CZ194594A3 - Products of amadori rearrangement, process of their preparation and their use - Google Patents
Products of amadori rearrangement, process of their preparation and their use Download PDFInfo
- Publication number
- CZ194594A3 CZ194594A3 CZ941945A CZ194594A CZ194594A3 CZ 194594 A3 CZ194594 A3 CZ 194594A3 CZ 941945 A CZ941945 A CZ 941945A CZ 194594 A CZ194594 A CZ 194594A CZ 194594 A3 CZ194594 A3 CZ 194594A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- molecular weight
- low molecular
- amino
- mixture
- amino acid
- Prior art date
Links
- 238000003691 Amadori rearrangement reaction Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 22
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 36
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims abstract description 34
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 31
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical class 0.000 claims abstract description 24
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 16
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 16
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 14
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 12
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims abstract description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims abstract description 11
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 10
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 8
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229960002429 proline Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 claims abstract description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 7
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 7
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims abstract description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims abstract description 6
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 229960004295 valine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims abstract description 5
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 5
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims abstract description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 5
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 4
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims abstract description 4
- SHZGCJCMOBCMKK-QYESYBIKSA-N 6-deoxyglucose Chemical compound C[C@@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-QYESYBIKSA-N 0.000 claims abstract description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims abstract description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims abstract description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims abstract description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims abstract description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 claims abstract description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 57
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 50
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 19
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 12
- 239000003415 peat Substances 0.000 claims description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 11
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 10
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 claims description 7
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N (3r,4s,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CC=O VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N 0.000 claims description 3
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical group [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical group C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Chemical group CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004473 Threonine Chemical group 0.000 claims description 3
- PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N alpha-D-ara-dHexp Natural products OCC1OC(O)CC(O)C1O PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims description 3
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 claims description 3
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 claims description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 abstract description 23
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 abstract description 23
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 abstract description 23
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 abstract description 21
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 14
- -1 treonine Chemical compound 0.000 abstract description 11
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 abstract description 8
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 abstract 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 35
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 19
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 18
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 17
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 16
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 14
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 8
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 7
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 5
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 5
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 4
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 4
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 4
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000000686 immunotropic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 1
- ZCWPHDXKEDBCER-UHFFFAOYSA-N 2,5-diphenyl-2h-tetrazol-2-ium;bromide Chemical compound [Br-].C1=CC=CC=C1C1=[NH+]N(C=2C=CC=CC=2)N=N1 ZCWPHDXKEDBCER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000972 4,5-dimethylthiazol-2-yl group Chemical group [H]C([H])([H])C1=C(N=C(*)S1)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 235000010523 Cicer arietinum Nutrition 0.000 description 1
- 244000045195 Cicer arietinum Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008557 D-aspartic acids Chemical class 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 208000035859 Drug effect increased Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 235000014066 European mistletoe Nutrition 0.000 description 1
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 150000008537 L-aspartic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000008539 L-glutamic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920006926 PFC Polymers 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102100038567 Properdin Human genes 0.000 description 1
- 235000012300 Rhipsalis cassutha Nutrition 0.000 description 1
- 108091006503 SLC26A1 Proteins 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000297179 Syringa vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000221012 Viscum Species 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-rhamnose Chemical compound C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000007705 chemical test Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- YAGKRVSRTSUGEY-UHFFFAOYSA-N ferricyanide Chemical compound [Fe+3].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] YAGKRVSRTSUGEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002020 noncytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000263 nonmitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 108010022457 polysaccharide peptide Proteins 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 231100000628 reference dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000007363 regulatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
- C08B37/0021—Dextran, i.e. (alpha-1,4)-D-glucan; Derivatives thereof, e.g. Sephadex, i.e. crosslinked dextran
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
- C07H7/02—Acyclic radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q5/00—Preparations for care of the hair
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Transplantation (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
Dosavadní stav techniky
Produkty Amadoriho reakce jsou známé. Jedná se například o reakční produkty aminokyseliny nebo peptidu s cukrem, oligo- nebo polysacharidem, u nichž proběhl Amadoriho přesmyk (J. Biol. Soc. 215 (1955), Henri Borsook et al.). Tak je v publikaci DE-C-3914354 popsán vodorozpustný glykoprotein aminokyseliny a cvikru, který je izolován z extraktu semen ovsa setého. Dále, v EP-A-406087 jsou popsány vodorozpustné komplexy polysacharidu a glykopeptidu, které jsou získány z buněčné stěny
Gram-positivní bakterie. V J. Biol. Chem. (1985), 260/9 se uvádí, že pro charakterizaci produktů Amadoriho reakce vzniklých reakcí glukózy s volnými aminoskupinami proteinu bylo použito NMR-spektroskopie.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je dále popsané použití produktů Amadoriho přesmyku obecného vzorce
R1-NH-R2 kde
Rj zahrnuje l-amino-l-deoxy-2-ketosu, odvozenou od cukerného zbytku, přednostně v D-formě, zvolenou ze souboru zahrnujícího glukosu, xylosu, galaktosu, rhamnosu, fruktosu, mannosu, 2-deoxyglukosu,
6-deoxyglukosu, glukosamin, galaktosamin, oligonebo polysacharidy, s přednostně nízkou molekulovou hmotností, zejména molekulovou hmotností nižší než 1000 dalton a
R2 zahrnuje aminokyselinu, přednostně v L-formě, zvolenou ze souboru zahrnujícího serin, glycin, prolin, histidin, arginin, alanin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, fenylalanin, threonin, cystein, cystin, glutamin, valin, asparagin, methionin, tyrosin, hydroxyprolin, lysin, tryptofan, isoleucin a leucin nebo, peptidový zbytek, s přednostně nízkou molekulovou hmotností, zejména molekulovou hmotností nižší než 1000 dalton.
Tyto sloučeniny redukují ferrikyanid draselný, což je zkušební reakční činidlo pro biologicky aktivní látky vznikající při reakci cukru s aminokyselinou.
Produkty Amadoriho přesmyku, vznikající reakcí cukrů a aminokyselin, se hodí pro výrobu farmaceutických *· 3 přípravků určených k léčbě a/nebo prevenci hematologických a/nebo imunologických chorob a/nebo ke stimulaci imunitního systému lidí a/nebo savců a zejména k indukci tvorby cytokinu. Tyto produkty se též hodí pro výrobu kosmetických přípravků.Použití výše definovaných látek k těmto účelům je předmětem tohoto vynálezu. V minulosti se nikdo nepokusil provést různé purifikační stupně na extraktu produktu Amadoriho reakce (zaměřené na odstranění balastních látek a nečistot), za účelem získání biologicky účinného přípravku.
Imunostimulační léčiva z přírodních zdrojů, jako jsou extrakty ze jmelí, extrakty z rašeliny atd.,jsou již známa. Jejich nevýhodou je, že při jejich výrobě je nutno nákladně zpracovávat velká množství surovin, za účelem získání několika málo gramů účinné látky. Další nevýhody spočívají v obsahu nekontrolovatelných nečistot, které by mohly mít za následek toxicitu a vedlejší účinky a dále v potížích s podáváním v průběhu praktické aplikace, které jsou způsobeny komplexní povahou a málo reprodukovatelným složením získaných přípravků.
Výroba srovnatelných produktů nebo směsí produktů z umělých zdrojů, jako je interferon nebo jiné látky získané metodami genetického inženýrství, je ještě nákladnější.
Kromě toho, molekuly humánního interferonu jsou často příliš velké, než aby pronikly stěnou humánních buněk, takže se účinným stává pouze zlomek podaného množství. Také produkty získané genetickým inženýrstvím mají obvykle vedlejší účinky a některé z nich jsou dokonce toxické. Kromě toho, některé z nich jsou jeden den účinné a jiný den nikoliv, aniž by byly známy důvody tohoto jevu.
S překvapením se nyní zjistilo, že téměř žádný jednoduchý komplex aminokyseliny a cukru, u něhož alespoň zčásti proběhl Amadoriho přesmyk, nevykazuje žádné z výše uvedených nevýhod, nýbrž naopak, má překvapivě vysokou imunologickou účinnost. Takových látek se proto může používat ve farmaceutických přípravcích a v kosmetice. Tyto malé molekuly snadno pronikají buněčnou stěnou a zdá se, že působí jako živiny. Indukují tvorbu přírodního interferonu a jiných cytokinů, včetně faktoru nekrosy nádorů. Tento stimulační účinek na biologickou aktivitu vykazují i po třech dnech od podání. Popsaný účinek se zvyšuje se zvyšujícím se dovršením Amadoriho přesmyku a opět klesá se zvyšujícím se rozkladem tohoto komplexu.
Kromě jednoduchých cukrů se také může používat polysacharidů, které mají přednostně nízkou molekulovou hmotnost, zejména molekulovou hmotnost pod 1000 dalton, jako je například dextran, který působí podobně. Polysacharidy vykazují určitou biologickou účinnost a mohou si zachovat část této účinnosti, když jsou převedeny na oligosacharidy.
O biologické účinnosti těchto sloučenin je až dosud známo jen velmi málo. Nyní se zjistilo, že kombinace těchto látek produkují v kontaktu s humánními leukocyty interferon a jiné cytokiny. Tento jev je označován termínem polyklonální aktivace buněk.
Je možné zkoušet látky produkované pod vlivem těchto sloučenin a stanovit biologické účinnosti v mezinárodních jednotkách, vztahujících se ke konkrétním cytokinům. Tyto sloučeniny mají zejména vysokou biologickou účinnost při koncentraci, která leží v rozmezí od 1 do 100 μ9/πι1 (vztaženo na čistou látku). V určité molekule je konkrétní druh aminokyseliny důležitější než druh cukerného zbytku molekuly.
Reakční produkty L-asparagové kyseliny s glukosou nebo galaktosou produkují po proběhnutí Amadoriho přesmyku - při styku s humánními leukocyty a inkubaci ve tkáňové kultuře při 37 °C po dobu 20 hodin a v atmosféře 5% oxidu uhličitého, 30 až 1000 protivirových jednotek interferonu. Interferon se měří biologickým stanovením za použití buněk humánní rakoviny. Působením těchto sloučenin je také možno produkovat sloučeniny označované názvem faktor nekrosy nádorů (TNF).
Skupina biologicky aktivních sloučenin podle tohoto vynálezu pokrývá jednak specifické sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem, které jsou popsány výše a jednak N-substituované deriváty řady různých aminokyselinových sloučenin a jednoho jednoduchého cukru, oligosacharidu nebo polysacharidu, který je přednostně nízkomolekulární (jeho molekulová hmotnost je zejména nižší než 1000 dalton), nebo N-substituované deriváty jedné aminokyselinové sloučeniny a řady jednoduchých cukrů, oligosacharidů a/nebo polysacharidů nebo jakékoliv kombinace těchto derivátů, pokud mají dostatečnou biologickou účinnost.
Předmětem vynálezu je také způsob výroby alespoň jednoho reakčního produktu obecného vzorce r1-nh-r2 kde
Rj představuje zbytek l-amino-l-deoxy-2-ketosy odvozený od jednoduchého cukru nebo nízkomolekulárního sacharidu a
R2 představuje aminokyselinový zbytek nebo nízkomolekulární peptidový zbytek, jehož podstata spočívá v tom, že se směs jednoduchých cukrů a/nebo nízkomolekulárních sacharidů, které se vyskytují ve sloučeninách obsažených v extraktu z přírodní rašeliny, smíchá se směsí aminokyselin a/nebo nízkomolekulárních peptidů, které se vyskytují ve sloučeninách obsažených v tomto extraktu a popřípadě též s anorganickými stopovými prvky, které se vyskytují v tomto extraktu, načež se výsledná substrátová směs nechá reagovat za přítomnosti vody, jako rozpouštědla, při zvýšené teplotě a popřípadě za tlaku a/nebo za přítomnosti nižšího alkoholu, přičemž molární poměr cukrů a/nebo monosacharidů k aminokyselinám a/nebo peptidům leží přednostně v rozmezí od 2:1 do 1:1 a nejvýhodněji v rozmezí 1,5:1.
Substrátová směs se s výhodou nechává reagovat při teplotě v rozmezí od asi 75 do 121 *C tak dlouho, dokud u výsledných produktů neproběhne Amadoriho přesmyk, který se zastaví, když reakční směs nabude světle oranžového zbarvení a potom se reakční směs vysuší.
Při způsobu podle vynálezu vzniká nejprve meziprodukt obecného vzorce
Rj'-NH-R2' kde
Rx’ představuje Cj-l-deoxylový zbytek v přímém uhlíkovém řetězci nebo jakoukoliv O-přemostěnou formu jednoduchého cukru, oligosacharidu nebo polysacharidu a představuje aminokyselinový nebo peptidový zbytek.
Ί
Ί druhé fázi se tento meziprodukt alespoň z části podrobuje Amadoriho přesmyku a/nebo Maillardově reakci pokračujícím zahříváním reakční směsi, přednostně za tlaku, za současného nebo následného odstraňování rozpouštědel.
V některých případech, zejména když se používá aminokyseliny obsahující dvě karboxyskupiny, bývá výhodné přidávat k reakční směsi sůl, která funguje jako pufr, například hydrogenuhličitan sodný, přednostně v molárním poměru 1:1.
Zjistilo se dále, že produkty Amadoriho přesmyku jsou poměrně náchylné k rozkladu a že produkty tohoto rozkladu mají tmavě hnědou barvu nebo barvu dehtu, přičemž takto vzniklé neidentifikovatelné sloučeniny již ztratily svou biologickou účinnost. Proto se přednostně Amadoriho přesmyk zastavuje v době, kdy reakční směs nabude světle oranžového až hnědého zbarvení.
Je zajímavé si všimnout, že intermediární reakční produkty, které vznikají, když se původně neprůhledný roztok aminokyseliny vyčeří (před proběhnutím Amadoriho přesmyku), jsou snadno hydrolyzovatelné (tj. reakce je vratná).
S postupujícím přesmykem se tato reversibilita zmenšuje, tj. produkty jsou stálejší a jejich barva se postupně mění od světle žluté na světle oranžovou a dále na oranžovohnědou, kdy se Amadoriho přesmyk zdá být ukončen. Zkoušení vzorků odebraných v průběhu tohoto přesmyku (různé zkušební postupy jsou uvedeny dále) prokázalo, že se biologická účinnost zvyšuje s postupem Amadoriho reakce a snižuje, když má další zahřívání za následek rozklad vzniklých produktů, jehož znamením je barevná změna na tmavě hnědou. Pokud reakční směs obsahuje aminokyseliny s obsahem jiných ketoskupin a/nebo síry, jako je cystein, dochází k okamžité redukci ferrikyanidu a následující barevné změně; jinak trvá reakce až 5 minut a podle toho je možno dobře odhadnout stupeň vývoje Amadoriho přesmyku. Nezreagované cukry by vykázaly barevnou změnu teprve po půl hodině až několika hodinách.
Izolace čistých produktů Amadoriho přesmyku se provádí o sobě známými postupy, které jsou založeny na vazbě směsi na silný katex (jako je Amberlite^R^ nebo Dowex^R^) a následující eluci čpavkovou vodou. Potom se vybraná definovaná frakce eluátu odpaří za sníženého tlaku a čistá sloučenina se nechá vykrystalovat z bezvodého methanolu (J. E. Hodge a Β. E. Fisher, Methods in Carbohydrate Chemistry, sv. II, Reactions of Carbohydrates, 1963, Academie Press,
New York, Lodnýn, str. 105 až 106 nebo výše citovaná publikace Borsook et al. nebo J. Dubourg a P. Devilliers.
Při způsobu podle tohoto vynálezu zůstávají všechny výše uvedené preference, pokud se týče druhu zbytku odvozených od jednoduchého cukru a aminokyseliny, nezměněny. Kromě toho, přednostní směs cukerných substrátů zahrnuje D-formy glukosy, xylosy, galaktosy, rhamnosy a fruktosy ve hmotnostním poměru přibližně 20:10:4:1:1, zatímco přednostní směs aminokyselinových substrátů zahrnuje L-formy šeřinu, glycinu, hystidinu, argininu, alaninu, prolinu, tyrosinu, valinu, leucinu, isoleucinu a lysinu ve hmotnostním poměru 20,4:35,8:35,8:132:180:360:216:160:72:68:780.
Jak již bylo uvedeno výše, produkty Amadoriho přesmyku jsou schopny redukovat ferrikyanid draselný, přičemž tato chemická zkušební reakce představuje základ pro rychlé stanovení biologické účinnosti látky vzniklé reakcí cukru a aminokyseliny.
Zjistilo se, že produkty Amadoriho reakce jsou zvláště účinné v tom případě, že se nechá reagovat směs jednoduchých cukrů o stejném složení a o stejném hmotnostním poměru, v jakém se vyskytuje v extraktu z přírodní rašeliny, za přítomnosti vodného rozpouštědla a přednostně za přidání nižšího alkoholu a popřípadě anorganických stopových prvků, které se v takovém extraktu vyskytují, při zvýšené teplotě a popřípadě za zvýšeného tlaku, načež se směs dále zahřívá za účelem Amadoriho přesmyku vzniklých produktů, přičemž se současně nebo následně vypuzují rozpouštědla a přesmyk se zastavuje v okamžiku, kdy reakční směs nabude světle oranžovohnědého zbarvení. Takto vzniklé produkty se potom přečistí sloupcovou chromatografií a shromáždí se frakce, které způsobují maximální redukci ferrikyanidu draselného.
Předmětem vynálezu je také směs sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem obecného vzorce r1-nh-r2 kde
R^ představuje zbytek l-amino-l-deoxy-2-ketosy odvozený od jednoduchého cukru nebo nízkomolekulárního sacharidu a r2 představuje aminokyselinový zbytek nebo nízkomolekulární peptidový zbytek, jejíž podstata spočívá v tom, že zahrnuje alespoň dva, přednostně větší počet, různých zbytků 1-amino-l-deoxy2-ketosy a přinejmenším dva, přednostně větší počet různých zbytků aminokyseliny a/nebo nízkomolekulárního peptidu.
S výhodou obsahuje tato směs různé zbytky 1-aminol-deoxy-2-ketosy a různé zbytky aminokyseliny a/nebo nízkomolekulárního peptidu, které se vyskytují ve sloučeninách obsažených v extraktu přírodní rašeliny a popřípadě také anorganické stopové prvky obsažené v tomto extraktu.
Výhodné je též, když směs těchto sloučenin obsahuje různé zbytky l-amino-l-deoxy-2-ketosy a různé zbytky aminokyseliny a/nebo nízkomolekulárního peptidu v podstatě o stejném složení a/nebo v podstatě ve stejném hmotnostním poměru, v jakém se vyskytují v extraktu přírodní rašeliny, popřípadě za přítomnosti anorganických stopových prvků vyskytujících se v tomto extraktu.
Tato směs produktů Amadoriho přesmyku může být zpracována na farmaceutický přípravek, který se hodí pro orální a/nebo topickou a/nebo intravenosní aplikaci a také tento farmaceutický přípravek je předmětem tohoto vynálezu.
Předmětem vynálezu je též farmaceutický přípravek výše uvedeného složení, který se hodí pro kosmetickou aplikaci.
Výše uvedené farmaceutické přípravky obsahují kromě účinné přísady vhodné nosiče a/nebo pomocné látky a/nebo mazací přísady v hmotnostním poměru účinné přísady k ostatním složkám v rozmezí od 1:1 do 1:100, přednostně od 1:8 do 1:20 a nejvýhodněji v hmotnostním poměru přibližně 1:9.
Jako výhodné provedení farmaceutického přípravku je možno uvést směs účinné přísady, laktosy a mazadla, v níž je hmotnostní podměr laktosy k mazadlu přibližně 20:1 až 100:1, přednostně 50:1.
Těchto farmaceutických přípravků se může používat pro léčbu a/nebo prevenci hematologických a/nebo imunologických chorob a/nebo pro stimulaci imunitního systému člověka a/nebo savců indukcí tvorby cytokinu.
V kosmetických přípravcích podle vynálezu bývá účinná přísada obsažena v množství od 0,01 do 10 % hmotnostních, přednostně od 0,01 do 1 % hmotnostního, zvláště pak v množství od 0,05 do 0,1 % hmotnostního. Tyto kosmetické přípravky mohou kromě účinné přísady obsahovat také nosiče, pomocné látky, obohacující složky a/nebo parfémy.
Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.
Příklady provedeni vynálezu
Příklad 1
Do 25ml baňky umístěné v rotačním odpařováku v lázni se zahřátou vodou se předloží;
1,47 g (0,01 mol) 0,84 g (0,01 mol) 0,91 g
0,91 g
3,00 ml
L-glutamové kyseliny, hydrogenuhličitanu sodného, D-glukosy, galaktosy a redestilované vody.
Vzniklá směs se zahřívá na 80 °C a přitom se, přednostně za sníženého tlaku, odpaří 50 % obsažené vody.
Potom se směs zahřívá za atmosférického tlaku na 80 až 85 ’C po dobu 120 minut, tj. tak dlouho, dokud nenabude oranžového zbarvení. Vzniklý sirupovitý koncentrovaný vodný roztok se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Takto vzniklý oranžovočervený pevný reakční produkt se označí symbolem D-10 a uchová pro biologické zkoušení.
Příklad 2
Do 25ml baňky umístěné v rotačním odpařováku v lázni se zahřátou vodou se předloží:
1,33 g (0,01 mol) 0,84 g (0,01 mol) 0,91 g
0,91 g
3,00 ml
L-asparagové kyseliny, hydrogenuhličitanu sodného, D-glukosy, galaktosy a redestilované vody.
Vzniklá směs se za míchání zahřívá na 80 ’C (míchání se provádí otáčením baňky), potom se zkoncentruje za tlaku, přičemž se odpaří celkem 1,5 ml vody. Potom se směs zahřívá za atmosférického tlaku na 80 až 85 ”C po dobu přibližně 60 minut, tj. tak dlouho, dokud nenabude světle oranžového zbarvení. Vzniklý sirupovitý koncentrovaný vodný roztok se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Takto vzniklý reakční produkt má podobu suchého žlutooranžového prášku. Produkt se označí symbolem D-ll a uchová pro biologické zkoušení.
Příklad 3
Do 25ml baňky umístěné v rotačním odpařováku v lázni se zahřátou vodou se předloží:
1,05 g (0,01 mol) L-serinu,
0,91 g D-glukosy,
0,91 g galaktosy a
2,50 ml redestilované vody.
Vzniklá směs se za míchání zahřívá na 85 až 92 ’C (míchání se provádí otáčením baňky), po 100 minutách nabude roztok oranžového zbarvení. Sníží se tlak a směs se odpaří do sucha. Reakční produkt vytvoří na stěnách baňky oranžovou průhlednou vrstvu. Produkt se seškrábe a rozdrží na prášek. Tento produkt se označí symbolem D-12 a uchová pro biologické zkoušení.
Příklad 4
Do 25ml baňky umístěné v rotačním odpařováku v lázni se zahřátou vodou se předloží:
0,66 g (0,005 mol) 0,42 g (0,005 mol) 0,45 g
0,45 g
3,00 ml
D-asparagové kyseliny, hydrogenuhličitanu sodného, D-glukosy, galaktosy a redestilované vody.
Vzniklá směs se zahřívá na 80 ’C, potom se odpaří za tlaku, přičemž se odpaří celkem 1,5 ml vody. Potom se směs zahřívá za atmosférického tlaku na 80 ’C po dobu 60 minut, tj. tak dlouho, dokud nenabude oranžového zbarvení. Vzniklý sirupovitý koncentrovaný vodný roztok se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Před tím, než se zbytek úplně vysuší se 2x přidá 10 ml bezvodého ethanolu a směs se vždy odpaří, aby se odstranila zbytková vlhkost. Takto vzniklý reakční produkt se rozdrtí na prášek, který se označí symbolem D-13 a uchová pro biologické zkoušení.
Příklad 5
Aby se syntetickým postupem získal ekvivalent biologicky účinné frakce extraktu určité přírodní rašeliny, předloží se do baňky umístěné v rotačním odpařováku v lázni se zahřátou vodou tyto složky:
| 20,5 | mg |
| 35,8 | mg |
| 35,8 | mg |
| 132,0 | mg |
| 180,0 | mg |
| 360,0 | mg |
| 216,0 | mg |
| 160,0 | mg |
| 68,0 | mg |
| 72,0 | mg |
| 780,0 | mg |
| 2000,0 | mg |
| 1000,0 | mg |
| 400,0 | mg |
| 100,0 | mg |
| 100,0 | mg |
| 6,0 | ml |
L-serinu,
L-glycinu,
L-histidinu,
L-argininu,
L-alaninu,
L-prolinu,
L-tyrosinu,
L-valinu,
L-isoleucinu,
L-leucinu,
L-lysinu,
D-glukosy,
D-xylosy, D-galaktosy, D-rhamnosy, D-fruktosy a redestilované vody.
Směs se míchá otáčením baňky a zahřívá za tlaku po dobu 45 minut na teplotu od 75 do 86 °C. Během této doby se odpaří přibližně 3 ml vody a substráty se úplně rozpustí.
Potom se směs zahřívá 30 minut za atmosferického tlaku na teplotu 85 až 86 ’C, aby došlo k Amadoriho přesmyku. Během této doby roztok rychle změní barvu na červenohnědou. Sníží se tlak a v zahřívání se pokračuje na 84 ’C, přičemž současně se odpaří rozpouštědla. Na konci odpařování se do reakční baňky 2x přidá 15 ml bezvodého ethanolu a reakční směs se vždy odpaří do sucha. Baňka s vysušeným reakčním produktem se na 18 hodin umístí do exsikátoru nad chlorid vápenatý a potom se reakční produkt zpracuje na prášek.
Získá se přibližně 4,5 g práškovitého produktu, který se označí symbolem EK2-S.
Část (4 g) tohoto reakčního produktu se rozpustí ve 20 ml destilované vody a vzniklý roztok se nanese na náplň chromatografícké kolony (kolona má rozměry 25 x 330 mm a jako nápln obsahuje sorbent Amberlite^R^ XAD-2, analytické čistoty). Sloupec se eluuje destilovanou vodou při průtoku 0,4 ml/min. Shromažďují se frakce o objemu 10 ml až do celkového objemu eluátu 450 ml. Obsah frakcí se monitoruje chromatograficky. Frakce 11 až 13 se spojí a odpaří za sníženého tlaku. Tyto frakce mají vysoký obsah produktů Amadoriho přesmyku (což se potvrdí redukční zkouškou pomocí ferrikyanidu draselného). Produkt se uchová pro následující biologické zkoušení a označí se symbolem EK2-S-11.
Biologické zkoušení zaměřené na zjištění biologické účinnosti se provádí na imunizovaných myších Balb/C obojího pohlaví a stáří 8 až 10 týdnů. Imunizace myší se provádí peritoneálním podáním 0,2 ml 10% suspenze ovčích erythrocytů (SRBC), tj . 6x10® buněk. Erythrocyty jsou fixovány ve sterilním Alseverově roztoku následujícího složení:
glukosa citrát sodný chlorid sodný kyselina citrónová redestilovaná voda do
2,05 g, 0/8 g, 0,42 g, 0,055 g, 100 ml.
Do tohoto Alseverova roztoku se vloží aseptický vzorek buněk ovčí krve v poměru 1:1 a směs se udržuje alespoň 3 dny při teplotě 4 °C. Takto vzniklé stabilizované erythrocyty se potom za aseptických podmínek převedou do fosforečnanem pufrovaného solného roztoku (PBS), za účelem promytí. Erythrocyty se 2x opláchnou PBS a potom 10 minut odstřelují při otáčkách 2000 min-1. Promytých buněk se používá ve formě 10% suspenze v PBS. Této suspenze se používá pro imunizaci myší Balb/C.
Zkoušený reakční produkt se podává intraperitoneálně (i. p.) nebo orálně (p. o.) 4x ve zvolené dávce, přičemž první podání se provádí 2 hodiny před imunizací myší SRBC, zatímco zbývající 3 dávky se podají po imunizaci v intervalech 24 hodin.
Každé zkušební skupině zvířat se podává různá dávka zkoušeného reakčního produktu: 10 mg/kg, 1 mg/kg, 0,1 mg/kg a 0,01 mg/kg. Kontrolní skupina zvířat se také imunizuje ·
I
SRBC, ale místo zkoušené látky se jí podává ve stejných časových intervalech vždy 0,2 ml PBS.
Všechny skupiny zvířat, jak kontrolní, tak zkušební, při všech pokusech zahrnují 8 až 12 myší.
Čtvrtý den nebo (v případě stanovení protilátek typu 7S) desátý den po imunizaci, se myší mírně anestetizují etherem exsanguinací prostřednictvím extirpace oční bulvy. Krev se odebere do zkumavek. Potom se myším zlomí páteř a vyjme slezina. Krve se použije pro získání séra, kterého je zapotřebí pro stanovení hemagglutinujících protilátek typu 19S + 7S a 7S, zatímco slezin se použije pro získání buněk, které jsou užitečné pro stanovení procentického podílu buněk schopných vytvářet E-rosety a pro stanovení hemolytické účinnosti. Pro tyto účely se myší slezina rozmělní. Splenocytové buňky, které se takto získají, se suspendují přibližně ve 2 ml Hankova media o teplotě 4 ’C, navrství na Ficoll-Uropolinúv gradient o hustotě 1,077 a potom 15 minut odstředují při otáčkách 3000 min“1 a teplotě 4 ’C. Po oddělení z mezifáze se žlutohnědý povlak lymfocytů přenese do Hankova media o teplotě 4 ’C a 2x promyje, vždy s následným sedmi až desetiminutovým odstředováním při otáčkách 1800 min“1. Potom se splenocyty suspendují v 1 ml Hankova media v takovém poměru, aby počet obsažených buněk byl 1 χ 106.
Při každé zkoušce se stanovuje procentický podíl mrtvých buněk tak, že se 1 kapka zkoušené suspenze splenocytů smíchá s 1 kapkou roztoku barviva (vyrobeného dříve), který obsahuje 4 díly 0,2% roztoku trypanové modři a 1 díl 4,25% roztoku chloridu sodného. Pod mikroskopem se vždy stanovuje procentický podíl mrtvých splenocytů u 100 buněk. Mrtvé buňky mají barvu námořnické modři, zatímco světlé buňky jsou živé. Přítomnost většího podílu mrtvých buněk než 10 % je kritická. Takový vzorek je třeba z dalšího použití vyloučit.
Všechny stupně se zkoušenými buňkami by měly být prováděny ve sterilním silikonizovaném skleněném laboratorním zařízení, umístěném v ledové lázni.
Příklad 6
Při první zkoušce se zjišťuje účinek zkoušených reakčních produktů na počet buněk vyvolávajících tvorbu hemolytických protilátek (PFC-IgM). Zkouška se provádí takto; K 0,5 ml 0,5% roztoku agarosy umístěného ve zkumavce a udržovaného ve vodní lázni zahřáté na 45 *C se přidá 0,1 ml 10% suspenze SRBC (připravené výše popsaným způsobem). Potom se přidá 0,1 ml suspenze splenocytů o hustotě 1 x 10® buněk/ml, směs se rychle promíchá a ihned na to nalije na sklíčka předběžně opatřená povlakem agarosy. Sklíčka se 2 hodiny inkubují při 37 °C. Potom se zkoušené vzorky potáhnou komplementem z morčete, zředěným v poměru 1:20 a 2 hodiny inkubují. Po inkubaci zkoušených vzorků s komplementem se zjistí počet plakotvorných buněk (PFC) a výsledek se přepočte na 1 x 10® splenocytů. Každá zkouška se provádí 2x.
Nejsilnější zesílení odpovědi na SRBC, vyjádřené jako zvýšení hladiny splenocytů produkujících hemolysiny IgM (PFC) je pozorováno po podání látky D-ll v dávce 0,1 mg/kg. Zesílení (amplifikace) činí 119 %. Když se denní dávka zvýší na 10-násobek (1 mg/kg), amplifikace odpovědi se sníží na 53 %.
Reakční produkt D-12 vykazuje nejsilnější účinnost, přírůstek 58 %, v dávce 1 mg/kg.
Reakční produkt EK2-S-11 při této zkoušce vykazuje nejsilnější účinnost v dávce 0,1 mg/kg (přírůstek 65 %). Při dávce lOx vyšší, t j. 1 mg/kg, je toto zvýšení o něco nižší, tj. 52 %.
Reakční produkt D-13 zkoušený v dávce 1 mg/kg způsobuje zvýšení 40 %. Při zvýšení této dávky na 10 mg/kg, tj . na 10-násobek, vykazuje odpověd pouze 14% zvýšení.
Příklad 7
Také se provede aktivní hemagglutinační zkouška za účelem stanovení hladiny protilátek anti-SRBC typu 19S + 7S a 7S. Pro stanovení hladiny protilátek typu 19S-IgM se připraví myší sérum čtvrtý den po imunizaci SRBC, zatímco pro stanovení hladiny protilátek typu 7S-IgG se tato příprava provádí desátý den po imunizaci myší SRBC. Doba přípravy séra odpovídá dnu, kdy myši obsahují maximální hladinu protilátek uvedeného typu po imunizaci SRBC.
A. Stanovení hladiny protilátek 19S + 7S
Krevní vzorek se 30 minut odstřeďuje při otáčkách 3500 min-1. Z každého takto získaného vzorku se odebere sérum a umístí do vodní lázně zahřáté na teplotu 56 C na 30 minut, aby se deaktivoval komplement. Potom se připraví řada roztoků s různým zředěním každého zkoušeného séra (v rozmezí od 1:1 do 1:4096) za použití mikrotitrátoru a mikrotitrových desek s jamkami ve tvaru písmene U, z nichž každá má objem 250 μΐ. Zředěné sérum se inkubuje vždy 1 hodinu při teplotě místnosti. Ke každému séru se přidá kapka 1% suspenze SRBC v PBS (připravené výše popsaným způsobem) a vzniklé směsi se inkubují další 2 hodiny při teplotě 37 °C a potom se uloží do prostoru o teplotě 4 ’C. Výsledky se zjišůují následující den. Maximální zředění, při němž je ještě pozorována hemagglutinace, je považováno za údaj charakterizující hladinu protilátek. Prstenec na dně jamky je znamením, že došlo k hemagglutinaci. Útvar podoby knoflíku na dně jamky je považován za negativní výsledek - k hemagglutinaci nedošlo.
Pro statistickou analýzu výsledků se zvýšení zředění séra u zkoušené látky porovná se zvýšením u kontrolní skupiny.
Reakční produkt D-ll, v dávce 1 mg/kg, zvyšuje hladinu IgM 2,57x. Při lOx vyšší dávce se stimulační účinek ve srovnání s kontrolní skupinou zvýší na 3,5-násobek.
Reakční produkt D-12 vykazuje při této zkoušce nižší účinnost. V dávce 0,1 mg/kg zvyšuje hladinu IgM 2x a v dávce 1 mg/kg l,4x.
Reakční produkt EK2-S-11 vykazuje nejsilnější účinnost při této zkoušce. V dávce 0,1 mg/kg zvyšuje hladinu IgM 4,3x a v dávkce 1 mg/kg 3,6x.
Reakční produkt D-13 zvyšuje hladinu IgM v dávce 1 mg/kg na trojnásobek a v desetinásobně vyšší dávce na
1,5-násobek.
B. Stanovení hladiny protilátek 7S
Zkoušená inaktivovaná séra se smísí v poměru 1:1 s 0,ÍM roztokem 2-merkaptoethanolu a směsi se inkubují 30 minut při teplotě 37 ’C. 2-merkaptoethanol ničí imunoglobuliny typu 19S-(IgM), zatímco imunoglobuliny typu 7S-(IgG) nejsou citlivé na působení 2-merkaptoethanolu.
Po 30 minutách inkubace se redukční reakce zastaví chlazením na teplotu 4 'C po dobu 15 minut. Potom se připraví řada zředěných vzorků, podobným způsobem, jak je to popsáno výše, za účelem stanovení hladiny protilátek 19S a tyto vzorky se smíchají s 1% suspenzí SRBC. Po 2 hodinách inkubace při 37 C se vzorky uloží při teplotě 4 ’C. Výsledky se vyhodnocují následující den, podle kritérií pro stanovení hladiny, při níž dochází k hemagglutinaci, popsaných výše. Současně se provádí kontrolní zkouška za použití kombinace 1% suspenze SRBC s PBS v poměru 1:1.
Když se látka D-ll zkouší výše popsaným způsobem, zvyšuje v dávce 1 mg/kg tvorbu protilátek IgG 3,16-násobně. V dávce 10 mg/kg je toto zvýšení 2,2-násobné.
Reakční produkt D-12 zkoušený v dávce 0,1 mg/kg a 1 mg/kg, stimuluje produkci protilátek IgG 1,3-násobně. Při dávce 10 mg/kg je stimulace 1,5-násobná.
Reakční produkt EK2-S-11 stimuluje v dávce 0,1 mg/kg produkci IgG 1,9-násobně a v dávce 1 mg/kg 2,89-násobně (vždy ve srovnání s kontrolním pokusem).
Výsledky zkoušek A a B, které se získají u každé produkční várky nebo u každé frakce biologicky účinných reakčních produktů syntetizovaných způsobem podle vynálezu, které poskytly výše uvedenou imunologickou odpověčř, se podrobí statistické analýze T-studentovou metodou, α = 0,05. Výsledky získané u každé zkoušené dávky se porovnají s paralelní kontrolní zkouškou a zjistí se zvýšení biologické účinnosti.
Příklad 8
Skupina biologicky účinných reakčních produktů získaných způsobem podle příkladů 1 až 5 se také podrobí zkoušce, při které se stanovuje procentický podíl splenocytů vytvářejících E-rosety.
250 μΐ 1% suspenze SRBC a 250 μΐ zkoušených buněk (při koncentraci lx 106 buněk/ml) se přidá do 550 μΐ Hankova media. Všechny vzorky se inkubují v teplé vodní lázni (zahřáté na 37 °C) vybavené třepačkou po dobu 15 minut.
Potom se vzorky skladují při teplotě 4 ’C dalších 20 hodin. Procentický podíl splenocytů vytvářejících E-rosety s SRBC se stanoví po obarvení suspenze 1 až 3 kapkami krystalické violeti.
U každého vzorku se stanovuje procentický podíl splenocytů 3x, přičemž v každém případě se spočítá 400 splenocytů. Za E-rosety se považuje útvar, v němž je splenocyt obklopen přinejmenším 3 erytrocyty.
Za účelem statistického vyhodnocení se porovnává procentické zvýšení počtu splenocytů s E-rosetami u jednotlivých zkoušených látek a kontrolní skupiny.
Při této zkoušce vykazuje maximální stimulační účinek reakční produkt D-ll (63 %) a EK2-S-11 (70 %) při dávce 1 mg/kg. Při dávce lOx nižší, tj. 0,1 mg/kg, poklesnou tyto hodnoty na 45 % a 57 %.
Reakční produkt D-12 způsobuje v dávce 1 mg/kg zvýšení schopnosti vytvářet E-rosety o 22 %, ve srovnání s kontrolní skupinou. Příslušná hodnota pro dávku lOx nižší, tj. 0,1 mg/kg, je 29 %.
Reakční produkt D-13 vykazuje maximální účinek v dávce 1 mg/kg (58 %), zatímco při vyšších dávkách je dosažený účinek o něco nižší.
Biologická účinnost syntetizovaných sloučenin se vyhodnocuje za použití následujících zkoušek:
1) Zkouška stanovení procentického podílu splenocytů, vytvářejících E-rosety se provádí způsobem popsaným v Bach a Dardenne, Cell. Immunol 3, 1 až 16, 1972.
2) Zkouška stanovení počtu buněk produkujících hemolytické protilátky typu IgM se provádí Jerneho metodou způsobem, který modifikoval Mishell a Dutton (J. Exp. Med. 126, 423 až 442, 1967).
3) Zkouška stanovení hladiny protilátek 19 + 7S a 7S, způsobující hemagglutinaci se provádí Adlerovou hemagglutinační metodou (J. Immunol 95, 26 až 38, 39 až 47, 1965) za použití mikrotitrových desek (J. Immuno Pharmacol. 4, 43 až 52, 1982).
Příklad
Do baňky umístěné v odpařováku se předloží:
zahřáté vodní lázni rotačního
1,33 g (0,01 mol) 0,84 g (0,01 mol)
10,00 g
10,00 ml
L-asparagové kyseliny, hydrogenuhličitanu sodného, hydrolýzováného dextranu o průměrné molekulové hmotnosti 3000 dalton a redestilované vody.
Směs se zahřívá za tlaku na teplotu 70 °C tak dlouho, dokud se úplně nerozpustí pevné látky a v průběhu této doby se oddestilují přibližně 3 ml vody (doba zahřívání je asi 30 minut). Baňka s roztokem se volně zakryje, umístí do parního sterilizačního zařízení a 40 minut zahřívá za tlaku na teplotu 121 eC. Po ochlazení se vzniklý žlutooranžový roztok zředí 15 ml vody, vyčeří odstředěním a vysuší rozprašovacím sušením ve vzduchu při teplotě na vstupu 160 ’C a na výstupu 85 ’C. Získá se 10,5 g světle béžového reakčního produktu, který je snadno rozpustný ve vodě.
Přítomnost produktů Amadoriho přesmyku v tomto reakčním produktu se potvrdí zkouškou pomocí ferrikyanidu draselného (viz Borsook, Abrams a Lowy, J. Biol. Chem. 215 (1955), 111 až 124 a chromatografickými metodami.
Biologickými zkouškami, které jsou popsány v předchozích příkladech, se potvrdí, že výše uvedený produkt má podobnou imunotropní účinnost, jako produkt získaný za použití jednoduchého cukru.
Příklad 10
Do kónické baňky se předloží:
5,0 g hydrolýzovaného dextranu o průměrné molekulové hmotnosti přibližně 5000 dalton,
1,1 g L-prolinu a
4,0 ml redestilované vody.
Obsah baňky se rozpustí za míchání. Rovnoměrná směs, která takto vznikne, se umístí do parního sterilizačního zařízení, kde se zahřívá za tlaku na teplotu 110 ’C po dobu 40 minut. Výsledný průhledný oranžový roztok se zředí 20 ml redestilované vody a vyčeří odstředěním. Čirý roztok se vysuší v rozprašovací sušárně.
Získá se 5,3 g reakčního produktu, který je snadno rozpustný ve vodě. Jeho imunotropní účinnost je podobná jako u produktů získaných v jiných experimentech popsaných v předcházejících příkladech.
Příklad 11
Při konvenčních zkušebních metodách se zkouší biologická účinnost těchto sloučenin na myších, ale nikoliv na lidech. Z toho důvodu byla vyvinuta nová biologická stanovení, při nichž se měří množství a účinnost cytokinů uvolňovaných z humánních periferních krevních leukocytú (PBL), ošetřených reakčními produkty podle příkladu 1 až 5, a 10. Cytokiny jsou proteiny podobné hormonům, které hrají důležitou úlohu při prakticky všech imunologických reakcích, jakož i při regulačních procesech, které jsou zodpovědné za udržování homeostasy.
Zkoušení cytotoxicity
Cytotoxicita reakčních produktů podle vynálezu se stanovuje u buněk adenokarcinomu lidských plic linie A549 (tato linie je uložena v Americké sbírce typových kultur ATCC CCL 185). Monovrstvy buněk se trypsinizují a potom se suspenze 2x 105 buněk/ml v Dulbeccem modifikovaném Eaglově minimálním esenciálním médiu (DMEM), doplněném 10% telecím sérem (CS) smíchají s různými dávkami léčiv. Směsi se umístí v jamkách mikrotitrové plotny z plastu a 48 hodin inkubují při 37 °C. Za hodnotu CD50 se považuje minimální koncentrace zkoušené sloučeniny, která způsobí přibližně 50% destrukci buněčné kultury, při měření za použití barvení 0,015% roztokem neutrální červeni v DMEM.
Indukce cytokinů
Povlaky žlutohnědé barvy pocházející od zdravých dárců krve byly získaný z oblastní transfusní stanice.
Použitý postup je následující: Erythrocyty se podrobí lysi působením chloridu amonného způsobem popsaným v Cantell,
L. , Hirvonen, S., Kauppinen, H. L.: Production and Partial Purification of Human Immune Interferon. Meth. Enzymol.,
119, 54, 1986. Používá se leukocytů od jediného dárce ve formě přípravku obsahujícího 8x 106 leukocytů/ml v médiu RPMI 1640, doplněném 10% fetálním telecím sérem (FCS), L-glutaminem a antibiotiky. Všechny várky FCS byly podrobeny předběžnému zkoušení. Pro kultury PBL se používá pouze nemitogenního FCS. Induktory cytokynu se přidávají k lml objemu kultur. Jako referenčního induktoru cytokynu se používá fytohemagglutininu (PHA) (Pharmacia Fine Chemicals, Švédsko) a LPS z E. Colli 0111:B4 (Difco Laboratories). Indukované kultury PBL se inkubují v atmosféře 5% oxidu uhličitého ve vzduchu 20 hodin při 37 'C a potom se odstředí. Supernatanty se skladují při 4 C a v průběhu jednoho týdne zkoušejí na TNF a IFN účinnost.
Stanovení interferonu (IFN)
Vyrobí se konfluentní monovrstva buněk A549 v jamkách mikrotitrové plotny, v DMEM s 10% CS,
L-glutaminem a antibiotiky (100 U/ml penicilínu a 100 μg/ml streptomicinu. Vzorky IFN zředěné v miskách se přidají k buněčné monovrstvě a 20 hodin inkubují při teplotě 37 eC v atmosféře 5% oxidu uhličitého ve vzduchu. Potom se buňky promyjí a provokují virem encephalomyocarditis (EMCV). Titr IFN je definován jako zředění vzorku IFN, které po 48 hodinách inkubace sníží cytopathogenní účinek viru o 50 %. Také se používá metody s MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)2,5-difenyltetrazoliumbromid] (Hansen, Μ. Β., Nielsen, S.
Ε. , a Berg, K.: Re-examination and Further Development of a Precise and Rapid Dye Method for Measuring Cell Growth /
Cell Kill. J. Immuno. Meth., 1989, 119, 203 až 210) pro zjištění usmrcených buněk ve scanneru ELISA. Při.všech těchto stanoveních se používá těchto laboratorních standardů
IFN: rekombinantní humánní IFN-gamma (Genentech lne., USA, specifická aktivita 2x 108 U/mg), přírodního humánního leukocitu IFN-α (3x 106 IU/ml) a IFN-gamma (2x 106 IU/ml), od firmy Dr. K. Cantell, Helsinky, Finsko.
Stanovení faktoru nekrosy nádorů (TNF
Cytotoxická účinnost TNF se měří v buňkách L929 způsobem popsaným v Flick, D. A., Gifford, G. E.: Comparison of in Vitro Cell Cytotoxic Assays for Tumor Necrosis Factor.
J. Immunol. Meth., 68, 167, 1984.
Vzorky a roztok aktinomycinu D se přidají ke kulturám buněk v podobě monovrstev. Po 20 hodinové inkubaci při 37 'C se buňky obarví krystalickou violetí a zjišůují se toxické účinky. Definuje se množství, které způsobuje přibližně 50% destrukci buněčných kultur a toto množství se charakterizuje jako jedna jednotka účinnosti TNF. Na základě srovnání s přípravkem TNF-α (Genentech. Inc., USA) ukazuje, že jedna jednotka při těchto zkouškách odpovídá 100 až 200 pg/ml TNF.
Neutralizační zkoušky cytokinu
Používá se těchto antisér: králičího anti-humánního TNF-α, várka 2958-40 a králičího anti-humánního IFN-gamma, várka 2891-56 (Genentech. Inc., USA), ovčího anti-humánního IFN-α,β a ovčího antihumánního IFN-gamma (Dr. K. Cantell, Finsko). Cytokinové přípravky se ošetří séry zředěnými v poměru 1:200 v kultivačním médiu a 1 hodinu inkubují při teplotě místnosti. Potom se popsaným způsobem stanovuje residuální účinnost IFN nebo TNF.
Používá se 5 různých dávek (L·^ až L5) PBL, připravených z krve zdravých dárců. Optimální koncentrace PBL při těchto stanoveních je 8x 106 buněk/ml média (RPMI1640, doplněné 10% fetálním telecím sérem a antibiotiky).
Inkubace humánního PBL s novými reakčními produkty I až XI (viz tabulka 1) má za následek syntézu IFN a TNF. Pozorovaná odpověď je závislá na dávce v rozmezí od 3 do 100 μg/ml sloučeniny (viz tabulka 2). Sloučeniny, používané v označených koncentracích jsou necytotoxické. Při všech biologických stanoveních se používá negativních a positivních kontrolních zkoušek. U negativních kontrolních zkoušek se měří množství cytokinů (IFN a TNF), které jsou produkovány spontánně bez toho, že by byly přidány nějaké exogenní stimulátory. Positivní kontrolní zkoušky poskytují údaj o množství cytokinů produkovaného v odpovědi na známý referenční induktor; v případě této zkoušky je jím fytohemagglutinin (PHA, Pharmacia, Švédsko, 100 μg/ml).
Je třeba zdůraznit, že indukce cytokinů v humánních kulturách PBL získaných od různých jednotlivců obvykle poskytuje výsledky se značným rozptylem. Tento úkaz je možno vysvětlit genetickým rozrůzněním lidské po pulace. Kromě toho, kultury PBL často produkují IFN a TNF spontánně.
Jinými slovy, u zdravých dárců PBL se běžně vyskytují jednotlivci s vysokou odpovědí i jednotlivci s nízkou odpovědí a dokonce i jednotlivci s nulovou odpovědí.
Přes výše uvedená omezení ukazují výsledky biostanovení, že PBL (Lj až L5) ošetřené reakčním produktem podle vynálezu (I až XI) produkují IFN a/nebo TNF v kvantitativně měřitelném množství.
V případě obsahujícího leukocyty dárce s vysokou odpovědí se zjistilo, že reakční produkt II (který obsahuje L-formu asparagové kyseliny) je podstatně účinnější jako induktor cytokinu než reakční produkt III (obsahující D-formu kyseliny asparagové a který je též podstatně, totiž o dva řády, nákladnější. Toto zjištění je velmi významné, poněvadž při biochemických reakcích jsou buňkami rozpoznávány jako přírodní substráty převážně L-formy.
Kromě toho, pro expresi biologické účinnosti reakčních produktů je aminokyselinová část molekuly mnohem důležitější než forma cukru. Kromě jednoduchých cukrů, se může též používat polysacharidů, přednostně nízkomolekulárních polysacharidů, zejména pak polysacharidů s molekulovou hmotností nižší než 1000 dalton (jako jsou dextrany, reakční produkty X až XI). Takové polysacharidy reagují podobně jako jednoduché cukry.
Naopak též platí, že polysacharidy obsahující zbytky aminokyselin mohou vykazovat biologickou účinnost a tato účinnost je zachována, když dojde k jejich rozkladu na oligosacharidy s vázanou aminokyselinou (data nejsou uvedena).
Podobné výsledky lze též pozorovat, když se při stimulaci leukocytů pro produkci cytokinů místo jednoduché aminokyseliny použije krátkého peptidu (data nejsou uvedena).
Sedm referenčních dávek nefrakcionovaného TTP, zkoušeného ve více než 100 kulturách PBL od různých dárců, poskytlo 10 až 1000 U IFN/ml a 9 až 750 U TNF/ml. Frakce EK2~S, připravená ze směsi, která odpovídá složení extraktu přírodní rašeliny (příklad 5), byla zkoušena v 8 kultrurách PBL od 8 různých dárců krve. Zjistilo se, že tato frakce představuje nejúčinnější přípravek indukující jak tvorbu IFN tak tvorbu TNF (data nejsou uvedena).
Z možných aplikací reakčních produktů podle vynálezu je možno uvést jejich použití jako imunomodulátorů a tato jejich účinnost je klinicky užitečná. Další prokázanou účinností je účinnost při regeneraci tkání. Také byla pozorována protirakovinová účinnost, která je pravděpodobně spojena s přítomností indukovaného interferonu a faktoru nekrosy nádorů. Také byla zaznamenána protivirová účinnost.
Reakční produkty podle vynálezu je možno podávat orálně, ale stejně dobře lze použít parenterální aplikace a topické aplikace. Tyto produkty jsou poměrně stálé.
Tabulka 1
Seznam reakčních produktů
Číslo Substráty
| I (D—10) | L-glutamová kyselina, glukosa, galaktosa |
| II (D-ll) | L-asparagová kyselina, glukosa, galaktosa |
| III (D-13) | D-asparagová kyselina, glukosa, galaktosa |
| IV (D-12) | L-serin, glukosa, galaktosa |
| V | EK2-S (frakce 11 až 13) |
| VI | EK2-S (frakce 6 až 7) |
| VII | EK2-S (frakce 8 až 10) |
| VIII | EK2-S (frakce 28 až 34) |
| IX | L-prolin, glukosa |
| X | L-asparagová kyselina + dextran (druh 1) |
| XI | L-asparagová kyselina + dextran (druh 2) |
Příklad 12
Za použití následujících reakčních produktů se vyrobí farmaceutické přípravky, které jako účinnou přísadu obsahují reakční produkty podle příkladů 1 až 5, 9 a 10:
Tablety/granule
5,0 g reakčního produktu získaného podle příkladu 1 nebo 10 (účinná přísada),
444,0 g farmaceuticky vhodné laktosy a
1,0 g lubrikační látky, například výrobku
MYVATEx(r) (obch. známka firmy Eastman Kodak)
Složky se smísí a směs se běžným způsobem granuluje za použití 30% vodného ethanolu. Granulát se usuší při 40 ’C a použije se ho pro výrobu kapslí, z nichž každá obsahuje přibližně 450 mg granulí, tj. 5 mg účinné přísady.
Alternativně se může granulí použít pro výrobu tablet, z nichž každá má hmotnost 450 mg a obsahuje 5 mg účinné přísady.
Podobnými běžnými postupy se mohou účinné přísady, získané způsoby popsanými v příkladech 1 až 5, 9 a 10, zpracovat za použití vhodných nosičů na jiné farmaceutické přípravky.
Tabulka 2
Biologická účinnost reakčních produktů I až XI v humánních PBL
Dávka
U/ml μσ/nil L-j
| kontrolní | - | 10 |
| 1 0 | 100 | |
| — | 100 | 100 |
| 30 | - | |
| 1 0 | 30 | |
| 3 | - | |
| -- | 1 00 | 1Ό0 |
| 30 | - | |
| 1 0 | 1000 | |
| 3 | - | |
| Trr | 1 00 | <10 |
| 30 | - | |
| 1 0 | <10 | |
| 3 | - | |
| z v | 1 00 | <1 0 |
| 30 | - | |
| 1 0 | <10 | |
| 3 | — | |
| v | 100 | 30 |
| 30 | - | |
| 1 0 | <10 | |
| vz | 100 | <10 |
| 30 | - | |
| 1 0 | 1 0 | |
| vzz | 1 00 | <10 |
| 30 | - | |
| .. | 1 0 | 1 0 |
| 3 | - | |
| vzz z | 1 00 | <10 |
| 30 | - | |
| 1 0 | <10 | |
| 3 | - | |
| zx | 1 00 | 10 |
| 30 | - | |
| 1 0 | 100 | |
| 3 | - | |
| M Λ | 1 00 | 100 |
| 30 | - | |
| 1 0 | <10 | |
| 3 | - | |
| xz | 1 00 | <10 |
| 30 | - | |
| 10 | <10 |
IFN U/ml
| L2 | U3 | L, *? | Li S | L1 |
| <10 | <10 | 20 | <10 | ao |
| 30 | 30 | 60 | 100 | 250 |
| <10 | <10 | 20 | - | 250 |
| — | 30 | - | — | |
| <10 | <10 | 30 | - | 60 |
| 10 | - | — | ||
| 1 0 | <10 | 10 | <10 | 250 |
| 1 0 | <10 | - | ||
| 10 | 30 | 10 | 10 | 250 |
| 10 | <10 | - | ||
| <10 | IC | 10 | <10 | 250 |
| 30 | <10 | - | ||
| <10 | <10 | 10 | <10 | so |
| — | 1 0 | <10 | — | |
| 10 | 10 | 20 | <10 | 50 |
| 20 | <10 | - | ||
| 30 | <10 | 20 | <10 | 80 |
| 20 | <10 | - | ||
| <10 | <10 | 60 | - | 80 |
| ! n | 60 | - | - | |
| <1 0 | <10 | 1 0 | - | 80 |
| — | 1 0 | - | — | |
| <10 | <10 | 20 | - | 80 |
| — | 10 | - | — | |
| <10 | <10 | 20 | - | 50 |
| — | 1 0 | - | ||
| <10 | <10 | - | — | 80 |
| <1 0 | <10 | - | - | 80 |
| <10 | <10 | - | - | 80 |
| <10 | <10 | - | - | 750 |
| <10 | <10 | 10 | - | 27 |
| — | — | 20 | - | — |
| 30 | <10 | 20 | - | 80 |
| 10 | - | — | ||
| <10 | 20 | 20 | - | 27 |
| r1- | — | 30 | - | — |
| 1 0 | <10 | 30 | - | 18 |
| — | 30 | - | — | |
| 10 | <10 | 30 | - | 18 |
| 10 | - | — | ||
| 30 | <10 | 10 | - | 18 |
| * | 20 | - | — |
L? L3 Ls
| 9 | 27 | 27 | <9 |
| 80 | 250 | 250 | 230 |
| q | 9 | 1 50 | - |
| — | 500 | - | |
| 9 | 18 | 1 60 | - |
| 1 60 | - | ||
| 18 | 1 8 | 250 | <9 |
| __ | — | 250 | <9 |
| 50 | 27 | 250 | <9 |
| — | 160 | <9 | |
| 9 | 18 | 250 | < 9 |
| — | 250 | <9 | |
| 27 | 1 s | 230 | <9 |
| — | 80 | <9 | |
| 60 | 9 | 1 60 | <9 |
| — | 27 | <9 | |
| 50 | 18 | 80 | <9 |
| — | 80 | <9 | |
| 50 | 1 8 | 230 | - |
| — | 80 | - | |
| 27 | 9 | 80 | - |
| — | 80 | - | |
| 27 | 18 | 80 | - |
| — | 80 | - | |
| 27 | 18 | 1 60 | - |
| — | 250 | - | |
| 27 | 27 | - - | - |
| — | - | — | |
| 27 | 27 . | - | |
| — | “ | — | |
| 160 | 27 | — | |
| 80 | 27 | - | - |
| — | — | — | |
| 27 | 18 | 80 | - |
| — | 80 | - | |
| 27 | 18 | 80 | - |
| ' — | 50 | - | |
| 27 | 1 3 | 250 | - |
| — | 80 | - | |
| 50 | 27 | 50 | - |
| ·. | — | 250 | - |
| 27 | 27 | 50 | - |
| - | 250 | - | |
| 80 | 80 | 80 | - |
| — | 750 | - |
O) Ol Ol Ol Ol Ol Ol Ol Ol Ol Ol Ol
Příklad 13
Účinných přísad, které byly získány způsobem popsaným v příkladech 1 až 5, 9 a 10 se může použít jako prospěšné přísady do kosmetických přípravků určených pro každodenní péči o vlasy a tělo, přičemž obsah těchto látek v přípravku leží v rozmezí od 0,01 do 10 % hmotnostních, v závislosti na typu přípravku, způsobu jeho aplikace a četnosti jeho použití.
Claims (15)
1. Použití alespoň jedné sloučeniny, která je produktem Amadoriho přesmyku obecného vzorce r1-nh-r2 kde
Rj zahrnuje l-amino-l-deoxy-2-ketosu, odvozenou od cukerného zbytku, přednostně v D-formě, zvolenou ze souboru zahrnujícího glukosu, xylosu, galaktosu, rhamnosu, fruktosu, mannosu, 2-deoxyglukosu, 6-deoxyglukosu, glukosamin, galaktosamin, oligonebo polysacharidy, s přednostně nízkou molekulovou hmotností, zejména molekulovou hmotností nižší než 1000 dalton a
R2 zahrnuje aminokyselinu, přednostně v L-formě, zvolenou ze souboru zahrnujícího serin, glycin, prolin, histidin, arginin, alanin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, fenylalanin, threonin, cystein, cystin, glutamin, valin, asparagin, methionin, tyrosin, hydroxyprolin, lysin, tryptofan, isoleucin a leucin nebo, peptidový zbytek, s přednostně nízkou molekulovou hmotností, zejména molekulovou hmotností nižší než 1000 dalton pro výrobu farmaceutických přípravků určených k léčbě a/nebo prevenci hematologických a/nebo imunologických chorob a/nebo pro stimulaci imunitního systému člověka a/nebo savců a zejména pro indukci tvorby cytokinů.
2. Použití alespoň jedné sloučeniny, která je produktem Amadoriho přesmyku obecného vzorce r1-nh-r2 kde
R^ zahrnuje l-amino-l-deoxy-2-ketosu, odvozenou od cukerného zbytku, přednostně v D-formě, zvolenou ze souboru zahrnujícího glukosu, xylosu, galaktosu, rhamnosu, fruktosu, mannosu, 2-deoxyglukosu, 6-deoxyglukosu, glukosamin, galaktosamin, oligonebo polysacharidy, s přednostně nízkou molekulovou hmotností, zejména molekulovou hmotností nižší než 1000 dalton a
R2 zahrnuje aminokyselinu, přednostně v L-formě, zvolenou ze souboru zahrnujícího serin, glycin, prolin, histidin, arginin, alanin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, fenylalanin, threonin, cystein, cystin, glutamin, valin, asparagin, methionin, tyrosin, hydroxyprolin, lysin, tryptofan, isoleucin a leucin nebo, peptidový zbytek, s přednostně nízkou molekulovou hmotností, zejména molekulovou hmotností nižší než 1000 dalton pro výrobu kosmetických přípravku.
3. Použití podle nároku 1 nebo 2, při němž je přídavně přítomna alespoň jedna z následujících látek: farmaceuticky a/nebo kosmeticky vhodný nosič, adjuvans a popřípadě lubrikační látka, v hmotnostním poměru sloučeniny k těmto látkám v rozmezí od 1:1 do 1:100, přednostně 1:8 do 1:20 a nejvýhodněji asi 1:9.
4. Použití podle nároku 3, při němž je lubrikační látka přítomna ve směsi s laktosou, přičemž hmotnostní poměr laktosy k lubrikační látce leží v rozmezí od 20:1 do 100:1 a přednostně je asi 50:1.
5. Použití podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, při němž je sloučenina v přípravku přítomna v množství 0,01 až 10 % hmotnostních, přednostně 0,01 až 1 % hmotností a nejvýhodněji 0,05 až 0,10 % hmotnostních.
6. Způsob výroby alespoň jednoho reakčního produktu obecného vzorce r1-nh-r2 kde
R1 představuje zbytek l-amino-l-deoxy-2-ketosy odvozený od jednoduchého cukru nebo nízkomolekulárního sacharidu a
R2 představuje aminokyselinový zbytek nebo nízkomolekulární peptidový zbytek, vyznačující se tím, že se směs jednoduchých cukrů a/nebo nízkomolekulárních sacharidů, které se vyskytují ve sloučeninách obsažených v extraktu z přírodní rašeliny, smíchá se směsí aminokyselin a/nebo nízkomolekulárních peptidů, které se vyskytují ve sloučeninách obsažených v tomto extraktu a popřípadě též s anorganickými stopovými prvky, které se vyskytují v tomto extraktu, načež se výsledná substrátová směs nechá reagovat za přítomnosti vody, jako rozpouštědla, při zvýšené teplotě a popřípadě za tlaku a/nebo za přítomnosti nižšího alkoholu, přičemž molární poměr cukrů a/nebo monosacharidú k aminokyselinám a/nebo peptidům leží přednostně v rozmezí od 2:1 do 1:1 a nejvýhodněji v rozmezí 1,5:1.
7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že se substrátová směs nechává reagovat při teplotě v rozmezí od asi 75 do 121 °C tak dlouho, dokud u výsledných produktů neproběhne Amadoriho přesmyk, který se zastaví, když reakční směs nabude světle oranžového zbarvení a potom se reakční směs vysuší.
8. Způsob podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že cukry a/nebo nízkomolekulární sacharidy, na jedné straně, a/nebo aminokyseliny a/nebo nízkomolekulární peptidy, na druhé straně, jsou přítomny, v podstatě ve stejném složení a/nebo v podstatě stejném hmotnostním poměru, v jakém se vyskytují v extraktu rašeliny.
9. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 6 až 8, vyznačující se tím, že alespoň jedna aminokyselina obsahuje dvě karboxyskupiny a reakce se provádí za přítomnosti soli, která funguje jako pufr, přednostně hydrogenuhličitanu sodného v molárním poměru k aminokyselině 1:1.
10. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 6 až 9, vyznačující se tím, že reakce alespoň jednoho cukru a/nebo alespoň jednoho sacharidu s alespoň jednou aminokyselinou a/nebo alespoň jedním peptidem se provádí v koncentrovaném vodném roztoku, přednostně v roztoku o koncentraci pevných látek asi 0,67 až asi 2,75 dílu hmotnostního na 1 díl hmotnostní vodného rozpouštědla a následující Amadoriho přesmyk se provádí se současným nebo následným odstraňováním vodného rozpouštědla tak dlouho, dokud reakční směs nenabude světle oranžového zbarvení.
11. Směs sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem obecného vzorce r1-nh-r2 kde
Rj představuje zbytek l-amino-l-deoxy-2-ketosy odvozený od jednoduchého cukru nebo nízkomolekulárního sacharidu a
R2 představuje aminokyselinový zbytek nebo nízkomolekulární peptidový zbytek, vyznačující se tím, že zahrnuje alespoň dva, přednostně větší počet, různých zbytků 1-aminol-deoxy-2-ketosy a alespoň dva, přednostně větší počet, různých zbytků aminokyseliny a/nebo nízkomolekulárního peptidu.
12. Směs sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem podle nároku 11, vyznačující se tím, že obsahuje různé zbytky l-amino-l-deoxy-2-ketosy a různé zbytky aminokyseliny a/nebo nízkomolekulárního peptidu, které se vyskytují ve sloučeninách obsažených v extraktu přírodní rašeliny a popřípadě také anorganické stopové prvky obsažené v tomto extraktu.
13. Směs sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem podle nároku 11, vyznačující se tím, že obsahuje různé zbytky l-amino-l-deoxy-2-ketosy a různé zbytky aminokyseliny a/nebo nízkomolekulárního peptidu v podstatě o stejném složení a/nebo v podstatě ve stejném hmotnostním poměru, v jakém se vyskytují v extraktu přírodní rašeliny, popřípadě za přítomnosti anorganických stopových prvků vyskytujících se v tomto extraktu.
14. Farmaceutický přípravek pro orální a/nebo topickou a/nebo intravenosní aplikaci, vyznačuj í cí se tím, že jako účinnou přísadu obsahuje směs sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem podle kteréhokoliv z nároků 11 až 13.
15. Kosmetický přípravek, vyznačuj í cí se tím, že jako přísadu obsahuje směs sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem podle kteréhokoliv z nároků 11 až 13.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL29346492A PL171023B1 (pl) | 1992-02-13 | 1992-02-13 | Sposób wytwarzania nowych induktorów cytokin |
| EP92103614 | 1992-03-03 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ194594A3 true CZ194594A3 (en) | 1994-12-15 |
| CZ285200B6 CZ285200B6 (cs) | 1999-06-16 |
Family
ID=26130822
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ941945A CZ285200B6 (cs) | 1992-02-13 | 1993-02-11 | Produkty Amadoriho přesmyku, způsob jejich výroby a jejich použití |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5723504A (cs) |
| JP (1) | JPH07506344A (cs) |
| AT (1) | ATE187734T1 (cs) |
| AU (1) | AU672595B2 (cs) |
| BG (1) | BG62172B1 (cs) |
| BR (1) | BR9305878A (cs) |
| CA (1) | CA2130106A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ285200B6 (cs) |
| DE (2) | DE69327310D1 (cs) |
| ES (1) | ES2072244T1 (cs) |
| FI (1) | FI943733A0 (cs) |
| GR (1) | GR950300017T1 (cs) |
| HU (1) | HUT70434A (cs) |
| MX (1) | MX9300759A (cs) |
| NO (1) | NO304026B1 (cs) |
| RO (1) | RO115633B1 (cs) |
| RU (1) | RU2141337C1 (cs) |
| SG (1) | SG52390A1 (cs) |
| SK (1) | SK86994A3 (cs) |
| TW (1) | TW302368B (cs) |
| WO (1) | WO1993016087A2 (cs) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5629412A (en) * | 1994-07-11 | 1997-05-13 | Glinskii; Guennadi V. | Synthetic glycoamines that promote or inhibit cell adhesion |
| FR2746316B1 (fr) * | 1996-03-19 | 1998-06-12 | Guerlain | Nouvelles compositions cosmetologiques ou dermatologiques |
| EP1014958A1 (en) * | 1996-06-27 | 2000-07-05 | The Picower Institute For Medical Research | 3-alkylamino-2-hydroxy-4-hydroxymethyl-2-cyclopenten-1-one advanced glycosylation endproducts and methods of use therefor |
| DE19705233A1 (de) * | 1997-02-12 | 1998-08-13 | Froelich Juergen C | Verfahren zur Herstellung einer Formulierung enthaltend Arginin |
| GB0319463D0 (en) * | 2003-08-20 | 2003-09-17 | Givaudan Sa | Compounds |
| TW200925268A (en) * | 2007-12-06 | 2009-06-16 | Mallinckrodt Baker Inc | Fluoride-containing photoresist stripper or residue removing cleaning compositions containing conjugate oligomeric or polymeric material of alpha-hydroxycarbonyl compound/amine or ammonia reaction |
| JP2012140360A (ja) * | 2010-12-28 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | 抗酸化剤、化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
| JP2012140378A (ja) * | 2010-12-29 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
| JP5835894B2 (ja) * | 2010-12-29 | 2015-12-24 | クラシエホームプロダクツ株式会社 | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
| JP2012140377A (ja) * | 2010-12-29 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1514910A (en) * | 1974-07-02 | 1978-06-21 | Unilever Ltd | Amadori compounds and their use to flavour foods |
| US4629692A (en) * | 1982-12-06 | 1986-12-16 | Miles Laboratories, Inc. | Immunoassay for nonenzymatically glucosylated proteins and protein fragments an index of glycemia |
| DE3405841A1 (de) * | 1984-02-17 | 1985-08-22 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | N-acylierte 1-alkylamino-1-desoxy-ketose-derivate, verfahren zur herstellung und ihre verwendung |
| DE3601472A1 (de) * | 1986-01-20 | 1987-07-23 | Fresenius Ag | Verwendung von umsetzungsprodukten von reduzierenden zuckern und serotonin oder serotonin-precursoren zur behandlung cerebraler stoerungen |
| GB2218102B (en) * | 1988-04-08 | 1992-09-16 | Sandoz Ltd | Calcitonin peptide derivatives |
| HU217370B (hu) * | 1991-03-16 | 2000-01-28 | Torf Establishment | Tőzegből származó, bioaktív termékek, hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyászati és kozmetikai készítmények, valamint eljárás e gyógyászati készítmények előállítására |
-
1993
- 1993-02-11 JP JP5513786A patent/JPH07506344A/ja not_active Ceased
- 1993-02-11 DE DE69327310T patent/DE69327310D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-02-11 RU RU94040167A patent/RU2141337C1/ru active
- 1993-02-11 SG SG1996003877A patent/SG52390A1/en unknown
- 1993-02-11 BR BR9305878A patent/BR9305878A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-02-11 CA CA002130106A patent/CA2130106A1/en not_active Abandoned
- 1993-02-11 AT AT93903950T patent/ATE187734T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-02-11 AU AU34966/93A patent/AU672595B2/en not_active Ceased
- 1993-02-11 WO PCT/EP1993/000327 patent/WO1993016087A2/en active IP Right Grant
- 1993-02-11 ES ES93903950T patent/ES2072244T1/es active Pending
- 1993-02-11 CZ CZ941945A patent/CZ285200B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-02-11 DE DE0632813T patent/DE632813T1/de active Pending
- 1993-02-11 HU HU9402347A patent/HUT70434A/hu unknown
- 1993-02-11 RO RO94-01361A patent/RO115633B1/ro unknown
- 1993-02-11 US US08/284,635 patent/US5723504A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-02-11 SK SK869-94A patent/SK86994A3/sk unknown
- 1993-02-12 MX MX9300759A patent/MX9300759A/es unknown
- 1993-03-23 TW TW082102133A patent/TW302368B/zh active
-
1994
- 1994-08-05 BG BG98956A patent/BG62172B1/bg unknown
- 1994-08-08 NO NO942930A patent/NO304026B1/no unknown
- 1994-08-12 FI FI943733A patent/FI943733A0/fi unknown
-
1995
- 1995-04-30 GR GR950300017T patent/GR950300017T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE632813T1 (de) | 1996-02-15 |
| SG52390A1 (en) | 1998-09-28 |
| CZ285200B6 (cs) | 1999-06-16 |
| AU672595B2 (en) | 1996-10-10 |
| NO942930L (no) | 1994-08-08 |
| JPH07506344A (ja) | 1995-07-13 |
| HUT70434A (en) | 1995-10-30 |
| US5723504A (en) | 1998-03-03 |
| RO115633B1 (ro) | 2000-04-28 |
| RU94040167A (ru) | 1996-07-10 |
| BR9305878A (pt) | 1997-08-19 |
| FI943733A (fi) | 1994-08-12 |
| FI943733A0 (fi) | 1994-08-12 |
| ATE187734T1 (de) | 2000-01-15 |
| HU9402347D0 (en) | 1994-10-28 |
| ES2072244T1 (es) | 1995-07-16 |
| CA2130106A1 (en) | 1993-08-14 |
| NO942930D0 (no) | 1994-08-08 |
| NO304026B1 (no) | 1998-10-12 |
| BG62172B1 (bg) | 1999-04-30 |
| BG98956A (bg) | 1995-07-28 |
| WO1993016087A3 (en) | 1993-09-16 |
| AU3496693A (en) | 1993-09-03 |
| DE69327310D1 (de) | 2000-01-20 |
| GR950300017T1 (en) | 1995-04-30 |
| SK86994A3 (en) | 1995-02-08 |
| WO1993016087A2 (en) | 1993-08-19 |
| TW302368B (cs) | 1997-04-11 |
| RU2141337C1 (ru) | 1999-11-20 |
| MX9300759A (es) | 1993-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| IKEKAwA et al. | Antitumor activity of Hypsizigus marmoreus. I. Antitumor activity of extracts and polysaccharides | |
| CZ287816B6 (en) | Peptide, process of its preparation, pharmaceutical preparation in which it is comprised and use thereof | |
| JPH09503489A (ja) | リピドａの毒性を中和するためのペプチド | |
| CZ194594A3 (en) | Products of amadori rearrangement, process of their preparation and their use | |
| Morris et al. | The isolation and characterization of γ-l-glutamyl-l-tyrosine and γ-l-glutamyl-l-phenylalanine from soybeans | |
| US5114926A (en) | Tetrapeptide inhibiting the entry into cycle of hemopoietic stem cells processes for its preparation, and its uses | |
| JPH07505371A (ja) | 免疫調節活性を有する新規親油性オリゴペプチド | |
| CA1321993C (en) | Substituted n-glycosylamides, process for their preparation, and their use as medicaments | |
| PL171319B1 (pl) | S posób wytwarzania kompozycji przydatnej do uzytku farmaceutycznegoi/lub kosmetycznego PL PL PL | |
| US4399124A (en) | Peptides having immunostimulating properties and pharmaceutical compositions containing them | |
| EP0632813B1 (en) | Amadori reaction compounds and products, process for their manufacture, and their use | |
| HU208160B (en) | Process for producing t-butyl-oxycarbonyl-1-tyrosylpeptidoglycan monomer and its derivatives marked with 125 i, as well as pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
| Weltzien et al. | Acidic “peptidophospholipids”, a new class of hapten-bearing cell surface modifying reagents | |
| JPH07196527A (ja) | ペプチドまたはその誘導体と、細胞増殖賦活化剤 | |
| JPS595150A (ja) | 抗微生物性ジスルフイドプロドラツグ | |
| CA2274731A1 (en) | Myelopeptides and their therapeutic use | |
| JP4195089B2 (ja) | 亜酸化物単位から製造される巨大環式化合物 | |
| JP2952830B2 (ja) | 血圧降下剤 | |
| PL171023B1 (pl) | Sposób wytwarzania nowych induktorów cytokin | |
| NL9000551A (nl) | Sdk peptiden, werkwijze voor de bereiding daarvan en therapeutische preparaten die deze bevatten. | |
| CA1337731C (en) | Inhibitory tetrapeptide of entry into cycle of hemopoietic stem cells, processes for its preparation and its uses | |
| RU2046799C1 (ru) | Мономер трет-бутилоксикарбонил-l-тирозил пептидогликана и его 125j -меченое производное и способ их получения | |
| US5656601A (en) | Acylated splenopentins, methods for their synthesis and their use | |
| RU2064935C1 (ru) | Гексапептид(бивалфор), обладающий противоопухолевой активностью | |
| JPS63141996A (ja) | 新規活性ペプチド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20010211 |