CZ18299A3

CZ18299A3 - Amidy alfa-aminokyselin, jejich výroba a farmaceutický prostředek

Info

Publication number: CZ18299A3
Application number: CZ99182A
Authority: CZ
Inventors: Paolo Chiesi; Paolo Ventura; Maurizio Delcanale; Fanti Renato De; Elisabetta Armani; Gino Villetti; Claudio Pietra
Original assignee: Chiesi Farmaceutici S. P. A.
Priority date: 1996-07-23
Filing date: 1997-07-15
Publication date: 1999-06-16
Also published as: AU729176B2; JP4542208B2; ATE237584T1; NZ333869A; SI0951465T1; DK0951465T3; CN1211351C; AU3695297A; IT1283489B1; NO990300D0; HU225623B1; PT951465E; DE69721052D1; IL128020A; CA2261259A1; US6114391A; NO326826B3; CN1225625A; ITMI961544A1; EP0951465A1

Description

Amidy alfa-aminokyselin, jejich výroba a farmaceutický prostředek

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká amidů α-aminokyselin, způsobů jejich výroby a farmaceutických prostředků s jejich obsahem.

Dosavadní stav techniky

GB patent 2048852 (Continental Pharma S. A.) popisuje 2aminoacetamidové (běžně označované jako glycinamidové) deriváty, které mohou být použity při léčení epilepsie, při léčbě pohybových poruch jako je Parkinsonova choroba, při léčení poruch paměti a patrně i při léčení deprese.

Některé z popisovaných sloučenin podávané orálně v dávkách 100 až 1000 mg/kg ukázaly protikřečové účinky proti tonickým křečím myší indukovaných bicuculinem.

Konkrétně byl studován 2-n-pentylaminoacetamid (v následujícím textu označovaný názvem milacemid) a jeho hydrochlorid.

Milacemid byl použit jako referenční sloučenina pro testování farmakologické účinnosti sloučenin podle předkládaného vynálezu.

EP-B1-0400495 (Farmitalia Carlo Erba) popisuje aaminkarboxamid N-fenylalkylsubstituované deriváty.

Příklady zvláště výhodných sloučenin jsou aminopropionamid (konkrétně alaninamid a serinamid) a aminoacetamid (glycinamid) Nfenylalkylsubstituované deriváty. Uvedené sloučeniny mají účinky na centrální nervovou soustavu a mohou být použity jako látky s antiepileptickým, antiparkinsonickým, antineurodegenerativním, antidepresívním, hypnotickým a antispastickým účinkem.

Účinnost sloučenin byla testována na myši jako protikřečové působení proti křečím indukovaným bicuculinem nebo kyselinou 3merkaptopropionovou.

Sloučeniny popisované v EP-B1-0400495 jsou také silné inhibitory monoaminooxidázy (MAO).

WO 94/22808 a WO 94/22809 (Pharmacia/Farmitalia Carlo Erba) popisují další aminopropionamidové deriváty s účinky na centrální nervovou soustavu, popřípadě substituované skupinami arylalkoxybenzyl a arylalkylaminobenzyl.

Jedním z nejlepším představitelů sloučenin podle vynálezu ve WO 94/22808 je FCE28245, chemicky methansulfonát 2-{4[3fenylpropyl]oxybenzyl}-amino-3-hydroxypropanamidu, který má být v testu účinný proti křečím způsobeným elektrickými šoky u myší.

PCT No. WO 95/18617 (Teva-Technion) a PCT No. WO 96/21640 (Teva-Lemmon) popisují 1-aminobenzocykloalkanové deriváty, jako jsou 1-aminoindany a 1-aminotetraliny, které mohou být použity při léčení Parkinsonovy choroby, demence, epilepsie a u posttraumatických onemocnění.

Některé z popisovaných sloučenin, jako například N-(2acetamido)-1-aminoindan a jeho opticky aktivní formy; N-(2acetamido)-6-fluor-1-aminoindan; N-(2-acetamido)-1-aminotetralin; N,N-di-(2-acetamido)-1aminoindan a N-(2-propionamido)-1aminoindan však nebyly v testu protikřečových účinků příliš účinné a zdá se, že nemají zvláště výhodný terapeutický index.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález se týká serinamidových, glycinamidových, alaninamidových a fenylalaninamidových derivátů obecného vzorce (I):

R’ CH NH

Ri kde:

R je přímý nebo rozvětvený alkyl; cykloalkylalkyl; arylalkyl nebo fenylalkyl, popřípadě substituovaný v kruhu skupinou alkyl, halogen nebo haloalkyl; fúzovaný nebo nefuzovaný aryl popřípadě substituovaný skupinou alkyl, alkoxy, halogen nebo haloalkyl;

R' je atom vodíku; alkyl; fenyl; fenylalkyl;

Ri je popřípadě acylovaný C1-C4 hydroxyalkyl nebo fenylalkyl, kde R je alkyl, cykloalkylalkyl, arylalkyl;

R₁ je atom vodíku, C1-C4 alkyl, popřípadě acylovaný C1-C4 hydroxyalkyl nebo fenylalkyl, kde R je aryl;

R₂ je atom vodíku; alkyl; fenyl; fenylalkyl.

Alkylová skupina je s výhodou, pokud není specifikováno jinak,

C1-C10 alkylová skupina jako methyl, ethyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl, n-pentyl, n-hexyl, n-heptyl, n-oktyl, n-nonyl, 2-ethylpentyl, 1ethylheptyl, 1-methyloktyl, 4-heptyl.

Cykloalkylalkylová skupina s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylové části a 3 až 7 atomy uhlíku v cykloalkylové části jako je cyklopropylmethyl, cyklopentylmethyl, cyklohexylmethyl, 1-(5-norbornylenyl)ethyl.

Popřípadě substituovaná arylalkylová nebo fenylalkylová skupina je s výhodou 2-naftalenylmethyl, benzyl, fenethyl, fenylpropyl, fenylbutyl, 3-(4-methylfenyl)propyl, 3-(4-fluorfenyl)propyl, 3-(4chlorfenyl)propyl, 3-(4-trifluormethylfenyl)propyl, 3-fenyl-1methylpropyl, 2-fenyl-1-methylethyl, 3-fenyl-3-methyl-propyl, 1fenylethyl.

Fúzovaná nebo nefuzovaná arylová skupina je s výhodou

1,2,3,4-tetrahydro-2-naftalenyl, 2-indanyl popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami alkoxy, halogen nebo haloalkyl.

Acylovaná C1-C4 hydroxyalkylová skupina je s výhodou acetoxyalkyl, propanoyloxyaikyl, 2-methylpropanoyloxyaikyl, benzoyloxyalkyl.

Výhodnou třídou sloučenin jsou látky, kde:

R.| je CH₂OH; R je C3-C10 alkyl, C₂-C₄ fenylalkyl, 1,2,3,4tetrahydro-2-naftalenyl nebo 2-indanyl, popřípadě substituovaná skupinou alkyl, alkoxy, halogen nebo haloalkyl; R' je atom vodíku nebo methyl a R₂ je atom vodíku nebo methyl.

Zvláště výhodnou podtřídou jsou sloučeniny, kde R1 je CH₂OH; Rje fenyl-(C₂-C3)-alkyl nebo 1,2,3,4-tetrahydro-2-naftalenyl, nebo 2indanyl popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami alkoxy, halogen, haloalkyl; R' a R₂ znamenají atom vodíku.

Druhou třídou výhodných sloučenin jsou látky, kde R1 je atom vodíku nebo methyl, R je 1,2,3,4-tetrahydro-2-naftalenyl nebo 2indanyl, popřípadě substituovaný jednou nebo více skupinami alkoxy, halogen, haloalkyl a R' a R₂ jsou atom vodíku.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být ve formě adičních solí s anorganickými nebo organickými kyselinami.

Sloučeniny podle vynálezu mohou mít navíc jeden nebo dva asymetrické atomy uhlíku, a proto mohou být použity jak ve formě směsí obsahujících více diastereoizomerů v jakémkoliv poměru, tak i ve formě racemických směsí obsahujících páry enantiomerů ve stejných nebo odlišných poměrech, a ve formě opticky čistých sloučenin.

·· · ·

Sloučeniny podle vynálezu mohou být použity při léčení chronických neurodegenerativních onemocnění, jako je Alzheimerova choroba, různé formy demence, Parkinsonova choroba, Huntingtonova choroba nebo akutní neurodegenerativní poruchy jako je mrtvice a poranění hlavy; a při léčení epilepsie a deprese.

Bylo totiž zjištěno, že amidy α-aminokyselin obecného vzorce (I) jsou charakterizovány vyšší účinnosti a/nebo lepším farmakologickým profilem než sloučeniny podle dosavadního stavu techniky.

Sloučeniny podle vynálezu je možno připravit reakcí esterů nebo amidů aminokyselin vzorce II

H₂N / COX CH (Π)

Ri kde Ri je jak definováno výše a X je skupina alkoxy nebo a NHR₂, kde R₂ je jak definováno výše, se sloučeninami vzorce III

R₄

Z

Y = c (III) r₃ kde Y je atom kyslíku nebo skupina NH, přičemž R₃ a R₄, které jsou stejné nebo různé, znamenají atom vodíku, nebo spolu s atomem uhlíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří jednu ze skupin R nebo R’, s výjimkou nefuzovaného arylu jak definováno výše, za poskytnutí sloučenin vzorce IV,

R₃ NH \ Z \

CH

X (iv)

R₄

Ri •4 4444

444 44 4 44 * 4444 44 44 444 44 s použitím hydridu jako je borohydrid sodný jako redukčního činidla, při teplotě od 0° do 40 °C.

Sloučeniny vzorce I je také možno alternativně připravit kondenzací alfa-halogenesteru vzorce V

^R1 kde R-i je jak definováno výše a s výhodou H, W je atom halogenu (obecně chlor nebo brom) a R₅ je alkylová skupina, s aminem vzorce VI ^H2ⁿ--CH^ ³ ^X R, (VI) kde R₃ a R4 jsou jak definovány výše, a následnou amidací aminem R2-NH2. Kondenzace sloučeniny V se sloučeninou VI se provádí v organickém rozpouštědle, například acetonitrilu, alkoholu, dimethylformamidu při teplotě od 40° do 140 °C v přítomnosti činidla vázajícího kyselinu, například uhličitanu draselného a s výhodou v přítomnosti katalytických množství jodidu draselného. Amidace se potom provádí výše popsaným postupem.

Je také možné kondenzovat alfa-halogenamid s aminem VI.

Pro uvedená terapeutická použití budou sloučeniny I formulovány ve vhodných farmaceutických prostředcích, které jsou dalším předmětem vynálezu.

Uvedené prostředky budou typicky obsahovat 1 až 1000 mg aktivní složky, zvláště 10 až 100 mg, a budou podávány jednou nebo vícekrát za den v závislosti na onemocnění, farmakokinetických •flflfl · flfl ···· ·· flfl • ·· flfl · flflfl· • · flflfl flflflfl * · · · · ·· ······ • flfl flflflfl fl · rozpouštědle, obecně alkoholu jako je ethanol nebo methanol, s použitím hydridu jako je borohydrid sodný jako redukčního činidla, při teplotě od 0° do 40 °C.

kde Ri je jak definováno výše a s výhodou H, W je atom halogenu (obecně chlor nebo brom) a R₅ je alkylová skupina, s aminem vzorce VI

R₃

H₂N—-CH (VI)

R₄ kde R₃ a R₄ jsou jak definovány výše, a následnou amidací aminem R₂-NH₂. Kondenzace sloučeniny V se sloučeninou VI se provádí v organickém rozpouštědle, například acetonitriiu, alkoholu, dimethylformamidu při teplotě od 40° do 140 °C v přítomnosti činidla vázajícího kyselinu, například uhličitanu draselného a s výhodou v přítomnosti katalytických množství jodidu draselného. Amidace se potom provádí výše popsaným postupem.

Je také možné kondenzovat aifa-halogenamid s aminem VI.

Uvedené prostředky budou typicky obsahovat 1 až 1000 mg aktivní složky, zvláště 10 až 100 mg, a budou podávány jednou nebo vícekrát za den v závislosti na onemocnění, farmakokinetických vlastnostech zvolené aktivní složky a stavu pacienta (hmotnost, pohlaví, věk).

Prostředky se budou vyrábět běžnými způsoby a s použitím běžných pomocných látek jak se například popisuje v Remingtonů Pharmaceutical Sciences Habook, Mack. Pub, N. Y, USA, a pacientům budou podávány orálně, parenterálně nebo rektálně. Příklady formulací jsou tablety, kapsle, sirupy, granuláty, sterilní injekční roztoky nebo suspenze, čípky apod.

Vynález dále ilustrují následující příklady:

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

a) Výroba hydrochloridu methylesteru N-(3-fenylpropvl)-L-serinu

Hydrochlorid methylesteru L-serinu (0,9 mol, 14 g), triethylamin (0,9 mol, 9,1 g) a 3-fenylpropionaldehyd (0,9 mol, 12,1 g) se rozpustí v suchém methanolu (370 ml) v Parrově přístroji a hydrogenují se při tlaku 310 kPa v přítomnosti 10 % Pd/C až do skončení pohlcování vodíku.

Katalyzátor je odfiltrován a filtrát je odpařen dosucha ve vakuu. Získaný olej se převede do methylenchloridu (500 ml), organický roztok se promyje vodou a odpaří dosucha ve vakuu za získání bleděžlutého oleje.

Produkt se získá jako hydrochlorid rozpuštěním v ethyletheru (800 ml) a okyselením methanolovým roztokem chlorovodíku. Sraženina se odfiltruje a suší ve vakuu při 45 °C. Výtěžek: 17,5 g (71 %) - teplota tání = 126 - 129 °C.

•··· · ·· ··♦· · · «· ··· ·· · ···· ♦ · » · · · · · · • · ·· · ·♦ ······ ··· · · · · · ·

b) Výroba hydrochloridu (-)-(S)-3-hvdroxv-2-(3-fenvlpropylamino)propanamidu (CHF 2803.01)

Produkt získaný v a) (0,06 mol, 17 g) se rozpustí ve vodě (500 ml) a zalkalizuje 10 % vodným roztokem uhličitanu draselného na pH = 8. Volná báze se extrahuje methylenchloridem a odpaří dosucha ve vakuu. Získaný bleděžlutý olej (16,3 g) se rozpustí v methanolu (150 ml). Roztokem se probublává amoniak, za chlazení na -5 °C, na ~15M koncentraci. Hermeticky uzavřený systém se ponechá reagovat 5 dní při pokojové teplotě a potom se odpaří dosucha ve vakuu. Produkt se získá ve formě hydrochloridu rozpuštěním v ethanolu (40 ml), okyselením etherovým roztokem HCl a srážením ethyletherem (500 ml).

Bílá pevná látka filtruje a suší ve vakuu při 40 °C.

Výtěžek: 7,6 g (46,5 %) - teplota tání: 153 - 155 °C [a]⁵⁸⁹ (c = 1, methanol) = -13,5

Příklad 2

a) Výroba methylesteru N-(2-tetralyl)-D-serinu

Kyanoborohydrid sodný (0,07 mol, 4,5 g) se přidá k roztoku βtetralonu (0,068 mol, 10,5 g) a hydrochloridu methylesteru D-serinu (0,07 mol, 11 g) ve směsi 10/1 ethanol/methanol (550 ml). Směs reaguje při pokojové teplotě 24 hod, odpaří se dosucha ve vakuu, převede do vody (800 ml) a extrahuje ethylacetátem (2 x 500 ml). Spojené organické fáze se extrahují 1N HCl (2 x 300 ml). Vodné fáze se zalkalizují hydrogenuhličitanem sodným a extrahují ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické fáze se odpaří dosucha ve vakuu, za získání produktu jako žlutého oleje.

Výtěžek: 12 g (72 %)

- 10 b) Výroba (R)-3-hydroxy-2-(1,2,3,4-tetrahydronaftalen-2-(R,S)ylaminojpropanamidu (CHF 2818)

Roztokem methylesteru N-(2-tetralyl)-D-serinu (0,048 mol, 12 g) v methanolu (150 ml) se probublává amoniak při 0 °C, až na koncentraci ~15M. Hermeticky uzavřený systém se ponechá reagovat při pokojové teplotě 120 hod. Roztok se odpaří dosucha ve vakuu a zbylý olej tuhne za tření v petroletheru.

Výtěžek: 9 g (80 %) - teplota tání: 104-115 °C

c) Dělení diastereomerů CHF 2818

Výroba 3-hydroxy-2-(R)-(1,2,3,4-tetrahydronaftalen-2-(S)-ylamino)propanamidu (CHF 2983)

2-(R)-(1,2,3,4-tetrahydro-2-(R,S)-naftalenylamino)-3-hydroxypropanamid (0,038 mol, 8,8 g) se krystalizuje v ethylacetátu (200 ml) a získaná pevná látka se dvakrát rekrystalizuje v ethylacetátu (200 ml) a nakonec v ethanolu (50 ml).Krystalická bílá látka se suší ve vakuu při 45 °C.

Výtěžek: 1,9 g (výtěžek 43 %) - teplota tání = 142 - 145 °C [a]⁵⁸⁹ (c = 1, methanoi) = +92

d) Výroba hydrochloridu 3-hydroxy-2-(R)-(1,2,3,4-tetrahydronaftalen-2(Rj-ylaminojpropanamidu (CHF 2982.01)

Matečné louhy z prvních tří krystalizaci CHF 2983 se spojí a ponechají při 0 °C 48 hod: sraženina se odfiltruje a filtrát odpaří dosucha ve vakuu. Získaný vosk ztuhne rozetřením v ethyletheru (50 ml) při pokojové teplotě.

Pevná látka se získá ve formě hydrochloridu rozpuštěním v methanolovém roztoku HCl (3M, 20 ml) a odpařením dosucha ve ·· ·· • · · · « · · · • ··· ··· « fl vakuu, a následnou krystalizací ze směsi 1/1 ethanol/ethylacetát (400 ml). Krystalická bílá látka se suší ve vakuu při 45 °C.

Výtěžek: 1,8 g (36 %) - teplota tání = 226 - 232 °C [a]⁵⁸⁹ (c = 1, methanol) = -105,1

Příklad 3

a) Výroba 3-(4-methylfenvl)propanoylchloridu

Kyselina 3-(4-methylfenyl)propanová (0,055 mol, 9 g) se rozpustí v thionylchloridu (1,008 mol, 120 g). Směs se míchá 30 min při pokojové teplotě, potom vaří 1,5 hod pod zpětným chladičem, odpaří ve vakuu na olej a převede do toluenu a hexanu, vždy s odpařením dosucha.

Výtěžek: 12,4 g

b) Výroba 3-(4-methylfenyl)propanalu

Roztok trifenylfosfinu (0,117 mol, 30,8 g) v acetonu (200 ml) se smíchá v proudu dusíku při pokojové teplotě s Cu(l)bis-(trifenylfosfin)tetrahydroborátem (0,067 mol, 40,69 g), potom se přikapává v průběhu 45 min roztok 3-(4-methylfenyl)propanoylchloridu (0,055 mol, 10 g) v acetonu (85 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě v atmosféře dusíku 1 hod. Vysrážená pevná látka se odfiltruje, promyje acetonem a filtrát se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v chloroformu (340 ml), přidá se chlorid měďný (0,235 mol, 13,38 g) a směs se míchá v proudu dusíku 1 hod při pokojové teplotě. Směs se přefiltruje přes celit, filtrát se odpaří dosucha a získaný zbytek převede do ethyletheru a petroletheru, zfiltruje a odpaří ve vakuu za získání oleje.

Výtěžek: 6,7 g (83 %) ftftft· ft · • ft ftftft· • · · • · ftft « ftft · ft ftft · ftftft ftftft • ·

c) Výroba hydrochloridu methylesteru kyseliny 3-hydroxy-2-(3-(4methylfenvD-propylaminojpropanové

2% roztok sodíku v methanolu (0,045 mol, 51,7 ml) se přidá k hydrochloridu methylesteru D,L-serinu (0,045 mol, 7 g), rozpustí v methanolu (70 ml), za získání volné báze.

Vytvořený chlorid sodný se vysráží ethyletherem (150 ml) a odfiltruje. Filtrát se odpaří dosucha ve vakuu. Získaný zbytek se rozpustí v methanolu (450 ml), přidá se 3(4-methylfenylpropanal) (0,045 mol, 6,7 g) a nastaví se pH 6 kyselinou octovou, přidá se kyanoborohydrid sodný (0,048 mol, 3 g) a směs se ponechá reagovat při pokojové teplotě 24 hod. Směs se okyselí methanolovým roztokem HCI, odpaří dosucha ve vakuu, převede do methylenchloridu (600 ml), potom zalkalizuje triethylaminem a promyje vodou (3 x 500 ml). Organická fáze se odpaří dosucha ve vakuu a produkt se získá jako hydrochlorid převedením do ethyletheru (400 ml) a okyselením etherovým roztokem HCI. Sražená bílá látka se suší ve vakuu při 30 °C.

Výtěžek: 8,8 g (68 %)

d) Výroba hydrochloridu 3-hvdroxv-2-(3-(4-methvlfenvl)propylamino)propanamidu (CHF 2934.01)

Hydrochlorid methylesteru kyseliny 3-hydroxy-2-(3-(4methylfenyi)propylamino)propanové (0,03 mol, 8,6 g) se rozpustí ve vodě (500 ml), zalkalizuje 10 % vodným uhličitanem draselným na pH = 8. Volná báze se extrahuje methylenchloridem a odpaří dosucha ve vakuu. Získaný bleděžlutý olej (16,3 g) se rozpustí v methanolu (150 ml). Roztokem se probublává amoniak, za chlazení na -5 °C na ~15M koncentraci. Hermeticky uzavřený systém se ponechá reagovat 5 dní při pokojové teplotě a potom se odpaří dosucha ve vakuu. Produkt se získá ve formě hydrochloridu rozpuštěním v ethanolu (40 ml), okyselením etherovým roztokem HCI a vysrážením

4444

- 13 • 4 44

4 4

4 4 •44 444 • 4 ethyletherem (500 ml). Bílá pevná látka se zfiltruje a suší ve vakuu při 40 °C.

Výtěžek: 4,9 g (60 %) - teplota tání = 173 - 176 °C

Příklad 4

a) Výroba 4-fenylbutanoylchloridu

Kyselina 4-fenylbutanová (0,83 mol, 13,57 g) se přidá k thionylchloridu (0,114 mol, 8,27 ml) a ohřeje pro rozpuštění pevné látky. Směs se míchá 30 min při pokojové teplotě, potom vaří pod zpětným chladičem 10 min a nakonec získá jako v příkladu 3a).

Získán 100 % výtěžek (0,083 mol, 15,09 g).

b) Výroba 4-fenylbutanalu

Použije se postup jako v 3b) vycházeje z 4-fenylbutanoylchloridu (0,083 mol, 15,09 g) za získání 11 g produktu.

c) Výroba hydrochloridu methylesteru kyseliny (R)-3-hydroxy-2-(4fenylbutylaminojpropanové % sodík v methanolu (0,052 mol, 59,8 ml) se přidá k hydrochloridu methylesteru D-serinu (0,052 mol, 8,16 g), rozpuštěnému v methanolu (81,6 ml) pro uvolnění báze. Vytvořený chlorid sodný se vysráží ethyletherem (163 ml) a odfiltruje. Filtrát je odpařen dosucha ve vakuu. Získaný zbytek se rozpustí v methanolu, (150 ml), přidá se 4-fenylbutanal (0,051 mol, 10,69 g) a nastaví se na pH 6 kyselinou octovou, přidá se kyanoborohydrid sodný (0,055 mol, 3,62 g ) a reakce se ponechá probíhat při pokojové teplotě 24 hod. Směs se okyselí methanolovým roztokem HCI, odpaří dosucha ve vakuu, převede do methylenchloridu (600 ml) a do 1M roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Fáze se oddělí a vodná fáze se znovu

- 14 extrahuje methylenchloridem (3 x 200 ml) a potom se spojené organické fáze promyjí vodou a odpaří dosucha ve vakuu. Produkt se získá jako hydrochlorid, převede do ethyletheru (180 ml) a okyselí etherovým HCI. Bílá sraženina se suší ve vakuu při 30 °C.

Výtěžek: 5,83 g (40 %)

d) Výroba (R)-3-hvdroxv-2-(4-fenylbutvlamino)propanamidu (CHF

2918)

Hydrochlorid methylesteru kyseliny (R)-3-(hydroxy-2-(4fenylbutylamino)propanové (0,02 mol, 5,83 g) se rozpustí ve vodě (250 ml) a zalkalizuje 10 % vodným uhličitanem sodným. Volná báze se extrahuje methylenchloridem (3 x 200 ml) a odpaří dosucha ve vakuu. Získaný bleděžlutý olej se rozpustí v methanolu (150 ml). Roztokem se probublává amoniak za chlazení na -5 °C, na koncentraci ~15M. Hermeticky uzavřený systém se ponechá reagovat 5 dní při pokojové teplotě, potom se. odpaří dosucha ve vakuu za získání hustého oleje. Produkt se získá jako pevná látka převedením do ethyletheru (25 ml) a srážením hexanem (400 ml). Bílá pevná látka se zfiltruje a suší ve vakuu při 35 °C.

Výtěžek: 4,43 g (92 %) - teplota tání = 59 - 61 °C

Podobnými způsoby jak se popisují v příkladech 1 až 4 byly připraveny sloučeniny 1 až 5, 27, 28, 30, 33, 34, 38, 39, 42 až 44, 46 až 48, 52 a 53 z tabulky 1.

Příklad 5

Výroba (R)-3-hvdroxv-2-(3-fenylpropylamino)propanamidu (CHF 2679)

D-serinamid (0,038 mol, 4 g) a 3-fenylpropanal (0,038 mol,

5,1 g) se rozpustí v methanolu (400 ml) v Parrově přístroji a hydrogenují v přítomnosti 10 % Pd/C (3 g) při tlaku 275,6 kPa, až do ··♦· ukončení pohlcování vodíku. Katalyzátor se odfiltruje a roztok se odpaří dosucha ve vakuu a převede do ethylacetátu (300 ml) a promyje vodou (2 x 200 ml). Organická fáze se suší a rozpustí v horkém ethyletheru (300 ml) pro sražení produktu jako bílé pevné látky za pomalého odpařování rozpouštědla při pokojové teplotě.

Výtěžek: 3,8 g (45 %) - teplota tání = 76 - 78 °C [α]^58θ (c = 1, methanol) =+13,2°

Podobnými způsoby jak byly popsány v příkladu 5 byly připraveny sloučeniny 6 až 13, 15 až 22, 24, 26, 49 až 51 z tabulky 1.

Příklad 6

Výroba (R)-2-(4-heptvlamino)-3-hvdroxypropanamidfosfátu (CHF

2870.02)

Roztok D-serinamidu (0,01 mol, 1 g) a 4-heptanonu (0,01 mol,

1,1 g) v methanolu (50 ml) se smísí s 4M methanolovým roztokem HCl (0,0033 mol, 0,85 ml) a kyanoborohydridem sodným (0,005 mol, 0,33 g). Směs se ponechá reagovat při pokojové teplotě 10 dnů, okyselí se methanolovým roztokem HCl na pH = 2, a odpaří dosucha ve vakuu. Zbytek se převede do vody (100 ml), promyje ethyletherem (100 ml), zalkalízuje uhličitanem sodným a extrahuje chloroformem (3 x 100 ml). Získaný olej (1,3 g) se rozpustí v methanolu (50 ml) a přidá se 85 % kyselina fosforečná (0,0065 mol, 0,75 g), a směs se odpaří dosucha ve vakuu za získání produktu jako velmi lehké pevné pěny.

Výtěžek: 2 g (77 %) - teplota tání = 150 - 156 °C [cc]⁵⁸⁹ (c=1, voda) = +1,9 *···

- 16 Příklad 7

a) Výroba methylesteru kyseliny 3-hydroxv-2-(N-methyl-(3-fenvlpropyl)amino)propanové

Roztok methylesteru N-(3-fenylpropyl)serinu (6,4 g, 0,027 mol) v methanolu (150 ml) se smísí s 10% Pd na uhlí (0,7 g) a 40% formaldehydem (3,0 ml 0,04 mol) rozpuštěným v methanolu (50 ml). Směs se míchá při pokojové teplotě v atmosféře vodíku, za mírného tlaku (275,6 kPa) až do ukončení pohlcování. Směs se zfiltruje a filtrát odpaří ve vakuu. Zbytek se převede do ethyletheru (300 ml), promyje vodou (2 x 200 ml), suší nad síranem sodným a odpaří ve vakuu. Výtěžek: 6,6 g

b) Výroba hydrochloridu 3-hvdroxv-2-(N-methvl-3-fenylpropyl)aminopropanamidu (2968.01)

Postup z příkladu 3b se opakuje.

Roztokem methylesteru kyseliny 3-hydroxy-2-(N-methyl-(3fenylpropylamino)propanové (0,026 mol, 6,6 g) v methanolu (150 ml) se probublává, při 0 °C, amoniak na koncentraci ~15 M. Systém se ponechá reagovat při teplotě ~80 °C 120 hod v uzavřeném reaktoru. Roztok se odpaří dosucha ve vakuu za získání oleje, ze kterého se oddělí produkt nízkotlakou kapalinovou chromatografii. Získaný olej se převede do absolutního ethanolu a ethylacetátu, potom okyselí etherovým roztokem HCl. Směs se míchá, přidá se ethylether, potom se sraženina filtruje a suší ve vakuu při 40 °C.

Výtěžek: 3,5 g. - teplota tání 112 - 114 °C

Podobným způsobem jak se popisuje v příkladu 7 byly vyrobeny následující sloučeniny:

hydrochlorid (R)-3-hydroxy-2-(N-methyl-2-indanylamino)propanamidu (CHF 3440.01; sloučenina 63)

- 17 ·· *··« • ♦ · ♦ « · • · · • · · · hydrochlorid (S)-3-hydroxy-2-(N-methyl-2-indanylamino)propanamidu (CHF 3462.01; sloučenina 67).

Příklad 8

a) Výroba methyl 2-(indanylamino)acetátu

Glycinmethylester (0,053 mol, 6,64 g) se rozpustí v absolutním ethanolu (420 ml) a methanolu (42 ml), přidá se 2-indanon (0,053 mol, 7 g), a kyanoborohydrid sodný (0,058 mol, 3,7 g) za míchání v průběhu 40 min. Směs se ponechá za míchání při pokojové teplotě přes noc, odpaří dosucha ve vakuu a zbytek se převede do vody (500 ml) a ethylacetátu (500 ml). Fáze se oddělí a organická fáze se extrahuje 0,1 N roztokem HCl (3 x 200 ml). pH kyselého roztoku se upraví na 8,5 - 9 nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se ethylacetátem (3 x 250 ml). Organický roztok se oddělí, suší nad síranem sodným a odpaří ve vakuu. Získaný produkt se suší ve vakuu při pokojové teplotě.

Výtěžek: 5,8 g (53,4 %)

b) Výroba hydrochloridu 2-(2-indanylamino)acetamidu (CHF 3381.01)

Methyl 2-(indanylamino)acetát (0,028 mol, 5,8 g) se rozpustí v ~15 M roztoku amoniaku v methanolu (150 ml) a udržuje v uzavřené zkumavce při pokojové teplotě několik dnů. Roztok se odpaří dosucha ve vakuu, převede do absolutního ethanolu (2 x 200 ml) a pokaždé odpaří. Olej se převede do methanolu (30 ml) a okyselí na kyselé pH roztokem HCl v suchém methanolu za míchání. Produkt se sráží přídavkem ethyletheru, filtruje a suší ve vakuu při 45 °C.

Výtěžek: 6,05 g (94,6 %) - teplota tání = 212 - 213 °C ♦· ·4 • 4 4 4 » · 4 ·

444 444 • 4

4 · ·

Příklad 9

Výroba 2-(N-methyl-2-indanylamino)acetamidu (CHF 3488) ····

- 18 2-(2-indanylamino)acetamid (0,016 mol, 3,00 g) se rozpustí v methanolu (60 ml), a za míchání se přidá uhličitan draselný (0,016 mol, 2,18 g). Do směsi se přikapává methyljodid (0,028 mol, 4,14 g) při pokojové teplotě v průběhu 15 min. Směs se ponechá reagovat 4 hod při pokojové teplotě, odpaří se ve vakuu. Získaná pevná látka se převede do vody (100 ml), vodný roztok se extrahuje ethylacetátem (3 x 150 ml). Organický roztok se suší nad síranem sodným, potom odpaří ve vakuu za získání oleje, který se chromatografuje za středního tlaku na silikagelu (eluent chloroform:methanol (90:10).

Výtěžek: 1,31 g (40 %) - teplota tání = 122-123 °C

Příklad 10

a) Výroba methyl (S)-3-hydroxv-2-(2-indanvlamino)propanoátu

L-serin methylesterhydrochlorid (0,05 mol, 7,78 g) se rozpustí v absolutním ethanolu (400 ml) a methanolu (40 ml), přidá se 2indanon (0,05 mol, 6,74 g) a kyanoborohydrid sodný (0,55 mol, 3,64 g) za míchání v průběhu 30 min. Směs se míchá při pokojové teplotě 5 hod, potom se odpaří dosucha ve vakuu a zbytek se převede do vody (150 ml) a ethylacetátu (150 ml). Fáze se oddělí a vodná fáze se dále extrahuje ethylacetátem (200 ml). Spojené organické fáze se extrahují 0,2 N roztokem HCI (2 x 200 ml). Vodný roztok se oddělí, pH se nastaví na 8 uhličitanem sodným a směs extrahuje ethylacetátem (2 x 300 ml). Organický roztok se oddělí, suší nad síranem sodným a odpaří ve vakuu. Získaný roztok se suší ve vakuu při pokojové teplotě.

Výtěžek: 8,4 g (71,4 %)

- 19 ♦ ··· • · ·* ·

b) Výroba hydrochloridu (S)-3-hydroxv-2-(2-indanylamino)-propanamidu (CHF 2993.01)

Methyl (S)-3-hydroxy-2-(2-indanylamino)propanoát (0,0357 mol,

8,4 g) se rozpustí v ~12 M amoniaku v methanolu (150 ml) a udržuje v uzavřené zkumavce při pokojové teplotě několik dnů. Roztok se odpaří dosucha ve vakuu za získání oleje, který se převede do methanolu (2 x 250 ml), a vždy odpaří dosucha. Získaný produkt (báze) se převede do ethylacetátu (170 ml) a okyselí na kyselé pH roztokem HCl v 4,75 N suchého ethylacetátu za míchání. Produkt se zfiltruje, krystalizuje z absolutního ethanolu a suší ve vakuu při 40 °C.

Výtěžek: 6,7 g (72,8 %) - teplota tání = 186 - 187 °C [oc]⁵⁸⁹ (c = 1, methanol) = +16,6 (hydrochlorid) [a]⁵⁸⁹ (c = 1, methanol) = -24,6 (báze)

Způsoby známými v oboru byla získána mesylátová sůl (CHF 2993.02).

teplota tání 180 - 183 °C [a]⁵⁸⁹ (c - 1, methanol) - + 13,4

Podobným způsobem popsaným v příkladu 10 byly připraveny sloučeniny 41, 57, 61, 62, 69, 72, 75 a 76 z tabulky 1.

Příklad 11

Výroba hydrochloridu (S)-2-(2-indanylamino)-3-(2-methylpropanoyloxyjpropanamidu (CHF 3542.01)

Hydrochlorid (S)-3-hydroxy-2-(2-indanylamino)-propanamidu (CHF 2993.01, 0,006 mol, 1,6 g) se rozpustí v kyselině trifluoroctové (3,75 ml) a přidá se po kapkách 2-methylpropanoylchlorid (0,022 mol, 2,3 ml). Po 2 hod při pokojové teplotě se roztok odpaří ve vakuu a získaný olej se převede do ethyletheru (100 ml). Produkt se zfiltruje,

- 20 rozetře v ethyletheru (50 ml) a oddělí filtrací. Pevná látka se suší ve vakuu při pokojové teplotě.

Výtěžek: 1,8 g (90 %) - teplota tání = 171 - 174 °C

Podobným způsobem popsaným v příkladu 11 byly vyrobeny následující sloučeniny:

hydrochlorid (S)-3-acetyloxy-2-(3-fenylpropylamino)propanamidu (CHF 3023.01; sloučenina 45);

hydrochlorid (S)-3-acetyloxy-2-(2-indanylamino)propanamidu (CHF 3519.01; sloučenina 74);

[a]⁵⁸⁹ (c = 1, methanol) = +29,8 hydrochlorid (S)-3-benzoyloxy-2-(2-indanylamino)propanamidu (CHF 3548.01; sloučenina 78)

Příklad 12

Výroba hydrochloridu (S)-3-hydroxv-2-(2-indanvlamino)-N-methylpropanamidu (CHF 3422.01)

Methylester N-(2-indanyl)-(S)-serinu (0,025 mol, 5,95 g) se rozpustí v 8,03 M roztoku methylaminu v ethanolu (155 ml) v uzavřené zkumavce. Po 1 dnu se roztok odpaří ve vakuu a zbylý olej se převede do methanolu (3 x 100 ml), petroletheru (frakc. 40 -70, 100 ml) a vždy se odpaří. Získaný olej převedený do petroletheru (250 ml), ztuhne za míchání. Zfiltrovaná pevná látka (-5,42 g) se rozpustí ve vlažném ethylacetátu (250 ml) a přidá se roztok HCI v suchém ethylacetátu (3,5 M) za míchání až do znatelně kyselého pH. Produkt se zfiltruje, opakovaně promyje ethyletherem (150 ml) a suší v sušárně ve vakuu.

Výtěžek: 5, 33 g (77,9 %) - teplota tání = 190,5 - 192 °C [a]⁵⁸⁹ (c = 1, DMSO) = +18 [a]⁵⁸⁹ (c = 1, methanol) = -2

- 21 Podobným způsobem jak se popisuje v příkladu 12 byly vyrobeny sloučeniny 55, 56, 58, 60, 64 až 66.

Příklad 13

a) Výroba 5,6-dimethoxv-2-hydroxyiminoindanonu

5,6-dimethoxy-1-indanon (0,078 mol, 15 g) se rozpustí v absolutním ethanolu (550 ml), teplota se udržuje na 50 °C, a přidá se izoamylnitrit (0,086 mol, 11,9 ml) a konc. HCl (11,9 ml). Po několika minutách se vysráží produkt. Reakce se udržuje při 50 °C další 3 hod, potom se ochladí na pokojovou teplotu a pevná látka se filtruje za promývání absolutním ethanolem (50 ml) a ethyletherem (100 ml). Produkt se suší v sušárně ve vakuu při pokojové teplotě.

Výtěžek: 16,3 g (94,4 %)

b) Výroba 5,6-dimethoxv-2-indanylaminu

K roztoku 5,6-dimethoxy-2-hydroxyimino-1-indanonu (0,27 mol, 6 g) v ledové kyselině octové (500 ml) se přidá 96 % kyselina sírová (3,3 ml) a 10 % Pd/C (1,5 g). Směs se hydrogenuje v Parrově přístroji (pokojová teplota, 241,2 kPa). Když ustane absorpce vodíku, katalyzátor se zfiltruje přes celit, promyje methanolem (70 ml). Roztok se odpaří dosucha, za získání pevné látky, která se rozpustí ve vodě a potom extrahuje ethylacetátem (2 x 70 ml). Vodný roztok se zalkalizuje 1 M roztokem hydroxidu sodného na pH = 8 - 8,5. Produkt se extrahuje methylenchloridem (2 x 70 ml). Organický roztok se suší nad síranem sodným a odpaří ve vakuu za získání pevného produktu. Výtěžek: 4,6 g (88,5 %) ····

- 22 ··

··* »·* ··

c) Výroba 2-(5,6-dimethoxv-2-indanylamino)-acetamidu (CHF 3511)

5,6-dimethoxy-2-indanylamin (0,024 mol, 4,6 g) a hydrogenuhličitan sodný (0,026 mol, 2,2 g) se přidají k roztoku chloracetamidu (0,024 mol, 2,2 g) v absolutním ethanolu (100 ml) a vaří pod zpětným chladičem 10 hod. Směs se zfiltruje při pokojové teplotě a roztok odpaří dosucha. Získaný olej se chromatografuje za středního tlaku přes siiikagel (eluent: methylenchlorid/methanol 90/10).

Výtěžek: 1,95 g (32,7 %) - teplota tání = 135 - 138 °C

Podobným způsobem jak se popisuje v příkladu 13 byly vyrobeny následující sloučeniny:

hydrochlorid 2-(5-fluor-2-indanylamino)acetamidu (CHF 3480.01);

hydrochlorid 2-(5,6-difluor-2-indanylamino)acetamidu (CHF 3518.01).

V následující tabulce 1 se uvádějí zkratky a strukturní vzorce sloučenin z příkladů i dalších sloučenin získaných stejnými způsoby popsanými výše.

Tabulka 1

Deriváty amidů α-aminokyselin - struktura

O

NH

CH

R'je H, pokud není uvedeno jinak.

-23 ···· • · · » · · ··· ·<

Sloučenina	R	Ri	r₂	Ster.	No.
CHF 2043	(CH₂)₆CH₃	ch₂oh	H	RS	1
CHF 2088	(CH₂)₄CH₃	ch₂oh	H	R	2
CHF 2102	(CH₂)₆CH₃	ch₂oh	H	R	3
CHF 2452.01	(CH₂)₄CH₃	ch₂oh	H	S	4
CHF 2525.01	(CH₂)₆CH₃	ch₂oh	H	S	5
CHF 2545	CH(CH₃)₂	ch₂oh	H	R	6
CHF 2560	CH(CH₃)₂	ch₂oh	H	S	7
CHF 2571	(CH₂)₆CH₃	ch₂c₆h₅	H	RS	8
CHF 2583	CH₂-cyklohexyl	ch₂oh	H	R	9
CHF 2597	(CH₂)₂CH₃	ch₂oh	H	S	10
CHF 2617	(CH₂)₆CH₃	ch₂oh	(CH₂)₆- -ch₃	R	11
CHF 2621.01	CH(CH₃)- -(CH₂)₅CH₃	ch₂oh	H	R	12
CHF 2678	(CH₂)₂C₆H₅	ch₂oh	H	R	13
CHF 2679	(CH₂)₃C₆H₅	ch₂oh	H	R	14
CHF 2721	(CH₂)₅CH₃	ch₂oh	H	RS	15
CHF 2722	(CH₂)₇CH₃	ch₂oh	H	RS	16
CHF 2723	(CH₂)sCH₃	ch₂oh	H	RS	17
CHF 2739.01	ch₂-ch-ch-c₂h₅ ch₂oh ch₃ch₃	H	RS	18
CHF 2750	CH(CH₂)₅CH₃ c₂h₅	ch₂oh	H	RS RS	19

	- 24 -	• • · • · ·	• · · • · · © ·· ·	• · · • • ©
Sloučenina	R	Ri	r₂	Ster.	No.
CHF 2751	CH(CH₂)₇CH3 ch₃	ch₂oh	H	RS RS	20
CHF 2768	1-(norbornyl- enyl)ethyl	ch₂oh	H	RS endo	21
CHF 2769	1-(norbornyl- enyl)etyl	ch₂oh	H	RS exo	22
CHF 2803.01	(CH₂)₃C₆H₅	ch₂oh	H	S	23
CHF 2812	(CH₂)₃C₆H₅	ch₂oh	ch₃	R	24
CHF 2818	1,2,3,4-tetra- hydro-2- naftalenyl	ch₂oh	H	R RS	25
CHF 2824	CH-(CH₂)₂C₆H₅ ch₃	ch₂oh	H	R RS	26
CHF 2847.01	ch-ch₂c₆h₅ ch₃	ch₂oh	H	R S	27
CHF 2865.01	(CH₂)₂-CHC₆H₅ ch₃	ch₂oh	H	R RS	28
CHF 2870.02	CH(CH₂CH₂CH₃)₂ ch₂oh	H	R	29
CHF 2880.01	ch-c₆h₅ ch₃	ch₂oh	H	R RS	30
CHF 2918	(ch₂)₄-c₆h₅	ch₂oh	H	R	31
CHF 2934.01	3-(4-methyl)- fenyl)propyl	ch₂oh	H	RS	32
CHF 2948.01	3-(fluorfenyl)- propyl	ch₂oh	H	RS	33

• · · · • · ···· ··

	- 25 -	• · • · · tt ·«	• · · · · · • · · · • · · · · ·
Sloučenina	R	Ri	r₂	Ster.	No.
CHF 2967.01	3-(4-chlor- fenyl)propyl	CH₂OH	H	RS	34
CHF 2968.01	(CH₂)₃-C₆H₅ R’ = CH₃	ch₂oh	H	RS	35
CHF 2982.01	1,2,3,4- tetrahydro-2 naftalenyl	ch₂oh	H	R R	36
CHF 2983.01	II	ch₂oh	H	RS	37
CHF 2990.01	II	ch₂oh	H	S S	38
CHF 2991	II	ch₂oh	H	S R	39
CHF 2993.01	2-indanyl	ch₂oh	H	S	40
CHF 2996	II	ch₂oh	H	R	41
CHF 3009.01	1,2,3,4- tetrahydro-2- naftalenyl	ch₃	H	S RS	42
CHF 3010.01	II	ch₃	H	R RS	43
CHF 3011.01	2-naftalenyl- methyl	ch₂oh	H	RS	44
CHF 3023.01	(CH₂)₃-C₆H₅	CH₂OAc	H	S	45
CHF 3066	6-meo-1,2,3,4- tetrahydro-2- naftalenyl	ch₂oh	H	R RS	46
CHF 3091.01	2-indanyl	ch₃	H	RS	47
CHF 3107.01	3-(4-CF₃- fenyl)propyl	ch₂oh	H	R	48

φφ φφφφ φ φ φφφφ

-26kde Υ je atom kyslíku nebo skupina NH, zatímco skupiny R₃ a

R₄ spolu s atomem uhlíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí skupinu R, jak definováno v nároku 1, za poskytnutí sloučenin vzorce IV •Φ φφφφ φφφφφ φ φφφφ φφ φφ φφφ

které potom mohou být převedeny na sloučeniny vzorce I pomocí jedné nebo více z následujících reakcí:

-jestliže Xje skupina alkoxy, reakcí s amoniakem;

- N-alkylací;

- převedením na sůl a/nebo rozdělením na optické izomery;

- odstraněním jakékoliv přítomné ochranné skupiny.

3. Způsob ' výroby sloučeniny podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje kondenzaci ahalogenesteru vzorce V

(V) «4·· kde Ri je jak definováno v nároku 1 a s výhódou atom vodíku,

W je atom halogenu, obecně chloru nebo bromu, a R5 je alkylová skupina, s aminem vzorce VI

-27 4* ···· • 4 4 44« ··*

CH

R.

(VI) kde R3 a R4 jsou jak definovány v nároku 2, a následnou amidaci amoniakem, za poskytnutí sloučenin vzorce I.

4. Farmaceutické prostředky, vyznačující se tím, ž e jako účinnou složku obsahují sloučeninu podle nároku 1 ve směsi s vhodnými pomocnými látkami nebo nosiči.

5. Použití sloučenin podle nároku 1 pro výrobu farmaceutických prostředků pro léčení neurodegenerativních onemocnění.

Zastupuje:

JUDr. ZDEŇKA 1COREJZOVÁ ADVOKÁTKA ·· · · • ·

elektrošoku (MES). Tento model se široce používá pro stanovení účinku antiepileptických prostředků proti generalizovaným a částečným záchvatům. Tato studie byla prováděna u krys i u myší použitím experimentálního postupu popsaného v W. Lósher a další, Epilepsy Res., 2 (1988), 145 - 181. Ve stručnosti, střídavý proud 60 Hz (myši 50 mA, krysy 150 mA) byl dodáván 0,2 s korneálními elektrodami pomocí elektrického stimulátoru. Protikřečová schopnost sloučeniny byla testována po 60 min a až do 180 min od podání (p.o.) vypočtením hodnoty ED₅o pro potlačení tonického natažení zadní končetiny. Byly testovány skupiny 10 zvířat na každou dávku a hodnota ED₅₀ byla vypočtena z křivky závislosti účinku na dávce podle Litchfield a Wilcoxon (J. Pharmacol. Exp. Ther., 96 (1949), 99 113).

Na MES modelu u krysy byl vyhodnocován pouze časový průběh protikřečového účinku. Byly testovány skupiny po 10 krysách, kterým byla podána ekviaktivní dávka 30, 60, 120, 240, 360 a 480 min před elektrošoky. Potom byl vyhodnocen vrchol protikřečového účinku a délka trvání působení.

V další řadě experimentů provedených u myši byla testována neurotoxicíta sloučenin hodnocená jako měřítko nesprávné motorické funkce použitím testu na horizontálním sítu (L. L. Coughenour a další, Pharmacol. Bioch. a Behav., 6 (1977), 351 - 353). V tomto testu jsou myši umístěny jednotlivě na sítu z krouceného drátu, které je umístěno vodorovně na kovové tyči, která se potom otočí o 180° tak, že jsou myši na spodní části síta. Nesprávná motorická funkce se pozoruje u těch zvířat, která ze síta spadnou nebo nešplhají na horní část sít. Střední neurologická toxická dávka (TD₅o) se potom vypočte způsobem uvedeným výše. Poměr TD₅o a ED50 označuje terapeutický index (T.l.) pro každou sloučeninu. T.l. se používá pro užitečné oddělení mezi neurotoxicitou a antiepileptickou aktivitou. Větší hodnoty T.l. budou ukazovat na lepší oddělení výše uvedených účinků a dobrý profil protikřečových účinků.

V myším modelu MES všechny testované sloučeniny ukázaly schopnost protikřečového účinku vyjádřenou v mol lepší než u milacemidu a/nebo valproátu sodného. Hodnoty ED₅₀ se pohybovaly mezi 1,2 a 0,5 mmol/kg s poměrem účinku od 4,5 do 35 vzhledem k milacemidu a od 1 do 6,7 vzhledem k valproátu sodnému.

Vyhodnocení časového průběhu protikřečového účinku ukázalo, že některé sloučeniny se rychle absorbovaly s maximem účinku 30 min po podání, zatímco u jiných sloučenin byly pozorovány zpožděné účinky, které měly maximum dokonce až 3 hod po podání.

Společnou vlastností mnoha sloučenin bylo dobré přetrvávání účinků s potlačením křečí stejným nebo větším než 50 %, které bylo se statistickou významností větší než 3 hod po podání.

Trvání působení bylo delší než u milacemidu, kde dosahovalo přibližně 1 hodinu.

Výsledky testu MES u myší významnějších sloučenin podle vynálezu 60 min jsou uvedeny v následující tabulce 2.

Účinky sloučenin byly porovnávány s účinky dvou sloučenin podle dosavadního stavu techniky: FCE 28245, prototypem nové řady serinových derivátů s protikřečovými účinky a TEVA sloučeninou 2 (1aminoindanový derivát), popisovanou v WO 94/22808 a ve WO 95/18617.

···

Sloučenina (CHF)	EDso MES (mg/kg p.o.)	TD₅₀ vodorovné síto (mg/kg p.o.)	T. I.
2993	44	1172	27
2996	34	>1500	44
2983	43	1300	30
2991	38	1099	29
3431	22	251	11
3440	35	689	20
3381	21	274	13
FCE 28245	180	1670	9
TEVA slouč. 2	38	299	8

T.I.: terapeutický index

Všechny sloučeniny byly podávány ve formě solí s HCI. Jednotlivé enantiomery 2-aminoindanových a aminotetralinových derivátů vykázaly výrazný protikřečový účinek. (S)-hydroxyl-2aminoindanový derivát CHF 2993 a jeho enantiomer (R) CHF 2996 byly v testu MES stejně účinné. Druhá uvedená sloučenina měla také vyšší T.l. (44) pro svou nízkou hodnotu neurotoxicity (>1500 mg/kg p.o.). Zavedení methylové skupiny v části CHF 2993 vedlo k vytvoření sloučeniny (CHF 3440) se stejnými protikřečovými účinky, ale s vyšší neurotoxicitou. (TD₅₀ = 6 8 9). Naopak jak (S) 2-(2indanylamino)propionamidové, tak i 2-(2-indanylamino)acetamidové deriváty CHF 3431 a CHF 3381 měly vyšší účinnost při inhibici MES, ale vyšší neurotoxicitu než výše uvedené sloučeniny. Dobrý profil protikřečové účinnosti byl také pozorován u 3-hydroxy-2- 31 -

tetralinaminových derivátů CHF 2983 (R,S enantiomer) a CHF2991 (S,R enantiomer).

Všechny testované sloučeniny měly přibližně 3 - 4 krát vyšší účinnost než FCE 28245, chemicky 3-hydroxy-2-(4-(3-fenylpropyloxy)benzylamino)propanamidmethansulfonát.

Není také bez významu, že 2-aminoindanový derivát CHF 3381 měl vyšší T.l. než 1-aminoindanová sloučenina 2 podle dosavadního stavu techniky známá z WO 95/18617, chemicky (S)-2(indanylamino)acetamid. Ve skutečnosti měla 2-aminoindanová sloučenina podle vynálezu větší protikřečové účinky než 1-aminoindan podle dosavadního stavu techniky. Při celkovém pohledu na uvedené výsledky se zdá, že třída 2-aminoindanových sloučenin podle vynálezu měla menší poruchy motorické koordinace než sloučenina podle dosavadního stavu techniky.

Navíc k testu MES u myši byly některé sloučeniny také testovány v testu MES na krysách a na chemickém modelu tonických křečí indukovaném bicuculinem podle postupu popsaného v Swinyard E. A. a další, Antiepileptic Drugs, 3. vydání, Raven Press, New York (1989). V tomto modelu byly myši pozorovány 30 min po podání dávky bicuculinu (s.c.), která indukovala u 97 % zvířat tonické křeče. U zvířat ošetřených testovanými sloučeninami se bere jako koncový bod odstranění složky natažení zadní končetiny, což ukazuje na to, že testované látky mají schopnost zabránit rozšíření záchvatu.

Jako referenční sloučenina byl použit FCE 26743 (S)-2-(4-(3fluorbenzyloxy)benzylamino)propanamid popisovaný v EP-B10400495.

Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 3:

- 32 • 9 · 9 · · • · · · · · · ·99 ·· 99 ·· 99 • 9 9 · • · · · •99 999 • · ·· ··

Sloučenina (CHF)	ED₅₉ MES (mg/kg p.o.)	Maximum účinku (hod)*	Doba působení (hod)*	ED₅₀ bicucu- lin, myš (mg/kg p.o.)
2993	31	3	6	65
2996	32	1	2	n.t.
2983	19	1	2	62
FCE 26743	11	0,5	1	20

*: čas maximálního účinku **: čas, po který je ochrana statisticky významná

n. t.: nebylo testováno

U testu MES CHF 2993, CHF 2996 a FCE 26743 se ukázala podobná antikřečová účinnost jako byla nalezena ve stejném modelu u myši. V tomto testu měla látka CHF 2983 vyšší účinnost s hodnotou ED₅o 19 mg/kg p.o, což je méně než hodnota udávaná v testu MES u myši. Analýza kinetiky farmakologických účinků ukázala, že CHF 2993 měla delší dobu působení (6 hod). Ve všech případech bylo trvání účinku všech testovaných sloučenin delší než u referenční sloučeniny FCE 26743 (1 hod). U křečí indukovaných bicuculinem u myši byla hodnota ED50 pro CHF 2993, CHF 2983 a FCE 26743 65, 62, popřípadě 20 mg/kg p.o. I když byly tyto hodnoty vyšší než hodnoty získané v testu MES u myši, jsou z hlediska protikřečového účinku MES tyto hodnoty stejného řádu.

Při celkovém pohledu na tyto výsledky je možno uzavřít, že popisované sloučeniny měly významnou protikřečovou účinnost v modelu MES u myši i u krysy, stejně jako v modelu křečí indukovaných bicuculinem u myši. Účinnost těchto sloučenin u myši byla téměř podobná účinku některých standardních antiepileptických

4444

- 33 • 4 ·· • * 4 4 • 4 4 4 • 44 4 4 4 • 4 • 4 4 4 léčiv včetně fenytoinu, karbamazepinu, a alespoň čtyřikrát vyšší než u valproátu sodného, u kterých údaje z literatury ukazují na menší terapeutické indexy ve srovnání s hodnotami zjištěnými v předkládaných výzkumech.

Sloučeniny podle vynálezu je možno podávat v řadě dávkovačích forem, například orálně ve formě tablet, kapslí, cukrem nebo filmem potahovaných tablet, kapalných roztoků; rektálně ve formě čípků, parenterálně, například intramuskulárně nebo intravenózní injekcí nebo infuzí. Terapeutický režim pro různé klinické příznaky je nutno přizpůsobit typu nebo patologii, přičemž je třeba brát jako obvykle v úvahu také cestu podávání, formu, ve které je podávaná sloučenina a věk, hmotnost a stav pacienta.

V jednom provedení byla terapeuticky účinná dávka od přibližně 1 mg do přibližně 1000 mg, s výhodou od přibližně 10 mg do přibližně 300 mg.

Tyto dávkovači režimy mohou být samozřejmě upraveny pro dosažení optimálního terapeutického účinku.

Povaha farmaceutických prostředků obsahujících sloučeniny podle vynálezu spolu s farmaceuticky přijatelnými nosiči nebo ředivy bude samozřejmě záviset na požadované cestě podávání.

Prostředky mohou být formulovány obvyklým způsobem s použitím běžných složek. Sloučeniny podle vynálezu mohou být například podávány ve formě vodných nebo olejových roztoků nebo suspenzí, tablet, pilulek, želatinových kapslí, sirupů, kapek nebo čípků.

Pro orální podávání jsou farmaceutickými prostředky s obsahem sloučenin podle vynálezu s výhodou tablety, pilulky nebo želatinové kapsle, které obsahují aktivní látku spolu s ředivy jako je laktóza, dextróza, sacharóza, mannitol, sorbitol, celulóza; kluzné látky, např. oxid křemičitý, talek, kyselina stearová, stearan vápenatý nebo

- 34 hořečnatý a/nebo polyethylenglykoly; nebo také mohou obsahovat pojivá jako škroby, želatinu, methylcelulózu, karboxymethylcelulózu, arabskou gumu, tragakant, polyvinylpyrrolidon; rozvolňovadla jako jsou škroby, kyselina alginová, algináty, sodná sůl glykolátu škrobu; šumivé směsi; barviva; sladidla; smáčedlá jako je lecithin, polysorbáty, laurylsulfáty; a obecně netoxické a farmakologicky neaktivní látky používané ve farmaceutických prostředcích. Uvedené farmaceutické prostředky je možno vyrábět známým způsobem, například míšením, granulací, tabletováním, potahováním cukrem nebo potahováním filmem.

Kapalnými disperzemi pro orální podávání mohou být např. sirupy, emulze a suspenze.

Sirupy mohou obsahovat nosič, například sacharózu nebo sacharózu s glycerolem a/nebo mannitolem a/nebo sorbitolem. Suspenze a emulze mohou obsahovat nosič, například přírodní gumu, agar, alginát sodný, pektin, methylcelulózu, karboxymethylcelulózu nebo polyvinylalkohol. Suspenze nebo roztoky pro intramuskulární injekce mohou obsahovat spolu s aktivní sloučeninou farmaceuticky přijatelný nosič, například sterilní vodu, olivový olej, ethyloleat, glykoly, např. propylenglykol, a v případě potřeby vhodné množství lidokainhydrochloridu.

Roztoky pro intravenózní injekce nebo infuze mohou obsahovat nosič, například sterilní vodu nebo mohou být s výhodou ve formě sterilních izotonických vodných roztoků soli.

Čípky mohou obsahovat spolu s aktivní sloučeninou farmaceuticky přijatelný nosič, např. kakaové máslo, polyethylenglykol, a povrchově aktivní látku na bázi esteru polyoxyethylensorbitan mastné kyseliny nebo lecitin.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučeniny vzorce I

R O

N

R’ CH

I

Ri kde:

R je alkyl s přímým nebo rozvětveným řetězcem; cykloalkylalkyl; arylalkyl nebo fenylalkyl popřípadě substituovaný v kruhu skupinou alkyl, halogen nebo haloalkyl; fúzovaný nebo nefuzovaný aryl popřípadě substituovaný skupinou alkyl, alkoxy, halogen nebo haloalkyl;

R' je atom vodíku; alkyl; fenyl; fenylalkyl;

Ri je popřípadě acylovaný C1-C4 hydroxyalkyl nebo fenylalkyl, kde R je alkyl, cykloalkyl, arylalkyl;

Rt je atom vodíku, C1-C4 alkyl, popřípadě acylovaný C1-C4 hydroxyalkyl nebo fenylalkyl, jestliže R je aryl;

R₂ je atom vodíku; alkyl; fenyl; fenylalkyl.
2. Sloučeniny podle nároku 1, kde:

R1 je CH₂OH; R je C3-C10 alkyl, fenyl-(C₂-C₄)-alkyl, nebo

1,2,3,4-tetrahydro-2-naftalenyl nebo 2-indanyl popřípadě substituovaný skupinou alkyl, alkoxy, halogen nebo haloalkyl; R' je atom vodíku nebo methyl a R₂ je atom vodíku.

- 36 ·· ♦· • · · • · · ··· *·· • ·
3. Sloučeniny podle nároku 1, kde Ri je atom vodíku nebo methyl, R je 1,2,3,4-tetrahydro-2-naftalenyl nebo 2-indanyl popřípadě substituovaný skupinou alkyl, alkoxy, halogen nebo haloalkyl a R¹ a R₂ znamenají atom vodíku.
4. Sloučeniny podle nároku 1, kde Ri je CH2OH; R je fenyl-(C₂C₃)-alkyl, 1,2,3,4-tetrahydro-2-naftalenyl, 2-indanyl; R’ a R₂znamenají atom vodíku.
5. Způsob výroby sloučenin podle některého z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že zahrnuje reakci esterů Mtteojceíz nebo amidů aminokyselin vzorce II

H₂N COX \ /

CH (II),

I

R1 kde R1 je jak definováno výše a X je skupina alkoxy nebo NHR₂, kde R₂ je jak definováno výše, se sloučeninami vzorce III

Rs (III) kde Y atom kyslíku nebo skupina NH, zatímco skupiny R₃ a R₄, které jsou stejné nebo různé, znamenají atom vodíku, nebo spolu s atomem uhlíku ke kterému jsou připojeny vytvářejí jednu ze skupin R nebo R' s výjimkou nefuzovaného arylu, jak definováno výše, za poskytnutí sloučenin vzorce IV • φφφ ·« φφφφ • Φ φ®

I 9 9 Φ » · Φ Φ • Φ Φ ΦΦΦ • Φ

Φ· ΦΦ r₃ νη

CH CH

I

R₄ Ri (IV), které potom mohou být převedeny na sloučeniny vzorce pomocí jedné nebo více z následujících reakcí:

-jestliže Xje skupina alkoxy, reakcí s aminem vzorce R2-NH2;

- N-alkylací;

- acylací jakékoliv hydroxylové skupiny přítomné v Rf,

- převedením na sůl a/nebo rozdělením na optické izomery;

- odstraněním jakékoliv přítomné ochranné skupiny.
6. Způsob výroby sloučeniny podle některého z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že zahrnuje kondenzaci α-halogenesteru vzorce V kde R1 je jak definováno výše a s výhodou atom vodíku, W je atom halogenu (obecně chloru nebo bromu) a R5 je alkylová skupina, s aminem vzorce VI r₃

H₂N~CH \

R₄ (VI) kde R3 a R₄ jsou jak definovány výše, a následnou amidaci aminem R₂-NH₂,kde R₂ jejak definováno výše, za poskytnutí sloučenin^l/.
7. Farmaceutické prostředky, vyznačující se tím, ž e jako účinnou složku obsahují sloučeninu podle některého z nároků 1 až 4 ve směsi s vhodnými pomocnými látkami nebo nosič.
8. Použití sloučenin podle některého z nároků 1 až 4 pro výrobu farmaceutických prostředků pro léčení neurodegenerativních onemocnění.