V ’ · φφ φφφφ φ φφφφ φ φ φφφ φφφ • φ φ φφφ φφ φφ

Podle biochemických a farmakologických studií, jak zde byly výše doloženy, byla pozorována nejlepší aktivita u těchto látek:

N-benzyl-N-met&yl-^3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)—propyl)_amin, l-(3-nitro-4-cyklohexylfenyl)-3-(4-fenylpiperidino)-propan-2-ol trans-3-^3-(3-nitro-4-cyklohexylfenyl)-allyl)-4-fenylpiperidin,

1-|3-(3-chlor-4-cyklohexylfe nyl)-prop-2-inylj-4-f e nylpiperidin,

1- |3—(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-propylj-4-feny 1-1,2,3,6te trahydropyr idin, l-Í3-(4-cy klohexylf eny l)-propylj -4-fenylpiperidin, cis-3-p-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-allylj -3-aza-spiro)5*5\undekan,

3- (3-(3-chlor-4-cy klohexylf enyl)-propylj -3-aza-spirol5.5jundekan, cis-N-adamantan-l-yl-N-ethyl-[3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)allyll-amin,

4- benayl-l- |3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-propylJ-piperidin, l-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-3-(4-fenylpiperidino)-pro-pan-l-ol, - <

N-cyklohexyl-N-ethyl43-(4-cyklohexylfenyl)-propylj-amin, cis-N-ethy 1-N-fenyl-l3-(3-chlor-4-éýklohexylfenyl)-sllyl)amin,

N-benzyl-N-methy1-[3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-propyljamin,

N-fenethyl-N-methyl-l-[3*(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-propylj-amin, cis-N-cyklohexyl-N-ethyl-l3-(4-cyklohexylfenyl)-allyí]-amin, N-cy klohexy1-N-e thy1-[3-(3,5-dichlor-4-cy klohexylfe nyl)allyl)-amin, trans-N,N-dihexyl-|3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-allyfJamin,

-32•9 9999 «

99·

99

9

9 9 9

999 999

9

9* 9«

N-cyklohexyl-N-ethyl- \3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-propy^ amin, l-f3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-allyÍj_/-azepan, trans-N,N-dicy klohexy l-3-[(3-chlor-4-cy klohexy lfenyl)-allyl~}amin,

N-cyklohexyl-N-e thy1-(3-(3-chlor-4-cy klohexylfe nyl)-prop-2inylj -amin, l-(3-chlor-4-cy klohexylfe ny1)-3-(cy klohexyle thylamino)-propan-l-oa, l-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-3-(cyklohexylethylamino)-propan-l-ol, trans-N,N-diethyl-{3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-allyl}-amin,

4-[3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-propyl}-morfolin, 4-f3-chlorfiexylfenyl)-but-2-enyí\ -morfolin, 4-B“(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-butyí] -morfolin, nebo jedna z jejich odpovídajících, farmaceuticky přijatelných solí či solvátů.

Sloučeniny, schopné nahradit H-SR 31747 v jeho receptorech, se mohou použít v therapii při všech pathologických postupech, vyžadujících zdržení proliferování tumorálních buněk. Tato buněčná proliferace může být sensibilní na hormony či nikoli.

Přesněji řečeno, klinické aplikace, při kterých lze předpokládat využití těchto sloučenin, zahrnují onemocnění, založená na buněčném proliferovéní, zvláště pak glioblastomů, neuroblastomů, lymfomů, myelomů, leukemie, karcinomu tlustého střeva, kolorektálního, epitheliálního, hepatického, plicního, dělohy, vaječníků, pankreasu nebo také prostaty.

K takovému účelu sloučeniny schopné vytlačit ^H-SR 317 47 z jeho receptorů, zvláště pak sloučeniny vzorců I až,VIII, jakož i jejich farmaceuticky přijatelné soli, se mohou využít pro přípravu farmaceutických kompozie pro podávání orální, parenterální, sublinguální, transdermální i topické. Takové farmaceutické kompozice obsahují nejméně jeden z produktů, popisovaných zde dříve spolu s inertním farmaceutickým vehikulem. A ještě přesněji řečeno zahrnuje ftft ftft » ♦ ♦ t t ftft · ftftft ftftft ft · ♦ · «ftft· • · · • ftftft • · ft *

-33tento vynález podle jednoho z jeho aspektů farmaceutické kompozice, obsahující jako účinnou složku látku vzorce VIII nebo některou z odpovídajících farmaceuticky vhodných solí, Pro přípravu adičních solí aminů vzorce VIII se mohou použít organické i anorganické kyseliny, pokud nejsou toxické a jsou farmaceuticky přijatelné, zvláště pak kyselina sírová, dusičná,fosforečná, chlorovodíková, citrónová, octová, mléčná, vinná, pámová, ethandisulfonová, methansulfonová, jantarová, cyklohexyIsulfonová, fumarová, maleinová a benzoová»

Pokud se týká podávání cestou orální nebo sublinguální, používají se zvláště stlačené typy, jako jeou tablety jednoduché nebo dražé, v želé s granulkami, případně s retaÉdovaným uvolňováním, kapky nebo i liposomy· V případě intravenosního podávání, či subkutánního nebo intramuskulárního, je třeba věnovat pozornost sterilním nebo sterilizovatelným roztokům, zvláště pak v případě vénových perfuzí, zatím co lze provést podávání vhodných dávefc transdermální cestou. Pro topické použití lze využít krémy ži lotiony s roztíráním na kůži·

Farmaceutické kompozice dle tohoto vynálezu lze připravit obvyklými postupy, které jsou na tomto úseku dobře známé. Aktivní látku lze přidat do obvykle používané‘ ti ho excipiens, jako je talek, arabská guma, laktosa, amidon, horečnatá sůl kyseliny stearové, další vehikula vodná či nevodná, mastné látky povahy živočišného i rostlinného, parafinické deriváty, glykoly, různá smáčedla, dispergující látky, emulgátoty, konzervační činidla atd.

Parraeceutické kompozice dle tohoto vynálezu mohou s výhodou obsahovat sloučeninu vzorce VIII nebo jednu ze solí farmaceuticky přijatelných kyselin spolu s jedním ěi více léčiv, známých a běžně používaných pro tytéž therapeutické indikace.

• 4 ·*·4 * · 4*44 • 4

Ů 4

(14 4 4 • · · · • 4 4 4

444 444

4

-uMnožství účinné látky, jež se má denně podávat dle postupu tohoto vynálezu je závislé obzvláště na therapeutických indikacích, obtížnosti stavu, který je třeba zvládnout, jakož i na hmotnosti nemocného a na způsobu podávání účinných látek. Při systematickém podávání globální dávka pro člověka kolísá obvykle mezi 1 až 100 mg denně, například 2 až 50 mg, s výhodou 3 až 40 mg denně·

Jednotkové dávkovači formy pro systematické podávání obsahují obvykle 3 až 50 mg (tedy 3, 5, 10, 20, 30, 40 a 50 mg produktu). Tyto dávky se podávají obvykle jednou, nebo vícekráte za den, s výhodou třikrát denně.

Při topickém podávání obsahují farmaceutické kompozice obvykle 0,0001 až 10% účinné složky, s výhodou 0,01 až 5%.

Příklady provedení vynálezu

Dále uvedené příklady popisují vynález, aniž by jeho rozsah jakkoli omezovaly. R (rendement) znamená výtěžek, P znamená teplotu tání (point de fusion), to dle stanovení na Koffler-ově bloku.

Příprava acetylenových derivátů při přípravě sloučenin cis Příprava 1: Semikarbazonový derivát

V 600 ml vody se rozpustí 73,6 g (0,66 mol) hydrochloridu semikarbazidu a 54_ř2 g (0,66 mol) octanu sodného, směs se energicky míchá za rychlého přidáváni za teploty místnosti φ φ φ ίλ φ φ φ · φ

35142,1 g (0,6 mol) roztoku 3-chlor-4-cyklohexylacetofenonu v 600 ml ethanolu,

Reakční směs se vyhřívá 2 hodiny na 50° C, potom se za teploty místnosti míchá přes noc, načež se odsají vyloučené krystaly, které se promyjí vodou, acetonem a diethyletherem, suší se, potom i ve vakuu a získá se tím ve výtěžku 96% 169,5 g bílých krystalků·

Příprava 2t 2-6hlor-l-cyklohexyl-4~ethinylbenzen

Postupuje se dle Lalezari-ho I. a spol., Angew.Chem· Internat.Ed. 464 (1970).

Suspenze 26 g (0,234 mol) jemně drceného oxidu seleniČitého a 58,7 g (0,2 mol) semikarbazonu, jak byl připraven v rámwi přípravy l,se v prostředí 400 ml ledové kyseliny octové zahřívá nejprve hodinu v olejové lázni na 60° C, potom 2 hodiny na 80° G, jako meziprodukt vzniká seleniodiazol. Teplota olejové lázně se pak zvýší na 150° G, reakční směs se zahřívá 3,5 hodin až do úplného rozkladu seleniodiazolu a do skončení úniku dusíku. Dále se kyselina octová vydestiluje ve vakuu, zbytek se zředí přidáním 600 ml diethyletherz, roztok se filtruje, promyje čtyřikrát vodou, jednou vodným roztokem hydroxidu sodného o koncentraci 5%, ještě dvakrát vodou a po vysušení bezvodým síranem sodným a filtraci se filtrát zahustí ve vakuu· Olejovitý zbytek se destiluje ve vakuu 10 , Hg, teplota 85-100° G a výsledkem je 24,8 g bezbarvého oleje.

Příprava ketonických derivátů láannich-ovou reakcí pro získání hydroxylováných prekursorů sloučenin trans Příprava 3 l-(3-Hitro-4-cyklohexylfenyl)-3-(4-fenylpiperidino)-propanon

Připraví se roztok 1^,3 g 3-nitro-4-cyklohexylacetcfenonu, 9,85 g 4-fenylpÍperidinu a 7,5 g paraformaldehydu v 100 ml 1,2-dimethoxyethanu a po přidání 1,5 ml komc.kyseliny * 9 • «9 ·'

-36chlorovodíkové se reakční směs zahřívá za míchání do varu pod zpětným chladičem 6 hodin; dále se vše ponechá přes noc za teploty místnosti, vyloučená- sraženina se odsaje a postupným promytím ethylesterem kyseliny octové a diethyletherem se získá 17 g očekávané sloučeniny.

Příklad 1

Hydrochlorid 3-[3-(3-chlor-4“cyklohexylfenyl)-prop-2-inylj-3aza-spiro[5.5jundekanu

V 25 ml 1,2-dimethoxyethanu se rozpustí 4,85 g (0,022 mol) sloučeniny, získané v přípravě 2 a 0,5 g chloridu mědnatého a do. roztoku se přikapává jiný.roztok , obsahující v 20 ml 1,2-dimethoxyethanu 2,7 g 35%ního roztoku formaldehydu a 3,74 g 3-azaspÍroL5.5jundekanu,pptom se reakční směs zahřívá 30 minut na 70°0 a rozpouštědlo se vydestiluje ve vakuu, Zbytek se rozpustí v diethyletheru, roztok se promyje vodným roztokem hydroxidu sodného o koncentraci 5%, nasyceným roztokem chloridu sodného ve vodě a vysuší se bezvódým síranem hořečnatým,

Hydrochlorid se překrystaluje z ethylesteru kyseliny octové, výtěžek 7,6 g očekávaného produktu, teplota tání 241° C.

Příklad 2

Hydrochlorid cis-3-j3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-allylJ3-aza-spiro[5,5]undekanu

Z hydrochloridu acetylénového derivátu z příkladu 1 se 3 g rozloží l0%ním vodným roztokem hydroxidu sodného.

Získaný olej'se extrahuje do diethyletheru, roztok se promyje nasyceným vodným.roztokem chloridu sodného a suší se bezvódým síranem hořečnatým. Piltrátmge po filtraci

4· zahustí ve vakuu, zbytek se rozpustí v 100 ml ethylesteru kyseliny octové, přidá se 5 ml methanolu, dále 0,2 g palladia na síranu barnatém a reakční směs se hydrogenuje za normální teploty i normálního tlaku. Katalyzátor se odfiltruje přes oxid křemičitý, filtrát se zahustí ve vakuu, zbylý olej se

A * > 4 A A

AAA AA«

-37• A AAAA ί A A aaaa A A « chromatografuje na koloně silikagelu^ eluování: dichlormethan/methanol, 98/2 obj. Zahuštěním čistých frakcí se získá hydrochlorid, který se překrystaluje z ethylesteru kyseliny octové, výtěžek 44%, t.t. 238°C.

Příklady 3 a 4

Při postupu, jak to bylo popsáno v příkladu 1, reaguje 4-cyklohexyl-3,5-dichlor-l-ethinylbenzen s jednak 4-fenylpiperidinem, jednak s cyklohexylethylamihem za přítomnosti formaldehydu. Získá se v tom kterém případe hydrochlorid 4-feny1-1-^3-(3,5-dichlor-4-cyklohexylfenyl)pro-2-inyl^-piperidinu, t.t. 250° C (příklad 3) a hydrochlorid B-cyklohexyl-N-ethyl-3-(3,5-dicblor-4-cyklohexylfenyl)-pro-2-inylaminu (příklad 4).

Příklady 5 až 10

Za použití postupu, popsaného v příkladu.l, se reakcí

3- chlor-4-cyklohexyl~l-ethinylbenzenu s v tom kterém případě ethylfenylaminem, 1-adamantylethylaminem, benzylmethylaminem, (2-fenylethyl)-methylaminem, 4-benzylpiperidinem a

4- hydroxy-4-fenylpiperidinem za přítomnosti formaldehydu získají:

hydrochlorid N-ethyl-N-fenyl-3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)prop_2-inylaminu, příklad 5, hydrochlorid H-(l-adamantyl)-H-ethyl-3-(3-chlor-4-cyklohexyl fenyl)-prop-2-iny laminu, příklad 6, hydrochlorid N-benzyl-N-methyl-3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl) prop-2-inylaminu, příklad 7, hydrochlorid H-me thy l-K-(2._fenyle thyl )-3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-pro-2-inylaminu, příklad 8, hydrochlorid 4-benzyl-l- ^-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-prop2-inylJ-piperidinu, příklad 9, a hydrochlorid 4-hydroxy-4-f_enyl-l- ^-(3-chlor-4-cyklohexylf e ny 1)-pr o p-2-iny íl-piperidinu, příklad 10.

-38«4 44

4 4 ·

4 4 « ' ·4 4 « 4 4 ·

44

Příklady 11 a 12

Za použití postupu jako v příkladu 1 se reakcí 4-cyklohexyl-l-ethinylbenzenu s cyklohexylethylaminem, resp, 4-fenylpÍperidinea za přítomnosti formaldehydu získají hydrochlorid N-cyklohexyl-N-ethyl-3-(4-cyklohexylfenyl)-prop-2-inylaminu, příklad 11, a hydrochlorid 4-feny l-l-[3-(4-cyklohexylfenyl)-prop-2-inylJUpi peridinu, příklad 12.

řříklady 13 až 16

Za použití postupu, popsaného v příkladu 2 se hydrogenováním acetylenových derivátů, získaných dle příkladů 4 až 6 a 11 získají cis-propenaminy, uvedené v tabulce I*

Tabulkal Sloučeniny cis

Příklad LI* Z t,t.°C

13	Cl	Cl	i,.,r 0	HCl 189
14	Cl	H	'-0	HCl 124

-39z

t.t.° c ·· · • · • ·»♦

pokrač.tabulky 1 Příklad L L*

15	Cl	H		HCl 234
16	H	H	Λ	HCl 184

Příklad 17 l-(3-Nitro-4-cyklohexylfenyl)-3-(4-fenylpiperidino)-propanol

V 300 ml methanolu se suspenduje 13,8 g ketonu z příkladu 3 a po ochlazení na -10 °C se přidává pomalu 8,42 g hydridu boritosodného, reakční směs se ponechá za chlazení na -10° C 10 minut, potom se nechá teplota vystoupit na 20° C, vyloučená sraženina se odsaje a promyje methanolem. Získá se tak 9,5 g očekávaného produktu, t.t. 148-150° C.

Příklad 18

Hydrochlorid trans l-^3-[3-(3-nitro-4-cyklohexylfenyl)~allyl^ * 4-fenylpiperidinu

V 300 ml xylenu se rozpustí 10,6 g alkoholu, jak byl připraven v příkladu 17 a 10,4 g kyseliny p-toluensulfonové, reakční směs se zahřívá za míchání 6 hodin do varu pod zpětným chladičem s nástevcem dle Dean-Stark-a pro sledování »4 «44«

4« 44 «4

4 44 4444

4 4 »444 * 4 4 4 444 444

4 4 4 4

44« 44 44

-4 Ον z nikle vodyo Rozpouštědlo se potom oddestiluje ve vakuu, zbylý olej se rozpustí v ethylesteru kyseliny octové, roztok se promyje 0,5 K roztokem hydroxidu sodného ve vodě, dále vodou, a vysuší se síranem hořečnatým. Zahuštěním filtrátu ve vakuu na objem 50 ml se získá podíl, do kterého se zavede plynný chlorovodík. Zahuštěním ve vakuu se takto izoluje vysrážením áiethyletherem 8 g očekávaného hydrochloridu, t.t. 225 až 233° C.

Příklad 19

Hydrochlorid 3-(N-ethyl-N-feny^amino-l-(3-chlor-4-cyklohexyl)-fenylpropanolu

a) Postupem popsaným v přípravě 3 se za použití 3-chlor4-cyklohexylacetofenonu získá reakcí s fenylethylaminem, l-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-3-(N-ethyl-N-fenylamino)-pro- . * panon.

b) Postupem popsaným v příkladu 17 se získá redukcí ketonu, připraveného v předchozím stupni (a) působením hydridu boritosodného očekávaný produkt ve formě hydrochlo-

t.t. 219° C.

Příklad 20

Hydrochlorid 3-j3-(3-chlor-4~cyklohexylfenyl)-propyl)-3-azaspir o Ϊ5 · 5) und eka nu g hydrochloridu acetylenového derivátu, získaného dle příkladu 1, se rozloží přidáním 10%ního vodného roztoku hydroxidu sodného. Vyloučený olej se extrahuje do diethyletheru, roztok se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, a po vysušení síranem hořečnatým a filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Připravený olej se rozpustí v 100 ml ethylesteru kyseliny osfcové za přidání 5 ml methanolu, a po dalším přidání 0,2 g palladia na síranu barnatém se reakční směs hydrogenuje za normální teploty i norm.tlaku. Katalyzátor • ·

-41• ft ·« · ··» • ft ftft ftft odfiltruje použitím celitu, filtrát se zahustí ve vakuu, zbytek se rozpustí v nejmenším možném množství methanolu za přítomnosti 50 ml 2 H roztoku kyseliny chlorovodíkové, následuje extrakce do dichlormethanu, promytí roztokem 2 N kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem chloridu sodného a vysušení síranem hořečnatým. Zahuštěním filtrátu ve vakuu se takto izoluje očekávaný hydrochlorid, 2 g, t.t.

266° C.

Příklady 21 až 26

Postupem popsaným v příkladu 20, tedy hydrogenavoním acetylenových derivátů, připravených podle příkladů 11, 7,

8, 9, 12 a 10 se dají připravit odpovídající nasycené deriváty, i viz tabulka II

Tabulka II i/

CX0-⁵ 1/___

	Příklad č.	L	L*	Z	t.t.°c HCl 167
21	H	H	0
	22	01	H		^0		HCl
					1		152

• · *· «· 0 0

Příklad 27

Hydrochlorid l-£3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)~propylj-4-fenyl-l,2,3,6-tetrahydropyridinu

V 25 ml xylenu se rozpustí 1 g sloučeniny z příkladu 26 a 0,51 g kyseliny p-toluensulfonové, reakční směs se zahřívá 2 hodiny do varu pod zpětným chladičem, dále se zahustí ve vakuu.

9

-43·· I*»* • * ·

9 9 9

99 • *, * 9

9 9 9

99· ··· • 9 ·9

Zbytek se zředí přidáním 10%n£ho roztoku hydroxidu sodného, následuje extrakce do dichlormethanu, tento roztok se promyje vodou, dále nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a po vysušení síranem hořečnatým se zahuštěním filtrátu ve vakuu získá 0,7 g očekávaného hydrochloridu, t.t. 210° 0.

Příklad 28

a) Kyselina 4-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-4-hy.droxymáselná

Ve 100 ml tetrahydrofuranu se rozpustí 20 g kyseliny 4-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-4-oxomáselné, přidá se 8,6 ml vodného roztoku hydroxidu sodného a 100 ml methanolu. Po ochlazení reakení směsi na 0 až 5° C se přidají 3,8 g hydridu boritosodného a reakční směs se ponechá za teploty místnosti po dobu nocio ^otom se vlije reakční směs do vody, přidá se 85 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a tím se připraví očekávaný hydroxy-derivát.

b) 5-(3-Chlor_4-cyklohexylfenyl)-dihydrofuran-2-on

Látka z postupu (a) se rozpustí v 300 ml toluenu a vše se zahřívá do varu pod fepětným chladičem za použití nástavce dle Dean-Stark-s k eliminování vody. Zahuštěním směsi se za použití vakua získá očekávaný lakton, výtěžek 16 g, t.t.

60° G.

c) Methylester kyseliny 4-chlor-4-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-máselné

V 30 ml benzenu se rospustí 2,78 g laktonu, získaného ve stupni (b), do roztoku se přikapává 2,2 ml thionylchloridu a reakční .směs se dále zahřívá do varu pod zpětným chladičem po 3 hodiny. Reakční směs se potom přidá do ochlazeného roztoku plynného chlorovodíku v methanolu, reakční směs se míchá přes noc za teploty místnosti a následným zahuštěním ve vakuu se získá očekávaný chlorovaný derivát ve výtěžku 3,5 g

d) Kyselina 2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxylová

V 10 ml terc.butylalkoholu se rozpustí 3 g esteru ze

-4499 99 «9 · ·9 99

9 9 9 9 « • 999 · 9 • · 9 · 9

9 9 9

9 *

9*9 999

9

9 99 stupně (c), přidá se 1,5 g kalium-terc.-butoxidu a reakční směs se vyhřívá 4 hodiny do varu pod zpětným chladičem. Po ochlazení a zředění přidáním 50 ml vody se lutka extrahuje do diethyletheru. Po zahuštění roztoku se produkt zmýdelní rozpuštěním zbytku v 20 ml éthanolu a 10 ml vody aa přítomnosti 0,8 g hydroxidu draselného s varem reakční směsi po 2 hodiny pod zpětným chladičem. Roztok se dále ochladí, zředí se vodou, okyselí přidáním 6 Ií roztoku kyseliny chlorovodíkové; následnou extrakcí do diethyletheru, po vysušení a zahuštění roztoku ve vakuu se takto získá 1,4 g očekávané kyseliny.

Příklady 29 až 32

a) Postupem, popsaným v příkladu 28 ad a) se z kyseliby

4- (4-cyklohexylfenyl)-4-oxomáselné, 4-(4-cyklohexyl-3,5-dichlorfenyl)-4-oxomáhelné, 4-(4-cyklohexyl-3-fluorfenyl)-4oxomáselné a 4-(4-cyklohexyl~3-nitrofenyl)-4-oxomáselné získají redukcí hydridem boritosodným tyto látky i kyselina 4-(4-cyklohexylfenyl)-4-hydroxymáselná, příklad; 29 a, kyselina 4-(4-cyklohexyl-3,5-dichlorfenyl)-4-hydroxymáselná, příklad 30a, kyselina 4-(4-cyklohexyl-3-fluorfenyl)-4-hydroxymáselná, příklad 31 a, a kyselina 4-(4-cyklohexyl-3-nitrofenyl)-4-hydroxymáselná, příklad 32 a).

b) Postupem, popsaným v příkladu 28 ad b) se z kyselin, hýdroxymáselných, získaných podle příkladů 29 a až 32 a zde výšezískají zahříváním v toluenu do varu pod zpětným chladičem za použití Dean-Stark-ova nástavce:

5- (4-cyklohexylfenyl)-dihydrofuran-2-on, příklad 29b,

5-(4-cyklohexyl-3,5-dichlorfenyl)-dihydrofuran-2-on, příklad 30by

5-(4-cyklohexyl-3-fluorfenyl)-dihydrofuran-2-on, příklad 31b, a 5-(4-cyklohexyl-3-nitrofenyl)-dihydrofuran~2-on, příklad 32 b).

c) Postupuje-li se, jak popsáno v příkladu 28 c), pak reakcí

-4544 4444 *4

4*4 4 ♦

444* 4 4 • 4 4 4 4

4 4 4

44 44

4 4 4, 4 4

4 4 4 4

4 444*44 • 4 4 »44 44 44 laktonů, získaných dle příkladů 29b až 32b za použití thionylchloridu, poté chlorovodíku v methanolu se získají: methylester kyseliny 4-ohlor-4-(4-cyklohexylfenyl)-máselné, příklad 29t, methylester kyseliny 4-(4-cyklohexyl-3,5-dichlorfebyl)-máselné, příklad 30 o, methylester kyseliny 4-chlor-3-(4-cyklohexyl-3-fluorfenyl)-máselné, příklad 31 c, a methylester kyseliny 4.chlor-4.(4-cyklohexy1-3-nitrofenyl)-másel né, příklad 31 d).

d) Postupem,jak to bylo popsáno v příkladu 28 d) se zahříváním získaných esterů, jak byly připraveny v příkladech 29 o až 32 c zde dříve v terc.butylalkoholu za přítomnosti terc.butoxiáu kalia získají tyto sloučeBiny:

kyselina 2-(4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxylová, příklad. 29 d), ky selina 2-(4-cy klohexy1-3,5-dichlorfeny1)-cyklopropa nkarboxylová, příklad 30 d, kyselina 2-(4-cyklohexy1-3-fluorfenyl)-cyklopropankarboxylová, příklad 31 d, a kyselina 2-( 4-cy klohexy 1-3-nitrofenyD-cyklopropankarboxylová, příklad 32 d).

Příklad 33

a) phlorid kyseliny 2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxylové

V 50 ml chloridu uhličitého se rozpustí 4 g kyseliny, získané dle příkladu 28 a 3,7 ml thionylchloridu a reakční směs se vyhřívá do varu pod zpětným chladičem 3 hodiny; po zahuštění ve vakuu se takto získá 5,9 g očekávaného chloridu kyseliny ve formě oleje.

b) N-Cyklohexyl-H-ethyl-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)cyklopropankarboxamid

V 50 ml chloridu uhličitého se rozpustí 3 g chloridu právě připraveného v předchozím stupni a), přidá se roztok 2,9 g cyklohexylethylaminu v 50 ml chloridu uhličitého a

-46··

ΦΦ φφφ · φ · • · · * * φ ·φφ φ · • · φ φ φ φ . · · · • ••«•φ* φφ φ * φ • Φ » · φ · « φφφφ φ « φφφ φφφ « φ φ

ΦΦ· φφ φφ reakčni směs se promíchává za teploty místnosti 20 hodin.

Roztok se dále promývá vodou až do neutrální hodnoty pH, . a ve formě oleje se získá 5,16 g amidu.

Příklady 34 až 37

a) Za použití cyklopropankarboxylových kyselin, získaných v příkladech 29 (d) až 32 (d) jako výchozích látek se získají působením thionylchloridu postupem popsaným v příkladu 33(a) tyto sloučeniny:

chlorid kyseliny 2-(4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxylové (příklad 34 a), chlorid kyseliny 2,(4~cyklohexyl-3,5-dichlorfenyl)-cyklopropankarboxylové (příklad 35a), chlorid kyseliny 2-(4-cyklohexyl-3-fluorfenyl)-cyklopropankarboxylove (příklad 36a) a chlorid kyseliny 2-(4-cyklohexyl-3-nitrofenyl)-cyklopropqn— karboxylové (příklad 37a).

b) Rostupuje-li se jako v příkladu 33b), pak reakcí chloridů kyseliny podle příkladů 34a až 37a zde výše s cyklohexylethyleminem se dají připravit:

N-cyklohexyl-N-ethyl-2-(4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxamid (příklad 34b),

N-cyklohexyl-N-ethyl-2-(4-cyklohexy1-3,5-dichlorfenyl)-cyklopropankarboxamid (příklad 35b),

N-cyklohexyl-N-ethyl-£~(4-cyklohexyl-3-fluorfenyl)-cyklopropankarboxamid (příklad 36b)

N-cyklohexyl-N-ethyl-2»(4-cyklohexyl-3-nitrofenyl)-cyklopropankarboxamid (příklad 37b).

Příklad 38

Hydrochlorid t²“(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropylmethy ij-cyklohexy laminu

V 50 ml diethyletheru se rozpustí 5,1 g amidu,-jak byl připraven postupem dle příkladu 33,,přidá ge suspenze 0,99 g lithiumaluminiumhydridu v diethyletheru, reakčni směs se míchá za teploty místnosti 3 hodiny, načež se vlije do 5%ního roztoku hydroxidu sodného ve vodě. Reakčni směs se extrahuje etherem,

-47• · • 949 ···· ·· ·· •» · 4 4 · • · 4 9 9

9 999 999 fe fe · ••fe ·· ·· roztok se vysuší síranem hořečnatým a zaváděním plynného chlorovodíku do filtrátu se získá 3,54 g uvedeného hydrochloridu, t.t. 202°C.

Příklad 39

a) Postupem, jak byl popsán v přípravě 3 se za použití

3-chlor-4-cyklohexylačetofenonu reakcí s di-n-hexylaminem a formaldehydem získá l-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-3-dihexylaminopropanon.

b) Postupem, jak byl popsán v příkladu 17 se redukcí ketonu, připraveného v předchozím stupni a) působením hydridu bořitosodného připraví 3-dihexylamino-l-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-propanol.

c) Postupem, popsaným v příkladu 19 se dehydratováním alkoholu, získaného v předchozím stupni b) získá trans-[3-(3chlor-4-cyklohexylfenyl)-allytJ-dihex3Llamin, t.t. 128° C. Příklady 40 až 52

Z chloridu kyseliny 2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxylové, jak byl získán popiyem v příkladu 33a, se reakcí v tom kterém případě s diethylaminem, dihexylaminem, (l-adamanty)-ethylaminem, ethylfenylaminem, benzylmethylaminem, methyl-(2-fenylethyl)-aminem, morfolinem, piperidinem, 4-fenyl-l,2,3,6-tetrehydropyridiaem, 4-fenylpiperidinem, 4-benzylpiperidinem, 4-(2-fenylethyl)-piperidinera, 3~aza-spiro^5 *5) undekanem získá postupem popsaným v příkladu 33b):

N,N-diethyl-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxamid (příklad 40),

N,B-dihexyl-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxamid (příklad 41),

N-(l-adamantyl)-N-ethyl-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklo~ propankerboxamid (příklad 42),

N-ethyl-N-fenyl-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxamid (příklad 43),

N-benzyl-N-methyl-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl).cyklopropankarboxamid (příkladr44),

N-methyl-N-(2-fenylethyl)-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyhl°~

-48• ft ··* ft» ft ft ♦ ftft • ftft* · · ft ftftftft ft ftftft ftftftft ftftft ftft ft ftftftft ftft ftftftft « ftftftft • · ftftft ftftft • ftft ftftft ftft ftft propankárboxamid (příklad 45),

4- {3 - (3 -chlor-4-cy klo hexy 1 f e ny 1) -cy klopr o py Ϊ) -kar bo ny 1morfolin (příklad 46),

1-(2-(3 -chlor-4-cy klohexylfe ny1)-cy klo propy ÍJ-kar bo ny1piperidin (příklad 47), l-[3-(3-chlor-4-cy klohexy lfenyl)-cyklopropylj -karbonyl4-fenyl-l,2,3,6-tetrahydropyridin (příklad 48), l-t2-(3-chlor-4~cyklohexylfenyl)-cyklopropyÍj-karbonyl-4fenylpiperidin (příklad 49), l-[2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropylj-karbonyl-4benzylpipe±idin,(příklad 50), l-^2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-oyklopropylj -karbony 1-4(2-fenylethyl)-piperidin (příklad 51), 3-l2-(3-chlor-4-cyklohexylfanyl)-cyklopropylj.karbonyl3-aza-spiro[5.5.3-undekan (příklad 52).

Příklady 53 aš 65

Postupem, jak byl popsán v příkladu 38 se získají redukcí amidů, připravených dle příkladů 40 až 52:

N,N-diethy1-2—(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropylmethanamin (příklad 53),

N,N-dihexyl-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropylmethan amin (příklad 54),

N-(l-adamantyl)-N-ethy1-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklo propyl-methanamin (příklad 55),

N-ethyl-N_fenyl-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropylmethanamin (příklad 56),

N-benzyl-N-methyl-2-(3 chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropylmethanamin (příklad 57),

N-me thy1-N-(2-fe ny1e thy1)-2-(3-chlor-4-cy klohexylfe ny 1) cyklopropylmethanamin (příklad 58)

4-^2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropyíj-methyImorfolin (příklad 59),

1-[2-(3-chlor-4-cyklohexylfe ny1)-cy klopropyy-methylpiperidin (příklad 60) l-[2- (3 -chlor-4-cy klohexy lfe ny 1) -cy klopr opylme thy 1-4-f e ny 11,2,3,6-tetrahydropyridin (příklad 6l) l-[2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropylj-methy1-4-fenylpiperidin (příklad 62) ftft «ftftft • ftftft * · » • ftftft* ft « ftftftft ft ftft· ·· »· • ft ft*»* ft

-491- j2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropyÍ} -methyl-4benzylpiperidin (příklad 63), l-j2-(3-chlor_4-cyklohexylfenyl)-cyklopropylj,-methyl-4(2-fenylethyl)-piperidin (příklad 64),

3- ]2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropyl|-methyl-3aza-spiro^5.5] undekan (příklad 65.

Příklad 66

N-Cyklohexyl-N-ethyl-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarbozamid

a) Do roztoku 3,4 g (12,2 mmol) kyseliny 2-(3-chlor-4cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxylové a 1,25 g (12,3 mmol) triethylaminu v 50 ml dioxanu se po ochlazení na -5°C přidá 1,34 g (12,3 mmol) ethylesteru kyseliny chlormravenčí. Za míchání se směs udržuje na uvedené teplotě 20 minut, potom se teplota nechá vystoupit na 20° G, odfiltruje se hydrochlorid triethylaminu a využije se' takto připravený roztok smíšeného anhydridu kyseliny 2-(3-chlor4- cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxylové έ ethylesterem ''mono kyseliny uhličité.

Do roztoku takto připraveného smíšeního anhydridu se přidá roztok 1,56 g cyklohexylethylaminu v 30 ml tetrahydrofuranu a reakční směs se míchá δ hodin za teploty místnosti, roztok se potom promyje vodou, vysuší a rozpouštědlo se oddestiluje Takto se připraví N-cyklohexyl-N-ethyl-2-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-cyklopropankarboxamido

JUDr. Petr KňiWXY

SPOLEČNÁ ADVOKÁTNÍ KANCELÁŘ VŠETEČKA ZELfci/r' C70PČÍK KALENSKÝ A PARTNER)

120 00 Praha 2, Hálkova 2 Česká republika **

50• · « ♦ *·»

R · 0 0 00 ft 00 00

0 · * ♦ ·

4 · · · * 0 »00 0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 · *

Vyobr.l

co

9m ‘Tjiouirui q.sou^omq r^3 bH §

cn φ

H o

h

-p a

o >í

.3

O

Φ d

Ί3

M tí φ

-Ω

O ca •d ft co

X» o

o

Q> Ίϋ £L 3C3

O o o	o <·	ri o o	o o
o o o o t> m o oo	jma O	CM ‘^iioranq,	H ΐεοχτχθΛ

• ·

0 *0 ··»♦

0

« 0« 04

0 0* 0 »000 0' 0 000 0 0 0 • 0 ·

000 04 ·'·

‘ygfitn ^son^onní c—

MC— i—l

ΓΛ

Cti o

H

O n

-P c

o

2d

Vyobr*2

fl

O

Q) a

Ό

M

C

Φ x

O ta •3

Λ

CQ

X

O ro §5

% ‘riíoum^ eou©AX©i^ • · · · Ϊ Τ ·,;

Φ ’ · i Ϊ

Φ · · Φ

-52• · * ·^ι β·· ^ι· *· • · · · » · * h • · · · · ·' φ · φφ 4«

Claims (4)

1. PATEUTOVÍ Ν Z R Ο Κ Υ lo Použití sloučenin, vyznačující se tím, že tyto sloučenin jsou schopné vytěsnit cis-H-cyklohexyl-Nethyl*C-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-allyl(-amin tritiov_aný i* ii · f z jeh© receptorw, pro přípravu kompozic'farmaceutických, určených k léčení nemocí vyvolaných buněčným proliferováním.
2. 2. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, sloučenina schopný vytěsnit tritiovaný ois-N-cyklohexylN-ethyl-j
3. 3-(3-chlor-4-cyklohexylfenyl)-allylJ-amÍn z jeho receptorů je zvolena ze skupiny, kterou tvoří

   a) aminy obecného vzorce I

   Λ (I) \„ kde

   R^ znamená vodík nebo halogen,

   Rg znamená cyklohexylovou skupinu,

   R3 znamená cykloalkylovou skupinu se třemi až šesti atomy uhlíku,

   R4 znamená vodík, alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu se třemi až šesti atomy uhlíku,

   A znamená skupinu, zvolenou z těchto :-0001^-, -CHCcD-CHg-, -GHCOHj-CHg-, -CHgCH^-, -CH=CH-, a-CH=CHb) farmaceuticky přijatelné adični soli aminů obecného vzorce I

   c) aminy obecného vzorce II kde (II)
4. 4« 4 44 4 4* 4 4· · · tf>4 # 4 · ·' 4 4 4 4

   44 44 4 4 4 * 4 4 *

   4 · · 4 A 4 .· 444 444 • 4*4· · * • 4«4 *4» 44 4*4 4 *) 4«

   53A.

   la 2 a znamená skupinu, fcvolenou z těchto: -CH=CH-, -Cr Cznamená vodík nebo halogen, znamená cyklohexylovou skupinu,

   -CO-CHg-, -CG(BH)-0¾

   d) adiční soli farm_aceuticky přijatelné kyseliny aminů obecného vzorce II,

   e) aminy obecného vzorce III (III) kde

   R^_b znamená vodík nebo halogen, znamená cyklohexylovou skupinu,

   R_3b znamená vodík nebo alkylovou skupinu s’jedním až třemi atomy uhlíku,

   R^_b znamená alkylovou skupinu s jedním až třemi atomy uhlíku, totožnou či lísící se od Rq ^b* ^3b a ^4b ^aP^^u dohromady a s atomem dueíku, na kterém jsou vázány tvoří heterocykličkou skupinu s pěti až sedmi členy cyklu, jako jsou skupina piperidinová, morfolinová a pyrrolidinová,

   Α^ znamená skupinu-CHgCHg- nebd -CH=CHf) adiční soli farmaceuticky přijatelných kyselin a aminů obecného vzorce III

   g)

   RA aminy obecného vzorce IV Ax/^Ro