CN113956303A - 一种从红景天中同时提取红景天苷、络塞维和多糖的方法 - Google Patents

一种从红景天中同时提取红景天苷、络塞维和多糖的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种从红景天中同时提取红景天苷、络塞维和多糖的方法，该方法包括乙醇回流提取红景天原料，分离残渣及滤液，滤液浓缩得到含有红景天苷和络塞维的粗提物；残渣水提，过滤，浓缩，醇沉得多糖粗提物；将含有红景天苷和络塞维的粗提物通过非极性大孔树脂柱，分别用水、不同浓度的乙醇洗脱，分别收集洗脱液，得多糖粗品、红景天苷粗品、络塞维粗品；合并多糖粗提物及洗脱液多糖粗品，除蛋白、色素，得红景天多糖提取物；红景天苷粗品、络塞维粗品分别经聚酰胺柱，有机溶剂反复重结晶，得红景天苷、络塞维纯品；该方法能够高效地同时提取红景天苷、络塞维和多糖。

Description

一种从红景天中同时提取红景天苷、络塞维和多糖的方法
技术领域
本发明涉及红景天成分提取，具体地，涉及一种从红景天中同时提取红景天苷、络塞维和多糖的方法。
背景技术
红景天是红景天科红景天书多年生草本植物，通常以干燥根和根茎入药。红景天是我国传统中药材，也是东北道地药材之一，由于药材野生资源较少，属珍稀药用植物，有“雪域人参”之称。因此人工栽培的红景天是市面上资源的主要来源，鉴于当前环境污染严重，在栽培过程中可能富集重金属，另外加工、贮存和生产炮制等过程中可能带入有害元素，原料中重金属富集，在提取物中会成倍增加，有超标的风险，虽然中药材规范化种植是从源头上解决问题的关键，但这个过程复杂且漫长，因此为保障提取物的安全性，有必要对提取物进行重金属去除，目前用于中药提取液重金属的去除主要有膜分离、大孔树脂吸附、超临界CO2萃取等技术，通常成本较高。
红景天中的主要化学成分有苯乙醇类如红景天苷、酪醇；苯丙素类如络塞维；黄酮类、谷甾醇、多糖等。红景天苷、络塞维是红景天中主要的活性成分，主要从根茎中提取，经科学研究及临床应用证明，红景天苷具有增强运动耐力，抗氧化、抗糖尿病、抗肺炎及哮喘，抗癌等功效。红景天多糖在近些年研究中发现其具有药理作用，而通常在提取红景天或络塞维后残渣一般会丢弃，经研究发现残渣中含有大量的多糖，为了提高红景天的资源综合利用率，使用残渣提取多糖，可实现资源利用最大化，节约了成本。
申请号CN201710664786.0的中国专利文献公开了一种从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维的方法，红景天原料使用含0.5％-10％低共熔剂的酒精水溶液提取，提取液利用混合大孔树脂膨胀床技术，结合梯度洗脱技术，分别制得红景天苷和络塞维粗提液，然后将红景天苷和络塞维粗提取液分别再次利用混合大孔树脂膨胀床技术，制备得到红景天苷和络塞维提取物。
上述方法虽然能够得到红景天苷和络塞维提取物，但是存在以下缺陷：1)首先提取液中加入了四乙基氯化铵、葡萄糖等物质，由于低共熔溶剂黏度高，回收有一定的困难，而且由于溶剂残留具有一定的安全隐患，在一定程度上增加了成本；2)其次大孔树脂膨胀床技术区别于传统流化床，需要特殊的吸附剂和设备，这就需要对工厂原有设备进行改造，一次性投入较大；3)再者该发明只能同时制备红景天苷和络塞维，并未充分利用资源。因此要实现有效综合利用资源，可实现工业化生产，就需要开发出从红景天中同时制备多种有效成分的有效、低成本的工艺。
发明内容
本发明的目的是提供一种从红景天中同时提取红景天苷、络塞维和多糖的方法，该方法能够高效地同时提取红景天苷、络塞维和多糖。
为了实现上述目的，本发明提供了一种从红景天中同时提取红景天苷、络塞维和多糖的方法，该方法包括：
1)将红景天生药、乙醇进行多次回流提取，每次提取后过滤得到滤液和残渣，后一次提取的底物为前一次提取得到的滤渣，将多次得到的滤液进行合并；将合并后的所述滤液通过吸附剂柱层析，收集流出液，去除乙醇(如采用减压真空干燥的方式去除乙醇，温度可以为50-70℃，压力可以为0.5-2kpa)，以得到含有红景天苷和络塞维的粗提物；
2)将提取后得到的残渣和水混合后，进行至少一次回流提取，每次提取后过滤得到滤液和残渣，后一次提取的底物为前一次提取得到的滤渣，将多次得到的滤液进行合并；将合并后的所述滤液浓缩，接着将浓缩液和乙醇混合、静置、分离收集沉淀；
3)将所述粗提物通过水溶解，去除不溶物后，通过非极性大孔树脂柱进行吸附，依次使用水、体积浓度为5-20％乙醇、体积浓度为30-60％乙醇进行洗脱，并分别收集洗脱液，分别对应为水洗脱液、5-20％乙醇洗脱液和30-60％乙醇洗脱液；
4)将所述水洗脱液、沉淀、氯化钙混合、静置，过滤后取滤液浓缩得到上柱液，将所述上柱液通过离子交换大孔树脂柱进行吸附、水洗，收集水洗液，浓缩以得到红景天粗多糖；
5)将所述5-20％乙醇洗脱液去除乙醇后通过水溶解，接着通过聚酰胺柱进行吸附、水洗和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得红景天苷提取物；
6)将所述30-60％乙醇洗脱液去除乙醇后通过水溶解，接着通过聚酰胺柱进行吸附、水洗和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得络塞维提取物。
在上述技术方案中，本发明提供的方法包括乙醇回流提取红景天原料，分离残渣及滤液，滤液浓缩得到含有红景天苷和络塞维的粗提物；残渣水提，过滤，浓缩，醇沉得多糖粗提物；将含有红景天苷和络塞维的粗提物通过非极性大孔树脂柱，分别用水、不同浓度的乙醇洗脱，分别收集洗脱液，得多糖粗品、红景天苷粗品、络塞维粗品；合并多糖粗提物及洗脱液多糖粗品，除蛋白、色素，得红景天多糖提取物；红景天苷粗品、络塞维粗品分别经聚酰胺柱，有机溶剂反复重结晶，得红景天苷纯品。
其中，通过吸附剂柱层析去除重金属，如壳聚糖中含有羟基和氨基可以吸附重金属，活性炭表面积大可以吸附重金属，利用活性炭在一定条件下对重金属有吸附而有效成分吸附较少的特性，可使用活性炭去除重金属。
在步骤3)和4)中，利用苯乙醇类成分和苯丙素类成分的极性大小不同，使用大孔树脂进行分离纯化时，洗脱剂使用不同浓度的乙醇可分别收集两类成分，现有水洗液在现有技术中一般作为废液进行处理，而发明人研究发现水洗液中多糖含量较高，收集进行进一步纯化，用有限的资源，实现资源的最大化利用。
由此，与现有技术相比，本发明取得了以下的有益效果：
1、本发明采用传统溶剂法提取有效成分，具有如下优势，所用的提取溶剂均为食品级，安全性高，且易获得，所得提取物溶剂残留低。
现有技术中有使用新型溶剂如低共熔溶剂、离子液体等，虽然可在一定程度上提高有效成分的提取率，但是由于该类溶剂使用条件苛刻，黏度大，回收困难，安全性不能保证。
2、在提取液中加入吸附剂，采取柱外保温，提取液匀速通过，利用吸附剂对重金属具有吸附作用，在一定浓度乙醇条件下对有效成分吸附较少的特点，可以快速去除重金属等污染物，保障了提取物的安全性。吸附剂经过活化处理后可实现重复利用，具有减少步骤、方便操作、吸附剂可重复利用的特点，大大节约了成本；而现有技术采用添加粉末活性炭，需过滤，且粉末活性炭回收利用不方便。
3、步骤2)使用残渣提取多糖，有以下优势：首先初次提取时大部分水溶性色素已经被提取出，简化了多糖纯化去杂的步骤；其次在现有技术中残渣一般被丢弃，本发明充分利用了残渣中含有大量多糖的特点，充分利用资源，实现有现资源最大利用化。
4、步骤3)大孔树脂水洗液含有大量多糖，在现有技术中水洗液一般直接废弃，本发明经研究发现水洗液中含有大量多糖，可进行充分利用。
综上可以得知，本发明的提取方法具有高效、安全和成本低的优势，同时得到的提取物的纯度也十分理想，具体为红景天粗多糖的纯度为40-60％，红景天苷的纯度为85-95％，络塞维的纯度为90-98％。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
本发明提供了一种从红景天中同时提取红景天苷、络塞维和多糖的方法，该方法包括：
1)将红景天生药、乙醇进行多次回流提取，每次提取后过滤得到滤液和残渣，后一次提取的底物为前一次提取得到的滤渣，将多次得到的滤液进行合并；将合并后的所述滤液通过吸附剂柱层析，收集流出液，去除乙醇，以得到含有红景天苷和络塞维的粗提物；
2)将提取后得到的残渣和水混合后，进行至少一次回流提取，每次提取后过滤得到滤液和残渣，后一次提取的底物为前一次提取得到的滤渣，将多次得到的滤液进行合并；将合并后的所述滤液浓缩，接着将浓缩液和乙醇混合、静置、分离收集沉淀；
3)将所述粗提物通过水溶解，去除不溶物后，通过非极性大孔树脂柱进行吸附，依次使用水、体积浓度为5-20％乙醇、体积浓度为30-60％乙醇进行洗脱，并分别收集洗脱液，分别对应为水洗脱液、5-20％乙醇洗脱液和30-60％乙醇洗脱液；
4)将所述水洗脱液、沉淀、氯化钙混合、静置，过滤后取滤液浓缩得到上柱液，将所述上柱液通过离子交换大孔树脂柱进行吸附、水洗，收集水洗液，浓缩以得到红景天粗多糖；
5)将所述5-20％乙醇洗脱液去除乙醇后通过水溶解，接着通过聚酰胺柱进行吸附、水洗和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得红景天苷提取物；
6)将所述30-60％乙醇洗脱液去除乙醇后通过水溶解，接着通过聚酰胺柱进行吸附、水洗和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得络塞维提取物。
在本发明中，为了进一步提高红景天苷、络塞维的纯度，优选地，所述方法还包括：将所述红景天苷提取物、络塞维提取物分别进行重结晶，依次得到红景天苷纯品、络塞维纯品。
在上述重结晶中，重结晶的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高产品的纯度，优选地，所述重结晶至少满足以下条件：重结晶的次数为2-3次，在单次重结晶中，待结晶物、溶剂的重量比为1：10-30，在8-12℃下静置8-12h进行结晶。
其中，所述重结晶中的溶剂的种类也可以在宽的范围内选择，考虑到溶剂的回收以及产品的纯度，优选地，所述重结晶中的溶剂选自乙醇、甲醇或乙酸乙酯。
在本发明中，所述红景天生药的规格也可以在宽的范围内选择，但是为了提高红景天苷和络塞维的提取产率，优选地，在步骤1)中，所述红景天生药至少满足以下条件：平均粒径为30-60目。
在上述的步骤1)中，对所述乙醇的浓度不作具体限定，但是为了进一步提高红景天苷和络塞维的提取率，优选地，在步骤1)中，所述乙醇的浓度为体积分数50-70％。
在上述的步骤1)中，对回流提取的次数不作具体限定，但是为了进一步提高红景天苷和络塞维的提取率，优选地，在步骤1)中，回流提取的次数为2-4次。
在上述的步骤1)中，吸附剂的用量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高重金属去除率，优选地，在步骤1)中，所述吸附剂柱中的吸附剂、红景天生药的重量比为0.5-1：100。
在上述实施方式的基础上，所述吸附剂柱层析的条件也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高重金属去除率，优选地，在步骤1)中，所述吸附剂柱层析至少满足以下条件：吸附剂的平均粒径为20-100目，柱温为60-80℃，上柱流速为1-3BV/h。
其中，在本发明中，所述吸附剂的种类也可以在宽的范围内变化，但是为了进一步提高重金属去除率，优选地，所述吸附剂选自活性炭、壳聚糖中的至少一种。
在本发明的步骤2)中，浓缩的程度也可以在宽的范围内进行控制，但是为了进一步提高多糖的提取率，优选地，在步骤2)中，所述浓缩液的体积为滤液体积的1/5-1/4。
在本发明的步骤2)中，所述乙醇的规格和用量可以在宽的范围内进行控制，但是为了进一步提高多糖的提取率，优选地，在步骤2)中，所述乙醇为无水乙醇，并且所述乙醇添加后体系中乙醇的体积分数为60-80％。
在本发明的步骤2)中，水的用量可以在宽的范围内进行控制，但是为了进一步提高多糖的提取率，优选地，在步骤2)中，所述残渣和水的重量比为1：4-6。
在本发明的步骤2)中，所述静置的时间可以在宽的范围内进行控制，但是为了进一步提高多糖的提取率，优选地，在步骤2)中，所述静置的时间为6-12h；
在本发明的步骤2)中，回流提取的次数可以在宽的范围内进行控制，但是为了进一步提高多糖的提取率，优选地，在步骤2)中，回流提取的次数为1-2次。
同时，在本发明的步骤1)和2)中，所述回流提取的条件也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高各组分的提取率，优选地，在步骤1)和2)中，所述回流提取各自独立地满足以下条件：在单次回流提取中，提取底物与提取溶剂的重量比为1：3-10，提取温度为60-90℃，提取时间为0.5-3h。
在上述步骤3)中，对水的用量并不作具体限定，但是为了进一步提高各组分的提取率，优选地，在步骤3)中，所述粗提物通过水溶解后形成含有生药量为0.5-2g/mL的水溶液。
在上述步骤3)中，对大孔树脂的用量并不作具体限定，但是为了进一步提高各组分的提取率，优选地，在步骤3)中，所述大孔树脂柱中大孔树脂、红景天生药的重量比为0.5-1：2。
在上述步骤3)中，对吸附条件也并不作具体限定，但是为了进一步提高各组分的提取率，优选地，在步骤3)中，所述吸附至少满足以下条件：上柱流速为0.5-3BV/h，非极性大孔树脂选自D101大孔树脂、HP20大孔树脂、AB-8大孔树脂和MKA-2大孔树脂中的至少一种。
在上述步骤3)中，对洗脱条件也并不作具体限定，但是为了进一步提高各组分的提取率，优选地，在步骤3)中，所述洗脱至少满足以下条件：水的用量为2-3BV，水的洗脱流速为2-3BV/h；5-20％乙醇的用量为2-6BV，5-20％乙醇的洗脱流速为1-3BV/h；30-60％乙醇的用量为2-3BV，30-60％乙醇的洗脱流速为1-2BV/h。
在本发明的步骤4)中，氯化钙的用量也可以在宽泛的范围内变化，但是为了进一步提高红景天粗多糖的提取率和纯度，优选地，在步骤4)中，所述氯化钙、水洗脱液的用量重量比为0.5-1:100。
在本发明的步骤4)中，静置的时间也可以在宽泛的范围内变化，但是为了进一步提高红景天粗多糖的提取率和纯度，优选地，在步骤4)中，所述静置的时间为6-12h。
在本发明的步骤4)中，浓缩的程度也可以在宽泛的范围内变化，但是为了进一步提高红景天粗多糖的提取率和纯度，优选地，在步骤4)中，浓缩后的滤液的体积为浓缩前的滤液体积的1/5-1/4。
在本发明的步骤4)中，吸附的条件也可以在宽泛的范围内变化，但是为了进一步提高红景天粗多糖的提取率和纯度，优选地，在步骤4)中，所述吸附至少满足以下条件：上柱流速为0.8-3BV/h，所述离子交换大孔树脂、红景天生药的重量比为0.5-1：2。
在本发明的步骤4)中，离子交换大孔树脂的种类也可以在宽泛的范围内变化，但是为了进一步提高红景天粗多糖的提取率和纯度，优选地，在步骤4)中，所述离子交换大孔树脂选自D301-R离子交换树脂、201X-4离子交换树脂中的至少一种。
在本发明的步骤4)中，水洗条件也可以在宽泛的范围内变化，但是为了进一步提高红景天粗多糖的提取率和纯度，优选地，在步骤4)中，所述水洗至少满足以下条件：水的用量为2-3BV，洗脱流速为1-3BV/h。
在本方法的步骤5)中，对水的用量并不作具体要求，但是为了进一步提高红景天苷的提取率和纯度，优选地，在步骤5)中，在水溶解时，固液重量比为1：10-40。
在本方法的步骤5)中，对吸附条件并不作具体要求，但是为了进一步提高红景天苷的提取率和纯度，优选地，在步骤5)中，所述吸附至少满足以下条件：上柱流速为1-2.5BV/h，所述聚酰胺、红景天生药的重量比为0.5-1：1。
在本方法的步骤5)中，对水洗条件并不作具体要求，但是为了进一步提高红景天苷的提取率和纯度，优选地，在步骤5)中，所述水洗至少满足以下条件：水的用量为2-3BV，洗脱流速为1-3BV/h。
在本方法的步骤5)中，对乙醇洗脱并不作具体要求，但是为了进一步提高红景天苷的提取率和纯度，优选地，在步骤5)中，所述乙醇洗脱至少满足以下条件：乙醇的用量为2-3BV，洗脱流速为1-2.5BV/h，乙醇的浓度为体积分数为5-20％。
在上述的步骤6)中，水的用量可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高络塞维的提取率和纯度，优选地，在步骤6)中，在水溶解时，固液重量比为1：30-50。
在上述的步骤6)中，吸附条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高络塞维的提取率和纯度，优选地，在步骤6)中，所述吸附至少满足以下条件：上柱流速为1-2.5BV/h，所述聚酰胺、红景天生药的重量比为0.5-1：1。
在上述的步骤6)中，水洗条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高络塞维的提取率和纯度，优选地，在步骤6)中，所述水洗至少满足以下条件：水的用量为2-3BV，洗脱流速为1-3BV/h。
在上述的步骤6)中，乙醇洗脱条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高络塞维的提取率和纯度，优选地，在步骤6)中，所述乙醇洗脱至少满足以下条件：乙醇的用量为2-3BV，洗脱流速为0.56-2BV/h，乙醇的浓度为体积分数为5-20％。
此外，在上述实时方式中，乙醇的去除方式也可以在宽的范围内选择，但是为了提高去除效果，优选地，在步骤4)和5)中，洗脱液中乙醇的去除采用浓缩的方式进行。
最后，本发明需要申明的是，所述浓缩或浓缩干燥均可以采取多种方式进行，但是为了提高生产效率，优选地，所述浓缩或浓缩干燥至少满足以下条件：温度为50-70℃，压力为0.5-2kPa。
以下将通过实例对本发明进行详细描述。在以下实例中，各产品的纯度采用以下方法进行检测，红景天苷采用2020版中国药典第一部红景天中含量测定的方法，络塞维采用实验室建立的HPLC法检测，多糖采用硫酸-蒽酮法测定，纯度指的是质量百分数％；溶剂的纯度百分数均指的是体积百分数，并且指的是水溶液中的纯度，如50％乙醇指的是体积百分数为50％的乙醇水溶液。浓缩和浓缩干燥的条件均为：温度为60℃，压力为1KPa。各个步骤中的活性炭柱、非极性大孔树脂、离子交换大孔树脂或聚酰胺的用量均按红景天生药的重量百分比计算，吸附剂、红景天生药的用量重量比为1：100，大孔树脂、红景天生药的用量重量比为0.5：2，离子交换大孔树脂、红景天生药的用量重量比为0.5：2，各步骤中聚酰胺、红景天生药的重量比为0.5：1。聚酰胺为西亚化学科技厂家60-100目的产品。
实施例1
1)取经去除杂质的干燥红景天，切片，粉碎过30目筛，称取50g，加入5倍重量为红景天粉末的50％乙醇于80℃提取2h，过滤，滤渣分别加入4倍、3倍重量为红景天粉末的50％乙醇提取1.5h，过滤，分离滤液和残渣，合并所有滤液。
滤液以1BV/h流速通过24目活性炭柱，活性炭柱柱温保持60℃，收集流出液，浓缩至无醇味，得含有红景天苷和络塞维的提取物。
2)取步骤1)的残渣，加入4倍红景天粉末重量的水，于80℃下回流提取3h，离心得提取液，浓缩至原体积的1/4，加入无水乙醇使溶液中乙醇含量为80％，静置8h，收集沉淀。
3)将步骤1)中含有红景天苷和络塞维的提取物加水溶解，配成含有生药量为1g/ml的水溶液，去除不溶物，即为上柱液。
将上柱液通过D101大孔树脂柱，上柱流速为2BV/h，吸附完成后，先用2BV水以1.5BV/h流速洗脱，收集含多糖水洗液，再用10％乙醇以2BV/h流速洗脱3BV，收集洗脱液，浓缩至干，即为红景天苷粗提物；最后用45％乙醇以2BV/h流速洗脱2BV，收集洗脱液，浓缩至干，即为络塞维粗提物。
4)将步骤3)中的含多糖水洗液与步骤2)中沉淀混合溶解，加入氯化钙(用量为沉淀溶解后总重量的1％)，放置6h，沉淀，过滤，浓缩至1/4体积，即为上柱液。
通过D301-R离子交换树脂柱，上柱流速为1BV/h，吸附完成后，用2BV水以2BV/h的流速洗脱，收集水洗液,浓缩至干，即为红景天多糖，经检测红景天多糖纯度为42.02％，经检测重金属及农残的去除率分别为92.8％、95.2％。
5)将步骤3)中红景天粗提物用水溶解即上柱液(红景天粗提物、水的重量比为1：50)，以1BV/h流速上柱吸附，分别用2BV水、2.5BV 5％乙醇洗脱(洗脱流速均为1.5BV/h)，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得红景天苷粗品。
6)将步骤3)中络塞维粗提物用水溶解即上柱液(络塞维粗提物、水的重量比为1：40)，以1BV/h流速上柱吸附，分别用2BV水、2.5BV 30％乙醇洗脱(洗脱流速均为1BV/h)，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得络塞维粗品。
7)将步骤5)和6)中红景天苷粗品和络塞维粗品分别使用乙醇、乙酸乙酯溶解(待结晶物、溶剂的重量比为1：10)，10℃下放置8h结晶，重复结晶2次，得红景天苷提取物，经检测纯度为92.4％，经检测重金属及农残的去除率分别为98.3、93.1％。络塞维提取物，经检测其纯度为95.21％，经检测重金属及农残的去除率分别为96.5、95.4％。。
实施例2
1)取经去除杂质的干燥红景天，切片，粉碎过60目筛，称取5kg，加入8倍重量为红景天粉末的70％乙醇于60℃提取1h，过滤，滤渣分别加入6倍、4倍重量为红景天粉末的7％乙醇提取0.5h，过滤，分离滤液和残渣，合并3次滤液。
滤液以2BV/h流速通过100目活性炭柱，活性炭柱柱温保持80℃，收集流出液，浓缩至无醇味，得含有红景天苷和络塞维的提取物。
2)取步骤1)的残渣，加入6倍红景天粉末重量的水，于90℃下回流提取1h，离心得提取液，浓缩至原体积的1/4，加入无水乙醇使溶液中乙醇含量为60％，静置10h，收集沉淀。
3)将步骤1)中含有红景天苷和络塞维的提取物加水溶解，配成含有生药量为0.5g/ml的水溶液，去除不溶物，即为上柱液。
将上柱液通过HP20大孔树脂柱，上柱流速为0.8BV/h，吸附完成后，先用2BV水以3BV/h流速洗脱，收集含多糖水洗液，再用20％乙醇以1BV/h流速洗脱3BV，收集洗脱液，浓缩至干，即为红景天苷粗提物；最后用60％乙醇以1BV/h流速洗脱2BV，收集洗脱液，浓缩至干，即为络塞维粗提物。
4)将步骤3)中的含多糖水洗液与步骤2)中沉淀混合溶解，加入含量为上述溶液的1％重量分数的氯化钙，放置12h，沉淀，过滤，浓缩至1/4体积，即为上柱液。
通过201X-4离子交换树脂柱，上柱流速为0.8BV/h，吸附完成后，用2BV水以1BV/h的流速洗脱，收集水洗液即为红景天多糖，经检测红景天多糖纯度为45.68％，经检测重金属及农残的去除率分别为93.1％、96.4％。
5)将步骤3)中红景天粗提物用水溶解即上柱液(红景天粗提物、水的重量比为1：30)，以2.5BV/h流速上柱吸附，分别用2BV水、2.5BV 20％乙醇洗脱(洗脱流速均为2BV/h)，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得红景天苷粗品。
6)将步骤3)中络塞维粗提物用水溶解即上柱液(络塞维粗提物、水的重量比为1：50)，以1BV/h流速上柱吸附，分别用2BV水、2.5BV 60％乙醇洗脱(洗脱流速均为1.5BV/h)，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得络塞维粗品。
7)将步骤5)和6)中红景天苷粗品和络塞维粗品分别使用甲醇、乙酸乙酯溶解(待结晶物、溶剂的重量比为1：20)，10℃下放置12h结晶，重复2次，得红景天苷提取物，经检测纯度为85.26％，经检测重金属及农残的去除率分别为95.1％、96.3％。络塞维提取物，经检测其纯度为97.54％，经检测重金属及农残的去除率分别为97.4％、98.7％。
实施例3
1)取经去除杂质的干燥红景天，切片，粉碎过50目筛，称取500kg，加入10倍重量为红景天粉末的60％乙醇于70℃提取1.5h，过滤，滤渣分别加入8倍、6倍重量为红景天粉末的60％乙醇提取1h，过滤，分离滤液和残渣，合并3次滤液。
滤液以3BV/h流速通过50目活性炭柱，活性炭柱柱温保持70℃，收集流出液，浓缩至无醇味，得含有红景天苷和络塞维的提取物。
2)取步骤1)的残渣，加入5倍红景天粉末重量的水，于90℃下回流提取1h，离心得提取液，浓缩至原体积的1/4，加入无水乙醇使溶液中乙醇含量为70％，静置12h，收集沉淀。
3)将步骤1)中含有红景天苷和络塞维的提取物加水溶解，配成含有生药量为2g/ml的水溶液，去除不溶物，即为上柱液。
将上柱液通过AB-8大孔树脂柱，上柱流速为3BV/h，吸附完成后，先用3BV水以2BV/h流速洗脱，收集含多糖水洗液，再用10％乙醇以2BV/h流速洗脱6BV，收集洗脱液，浓缩至干，即为红景天苷粗提物；最后用50％乙醇以2BV/h流速洗脱3BV，收集洗脱液，浓缩至干，即为络塞维粗提物。
4)将步骤3)中的含多糖水洗液与步骤2)中沉淀混合溶解，加入重量为上述溶液重量的1％的氯化钙，放置10h，沉淀，过滤，浓缩至1/4体积，即为上柱液。
通过201X-4离子交换树脂柱，上柱流速为1BV/h，吸附完成后，用3BV水以2BV/h的流速洗脱，收集水洗液浓缩至干，即为红景天多糖，经检测红景天多糖纯度为48.67％，经检测重金属及农残的去除率分别为90.4％、91.7％。
5)将步骤3)中红景天粗提物用水溶解即上柱液(红景天粗提物、水的重量比为1：40)，以2BV/h流速上柱吸附，分别用3BV水、3BV 20％乙醇洗脱(洗脱流速均为1BV/h)，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得红景天苷粗品。
6)将步骤3)中络塞维粗提物用水溶解即上柱液(络塞维粗提物、水的重量比为1：30)，以2BV/h流速上柱吸附，分别用3BV水、4BV 60％乙醇洗脱(洗脱流速均为2BV/h)，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得络塞维粗品。
7)将步骤5)和6)中红景天苷粗品和络塞维粗品分别使用乙醇、乙酸乙酯溶解(待结晶物、溶剂的重量比为1：30)，10℃下放置10h结晶，重复2次，得红景天苷提取物，经检测纯度为89.27％，经检测重金属及农残的去除率分别为96.3％、97.1％；络塞维提取物，经检测其纯度为98.16％，经检测重金属及农残的去除率分别为98.4％、98.1％。
对上述实施例1-3的原料以及产品的重量进行统计，结果见表1。
表1
实施例1 实施例2 实施例3
红景天生药用量/g 50 5000 500000
红景天多糖/g 9.71 919.43 92459
络塞维提取物/g 1.29 131.28 13447
红景天苷提取物/g 0.50 55.12 5601
通过查询红景天相关文献得知，红景天生药中红景天多糖的平均含量重量百分数为12％，络塞维的平均含量重量百分数为3.5％，红景天苷的平均含量重量百分数为1.4％；通过上表与文献值对比可以得知，红景天多糖的提取率为68-75％，络塞维提取物的提取率为70-75％，红景天苷提取物的提取率为68-72％；由此可见，该方法不仅能够保证各提取率具有优异的纯度，还具有较高的提取率。
检测例1
按照采用中国药典2020版四部通则重金属检查法对实施例1得到的红景天多糖、络塞维提取物和红景天苷提取物的重金属进行检测；按照中国药典2020版四部通则农药残留测定法1的方法对实施例1得到的红景天多糖、络塞维提取物和红景天苷提取物的农药残留进行检测，具体结果见表2，单位为μg·kg-1。
表2
砷 铅 α-BHC p,p'-DDE PCNB
红景天多糖 ＜0.5 1.2 ＜0.1 ＜0.1 ＜0.1
络塞维提取物 ＜0.5 ＜1.0 ＜0.1 ＜0.1 ＜0.1
红景天苷提取物 ＜0.5 ＜1.0 ＜0.1 ＜0.1 ＜0.1
通过上表可以得知，该方法能够有效地去除重金属和农药残留，按照相同的方法检测实施例2-3的产品，结果基本一致。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (10)

1.一种从红景天中同时提取红景天苷、络塞维和多糖的方法，其特征在于，所述方法包括：
1)将红景天生药、乙醇进行多次回流提取，每次提取后过滤得到滤液和残渣，后一次提取的底物为前一次提取得到的滤渣，将多次得到的滤液进行合并；将合并后的所述滤液通过吸附剂柱层析，收集流出液，去除乙醇，以得到含有红景天苷和络塞维的粗提物；
2)将提取后得到的残渣和水混合后，进行至少一次回流提取，每次提取后过滤得到滤液和残渣，后一次提取的底物为前一次提取得到的滤渣，将多次得到的滤液进行合并；将合并后的所述滤液浓缩，接着将浓缩液和乙醇混合、静置、分离收集沉淀；
3)将所述粗提物通过水溶解，去除不溶物后，通过非极性大孔树脂柱进行吸附，依次使用水、体积浓度为5-20％乙醇、体积浓度为30-60％乙醇进行洗脱，并分别收集洗脱液，分别对应为水洗脱液、5-20％乙醇洗脱液和30-60％乙醇洗脱液；
4)将所述水洗脱液、沉淀、氯化钙混合、静置，过滤后取滤液浓缩得到上柱液，将所述上柱液通过离子交换大孔树脂柱进行吸附、水洗，收集水洗液，浓缩以得到红景天粗多糖；
5)将所述5-20％乙醇洗脱液去除乙醇后通过水溶解，接着通过聚酰胺柱进行吸附、水洗和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得红景天苷提取物；
6)将所述30-60％乙醇洗脱液去除乙醇后通过水溶解，接着通过聚酰胺柱进行吸附、水洗和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得络塞维提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：将所述红景天苷提取物、络塞维提取物分别进行重结晶，依次得到红景天苷纯品、络塞维纯品。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述红景天生药至少满足以下条件：平均粒径为30-60目；
优选地，在步骤1)中，所述乙醇的体积浓度为50-70％；
优选地，在步骤1)中，回流提取的次数为2-4次；
优选地，在步骤1)中，所述吸附剂柱中的吸附剂、红景天生药的重量比为0.5-1：100；
优选地，在步骤1)中，所述吸附剂柱层析至少满足以下条件：吸附剂的平均粒径为20-100目，柱温为60-80℃，上柱流速为1-3BV/h；
优选地，所述吸附剂选自活性炭、壳聚糖中的至少一种。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，所述浓缩液的体积为滤液体积的1/5-1/4；
优选地，在步骤2)中，所述乙醇为无水乙醇，并且所述乙醇添加后体系中乙醇的体积浓度为60-80％；
优选地，在步骤2)中，所述残渣和水的重量比为1：4-6；
优选地，在步骤2)中，所述静置的时间为6-12h；
优选地，在步骤2)中，回流提取的次数为1-2次；
优选地，在步骤1)和2)中，所述回流提取各自独立地满足以下条件：在单次回流提取中，提取底物与提取溶剂的重量比为1：3-10，提取温度为60-90℃，提取时间为0.5-3h。
5.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤3)中，所述粗提物通过水溶解后形成含有生药量为0.5-2g/mL的水溶液；
优选地，在步骤3)中，所述大孔树脂柱中大孔树脂、红景天生药的重量比为0.5-1：2；
优选地，在步骤3)中，所述吸附至少满足以下条件：上柱流速为0.5-3BV/h，非极性大孔树脂选自D101大孔树脂、HP20大孔树脂、AB-8大孔树脂和MKA-2大孔树脂中的至少一种；
优选地，在步骤3)中，所述洗脱至少满足以下条件：水的用量为2-3BV，水的洗脱流速为2-3BV/h；体积浓度5-20％乙醇的用量为2-6BV，体积浓度5-20％乙醇的洗脱流速为1-3BV/h；体积浓度30-60％乙醇的用量为2-3BV，30-60体积％乙醇的洗脱流速为1-2BV/h。
6.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤4)中，所述氯化钙：水洗脱液的用量重量比为0.5-1：100；
优选地，在步骤4)中，所述静置的时间为6-12h；
优选地，在步骤4)中，浓缩后的滤液的体积为浓缩前的滤液体积的1/5-1/4；
优选地，在步骤4)中，所述吸附至少满足以下条件：上柱流速为0.8-3BV/h，所述离子交换大孔树脂、红景天生药的重量比为0.5-1：2；
优选地，在步骤4)中，所述离子交换大孔树脂选自D301-R离子交换树脂、201X-4离子交换树脂中的至少一种；
优选地，在步骤4)中，所述水洗至少满足以下条件：水的用量为2-3BV，洗脱流速为1-3BV/h。
7.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤5)中，在水溶解时，固液重量比为1：10-40；
优选地，在步骤5)中，所述吸附至少满足以下条件：上柱流速为1-2.5BV/h，所述聚酰胺、红景天生药的重量比为0.5-1：1；
优选地，在步骤5)中，所述水洗至少满足以下条件：水的用量为2-3BV，洗脱流速为1-3BV/h；
优选地，在步骤5)中，所述乙醇洗脱至少满足以下条件：乙醇的用量为2-3BV，洗脱流速为1-2.5BV/h，乙醇的体积浓度为5-20％。
8.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤6)中，在水溶解时，固液重量比为1：30-50；
优选地，在步骤6)中，所述吸附至少满足以下条件：上柱流速为1-2.5BV/h，所述聚酰胺、红景天生药的重量比为0.5-1：1；
优选地，在步骤6)中，所述水洗至少满足以下条件：水的用量为2-3BV，洗脱流速为1-3BV/h；
优选地，在步骤6)中，所述乙醇洗脱至少满足以下条件：乙醇的用量为2-3BV，洗脱流速为0.5-2BV/h，乙醇的体积浓度为5-20％。
9.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，所述重结晶至少满足以下条件：重结晶的次数为2-3次，在单次重结晶中，待结晶物、溶剂的重量比为1：10-30，在8-12℃下静置8-12h进行结晶；
优选地，所述重结晶中的溶剂选自乙醇、甲醇或乙酸乙酯。
10.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤4)和5)中，洗脱液中乙醇的去除采用浓缩的方式进行；
优选地，所述浓缩或浓缩干燥至少满足以下条件：温度为50-70℃，压力为0.5-2KPa。
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