CN1857367A - 波棱瓜子提取物、其滴丸剂及制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药制剂发明技术领域，具体涉及波棱瓜子提取物及其滴丸剂型和提取物与滴丸剂的制备方法和应用技术领域。我国是病毒性肝炎高发地区，其中的慢性乙型肝炎因其病情逐渐发展、不易控制。波棱瓜子是藏药中治疗肝病的首选药物之一，由于处方量偏小，且藏药制剂工艺落后，大大影响药物的吸收。通过药效学研究，确定有效部位为波棱总木脂素及其给药剂量，本发明通过现代提取工艺和现代制剂工艺，从波棱瓜子中提取了抗肝炎病毒、抗肿瘤的含波棱总木脂素的原料药，并制备出波棱总木脂素原料药滴丸制剂。

Description

波棱瓜子提取物、其滴丸剂及制备方法和应用

技术领域

本发明属于中药制剂发明技术领域，具体涉及波棱瓜子提取物及其滴丸剂型和提取物与滴丸剂的制备方法和应用技术领域。

背景技术

我国是病毒性肝炎高发区，其中的慢性乙型肝炎因其病情逐渐发展、不易控制、预后差、发病机理复杂而尤为引起关注。目前全国有近1.3亿人是乙型肝炎病毒携带者，5000万人患有慢性肝炎，每年死于肝炎的患者约23万人(2002年12月国家卫生部的一项调查统计数据表明：肝炎依然是我国发病率和死亡率均居首位之传染病种)，加上其它已知和未知的因病毒异化引发的病毒性肝炎病种，导致我国人群的发病率更高，危害性更大。据不完全统计，我国每年直接用于肝炎防治的医疗费用超过1000亿元人民币，因此，慢性乙型肝炎的治疗仍为当前肝病领域中的难题之一，国内外盛行的干扰素、核苷类药物治疗虽然具有一定疗效，但前景不容乐观。目前，病毒性肝炎治疗尚无根本性突破，其总体患病人数仍有不断上升趋势，而肝炎慢性化的问题仍未解决。由于国内围产期及幼年感染比例高、乙肝疫苗在部分地区普及程度较低，原有HBV携带人群基数巨大等原因，在目前乃至未来数十年内，乙肝病毒等引起的慢性肝炎仍将是严重危害我国人民健康的疾病之一。

波棱瓜子是藏药中治疗肝病的首选药物之一，在用于治疗肝病的藏药成方制剂中，有一半以上入药。但是，由于处方量偏小，且藏药制剂工艺落后，大大影响药物的吸收。我们通过药效学研究，确定有效部位为波棱总木脂素及其给药剂量，采用现代工艺技术研制成滴丸剂型。依据其功能及其服用剂型，命名为肝能滴丸，具有药物用量小、疗效高、释药快、口服易吸收等优点。

发明内容

针对以上缺陷，市场上需要一种质量稳定、剂量可控、用量小、疗效高、释药快、口服易吸收，并适于大规模生产的含波棱瓜子有效成分提取物的滴丸。

本发明的一个目的在于公开了波棱瓜子提取物及其滴丸制剂。

本发明的另一个目的在于公开了波棱瓜子提取物及其滴丸制剂的制备方法。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：

1、波棱瓜子提取物即波棱总木脂素原料药的制备：

1)、将波棱瓜子干燥品粉碎成粗粉，按照《中华人民共和国药典》(一部，2005年版)，粗粉是指全部通过标准四号筛的粉末不超过40％的粉末；

2)、将粗粉用5～10倍粗粉量的80％乙醇进行煎煮提取，提取两次，每次2小时，合并煎液；

3)、煎煮液采用板框抽滤法进行抽滤，滤液在40℃～100℃下减压浓缩至每1ml药液相当于2g原料药；用NaOH调节浓缩液pH值至9～11，沉淀溶解后，用HCl调节pH值至2～3，离心，弃上清液；用沸程为60～90℃的石油醚清洗沉淀物，在40℃～100℃下低温减压干燥，将干燥物粉碎成细粉，过100目筛，得到含有2.0～7.9％的PED I、2.0～7.5％的PED II、1.5～7.0％的herpetal、1.5～15.3％的herpetin、5.0～39.6％的herpetrione，4.3～28.7％herpetetrone的波棱瓜子提取物即波棱总木脂素原料药。

2、波棱总木脂素原料药中主要有效成分的定性和定量测定：

2.1波棱总木脂素原料药中主要有效成分的定性研究：

(1)、化合物Herpetrione(PED X)，其结构式为：

质谱分析[M+H]⁺＝553，得到分子量为552。

峰位归属：¹³C中化学位移δ＝198.423呈现一羰基不饱和碳的响应信号，151.641、147.969、147.694、147.322、145.887、142.999显示为六个连接有氧原子的芳香羰，132.731、132.002、128.785、123.258表明分子中存在四个非氧取代芳香碳质子。123.079、118.660、117.216、114.680、114.389、111.406、109.579、108.024表明分子中有六个未取代芳香碳。¹³C谱在85.984、85.841、71.204、71.162、54.979、54.637位移表明四氢呋喃并四氢呋喃环的存在，此外，化学位移在53.972、53.841、53.739的相应信号提示分子结构中包含三个甲氧基团。¹³C NMR谱与已知文献(Kaouadji M，Favre BJ.Herpetrione，atrimeric lignoide isolated from Herpetospermum caudigerumWall[J].Tetrahedron Lett，1983，24(52)：5881-5884)中报道的herpetrione结构相应，同时，¹H NMR的峰位归属能够印证上述推断。

(2)、化合物Herpetetrone：

质谱分析[M+Na]+＝753，得到分子量为730。

峰位归属：¹³C的峰位归属：δ＝198.369出现一羰基不饱和碳的响应信号，147.999、147.721、146.212、144.085、143.023、134.503、133.165显示为七个连接有氧原子的芳香碳，123.330、118.316、117.230、114.936、114.772、114.647、111.227、110.703、109.172、108.006显示有十个未取代的芳香碳的存在。87.798位置处的响应信号乃因受空间结构的影响，四氢呋喃上连接苯基的碳的位移。此外，86.230、85.952、71.332、71.157、55.413、55.163的化学位移则共同见证了四氢呋喃并四氢呋喃环的存在，63.436、62.771提示存在两个羟甲基仲碳，54.987、54.836、54.068、53.913提示结构中存在四个甲基碳。¹³C NMR谱的推断与已知文献(Kaouadji M，Favre BJ，Sarrazin.Herpetetrone，another tetrameric lignoid fromHerpetospermum caudigerum seeds[J].J.Nat.Prod.，1987，50(6)：1089-1093.)中报道的herpetetrone结构相应，同时，¹H NMR的峰位归属能够印证上述推断。

(3)、化合物PED I：

质谱分析[M+Na]⁺＝397，得到分子量为374。

峰位归属：¹³C峰位归属如图所示：其中化学位移44.006、54.112、73.611、84.312及其上面分别连接的H的NMR位移δ2.759(d)、2.407(d)、4.003、3.801(dd)、4.804(d)证明四氢呋喃环的存在。33.928及2.739、2.515(dd)、60.579及3.843、3.672(dd)则共同表明分子中包含两个化学环境不一的仲碳基团的存在。116.176、116.014、115.824、114.436、111.943、111.607处的化学位移显示分子结构中含6个未取代的芳香碳，芳香氢质子在6.838(dd)、6.933(dd)、6.803(d)、6.815(d)、6.965(d)、6.962(d)的信号峰分别给以了对应证明。¹H NMR的其余峰位归属也印证了上述推断。根据上述推断及对各相关谱的分析，得到上述结构，命名为：3-羟甲基，2-(3-甲氧基，4-羟基苯)，4-(3，4-二甲氧基苯)四氢呋喃。

(4)、化合物PED II：

质谱分析[M+K]⁺＝429，得到分子量为390。

峰位归属：¹³C峰位归属如上图所示：其中化学位移55.261、55.366、89.045、89.187证明四氢呋喃环的存在，同时，上述数据结合¹H NMR的数据，显示该分子结构中四氢呋喃环存在四个相对对称的取代。63.853与3.845、3.660(dd)、及63.357与3.840、3.650(dd)分子结构中显示分子结构中存在两个对称性的仲碳基团。116.086、115.807、111.885、111.011、110.600、105.335处的化学位移显示分子结构中含6个未取代的芳香碳。¹H NMR的峰位归属能够印证上述推断。根据上述推断及对各相关谱的分析，得到上述结构，命名为：3，4-二羟甲基，2-(3-甲氧基，4-羟基苯)，5-(3，4-二甲氧基苯)四氢呋喃。

(5)、化合物Herpetal(PED XI)：

质谱分析[M+H]⁺＝355，得到分子量为354。

通过对碎片离子进行分析，在该质谱图中，还存在下面所列的相对丰度很高的碎片离子，是本原料药中所含木脂素类成分中典型的碎片离子，这也为确定该化合物为Herpetal提供了佐证：

297        C₁₇H₁₃O₅ ⁺

151        C₁₀H₁₅O⁺

137        C₉H₁₃O⁺

2.2波棱总木脂素原料药中各成分的定量研究：

1)仪器与材料

1.1)材料：原料药自制(批号030512)。PED I、PED II、herpetal、herpetrione、herpetin、herpetetrone均为实验室自制(纯度均超过98％)。乙腈为色谱级，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

1.2)仪器：高效液相色谱仪(配有DAD检测器，Agilent-1100型美国)；色谱柱(ODS柱，Kromasil 250×4.6mm，5μm瑞典；正相柱，Alltech 250×4.6mm，Apollo Silica，5μm)；微量进样器(25μl，Hamilton美国)；微量分析天平(Mettler AE163瑞士)等。

2)方法与结果

2.1)对照品溶液的制备：精密称取上述六种对照品各适量，精密称定，分别置25ml量瓶中，加甲醇20ml超声溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别配制成浓度为0.2mg/ml的对照品溶液，储存备用。

2.2)供试品溶液的制备：取波棱总木脂素原料药12mg，精密称定，加入甲醇20ml，称定重量，超声处理30min，冷却后再称重量，加甲醇补足损失重量，滤过。准确量取续滤液5ml至10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制得样品供试品溶液。

2.3)色谱条件

2.3.1)反相色谱条件色谱柱：Kromasil，5μm C18柱(250×4.6mm)；流动相：乙腈-0.05％磷酸水(20∶80)；检测波长：280nm；流速：1ml/min；柱温：室温；

2.3.2)正相色谱条件色谱柱：Alltech，Apollo Silica，5μm(250×4.6mm)；流动相：环己烷-二氯甲烷-甲醇(42.5∶42.5∶5)；检测波长：280nm；流速：1ml/min；柱温：室温；

2.4)测定结果

2.4.1)10批波棱原料药的反相HPLC测定结果

化合物	样品1(％)	样品2(％)	样品3(％)	样品4(％)	样品5(％)	样品6(％)	样品7(％)	样品8(％)	样品9(％)	样品10(％)
											PED IPED II	4.74.6	5.04.7	2.32.0	3.02.8	3.53.3	3.22.9	3.53.1	4.13.8	7.97.5	2.02.2

herpetalherpetin

3.85.8

3.66.2

1.51.5

2.15.7

2.54.5

1.54.7

2.05.0

2.45.2

7.015.3

1.65.1

2.4.2)10批波棱原料药的正相HPLC测定结果

化合物	样品1(％)	样品2(％)	样品3(％)	样品4(％)	样品5(％)	样品6(％)	样品7(％)	样品8(％)	样品9(％)	样品10(％)
											herpetrioneherpetetrone	21.311.2	18.512.3	5.04.3	21.512.5	14.79.3	19.59.5	15.87.3	20.311.0	39.628.7	16.511.5

由以上结果得出提取物中主要有效成分的含量如下：PED I含量范围2.0～7.9％，PED II含量范围2.0～7.5％，herpetal含量范围1.5～7.0％，herpetin含量范围1.5～15.3％，herpetrione含量范围5.0～39.6％，herpetetrone含量范围4.3～28.7％；提取物中还含有少量的如下成分coniferylalcohol、herpetriol、herpetetrol、herpetradione、herpepentol、herpetone、herpetfluorenone、herpetenol。

3、波棱瓜子提取物的滴丸制剂的制备过程如下：

1)、称取质量百分比为70％的药用辅料，加热熔融；

2)、取质量百分比为30％的波棱瓜子提取物，加入熔融状态的药用辅料中，搅拌熔融；

3)、将步骤2)中的药液加入滴丸机储液池，选择二甲基硅油和/或液体石蜡中的一种为冷却液，冷却液高度为60～120cm，温度为6～30℃，滴速为40滴/分，用滤纸洗去滴丸表面的冷却液进行制备。

所述的药用辅料选自PEG4000、PEG6000、PVP、poloxamer188和尿素中的一种或一种以上的任意比例组合。

上述滴丸的制备工艺中，使用烟台烟台康达尔药业有限公司生产的DWJ系列自动化滴丸机。

由于采用了上述技术方案，获得了波棱总木脂素原料药及其滴丸剂，具有提取及制剂工艺稳定、质量可控、处方量用量小、疗效高等优点。

具体实施方式

以下通过试验例来具体说明本发明所述药物具有的有益效果，试验例包括所属药物的药效学试验和临床试验。

试验例1药效学试验

1.仪器、试剂与动物

1.1药品与试剂

波棱总木脂素原料药，实验室自制(批号030512)。联苯双酯，北京协和药厂(批号030109)。拉米夫啶，英国葛兰素威康有限公司产(批号：00212008)。谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)测定试剂盒，为北京北化康泰临床试剂有限公司产品。总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)测定试剂盒，均为北京中生生物工程高技术公司产品。环磷酰胺(Cy)粉针剂，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号：01060821。D-半乳糖胺(D-GalN)，α-萘异硫氰酸酯(ANIT)分析纯，中国人民解放军防化学院提供。卡介苗(BCG)，北京生物制品研究所生产，批号：010910。脂多糖(LPS)，Sigma公司产品，批号：L2688。植物血凝素(PHA)，Sigma公司产品，批号：L8754。Eagles MEM干粉、G-418(Geneticin)、酵母t-RNA、蛋白酶K，美国GIBCO公司产品。胎牛血清，美国Hyclone Lab公司产品。L-谷氨酰胺，京科化学试剂公司进口分装。HBsAg、HBeAg固相放免测定盒，中国同位素公司北方免疫试剂研究所产品。卡那霉素，华北制药厂产品。其它试剂均为市售分析纯。Wistar大鼠，体重190-210g，雌雄各半，由中国生物制品检定所动物中心(动物合格证号：SCXK11-00-0010)提供；昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半，由军事医学科学院动物中心(动物合格证号：军医动字第BDW95001)和中国生物制品检定所动物中心(动物合格证号：SCXK11-00-0010)提供；1日龄北京鸭，80-100g，由北京医科院药植所动物饲养场提供。动物实验条件：贰级标准，合格证号：军医动字第B98006。BS-224生化分析测定仪。

2.1抗乙肝病毒试验

采用抗鸭乙肝病毒试验，对以波棱瓜子总木脂素原料药进行抗肝炎病毒药效学初筛评价。以DHBVDNA为观察指标，分析在同一水平下不同剂量的药效作用，并进行了重复验证试验。按原料药计，分别以0.15g/kg·日、0.3g/kg·日、0.45g/kg·日三个剂量给予感染DHBVDNA的一日龄雏鸭，在给药后5天(T5)、10天(T10)、停药后3天(P3)取血，采用斑点杂交方法测定血清中DHBVDNA水平，判断药物对DHBVDNA的抑制作用。结果见表1，2：

表1原料药在鸭体内对DHBVDNA的抑制率(第1批)

组别g/kg	动物数只	抑制率
					T5	T10	P3
		0.150.3	66	12.4±8.427.5±4.2				6.7±3.930.8±6.7	24.5±8.217.8±9.2

0.45拉米夫定0.1g/kg

66

25.2±11.824.8±9.6

40.5±12.850.5±7.6

27.6±13.519.6±11.6

表2原料药在鸭体内对DHBVDNA的抑制率(第2批)

组别g/kg	动物数只	抑制率
					T5	T10	P3
		0.150.30.45拉米夫定0.1g/kg	6666	12.9±7.528.1±10.930.5±9.133.8±11.3				14.5±9.236.8±7.251.2±6.852.2±4.9	11.5±9.826.7±13.738.6±19.116.4±7.6

表1和表2的药效学结果证明：原料药抗鸭乙肝病毒作用显著。

2.2保肝降酶实验

2.2.1对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响

取Wistar大鼠，按体重随机分为6组，每组10只，正常对照组、肝损伤模型组、原料药低、中、高(0.008g、0.016g、0.032g/kg)三个剂量组。除正常对照组外，各组动物腹腔注射10％CCl₄植物油0.5ml/100g体重，每周两次，共12周，正常对照组ip生理盐水。造模同时每日ig给药一次(0.5ml/100g体重，正常对照组ig同体积的蒸馏水)。实验结束前，动物禁食12小时，取股动脉血，以3000转/分离心10分钟，分离血清，测定GPT、GOT、TP、ALB，采血后将动物处死，取肝组织作羟脯氨酸测定，计算肝胶原蛋白含量(结果见表3、4)。

表3对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响(n＝10)

组别	剂量	动物数	肝功能(X±SD)
								GPT(U·L-1)	GOT(U·L-1)	TP(g·L-1)	ALB(g·L-1)	白/球
			对照组模型组联苯双酯原料药	0.02250.0080.0160.032	201012101113	34.21±2.25138.68±25.53##60.19±8.68**109.08.±30.52*75.32±18.98**63.13±11.94**	33.42±4.31113.22±8.03##49.93±8.49**102.26±12.10*62.98±21.68**48.08±10.73**						6.79±0.385.43±0.95#6.68±0.58**6.07±0.676.33±0.966.48±0.65*	4.12±0.293.14±0.53##4.02±0.56**3.39±0.653.73±0.69*3.90±0.66**	1.541.371.511.261.431.50

与正常组比较#p＜0.05，##p＜0.01；与模型组比较^*p＜0.05，^**p＜0.01

表4.对大鼠肝胶原蛋白含量的影响(X±SD)

组别	剂量(g/kg)	动物数(只)	胶原蛋白(mg/g干肝)
				对照组模型组联苯双酯原料药	0.02250.0080.0160.032	201012101113	14.15  2.9642.88  5.44##20.33  1.68**38.29  3.27*31.60  2.64**23.73  6.88**

与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01

表3、4结果表明，原料药可抑制多次注射CCl₄引起的大鼠血清转氨酶的升高、总蛋白和白蛋白降低，减少肝胶原蛋白含量。

2.3对小鼠免疫性肝损伤的影响

健康小鼠60只，随机分为六组，正常对照组、模型组、联苯双酯组(0.029g/kg)、原料药(0.012、0.023、0.046g/kg)三个剂量组，每组10只，小鼠ig给药2次/日，共10天。给药前除正常对照组外，每鼠尾静脉注射0.25％BCG 2.5mg，10天后每鼠再尾静脉注射LPS 2.5μg攻击，12小时后眼球后静脉丛取血测血清ALT、AST。

表5对小鼠免疫性肝损伤的影响(X±SD)

组别	剂量(g/kg)	动物数(只)	GPT(U·L-1)	GOT(U·L-1)
					对照组模型组联苯双酯原料药	0.0290.0120.0230.046	101010101010	23.54±5.07253.03±30.90##100.45±21.26*199.96±50.48*160.61±31.05**108.22±14.34**	19.18±2.12144.22±19.08##67.49±18.94**133.21±21.66100.43±22.64*69.16±20.02**

与正常对照组比较，^##p＜0.01；与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01

表5结果表明，原料药对BCG+LPS所致免疫性肝损伤小鼠血清转氨酶的升高有明显的抑制作用，与模型组相比有显著性差异。

2.4抗肿瘤作用

方法  分别以人肝癌细胞株BEL-7402、BEL-7404、及人结肠癌细胞株HCT为研究对象，以含不同稀释浓度波棱原料药的培养基与细胞共同培养，采用MTT法检测药物作用对癌细胞的抑制作用。靶细胞以完全培养液调为1×105/mL，分别接种于96孔培养板中，每孔100μL，然后分别加入100μL不同含药血清及空白血清，总体积200μL，每组设7个平行孔，在37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养48h后，每孔加入5mL MTT 10μL，继续培养4h后进行显色反应，加20％二甲基亚砜100μL终止反应，震荡10min，在DG3022-A型酶联免疫检测仪，波长570nm测吸光度(A)值。细胞毒活性计算公式为：

结果见表6。

                           表6.对肿瘤细胞生长的抑制率(％)

细胞株	浓度(μg/ml)
							1.25	2.50	5.00	10.00	20.00	IC50
	BEL-7402BEL-7404HCT	34.8512.6032.60	41.5060.3058.50	100.00100.0072.00	98.8098.50100.00	100.00100.00100.00							1.451.682.36

结果表明：波棱原料药对BEL-7402、BEL-7404的50％抑制率分别为1.45、1.68，对HCT的50％抑制率为2.36，说明本发明的波棱原料药对不同癌细胞体外生长具有明显的抑制作用。

试验例2本发明药物滴丸剂治疗慢性乙肝的临床试验

1资料与方法

1.1资料  本组病例均为HBeAg和/或HBV DNA阳性的慢性肝炎患者。临床分为：治疗组(肝能滴丸组)30例(共入组36例，6例因中断治疗，自然脱落)。其中男20例，女10例；年龄(19～55)岁，平均(28.6±8.67)岁；HBeAg和HBVDNA均阳性者30例；根据中华医学会2000年9月西安第十次全国病毒性肝炎学术会议讨论修订的“病毒性肝炎防治方案”中慢性乙型肝炎的诊断标准^【1】。对照组(拉米呋定组)28例。其中男22例，女6例；年龄(20～58)岁，平均(31.34±9.26)岁；HBeAg和HBVDNA均阳性者28例。两组患者在性别、年龄、病程及病情等方面资料比较，具有均衡性与可比性。

1.2方法  采用开放、随机对照法。治疗组给予肝能滴丸。处方组成：波棱原料药12g PEG4000 20g PEG6000 8g制成1000粒。用法：12粒/次，3次/日。对照组给予拉米呋定，每日1次，口服。两组均为3个月一疗程。治疗组与对照组均应用基础药物(包括维生素类及一般保肝治疗)，但未用其它抗病毒药与免疫调节剂。两组分别于治疗前、治疗后每月、治疗结束时检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆红素(BIL)，采用ELISA法检测乙肝病毒7项指标，荧光定量PCR法检测HBVDNA；并检测血、尿常规、肾功能。根据中国中医药学会内科肝病专业委员会制定的《病毒性肝炎中医疗效判定标准(试行)》判定疗效。

统计学方法  计数资料应用SAS6.12的χ²检验程序。

2、结果

2.1对血清HBeAg的影响治疗组治疗前HBeAg阳性30例，治疗后9例阴转，转阴率为30.00％；对照组(拉米夫定)治疗前HBeAg阳性28例，治疗后6例阴转，转阴率为21.4％，两组HBeAg转阴率比较，P＞0.05，差异无统计学意义。

2.2对血清HBVDNA的影响治疗组治疗前HBVDNA阳性30例，治疗后16例阴转，转阴率53.33％；对照组(拉米夫定)治疗前HBV.DNA阳性28例，治疗后19例阴转，转阴率67.86％。两组HBVDNA转阴率比较，P＞0.05，差异无统计学意义。(见表6)。

             表6两组治疗前后HBV复制指标阳性率变化情况比较

分组	治疗组		对照组		P
						治疗前后阳性例数	转阴率	治疗前后阳性例数	转阴率
	HBeAgHBVDNA	30/930/16	30.00％53.33％	28/628/19						21.80％67.86％	＞0.05＞0.05

2.3治疗前后肝功能复常情况  治疗组治疗前ALT异常30例，治疗后复常23例，ALT复常率为76.67％。对照组治疗前ALT异常28例，治疗后复常21例，治疗后ALT复常率为75.00％。两组ALT复常率比较，P＞0.05，差异无统计学意义(见表7)。

治疗组治疗前AST异常29例，治疗后复常28例，AST复常率为96.55％。对照组治疗前AST异常25例，治疗后复常12例，治疗后AST复常率为48.0％。两组AST复常率比较，P＜0.01，差异有统计学意义(见表7)。

                     表7两组治疗前后肝功能复常情况比较

分组	治疗组		对照组		P
						治疗前后异常例数	复常率	治疗前后异常例数	复常率
	ALTAST	30/2329/28	76.67％96.55％	28/2125/12						75.00％48.00％	＞0.05＜0.01

3、不良反应及处理  治疗组在治疗过程中基本无不良反应或很轻微，仅见3例患者出现轻度便溏，无需特殊处理，自行缓解。治疗前后血WBC、BUN、Cr均无显著差异。对照组28例中4例出现不同程度服药后胃部不适，均予以对症处理后缓解。

以下通过实施例来具体说明本发明所述药物的制备过程。

实施例1波棱瓜子提取物即原料药的制备：

实施例1-1

波棱瓜子提取物，其制备方法如下：

1)、将波棱瓜子干燥品粉碎成粗粉；

2)、将粗粉用6倍粗粉量的80％乙醇进行煎煮提取，提取2次，每次2小时，合并煎液；

3)、煎煮液采用板框抽滤法进行抽滤，滤液在40℃下减压浓缩至每1ml药液等于2g原料药；用NaOH调节浓缩液pH值至pH＝10，沉淀溶解后，用HCl调节pH值至pH＝2，离心，弃上清液；用沸程为60℃的石油醚清洗沉淀物，在40℃下低温减压干燥，将干燥物粉碎成细粉，过100目筛，得到波棱瓜子提取物。

实施例1-2

波棱瓜子提取物的制备方法，其步骤和原料如实施例1-1，在步骤2)中将粗粉用8倍粗粉量的80％乙醇进行煎煮提取；在步骤3)中使滤液在50℃下减压浓缩；用NaOH调节浓缩液pH值至pH＝10.5，沉淀溶解后，用HCl调节pH值至pH＝2.5，离心，弃上清液；用沸程为70℃的石油醚清洗沉淀物，在50℃下低温减压干燥，将干燥物粉碎成细粉，过100目筛，得到波棱瓜子提取物。

实施例1-3

波棱瓜子提取物的制备方法，其步骤和原料如实施例1-1，在步骤2)中将粗粉用10倍粗粉量的80％乙醇进行煎煮提取；在步骤3)中使滤液在60℃下减压浓缩；用NaOH调节浓缩液pH值至pH＝11，沉淀溶解后，用HCl调节pH值至pH＝3，离心，弃上清液；用沸程为90℃的石油醚清洗沉淀物，在60℃下低温减压干燥，将干燥物粉碎成细粉，过100目筛，得到波棱瓜子提取物。

实施例2波棱瓜子提取物的滴丸制剂的制备：

实施例2-1

波棱瓜子提取物的滴丸制剂的制备，包括以下步骤：

1)、称取质量百分比为10％的药用辅料PVP，加热熔融；

2)、取质量百分比为90％的波棱瓜子提取物，加入熔融状态的药用辅料PVP中，搅拌熔融；

3)、将步骤2)中的药液加入滴丸机储液池，选择二甲基硅油为冷却液，冷却液高度为60cm，温度为6℃，滴速为40滴/分，用滤纸洗去滴丸表面的冷却液进行制备。

实施例2-2

波棱瓜子提取物的滴丸制剂的制备，包括以下步骤：

1)、称取质量百分比为50％的药用辅料poloxamer188，加热熔融；

2)、取质量百分比为50％的波棱瓜子提取物，加入熔融状态的药用辅料poloxamer188中，搅拌熔融；

3)、将步骤2)中的药液加入滴丸机储液池，选择二甲基硅油为冷却液，冷却液高度为90cm，温度为18℃，滴速为40滴/分，用滤纸洗去滴丸表面的冷却液进行制备。

实施例2-3

波棱瓜子提取物的滴丸制剂的制备，包括以下步骤：

1)、称取90％的药用辅料，该药用辅料为PEG4000和PEG6000按质量比为5∶2混合，将药用辅料加热熔融；

2)、取质量百分比为10％的波棱瓜子提取物，加入熔融状态的药用辅料中，搅拌熔融；

3)、将步骤2)中的药液加入滴丸机储液池，选择液体石蜡为冷却液，冷却液高度为120cm，温度为30℃，滴速为40滴/分，用滤纸洗去滴丸表面的冷却液进行制备。

Claims (7)

1、一种波棱瓜子提取物的制备方法，它包含以下步骤：

1)、将波棱瓜子干燥品粉碎成粗粉；

2)、将粗粉用5～10倍粗粉量的80％乙醇进行煎煮提取，提取2次，每次2小时，合并煎液；

3)、煎煮液采用板框抽滤法进行抽滤，滤液在40℃～100℃下减压浓缩至每1ml药液相当于2g原料药；用NaOH调节浓缩液pH值至9～11，沉淀溶解后，用HCl调节pH值至2～3，离心，弃上清液；用石油醚清洗沉淀物，在40℃～100℃下低温减压干燥，将干燥物粉碎成细粉，过100目筛，得到波棱瓜子提取物。

2、用权利要求1所述的方法制备的波棱瓜子提取物，其特征在于：所述的提取物可用下述方法提取获得：将波棱瓜子粗粉用5～10倍粗粉量的80％乙醇提取2次，每次2小时，合并煎液；对煎煮液进行抽滤，滤液在40℃～100℃下减压浓缩至每1ml药液相当于2g原料药；用NaOH调节浓缩液pH值至9～11，沉淀溶解后，用HCl调节pH值至2～3，离心，弃上清液；用石油醚清洗沉淀物，在40℃～100℃下低温减压干燥，将干燥物粉碎成细粉，过100目筛，得到含有2.0～7.9％的PED I、2.0～7.5％的PED II、1.5～7.0％的herpetal、1.5～15.3％的herpetin、5.0～39.6％的herpetrione，4.3～28.7％的herpetetrone的波棱瓜子提取物。

3、权利要求2所述的波棱瓜子提取物在制备抗肝炎病毒药物、抗肿瘤药物和保肝降酶药物中的应用。

4、权利要求2所述的波棱瓜子提取物的滴丸剂，其特征在于：所述的滴丸剂由质量百分比为10～90％的波棱瓜子提取物和90～10％的药用辅料组成。

5、权利要求4所述的滴丸剂，其特征在于：所述的药用辅料选自PEG4000、PEG6000、PVP、poloxamer188和尿素中的一种或一种以上的组合。

6、权利要求4所述的滴丸剂的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

1)、称取所述质量百分比的药用辅料，加热熔融；

2)、称取所述质量百分比的波棱瓜子提取物，加入熔融状态的药用辅料中，搅拌熔融；

3)、将步骤2)中的药液加入滴丸机储液池，选择二甲基硅油和/或液体石蜡中的一种为冷却液，冷却液高度为60～120cm，温度为6～30℃，滴速为40滴/分，用滤纸洗去滴丸表面的冷却液进行制备。

7、权利要求4所述的滴丸剂在制备抗肝炎病毒药物、抗肿瘤药物及保肝降酶药物中的应用。