CN102382152A - 一种制备红景天苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种制备红景天苷的方法，该方法包括浓缩、醇沉、过聚酰胺柱纯化、过大孔吸附树脂精制和结晶5个步骤，该方法简单、成本低，适于工业化大生产，得到的红景天苷纯度高，适合于制成注射剂或冻干粉针。

Description

一种制备红景天苷的方法

技术领域

本发明涉及一种制备红景天苷的方法，属于制药领域。

背景技术

红景天为景天科红景天属多年生草本植物或亚灌木野生植物，植物资源丰富，品种众多，全世界约有96种，我国有73种。红景天中的红景天苷是该种植物所特有的有效成分，具有扶正固本、调和阴阳、滋补强身等作用，现代药理研究证明，红景天苷具有预防和抗痴呆作用、抗缺氧作用、延缓衰老作用和抑制快速型室性心率失常的作用，临床上用来治疗冠心病、高原低血压症、高原性红细胞增多症。毒性试验表明，红景天苷毒性甚小：红景天苷1g/Kg小鼠皮下注射，未见毒性反应。近年来，随着人们生活水平的提高，加上人口结构的老龄化，心血管疾病的发病率呈逐年上升的趋势，开发治疗效果较好的心脑血管疾病的药物已经成为当今药物研究的热点，临床研究报道显示：高纯度单一成分的红景天苷在治疗心脑血管方面具有良好的应用前景。

目前红景天苷的制备方法较多，邰韧辉等(高纯度红景天苷的制备工艺研究，现代中药研究与实践2004，18(4)：58)用溶剂萃取结合大孔吸附树脂分离，然后用硅胶柱精制，但是，用该方法制得的红景天苷含量低，且成本高，不适合工业化大生产。丁朝武等(红景天苷和红景天苷元标准品的制备方法研究，分析测试学报1997，16(1)：38)用化学和高效液相制备色谱方法分离制备，所得的产品纯度高，但高效液相色谱制备量小，无法大规模生产。葛永潮等(红景天苷的制备工艺改进，中国药物化学杂志1994，4(3)：196)将聚酰胺、反相大孔吸附树脂、硅胶及葡聚糖凝胶四种柱层析组合使用制备红景天苷，然而，此方法分离介质品种较多，且成本较高，同样不适合工业化大生产。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明的一个目的是提供一种新的制备红景天苷的方法，本发明的另一个目的是提供一种根据上述方法制备的高纯度的红景天苷，本发明的再一个目的是提供一种红景天苷的用途。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一方面，本发明提供了一种制备红景天苷的方法，其中，所述方法包括如下步骤：

1)浓缩：将红景天提取液减压浓缩，得浓缩液I；

2)醇沉：向步骤1)所得浓缩液I中加乙醇，静置，过滤，滤液浓缩，得浓缩液II；

3)纯化：将步骤2)所得浓缩液II过聚酰胺柱，洗脱，洗脱液减压浓缩，得浓缩液III；

4)精制：将步骤3)所得浓缩液III过大孔吸附树脂柱，洗脱，洗脱液浓缩至干，得干膏；

5)结晶：向步骤4)所得干膏中加入无水乙醇，使干膏溶解，过滤，向滤液中加入三氯甲烷除杂，再加入三氯甲烷结晶，过滤，即得红景天苷结晶。

进一步，根据前述的制备方法，在步骤1)中：

所述红景天提取液为以水或0～50％(v/v)的乙醇作为提取溶剂得到的红景天药材提取液；

所述浓缩液I的相对密度在20℃为1.00～1.10。

进一步，根据前述的制备方法，在步骤2)中：

所述加乙醇包括：向浓缩液I加入95％(v/v)的乙醇使含醇量达到60％(v/v)；

所述静置条件为：2～8℃静置48h；

所述浓缩液II的相对密度根据红景天生药材质量与溶液体积比计算为0.5～1.5，优选为1.5。

进一步，根据前述的制备方法，在步骤3)中：

所述聚酰胺柱中的聚酰胺粉目数为14～80目，优选为60～80目；

所述聚酰胺柱的径高比小于1∶10，优选为1∶10；

所述红景天生药材与聚酰胺粉的质量之比优选为1∶1；

所述洗脱用水量为2～6BV(柱体积)，优选4BV；

所述洗脱流速优选为3BV/h；

所述浓缩液III的相对密度根据红景天生药材质量与溶液体积比计算为1.0～1.5。

进一步，根据前述的制备方法，在步骤4)中：

所述洗脱的溶剂为5～10％(v/v)的乙醇，优选为10％(v/v)的乙醇；所述洗脱的溶剂用量为不少于30BV，优选为30BV。

进一步，根据前述的制备方法，在步骤5)中：

所述加入无水乙醇包括：加入无水乙醇使干膏溶解，使所得溶液的浓度根据红景天干浸膏质量与溶液体积比计算为4.06～8.12mg/mL；

所述加入三氯甲烷除杂包括：向滤液中加入三氯甲烷至出现絮状沉淀，静置30min，优选地，向滤液中加入2～3次三氯甲烷至澄清无色，每次静置时间不超过30min；

所述加入三氯甲烷结晶包括：向除杂后的澄清无色溶液中，加入三氯甲烷，同时以120r/min的速度搅拌，至溶液浑浊，2～8℃静置不少于72h，优选72h。

在红景天纯化过程中，鞣质是比较难除的一类杂质，鞣质的存在会严重影响制剂的质量；特别是在注射剂和冻干粉针剂中，鞣质的存在会导致受试者局部肿痛甚至死亡；因此鞣质的除去便显得尤为重要，目前除去鞣质的方法主要为明胶沉淀法、醇液碱沉淀法和聚酰胺吸附法。

明胶沉淀法：明胶溶液可与水溶液中鞣质生成沉淀，以pH＝4时沉淀效果最好。沉淀后，还需要将水溶液浓缩，再加95％(v/v)乙醇使含醇量达75％(v/v)以上，除去过剩的明胶。将上述醇沉后的醇溶液回收乙醇至无醇味，加适量的水，然后加入10％的明胶水溶液，沉淀，放置，滤过，滤液浓缩，加入95％(v/v)乙醇使含醇量达75％(v/v)以上，除去过量的明胶。此法虽然可除去鞣质，但操作步骤繁多，在工业生产中耗能多，会提高产品成本。另外，明胶属于肽类化合物，有众多的肽键，与黄酮甙、蒽醌、香豆精等酚性成分有一定的亲和力，而红景天苷也属于酚类化合物，因此，明胶与鞣酸形成明胶鞣酸蛋白质沉淀的同时，也能吸附一定量的红景天苷形成沉淀。综上分析，此法不可行。

醇液碱沉淀法：在85％(v/v)的乙醇中加入碱液，调pH＝8时，鞣质及有机酸类等形成钠盐，在醇溶液中析出，而红景天苷则保留在溶液中，但红景天苷分子结构上带有酚羟基，有一定的酸性，因此在碱性溶液中会部分成盐而被破坏，因此本方法也不可行。

聚酰胺吸附法：主要是利用酰胺和酚类或某些酸形成氢键，而具有吸附作用。可被聚酰胺吸附的化合物有黄酮类、蒽醌类、有机酸、酚类和鞣质等。鞣质是一种多元酚类的化合物，不论其低分子或高分子，都很容易被聚酰胺吸附，且吸附力比任何别的化学成分都强，因此可以利用聚酰胺除去提取液中的鞣质。所以，将红景天醇沉后的溶液通过聚酰胺柱层析，能够使鞣质被吸附，而红景天苷不被吸附，之后用水就可以将红景天苷洗脱下来，成本较低，除鞣质效果较好，适合工业化大生产。

目前大孔吸附树脂分离纯化技术在中草药有效成分的提取分离中得到了日益广泛的应用，其优点在于吸附容量大、再生简单、效果可靠，尤其适合分离纯化苷类、黄酮类、皂苷类等成分(李伯庭.大孔吸附树脂在天然产物分离中的应用[J].中草药1990，21(8)：42)，因此选择大孔吸附树脂来精制红景天苷。

另一方面，本发明提供了一种根据上述制备方法得到的红景天苷及其药物组合物，其中，所述红景天苷的纯度在95％以上。

再一方面，本发明提供了一种根据上述制备方法得到的红景天苷在制备治疗心脑血管疾病或癌症的药物中的用途，其中，所述药物剂型为注射剂或冻干粉针。

本发明提供的制备红景天苷的方法简单、成本低，适于工业化大生产，得到的红景天苷的纯度高。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为本发明实施例2的洗脱剂种类对红景天苷影响的梯度洗脱曲线；

图2为本发明实施例2中洗脱剂用量对红景天苷洗脱率的影响曲线。

具体实施方式

以下各实施例中所使用的原料为：

红景天提取液由康美药业研发中心提供，

聚酰胺粉由台州市路桥四甲生化塑料厂提供，

SP825型大孔吸附树脂由日本三菱化学公司提供，

乙醇由天津市大茂化学试剂厂提供，其浓度均为体积百分浓度，纯度级别为分析纯。

乙醚由西陇化工有限公司提供，纯度级别为分析纯。

三氯甲烷由西陇化工有限公司提供，纯度级别为分析纯。

乙酸乙酯由天津大茂化学试剂厂提供，纯度级别为分析纯。

以下各实施例中所使用的设备为：

高效液相色谱仪(HPLC)型号Angilent 1100系列，DAD检测器，生产厂家为美国安捷能科技有限公司，

薄层色谱仪(TLC)型号REPROSTAR-3，生产厂家为瑞士卡玛(CAMAG)公司。

实施例1：红景天苷纯化工艺研究

1.1聚酰胺粉目数的考察

目前市场上常用的柱层析用聚酰胺粉的目数一般为14～30目、30～60目和60～80目，聚酰胺粉太粗分离效果差，太细则流速慢，以下就这3种型号的聚酰胺粉进行考察。

方法：取3份聚酰胺粉，每份20g，目数分别为14～30目、30～60目和60～80目，分别装柱(φ2.4cm×30cm)，另取取3份红景天醇沉液(每份相当于红景天生药材20g)，浓缩成相对密度为1.0(红景天生药材质量与溶液体积之比)的浓缩液，将红景天醇沉浓缩液动态上样，静置2h，用水洗脱，流速为2BV/h，共用水约5BV，收集洗脱液，浓缩定容至250ml，每份洗脱液量取1～10mL于试管中，向里面加入5mL新配置的1％(v/v)鸡蛋清的生理氯化钠溶液，实验结果见表1。

表1聚酰胺粉目数考察

聚酰胺粉目数	14～30目	30～60目	60～80目
				鞣质检测	轻微沉淀	无沉淀	无沉淀

分析：鞣质检测结果表明，聚酰胺粉目数对鞣质是否会被洗脱下来有一定影响，14～30目的聚酰胺柱有鞣质被洗脱下来，30～60目和60～80目的聚酰胺柱无鞣质被洗脱下来，但柱子上的色带可以明显看出，60～80目的聚酰胺柱柱容量明显比30～60目的聚酰胺柱大。

结论：综合流速和柱容量考虑，选择60～80目的聚酰胺粉。

1.2最大上样量考察

方法：取6份聚酰胺粉(60～80目)，每份20g，分别装柱(φ2.4cm×30cm)，按照红景天生药材与聚酰胺粉(60～80目)重量比分别为1∶2、1∶1、2∶1、4∶1和6∶1，将红景天醇沉浓缩液动态上样，静置2h，后用水洗脱，流速为2BV/h，共用约5BV水，收集洗脱液，浓缩定容至250ml，每份洗脱液精密量取1～10mL于试管中，向里面加入5ml新配置的1％(v/v)鸡蛋清的生理氯化钠溶液，实验结果见表2。

表2最大上样量的考察

分析：当聚酰胺粉与红景天生药材之比为1∶1时，鞣质检测表明，洗脱液中含有少量鞣质，说明此时聚酰胺树脂已经饱和。

结论：确定红景天生药材与聚酰胺粉的质量之比为1∶1。

1.3药液相对密度的考察

方法：取3份聚酰胺粉(60～80目)，每份20g，分别装柱(φ2.4cm×30cm)，另取取3份红景天醇沉液(每份相当于红景天生药材20g)，分别浓缩成相对密度0.5、1.0和1.5(红景天生药材质量与溶液体积之比)的浓缩液，将红景天醇沉浓缩液动态上样，静置2h，用水洗脱，流速为2BV/h，至无红景天苷被洗脱下来(TLC检测)，共用水约5BV，收集洗脱液，浓缩定容至250ml，每份洗脱液量取1～10mL于试管中，向里面加入5mL新配置的1％(v/v)鸡蛋清的生理氯化钠溶液，实验结果见表3。

表3药液相对密度考察

药液相对密度	0.5	1.0	1.5
				鞣质检测	无沉淀	无沉淀	无沉淀

分析：鞣质检测结果表明，药液相对密度对鞣质是否会被洗脱下来无明显影响，三份洗脱液中均无鞣质。

结论：综合工业生产的实际考虑，药液相对密度选择1.5(红景天生药材质量与溶液体积之比)。

1.4流速考察

方法：取3份聚酰胺粉(60～80目)，每份20g，分别装柱(φ2.4cm×30cm)，按照红景天生药材与聚酰胺粉(60～80目)重量比为1∶1的比例将红景天醇沉浓缩液动态上样，静置2h，用水洗脱，流速分别为1BV/h、2BV/h和3BV/h，至无红景天苷被洗脱下来(TLC检测)，共用水约5BV，收集洗脱液，浓缩定容至250ml，每份洗脱液量取1～10mL于试管中，向里面加入5mL新配置的1％(v/v)鸡蛋清的生理氯化钠溶液，实验结果见表4。

表4流速考察

流速	1BV/h	2BV/h	3BV/h
				鞣质检测	无沉淀	无沉淀	无沉淀

分析：鞣质检测结果表明，洗脱液流速的大小对鞣质是否会被洗脱下来无明显影响，三份洗脱液中均未检出鞣质。

结论：综合工业生产的实际考虑，选择3BV/h。

1.5聚酰胺柱径高比考察

方法：取3份聚酰胺粉(60～80目)，每份5g，分别按照径高比1∶5、1∶10和1∶20的比例装柱，按照红景天生药材与聚酰胺粉(60～80目)重量比为1∶1的比例将红景天醇沉浓缩液动态上样，静置2h，后用水洗脱，流速为3BV/h，至无红景天苷被洗脱下来(TLC检测)，共用约5BV水，收集洗脱液，浓缩定容至250ml，每份洗脱液取1～10mL试管中，向里面加入5mL新配置的1％(v/v)鸡蛋清的生理氯化钠溶液，实验结果见表5。

表5聚酰胺柱径高比考察

径高比	1∶5	1∶10	1∶20
				鞣质检测	有沉淀	无沉淀	无沉淀

分析：鞣质检测结果表明，当径高比为1∶5时，鞣质会被洗脱下来，径高比小于1∶10时，鞣质不会被洗脱下来。

结论：聚酰胺柱径高比应小于1∶10。

1.6洗脱剂种类的选择

方法：取20g聚酰胺粉(60～80目)，按照径高比1∶10的比例装柱，将红景天醇沉浓缩液(相当于20g红景天生药材)动态上样，静置2h，先用水洗脱至无色，再分别用10％、20％、30％、40％和50％的乙醇进行洗脱，结果发现只有水洗脱部分有红景天苷，其他不同浓度乙醇洗脱部分无红景天苷，因此选择水作为洗脱溶剂。

1.7洗脱剂体积考察

方法：取20g聚酰胺粉(60～80目)，按照径高比1∶10的比例装柱，将红景天醇沉浓缩液(相当于20g红景天生药材)动态上样，静置2h，后用水洗脱，流速为3BV/h，每个柱体积收集一份，共收集7个柱体积，将每份流份浓缩定容到25mL，HPLC检测其中红景天苷含量，实验结果见表6。

表6洗脱溶剂体积考察

分析：液相检测结果表明，当冲到第3个BV时，洗脱下来的红景天苷很少，第4个BV时，没有红景天苷被洗脱下来。

结论：洗脱剂的用量选择4个BV。

实施例2：红景天的精制工艺研究

2.1洗脱剂的选择：

方法：将过聚酰胺柱后的红景天浓缩液动态上样至预处理好的大孔吸附树脂，先用80mL(8BV)水进行洗脱，再依次用5％、10％、15％、20％和25％的乙醇各100mL(10BV)洗脱，体积流量为1mL/min，收集洗脱液，以红景天苷为考察指标，绘制梯度洗脱曲线，结果见图1。

分析：从图1可以看出25％乙醇洗脱液中已经没有红景天苷了，而选择太低质量分数的乙醇洗脱液(如5％乙醇溶液)需要较大用量才能将吸附的红景天苷洗脱出来。

结论：选择10％乙醇作为红景天苷的洗脱溶剂。

2.2洗脱剂用量的选择

方法：按所确定的吸附条件饱和SP825型大孔吸附树脂，用蒸馏水洗至无色，然后用10％乙醇洗脱，体积流量为1mL/min，每份收集15mL(1BV)，共收集35份，以红景天苷洗脱率为考察指标，绘制曲线，结果见图2。

分析：从图2可以看出，30BV的10％乙醇能将98％以上树脂所吸附的红景天苷洗脱下来。

结论：确定洗脱红景天苷的洗脱剂用量为30BV。

2.3结晶工艺用样品的准备

液相检测大孔吸附树脂下洗脱下来的流份，将红景天苷纯度在70％(HPLC法，检测波长：254nm)以上的流份合并在一起，浓缩至干，备用。

实施例3：红景天苷结晶工艺研究

3.1溶解溶剂的考察

红景天苷的性质为极易溶于水，易溶于甲醇，可溶于乙醇，难溶于乙醚。根据红景天苷的性质可知，红景天苷结晶可以选择甲醇或者乙醇作为溶剂，由于甲醇毒性较大，不适用于工业生产，因此选择无水乙醇作为溶解溶剂来考察。

3.1.1温度对结晶的影响

将红景天过大孔吸附树脂柱的合并液减压浓缩至干，用无水乙醇溶解并转移至小烧杯中，在阴凉通风处挥除乙醇至溶液出现混浊，将溶液置于60℃水浴锅上，使溶液澄清，自然放冷，后置于2～8℃条件下冷藏72h，观察结晶情况，结果并无结晶出现。

3.1.2溶剂用量对结晶的影响

将红景天过大孔吸附树脂柱的合并液减压浓缩至干，无水乙醇溶解并转移至小烧杯中，在阴凉通风处挥除乙醇，观察在乙醇挥掉的过程中结晶情况，结果无结晶出现。

3.2结晶溶剂的考察

从上面2个试验结果可以看出，单一溶剂不能让红景天苷结晶，需要使用混合溶剂结晶法。取3份红景天过大孔吸附树脂柱的合并液(每份相当于红景天生药材40g)，减压浓缩至干，用无水乙醇溶解并转移至小烧杯中，分别向该3份溶液中加入等量的乙醚、三氯甲烷、乙酸乙酯，观察结晶情况，结果见表7。

表7结晶溶剂种类考察

分析：由于3份溶液中均出现不溶物，因此将3份溶液过滤，继续加相应的溶剂，结果加乙醚和氯仿的溶液均出现结晶，加乙酸乙酯的溶液无结晶，对结晶的纯度进行检测，发现加氯仿的溶液结晶纯度较高，达95％以上，而加乙醚的溶液结晶纯度较低，只有约80％，且乙醚对人体有麻醉作用，工业生产时对工人健康会造成较大影响。

结论：综合以上情况，选择氯仿作为结晶溶剂。

3.3除杂静置时间的考察

从3.2的试验结果可知，三氯甲烷可以除去杂质(红景天苷为无色针状物质或粉末，有颜色的沉淀为杂质)，红景天苷在三氯甲烷溶液中的溶解度较小，若静置时间过长，红景天苷也会跟随杂质一起沉淀出来，因此需要考察用氯仿除杂的静置时间。

方法：取7份红景天过大孔吸附树脂柱的洗脱液(每份相当于红景天生药材40g)，减压浓缩至干，用无水乙醇溶解并转移至锥形瓶中，加入三氯甲烷至溶液出现浅黄色絮状沉淀，静置时间分别为0min、30min、60min、90min、120min、150min和180min，以絮状沉淀的量和红景天苷的损失量为考察指标，选择合适的除杂静置时间，结果见表8。

表8除杂静置时间考察

静置时间(min)	0	30	60	90	120	150	180
								杂质重量(mg)	6.8	13.2	21.3	26.8	30.5	33.7	35.0
红景天苷损失量(mg)	0	1.6	3.3	6.9	10.2	13.3	14.5
								红景天苷损失率(％)	0	3.94	8.13	16.99	25.12	32.76	35.71

分析：从表8可以看出，除杂静置时间越久，红景天苷损失率越大，当静置时间为30min时，红景天苷的损失率达到3.94％。

结论：除杂静置时间确定为30min，可以选择2～3次加氯仿来除杂以使溶液澄清无色，每次静置时间不超过30min。

3.4溶液浓度的考察

方法：取5份红景天过大孔吸附树脂柱的合并液(每份相当于红景天生药材20g)，减压浓缩至干，用无水乙醇溶解并分别转移至5mL、10mL、25mL、50mL和100mL的容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，将这5份溶液转移至锥形瓶中，分别向该5份溶液中加入等量三氯甲烷，静置30min以除去杂质，重复此操作2～3次，至溶液澄清且无色，后再加入三氯甲烷至溶液混浊，2～8℃条件下冷藏，观察结晶情况，结果见表9。

表9结晶浓度考察

分析：当溶液浓度(红景天干浸膏质量与溶液体积比)为8.12mg/mL时，溶液中出现絮状漂浮物，可能原因是红景天苷浓度太高，无法结晶，所以当溶液浓度降低至4.06mg/mL时溶液中出现结晶。当溶液进一步稀释时，溶液中也没有结晶出现，原因可能是溶液浓度偏低，红景天苷结晶不出来。

结论：选择4.06～8.12mg/mL为比较合适的红景天苷结晶浓度。

3.5搅拌速度的考察

方法：取5份红景天过大孔吸附树脂柱的合并液(每份相当于红景天生药材20g)，减压浓缩至干，用无水乙醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，将溶液转移至锥形瓶中，加入三氯甲烷至溶液出现絮状沉淀，静置30min，过滤除去杂质，重复此操作2～3次，至溶液澄清无色，再加入三氯甲烷，边加边搅拌，搅拌速度分别为40r/min、80r/min、120r/min、160r/min和200r/min，至溶液混浊，2～8℃条件下冷藏，观察结晶情况，结果见表10。

表10搅拌速度考察

分析：从表10的结果可以看出，搅拌速度过慢，结晶颗粒较大，由于包裹了较多的杂质，所以结晶纯度较低；搅拌速度过快，颗粒结合在一起的机会减少，结晶的粒度很细，而且结晶的量较少。

结论：搅拌速度确定为120r/min。

3.6结晶静置时间的考察

方法：取7份红景天过大孔吸附树脂柱的合并液(每份相当于红景天生药材20g)，减压浓缩至干，用无水乙醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，将溶液转移至锥形瓶中，加入三氯甲烷至溶液出现絮状沉淀，静置30min，过滤除去杂质，重复此操作2～3次，至溶液澄清且无色，后再加入三氯甲烷，边加边搅，搅拌速度为120r/min，至溶液混浊，2～8℃条件下冷藏，时间分别为12h、24h、36h、48h、60h、72h和84h，观察结晶情况，结果见表11。

表11结晶静置时间的考察

静置时间(h)	12	24	36	48	60	72	84
								结晶重量(mg)	6.7	13.4	17.8	24.5	27.2	30.6	31.3
结晶纯度(％)	97.4	98.3	97.7	98.8	99.1	98.7	99.3

分析：随着静置时间的延长，红景天苷的结晶重量不断增加，大约72h后，重量增加不明显，说明72h后静置时间对红景天苷的纯度影响不大。

结论：确定结晶的静置时间为72h。

实施例4：红景天苷的制备

取红景天醇沉液(相当于红景天生药材200g)，减压浓缩至相对密度为1.0(红景天生药材质量与溶液体积之比)，浓缩液过聚酰胺柱(60～80目)，聚酰胺粉与红景天生药材的重量比为1∶1，径高比为1∶10，流速为3BV/h，洗脱用水4BV，收集洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.5(红景天生药材质量与溶液体积之比)，过大孔吸附树脂柱，10％的乙醇洗脱30BV，将红景天苷纯度在70％(HPLC法，检测波长：254nm)以上的流份合并在一起，减压浓缩至干，无水乙醇溶解，过滤，向滤液中加入三氯甲烷至溶液出现絮状沉淀，静置30min，过滤，再向滤液中加入三氯甲烷至出现絮状沉淀，静置30min，过滤，若溶液仍有颜色，重复此操作至溶液无色，再向溶液中加入三氯甲烷，边加边搅，搅拌速度为120r/min，至溶液混浊，2～8℃条件下冷藏72h，过滤，得红景天苷结晶约378mg，纯度为99.4％。

Claims (9)

1.一种制备红景天苷的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)浓缩：将红景天提取液减压浓缩，得浓缩液I；

2)醇沉：向步骤1)所得浓缩液I中加乙醇，静置，过滤，滤液浓缩，得浓缩液II；

3)纯化：将步骤2)所得浓缩液II过聚酰胺柱，洗脱，洗脱液减压浓缩，得浓缩液III；

4)精制：将步骤3)所得浓缩液III过大孔吸附树脂柱，洗脱，洗脱液浓缩至干，得干膏；

5)结晶：向步骤4)所得干膏中加入无水乙醇，使干膏溶解，过滤，向滤液中加入三氯甲烷除杂，再加入三氯甲烷结晶，过滤，即得红景天苷结晶。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)中：

所述红景天提取液为以水或0～50％(v/v)的乙醇作为提取溶剂得到的红景天药材提取液；

所述浓缩液I的相对密度在20℃为1.00～1.10。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤2)中：

所述加乙醇包括：向浓缩液I加入95％(v/v)的乙醇使含醇量达到60％(v/v)；

所述静置条件为：2～8℃静置48h；

所述浓缩液II的相对密度根据红景天生药材质量与溶液体积比计算为0.5～1.5，优选为1.5。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤3)中：

所述聚酰胺柱中的聚酰胺粉目数为14～80目，优选为60～80目；

所述聚酰胺柱的径高比小于1∶10，优选为1∶10；

所述红景天生药材与聚酰胺粉的质量之比优选为1∶1；

所述洗脱用水量为2～6BV(柱体积)，优选为4BV；

所述洗脱流速优选为3BV/h；

所述浓缩液III的相对密度根据红景天生药材质量与溶液体积比计算约为1.0～1.5。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤4)中：

所述洗脱的溶剂为5～10％(v/v)的乙醇，优选为10％(v/v)的乙醇；所述洗脱的溶剂用量为不少于30BV，优选为30BV。

6.根据权利要求1～6中任一项所述的制备方法，其特征在于，在步骤5)中：

所述加入无水乙醇包括：加入无水乙醇使干膏溶解，使所得溶液的浓度根据红景天干浸膏质量与溶液体积比计算为4.06～8.12mg/mL；

所述加入三氯甲烷除杂包括：向滤液中加入三氯甲烷至出现絮状沉淀，静置30min，优选地，向滤液中加入2～3次三氯甲烷至澄清无色，每次静置时间不超过30min；

所述加入三氯甲烷结晶包括：向除杂后的澄清无色溶液中，加入三氯甲烷，同时以120r/min的速度搅拌，至溶液浑浊，2～8℃静置不少于72h，优选72h。

7.一种根据权利要求1～6中任一项所述制备方法得到的红景天苷，其特征在于，所述红景天苷的纯度在95％以上。

8.一种包含权利要求1～6中任一项所述制备方法得到的红景天苷或权利要求7所述红景天苷的药物组合物，其特征在于，所述红景天苷的纯度在95％以上。

9.一种根据权利要求1～6中任一项所述制备方法得到的红景天苷或权利要求7所述的红景天苷在制备治疗心脑血管疾病或癌症的药物中的用途，其特征在于，所述药物剂型为注射剂或冻干粉针。

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