CN102942606A

CN102942606A - 一种制备高纯枸杞酸的方法

Info

Publication number: CN102942606A
Application number: CN2012105328009A
Authority: CN
Inventors: 殷梦龙; 杨延超; 董慧燕; 李旭孟
Original assignee: NUODE BIOLOGICAL IND CO Ltd SHANGHAI
Current assignee: NUODE BIOLOGICAL IND CO Ltd SHANGHAI
Priority date: 2012-12-11
Filing date: 2012-12-11
Publication date: 2013-02-27
Anticipated expiration: 2032-12-11
Also published as: CN102942606B

Abstract

本发明公开了一种高纯枸杞酸制备方法。包括将枸杞原料用溶剂冷浸或加热提取、过滤、浓缩、大孔树脂除杂、通过离子交换纤维富集以及两次中压层析。通过本发明方法制备得到高纯枸杞酸，由高效液相色谱检测枸杞酸含量可达95%以上。本发明公开的枸杞酸是枸杞中独有的标志性成分，可作为枸杞深加工产品的真伪鉴别指标，若同时对枸杞酸进行含量测定又可以起到保证枸杞深加工产品质量的作用。本发明将对枸杞提取物加工品质的提高，对造福于人类健康具有积极作用。

Description

一种制备高纯枸杞酸的方法

技术领域

本发明涉及植物药提取制备方法，具体涉及一种从枸杞（Lyciumchinense）提取制备高纯度枸杞酸的方法。

背景技术

枸杞是作为对人的健康有很多益处的食品，已被广泛应用。随着人们生活水平的日益提高，近年来相关枸杞的深加工产品也日益增多。但是，枸杞的原料产地来源多，质量也有较大的区别，进一步对制备枸杞提取物带来影响，导致深加工产品质量无法控制。目前，对于枸杞提取物的要求，只是以枸杞提取物中的多糖成分作为质量指标。而实际上除此之外，还有一些其它成份，例如：黄酮，枸杞酸，牛磺酸，甜菜碱等等，它们都有可能会影响枸杞提取物的质量。本发明人根据文献报道[1]“枸杞酸”是一种目前仅在枸杞中发现的独有的抗氧化有效成分，它是一种抗坏血酸的β葡萄糖苷，其化学名：2-O-(β-D-glucopyranosyl)ascorbic acid（AA-2βG）

枸杞酸是枸杞中特有的标志性成分，检测枸杞酸含量可以对枸杞原料质量进行鉴别同时也希望以此为基础建立新的针对枸杞提取物的质量标准。由于目前未见枸杞酸有市售品，为此有必要以专利形式公布一种全新的制备方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服上述的不足之处，研究设计从枸杞（Lycium chinense）提取制备高纯度枸杞酸的方法。

本发明提供了一种制备高纯枸杞酸的方法，该方法包括下列步骤:

（1）提取：将枸杞原料用溶剂冷浸或加热提取；

（2）离心结合平板过滤：将上述浸泡物料使用高速离心机去掉植物渣，再经板框过滤机滤得清液；

（3）浓缩：所得清液真空浓缩至不含有机溶媒；

（4）大孔树脂除杂：浓缩液以1个柱体积量/小时的流量通过大孔吸附树脂柱，收集全部通过的液体；

（5）通过离子交换纤维：将步骤（4）料液以1个柱体积量/小时的流速通过强碱性阴离子交换纤维，用反渗透纯水洗至中性，交换纤维再用两个柱体积0.5%的甲酸溶液洗脱，以0.5个柱体积量/小时的流速操作；

（6）浓缩：收集全部两个柱体积的洗脱液真空浓缩并经加水再浓缩直至浓缩液中无甲酸（pH 7）；

（7）中压层析：取上述浓缩液，上于中压层析柱上，采用乙腈、甲醇，乙醇、丙醇或丙酮的水溶液作为洗脱剂，洗脱液用HPLC检测，收集枸杞酸相对集中的馏分；

（8）浓缩：真空浓缩经HPLC检测为枸杞酸相对集中的层析馏分；

（9）将上述浓缩物重复步骤（7）进行再一次层析，收集枸杞酸高度集中的馏分；

（10）浓缩干燥：真空浓缩上述枸杞酸高度集中的层析馏分至干即得。

通过本发明方法制得的枸杞酸经HPLC鉴别纯度达到95%~97%。

本发明可用中国宁夏、新疆、甘肃和河北等地产的枸杞为原料。

本发明方法步骤（1）用于提取的溶剂可以是水、甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮或是水与甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮的0~100%的混合液，优选纯甲醇或者纯乙腈。

溶剂与枸杞的重量配比为1:8~1:16，优选1:14。

冷浸温度和时间是4～90℃和4~14小时，优选25℃和8小时。

步骤（2）用转速在8000转/分钟的高速离心机除去植物渣。

步骤（4）中的除杂所用的大孔树脂为非极性或低极性的D-101、AB-8、ADS-17或HP-20，优选D-101。

步骤（5）通过的强碱性阴离子交换纤维是ZB-2强碱性阴离子交换纤维。

步骤（7、9）中所述的中压层是指使用DIOL或RP8中压层析预制柱为：MERCK LiChroprep DIOL和MERCK LiChroprep RP8。层析流动相采用乙腈或者甲醇与水配制的梯度洗脱系统，梯度从甲醇与水的比例为1%（1:99V/V）起逐渐升高比例到50%（50:50V/V）止，流量为20毫升/分钟。以紫外在线检测器信号为准收集260nm监测下的枸杞酸出峰部位，自动收集仪收集枸杞酸高度集中的馏分。

本发明方法制备的枸杞酸经光谱鉴定与抗坏血酸的β葡萄糖苷完全一致。高分辨质谱数据显示：Q-Tofu分子量是361.0741，计算得出枸杞酸含钠离子的分子式为C₁₂H₁₈O₁₁Na。那么枸杞酸的分子量应该是338，分子式是C₁₂H₁₈O₁₁。再结合枸杞酸的核磁共振光谱碳氢数据的解读推定枸杞酸的分子结构与已知的2-O-(β-D-glucopyranosyl)ascorbic acid一致。

碳氢数据

本发明提供的方法制备得到高纯枸杞酸，由高效液相色谱检测枸杞酸纯度达95%~97%。本发明对高纯枸杞酸的制备技术将有利于枸杞加工产品质量提高，造福于人类健康。本发明方法简单，宜于大量制备作为对照品供给市场，预期有较大的应用价值和社会效益。

附图说明

图1本发明方法制得高纯枸杞酸HPLC检测图（实施例1）

图2本发明方法制得高纯枸杞酸HPLC检测图（实施例2）

图3本发明方法制得高纯枸杞酸HPLC检测图（实施例3）

具体实施方式

以下所用原料市售得到。

实施例1

称取宁夏产枸杞干果1公斤，加入30%乙腈（15升），室温（23~27℃）浸泡4小时后投入食品搅拌器中搅碎，继续浸泡10小时，用高速离心机以8000转/分钟离心浸泡物料,除去植物渣，所得料液再用不锈钢板框滤器过滤得到处理后得到清料液12.8升。料液用旋转蒸发仪在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩至无乙腈。得到水性料液6升，将此料液通过高位槽加入到1000毫升洗净的D-101大孔吸附树脂柱子中，控制通过液流速为1柱体积/小时，上柱完毕后，用1000毫升水替换出柱内料液，获得过柱料液7升。收集过柱料液通过OH型的ZB-2强碱性离子交换纤维，以1柱体积/小时流速通过。通完料液柱体用2柱体积的清水以2柱体积/小时流速洗掉料液，离子交换纤维再用2柱体积的0.5%甲酸溶液洗脱，流量为0.2柱体积/小时，收集甲酸洗脱液，在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩至浓缩物中无甲酸，此时浓缩液pH 7。得浓缩物20.3克。取2克所得浓缩物，用1毫升水溶解，溶液上于DIOL中压层析柱上，以20毫升/分流量采用1%-50%乙腈的梯度系统冲洗，在以紫外在线检测器信号为准收集波长260纳米监测下的合适出峰部位，自动收集仪收集枸杞酸高度集中的馏分。将收集到的部位在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩，获得0.8克糖浆状物质。再将此物质用0.5毫升水溶解，上于DIOL中压层析柱再一次层析，流动相仍为1%-50%乙腈的梯度系统，还是以20毫升/分流量冲洗。收集波长260纳米监测下的枸杞酸出峰部位，自动收集仪收集枸杞酸高度集中的馏分。将收集所得馏分在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩至干（无溶剂），得固体0.12克。

产品经核磁共振光谱检测确认与枸杞酸一致。

HPLC纯度鉴定为96.8%（见图1）。

实施例2

称取新疆产枸杞干果1公斤，加入适量30%乙醇在食品搅拌器中全部搅碎后加30%乙醇加足到15升，回流3小时后。提取液待冷却到23~27℃后，

用高速离心机以8000转/分钟离心浸泡物料,除去植物渣，所得料液再用不锈钢板框滤器过滤得到处理后得到清料液13.2升。料液用旋转蒸发仪在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩至无乙腈。得到水性料液7升，将此料液通过高位槽加入到1000毫升洗净的AB-8大孔吸附树脂柱子中，控制通过液流速为1柱体积/小时，上柱完毕后，用1000毫升水替换出柱内料液，获得过柱料液8升。收集过柱料液通过OH型的ZB-2强碱性离子交换纤维，以1柱体积/小时流速通过。通完料液柱体用2柱体积的清水以2柱体积/小时流速洗掉料液，离子交换纤维再用2柱体积的0.5%甲酸溶液洗脱，流量为0.2柱体积/小时，收集甲酸洗脱液，在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩至浓缩物中无甲酸，此时浓缩液pH 7。得浓缩物22.1克。取2克所得浓缩物，用1毫升水溶解，溶液上于RP-8中压层析柱上，以20毫升/分流量采用0.5%-40%甲醇的梯度系统冲洗，在以紫外在线检测器信号为准收集波长260nm监测下的合适出峰部位，自动收集仪收集枸杞酸高度集中的馏分。将收集到的部位在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩，获得0.8克糖浆状物质。再将此物质用0.5毫升水溶解，上于DIOL中压层析柱再一次层析，流动相为1%-50%乙腈的梯度系统，以20毫升/分流量冲洗。收集波长260纳米监测下的枸杞酸出峰部位，自动收集仪收集枸杞酸高度集中的馏分。将收集所得馏分在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩至干（无溶剂），得固体0.16克。

产品经核磁共振光谱检测确认与枸杞酸一致。

HPLC纯度鉴定为96.2%（见图2）。

实施例3

称取甘肃产枸杞干果1公斤，加入适量20%丙酮15升23~27℃浸泡8小时后投入食品搅拌器中搅碎，然后加热回流2小时，待冷却后，用高速离心机离心浸泡物料出去除去植物渣，所得料液再用平板框滤器过滤得到处理后的清料液12.3L。料液用旋转蒸发仪在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩至无丙酮。得到水性料液6升，将此料液通过高位槽加入到1000毫升洗净的HP20大孔吸附树脂柱子中，控制通过液流速为1柱体积/小时，上柱完毕后，用1000毫升水替换出柱内料液，获得过柱料液8升。收集过柱料液通过OH型的ZB-2强碱性离子交换纤维，以1柱体积/小时流速通过。通完料液柱体用2柱体积的清水以2柱体积/小时流速洗掉料液，离子交换纤维再用2柱体积的0.5%甲酸溶液洗脱，流量为0.2柱体积/小时，收集甲酸洗脱液，在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩至浓缩物中无甲酸，此时浓缩液pH 7。得浓缩物15.7克。取2克所得浓缩物，用1毫升水溶解，溶液上于RP-8中压层析柱上，以20毫升/分流量采用0%-40%甲醇的梯度系统冲洗，在以紫外在线检测器信号为准收集波长260nm监测下的枸杞酸出峰部位，自动收集仪收集枸杞酸高度集中的馏分。将收集到的部位在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩，获得0.72克糖浆状物质。再将此物质用0.5毫升水溶解，上于RP-8中压层析柱再一次层析，流动相仍为0%-40%甲醇的梯度系统，以20毫升/分流量冲洗。收集波长260纳米监测下的合适出峰部位，自动收集仪收集枸杞酸高度集中的馏分。将收集所得馏分在-0.09~-0.95兆帕，55~65℃下真空浓缩至干（无溶剂），得固体0.08克。

产品经核磁共振光谱检测确认与枸杞酸一致。

HPLC纯度鉴定为96.5%（见图3）。

Claims

1.一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

（1）提取：将枸杞原料用溶剂冷浸或加热提取；

（3）浓缩：所得清液真空浓缩至不含有机溶媒；

（6）浓缩：收集全部两个柱体积的洗脱液真空浓缩并经加水再浓缩直至浓缩液中无甲酸pH 7；

2.根据权利要求1所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，步骤（1）用于提取的溶剂为水、甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮或是水与甲醇、乙醇、丙醇、乙腈或丙酮的0~100%的混合液，优选纯甲醇或者纯乙腈；溶剂与枸杞的重量配比为1:8~1:16，优选1:14。

3.根据权利要求1所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，所述步骤（1）冷浸温度和时间为4～90℃，4~14小时；优选25℃，8小时。

4.根据权利要求1所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，所述步骤（2）用转速在8000转/分钟的高速离心机除去植物渣。

5.根据权利要求1所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，所述步骤（4）中的除杂所用的大孔树脂为非极性或低极性的D-101、AB-8、ADS-17或HP-20，优选D-101。

6.根据权利要求1所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，所述步骤（5）通过的强碱性阴离子交换纤维为ZB-2强碱性阴离子交换纤维。

7.根据权利要求1所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，所述步骤（7）或（9）中所述的中压层是指使用DIOL或RP8中压层析预制柱为：MERCK LiChroprep DIOL或MERCK LiChroprep RP8；层析流动相采用乙腈或者甲醇与水配制的梯度洗脱系统，梯度从甲醇与水的比例为1%1:99V/V起逐渐升高比例到50%50:50V/V止，流量为20毫升/分钟；以紫外在线检测器信号为准收集260nm监测下的枸杞酸出峰部位，自动收集仪收集枸杞酸高度集中的馏分。

8.根据权利要求1所述的一种制备高纯枸杞酸的方法，其特征在于，制得的枸杞酸经HPLC鉴别纯度达到95%~97%。