CN101129440A - 藏药大花红景天多糖降糖肠溶微丸及制备方法 - Google Patents

Abstract

藏药大花红景天多糖降糖肠溶微丸是由以西藏产大花红景天为原料，采用水提醇沉法从中提取多糖部位。经酶法脱蛋白、透析、醇沉、洗涤、真空干燥等操作后制得红景天粗多糖，再经Sephadex G－100凝胶树脂柱层析得到红景天精制多糖。在利用包括薄层色谱、红外光谱、紫外光谱、核磁共振等在内的多种波谱学手段对红景天多糖的组成、结构特点进行探讨的基础上，采用挤出滚圆法和薄膜包衣法制备了肠溶型红景天多糖微丸。经动物试验证实这种产品具有较为明显的降糖活性。

Description

藏药大花红景天多糖降糖肠溶微丸及制备方法

技术领域：

本发明所涉及到的是药物化学和药物制剂技术领域，尤其是建立在对藏药大花红景天提取纯化基础上的以红景天多糖缓释微丸为代表的缓释制剂。

背景技术：

景天科红景天属植物红景天品种多、分布广。其中在我国的东北、西藏、青海、四川等地就分布有高山红景天、大花红景天、菱叶红景天、狭叶红景天、蔷薇红景天以及长鞭红景天等品种。由于红景天通常生长在高寒特殊环境而具有抗疲劳、抗缺氧、提高免疫力等特殊功效[宋月英、韩慧文、郝素云，红景天研究进展，武警医学院学报，2003，13(1)]。对红景天药材中化学成分的研究，已有一些报道[彭江南、马成禹、葛泳潮，大花红景天化学成分研究，中草药，1996，26(4)；陈纪军，陈金素，陈泗英等，德钦红景天化学成分，云南植物研究，1999，21(4)；田军，鲍燕燕，王瑞冬，红景天挥发油化学成分研究，军事医学科学院院刊，2000，24(1)]。结果表明，红景天药材中含有多种类型的化学成分，除了含有小分子化合物红景天苷及其苷元酪醇、黄酮类的草质素苷等类成分以外，还含有大分子化合物多糖、鞣质及蛋白质等类成分。目前对红景天资源的开发制剂多为与其它补益药配伍的粗制剂[郗爱旗，张鑫生，吕雪梅，藏药三普红景天胶囊对高原红细胞增多症的研究，中草药，2000，31(6)]。由于普遍认为红景天苷是其主要有效成分[张俊钰、周斌、江涛等，我国红景天提取工艺和含量测定研究概况，中药材，2003，26(12)]，因此，对红景天制剂的工艺设计方案，一般都是针对红景天苷部位，造成了这一宝贵药材资源的其它活性部位的大量浪费。虽然文献“大花红景天有效成分制剂及制备方法”(专利申请号：00115423.0)以水-醇混合溶剂采用一步法同时提取了黄酮、多糖等类成分，制成了含小分子化合物制剂和含大分子化合物制剂，但并未突出多糖本身的结构和药理活性。由于多糖类成分在体内易降解、生物利用度低，通常难以制成口服制剂[李西林、南艺蕾，红景天多糖化学药理研究进展，中国中医药信息杂志，2006，13(3)]。在文献“红景天多糖注射制剂及其制备方法”(专利申请号200510056777.0)中，将红景天多糖制成了具有提高免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤作用的注射剂，但有个别实验动物出现过敏反应。在该文献的药理研究中未指明红景天药材的种属和产地，以及所用红景天多糖的组成、结构特征。一般而言，药材的品种、产地与其中所含有的化学成分、药理活性密切相关，同样与其中多糖的单糖组成、相对含量、连接方式以及生物活性都密切相关。鉴于此，本项发明以素有“神草”之称的藏医常用药材大花红景天(Rhodiola crenulata)为对象，从中提取并分离纯化了其中的多糖类成分，在化学结构和理化特征研究的基础上，制成了能用于口服的肠溶型缓释微丸制剂，这种制剂能够在充分保证质量和生物利用度的基础上，克服注射对患者造成的痛苦以及有可能出现的不良反应。初步的药效学研究结果表明，大花红景天多糖缓释微丸具有明显的降低血糖的作用。本发明提高了药材的利用率和制剂的生物利用度，适宜于工业化生产。

发明内容：

通过对西藏产大花红景天(Rhodiola crenulata)药材的提取和纯化，得到了精制多糖并进行了组成和结构探讨，以此为基础，制成了大花红景天多糖缓释微丸。药效学试验证实该制剂具有明显的降血糖作用。

大花红景天多糖缓释微丸的制备工艺过程主要包括提取纯化、化学结构和理化特征考察和制剂成型三个阶段，本发明通过以下方法实现：

1.大花红景天多糖的提取纯化

1.1采用水提取乙醇沉淀法提取红景天多糖。将洗净、阴干后的药材切碎，打成粗粉。将药材粗粉和水按照料液比S∶L＝1∶8～1∶12的比例混合后，温度保持在60～100℃下提取2～3次，合并水提取液，加热浓缩至1g药材/ml左右的比例，再在浓缩液中加入95％乙醇，使醇浓度达到60～～80％进行沉淀，静置、过滤，真空干燥后得红景天多糖提取物。

1.2红景天多糖提取物的纯化。将所得红景天多糖提取物用蒸馏水复溶，滤除杂质，经采用木瓜蛋白酶-鞣酸联合法脱蛋白。具体做法是：称取木瓜蛋白酶100mg溶于100ml蒸馏水中，以1∶100体积比加入到多糖水溶液中，不断搅拌，在37℃下恒温5～7小时，再加入鞣酸1％(质量/体积)，振荡、静置，高速离心除去蛋白质。然后用去离子水透析48小时，再次醇沉、无水乙醇洗涤、真空干燥后制得红景天粗多糖。蒸馏水将其溶解后上SephadexG-100凝胶柱层析，用含NaCl浓度为0.05mol/L的溶液洗脱，硫酸-苯酚法在线检测，收集多糖洗脱液，通过透析、浓缩、真空干燥后得到大花红景天精制多糖。

2.大花红景天多糖的结构和理化性质

红景天多糖为一种天然高分子杂多糖，分子结构十分复杂，有关结构的研究还不成熟，而大花红景天多糖的结构研究也更是很少见，为此，我们进行了比较深入的研究，得到了一些有意义的结果。

2.1性状：淡黄色、无味疏松状粉末；

2.2通过紫外光谱检测，多糖中无蛋白质和核酸存在，经三氟乙酸酸水解、薄层色谱、气相色谱分析，发现该多糖除了主要由阿拉伯糖、鼠李糖组成以外，还含有少量半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖和半乳糖醛酸等共七种单糖组成，以上各单糖的相对摩尔比值为2.96∶1.00∶0.58∶0.08∶0.26∶0.15。

2.3经高效凝胶渗透色谱-示差检测法测定，重均分子量为27876Dalton，数均分子量为13562Dalton。

2.4红外光谱图中，3424.83，2934.10，1742.11，1438.96，1261.40，1103.54，832.86处均有多糖的特征吸收，1742.11处为糖醛酸的特征吸收，表明为一酸性多糖。

2.5经核磁共振氢谱测定，红景天多糖中各单糖的连接以α构型为主。

3.大花红景天多糖缓释微丸的制备

3.1微丸的制备

以得到的大花红景天粗多糖进行制剂学研究。采用挤出滚圆法，以聚维酮(PVP)为辅料，按照粗多糖∶PVP＝10∶1～20∶1(重量比)的比例混合均匀，以60％～80％的乙醇为润湿粘合剂，通过挤出机将其挤成圆条状，挤出速率为20～30转/分，再到滚圆机将其切割成球粒状，滚圆速率为20～30转/分，滚圆3～5分钟后，筛析制得粒径范围在2.5～3.5mm之间的微球丸。

3.2微丸包衣

3.2.1包衣液的配制

以Eudragit RL100和EudragitRS100两种聚丙烯酸树脂混合物(1∶3～1∶5)为缓释材料，同时溶于70～90％乙醇溶液中，然后再加入2～10％聚乙二醇-6000和10～30％的滑石粉，超声匀化5～10分钟后，然后再加入70～90％乙醇溶液至其总量为聚丙烯酸树脂重量的15～25倍，充分搅拌，80目筛网滤过。

3.2.2包衣条件

片床温度30～40℃，进风温度70～80℃，

雾化压力2～3kg/cm²，进风量3000～3200m³/h，

锅速20～30转/分，

3.2.3操作方法

将微丸置于包衣锅内，以2～5转/分的低速转动并通入空气预热10分钟左右，再调整至工作转速，喷入包衣液，当微丸表面覆盖有一层包衣液后，停止喷液，调高转速至20～30转/分，维持3～5分钟后，送冷风吹干，然后继续喷涂包衣液，如前所述，喷一层，吹干一层，当微丸增重5～20％时即达到包衣终点。取出包衣后的微丸，冷却、干燥，筛析40-16目微丸。

本发明的特点：

1.采用水提醇沉法，结合酶解-鞣酸联合法脱蛋白工艺，得到了西藏产大花红景天粗多糖，并通过进一步的柱层析获得了精制多糖；

2.针对红景天多糖尤其是西藏产大花红景天多糖研究还不成熟的情况，通过细致的分离纯化工作，获得了其组成、结构的基本特征；

3.将红景天多糖制成了肠溶型微丸，能够克服一般的多糖类口服制剂在体内容易降解的不足，同时也避免了使用注射剂给患者带来的痛苦和可能产生的不良反应；

4.药效学试验的结果已经证实，这种肠溶型的红景天多糖微丸具有明显的降糖作用。

实施例以1公斤大花红景天药材为原料，经筛选、洗净、晾干、粉碎等步骤处理后，采用水提醇沉法，提取多糖部位，并结合酶解-鞣酸脱蛋白工艺，经过透析、醇沉、无水乙醇洗涤、真空干燥等操作制成大花红景天粗多糖粉末27克。

微丸制备的处方组成：多糖粉末27克

PVP                 1.5克

                    80％的乙醇溶液20毫升

包衣液的处方组成：  EudragitRS1003克，

                    Eudragit RL100 1克，

                    聚乙二醇-6000，3克

                    滑石粉，5克

                    75％乙醇溶液60毫升

肠溶型红景天多糖微丸的制备包括红景天多糖微丸的制备和对微丸的薄膜包衣两个步骤组成，具体如下：

(1)按照3.1项下的操作条件，取经纯化的红景天多糖粉末27克，与PVP 1.5克混合均匀，以80％的乙醇为润湿粘合剂，通过挤出机将其挤成圆条状以后，再到滚圆机将其切割成球粒状，滚圆后，制得粒径范围在2.5～3.5mm之间的微球丸。

(2)按照3.2项下的操作条件，将上述微球丸将微丸置于包衣锅内，预热后喷入包衣液。取出包衣后的微丸，冷却、干燥，筛析得40-16目微丸。

药效学研究

实验动物为昆明种小鼠100只，雌雄各半，体重18～22g：由华西动物实验中心提供。将实验动物分成5组，每组雌雄各半，每组20只。将小鼠空腹24小时后，称重小鼠，按照200mg/kg体重给小鼠腹腔注射四氧嘧啶，48小时后达到高血糖标准。经尾静脉采样检测表明，各样品血糖值均超过10mmol/L体重，符合高血糖模型的要求。

造模成功的高血糖小鼠，每只称重，按照100mg/kg、200mg/kg、300mg/kg的剂量灌胃肠溶型包衣多糖微丸；其余两组分别以口腔灌胃方式给予相同体积的生理盐水和降糖宁(200mg/kg)溶液，分别作为空白对照组和阳性药物治疗对照组。实验小鼠分组情况如下：

第一组：正常空白对照组；每天生理盐水灌胃，每天正常饮食。

第二组：阳性对照组；每天按200mg降糖宁/kg体重的剂量灌胃，正常饮食。

第三组：低剂量给药组1；每天按100mg多糖/kg体重的剂量用微丸灌胃，正常饮食。

第四组：中剂量给药组2；每天按200mg多糖/kg体重的剂量用微丸灌胃，正常饮食。

第五组：高剂量给药组3；每天按300mg多糖/kg体重的剂量用微丸灌胃，正常饮食。

实验数据见表一(各指标以均值±标准差

表示，数据比较用t检验)。

表一肠溶红景天多糖微丸对四氧嘧啶糖尿病小鼠的影响

注：阳性对照组和给药组2、给药组3组间概率P＜0.01；与给药组1P＞0.05

用本发明制备的制剂进行药效学试验，初步结果显示可降低由四氧嘧啶所致高血糖小鼠的血糖值，并呈现出一定的量效关系。

Claims (3)

1.一种红景天多糖降糖肠溶微丸，其特征在于，该制剂是主要由多糖微丸及其外层肠溶薄膜衣构成。

2.按照权利要求1所述的制剂的制备方法，其特征在于，由以下多个步骤组成：

(1)采用水提取乙醇沉淀法提取得到红景天多糖提取物，然后采用用蒸馏水复溶，滤除杂质，经酶法脱蛋白、透析、醇沉、洗涤、真空干燥等操作后制得红景天粗多糖。经SephadexG-100凝胶柱层析，收集洗脱液，通过浓缩，真空干燥后得到了一种精制的红景天多糖；

(2)采用包括薄层色谱、红外光谱、紫外光谱、核磁共振等在内的多种波谱学手段，对红景天精制多糖的组成、结构进行了探讨。结果表明，该多糖主要由阿拉伯糖、鼠李糖组成，此外，还含有少量半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖和半乳糖醛酸等等单糖成分，与以上七种单糖对应的相对摩尔比值为2.96∶1.00∶0.58∶0.08∶0.26∶0.15；经高效凝胶渗透色谱-示差检测法测定，该多糖重均分子量为27876Dalton、数均分子量为13562Dalton；多糖中各单糖的连接以α构型为主。

(3)制剂的制备

1)微丸的制备采用挤出滚圆法，按照粗多糖∶PVP＝10∶1～20∶1(重量比)的比例混合均匀，以60％～80％的乙醇为润湿粘合剂，通过挤出机将其挤成圆条状，挤出速率为20～30转/分，再到滚圆机将其切割成球粒状，滚圆速率为20～30转/分，滚圆3～5分钟后，制得粒径范围在2.5～3.5mm之间的微球丸；

2)微丸包衣

取所需微丸置于包衣锅内，经空气预热后，在工作转速下，喷入包衣液，喷一层，吹干一层，当微丸增重5～20％时即达到包衣终点。取出包衣后的微丸，冷却、干燥，筛析40-16目微丸。

3.按权利要求1所述的红景天多糖降糖肠溶微丸既可用作降糖药物，也可用作保健食品。