CZ2002132A3

CZ2002132A3 - Bicyklonukleosidové analogy

Info

Publication number: CZ2002132A3
Application number: CZ2002132A
Authority: CZ
Inventors: Takeshi Imanishi; Satoshi Kohiga
Original assignee: Sankyo Company, Limited
Priority date: 1999-07-22
Filing date: 2000-07-21
Publication date: 2002-05-15
Also published as: JP4151751B2; US7217805B2; NZ516653A; MXPA02000826A; CN1376161A; JP2001089496A; DE60014104D1; ES2226891T3; PL352682A1; KR20020092894A; EP1201678A4; PT1201678E; US20040143114A1; EP1201678A1; NO20020305L; ATE277066T1; HUP0202812A3; BR0012646A; IL147595A0; NO20020305D0

Description

Sloučenina nebo její farmaceuticky-p-ř-ijate-lná oůl·

Oblast techniky

Vynález popisuje nové bicyklonukloesidové analogy, které je možné použit při syntéze nepřirozených oligonukleotidových analogů, které vykazuji výbornou antisens nebo antigenni aktivitu a stabilitu in vivo.

Vynález popisuje nové oligonukleotidové analogy, které mají jednu nebo více z uvedených bicyklonukleosidových části.

Dále tento vynález popisuje nové upravené bicyklonukleosidové analogy, které vykazuji aktivitu proti AIDS.

Dosavadní stav techniky

Očekává se, že oligonukleotidy vykazující výborné antisens a antigenni aktivity a stabilitu in vivo se mohou použít jako použitelná farmaceutická činidla.

Je však dobře známo, že přirozené oligonukletidy se rychle rozkládají různými nukleázami v krvi nebo buňkách.

Aby se vyřešily tyto problémy, syntetizovala se řada nepřirozených analogů za účelem vyvinutí farmaceutických prostředků. V oboru jsou známy oligonukleotidy, kde se atom kyslíku vázající se na atom fosforu fosfodiesterovou vazbou substituje atomem síry, methylovou skupinou nebo atomem bóru.

Dále jsou známy oligonukleotidy jejichž cukerná a/nebo bazická část je chemicky upravena.

Firma ISIS Co. vyvinula thioátoligonukleotid ISIS2922 jako terapeutické činidlo pro léčbu retinitidy způsobené lidským cytomegalovirem a lék se používá v USA pod názvem Vitravene.

Libovolné nepřirozené oligonukleotidové analogy popsané shora v textu nebyly zcela úspěšné, což je způsobeno nedostatečnou silou antisens nebo antigenni aktivity (to je schopnost tvořit komplementární řetězce s mRNA nebo DNA) a • · • · vedlejšími účinky způsobenými neselekčním navázáním na různé proteiny in vivo. Proto je nutné vyvinout nepřirozené olignukleotidové analogy, které mají silnou antisens nebo antigenní aktivitu, in vivo stabilitu a pouze slabé vedlejší účinky.

Sloučeniny, které mají dioxabicyklo[2,2, l]heptanovou část a které jsou příbuzné sloučeninám podle vynálezu a které jsou zobrazeny dále v textu se popisují v dokumentu WO 98/39 352. Tyto sloučeniny se liší od sloučenin podle vynálezu substituentem v poloze 3' ribózy. Dále není známo, že tyto sloučeniny vykazují aktivitu proti AIDS.

symbol B° znamená pyrimidinovou nebo purinovou bázi nukleové kyseliny nebo jejich analogy, symboly X a Y jsou stejné a každý z nich reprezentuje atom vodíku, alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, aralkylovou skupinu, arylovou skupinu, acylovou skupinu nebo silylovou skupinu.

Vynález popisuje nové bicyklonukleosidové analogy, které je možné použít pro syntézu nepřirozených oligonukleotidů, které vykazují výbornou antisens nebo antigenní aktivitu a in vivo stabilitu.

Vynález dále popisuje nové oligonukleotidové analogy, které mají jednu nebo více relevantních bicyklonukleosidových částí.

Dále vynález popisuje nové bicyklonukleosidové analogy, které vykazují aktivitu proti AIDS.

Zjistilo se, že nové bicyklonukleosidové analogy vykazující 2'-O,4'-C-ethylenovou část jsou důležitým meziproduktem při syntéze nepřirozených oligonukleotidů, které • · • · · · · · ··· ·· ·· ·· ···· ·♦ ···· vykazují výbornou antisens nebo antigenní aktivitu, stejně jako in vivo stabilitu. Dále se zjistilo, že nové oligonukleotidové analogy mající jednu nebo více zmíněných bicyklonukleosidových částí vykazují výbornou amtisens nebo antigenní aktivitu stejně jako in vivo stabilitu. Dále uvedené bicyklonukleosidové analogy vykazují výbornou aktivitu proti AIDS.

Podstata vynálezu

1) Nové bicyklonukleosidové analogy jsou sloučeniny obecného vzorce 1 nebo jejich farmaceuticky přijatelné sole

kde symbol R¹ je stejný nebo odlišný a každý reprezentuje atom vodíku, skupinu chránící hydroxyskupinu při syntéze nukleové kyseliny, skupinu kyseliny fosforečné, skupiny kyseliny fosforečné chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny nebo skupinu reprezentovanou vzorcem

-P(R^4a)R^4b (kde symboly R^4a a R^4b jsou stejné nebo se liší a každý reprezentuje hydroxyskupinu, hydroxyskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, merkaptoskupinu, merkaptoskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, aminoskupinu, aminoskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkoxyskupinu, která má 1 až 6 atomů uhlíku, kyanoalkoxyskupina, která obsahuje 1 až 7 atomů uhlíku nebo aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou, která má 1 až 6 atomů uhlíku), • · • · ·· symbol R² reprezentuje azidoskupinu, aminoskupinu nebo skupinu reprezentovanou vzorcem -NH-R³ (kde symbol R³ je stejný nebo se liší a každý reprezentuje chránící skupinu aminoskupiny při syntéze nukleové kyseliny, skupinu kyseliny fosforečné, skupiny kyseliny fosforečné chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny nebo skupinu reprezentovanou vzorcem -P(R^4a)R^4b (kde symbol R^4a a R^4b jsou stejné nebo se liší a každý reprezentuje hydroxyskupinu, hydroxyskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, merkaptoskupinu, merkaptoskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, aminoskupinu, aminoskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkoxyskupinu, která má 1 až 6 atomů uhlíku, alkylthioskupinu obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, kyanoalkoxyskupina, která obsahuje 1 až 7 atomů uhlíku nebo aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou, která má 1 až 6 atomů uhlíku), symbol B reprezentuje purin-9-ylovou skupinu nebo 2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, přičemž každá může být susbtituovaná jedním nebo více substituenty vybranými z následující skupiny a).

(skupina alfa) hydroxys kupina, hydroxyskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, merkaptoskupina, merkaptoskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkylthioskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku aminoskupina, aminoskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, « · • · • · ·· aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou, která má 1 až 6 atomů uhlíku, alkylskupinu, která má 1 až 6 atomů uhlíku a atom halogenu.

Mezi sloučeninami podle vynálezu preferované sloučeniny jsou následující:

2) Sloučeniny, kde symbol R¹ reprezentuje atom vodíku, alifatickou acylovou skupinu, aromatickou acylovou skupinu, silylovou skupinu, methylovou skupinu substituovanou 1 až 3 arylovými skupinami nebo methylovou skupinu substituovanou 1 až 3 arylovými skupinami, kde arylové kruhy jsou substituovány nižší alkylovou skupinou, nižší alkoxyskupinu, halogenový atom nebo kyanoskupinu.

3) Sloučeniny, kde symbol R¹ reprezentuje atom vodíku, silylovou skupinu, methylskupinu substituovanou 1 až 3 arylovými skupinami nebo methylovou skupinu substituovanou 1 až 3 arylovými skupinami, kde arylové kruhy jsou substituované nižší alkylovou skupinou, nižší alkoxyskupinou, atomem halogenu nebo kyanoskupinou.

4) Sloučeniny, kde symbol R¹ reprezentuje atom vodíku, trimethylsilylovou skupinu, t-butyldimethylsilylovou skupinu, t-butyldifenylsilylovou skupinu, benzylovou skupinu, trifenylmethylovou skupinu, 4-methoxybenzylovou skupinu, 4-methoxyfenyldifenylmethylovou skupinu, 4,4'-dimethoxytrifenylmethylovou skupinu nebo 4,4',4''-trimethoxytrifenylmethylovou skupinu.

5) Sloučeniny, kde symbol R² reprezentuje azidoskupinu, aminoskupinu nebo skupinu reprezentovanou vzorcem -NH-R³(kde symbol R³ reprezentuje alifatickou acylovou skupinu, aromatickou acylovou skupinu, methylovou skupinu substituovanou 1 až 3 arylovými skupinami, kde arylové kruhy jsou substituovány nižší alkylovou skupinou, nižší alkoxyskupinou, atomem halogenu nebo kyanoskupinou, silylovou skupinou fosforoamiditovou skupinou, ♦ · · ♦ Φ · · Φ φ • ••ΦΦ Φ · Φ ΦΦ V fosforylskupinou, skupinou kyseliny fosforečné nebo skupinou kyseliny fosforečné substituované chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny),

6) Sloučeniny, kde symbol R² reprezentuje azidoskupinu, aminoskupinu nebo skupinu reprezentovanou obecným vzorcem -NH-R³ (kde symbol R³ reprezentuje acetylovou skupinu, trifluoracetylovou skupinu, benzoylskupinu, benzylskupinu, p-methoxybenzylovou skupinu, terč.butyldifenylsilylovou skupinu, skupinu reprezentovanou vzorcem

-P(OC2H4CN) (NCH(CH₃) ₂) , skupinu reprezentovanou vzorcem -P(OCH₃) (NCH(CH₃)₂), fosfonylovou skupinu nebo 2-chlorfe- .

nylovou skupinu nebo skupinu kyseliny 4-chlorfenylfosforečné),

7) Sloučeniny, kde symbol R² reprezentuje azidoskupinu nebo aminoskupinu,

8) Sloučeniny, kde symbol B reprezentuje 6-aminopurin-9-ylovou skupinu (to je adeninyl), 6-aminopurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, 2,6-diamonopurin-9-ylovou skupinu, kde jedna nebo obě aminokyselinové skupiny jsou při syntéze nukleové kyseliny chráněny chránící skupinou, 2-amino-6~chlorpurin-9-ylovou skupinu, 2-amino-6-chlorpurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-amino-6-fluorpurin-9-ylovou skupinu, 2-amino-6-fluorpurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-amino-6-brompurin-9-ylovou skupinu, 2-amino-6-brompurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-amino-6-hydroxypurin-9-ylovou skupinu (to je guaninyl), 2-amino-6-hydroxypurin-9-ylovou, kde aminoskupina je při syntéze nukleové kyseliny chráněna chránící skupinou, 6-amino-2-methoxypurin-9-ylovou skupinu, 6-amino-2-methoxypurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při • fcfc fc • •••fc fcfc · fcfc · • fcfc fcfc· · fc ·· · · ······· ··· ·· ·· ······ ······ syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 6-amino-2-chlorpurin-9-ylovou skupinu, 6-amino-2-chlorpurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 6-amino-2-fluorpurin-9-ylovou skupinu, 6-amino-2-fluorpurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2,6-dimethoxypurin-9-ylovou skupinu,

2,6-dichlorpurin-9-ylovou skupinu, 6-merkaptopurin-9-ylovou skupinu, 6-merkaptopurin-9-ylovou skupinu, kde merkaptoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-oxo-4-amino-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu (to je cytosinyl), 2-oxo-4-amino-l,2dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou,

4-amino-2-oxo-5-fluor-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, 4-amino-2-oxo-5-fluor-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 4-amino-2-oxo-5-chlor-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, 4-amino-2-oxo-5-chlor-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-oxo-4-merkapto-l,2-dihydropyrimidin-l— --ylovou skupinu, 2-oxo-4-merkapto-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde merkaptoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2,4-dihydroxypyrimidin-l-ylovou skupinu (to je uracilyl), 2,4-dihydroxy-5-methylpyrimidin-l-ylovou skupinu (to je thyminyl), 4-amino-5-methyl-2-oxo-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu nebo 4-amino-5-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou,

9) Sloučenina, kde symbol B reprezentuje 6-benzoylaminopurin-9-ylovou skupinu, adeninyl, 2-benzoylamino-6-hydroxyprutin-9-ylovou skupinu, guaninyl, 2-oxo-4-benzoylamino• · • 9 • · ·· • 9 ·

9 9 • 9 ·«·*

1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, cytosinyl, uracilyl nebo thyminyl.

Preferují se sloučeniny, kde symbol R¹ se vybral ze shora popsaných sloučenin v odstavci 2) až 4) a symbol R² se vybral ze shora popsaných sloučenin v odstavci 5) až 7) a symbol B se vybral ze shora popsaných sloučenin v odstavci 8) nebo 9). Zvláště se preferují sloučeniny kde symbol R¹ se vybral ze sloučenin popsaných v odstavci 2), symbol R² se vybral ze sloučenina popsaných v odstavci 5) a symbol B se vybral ze sloučenin popsaných v odstavci 8) a kde symbol R¹ se vybral ze sloučenin popsaných v odstavci 8) a kde symbol R¹ se vybral ze sloučenin popsaných v odstavci 4), symbol R² se vybral ze sloučenin popsaných v odstavci 6) a symbol B se vybral ze sloučenin vybraných z odstavce 9).

Nové oligonukleotidové analogy podle vynálezu jsou (1) Oligonukleotidové analogy a jejich farmaceuticky přijatelné sole, které mají jednu nebo více strukturálních jednotek vzorce la, přičemž když oligonukleotid vykazuje dvě nebo více strukturálních jednotek vzorce la každý symbol B je stejný nebo odlišný.

Symbol B reprezentuje skupinu purin-9-yl nebo skupinu 2 — -oxo-1,2-dihydropyrimidin-l-yl, které mohou být substituovány substituenty vybranými ze skupina alfa dále v textu.

(skupina alfa) hydroxyskupiny, • · ··

Q »······ «··

4 4 4 9 4 · · · · · » ·· hydroxyskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, merkaptoskupina, merkaptoskupina chráněná při syntéze nukleové kyseliny, chránící skupinou alkylthioskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku aminoskupina, aminoskupina chráněná při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou, která má 1 až 6 atomů uhlíku, alkylskupinu, která má 1 až 6 atomů uhlíku a atom halogenu.

Termín „oligonukleotidové analogy reprezentuje nepřirozené oligonukleotidy, ve kterých nukleosidové jednotky přirozeného oligonukleotidů se substituují jednou nebo více nukleosidovými částmi, které mají shora uvedenou strukturu la. Oligonukleotidové analogy například zahrnují upravené cukerné deriváty, thioátové deriváty, ve kterých místa vázající fosfodiester obsahují atom síry, estery, ve kterých se esterifikuje část kyseliny fosforečné, a amidové deriváty, ve kterých aminoskupina v purinové bázi je amidována jako jiná nukleosidová nebo nukleotidová část.

Mezi novými oligonukleotidovými analogy podle vynálezu preferované oligonukleotidové analogy jsou sloučeniny a jejich farmaceuticky přijatelné sole, kde

2) symbol B reprezentuje 6-aminopurin-9-yl (to je adeninyl), 6-aminopurin-9-yl, kde aminoskupina je chráněna chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, 2,6-diamonopurin-9-yl, kde jedna nebo obě aminokyselinové skupiny jsou při syntéze nukleové kyseliny chráněny chránící skupinou, 2-amino-6-chlorpurin-9-yl, 2-amino-6-chlorpurin-9-yl, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2• · • · ·· ·

• · · • tttt ·· tttt • · · · · tt ··· ··· tttt ···· · » tttttttt amino-6-fluorpurin-9-yl, 2-amino-6-fluorpurin-9-yl, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chrániči skupinou, 2-amino-6-brompurin-9-yl, 2-amino-6-brompurin-9-yl, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl (to je guaninyl), 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, kde aminoskupina je při syntéze nukleové kyseliny chráněna chránící skupinou, 6- ·

-amino-2-methoxypurin-9-yl, 6-amino-2-methoxypurin-9-yl, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 6-amino-2-chlorpurin-9-yl, 6-amino-2-chlorpurin-9-yl, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 6-amino-2-fluorpurin-9-yl, 6-amino-2-fluorpurin-9-yl, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2,6-dimethoxypurin-9-yl,

2,6-dichlorpurin-9-yl, 6-merkaptopurin-9-yl, 6-merkaptopurin-9-yl, 2-oxo-4-amino-l,2-dihydropyrimidin-l-yl (to je cytosinyl), 2-oxo-4-amino-l,2-dihydropyrimidin-l-yl, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 4-amino-2-oxo-5-fluor-l,2-dihydropyrimidin-1-yl, 4-amino-2-oxo-5-fluor-1,2-dihydropyrimidin-l-yl, 4-amino-2-oxo-5-chlor-l,2-dihydropyrimidin-l-yl, 4-amino-2-oxo-5-chlor-1,2-dihydropyrimidin-l-yl, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-oxo-4-merkapto-1,2-dihydropyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-hydroxy-l,2-dihydropyrimidin-l-yl (to je uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5-methyl-l,2-dihydropyrimidin-l-yl (to je thyminyl), 4-amino-5-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-l-yl (to je 5-methylcytosinyl) nebo 4-amino-5-methyl-2-oxo-l,2-dihydropyrimidin-l-yl, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou.

3) Sloučeniny a jejich farmaceuticky přijatelné sole, kde symbol B je 6-benzoylaminopurin-9 ,-yl, adeninyl, 2-isobutyrylamino-6-hydroxyputin-9-yl guaninyl, 2-oxo-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidin-l-yl, cytosinyl, 2-oxo-5-methyl-4• 4 44 • · · · 4 9 ··· 444 444 • · · · * *· · ·-· 44 4 4

-benzoylamino-1, 2-dihydropyrimidin-l-yl, 5-methylcytosinyl, uracinyl nebo thyminyl.

Termín „chránící skupina pro hydroxyskupinu při syntéze nukleové kyseliny v definici shora uvedeného symbolu R¹ nemá omezení, pokud chránící skupina může stabilně chránit hydroxyskupinu při syntéze nukleové kyseliny. Příklady chránících skupin jsou uvedeny dále v textu.

Termín „alifatická acylová skupina jako je například alkylkarbonalová skupina, jako je formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, pivaloyl, valeryl, isovaleryl, oktanoyl, dekanoyl, 8-methylnonanoyl, 3-ethyloktanoyl, 3,7-dimethyloktanoyl, undekanoyl, tridekanoyl, hexadekanoyl, 1,4-methylpentadekanoyl, 13,13-dimethyltetradekanoyl, 1-methylheptadekanoyl, nonadekanoyl, eikosanoyl a henikosanoyl, karboxylovaná alkylkarbonylovaná skupina, jako je sukcinoyl, glutaroyl a adipoyl, halogen(nižší)alkylkarbonylová skupina, jako je chloracetyl, dichloracetyl, trichloracetyl a trifluoracetyl, (nižší)alkoxy(nižší)alkylkarbonyl, jako je methoxyacetyl a nesaturovaná alkylkarbonylová skupina, jako je (E)-2-methyl-2-butenoyl.

Termín „aromatická acylová skupinazahrnuje například arylkarbonylovou skupinu, jako je benzoyl, α-naftoyl a β-naftoyl, halogenarylkarbonylová skupina, jako je 2-brombenzoyl, 4-chlrorobenzoyl, (nižší)alkylovaná arylkarbonylová skupina, jako je 2,4,6-trimethylbenzoyl a 4-toluyl, (nižší)alkoxylovaná arylkarbonylová skupina, jako je 4-anisoyl, karboxylovaná arylkarbonylovaná skupina, jako je 2-karboxybenzoyl, 3-karboxybenzoyl a 4-kerboxybenzoyl, nitrátovaná arylkarbonylová skupina, jako je 4-nitrobenzoyl a 2-nitrobenzoyl, nižší alkoxykarbonylovaná arylkarbonylová skupina, jako je 2-(methoxykarbonyl)benzoyl, arylovaná arylkarbonylová skupina, jako je 4-fenylbenzoyl.

Termín „tetrahydropyranyl nebo tetrahydrothiopyranyl jako je tetrahydropyran-2-yl, 3-bromtetrahydropyran-2-yl, 4• ··· • · · · » · ♦ * ·««· ·« ·♦·· methoxytetrahydropyran-4-yl, tetrahydrothiopyran-2-yl a 4-methoxytetrahydrothiopyran-4-yl.

Termín „tetrahydrofuranyl nebo tetrahydrothiofuranyl znamená tetrahydrofuran-2-yl a tetrahydrothiofuran-2-yl.

Termín „silyl znamená například tri(nižší)alkylsilyl, jako je trimethylsilyl, triethylsilyl, isopropyldimethylsilyl, t-butyldimethylsilyl, methyldiisopropylsilyl, methyldi-t-butylsilyl a triisopropylsilyl, tri(nižší)alkylsilyl substituovaný 1 až 2 arylovými skupinami, jako je difenylmethylsilyl, t-butyldifenylsilyl, difenylisopropylsilyl a fenyldiisopropylsilyl.

Termín „(nižší)alkoxymethyl znamená methoxymethyl, 1,1-dimethyl-l-methoxymethyl, ethoxymethyl, propoxymethyl, isopropoxymethyl, butoxymethyl a t-butoxymethyl.

Termín „(nižší)alkoxylovaný (nižší)alkoxymethyl znamená 2-methoxyethoxymethyl.

Termín „halogen(nižší)alkoxymethyl znamená například

2,2,2-trichlorethoxymethyl a bis(2-chlorethoxy)methyl.

Termín „(nižší)alkoxylovaný ethyl znamená 1-ethoxyethyl a 1-(isopropoxy)ethyl.

Termín „halogenovaný ethyl znamená například 2,2,2-trichlorethyl.

Termín „methyl substituovaný 1 až 3 arylovými skupinami znamená benzyl, a-naftylmethyl, β-naftylmethyl, difenylmethyl, trifenylmethyl, α-naftyldifenylmethyl a 9-antrylmethyl.

Termín „methyl substituovaný 1 až 3 arylovými skupinami, kde arylový kruh se substituuje nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, halogenem nebo kyanoskupinou znamená 4-methylbenzyl, 2,4.6-trimethylbenzyl, 3,4,5-trimethylbenzyl, 4-methoxybenzyl, 4-methoxyfenyldifenylmethyl, 4,4'-dimethoxytrifenylmethyl, 4,4',4''-trimethoxytrifenylmethyl, 2-nitrobenzyl, 4-nitrobenzyl, 4-chlorbenzyl, 4-brombenzyl a 4-kyanobenzyl.

* 4 ♦· · « • 0 0 00

0 0 0 »0 0 • 4 0 4 *0 00 • 4 0 ♦

0 4

0 0 • 40 •0 0000

Termín „(nižší)alkoxykarbonyl” znamená methoxykarbonyl, ethoxykarbonyl, t-butoxykarbonyl a isobutoxykarbonyl.

Termín „(nižší)alkoxakarbonyl substituovaný atomem halogenu nebo tri(nižším)alkylsilylem znamená například

2,2,2-trichlorethoxykarbonyl a 2-trimethylsilylethoxykarbonyl.

Termín „alkenyloxykarbonyl znamená vinyloxykarbonyl a aryloxykarbonyl.

Termín „aralkyloxykarbonyl, kde arylový kruh se může substituovat 1 nebo 2 (nižší)alkoxyskupinou nebo nitroskupinou, znamená například benzylkarbonyl, 4-methoxybenzyloxykarbonyl, 3,4-dimethoxydin'benzyloxykarbonyl, 2-nitrobenzyloxykarbonyl a 4-nitrobenzyloxykarbonyl.

Preferované chránící skupiny jsou alifatciká acylová skupina, aromatická acylová skupina, methyl substituovaný 1 až 3 aryly, methyl substituovaný 1 až 3 aryly, kde arylový kruh je substituovaný nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, atomem halogenu nebo kyanoskupinou, nebo silyl. Více výhodné chránící skupiny jsou acetyl, benzoyl, p-methoxybenzyl, dimethoxytrityl, monomethoxytrityl nebo terč.butyldifenylsilyl.

Chránící skupiny při syntéza nukleové kyseliny popsané jako „skupina kyseliny fosforečné chráněná při syntéze kyselinu nukleové chránící skupinou ve shora uvedené definici symbolu R¹ a R³ nemají omezení, pokud chránící skupina může chránit skupinu kyseliny fosforečné při syntéze nukleové kyseliny. Příklady takových chránících skupin jsou „nižší alkyl, jako je methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, s-butyl, terc.butyl, a-pentyl, isopentyl, 2-methylbutyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, a-hexyl, isohexyl, 4-methylpentyl, 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 3,3-dimethylpentyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 1,3-dimtehylbutyl, 2,3-dimethylbutyl a 2-ethylbutyl.

Termín „nižší alkyl s kyainoskupinou znamená 2-kyanoethyl a 2-kyano-l,1-dimethylethyl.

• · · φ • · · φ • φ φ ·

Termín „ethylsubstituovaný silylem znamená 2-methyldifenylsilylethyl, 2-trimethylsilylethyl a 2-trifenylsilylethyl.

Termín „halogenovaný nižší alkyl znamená 2,2,2-trichlorethyl, 2,2,2-tribromethyl, 2,2,2-trifluorethyl a 2,2,2-trichlor-1,1-dimethylethyl.

Termín „nižší alkynyl znamená ethenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, l-methyl-2-propenyl, 1-methyl-l-propenyl, 2-methyl-l---propenyl, 2-methyl2-propenyl, 2-tehyl-2-porpenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, l-methyl-2-butenyl, 1-methyl-l-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, l-ethyl-2-butenyl, 3-butenyl, l-methyl-3-butenyl, 2-methyl-3-butenyl, l-ethyl-3-butenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, l-methyl-2-pentenyl, 2-methyl-2-pentenyl, 3-pentenyl, 1-methyl-3-pentenyl, 2-methyl-3-pentenyl, 4-pentenyl, l-methyl-4-pentenyl, 2-methyl-4-pentenyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl, 3-hexenyl, 4-hexenyl a 5-hexenyl.

Termín „cykloalkylová skupina zahrnuje cyklopropyl, cykloobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, norbonyl a adamantyl.

Termín „nižší alkenyl s kyanoskupinou znamená 2-kyanobutenyl.

Termín „aralalkyl znamená benzyl, α-naftylmethyl, β-naftylmethyl, indenylmethyl, fenantrenalmethyl, antracenylmethyl, difenylmethyl, trifenylmethyl, 1-fenethyl, 2-fenethyl, 1-naftylethyl, 2-naftylethyl, 1-fenylpropyl, 2-fenylpropyl, 3-fenylpropyl, 1-naftylpropyl, 2-naftylpropyl, 3-naftylpropyl, 1-fenylbutyl, 2-fenylbutyl, 3-fenylbutyl, 4-fenylbutyl, 1-naftylbutyl, 2-naftylbutyl, 3-naftylbutyl, 4-naftylbutyl, 1-fenylpentyl, 2-fenylpentyl, 3-fenylpentyl, 4-fenylpentyl, 5-fenylpentyl, 1-naftylpentyl, 2-naftylpentyl, 3-naftylpentyl, 4-naftylpentyl, 5-naftylpentyl, 1-fenylhexyl, 2-fenylhexyl, 3-fenylhexyl, 4-fenylhexyl, 5-fenylhexyl, 6- fenylhexyl, 1-naftylhexyl, 2-naftylhexyl, 3-naftylhexyl, 4-naftylhexyl, 5-naftylhexyl, 6-naftylhexyl.

·· • * * · • · • · • · * t I # •·· · · » · • · ··· ···* • · ·· · »· · 99 99 9

Termín „aralkyl, kde arylový kruh je substituován nitroskupinou a/nebo halogenovým atomem zahrnuje 4-chlorbenzyl, 2-(4-nitrofenyl)ethyl, o-nitrobenzyl, 4-nitrobenzyl a

2.4- dinitrobenzyl, 4-chlor-2-nitrobenzyl.

Termín „aryl znamená fenyl, indenyl, naftyl, fenantrenyl a antracenyl.

Termín „aryl substituovaný nižším alkylem, halogenovým atomem a/nebo nitroskupinou znamená 2-methylfenyl, 2,6-dimethylfenyl, 2-chlorfenyl, 4-chlorfenyl, 2,4-dichlorfenyl,

2.5- dichlorfenyl, 2-bromfenyl, 4-nitrofenyl, 4-chlor-2-nitrofenyl.

Preferované chránící skupiny jsou „nižší alkyl, „nižší alkyl substituovaný kyanoskupinou, „aralkyl, „aralkyl, kde arylový kruh je substituovaný nitroskupinou a/nebo halogenovým atomem nebo „aryl substituovaný nižším alkylem, halogenovým atomem a/nebo nitroskupinou.

Výhodnější jsou 2-kyanoethyl, 2,2,2-trichlorethyl, benzyl, 2-chlorfenyl nebo 4-chlorfenyl.

Termín „alkylové skupiny vykazující 1 až 6 atomů uhlíku u vedené v definici alfa skupiny je například alkyl s přímým nebo větveným řetězcem, který má 1 až 6 atomů uhlíku, jako je například methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, s-butyl, terc.butyl, pentyl a hexyl. Preferované skupiny jsou alkyly, které mají 1 až 4 atomy uhlíku a více se preferují alkyly, které mají 1 až 2 atomy uhlíku a nejvíce se preferuje methyl.

Termín „chránící skupina pro aminokyselinu při syntéze nukleové kyseliny popsané v definici symbolu R² uvedené shora v textu je bez omezení, pokud skupiny mohou chránit aminoskupiny při syntéze nukleové kyseliny. Tyto chránící skupiny jsou alifatické acylové skupiny, jako je například alkylkarbonylová skupina, jako je formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, pivaloyl, valeryl, isovaleryl, oktanoyl, dekanoyl, 8-methylnonanoyl, 3-ethyloktanoyl, 3,7φφ

Φ φ · • φ φφφ φ φ φ φ • » φ φ φφ φφ φφ ·· φ · φ φ φ φ φ φφφ φφφ φ* φφφφ dimethyloktanoyl, undekanoyl, tridekanoyl, hexadekynoyl, 14-methylpentadekanoyl, 13,13-dimethyltetradekanoyl, 1-methylheptadekanoyl, nonadekanoyl, eikosanoyl a henikosanoyl, karboxylovaná alkylkarbonylová skupina, jako je sukcinoyl, glutaroyl a adipoyl, halogen(nižší)alkylkarbonalová skupina, jako je chlroacetyl, dichloracetyl, trichloracetyl a trifluoracetyl, (nižší)alkoxy(nižší)alkylkarbonylová skupina, jako je methoxyacetyl, nenasycená alkylkarbonylová skupina jako je (E)-2-methyl-2-butenoyl.

Termín „aromatická acylová skupina zahrnuje například arylkarbonylovou skupinu, jako je benzoyl, α-naftoyl a β-naftoyl, halogenarylkarbonylová skupina, jako je 2-brombenzoyl a 4-chlorbenzoyl, nižší alkylovaná arylkarbonylová skupina, jako je 2,4,6-trimethylbenzoyl a 4-toluyl, nižší alkoxylovaná arylkarbonylová skupina, jako je 4-anisoyl, karboxylovaná arylkarbonylová skupina, jako je 2-karboxybenzoyl, 3-karboxybenzoyl a 4-karboxybenzoyl, nitrátovaný arylkarbonylová skupina, jako je 4-nitrobenzoyl a 2-nitrobenzoyl, nižší alkoxykarbonylovana arylkarbonylová skupina, jako je 2-(methoxykarbonyl)benzoyl, arylovaná arylkarbonylová skupina, jako je 4-fenylbenzoyl.

Termín „nižší alkoxykarbonylová skupina znamená methoxykarbonyl, ethoxykrabonyl, t-butoxakarbonyl a isobutoxykarbonal.

Termín „nižší alkoxykarbonylová skupina substituovaná halogenovým atomem nebo tri(nižší)alkylsilovou skupinou, znamená například 2,2,2-trichlorethoxykarbonyl a 2-trimethylethoxykarbonyl.

Termín „alkenyloxykarbonylová skupina znamená vinyloxykabonyl a aryloxykarbonyl.

Termín „aralkyloxykarbonylová skupina, kde arylový kruh může být substituovaný 1 až 2 nižšími alkoxyskupinami nebo nitroskupinami jako je benzyloxykarbonyl, 417

0 0 0 • · 0

0 0 00

0 0

-methoxybenzyloxykarbonyl, 3,4-dimethoxybenzyloxykOrbonyl, 2-nitrobenzyloxykarbonyl a 4-nitrobenzyloxykarbonyl.

Preferovanou skupinou jsou „alifatická acylová skupina nebo „aralkyloxykerbonylová skupina, kde arylový kruh může být susbtituován 1 až 2 alkoxyskupinami nebo nitroskupinami.

Více preferované skupiny jsou „alifatická acylová skupina nebo aralkyloxykarbonylová skupina, kde arylový kruh se může substituovat 1 až 2 nižšími alkoxyskupinami nebo nitroskupinami .

Zvláště preferovaná skupina je trifluoracetylová skupina nebo benzyloxykarbonylová skupina.

Termín „fosforamiditová skupina popsaná shora v textu reprezentovaná skupinou -P(OR^3a) (NR^3b) (kde R^3a reprezentuje alkylovou skupinu, které mají 1 až 6 atomů uhlíku nebo kyanoalkylová skupina, která má 1 až 7 atomů uhlíku, zatímco R^3b reprezentuje alkylskupinu, která obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku).

Preferované skupiny jsou ty reprezentované vzorcem -P (OC₂H₄CN) (NCH (CH₃) ₂) nebo -P (OCH₃) (NCH (CH₃) 2) .

Termín „halogenový atom popsaný shora v textu v definici a skupiny je fluór, chlór, bróm nebo jód a preferované atomy jsou atom fluóru nebo chlóru.

Termín „alkylová skupina, která má 1 až 6 atomů uhlíku popsaných v definici R^4a, R^4b a a skupiny shora v textu je například alkylová skupina s přímým nebo větveným řetězcem, která má 1 až 6 atomů uhlíku, jako je methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, s-butyl, terč.butyl, pentyl a hexyl. Preferované skupiny jsou methyl nebo ethyl.

Termín „hydroxyskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny popsané shora v textu v definici R^4a, R^4b a α-skupiny je podobná skupině, která se popisuje dříve v textu v „chránící skupina pro hydroxyskupinu při syntéze nukleové kyseliny v shora uvedené definici R¹. Preferované ftftftft ft ftft · ft» ftft • ft ·· • ftft · • ft · ftftft ftftft ·'· ftftftft skupiny jsou „alifatická acylová skupina a „aromatická acylová skupina a nejvíce preferovanou skupinou je benzoyl.

Termín „merkaptoskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny popsané shora v textu v definici R^4a, R^4b a a skupina je například „skupina tvořící disulfid, jako je například alkylthioskupinu, jako je methylthioskupina, ethylthioskupina a terč.butylthioskupina a arylthioskupina, jako je benzylthioskupina a navíc skupiny popsané termínem „chránící skupina pro hydroxyskupinu při syntéze nukleové kyseliny v definici symbolu R¹.

Mezi těmito preferovanými skupinami jsou „alifatická acylová skupina nebo „aromatická acylová skupina a nejvíce preferovanou skupinou je benzoylová skupina.

Termín „aminokyselina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny popsaná shora v definicích R^4a, R^4b a a skupina je podobná skupině, která se popisuje v termínu „chránící skupina pro aminokyselinu při syntéze nukleové kyseliny, která se už popisuje v definici R². Preferované skupiny jsou „alifatické acylové skupiny nebo „aromatické acylové skupiny a nejvíce se preferuje benzoylová skupina.

Termín „alkoxyskupina vykazující 1 až 6 atomů uhlíků popsaná shora v textu v definici R^4a, R^4b a a skupina je například alkoxyskupina s přímým nebo větveným řetězcem, která má 1 až 6 atomů uhlíku, jako je meťbxyskupina, ethoxyskupina, n-propoxyskupina, isopropoxyskupina, n-butoxyskupina, isobutoxyskupina, s-butoxyskupina, terč.butoxyskupina, pentyloxe a hexyloxyskupina. Preferované skupiny jsou methoxyskupina nebo ethoxyskupina.

Termín „alkylthioskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku popsaná shora v definicích R^4a, R^4b a a skupina je například methylthioskupina, ethylthioskupina, propylthioskupina, isopropylthioskupina, butylthioskupina, isobutylthioskupina, s-butylthioskupina, terč.butylthioskupina, pentylthioskupina ♦ Φ ·· • · · • φφφφ φ

φ

nebo hexylthioskupina. Preferované skupiny jsou methylthioskupina nebo ethylthioskupina.

Termín „alkylaminoskupina substituována alkylskupinou, která má 1 až 6 atomů uhlíku popsaná shora v textu v definicích R^4a, R^4b a a skupina, jako je například methylaminoskupina, ethylaminoskupina, propylaminoskupina, isopropylaminoskupina, butylaminoskupina, isobutylaminoskupina, s-butylaminoskupina, terč.butylaminoskupina, pentylaminoskupina, hexylaminoskupina, dimethylaminoskupina, diethylaminoskupina, dipropylaminoskupina, diisopropylaminoskupina, dibutylaminoskupina, diisobutylaminoskupina, di(s-butyl)aminoskupina, di (terč.butyl)aminoskupina, dipentylaminoskupina nebo dihexylaminoskupina. Preferované skupiny jsou methylaminoskupina, ethylaminoskupina, dimethylaminoskupina nebo diethylaminoskupina.

Termín „kyanoalkoxyskupina, která obsahuje 1 až 7 atomů uhlíku popsaná shora v textu v definici R^4a, R^4b je například kyanomethoxyskupina, kyanoethoxyskupina, kyanopropyloxyskupina, kyanobutyloxyskupina, kyanopentyloxyskupina nebo kyanohexyloxyskupina a preferovanou skupinou je 2-kyanoethoxyskupina.

Termín „jejich farmaceuticky přijatelné sole popsané shora v textu vykazují sole oligonukleosidových analogů vzorce 1 a oligonukleotidových analogů, které mají shora uvedenou chemickou strukturu la. Mezi těmito solemi se preferují například sole kovů, jako jsou sole alkalických kovů, například sodné sole, draselné sole, litné sole, sole kovů alkylických zemin, jako je například vápenaté sole a hořečnaté sole, sole hlinité, železité sole, zinečnaté sole, měďnaté sole, nikelnaté sole a kobaltnaté sole, sole aminů, jako jsou anorganické sole, například amonné sole, organické sole, například t-oktylamonové sole, dibenzylaminové sole, morfolinové sole, glukosaminové sole, fenylglycinalkylesterové sole, ethylendiamonové sole, N-methylglukaminové sole, sole • · φφ • ♦ ♦ • · φφ® • φ φ • φφφ · · φφ φφ ·Φ

Φφφ φφ φ φ φφφ φ φφφ guanidinu, diethylaminové sole, triethylaminové sole, dicyklohexylaminové sole, N,N'-dibenzylethylendiaminové sole, chlorprokainové sole, prokainové sole, diethanolaminové sole, N-benzylfenethylaminové sole, piperazinové sole, sole tetramethylamonia a tris(hydroxymethyl)amonomethanové sole, sole anorganických kyselin, jako je sole hydrohalogenových kyselin, například sole kyselina fluorovodíkové, chlorovodíkové, bromvodíkové a jodovodíkové, sole kyseliny dusičné, sole kyseliny chloristé, sole kyseliny sírové a sole kyseliny fosforečné, sole organických kyselin, jako jsou sole nižší alkansírové, například sole kyseliny methansulfonové, sole kyseliny trifluormethansulfonové a ethansulfonové, arylsulfonové, například sole benzensulfonové kyseliny a p-toluensulfonové kyseliny, sole kyseliny octové, sole kyseliny malienové, sole kyseliny fumarové, sole kyseliny jantarové, sole kyseliny citrónové, sole kyseliny vinné, sole kyseliny šťavelové, sole kyseliny maleinové, dále sole aminokyselin, jako jsou sole glycinu, sole lysinu, sole argininu, sole ornithinu, sole glutamové kyseliny a sole kyseliny asparágové.

Mezi těmito solemi se preferují sole sodné, draselné a triethylaminové sole v případě oligonukleotidových analogů, které obsahují nukleosidovou strukturu la, a volná forma nukleosidu se preferuje v případě nukleosidových analogů vzorce 1.

Nukleosidové analogy vzorce 1 a oligonukleotidové analogy, které mají shora uvedenou strukturu vzorce la podle vynálezu absorbují nebo adsorbují vodu za vzniku hydrátů, když se nechají v atmosféře. Tyto jsou také předmětem vynálezu.

Nukleosidové analogy vzorce 1 a oligonukleotidové analogy zahrnující shora uvedenou strukturu vzorce la podle vynálezu absorbují jistá rozpouštědla za vzniku solvátu. Tyto sole jsou také popsány ve vynálezu. Některé typické příklady sloučeniny obecného vzorce 1 podle vynálezu jsou uvedeny v tabulce č. 1 a 2.

·· 99 • » » • · ··· • * 9 9 • 9 9 9

99 •4 99 • · 4 · • 4 4 • · 4 • 4 4 »4 4444

Zkratky používané v tabulce č. 1 a 2 jsou následující: Zkratka Bn znamená benzylovou skupinu, zkratka Bz znamená benzoylovou skupinu, zkratka Me znamená methylovou skupinu, zkratka PMBn znamená p-methoxybenzylovou skupinu, zkratka MMTr znamená 4-methoxytrifenylmethylovou skupinu, zkratka DMTr znamená 4,4'-dimethoxytrifenylmethylovou skupinu, zkratka TMTr znamená 4,4 , 4''-trimethoxytrifenylmethylovou skupinu, zkratka TMS znamená trimethylsilylovou skupinu, zkratka TBDMS znamená terč.butyldimethylsilylovou skupinu, zkratka TBDPS znamená terč.butyldifenylsilylovou skupinu.

Tabulka č. 1

CO

příklad sloučeniny číslo	R¹	R²	R^a	R^b
1-1	H	nh₂	H	H
1-2	H	nh₂	H	OH
1-3	H	nh₂	H	SH
1-4	H	nh₂	H	nh₂
1-5	H	nh₂	H	OMe
1-6	H	nh₂	F	H
1-7	H	nh₂	F	nh₂
1-8	H	nh₂	Cl	H
1-9	H	nh₂	Cl	nh₂
1-10	H	nh₂	Cl	Cl
1-11	H	nh₂	Br	H
1-12	H	nh₂	Br	nh₂
1-13	H	nh₂	OH	H
1-14	H	nh₂	OH	OH

0«

0 0 »00 0 0 « *

0 ·

0«

0« ·» • 0 · 0 ·· 0

0»

0 0 •0 »«<·

0« * 0 0 · * 0

0« »00 • 0 »9« ·

1-15	Η	νη₂	ΟΗ	nh₂
1-16	Η	νη₂	OMe	OMe
1-17	Η	νη₂	OMe	nh₂
1-18	Η	νη₂	νη₂	H
1-19	Η	νη₂	νη₂	F
1-20	Η	νη₂	νη₂	Cl
1-21	Η	νη₂	νη₂	Br
1-22	Η	νη₂	νη₂	OH
1-23	Η	νη₂	νη₂	nh₂
1-24	Η	νη₂	νη₂	OMe
1-25	Η	ν₃	Η	H
1-26	Η	ν₃	Η	OH
1-27	Η	ν₃	Η	SH
1-28	Η	ν₃	Η	nh₂
1-29	Η	ν₃	Η	OMe
1-30	Η	ν₃	F	H
1-31	Η	ν₃	F	nh₂
1-32	Η	ν₃	C1	H
1-33	Η	ν₃	C1	nh₂
1-34	Η	ν₃	C1	Cl
1-35	Η	ν₃	Br	H
1-36	Η	ν₃	Br	nh₂
1-37	Η	ν₃	OH	H
1-38	Η	ν₃	OH	OH
1-39	Η	ν₃	OH	nh₂
1-40	Η	ν₃	OMe	OMe
1-41	Η	ν₃	OMe	nh₂
1-42	Η	ν₃	nh₂	H
1-43	Η	ν₃	nh₂	F
1-44	Η	ν₃	nh₂	Cl
1-45	Η	ν₃	nh₂	Br
1-46	Η	ν₃	nh₂	OH
1-47	Η	ν₃	nh₂ .	nh₂
1-48	Η	ν₃	nh₂	OMe
1-49	Η	ν₃	H	NHBz
1-50	Η	νη₂	H	NHBz
1-51	Η	ν₃	Cl	NHBz
1-52	Η	ν₃	OH	NHBz
1-53	Η	ν₃	OMe	NHBz
1-54	Η	ν₃	NHBz	H

♦· ·· • » * · ·· ·· • · · ·

1-55	Η	n₃	NHBz	Cl
1-56	Η	n₃	NHBz	OH
1-57	Η	nh₂	NHBz	OH
1-58	Η	n₃	NHBz	NHBz
1-59	Η	n₃	NHBz	OMe
1-60	Βη	n₃	H	NHBz
1-61	Βη	n₃	NHCOCH(CH₃)₂	OH
1-62	ΡΜΒη	n₃	H	NHBz
1-63	ΡΜΒη	n₃	NHCOCH(CH₃)₂	OH
1-64	MMTr	n₃	H	NHBz
1-65	MMTr	n₃	NHCOCH(CH₃)2	OH
1-66	DMTr	n₃	H	NHBz
1-67	DMTr	n₃	NHCOCH(CH₃)2	OH
1-68	TMTr	n₃	H	NHBz
1-69	TMTr	n₃	NHCOCH(CH₃)2	OH
1-70	TMS	n₃	H	NHBz
1-71	TMS	n₃	NHCOCH(CH₃)2	OH
1-72	TBDMS	n₃	H	NHBz
1-73	TBDMS	n₃	NHCOCH(CH₃)2	OH
1-74	TBDPS	n₃	H	NHBz
1-75	TBDPS	n₃	NHBz	OH
1-76	Bn	nh₂	H	NHBz
1-77	Bn	nh₂	NHCOCH(CH₃)2	OH
1-78	PMBn	nh₂	H	NHBz
1-79	PMBn	nh₂	NHCOCH(CH₃)₂	OH
1-80	MMTr	nh₂	H	NHBz
1-81	MMTr	nh₂	NHCOCH(CH₃)2	OH
1-82	DMTr	nh₂	H	NHBz
1-83	DMTr	nh₂	NHCOCH(CH₃)₂	OH
1-84	TMTr	nh₂	H	NHBz
1-85	TMTr	nh₂	NHCOCH(CH₃)₂	OH
1-86	TMS	nh₂	H	NHBz
1-87	TMS	nh₂	NHCOCH(CH₃)₂	OH
1-88	TBDMS	nh₂	H	NHBz
1-89	TBDMS	nh₂	NHCOCH(CH₃)₂	OH
1-90	TBDPS	nh₂	H	NHBz
1-91	TBDPS	nh₂	NHCOCH(CH₃)₂	OH

• · • ·

Tabulka č. 2

příklad sloučeniny číslo	R¹	R²	R⁵	R⁶
2-1	H	nh₂	H	H
2-2	H	nh₂	Cl	H
2-3	H	nh₂	OH	H
2-4	H	nh₂	OH	Me
2-5	H	nh₂	SH	H
2-6	H	nh₂	nh₂	H
2-7	H	nh₂	nh₂	F
2-8	H	nh₂	nh₂	Cl
2-9	H	nh₂	nh₂	Me
2-10	H	nh₂	OMe	H
2-11	H	n₃	H	H
2-12	H	n₃	Cl	H
2-13	H	n₃	OH	H
2-14	H	n₃	OH	Me
2-15	H	n₃	SH	H
2-16	H	n₃	nh₂	H
2-17	H	n₃	nh₂	F
2-18	H	n₃	nh₂	Cl
2-19	H	n₃	nh₂	Me
2-20	H	n₃	OMe	H
2-21	H	n₃	NHBz	H
2-22	H	nh₂	NHBz	H
2-23	H	n₃	NHBz	F
2-24	H	n₃	NHBz	Cl
2-25	H	n₃	NHBz	Me
2-26	Bn	n₃	OH	H
2-27	Bn	n₃	OH	Me

2-28	Bn	n₃	NHBz	H
2-29	PMBn	n₃	OH	H
2-30	PMBn	n₃	OH	Me
2-31	ΡΜΒη	n₃	NHBz	H
2-32	MMTr	n₃	OH	H
2-33	MMTr	n₃	OH	Me
2-34	MMTr	n₃	NHBz	H
2-35	DMTr	n₃	OH	H
2-36	DMTr	n₃	OH	Me
2-37	DMTr	n₃	NHBz	H
2-38	TMTr	n₃	OH	H
2-39	TMTr	n₃	OH	Me
2-40	TMTr	n₃	NHBz	H
2-41	TMS	n₃	OH	H
2-42	TMS	n₃	OH	Me
2-43	TMS	n₃	NHBz	H
2-44	TBDMS	n₃	OH	H
2-45	TBDMS	n₃	OH	Me
2-46	TBDMS	n₃	NHBz	H
2-47	TBDPS	n₃	OH	H
2-48	TBDPS	n₃	OH	Me
2-49	TBDPS	n₃	NHBz	H
2-50	Bn	nh₂	OH	H
2-51	Bn	nh₂	OH	Me
2-52	Bn	nh₂	NHBz	H
2-53	PMBn	nh₂	OH	H
2-54	PMBn	nh₂	OH	Me
2-55	PMBn	nh₂	NHBz	H
2-56	MMTr	nh₂	OH	H
2-57	MMTr	nh₂	OH	Me
2-58	MMTr	nh₂	NHBz	H
2-59	DMTr	nh₂	OH	H
2-60	DMTr	nh₂	OH	Me
2-61	DMTr	nh₂	NHBz	H
2-62	TMTr	nh₂	OH	H
2-63	TMTr	nh₂	OH	Me
2-64	TMTr	nh₂	NHBz	H
2-65	TMS	nh₂	OH	H
2-66	TMS	nh₂	OH	Me
2-67	TMS	nh₂	NHBz	H

• · • · • ··· • · · ·

2-68	TBDMS	nh₂	OH	H
2-69	TBDMS	nh₂	OH	Me
2-70	TBDMS	nh₂	NHBz	H
2-71	TBDPS	nh₂	OH	H
2-72	TBDPS	nh₂	OH	Me
2-73	TBDPS	nh₂	NHBz	H

Mezi sloučeninami uvedenými v tabulkách se preferují následující látky 1-3, 1-4, 1-7, 1-9, 1-10, 1-16, 1-17, 1-19,

1- 20, 1-21, 1-22, 1-23, 1-27, 1-28, 1 až 33, 1 až 34, 1-40, 141, 1-43, 1-44, 1-45, 1-46, 1-47, 1-49, 1-50, 1-56, 1-57, 182, 1-83, 2-3, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8, 2-9, 2-20, 2-13, 2-14,

2- 15, 2-16, 2-17, 2-18, 2-19, 2-20, 2-21, 2-22, 2-48, 2-59, 260 a 2-61.

Více se preferují následující sloučeniny: 1-4, 1-22, 1-28,

1- 46, 1-49, 1-50, 1-56, 1-57, 1-82, 1-83, 2-3, 2-4, 2-6, 2-13,

2- 14, 2-16, 2-21, 2-22, 2-48,2-59, 2-60 a 2-61.

Zvláště preferované sloučeniny jsou:

2-4: 3'-amino-3 '-deoxy-2'-0,4'-C-methylen-5-methyluridin 2-14: 3'-azido-3'-deoxy-2'-0,4'-C-methylen-5-methyluridin,

2-36: 3'-azido-3'-deoxy-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-O,4'-C-methylen-5-methyluridin,

2-48: 3'-azido-5'-O-terč.butyldifenylsilyl-3'-deoxy-2'-O,4-C-methylen-5-methyluridin a

2-60: 3'-amino-3'-deoxy-5-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-O,4'-C-methylen-5-methyluridin.

Sloučeniny podle vynálezu se mohou syntetizovat způsobem A popsaným dále v textu.

Při způsobu popsaném shora v textu symbol R¹, R² a B se definují shora v textu.

Symbol R⁷ reprezentuje chránící skupinu pro hydroxyskupinu a preferované sloučeniny jsou aromatické acylové skupiny, jako je například arylkarbonylové skupiny, jako je benzoyl, a-naftoyl a β-naftoyl, nižší alkylované arylkarbonylové skupiny, jako jsou 2,4,6-trimethylbenzoylová skupina, 4-toluylová skupina a arylovaná arylkarbonalová skupina, jako je 4-fenylbenzoylová skupina. Nejvýhodnější skupinou je benzyolová skupina.

Symbol R⁸ reprezentuje chránící skupinu pro hydroxyskupinu a preferované skupiny jsou „silylová skupina například tri(nižší)alkylsilylová skupina, jako je trimethylsilylová skupina, triethylsilylová skupina, isopropyldimethylsilylová skupina, t-butyldimethylsilylová skupina, methyldiisopropylsilylová skupina, methyldi-t-butylsilylová skupina a triisopropylsilylová skupina a tri(nižší)alkylsilylováskupina substituovaná 1 až 2 arylovými skupinami, jako je difenylmethylsilylová skupina, t-butyldifenylsilylová skupina, difenylisopropylsilylová skupina a fenyldiisopropylsilylová skupina, „methyl substituovaný 1 až 3 arylovými skupinami jako je benzyl, α-naftylmethyl, β-naftylmethyl, difenylmethyl, trifenylmethyl, ct-naf tyldif enylmethyl a 9-anthrylmethyl, „methyl substituovaný 1 až 3 arylovými skupinami, kde arylový kruh se substituuje nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, atomem halogenu nebo kyanoskupinou tak, že 4-methylbenzyl, 2,4,6-trimethylbenzyl, 3,4,5-trimethylbenzylem, 4-methoxybenzylem, 4-methoxafenyldifenylmethylem, 4,4'-dimethoxytrifenylmethylem, 4,4',4''-trimethoxytrifenylmethylem, 2-nitrobenzylem, 4-nitrobenzylem, 4-chlorbenzylem, 4-brombenzylem a 4-kyanobenzylem.

Více preferované skupiny jsou trimethylsilylová skupina, t-butyldimethylsilylová skupina, t-butyldifenylsilylová skupina, benzylová skupina, trifenylmethylová skupina, 4-methoxybenzylová skupina, 4-methoxyfenylmethylová skupina nebo 4,4', 4''-trimethoxytrifenylmethylová skupina.

Symbol R⁹ reprezentuje odstupující skupinua preferované skupiny jsou nižší alkylsulfonylová skupina, jako je methansulfonylová skupina a ethansulfonylová skupina, nižší alkylsulfonylovou skupinu substituovanou halogenovými atomy, jako je trifluormethansulfonylová skupina a arylsulfonylová skupina, jako je p-toluensulfonylová skupina.

Mezi těmito skupinami se preferují methansulfonylová skupina nebo p-toluensulfonylová skupina.

Symbol R¹⁰ reprezentuje chránící skupinu pro hydroxyskupinu a preferované skupiny jsou „alifatické acylové skupiny například alkylkarbonylová skupina, jako je formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, pivaloyl, valeryl, isovaleryl, oktanoyl, dekynoyl, 1-methylheptadekanoyl, nonadekanoyl, eikosanoyl a henikosanoyl, karboxylované alkylkarbonylová skupiny, jako je sukcinoyl, glutaroyl a adipoyl, halogen(nižší)alkylkarbonylová skupiny, jako je chloracetyl, dichloracetyl, trichloracetyl a trifluoracetyl, (nižší)alkoxy(nižší)alkylkarbonylová skupina, jako je methoxyacetylová skupina a nesaturované alkylkarbonylová skupiny, jako je (E)-2-methyl-2-butenoyl, „aromatické acylové skupiny například arylkarbonylová skupina, jako je benzoyl, α-naftoyl a β-naftoyl, halogenarylkarbonyl, jako je 2-brombenzoyl a 4-chlorbenzoyl, nižší alkylovaná arylkarbonylová skupina, jako je 2,4,6trimethylbenzoyl a 4-toluyl, (nižší)alkoxylovaná arylkarbonylová skupina, jako je 4-anisoyl, karboxylovaný arylkarbonyl, jako je 2-karboxybenzoyl, 3-karboxybenzoyl a 4-karboxybenzoyl, nitrované arylkarbonylová skupina, jako je 4-nitrobenzoylová skupina a 2-nitrobenzoylová skupina, nižšíalkoxykerbonylovaná arylkarbonylovaná skupina, jako je 2-(methoxakarbonyl)benzoyl a arylovaná arylkarbonyl, jako je 4-fenylbenzoyl.

Mezi těmito skupinami se více preferují „alifatické acylové skupiny a zvláště se preferuje acetyl.

Symbol B¹ reprezentuje purin-9-yl nebo 2-oxo-l,2-dihydropyrimidin-l-yl, který může mít 1 nebo více substituentů vybraných ze skupiny al popsané dále v textu.

• · (skupina al) hydroxyskupina, hydroxyskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, merkaptoskupina, merkaptoskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkylthioskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku aminoskupina, aminoskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou, která má 1 až 6 atomů uhlíku, alkylskupinu, která má 1 až 6 atomů uhlíku a atom halogenu.

Způsob A zobrazuje syntézu sloučenin vzorce la, lb a lc z počáteční sloučeniny vzorce 2 prostřednictvím zavedení substituentu B a uzavření kruhu.

Počáteční sloučenina vzorce 2 se syntetizuje z běžně dostupné diaceton-D-glukózy za použití podobného způsobu, který se popisuje v publikaci O. T. Schmidt, Methods in Carbohydr. Chem., 4, 318 (1964), J. S. Brimacombe and O. A. Ching, Carbhyd. Res. 8, 82 (1968), T. F. Tam and B. FraserReid, can. J. Chem., 57, 2818 (1979), S. A. Suzhkov,

Nuclesides and Nucleotides, 13, 2283 (1994).

Detaily každého způsobu A se popisují dále v textu.

[Způsob A] (Postup A-1)

Sloučenina vzorce (3) se připravila v kroku, který zahrnuje odstranění chránící skupiny počáteční sloučeniny vzorce 2, kterou tvoří primární alkohol, v přítomnosti báze v inertním rozpouštědle.

• · • · φ φ φ φ φ

Použité rozpouštědlo není omezeno pokud jde o rozpouštědlo, které se v normálním případě používá pro hydrolýzu. Může to být voda, organická rozpouštědla například alkoholy, jako je methanol, ethanol a n-propanol a ethery, jako je tetrahydrofuran a dioxan, nebo směs vody a organických rozpouštědel popsaných shora v textu. Preferovaná rozpouštědla jsou alkoholy.

Pro výběr používaného alkylického činidla není omezení, pokud činidlo neovlivňuje jiné části sloučeniny. Preferovaná alkalická činidla jsou kovové alkoxidy, jako je natriummethoxid, uhličitan alkalického kovu, jako je uhličitan sodný, uhličitan draselný a uhličitan litný, hydroxidy alkalických kovů, jako je hydroxid sodný, hydrixid draselný, hydroxid litný a hydroxid barnatý nebo hydroxid amonný, jako je vodný roztok čpavku a koncentrovaný čpavek v methanolu. Preferovaná alkalická činidla jsou uhličitany alkalických kovů.

Reakční teplota a reakční doba závisí na počátečním materiálu, rozpouštědle použitém alkalickém činidle a nemají omezení. Běžná reakční teplota se pohybuje mezi 0 °C a 15 °C a reakční čas je 1 hodina až 10 hodin.

Po ukončení reakce požadovaná sloučenina vzorce 3 se shromáždila z reakční směsi běžnou metodou. Reakční směs se například neutralizuje a zvyšuje se její koncentrace a do zbytku se přidá voda a organické rozpouštědlo nemísitelné s vodou, jako je ethylacetát. Po promytí vodou se izoluje organická fáze zahrnující požadovanou sloučeninu a suší se na bezvodém síranu sodném nebo podobně. Požadovaná sloučenina se získala vypařením rozpouštědel.

Získaná sloučenina se čistila, jestliže je to nezbytné, běžnými metodami, jako je rekrystalizace a/nebo chromatografie na koloně se silikagelem.

(Způsob A-2) ·· ·« • · φ • · · ··

·· ·· • · · • · • · · ·

Tímto způsobem se připravila sloučenina vzorce 4, která zahnruje reakci sloučeniny vzorce 3 získanou v postupu A-l s činidlem s chráněnou hydroxyskupinou v přítomnosti alkylického činidla v inertním rozpouštědle. Výběr rozpouštědla pro použití nemá omezení pokud neinhibuje reakci a rozpouští počáteční materiály a používá se například alifatický uhlovodík, jako je hexan a heptan, aromatický uhlovodík, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, ester, jako je ethylformát, athylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ether, jako je diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxanm dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, nitril, jako je acetonitril a isobutyronitril, amid , jako je formamid, N,N-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, N-methylpyrrolidinon a hexamethylfosforotriamid. Preferované rozpouštědlo je methylenchlorid.

Výběr alkalického činidla je bez omezení pokud se používá jako alkalické činidlo v běžných reakcích. Může to být například organické alkalické činidlo, jako je A-methylmorfolin, triethylamin, tributylamin, diisopropylethylamin, dicyklohexylamin, N-methylpiperidin, pyperidin, 4pyrrolidinopyridin, pikolin, 4-(N,N-dimethylamino)pyridin,

2,6-di(terč.butyl)-4-methylpyridin, chinolin, N,N-dimethylanilin a N,N-diethylanilin.Preferované alkalické činidlo je triethylamin.

Používaná činidla s chráněným hydroxylem jsou například silylhalidy, jako je t-butyldimethylsilylchlorid, trimethylsilylchlorid, triethylsilylchlorid, triethylsilylbromid, triisopropylsilylchlorid, dimethylisopropylsilylchlorid, diethylisopropylsilylchlorid, t-butyldifenylsilylchlorid, difenylmethylsilylchlorid a trifenylsilylchlorid, tritylhalidy, jako je 4-methoxytrife-nylmethylchlorid, 4,4'9 9

9 9

9 99 9 • · · • · ··· • · · • 9 9

99 dimethoxytrifenylmethylchlorid a 4,4',4''-trimethoxytrifenylmethylchlorid a aralkylhalidy, jako je benzylchlorid, benzylbromid a p-methoxybenzylbromid. Preferované činidlo s chráněným hydroxylem je t-butyl-difenylsilylchlorid. Reakční teplota je obvykle mezi -20 °C a teplotou refluxu použitého činidla. Preferovaná teplota je mezi 0 °C a teplotou refluxu použitého činidla.

Reakční doba závisí hlavně na teplotě reakce, počáteční sloučenině, alkalickém činidle a použitém rozpouštědle.

Obyčejně je od 10 minut do tří dní a prferovaný reakční doba je od 1 hodiny do 24 hodin.

Po ukončení reakce se z reakční směsi izolovala požadovaná sloučenina vzorce 4 použitím běžných metod. Reakční směs se neutralizovala a voda a organické rozpouštědlo nemísitelné s vodou, jako je ethylacetát se přidalo k neutralizované reakční směsi. Po promytí vodou se separovala organická fáze, která obsahuje požadovanou sloučeninu a sušila se na bezvodém síranu sodném nebo podobně. Požadovaná sloučenina se získala odpařením rozpouštědla.

Sloučenina, je-li potřeba a zvláště, když produkt, ve kterém se R⁸ zavedl do hydroxyskupiny v požadované poloze, se získala rekrystalizací a kolonovou chromatografií na silikagelu.

(Způsob A3)

Tímto způsobem, který zahrnuje reakci sloučeniny vzorce 4 získanou postupem A-2 za použití činidla obsahujícího odstupující skupinu v přítomnosti inertního rozpouštědla se připravila sloučenina vzorce 5.

Použité rozpouštědlo je například alifatický uhlovodík, jako je hexan, heptan, ligroin a ether minerálního oleje, aromatický uhlovodík, jako je benzen, toluen a xylen, halogenovaný uhlovodík, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, • 4 4« • 4 ·

4 »·»4

ester, jako je ethylformát, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ether, jako je diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, keton, jako je aceton, methylethylketon a methylisobutylketon, isoforon a cyklohexanon, nitrosloučenina, jako je nitroethan a nitrobenzen, nitril, jako je acetonitril a isobutyronitril, amid, jako je formamid, N,N-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, N-methylpyrrolidinon a hexamethylfosforotriamid, sulfoxid, jako je sulfolan nebo pyridin.

Mezi těmito rozpouštědly vybraným preferovaným rozpouštědlem je methylenchlorid.

Preferovaný bazický katalyzátor je alkalické činidlo, jako je triethylamin, pyridin a dimethylaminopyridin.

Používaným činidlem zavádějícím odstupující skupinu je například alkylsulfonylhalid, jako je methansulfonylchlorid a ethansulfonylbromid nebo arylsulfonylhalid, jako je p-toulensulfonylchlorid.

Preferovanými činidly zavádějícími odstupující skupinu jsou methansulfonylchlorid a p-toluensulfonylchlorid.

Reakční teplota závisí na počáteční sloučenině, rozpouštědlu, na činidle zavádějícím odstupující skupinu a použitém alkalickém činidle. Teplota se obvykle pohybuje mezi 0 °C až 50 °C a preferovaná teplota se pohybuje mezi 10 °C a 40 °C.

Reakční doba závisí na počáteční sloučenině, rozpouštědle, činidle zavádějícím odstupující skupinu a použitém alkalickém činidle. Obvykle reakční doba je od 10 min do 24 hodin a preferovaný reakční čas je od 1 hodiny do 15 hodin.

Po ukončení reakce požadovaná sloučenina vzorce 5 se shromáždila z reakční směsi podle běžných metod. Reakční směs se neutralizovala a zvýšila se její koncentrace. Ke zbytku se přidala voda a organické rozpouštědlo nemísitelné s vodou, •»· · ϊ·· · «» · ·« » · ·«· · Λ · . * ϊ ϊ ί ϊ * ’ * ··..

«« -- · · » , , jako je ethylacetát. Po promytí vodou se separovala organická fáze, která zahrnuje požadovanou sloučeninu, sušila se na bezvodém síranu sodném nebo podobně a pak se požadovaná sloučenina získala odpařením rozpouštědla. Získaná sloučenina, jestliže je to nezbytné, se čistila běžnými metodami, jako je rekrystalizace, kolonová chromatografie se silikagelem a podobně.

(Způsob A-4)

Tímto způsobem se připravila sloučenina vzorce 6, přičemž tento způsob zahrnuje reakci sloučeniny vzorce 5, jenž se získala v postupu A-3 s kyselým anhydridem v přítomnosti kyselého katalyzátoru v rozpouštědle.

Použité rozpouštědlo je například ether, jako je diether, dioxan a terahydrofuran, nitril, jako je acetonitril a isobutyronitril, amid, jako je formamid, N,N-dimethylformamid,

N,N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon a hexamethylfosforotriamid nebo organická kyselina, jako je kyselina octová. Preferovaným rozpouštědlem je kyselina octová.

Kyselým katalyzátorem používaný v postupu A-4 je například anorganická kyselina, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová nebo kyselina dusičná. Preferovanou kyselinou je kyselina sírová (zvláště koncentrovaná kyselina sírová).

Používaný kyselý anhydrid je například nižší alifatický kyselý anhydrid, jako je anhydrid kyseliny octové, anhydrid kyseliny propionové a podobně. Preferovaný kyselý anhydrid je anhydrid kyseliny octové.

Reakční teplota závisí na počáteční sloučenině, rozpouštědle, kyselém katalyzátoru a použitém kyselém anhydridu. Obvykle reakční teplota je mezi 0 °C a 50 °C a preferovaná reakční teplota je mezi 10 °C a 40 °C.

Reakční teplota závisí na počáteční sloučenině, rozpouštědle, kyselém katalyzátoru, kyselém anhydridu a • 0

0· ·· • · • ·β»

0 0 0 • 0 ·

0· ·« ·· « 0 4 • Ί

0 0 • · »«·· *0 00 • · » • 0

0 0 • 00 ·· 0000 reakční teplotě. Reakční čas je obvykle od 10 minut do 12 hodin a preferuje se reakční doba 30 minut až 6 hodin.

Po ukončení reakce se získala z reakční směsi požadovaná sloučenina vzorce 6 běžnou metodou. Do reakční směsi se přidala voda a organické rozpouštědlo nemísitelné s vodou, jako je ethylacetát. Po promytí vodou se izolovala organická fáze zahrnující požadovanou sloučeninu, sušila se na bezvodém síranu sodném. Pak se požadovaná sloučenina může získat odpařením rozpouštědla.

Získaná sloučenina, jestliže je to nezbytné, se dále čistila běžnými metodami, jako je krystalizace, kolonová chromatografie na silikagelu a podobně.

(Způsob A-5)

Tímto způsobem, který zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce 6 získané postupem A-4 s trimethylsilylovým derivátem substituovaným purinem nebo pyridinem připraveným podle publikace H. Vorbrueggen, K. Krolikiewicz and B. Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981) v přítomnosti kyselého katalyzátoru v inertním rozpouštědle se připravila sloučenina vzorce 7.

Rozpouštědlo je aromatický uhlovodík, jako je benzen, toluen a xylen, halogenovaný uhlovodík, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, 1,2-dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, nitril, jako je acetonitril a isobutyronitril, amid, jako je formamid, N,N-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, N-methylpyrrolidinon a hexamethylfosforotriamid nebo sulfid uhličitý. Preferované rozpouštědlo je 1,2-dichlorethan.

Používaný kyselý katalyzátor je například Lewisův kyselý katalyzátor, jako je A1C1₃, SnCl₄, TiCl₄, ZnCl₂, BF₃ a trimethylsilyltrifluormethansolfonát. Preferovaný kyselý katalyzátor je chlorid ciničitý (SnCl₄) .

• ·

444 • · · · ··· · · · • · · · ·· · · 4 4 9 4 4 4 4 4

Reakční teplota závisí na počáteční sloučenině, rozpouštědle a na použitém kyselém katalyzátoru. Reakční teplota je obvykle mezí 0 °C a 100 °C a preferovaná reakční teplota je mezi 30 °C a 80 °C.

Reakční doba závisí na počáteční sloučenině, rozpouštědle, kyselém katalyzátoru a reakční teplotě. Obvykle reakční doba je od 1 hodiny do 3 dní a preferovaná reakční doba je od 1 hodiny do 2 dní.

Po ukončení reakce se z reakční směsí izolovala požadovaná sloučenina vzorce 7 běžnými metodami. Reakční směs se například neutralizovala a přidala se do ní voda a organické rozpouštědlo nemísitelné vodou, jako je ethylacetát nebo methylenchlorid. Po promytí vodou se separovala organická fáze zahrnující požadovanou sloučeninu, sušila se na bezvodém síranu sodném nebo podobně. Pak se požadovaná sloučenina může získat odpařením rozpouštědla.

Získaná sloučenina, jestliže je to nezbytné, se čistila běžnými metodami například rekrystalizací, kolonovou chromatografií a podobně.

(Způsob A-6)

Sloučenina vzorce lc připravená způsobem, který zahrnuje cyklizační reakci sloučeniny vzorce 7 získanou postupem A-5 v přítomnosti alkalického katalyzátoru v inertním rozpouštědle.

Výběr rozpouštědla není omezen pokud neinhibuje reakci a rozpouští počáteční sloučeninu. Preferovaná rozpouštědla jsou alkoholy, jako je methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, isoamylalkohol, diethylenglykkol, glycerin, oktanol, cyklohexanol a methylcelosolv.

Nejvíce preferované rozpouštědlo je methanol. Používaný alkalický katalyzátor je například hydroxid alkalického kovu, jako je hydroxid sodný a hydroxid draselný, uhličitan alkalického kovu, jako je natriummethoxid a natriumethoxid • · • · * · • · • ·

nebo vodný roztok čpavku a podobně. Preferované alkalické katalyzátory jsou uhličitany alkalického kovu a nejvíce preferovaný alkalický katalyzátor je uhličitan sodný.

Reakční teplota závisí na počáteční sloučenině, rozpouštědle a použitém alkalickém katalyzátoru. Obvykle reakční teplota je mezi 0 °C a 50 °C a preferovaná reakční teplota je mezi 10 °C a 30 °C.

Reakční teplota závisí na počáteční sloučenině, rozpouštědle, alkalickém katalyzátoru a reakční teplotě.

Obvykle reakční doba je od jedné hodiny do tří dnů a preferovaný reakční doba je od 3 hodin do 2 dnů.

Po ukončení reakce se požadovaná sloučenina izolovala s reakční směsi běžnými postupy. Koncentrovala se reakční směs a ke zbytku se přidala voda a organické rozpouštědlo nemísitelné s vodou, jako je ethylacetát. Po promytí vodou se separovala organická fáze zahrnující požadovanou sloučeninu, sušila se pomocí bezvodého síranu sodného nebo podobně. Pak se požadovaná sloučenina může získat odpařením rozpouštědla.

Získaná sloučenina, je-li to nezbytné, se čistila běžnými metodami například rekrystalizací, kolonovou chromatografií na silikagelu a podobně.

(Způsob A-7)

Tímto postupem, který zahrnuje reakci sloučeniny vzorce la získané postupem A-6 s deprotekčním činidlem v inertním rozpouštědle, se připravila sloučenina vzorce lb. V tomto případě, kdy odstranění chránící skupiny je nezbytné, další postup může být vedený bez uvedeného postupu.

Postup odstranění ochrany závisí na použité chránící skupině a výběr deprotekčního činidla není omezující pokud nemá nežádoucí účinek na reakci. Odstranění chránící skupiny se může provést způsoby popsanými v literatuře „Protective Groups in Organic Synthesis (Theodora W. Greene, 1981, A Wiley-InterscinePublication).

·· ·9 ·· • · · · · · • · · · • · · · • 444 44 4444

Když existují různé druhy chránících skupin, některé z těchto metod se nekombinují správným způsobem a každá z nich se provádí opačně.

Zvláště, když chránící skupiny jsou (1) „alifatická acylová a aromatická acylová skupina, (2) „methyl substituovaný jednou až třemi arylovými skupinami nebo „methyl substituovaný jednou až třemi arylovými kruhy, kde arylový kruh je substituovaný nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, kyanoskupinou nebo atomem halogenu, (3) „silylové skupiny se mohou odstranit následujícím způsobem:

(1) Když chránící skupiny jsou alifatický acyl nebo aromatické acylové skupiny, jsou obvykle odstraněny reakcí s alkalickým činidlem v inertním rozpouštědle.

Výběr používaných rozpouštědel nemá omezení pokud jsou obvykle používaná při hydrolýze. Mohou se použít například voda, organická rozpouštědla, jako jsou například alkoholy, jako je methanol, ethanol a n-propanol, ethery, jako je tetrahydrofuran a dioxan nebo směsi voda a shora uvedená organická rozpouštědla. Preferovaná rozpouštědla jsou alkoholy.

Výběr alkalických činidel není omezený pokud neovlivňují jiné části sloučenin. Preferovaná alkalická činidla jsou alkoxidy kovů, jako je natriummethoxid, uhličitany alkalických kovů, jako je uhličitan sodný, uhličitan draselný a uhličitan litný, hydroxidy alkalických kovů, jako je hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid litný a hydroxid barnatý nebo čpavek, jako je vodný roztok čpavku a koncetrovaná směs čpavek-ethanol. Preferovaná alkalická činidla jsou uhličitany alkalického kovu.

Reakční teplota a reakční doba závisí na počáteční sloučenině, rozpouštědle a alkalickém činidle. Reakční teplota je obvykle mezi 0 °C a 150 °C a reakční doba je mezi 1 hodinou a 10 hodinami, účelem čehož je potlačení produkce vedlejších produktů.

• · • · ·· • · · * • · · · · ft · · · · · • · · · « · ·· ·· «· ···· ·· ····

Po ukončení reakce se požadovaná sloučenina vzorce lb izolovala z reakční směsi pomocí běžných metod. Koncentrace reakční směsi se zvýšila a ke zbytku se přidala voda a organické rozpouštědlo nemísitelné s vodou, jako je ethylacetát. Po promytí vodou se separovala organická fáze zahrnující požadovanou sloučeninu, sušila se bezvodým síranem sodným nebo podobně a pak se požadovaná sloučenina může získat odpařením rozpouštědla.

Získaná sloučenina, je-li to nezbytné, se čistila běžnými metodami, například rekrystalizaci, kolonovou chromatografii na silikagelu a podobně.

(2) V případě, že chránící skupina je „methyl substituovaný jednou až třemi aryly nebo „methyl substituovaný jedním až třemi arylovými kruhy, atomem halogenu nebo kyanoskupinou odstranění této skupiny se provádí redukčním činidlem v inertním rozpouštědle.

Preferovaná použitá rozpouštědla jsou alkoholy, jako je methanol, ethanol a isopropanol, ethery jako jsou diethylether, tetrahydrofuran a dioxan, aromatické uhlovodíky, jako je toluen, benzen a xylen, alifatické uhlovodíky, jako je hexan, a cyklohexan, estery, jako je ethylacetát a propylacetát, organické kyseliny, jako je kyselina octová nebo směsi organických rozpouštědel a voda.

Výběr redukčních činidel není omezen, jestliže se obvykle používají v katalytických reakcích. Preferovaná redukční činidla jsou paládium-uhlík, Raneyův nikl, oxid platiničity, oxid rhodohlinitý, trifenylfosfin-rhodiumchlorid a síran paladiumbarnatý.

Tlak, při kterém probíhá reakce není omezen. Obvykle se tento způsob provádí při tlaku 101,3 kPa až 1 013 kPa.

Reakční teplota se pohybuje mezi 0 °C až 60 °C a preferovaná reakční teplota je mezi 20 °C až 40 °C.

Reakční doba je od 10 minut do 24 hodin a preferovaný reakční čas je od 1 hodiny do 3 hodin.

···· 444 444 *· ·· ·* 4·44 4· 4444

Po ukončení reakce požadovaná sloučenina vzorce lb se tato sloučenina izolovala z reakční směsi podle běžné metody.

Odstranila se redukční činidla a k reakční směsi se přidala voda a organické rozpouštědlo nemísitelné s vodou, jako je ethylacetát. Po promytí vodou se organická fáze zahrnující požadovanou sloučeninu oddělila, sušila se na bezvodém síranu sodném nebo podobným způsobem a pak se požadovaná sloučenina získala odpařením rozpouštědla.

Získaná sloučenina, jestliže je to nezbytné, se dále čistila běžnými metodami, například rekrystalizací, kolonovou chromatografií na silikagelu a podobně.

Když chránící skupinou je „methyl substituovaný 3 arylovými skupinami to znamená, když chránící skupina je trityl, odstranění chránící skupiny se může provést použitím kyseliny.

V tomto případě se mohou použít následující rozpouštědla, například aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, 1,2-dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, alkoholy, jako je methanol, ethanol, isopropanol a terč.butanol, nitrily, jako je acetonitril a isobutylnitril, amidy, jako jsou formamid, N,N-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon a hexamethylfosforotriamid a organické kyseliny, jako je kyselina octová. Preferovaná rozpouštědla jsou organické kyseliny (zvláště kyselina octová) a alkoholy (zvláště terč.butanol).

Preferovaná používaná kyselina je kyselina octová nebo trifluoroctová.

Reakční teplota se pohybuje mezi 0 °C a 60 °C a preferovaná reakční teplota je mezi 20 °C a 40 °C. Reakční doba je od 10 minut do 24 hodin a preferovaná reakční doba je od 1 hodiny do 3 hodin.

• · · ·

Po ukončení reakce požadovaná sloučenina vzorce lb této reakce se shromáždila z reakční směsi běžným způsobem. Reakční směs se neutralizovala a přidala se do ní voda a organické rozpouštědlo nemísitelné s vodou, jako je ethylacetát. Po promytí vodou se izolovala organická fáze zahrnující požadovanou sloučeninu, sušila se bezvodým síranem sodným nebo podobně a pak se požadovaná sloučenina může získat odpařením rozpouštědla.

Jestliže je to nezbytné získaná sloučenina se dále čistí běžnými metodami, například rekrystalizací, kolonovou chromatografií na silikagelu a podobně.

(3) V případě, že chránící skupina je „sily! chránící skupina se obvykle odstraní ošetřením sloučeninami, které produkují anion fluoru, jako je tetrabutalamoniumfluorid, kyselina fluorovodíková, kyselina pyridinfluorovodíková a fluorid draselný nebo oganické kyselina, jako je kyselina octová, methansulfonová kyselina, kyselina paratoluensulfonová, kyselina trifluorctová a kyselina trifluormethynsulfonová nebo anorganické kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková.

Když se chránící skupina odstraní anionem fluoru, reakce se v některých případech urychlí přidáním organické kyseliny, jako je kyselina mravenčí, kyselina octová nebo kyselina propionová.

Výběr rozpouštědla pro použití nemá omezení pokud neinhibuje reakci a rozpouští počáteční materiály. Preferovaná rozpouštědla však jsou diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, nitrily, jako je acetonitril a isobutylnitril, voda, organické kyseliny, jako je kyselina octová a směsi těchto rozpouštědel popsaných shora v textu.

Reakční teplota se pohybuje mezi 0 °C a 100 °C a preferovaná teplota je mezi 20 °C až 70 °C.

Reakční doba je od 5 minut do 48 hodin a preferovaná reakční doba je od 1 hodiny do 24 hodin.

♦ · * · · · ♦ · · · · 0 • · · · · · · · · ·· ·· ·· ···· ·» ····

Po ukončení reakce se z reakční směsi shromáždila požadovaná sloučenina vzorce lb použitím běžných metod.

Požadovaná sloučenina se získala odpařením rozpouštědla a pak se požadovaná sloučenina čistila rekrystalizací a kolonovou chromatografií na silikagelu.

(Způsob A-8)

Tímto způsobem se připravila sloučenina vzorce lc, která zahrnuje katalytickou redukci azidoskupiny ve sloučenině vzorce lb získanou v postupu A-7, přičemž vzniká aminoskupina v přítomnosti vodíku a katalyzátoru v inertním rozpouštědle a jestliže je to nezbytné musí se aminoskupina chránit.

Výběr rozpouštědla pro použití nemá omezení pokud nemá nežádoucí účinky na tuto reakci. Preferovaná rozpouštědla však jsou alkoholy, jako je methanol, ethanol a isopropanol, ethery, jako je diethylether, tetrahydrofuran a dioxan, aromatické uhlovodíky, jako je toluen, benzen a xylen, alifatické uhlovodíky, jako je hexan a cyklohexan, estery, jako je ethylacetát a propylacetát, amidy, jako je formamid, dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon a hexamethylfosfortriamid, alifatické kyseliny, jako je kyselina mravenčí a kyselina octová, voda nebo směsi těchto rozpouštědel.

Výběr katalyzátoru není omezen, jestliže se obvykle používají v katalytických redukcích. Preferované katalyzátory * 9

9 9 9

9 9 9 9 9 ♦ · · · 99 9999 <9 9999 jsou paládíum na uhlíku, Raneyův nikl, oxid platiničity, platinová čerň, oxid rhodohlinitý, trifenylfosfinrhodiumchlorid a síran paladiumbarnatý.

Reakční tlak není omezen, ale je obvykle mezi 101,3 kPa a 1 013 kPa.

Reakční teplota závisí na počátečním materiálu, rozpouštědle a použitém katalyzátoru a nemají omezení. Běžná reakční teplota je mezi 0 °C a 100 °C a reakční čas je od 5 minut do 48 hodin, preferuje se reakční doba 30 minut až 10 hodin.

Po ukončení reakce požadovaná sloučenina vzorce lc se shromáždila z reakční směsi běžnou metodou. Požadovaná sloučenina se získala odstraněním katalyzátoru filtrací a odpařením rozpouštědla z filtrátu.

Požadovaná aminoskupina se chránila způsoby popsanými v publikaci (Protective Groups in Organic Synthesis).

Oligonukleotidový analog N3'-P5'podle vynálezu, ve kterém atom dusíku v poloze 3'a atom kyslíku v poloze 5'se kombinuje přes kyselinu fosforečnou se připravil použitím sloučeniny vzorce ld podle vynálezu způsobem B popsaným dále v textu.

• · • · • · · φ

• · φ φ • φφφ φ φ ΦΦΦΦ

Β-1

Β-2

Oligonucleotide

V postupu popsaném shora v textu symbol B¹ a B⁸ mají stejný význam, jak se definuje shora v textu. Avšak symbol B¹ve vzorci ld a symbol B¹ ve vzorci 8 může být stejný nebo se může lišit.

Symbol R^u reprezentuje pryskyřici, jako je „succinylControled Póre Glass nebo „Tentagel, které se v obvyklém případě používají při syntéze oligonukleotidů.

CEO reprezentuje 2-kyanoethoxyskupinu.

Každý postup metody B se popisuje dále v textu.

(Způsob B-l)

Sloučenina vzorce 9 se připravila tímto postupem, který obsahuje oxidační fosforylační kuplující reakci sloučeniny ld se sloučeninou vzorce 8. Tento způsob se uskutečnil, jak se popisuje v publikaci Nucleic Acids Research, Vol. 23, No. 14, pp. 2661-2668, 1995.

• · fc · · « fc fc • · · · í fc • · · fcfcfc fcfc ···· fc· · fc · fc

Hydroxyskupina v poloze 5' sloučeniny vzorec ld je chráněna ve sloučenina vzorce ld v postupu A-8 a jestliže existuje aminokyselina v bázi B, uvedená aminoskupina sloučeniny ld je chráněna.

Dále sloučenina vzorce 8 se může připravit ze sloučeniny vzorce lc získané způsobem A-8 v souladu s publikací Nucleic Acids Research, Vol. 23, No. 14, pp. 2661-2668, 1995.

{Způsob B-2)

Tento způsob ze používá k produkci oligonukleotidu ze sloučeniny vzorce 9 získané v postupu B-l.

Způsob obsahuje odstranění chránící skupiny hydroxylu R⁸sloučeniny vzorce 9 postupem A-7, fosforylací v souladu s publikací Nucleic Acids Research, Vol. 23, No. 14, pp. 26612668, 1995, přičemž reakce se sloučeninou vzorce ld ve způsobu podobném způsobu popsaném v prostupu B-l následovaný opakováním těchto reakcí za vzniku požadovaného oligonukleotidu.

Délka získané sekvence oligonukleotidů je obvykle 2 až 5 nukleosidových jednotek a preferovaná délka je 10 až 30 nukleosidových jednotek.

Získané oligonukleotidové analogy jsou rezistentní vůči různým nuklesidázám. Zůstávají v těle po dlouhou dobu po aplikaci. Dále oligonukleotidové analogy například tvoří stabilní dvojitý řetězec s mRNA a inhibuje biosyntézu proteinů, které se podílejí na patogenezi nebo inhibují přepis na mRNA za vzniku tripletů s dvouřetězcovou DNA v genomech nebo inhibují proliferaci virů.

Oligonukleotidové analogy podle vynálezu mohou potlačit specifikované genomové funkce a očekává se, že jsou terapeutická činidla používaná při léčbě onemocnění jako anti-neoplazmatické činidlo, antivirové činidlo nebo podobně.

Mohou se připravit prostředky, které nejsou určeny pro orální aplikaci nebo liposomové formulace oligonukleotidových • · • · • · ·Φ • · · · · · analogů podle vynálezu, například přidáním běžných adjuvans, jako jsou pufry a/nebo stabilizátory. Nukleotidové analogy se mohou spojovat s běžnými farmaceutickými nosiči za vzniku mastí, krémů, roztoků nebo náplastí.

Jejich dávky se liší podle symptomů onemocnění, věku pacienta a způsobu aplikace. Nejnižší dávka oligonukleotidového analogu je 0,001 mg/kg tělesné hmotnosti (upřednostňuje se 0,01 mg/kg tělesné hmotnosti) a nejvyšší dávka je 100 mg/kg tělesné hmotnosti (upřednostňuje se 10 mg/kg tělesné hmotnosti) jako jediná dávka. Zda je nutná aplikace vícekrát za den záleží na symptomech pacienta.

Přehled obrázků na výkresu

Obrázek č. 1 demonstruje časový průběh změn množství oligonukleotidu v přítomnosti nukleáz.

Osa y indikuje poměr (%) množství zbývajícího oligonukleotidu ku množství oligonukleotidu v čase 0 minut.

Osa x indikuje čas (vyjádřený v minutách) po začátku reakce.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1: 3'-azido-5'-O-terc.butyldifenylsilyl-3'-deoxy-2'-O,4'-C-methylen-5-methyluridin (sloučenina č. 2-48)

Uhličitan draselný (41 mg, 0,29 mmol) se přidal do roztoku methanolu (objem 7 ml) sloučeniny získané v referenčním příkladu 5 (množství 200 mg, koncentrace 0,27 mmol) při teplotě 0 °C a směs se míchala po dobu 4,5 hodin při teplotě místnosti. Dále se ke směsi přidal uhličitan draselný (množství 34 mg, koncentrace 0,25 mmol) a směs se míchala po dobu 23 hodin. Pak se methanol odpařil. Zbytek se rozdělil mezi ethylacetát a vodu. Extrakt se promyl saturovaným vodným roztokem chloridu sodného. Organická fáze se sušila bezvodým síranem sodným. Rozpouštědla se odpařila a zbytek se čistil • · • · • »·· • · · ♦ · 4 • · 4 4 4 4 ·» ···· ·· ··«« kolonovou chromatografií na silikagelu (poměr ethylacetátu : n-hexanu je 2:1) za vzniku sloučeniny uvedené v názvu ve formě bezbarvých krystalů (množství 142 mg, 0,27 mmol, 100 %). teplota tání je 93 °C až 95 °C

IR vmax (KBr): 3169, 3047, 2956, 2888, 2859, 2117, 1696, 1275, 1109 cm’¹.

^XH-NMR (CDC1₃) 8: 1,12 (9H,s), 1,65 (3H,s), 3, 78, 3, 84 (2H, AB, J = 8 Hz), 3,90, 4,08 (2H, AB, J = 12,5 Hz), 4,02 (ÍH, s),

4,67 (ÍH, s), 5,67 (ÍH, s), 7,54 (ÍH, s), 7,39-7,48 (6H, m) , 7,67-7,71 (4H, m), 8,46 (ÍH, brs).

¹³C-NMR (CDCI3) δ: 12,3, 19,5, 27,0, 58,7, 60,3, 71,4, 77,2, 78,6, 87,2, 90,1, 110,8, 128,0, 130,1, 130,2, 131,7, 132,3,

133.7, 135,1, 135,4, 149,6, 163,6.

Příklad 2: 3'-azido-5'-deoxy-2'-O,4'-C-methylen-5-methyluridin (sloučenina č. 2-14)

Bezvodý tetrabutylamoniumfluorid (10 M v THF, objem 290 μΐ, 0,29 mmol) se přidal k bezvodému roztoku tetrahydrofuranu (5 ml) sloučeniny získané v příkladu 1 (v množství 140 mg, koncentrace 0,26 mmol) v atmosféře dusíku a roztok se míchal po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpařilo a zbytek se čistil kolonovou chromatografií na silikagelu (poměr ethylacetát : n-hexan =25:1) a sloučenina uvedená v názvu se získala ve formě bílého prášku (množství 65,7 mmol, 0,22 mmol, 85 %).

Teplota tání je 94 °C až 96 °C.

IR vmax (KBr): 3169, 3046, 2118, 1692, 1468, 1273, 1062 cm^-1. ¹H-NMR (CD3OD) δ: 1,89 (3H,s), 3, 76, 3, 86 (2H, AB, J = 8 Hz), 3,85, 3,95 (2H, AB, J = 13 Hz), 4,03 (1H, s), 4,58 (ÍH, s),

5,58 (ÍH, s), 7,70 (ÍH, s).

ⁿC-NMR (CD₃OD) δ: 12,8, 57,3, 61,2, 72,4, 79,8, 88,3, 91,0,

110.8, 136,3, 151,5, 116,1.

·· φφ φφ φφ ♦ · · φ φ φ φ

ΦΦ Φ· • · · • φφφφ φ φ φ • · φ φφφ ·» ···· φφ φφφφ

Příklad 3: 3'-amino-3'-deoxy-2'-Ο,4'-C-methylen-5-methyluridin (sloučenina 2-4)

Roztok ethanolu (objem 3 ml) sloučeniny se získané v příkladu 2 (množství 64 mg, koncentrace 0,22 mmol) se přidal k 10 % paládiu zacyceném na uhlíku (množství 28 mg) suspendovaném v bezvodém roztoku tetrahydrofuranu (objem 5 ml) v atmosféře vodíku a směs se míchala po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Reakční směs se filtrovala a z filtrátu se odpřilo rozpouštědlo a sloučenina uvedená v názvu se získala ve formě bílého prášku (v množství 59 mg, koncentrace 0,22 mmol, 100 %).

Teplota tání je 243 °C až 246 °C.

IR vmax (KBr): 3459, 3365, 1699, 1447, 1273, 1054 cm’¹.

¹H-NMR (C5D5N) δ: 1,83 (3H,s), 3,62 (lH,s), 3,92, 4,14 (2H, AB, J = 8 Hz), 4,24 (2H, s), 4,54 (1H, s), 5,97 (1H, s), 7,90 (1H, s) .

¹³C-NMR (CD3OD) δ: 12,8, 54,2, 57,2, 71,6, 81,4, 91,1, 109,5,

150,8, 164,3.

Příklad 4: 3'-azido-3'-deoxy-5'-0-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'- -0,4'-C-methylen-5-methyluridin (sloučenina 2-36)

Dimethoxytritylchlorid (415 mg, 1,22 mmol) a dimethylaminopyridin (množství 12,5 mg, 0,10 mmol) se přidaly do roztoku pyridinu (objem 6 ml) sloučeniny získané v příkladu 2 (v množství 300 mg, 1,02 mmol) v atmosféře dusíku a roztok se míchal po dobu 20,5 hodin při teplotě místnosti. K reakční směsi se přidal saturovaný vodný roztok uhličitanu sodného a výsledná směs se extrahovala dichlormethanem. Organická fáze se promyla vodou a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a sušil se bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo se odpařilo za redukovaného tlaku a zbytek se čistil kolonovou chromatografií na silikagelu (poměr n-hexanu : ethylacetátu je 2: 1 až 1:1) a získala se sloučenina uvedená v názvu ve formě • φ φφφφ • · φ

φφφφ světle žluté pěny (množství 462 mg, koncentrace 0,78 mmol, 76 %) · teplota tání je 125 °C až 128 °C

¹H-NMR	(CDC1₃)	δ: 1,66 (3H, s;	>, 3,	,32, 3,	, 65	(2H, ABq, J =	11
Hz), 3	,78 (2H,	s), 3,80 (6H,	s) ,	4,13	(1H,	s), 4,63 (1H,	s) ,
5,67 (	lH,s), 6	,86 (4H, dd, J	= 2	Hz, 9	Hz)	, 7,23 - 7,45	(9H,

m), 7,73 (1H, s), 8,04 (1H, brs).

Příklad 5: 3'-amino-3'-deoxy-5'-0-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-0,4'-C-methylen-5-methyluridin (sloučenina 2-60)

Trifenylfosfin (94 ml, 0,36 mmol) se přidal k roztoku pyridinu (2,5 ml) sloučeniny získané v příkladu 4 (množství 110 mg, koncentrace 0,18 mmol) v atmosféře dusíku a směs se míchala po dobu 3,5 hodiny při teplotě místnosti. 28 % roztok vodného čpavku (5,5 ml) se přidal do reakční směsi, která se míchala po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpařilo za sníženého tlaku a surový produkt se čistil kolonovou chromatografií na silikagelu (poměr směsi chlorform : ethanolu je 20 : 1) a sloučenina uvedená v názvu se získala jako světle žlutá pěna (v množství 462 mg, koncentrace je 0,78 mmol, 76 %).

teplota tání je 131 °C až 134 °C ¹H-NMR (pyridin-d₅) δ: 1,89 (3H, s) , 3,71 (6H, s) , 3,77 (1H, s), 3,84 (2H, s), 3,99, 4,10 (2H, ABq, J = 8 Hz), 4,69 (1H, s), 6,04 (1H, s), 7,03 - 7,87 (13 H, m), 8,58 (1H, s).

Příklad 6: 3'-amino-3'-deoxy-5'-0-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'— 0,4'-C-methylen-5-methyluridin-(3'—>5 ') -3 ' -0(terč.butyldimethylsilyl)thymidin-2-kyanoethylester

Roztok chloridu uhličitého (0,3 ml) sloučeniny získané v příkladu 5 (10,0 mg, 18 μΐ) a roztok triethylaminu (0,05 ml, 0,36 mmol) v acetonitrilu (0,2 ml) se přidaly do roztoku acetonitrilu (0,3 ml) sloučeniny získané s odkazem na příklad (v množství 14,5 mg, 0,28 μτηοΐ) v atmosféře dusíku a roztok se míchal po dobu 14,5 hodiny při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpařilo za sníženého tlaku a surový extrakt se čistil kolonovou chromatografií na silikagelu (poměr směsi n-hexan : ethylacetátu je 1:1 až 0 : 1) a sloučenina uvedená v názvu se získala v podobě bílého prášku (množství 13,0 mg,

12,5 pmol, 71 %).

Teplota tání je 101 °C až 105 °C.

³¹P-NMR (CDCls) δ: 7,68, 8,24. Hmotnost (FAB) : m/z je 1043 (M⁺ + H) .

Příklad 7: 3'-amino-3'-deoxy-5'-0-(4,4'-dimethoxytrityl)-2 -0, 4'-C-methylen-5-methyluridin- (3 '->5') -3'-0(terč.butyldimethylsilyl)thymidin-2-methylester

Roztok chloridu uhličitého (0,3 ml) sloučeniny získané v příkladu 5 (10 mg, 18 pmol) a roztok triethalaminu (0,05 ml, 0,36 mmol) v acetonitrilu (0,2 ml) se přidal k roztoku acetonitrilu (0,3 ml) sloučeniny získané v příkladu 7 (22,1 mg, 51 gmol) v atmosféře dusíku a roztok se míchal po dobu 18 hodin při teplotě místnosti. Voda se přidala do reakční směsi a výsledná směs se extrahovala ethylacetátem. Organická fáze se promyla saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a sušila se bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo se odpařilo za redukovaného tlaku a surový extrakt se čistil kolonovou chromatografií na silikagelu (směs dichlormethanu : methanolu je v poměru 20 : 1, 30 : 1) a získala se sloučenina uvedená v názvu ve formě bílého prášku (6,9 mg, 6,87 pmol, 39 %). Teplota tání je 118 °C až 122 °C ³¹P-NMR (CDC1₃) δ: 11,20, 11,30. Hmotnost (FAB) : m/z 1026 (M¹ + Na) .

Příklad 8: 3'-amino-3'-deoxy-5'-0-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-0,4'-C-methylen-5-methyluridin- (3'—>5' ) -3'-0(terc.butyldimethylsilyl)thymidin-2-methylester • 000

00 0»

Tetrahydrofuranový roztok tetrabutylamoniumfluoridu (1,0

M, 15 μΐ, 15 μπιοί) se přidal do tetrahydrofuranového roztoku (1 ml) sloučeniny získané v příkladu 7 (13,9 mg, 14 μπιοί) v atmosféře dusíku a roztok se míchal po dobu 3 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpařilo za sníženého tlaku a surový produkt se čistil kolonovou chromatografii na silikagelu (poměr směsi ethylacetát : ethanol je 5 : 1) a sloučenina uvedená v názvu se získala jako bezbarvý prášek (9,7 mg, 10,9 μιηοΐ, 7 8 %) .

Teplota tání je 157 °C až 160 °C.

³¹P-NMR (CDC1₃) δ: 11,20, 11,30. Hmotnost (FAB) : m/z 1026 (M⁺ Na) .

Příklad 9: 3'-amino-3'-deoxy-5'-0-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-0,4'-C-methylen-5-methyluridinyl-(3'—>5') -2'-[kyanoethoxy (diisopropylamino) fosf inojthymidinmethylester

Tetrahydrofuran (0,2 ml) se přidal k roztoku acetonitrilu (objem 0,6 ml) sloučeniny získané v příkladu 8 (množství 10 mg, 11 μπιοί) a diisopropylamoniumtetrazolidu (15,5 mg, 77 μπιοί) , pak se přidal v atmosféře dusíku 2-kyanoethyldiisopropylchlorfosforodiamidit (39,8 mg, 132 μπιοί) a roztok se míchal za sníženého tlaku. Zbytek sloučeniny se čistil kolonovou chromatografii na silikagelu (ethylacetát : triethylamin je 99 : 1 -> ethyl acetát : ethanol : triethylamin je 100 : 10 : 1). Produkt se srážel s dichlorethanem a n-hexanem a sloučenina uvedená v názvu se získala v podobě bílého prášku (3,8 mg, 3,5 μπιοί, 31 %) .

Teplota tání je 113 až 116 °C.

³¹P-NMR (CD₃OD) δ: 8,67, 8,77, 9,07, 9, 28, 148,53, 148,93,

148,99, 149,03.

Příklad 10: Syntéza oligonukleotidových analogů.

ft· • · • ftftft • · «

··

ftft • ft ft •

ft • ftftft

Použitím syntetizátoru DNA (vyrobeno firmou Pharmacia Co.) Gene Assemble Plus) se oligonukleotidy automaticky syntetizovaly v koncentraci 0,2 pmol. Rozpouštědla a koncentrace činidel a fosforamiditu v každém postupu produkce je stejný jako při produkci přirozených oligonukleotidů. Rozpouštědla, činidla a fosforamidity přirozených nukleosidů jsou ty, které se získaly od firmy Pharmacia. Chránící skupina DMTr Universal QCPG (0,2 μιηοΐ, vyrobeno firmou Glen Research) se odstranila kyselinou trichlorctovou a vzniklá hydroxyskupina se ošetřila sloučeninou získanou v příkladu 9 nebo amidity užívané při syntéze přirozených nukleotidů. Tento postup kondenzace se opakoval, aby se získaly oligonukleotidové analogy požadovaných sekvencí. Cyklus syntézy je následující:

1) detritylace, trichloracetát/dichlormethan, 60 vteřin,

2) interakce fosforamiditu (25 eq), tetrazol/acetonitril, 2 minuty nebo 30 minut,

3) kapovací reakce, 1-methylimidazol/acetonitril, bezvodá kyselina octová/2,4,6-kolidin/acetonitril, 36 vteřin,

4) oxidace, jód/voda/pyridin/acetonitril, 60 vteřin.

Když sloučenina získaná v příkladu 10 reagovala v shora v textu popsaném cyklu 2, reakční doba je 30 minut a když se použily jiné fosforamidity, pak reakční doba jsou 2 minuty. Po syntéze oligonukleotidu, který má požadovanou sekvenci, proběhl cyklus syntézy až do cyklu 1 popsaného shora v textu, odstranila se chránící skupina dimethoxytritylu v poloze 5' a pak běžnými metodami se odstranil oligomér s její podpůrné látky koncentrovaným vodným roztokm čpavku, chránící skupina kyanoethylu na atomu fosforu se odstranila a odstranily se chránící skupiny na bázích nukleové kyseliny.

Oligomér se čistil HPLC s reverzní fází a získal se požadovaný oligonukleotid.

V souladu s touto metodou se získal oligonukleotidový analog 5'-ttttttttttnt-3'(číslo sekvence 1 v tabulce • · ·« 9 9 tt

9 9 9 9 9 9

9 999 9 9 9

9 9 9 9 9 9 0 • 9 * · 0 0 0 ·* ·· 0 0 ·999 * · ·· ♦ ··· sekvencí), kde symbol n v bázi číslo 11 je 3'-amino-3'deoxy-2'-0,4'-C-methylen-5-methyluridin (nazývá se „oligonukleotid 1) .

(výtěžek je 8,5 nmol, 4,3 %)

Získané oligonukleotidové analogy se čistily HPLC s reverzní fází (HPLC: Model 302, kolonu vyrobila firma GILSON, CHEMCO CHEMCOBOND 5-ODS-H (7,8 x 300 mm), 0,1 M vodný roztok triethylaminacetátu (TEAA), pH7, 10 až 12,5 % CH₃CN/40 minut, lineární gradient, 50 °C , 2,5 ml/min., 254 nm) a frakce se eluovala po dobu 25,4 minut.

Příklad 11: Syntéza oligonukleotidových analogů

Použitím 5'-0-dimethoxytrityl-N-4-benzoyl-5-methyl-2'-deoxycitidin-3'-O-(2-kyanoethyl)-N,N-diisopropylfosforamiditu (vyrobeno firmou Pharmacia Co.), nukleotidového analogu, který má sekvenci reprezentovanou jako 5'-tttttmtntmtmtmt-3' (sekvence č. 2 v sekvenční tabulce), kde symbol m reprezentuje

5-methyl-2'-deoxycitidin a symbol a reprezentuje 3'-amino-3'-deoxy-2-O,4'-C-methylen-5-methyluridin se získal („oligonukleotid 2) (výtěžek je 7,1 nmol, 3,5 %).

Modifikovaný získaný oligonukleotidový analog se čistil HPLC s reverzní fází (HPLV: Model 302, kolonu vyrobila firma GILSON, CHEMCO CHEMCOBOND 5-ODS-H (7,8 x 300 mm), 0,1 M vodný roztok triethylaminacetátu (TEAA), pH7, 10 až 12 % CH₃CN/40 minut, lineární gradient, teplota je 50 °C, 2,5 ml/min., 254 nm) a frakce se eluovala po dobu 22,5 minut.

Příklad 12: 3'-azido-3-deoxy-4-hydroxymethyl-l,2-0-isopropyliden-a-D-ribofuranóza

Uhličitan draselný (380 mg, 2,75 mmol) a voda (15 ml) se přidala k roztoku methanolu (85 ml) 3-azido-4-benzoyloxymethyl-5-0-benzoyl-3-deoxy-l,2-O-isopropyliden-a-D-ribofuranóza (4,13 g, 9,15 mmol) připravený v souladu s publikací Surzhykov S.A., Krayevsky A.A., Nucleosides Nucleotides, 13,

2283-2305 (1994)) pří teplotě 0 °C a směs se míchala po dobu

4,5 hodin při teplotě 0 °C. Reakční směs se pak neutralizovala 10 % roztokem kyseliny chlorovodíkové při teplotě 0 °C a odpařil se methanol. Po extrakci ethylacetátem se extrakty promyly saturovaným vodným rotokem chloridu sodného. Organická fáze se sušila bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo se odpařilo. Získaná bílá pevná látka se promyla s chlazeným n-hexanem a požadovaná sloučenina se získala ve formě bílého prášku (1,93 g, 7,87 mmol, 86 %).

Teplota tání je 113 °C až 115 °C (toluen)

IR vmax (KBr): 3 460, 3 417, 2 989, 2 951, 2 907, 2 111 cm’¹. ¹H-NMR (CDC1₃) δ: 1,62 (3H, s) , 1,35 (3H, s) , 2,65 (2H, br s) , 3,81, 3,65 (2H, AB, J = 12 Hz), 3,59, 4,00 (2H, AB, J = 12,5

Hz), 4,28 (ÍH,	d, J = 5	,5 Hz), 4,82	(ÍH,	dd, J = 4 Hz, 5,5
Hz), 5,85 (ÍH,	d, J = 4	Hz) .
¹³C-NMR (CDCI3)	δ: 25,7,	26,2, 61,9,	62,1,	63,2, 79, 9, 87,3,

104,4, 113,6.

Příklad 13: 3-azido-5-0-terc.butyldifenylsilyl-3-deoxy-4-hydroxymethyl-1,2-O-isopropy-liden-a-D-ribofuranóza

Triethylamin (3,5 g, 4,82 ml, 34,6 mmol) a t-butyldifenylsilylchlorid (9,75 g, 9,22 ml, 35,46 mmol) se přidaly k bezvodému roztoku methylenchloridu (73 ml) sloučeniny získané v příkladu 11 (2,56 mg, 10,5 mmol)a roztok se míchal po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Pak se do reakční směsi přidal saturovaný vodný roztok uhličitanu sodného a výsledná směs se extrahovala ethylacetátem a extrakty se promyly saturovaným vodným roztokem chloridu sodného. Organická fáze se sušila bezvodým síranem sodným. Po odpaření rozpouštědla se zbytek čistil kolonovou chromatografii na silikagelu (poměr ethylacetát : n-hexan jel: 6). Požadovaná sloučenina se získala ve formě bílého prášku (3,13 g, 6,47 mmol, 62 %).

Teplota tání je 99,5 °C až 100,5 °C (n-hexan).

IR vmax (KBr): 3 504, 2 936, 2 852, 2 111 cm’¹.

¹H-NMR (CDC1₃) δ: 1,07 (9H, s) , 1,36 (3H, s) , 1,62 (3H, s) ,

3, 62, 3, 92 (2H, AB, J == 12 Hz), 4,38 (IH, d, J = 6 Hz), 4,84 (IH, dd, J = 4 Hz, 5,5 Hzú, 3,82, 3,70 (2H, AB, J = 11 Hz), 4,84 (IH, dd, J = 4 Hz, 5,5 Hz), 5,86 (IH, d, J = 4 Hz), 7,367,44 (6H, m), 7,64 - 7,67 (4H, m).

¹³C-NMR (CDCI3) δ: 19,2, 26,1, 26,3, 26, 8, 62,2, 62,3, 65,2,

80,4, 88,0, 104,5, 113,7, 127,7, 127,8, 129,8, 129,9, 132,7,

132,8, 135,5.

Příklad 14: 3-azido-5-0-terc.butyldifenylsilyl-3-deoxy-4-(p-toluensulfonyloxymethyl) -1,2-O-isopropy-liden-oc-D-ribofuranóza

Triethylamin (137 mg, 180 μΐ, 1,29 mmol), p-toluensulfonylchlorid (63,3 mg, 0,33 mmol) a 4-dimethylaminopyridin (4 mg, 0,03 mmol) se přidalo do bezvodého roztoku methylenchloridu (2 ml)sloučeniny získané v příkladu 12 (100 mg, 0,21 mmol) při teplotě 0 °C v atmosféře dusíku a roztok se míchal po dobu 14 hodin při teplotě místnosti. Pak se k reakční směsi přidal saturovaný vodný roztok uhličitanu sodného a výsledná směs se extrahovala ethylacetátem a extrakty se promyly saturovaným roztokem chloridu sodného. Organická fáze se sušila bezvodým síranem sodným. Po odpaření rozpouštědla se zbytek čistil kolonovou chromatografií na silikagelu (poměr ethylacetát : n-hexan je 1: 6). Požadovaná sloučenina se získala ve formě bílého prášku (130 mg, 0,20 mmol, 98 %). Teplota tání je 122 °C až 124 °C (ethylacetát - n-hexan).

IR vmax (KBr): 3 069, 2 935, 2 114, 1 366, 1 183, 1 109 cm'¹. ’Η-NMR (CDCI3) δ: 1,03 (9H, s) , 1,27 (3H, s) , 1,31 (3H, s) ,

2,41 (3H, s), 3,60, 3,72 (2H, AB, J = 10,5 Hz), 4,33, 4,40 (2H, AB. J = 10 Hz), 4,55 (IH, d, J = 5,5 Hz), 5,00 (IH, dd, J = 3,7 Hz, 5,5 Hz), 5,82 (IH, d, J = 3,7 Hz), 7,23 (2H, d, J =

8,5 Hz), 7,36 - 7,45 (6H, m), 7,61 - 7,63 (4H, m), 7,72 (2H, d, J = 8,5 Hz).

• 0 00 • 0 0 0 • 0 0

0 0 •00

0000 ·« *e • · · • · ·«· • ·« · • < · · ·· ·· ·« ·· • · * · • · 0 • 0 0 • 00 •f 0000 ¹³C-NMR (CDC1₃) δ: 19,1, 21,5, 25, 9, 26, 0, 26, 7, 63, 1, 64,7, 68,9, 80,1, 85,6, 104,4, 113,8, 127,8, 128,0, 129,6, 129,9,

132,4, 132,5, 135,4, 144,6.

Příklad 15: 3-azido-5-0-terc.butyldifenylsilyl-3-deoxy-4-(p-toluensulfonyloxymethyl)-1,2-di-O-acetyl-D-ribofuranóza

Kyselý anhydrid (406 mg, 375 μΐ, 3,98 mmol) a koncentrovaná kyselina sírová (6,5 mg, 3,5 μΐ, 0,066 mmol) se přidala k roztoku kyseliny octové (3,5 ml) sloučeniny získané v příkladu 15 (230 mg, 0,36 mmol) v atmosféře dusíku a roztok se míchal po dobu 5 hodin při teplotě místnosti. K reakční směsi se pak přidala voda s ledem a po promíchání po dobu 30 minut se přidal saturovaný vodný roztok chloridu sodného. Výsledná směs se extrahovala ethylacetátem. Organická fáze sušila bezvodým síranem sodným. Po odpaření rozpouštědla se zbytek čistil kolonovou chromatografií na silikagelu (poměr ethylacetát : n-hexan je 4 : 1). Požadovaná sloučenina, kterou je směs α : β je přibližně 3 : 7, se získala ve formě

bezba	.rvého ole	je (23C	¹ mg,	0,34	mmol	, 94	%) ·
IR vm	ax (KBr) :	3 084,	2 9	35, 2	864,	2 11	7, 1	756 cm’¹.
¹H-NM	R (CDCI3)	[forma	β] δ:	1, 06	(9H,	s) ,	1,83	; (3H, s), 2,08
(3H,	s), 2,40	(3H, s)	, 3,	54, 3,	80,	(2H,	AB,	J = 11 Hz) , 4,12,
4,26	(2H, AB,	J = 10	Hz) ,	4,37	(IH,	d, J	' = 5	,5 Hz), 5,32 (IH,
d, J	= 5,5 Hz)	, 5,98	(IH,	s) , 7	,29	(2H,	d, J	= 8 Hz) , 7,37 -
7,46	(6H, m),	7,59 -	7,65	(4H,	m) ,	7,76	(2H,	d, J = 8 Hz) .
[form;	a α] δ: 1,	05 (9H,	s) ,	2,02	(3H,	s) ,	2,13	(3H, s), 2,39 (3H
s) , 3	,51, 3,68	(2H, Ά	£, J	= 11	Hz) ,	4,12	, 4,	21 (2H, AB, J =
10,5	Hz), 4,40	(IH, d	, J ^:	= 7 Hz	), 5	,32 (	IH, :	m) , 5,32 (IH, m),
6, 31	(IH, d, J	= 4,5	Hz) ,	7,25	(2H,	d, J	= 8	,5 Hz), 7,37 -
7,46	(6H, m) ,	7,59 -	7,65	(4H,	m) ,	7,70	(2H,	d, J - 8,5 Hz) .

¹³C-NMR (CDC1₃) δ: 19, 0, 19, 1, 20,0, 20,6, 20, 9, 21,1, 21,5,

26,6, 61,0, 63,2, 65,1, 68,4, 68,8, 72,2, 75,5, 85,4, 86,5, • · · ·

93, 6, 96,0, 97,3, 127,8, 127,9, 128,0, 129, 6, 129, 9, 130, 0,

132,0, 132,3, 132,4, 135,4, 114,7, 168,5, 169,2, 169,3, 169,4.

Příklad 16: 2'-O-acetyl-3'-azido-5-O-terc.butyldifenylsilyl-3'-deoxy-4'-(p-toluensulfonyloxymethyl)-5-methyluridin

Ο,Ο'-bis(trimethylsilyl)thymin (240 mg, 0,93 mmol) a chlorid ciničitý (253 mg, 114 μΐ, 0,97 mmol) se přidaly do bezvodého roztoku 1,2-dichlorethanu (6 ml) sloučeniny získané v příkladu 15 (300 mg, 0,44 mmol) při teplotě 0 °C v atmosféře dusíku a roztok se míchal po dobu 43 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se ředila dichlormethanem v ledové lázni a přidal se saturovaný vodný roztok uhličitanu sodného. Reakční směs se extrahovala dichlormethanem. Extrakty se promaly saturovaným vodným roztokem chloridu sodného.

Organická fáze se sušila bezvodým síranem sodným a rozpouštědlo se odpařilo a zbytek se čistil kolonovou chromatografii na silikagelu (poměr ethylacetátu : n-hexanu je 2 : 1 až 1 : 0). Požadovaná sloučenina se získala jako bílý prášek (300 mg, 0,4 mmol, 91 %).

Teplota tání je 158,5 °C až 159, 5 °C (ethylacetát - n-hexan). ¹H-NMR (CDC1₃) δ: 1,11 (9, s) , 1,59 (3H, s) , 2,15 (3H, s) , 2,41 (3H, s), 3,80, 3,84 (2H, AB, J = 11,5 Hz), 4,04, 4,10 (2H, AB, J = 11 Hz), 4,47 (1H, D, J = 6 Hz), 5,53 (1H, t, J = 6,5 Hz),

5, 94 (1H, d, J = 7 Hz), 7,18 (1H, s), 7,28 (2H, d, J = 7,5 Hz), 7,37 - 7, 47 (6H, m), 7,61 - 7,65 (4H, m), 7,71 (2H, d, J = 7,5 Hz), 9,68 (1H, br s) .

¹³C-NMR (CDCI3) δ: 11,8, 19, 2, 20, 9, 21,5, 26, 9, 62,3, 65,9, 68,3, 74,2, 84,8, 86,1, 118,9, 127,9, 128,0, 129,7, 130,1, 131,5, 132,2, 135,2, 135,3, 135,5, 145,0, 150,4, 163,6, 169,9.

Příklad 17: 3'-O-(terč.butyldimethylsilyl)thymidin-5'-(2-kyanoethyl)fosfonát

0

0 • 000

2-kyanoethyltetraisopropylfosforodiamidit (132 mg, 0,44 mmol) se přidával po dobu 5 minut k roztoku acetonitrilu (4 ml) sloučeniny 3'-0-(terč.butyldimethylsilyl)thymidin (popisuje se v pbulikaci K. M. Fries, C. Joswing and R.F.

Borch, J. Med. Chem., 38, 2672 (1995) (100 mg, 0,34 mmol) v atmosféře dusíku a roztok se míchal po dobu 2,2 hodiny při teplotě místnosti. Pak se přidal acetonitrilový roztok (0,88 ml) tetrazolu (30,8 mg, 0,44 mmol) a roztok se míchal po dobu

1,5 hodiny při teplotě místnosti. K reakční směsi se přidala voda, která se extrahovala dichlorethanem. Organická fáze se promyla saturovaným roztokem bezvodého chloridu sodného. Rozpouštědlo se odpařilo za sníženého tlaku a surový produkt se čistil kolonovou chromatografií na silikagelu (poměr chloroform : methanol je 30 : 1, n-hexan : ethylacetát je 1 :

až 0 : 1) .

Sloučenina uvedená v názvu se získala ve formě bezbarvého oleje (98,4 mg, 0,21 mmol, 70 %).

^XH-NMR (CDC1₃) δ: 0,10 (6H, s) , 0,90 (9H, s), 1,96 (3H, s),

2,16 - 2,28 (2H, m) , 2,77 - 2,82 (2H, m), 4,09 - 4,41 (6H, m), 6,28 (IH, dd, J = 7 Hz, 11 Hz), 6,98 (IH, d, J = 720 Hz), 7,36 (IH, d, J = 8 Hz), 8,20 (IH, brs) . ³¹P-NMR (CDCI3) δ: 7,70,

8,94.

Příklad 18: 3'-O-(terc.butyldimethylsilyl)thymidin-5'-methylfosfonát

Chlordiisopropylaminomethoxyfosfin (69,2 mg, 0,35 mmol) se přidával po dobu 5 minut do roztoku dichlormethanu (2 ml) sloučeniny 3'-O-(terč.butyldimethylsilyl)thymidin (100 mg,

0,28 mmol) v atmosféře dusíku a roztok se míchal po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti. Pak se přidal roztok acetonitrilu (2 ml) sloučeniny tetrazolu (56,0 mg, 0,80 mmol) a roztok se míchal po dobu 40 minut při teplotě místnosti.

K reakční směsi se přidala voda, která se extrahovala dichlorethanem a orghanická fáze se promyla saturovaným vodným • φ • φ φ φφφ I φ φφ φφφ φ φ · φ · φ φφφφ φφφ φφφ φφ φφ φφ φφφφ φφ φφφφ roztokem chloridu sodného a sušila se bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo se odpařilo za sníženého tlaku a surový extrakt se čistil kolonovou chromatografií na silikagelu (směs n-hexan : ethylacetát je 1 : 1 až 0:1, n-hexan - ethylacetát je 1 :

4). Sloučenina uvedená v názvu se získala ve formě bezbarvého oleje (109 mg, 0,25 mmol, 91 %).

³¹P-NMR (CDC1₃) δ: 9,13, 10,07.

Příklad 18: Měření teploty tání za účelem stanovení aktivity tvorby tripletu

Vzorek roztoku ekvimolárního množství oligonukleotidu 2, který tvoří triplet a přirozený oligonukleotid s dvouřetězcovou DNA (konečná koncentrace každého nukleotidu je 1,5 μΜ) v 7 mM roztoku pufru fosforečnanu sodného (pH 7,0) obsahující 140 mM KC1 a 10 mM MgCl₂ (nebo roztok bez 10 mM MgCl₂) se ponořil do lázně s vroucí vodou. Pak se roztok pomalu chladil po dobu 12 hodin na teplotu místnosti a dále se chladil na teplotu 4 °C a nechal se stát při teplotě 4 °C po dobu jedné hodiny. Vzorek roztoku v cele spektrofotometru (Du650 varoben firmou Beckman Instrument lne.) se zahřál postupně z teploty 5 °C na teplotu 85 °C (0,5 °C/min.) a stanovila se absorpce ultrafiolového záření při vlnové délce 260 nm.

Použily se přirozené oligonukleotidy, které mají dvouřetězcovou DNA se sekvencí 5'-gctaaaaagaaagagatcg-3' (číslo sekvence 3 uvedené v sekvenční tabulce) a její komplementární řetězec se sekvencí 5'-cgatctctctttctttttagc-3' .

Dále se použil přirozený nukleotid, který tvoří triplet se sekvencí 5'tttttmtttmtmtmt-3', ve kterém symbol m je 5-methyl-2-deoxycytidin (zde se nazývá „oligonukleotid 3).

Dále se použil přirozený nukleotid, který tvoří triplet se sekvencí 5'tttttmtttmtmtmt-3', ve kterém symbol m je 5-methyl-2'-deoxycytidin (nazvaný „oligonukleotid 3).

• · • · • · · ·

Výsledky měření poloviční teploty denaturace (teplota tání) dvouřetězcové DNA s oligonukleotidem 2 a 3 jsou zobrazeny v tabulce č. 3.

Tabulka č. 3:

	Tm (°C) oligonukleotid 2 získáno v příkladu 11	oligonukleotid 3
s MgCl₂	55	44
bez MgCl₂	44	32

Je zřejmé, že oligonukleotidové analogy podle vynálzu vykazují vyšší hodnoty poloviční teplota denaturace (teplota tání) v případě tripletů ve srovnání s přirozenými oligonukleotidovými analogy. To naznačuje, že oligonukleotidové analogy podle vynálezu vykazují vysokou aktivity při tvorbě tripletu.

Příklad 19: Stanovení tolerance k nukleázám

0,2 pg 3'-exonukleázy (fosfodiesteráza z Crotalus durissus (Boehringer Mannhaeim) se přidaly k 320 μΐ pufrovacího roztoku (50 mM Tris (pH 8,0) a 10 mM MgCl₂) , který obsahuje různé oligonukleotidy (10 pg) a směs se udržovala při teplotě 37 °C. Po předem stanovené době se enzymová aktivita ukončila zahřátím na teplotu 90 °C části výsledné směsi po dobu 2 minut. Zbývající množství oligonukleotidu ve výsledné směsi se stanovilo HPLC s reverzní fází a změna v množství oligonukleotidu v čase se stanovila v přítomnosti nukleáz.

Tyto výsledky jsou zobrazeny na obrázku č. 1.

Oligonukleotid použitý v textu

1. Oligonukletid 1 získaný v příkladu 10.

• φ • φφφφφ • · · · · · · • * · · · φφφ • Φ ·· φφφφ φφ φφφφ

2. Nukleotid se sekvencí 5'-ttttttttttnt-3' (sekvence číslo 1 uvedené v seznamu sekvencí), kde symbol n je 2'-0,4-C-methylen-5-methyluridin (nazvaný „oligonukleotid 4).

3. Přirozený oligonukleotid se sekvencí 5'-tttttttttttt-3' (sekvence číslo 6 uvedená v seznamu sekvencí) (nazývá se „oligonukleotid 5).

Oligonukleotidové analogy podle vynálezu demonstrovaly výbornou rezistenci k nukleáze ve srovnání s přirozenými oligonukleotidovými analogy. Dále oligonukleotidové analogy podle vynálezu vykazují silnější rezistenci k nukleáze ve srovnání s nepřirozenými oligonukleotidovými analogy.

Aktivita oligonukleotidových analogů podle vynálezu tvořit hybridy a působit proti HIV se stanovila použitím následujících metod.

Způsob 1

Poloviční teplota denaturace (teplota tání) (hodnota Tm) teplotní hybridizace produktů mezi antisens řetězci, kterými byly různé získané oligonukleotidové analogy a sense řetězce založené na přirozené DNA nebo RNA, se měřila za účelem zkoumat schopnost oligonukleotidových analogů podle vynálezu hybridizovat s komplementární DNA a RNA.

Každý vzorek roztoku (500 μΐ) chloridu sodného s konečnou koncentrací 100 mM, pufr fosforečnan sodný s konečnou koncentrací 10 mM (pH 7,2), antisens řetězec s konečnou koncentrací 4 μΜ a sens řetězec s konečnou koncentrací 4 μΜ se zahřály v lázni s vroucí vodou a pomalu se chladily na teplotu místnosti po dobu 10-ti hodin. Vzorek roztoku v cele spektrofotometru (UV-2100PC, vyroben firmou Shimadzu Co.) se postupně ochladil na teplotu 5 °C a udržoval se při teplotě 5 °C po dobu dalších 20 minut a pak začalo měření v atmosféře dusíku, aby se předešlo kondenzaci vlhkosti. Teplota vzorku rostla rychlostí 0,2 °C/min. až dosáhla teploty 90 °C a v teplotním intervalu 0,1 °C se stanovila absorpce • « « · · · • · · · · · · · · • tt tttt ·· · · · ,· · · ···· ultrafialového světla při vlnové délce 260 nm. Za účelem předcházet změnám koncentrace vzorku při zvýšeni teploty se cela spektrofotometru uzavřela kapkou minerálního oleje aplikovanou na povrch vzorku během měření.

Způsob 2

Stanovení aktivity proti HIV

Aktivity oligonukleotidových analogů podle vynálezu proti HIV se stanovily podobným způsobem, jako je způsob, který se popisuje v publikaci R. Pauwel et al., J. Virological Method,

20, p.309-321 (1988). Buněčná sraženina se suspendovala v kultivačním médiu RPMI-1640, které neobsahuje sérum.

K suspenzi se přidal HIV a směs se inkubovala při teplotě 37 °C po dobu jedné hodiny. Na konci uvedené doby se výsledná směs promyla kultivačním médiem RPMI-1640, které obsahuje 10 % fetální bovinní sérum (zde se nazývá „sérové médium), a centrifugovala se (při 1 000 x g, po dobu 5 minut). Tímto způsobem získané infikované buňky HIV a neinfikované buňky se suspendovaly v sérovém médiu v koncentraci 4 x 10⁵/ml. Do každé prohlubně destiček pro kultivaci tkání s 96 prohlubněmi se aplikoval objem 100 μί suspenze. Destičky se ínkubovaly po dobu pěti dní při teplotě 37 °C v přítomnosti plynného oxidu uhličitého, aniž došlo k míchání. Buňky infikované HIV a neinfikované buňky, ke kterým se nepřidala testovaná sloučenina se inkubovaly stejným způsobem. Po inkubaci se stanovil počet živých buněk použitím MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromid) a stanovily se inhibiční aktivity testovaných sloučenin při poškození buněk.

Potvrdilo se, že mykoplazma neobsahovala v roztoku buněk virus.

Inhibiční aktivita porušení buněk u buněk neinfikovaných

HIV bez přítomnosti testované sloučeniny se vyjádřila jako 100 % a inhibiční aktivita poškození buněk u buněk infikovaných

HIV bez přítomnosti testované sloučeniny se vyjádřila jako 0 φ φ φ · · φ ·*·«·. · φ · · · · φ • ΦΦ* φφφ φφφ φ · · φ · φ ···· φ · φφφφ

%. Stanovila se koncentrace sloučeniny, která inhibuje poškození buněk z 50-ti % (EC₅₀) .

Průmyslová využitelnost

Nové bicyklonukleosidové analogy podlý vynálezu vykazují výborné antisense nebo antigenní aktivity a je možné je použít jako meziprodukty při produkci oligonukleotidových analogů s dostatečnoz stabilitou in vivo.

Dále nové oligonukleotidvé analogy podle vynálezu jsou stabilní in vivo a je možné je použít jako antisens nebo antigenní činidla.

Avšak nové bicyklonukleosidové analogy působí proti HIV a proto je možné je použít jako terapeutická nebo profylaktická činidla v případě onemocnění AIDS.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce 1 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl kde symbol R¹ je stejný nebo odlišný a každý reprezentuje atom vodíku, skupinu chránící hydroxyskupinu při syntéze nukleové kyseliny, skupinu kyseliny fosforečné, skupinu kyseliny fosforečné chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny nebo skupinu reprezentovanou vzorcem -P(R^4a)R^4b (kde symboly R^4a a R^4b jsou stejné nebo se liší a každý reprezentuje hydroxyskupinu, hydroxyskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, merkaptoskupinu, merkaptoskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, aminoskupinu, aminoskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkoxyskupinu, která má 1 až 6 atomů uhlíku, alkylthioskupinu, která obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku, kyanoalkoxyskupinu, která obsahuje 1 až 7 atomů uhlíku nebo aminoskupina substituovanou alkylovou skupinou, která má 1 až 6 atomů uhlíku), symbol R² reprezentuje azidoskupinu, aminoskupinu nebo skupinu reprezentovanou vzorcem -NH-R³ (kde symbol R³ je stejný nebo se liší a každý reprezentuje chránící skupinu aminoskupiny při syntéze nukleové kyseliny, skupinu kyseliny fosforečné, skupiny kyseliny fosforečné chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny nebo • · • · * · • · ·· ,4a skupinu reprezentovanou vzorcem -P(R^4a)R^4b ;kde symbol R a

R^4b jsou stejné nebo se liší a · každý reprezentuje hydroxyskupinu, hydroxyskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, merkaptoskupinu, merkaptoskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, aminoskupinu, aminoskupinu chráněnou chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkoxyskupinu, která má 1 až 6 atomů uhlíku, alkylthioskupinu obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, kyanoalkoxyskupina, která obsahuje 1 až 7 atomů uhlíku nebo aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou, která má 1 až 6 atomů uhlíku), symbol B reprezentuje purin-9-ylovou skupinu nebo 2-oxo-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, přičemž každá může být susbtituovaná jedním nebo více substituenty vybranými z následující skupiny a.

(skupina alfa) hydroxyskupina, hydroxyskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, merkaptoskupina, merkaptoskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkylthioskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku aminoskupina, aminoskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou, která má 1 až 6 atomů uhlíku, alkylskupinu, která má 1 až 6 atomů uhlíku a atom halogenu.

Sloučenina podle nároku 1, kde symbol R¹ představuje atom vodíku, alifatický acyl, aromatický acyl, silyl, methyl
2.

• · ♦ ♦ · · · · • · · ·· «β · ·· « ······· · ♦ · · · • · · · · · · · · « ·· ·» ·· ···· 9« ««·· substituovaný 1 až 3 aryly nebo methyl substituovaný 1 až 3 aryly, kde arylové kruhy jsou substituovány nižším alkylem,

nižší alkoxyskupinou, halogenovým atomem nebo kyanoskupinou. 3. Sloučenina podle nároku 1, kde symbol R¹ reprezentuj e atom vodíku, silyl, methyl substituovaný 1 až 3 aryly nebo

methyl substituovaný 1 až 3 aryly skupin, kde arylové kruhy jsou substituovaný nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, atomem halogenu nebo kyanoskupinou.

4. Sloučenina podle nároku 1, kde symbol R¹ reprezentuje atom vodíku, trimethylsilyl, t-butyldimethylsilyl, t-butyldimethylsilyl, t-butyldifenylsilyl, benzyl, trifenylmethyl, 4-methoxybenzyl, 4-methoxyfenyldifenyImethyl, 4,4'-dimethoxytrifenylmethyl nebo 4,4^z,4' '-trimethoxytrifenylmethyl.

5. Sloučenina podle nároku 1, kde symbol R² reprezentuje azidoskupinu, aminoskupinu nebo skupinu reprezentovanou vzorcem -NH-R³ (kde symbol R³ reprezentuje alifatický acyl, aromatický acyl, methyl substituovaný 1 až 3 aryly, methyl substituovaný 1 až 3 aryly, kde arylové kruhy jsou substituovány nižší alkylem, nižší alkoxyskupinou, atomem halogenu nebo kyanoskupinou, silylem, fosforamiditovou skupinou, fosfonylem, skupinou kyseliny fosforečné nebo skupinou kyseliny fosforečné chráněné při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou.

6. Sloučenina podle nároku 1, kde symbol R² reprezentuje azidoskupinu, aminoskupinu nebo skupinu reprezentovanou obecným vzorcem -NH-R³ (kde symbol R³ reprezentuje acetyl, trifluoracetyl, benzoyl, benzyl, p-methoxybenzyl, terč.butyldifenylsilyl, skupinu reprezentovanou vzorcem —P(OC₂H₄CN) (NCH(CH3)2), skupinu reprezentovanou vzorcem — P (OCH3) (NCH (CH3) 2) , fosfonyl nebo skupinu kyseliny 2-chlorfenylfosfonové nebo skupinu kyseliny 4-chlorfenylfosfonové).

• · • · • · · · 9 9 • · · · * · 9 9 9 9 ·· ·» ·· ·«·* 99 ····

Ί. Sloučenina podle nároku 1, kde symbol R² reprezentuje azidoskupinu nebo aminoskupinu.

8. Sloučenina podle nároku 1, kde symbol B reprezentuje 6-aminopurin-9-ylovou skupinu (to je adeninyl), 6-aminopurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, 2,6-diaminopurin-9-ylovou skupinu, kde jedna nebo obě aminoskupiny jsou při syntéze nukleové kyseliny chráněny chránící skupinou, 2-amino-6-chlorpurin-9-ylovou skupinou, 2-amino-6-chlorpurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-amino-6-fluorpurin-9-ylovou skupinou, 2-amino-6-fluorpurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-amino-6-brompurin-9-ylovou skupinu, 2-amino-6-brompurin-9-ylou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-amino-6-hydroxypurin-9-ylovou skupinu (to je guaninyl), 2-amino-6-hydroxypurin-9--ylovou skupinu, kde aminoskupina je při syntéze nukleové kyseliny chráněna chránící skupinou, 6-amino-2-methoxypurin-9-ylovou skupinu,

6-amino-2-methoxypurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 6-amino-2-chlorpurin-9-ylovou skupinu, 6-amino-2-chlorpurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 6-amino-2-fluorpurin-9-ylovou skupinu, 6-amino-2-fluorpurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2,6-dimethoxypurin-9-ylovou skupinu, 2,6-dichlorpurin-9-ylovou skupinu, 6-merkaptopurin-9-ylovou skupinu, 6-merkaptopurin-9-ylovou skupinu, kde merkaptoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-oxo-4-amino-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu (to je cytosinyl), 2-oxo-4-amino-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde aminoskupina je • · · · • φ · φ φ φ φφφφ φφφ φφφ φφ φφ φφ φφφφ φφ φφφφ chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou,

4-amino-2-oxo-5-fluor-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, 4-amino-2-oxo-5-fluor-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 4-amino-2-oxo-5-chlor-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, 4-amino-2-oxo-5~-chlor-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-oxo-4-methoxy-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, 2-oxo-4-merkapto-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, 2-oxo-4-merkapto-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde merkaptoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2,4-dihydroxypyrimidin-l-ylovou skupinu (to je uracilyl), 2,4-dihydroxy-5-methylpyrimidin-l-ylovou skupinu (to je thyminyl), 4-amino-5-methyl-2-oxo-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu nebo 4-mino-5-methyl-2-oxo-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou.

9. Sloučenina podle nároku 1, kde symbol B reprezentuje 6-benzoylaminopurin-9-ylovou skupinu, adeninyl, 2-benzoylamino-6-hydroxyprutin-9-ylovou skupinu, guaninyl, 2-oxo-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, cytosinyl, uracilyl nebo thyminyl.

10. Sloučenina podle nároku 1, která se vybrala z následujících sloučenin
3'-amino-3'-deoxy-2'-O,4'-C-methylen-5-methyluridin,

3'-azido-3'-deoxy-2'-O,4'-C-methylen-5-methyluridin,

3'-azido-3'-deoxy-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-O,4'-C-methylen-5-methyluridin,

3'-azido-5'-O-terč.butyldifenylsilyl-3'-deoxy-2'-0,4'-C-methylen-5-methyluridin a

3'-amino-3'-deoxy-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-O, 4'-C-methylen-5-methyluridin.

• · φφφφ φ φφφ φφφ φφ φφφφ φφ φφφφ

11. Oligonukleotidový analog nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, které mají jednu nebo více strukturálních jednotek reprezentovaných následujícím obecným vzorcem la přičemž, jestliže oligonukleotid má dvě nebo více strukturálních jednotek obecného vzorce la, každý symbol B je stejný nebo se liší a reprezentuje purin-9-ylovou skupinu nebo 2-oxo-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, která může být susbtituována substituenty vybranými ze skupiny a popsané dále v textu, (skupina a) hydroxyskupina, hydroxyskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, merkaptoskupina, merkaptoskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, alkylthioskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, aminoskupina, aminoskupina chráněná chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou, která má 1 až 6 atomů uhlíku, alkylskupinu, která má 1 až 6 atomů uhlíku a atom halogenu.

12. Oligonukleotidový analog nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl podle nároku 11, kde symbol B reprezentuje 6-4 4
4 4 »· 4444

4444 aminopurin-9-ylovou skupinu (to je adeninyl), 6-aminopurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna chránící skupinou při syntéze nukleové kyseliny, 2,6-diamonopurin-9-ylovou skupinu, 2-amino-6-chlorpurin-9-ylovou skupinu, 2-amino-6-chlorpurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-amino-6-fluorpurin-9-ylovou skupinu, 2-amino-6-fluorpurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-amino-6-brompurin-9-ylovou skupinu, 2-amino-6-brompurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-amino-6-hydroxypurin-9-ylovou skupinu (to je guaninyl), 2-amino-6-hydroxypurin-9-ylovou skupinu, kde aminoskupina je při syntéze nukleové kyseliny chráněna chránící skupinou, 6-amino-2-methoxypurin-9-ylovou skupinu, 6-amino-2-chlorpurin-9ylovou skupinu, 6-amino-2-fluorpurin-9-ylovou skupinu, 2,6-dimethoxypurin-9-ylovou skupinu, 2,6-dichlorpurin-9-ylovou skupinu, 6-merkaptopurin-9-yl, 2-oxo-4-amino-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu (to je cytosinyl), 2-oxo-4-amino-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 2-oxo-4-amino-5-fluor-l,2-dihydropyrimidin-lylovou skupinu, 4-amino-2-oxo-5-fluor-1,2-dihydropyrimidinl-ylovou skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou, 4-amino-2-oxo-5-chlor-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, 2-oxo-4-methoxy-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, 2-oxo-4-merkapto-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, 2-oxo-4-hydroxy-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu (to je uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5-methyl-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu (to je thyminyl), 4-amino-5-methyl-2-oxo-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu (to je 5-methylcytosinyl) nebo 4-amino-5-methyl-2-oxo-l,2-dihydropyrimidin-l-ylovou • ·

4 · • · • ···
9 9 9 9 9 9 • 999 9 9 9 9 9 9 ·· ·· ·* 9999 99 9999 skupinu, kde aminoskupina je chráněna při syntéze nukleové kyseliny chránící skupinou.
13. Oligonukleotidový analog nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl podle nároku 11, kde symbol B reprezentuje 6-benzoylaminopurin-9-ylovou skupinu, adeninyl, 2-isobutylamino-6-hydroxypurin-9-ylovou skupinu, guaninyl, 2-oxo-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, cytosinyl, 2-oxo-5-methyl-4-benzoylamino-1,2-dihydropyrimidin-l-ylovou skupinu, 5-methylcytosinyl, uracinyl nebo thyminyl.