CN1850166A - 桑叶降血糖有效组分组合物及制备方法 - Google Patents

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本发明涉及桑叶降血糖有效组分组合物及制备方法，属于中药领域。组合物中桑叶多糖分子量大于100万道尔顿，重量百分比为20～80％，桑叶生物碱中1－脱氧野尻霉素含量大于50％，重量百分比为80～20％。制备时桑叶除去杂质，低温干燥后粉碎称重，得桑叶粉末，再用有机溶剂提取，除去脂溶性部分，然后过滤，取渣去液；滤渣挥去有机溶剂，得桑粉渣；再用热水提取，过滤，滤液加入乙醇使浓度为40％～80％，然后过滤，得上清液和沉淀。用阳离子树脂交换，再用阴离子树脂交换除去杂质，浓缩，干燥，即得桑叶生物碱。本发明工艺过程简单，成本低，药效显著，食用方便并且可以充分利用自然资源。

Description

桑叶降血糖有效组分组合物及制备方法
技术领域
本发明涉及桑叶降血糖有效组分组合物及制备方法，属于中药领域。
背景技术
栽桑养蚕是我国农业的传统产业之一，桑叶在我国有着大量的资源优势，但传统的蚕桑业只用于养蚕，用途单一。每年按正常情况就有大量的桑叶过剩而被浪费，因此寻找桑叶的多用途开发渠道，开发成药品或保健性产品，既可以充分利用自然资源，又可以为蚕桑业找到新的经济增长点，推动蚕桑业发展。
而桑叶在中药古方就有用于“止消渴”，即现代糖尿病。用桑叶开发天然安全的治疗糖尿病新药或降血糖的功能性食品已有很多研究，目前关于桑叶降血糖成分已经有一些相关专利：如申请号：01129976.2“一种桑叶多糖产品及其用途”公开了一种用桑叶提取的桑叶多糖产品和用途，多糖分子量在1500～50000道尔顿之间；申请号：200410018677.4“具有α-糖苷酶抑制活性的药物组合物及其用途”，公开了的药物组合按重量百分比生物碱为5～90％、黄酮类为10～95％；申请号：01113191.8“具有α-糖苷酶抑制剂活性的中药提取物、其制备方法及用途”，公开了总生物碱的制备方法；申请号：03142068.0“桑叶有效成分提取物及制备方法”，公开的提取物中含野尻霉素1.0～3.0％，γ-氨基丁酸0.8～1.5％；申请号：02125869.4“一种α-糖苷酶抑制剂和它的用途”，公开了一种高效、廉价且易于获得的α-糖苷酶抑制剂。以上专利没有涉及从桑叶中提取桑叶多糖和生物碱有效组分组合物的制备方法，更没涉及桑叶多糖和桑叶生物碱有效组分组合用于降血糖用途的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用桑科植物桑树的叶子提取的降血糖有效组分组合物：桑叶多糖和桑叶生物碱，固态呈浅棕色或浅黄色粉末，其中桑叶多糖分子量大于100万道尔顿，重量百分比为20～80％，桑叶生物碱中1-脱氧野尻霉素含量大于50％，重量百分比为80～20％。
本发明提供的桑叶降血糖有效组分组合物，以桑科植物桑树的叶子为原料，按下述顺序的步骤制备得到：
(1)桑叶除去杂质，低温干燥后粉碎称重，得桑叶粉末；
(2)桑叶粉末用有机溶剂提取，除去脂溶性部分，然后过滤，取渣去液；
(3)滤渣挥去有机溶剂，得桑粉渣；
(4)桑粉渣用热水提取，过滤，滤液加入乙醇使浓度为40％～80％，然后过滤，得上清液和沉淀。
(5)步骤(4)中所得的上清液用阳离子树脂交换，再用阴离子树脂交换除去杂质。
(6)步骤(5)中阳离子树脂用0.4M～0.7M的氨水溶液洗脱，收集阳离子树脂的氨水洗脱液，浓缩，浓缩液上阴离子树脂，用水溶液洗脱，收集阴离子树脂水洗脱液，浓缩，干燥，即得桑叶生物碱，其中主要生物碱成分1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。
(7)步骤(4)中所得的沉淀用水溶解，再加入三氯乙酸除去蛋白，离心；
(8)步骤(7)中上清液用NaOH溶液调pH＝7，离心；
(9)步骤(8)中上清液透析，然后加入乙醇使溶液浓度为40％～80％，沉淀，过滤；
(10)步骤(9)中所得沉淀，干燥，即得桑叶多糖，多糖分子量大于100万。
(11)合并步骤(6)所得生物碱和步骤(10)所得桑叶多糖，即得桑叶降血糖有效组分组合物；
本发明步骤(2)中所用有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯、甲醇、无水乙醇；步骤(5)中所用阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001×8、大孔弱酸丙烯酸系阳离子交换树脂D152、弱酸1D1阳离子交换树脂724、阳离子交换树脂732；所用阴离子交换树脂为弱碱330阴离子交换树脂701、强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂201×4。
本发明制备方法中，凡涉及干燥时，可采用烘箱干燥、真空干燥、冷冻干燥和/或喷雾干燥。本发明制备方法中，凡涉及浓缩工艺时，可采用减压浓缩、常压浓缩。本发明方法中凡涉及沉淀或析出物与液体分离时，可采用离心分离、膜分离和/或常压或减压过滤。粉碎可采用单独粉碎和/或混合粉碎。本发明中凡涉及提取时，可采用超声提取、加热回流提取、或浸提。
本发明固态呈浅棕色或浅黄色粉末。可研制成系列具有降血糖作用的药品或功能性食品，工艺过程简单，成本低，药效显著，食用方便并且可以充分利用自然资源。
具体实施方式
以下结合实施例及药效试验对本发明作进一步的说明。
桑叶降血脂有效组分组合物制备实例如下：
实例1
取桑科植物桑树的叶子2kg，除去杂质，低温干燥后粉碎，加入3倍体积的石油醚提取，除去脂溶性成分，然后过滤，取渣去液。滤渣挥去有机溶剂，得桑粉渣。桑粉渣加入5倍体积热水提取，过滤，去渣取液。滤液中加入乙醇使浓度为40％，沉淀，过滤，得上清液和沉淀。上清液先用001×8(强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂)纯化，用0.4M的氨水洗脱，收集洗脱液，浓缩，再用701(弱碱330阴离子交换树脂)纯化，用水溶液洗脱。洗脱液浓缩干燥后得桑叶生物碱，其中1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。沉淀用水溶解后加入三氯乙酸除蛋白，离心。取上清液用NaOH溶液调pH＝7，再离心。取上述上清液透析，透析后加入乙醇使浓度为40％，沉淀过滤。沉淀干燥后即得浅黄色桑叶多糖粉末。合并桑叶生物碱和桑叶多糖即得桑叶降血糖有效组分组合物
实例2
取桑科植物桑树的叶子2kg，除去杂质，低温干燥后粉碎，加入5倍体积的乙酸乙酯提取，除去脂溶性成分，然后过滤，取渣去液。滤渣挥去有机溶剂，得桑粉渣。桑粉渣加入6倍体积热水提取，过滤，去渣取液。滤液中加入乙醇使浓度为50％，沉淀，过滤，得上清液和沉淀。上清液先用D152(大孔弱酸丙烯酸系阳离子交换树脂)纯化，用0.5M的氨水洗脱，收集洗脱液浓缩，再用201×4(强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂)纯化，用水溶液洗脱。洗脱液浓缩干燥后得桑叶生物碱，其中1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。沉淀用水溶解后加入三氯乙酸除蛋白，离心。取上清液用NaOH溶液调pH＝7，再离心。取上述上清液透析，透析后加入乙醇使浓度为80％，沉淀、过滤。沉淀干燥后即得浅黄色桑叶多糖粉末。合并桑叶生物碱和桑叶多糖即得桑叶降血糖有效组分组合物。
实例3
取桑科植物桑树的叶子2kg，除去杂质，低温干燥后粉碎，加入5倍体积的甲醇提取，除去脂溶性成分，然后过滤，取渣去液。滤渣挥去有机溶剂，得桑粉渣。桑粉渣加入8倍体积热水提取，过滤，去渣取液。滤液中加入乙醇使浓度为60％，沉淀，过滤，得上清液和沉淀。上清液先用724(弱酸1D1阳离子交换树脂)纯化，用0.6M的氨水洗脱，收集洗脱液浓缩，再用201×4(强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂)纯化，用水溶液洗脱。洗脱液浓缩干燥后得桑叶生物碱，其中1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。沉淀用水溶解后加入三氯乙酸除蛋白，离心。取上清液用NaOH溶液调pH＝7，再离心。取上述上清液透析，透析后加入乙醇使浓度为70％，沉淀，过滤。沉淀干燥后即得浅黄色桑叶多糖粉末。合并桑叶生物碱和桑叶多糖即得桑叶降血糖有效组分组合物。
实例4
取桑科植物桑树的叶子2kg，除去杂质，低温干燥后粉碎，加入5倍体积的无水乙醇提取，除去脂溶性成分，然后过滤，取渣去液。滤渣挥去有机溶剂，得桑粉渣。桑粉渣加入7倍体积热水提取，过滤，去渣取液。滤液中加入乙醇使浓度为70％，沉淀，过滤，得上清液和沉淀。上清液先用001×8(强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂)纯化，用0.7M的氨水洗脱，收集洗脱液浓缩，再用701(弱碱330阴离子交换树脂)纯化，用水溶液洗脱。洗脱液浓缩干燥后得桑叶生物碱，其中1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。沉淀用水溶解后加入三氯乙酸除蛋白，离心。取上清液用NaOH溶液调pH＝7，再离心。取上述上清液透析，透析后加入乙醇使溶液浓度为60％，沉淀，过滤。沉淀干燥后即得浅黄色桑叶多糖粉末。合并桑叶生物碱和桑叶多糖即得桑叶降血糖有效组分组合物。
实例5
取桑科植物桑树的叶子2kg，除去杂质，低温干燥后粉碎，加入4倍体积的无水乙醇提取，除去脂溶性成分，然后过滤，取渣去液。滤渣挥去有机溶剂，得桑粉渣。桑粉渣加入10倍体积热水提取，过滤，去渣取液。滤液中加入乙醇使浓度为80％，沉淀，过滤，得上清液和沉淀。上清液先用724(弱酸1D1阳离子交换树脂)纯化，用0.8M的氨水洗脱，收集洗脱液浓缩，再用201×4(强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂)纯化，用水溶液洗脱。洗脱液浓缩干燥后得桑叶生物碱，其中1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)含量不少于50％。沉淀用水溶解后加入三氯乙酸除蛋白，离心。取上清液用NaOH溶液调pH＝7，再离心。取上述上清液透析，透析后加入乙醇使溶液浓度为50％，沉淀，过滤。沉淀干燥后即得浅黄色桑叶多糖粉末。合并桑叶生物碱和桑叶多糖即得桑叶降血糖有效组分组合物。
                      第二部分药效试验
本发明提供的桑叶降血糖有效组分组合物有良好的降血糖作用。已经过动物试验证明，药效试验报告如下：
1、样品：桑叶降血糖有效组分组合物。
2、试验动物：昆明种小白鼠：雌雄兼用，体重(22±2)g，由江苏大学动物中心提供。
3、试验方法：
(1)糖尿病模型的制备：健康小鼠，绝食24h后，腹腔注射新鲜配制的四氧嘧啶200mg/kg，3天后取尾血测血糖，选取血糖值在14.9mmol/L以上的即为糖尿病模型小鼠。
(2)形成糖尿病模型的小鼠，按10只为一组，分别腹腔注射实例1～实例5的桑叶降血糖有效组分组合物，于第八天测血糖。
(3)血糖值测定：使用ONE TOUCHTM BasicTM Plus稳捷基础倍加型血糖监测仪测定。
4、测试结果：
采用不同工艺获得的桑叶降血糖有效组分组合物降糖试验结果见表1。
                 表1不同实例的桑叶降血糖有效组分组合物的降糖效果
  组别   剂量   给药前血糖值   给药后血糖值   血糖下降百分率   n
  (mg/kg，i.p.)   (mmol/L)   mmol/L   ％
  正常对照   同容量   4.96±0.93   4.75±0.75   0.00   10
  糖尿病对照   同容量   25.25±4.75   24.35±5.98   0.03±15.40   10
  实例1   100   24.21±5.31   15.40±9.20##   38.32±31.58*   10
  实例2   100   20.85±4.35   14.19±7.17##   34.47±25.67*   10
  实例3   100   21.41±6.67   15.10±6.21#   26.44±24.44*   10
  实例4   100   18.67±4.37   11.7±5.67#   35.22±15.22*   10
  实例5   100   23.12±3.15   13.58±2.15#   41.26±13.45*   10
与糖尿病对照组相比*P＜0.05、**P＜0.01；
给药前后与给药后自身相比#P＜0.05、##P＜0.01
试验结果表明：几种桑叶降血糖有效组分组合物，均有明显的降血糖作用。
a：给药前血糖值，b：给药后血糖值。

Claims (3)

1、一种桑叶降血糖有效组分组合物，其特征在于该有效组分组合物为桑叶多糖和桑叶生物碱，固态呈浅棕色或浅黄色粉末，其中桑叶多糖分子量大于100万道尔顿，重量百分比为20～80％，桑叶生物碱中1-脱氧野尻霉素含量大于50％，重量百分比为80～20％。
2、权利要求1所述的一种桑叶降血糖有效组分组合物的制备方法，其特征在于以桑科植物桑树的叶子为原料，按下述顺序的步骤制备得到：
①桑叶除去杂质，低温干燥后粉碎称重，得桑叶粉末；
②桑叶粉末用有机溶剂提取，除去脂溶性部分，然后过滤，取渣去液；
③滤渣挥去有机溶剂，得桑叶粉渣；
④桑叶粉渣用热水提取，过滤，滤液加入乙醇使浓度为40％～80％，然后过滤，得上清液和沉淀。
⑤将所得的上清液用阳离子树脂交换，再用阴离子树脂交换除去杂质。
⑥将阳离子树脂用0.4M～0.8M的氨水溶液洗脱，收集阳离子树脂的氨水洗脱液，浓缩，浓缩液上阴离子树脂，用水溶液洗脱，收集阴离子树脂水洗脱液，浓缩，干燥，即得桑叶生物碱，其中主要生物碱成分1-脱氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量不少于50％。
⑦将所得的沉淀用水溶解，再加入三氯乙酸除去蛋白，离心，得上清液；
⑧将步骤⑦得到的上清液用NaOH溶液调pH＝7，离心；
⑨将步骤⑧得到的上清液透析，然后加入乙醇使溶液浓度为40％～80％，沉淀，过滤；
⑩将步骤⑨中所得沉淀，干燥，即得桑叶多糖；
(11)合并步骤⑥所得生物碱和步骤⑩所得桑叶多糖，即得桑叶降血糖有效组分组合物；
上述所用有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯、甲醇、无水乙醇；所用阳离子交换树脂为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001×8、大孔弱酸丙烯酸系阳离子交换树脂D152、弱酸1D1阳离子交换树脂724、阳离子交换树脂732；所用阴离子交换树脂为弱碱330阴离子交换树脂701、强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂201×4。
3.根据权利要求1所述的一种桑叶降血糖有效组分组合物的制备方法，其特征在于采用烘箱干燥、真空干燥、冷冻干燥和/或喷雾干燥；采用减压浓缩或常压浓缩工艺；采用离心分离、膜分离和/或常压或减压过滤进行沉淀或析出物与液体分离；采用单独粉碎和/或混合粉碎；采用超声提取、加热回流提取或浸提。
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