CN107805270A

CN107805270A - 一种人参皂苷Rh2的提取方法

Info

Publication number: CN107805270A
Application number: CN201711052713.2A
Authority: CN
Inventors: 杨闰; 仇文俊; 丁健
Original assignee: Jiangsu Ji Source Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Ji Source Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2017-10-30
Filing date: 2017-10-30
Publication date: 2018-03-16

Abstract

本发明提供了人参皂苷Rh₂的提取方法，其将有人参皂苷类成分的药材在乙酸乙酯及无机酸作用下水解后，使用印迹聚合物柱分离纯化，以洗脱出人参皂苷Rh₂。本发明所揭示的一种人参皂苷Rh₂的提取方法，实现了从价格便宜的药材中高效分离并提取人参皂苷Rh₂，并降低人参皂苷Rh₂的制备成本，分离后得到最终的人参皂苷Rh₂的纯度可达到98％以上。

Description

一种人参皂苷Rh2的提取方法

技术领域

本发明涉及人参加工技术领域，尤其涉及一种人参皂苷Rh2的提取方法。

背景技术

人参皂苷(Ginsenoside)是一种固醇类化合物。人参皂苷Rh₂作为人参皂苷的一种重要单体化合物，人参皂苷Rh₂具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复。人参皂苷Rh2单体化合物对癌细胞的生长有抑制作用，能诱导肿瘤细胞凋亡，逆转肿瘤细胞异常分化，抗肿瘤转移，与化疗药物联用能起到增效减毒的作用。此外，人参皂苷Rh₂还具有提高机体免疫力、抗菌、改善心脑血管供血不足、调节中枢神经系统、抗疲劳、延缓衰老等功效。

然而，天然的人参皂苷Rh₂单体化合物仅存在于野外环境生长的人参中。由于野生的人参价格昂贵，因此从野山人参中提取人参皂苷Rh₂单体的成本就非常高昂，不适于普通患者使用。西洋参、三七茎叶等价格便宜的药材中也含有人参皂苷Rh₂单体化合物，但是现有技术中的提取方法的提取效果不甚理想。同时，由于西洋参或者三七中的二醇类皂苷和人参皂苷Rh₂单体化合物的分子结构相同(仅糖链不同)，因此传统的从西洋参、三七茎叶等价格便宜的药材提取人参皂苷Rh₂单体化合物的通常纯度不高。

公告号为CN101463061B的中国发明专利公开了“三七人参皂苷Rg1、Rb1及其总皂苷的制备方法”，其采用溶剂萃取+大孔树脂吸附+结晶的方式进行提取有效成分，但是该现有技术中无法实现单一提取特定单体化合物的缺陷，尤其是无法单一地提取人参皂苷Rh₂单体化合物，因此存在一定的局限性，且存在难以富集，体系复杂，分离纯化难度大的缺陷。同时，由于，人参皂苷Rh₂具有热敏、易水解的特性，从而导致采用上述方法存在对人参皂苷Rh₂提取效果不理想。

公开号为CN1648133A的中国发明专利公开了“人参皂苷Rh₂的制备方法”，其采用乙醇浸提---分离纯化萃取---分离纯化---水解提取---酶转化---低温干燥的工艺路线。该现有技术仍然存在提取工艺路线较长的缺陷且工艺繁琐的缺陷。

有鉴于此，有必要对现有技术中的人参皂苷Rh₂的提取方法予以改进，以解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于公开一种人参皂苷Rh₂的提取方法，以实现从价格便宜的药材中高效分离并提取人参皂苷Rh₂，并降低人参皂苷Rh₂的制备成本及分离后得到最终的人参皂苷Rh₂的纯度。

为实现上述发明目的，本发明提供了一种人参皂苷Rh2的提取方法，包括以下步骤：

S1：将呈粉状并含有人参皂苷类成分的药材加入乙酸乙酯，常温条件下，以1500～2000rpm的转速搅拌过夜，抽滤，滤饼干燥得淡黄色粉末；

S2：取步骤S1所得的淡黄色粉末与纯化水混合，加热至100～120℃，搅拌反应半小时，滴加体积比为10～15％无机酸溶液，并在90～110℃条件下加入乙酸乙酯与水混合溶液，以1500～2000rpm的转速搅拌30分钟，抽滤得母液，母液使用饱和碳酸钠水溶液洗涤1～3次后，使用无水碳酸钠在60℃条件下干燥4～5小时，得固体，然后将固体加入乙酸乙酯及石油醚打浆，抽滤干燥后，得皂苷粗品；

S3：取醋酸纤维素酞酸酯、十二醇、苯和4-乙烯基吡啶混合均匀，超声处理4～6h后，加入二甲基丙烯酸乙二醇酯和偶氮二异丁腈后再经超声处理5～10分钟后得混合溶液，使用进样针移取所述混合溶液至甲醇处理过的一端封口的移液枪枪头内，移液枪枪头用保鲜膜及硅胶封口后于60℃反应24小时后取出，除去保鲜膜及硅胶，用甲醇洗脱，过滤，得固体，固体研磨至直径20～25微米的范围内，装入不锈钢柱内，以制得印迹聚合物柱；

S4：将步骤S2所得的皂苷粗品配置浓度为20wt％的水溶液，使用步骤S3中的印迹聚合物柱进行分离纯化，TLC检测反应完全，以洗脱出人参皂苷Rh2。

作为本发明的进一步改进，所述步骤S1中，含有人参皂苷类成分的药材选自人参、人参茎叶、西洋参、西洋参茎叶、三七或者三七茎叶中的一种或两种以上任意比例的混合物。

作为本发明的进一步改进，所述步骤S2中的无机酸溶液的浓度为1～1.2mol/L，

作为本发明的进一步改进，述步骤S2中的无机酸溶液选自盐酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液、硼酸溶液、偏铝酸溶液、高氯酸溶液、次氯酸溶液或者磷酸溶液。

作为本发明的进一步改进，所述步骤S3中，超声处理中的超声频率为40赫兹。

作为本发明的进一步改进，所述步骤S4中，不锈钢柱中所使用的洗脱剂为由纯化水与乙醇所形成的乙醇溶液，所述洗脱剂中乙醇的浓度为50wt％。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明所揭示的一种人参皂苷Rh₂的提取方法，实现了从价格便宜的药材中高效分离并提取人参皂苷Rh₂，并降低人参皂苷Rh₂的制备成本，分离后得到最终的人参皂苷Rh₂的纯度可达到98％以上。

附图说明

图1为通过本发明制备得到的人参皂苷Rh₂的核磁共振氢谱图；

图2为通过本发明制备得到的人参皂苷Rh₂的核磁共振碳谱图；

图3为通过本发明制备得到的人参皂苷Rh₂的HPLC图。

具体实施方式

下面结合附图所示的各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。

除非说明书中有特殊说明，本发明中的各个实施例中的组分、原料均采用分析纯级别。另外，各实施例中的“g”为重量单位“克”；“h”为时间单位“小时”；“ml”为体积单位“毫升”；“室温”为23℃。“rmp”为每分钟的转速。“wt％”为浓度单位“质量比百分比”。“mol/L”为浓度单位“摩尔每升”。

本实施方式具体载明了一种人参皂苷Rh₂的提取方法，包括以下步骤：

步骤S1：在2000ml单口烧瓶中，称取放入呈粉状并含有人参皂苷类成分的药材200g。含有人参皂苷类成分的药材选自人参、人参茎叶、西洋参、西洋参茎叶、三七或者三七茎叶中的一种或两种以上任意比例的混合物。在本实施方式中，所选用的含有人参皂苷类成分的药材选自三七茎叶。加入600ml乙酸乙酯。常温条件下，以1500～2000rpm的转速搅拌过夜，抽滤，滤饼干燥得170g淡黄色粉末。

步骤S2：另取一个2000ml单口瓶，取步骤S1所得的淡黄色粉末20g与300ml纯化水混合，加热至100～120℃，搅拌反应半小时，滴加体积比为10～15％无机酸溶液320ml，并在15分钟内滴加完毕，并在90～110℃条件下加入600ml乙酸乙酯与60ml水。在1500～2000rpm的转速搅拌30分钟，抽滤得母液，母液使用饱和碳酸钠水溶液洗涤3次后，使用无水碳酸钠在60℃条件下干燥4～5小时，得固体，然后将固体加入200ml乙酸乙酯及600ml石油醚打浆，抽滤干燥后，得皂苷粗品。该皂苷粗品约含7.5％的人生皂苷Rh₂。

在本实施方式中，该步骤S2中的无机酸溶液的浓度为1～1.2mol/L。无机酸溶液选自盐酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液、硼酸溶液、偏铝酸溶液、高氯酸溶液、次氯酸溶液或者磷酸溶液，并具体选用1.2mol/L的盐酸溶液，并通过盐酸溶液对总皂苷进行酸解。

步骤S2所涉及的化学反应方程式如下式(1)所示：

步骤S3：取0.05ml醋酸纤维素酞酸酯、0.2950g十二醇、46ml苯和0.1ml4-乙烯基吡啶混合均匀，超声处理4～6h后，加入1ml二甲基丙烯酸乙二醇酯和8.5mg偶氮二异丁腈后再经超声处理5～10分钟后得混合溶液，使用规格为100ml的进样针移取所述混合溶液50ml至使用甲醇处理过切一端封口的移液枪枪头内。移液枪枪头用保鲜膜及硅胶封口后于60℃反应24小时后取出，除去保鲜膜及硅胶，用甲醇洗脱，过滤，得固体，固体研磨至直径20～25微米的范围内，装入不锈钢柱内，以制得印迹聚合物柱。所述步骤S3中，超声处理时使用超声波发生器，超声波发生器所输出的超声波功率为700W，超声频率为40赫兹。

本实施方式所制得的印迹聚合物柱可以有效除去未被包裹的水溶性活性成分，使得其稳定性大大增加，可提高对人参皂苷Rh2实现专一性识别并吸附。并能够有效地降低脂肪类物质与其他人参皂苷活性成分的接触，进一步提升稳定性。

步骤S4：将步骤S2所得的皂苷粗品配置成浓度为20wt％的水溶液，使用步骤S3中所制得的印迹聚合物柱进行分离纯化，TLC检测反应完全，以顺序地洗脱出目标组分，即人参皂苷Rh2。具体的，在本实施方式中，填充印迹聚合物的不锈钢柱中所使用的洗脱剂为由纯化水与乙醇所形成的乙醇溶液，所述洗脱剂中乙醇的浓度为50wt％。

洗脱剂的收集采用等分法自动收集，洗脱顺序为为人参皂苷Rg3，人参皂苷Rg5，人参皂苷Rh1，人参皂苷Rh2，人参皂苷Rh3。皂苷元被柱体吸附，整体柱使用完以后使用95wt％的乙醇溶液继续洗脱，把皂苷元洗脱下来。人参皂苷Rh2的含量可达98％以上，收率达20.1％。物理性质：白色固体粉末mp为218.3℃，易溶于醇类溶剂。在本发明中，通过分子印迹聚合物(MIP)并在由此制成的印迹聚合物柱进行顺序地分离，实现了对目标组分人参皂苷Rh2的高效分离与提纯操作。

参图1与图2所示，通过本实施方式所最终分离得到的人参皂苷Rh2样品进行核磁共振氢谱及碳谱测试。

图1的试验条件如下：

检测依据：JY/T 007-1996。检测仪器：核磁共振谱仪。C¹³测定。

图2的试验条件如下：

检测依据：JY/T 007-1996。检测仪器：核磁共振谱仪。H¹测定。

从图1及图2我们可明显看出，待检测的白色固体粉末的样品曲线与人参皂苷Rh2(标准品)的多个信号峰几乎完全重合。由此可知，通过本实施方式最终制备得到的白色固体粉末为人参皂苷Rh2。

参图3的试验条件：

检测依据：GB/T16631-2008。检测仪器：高效液相色谱仪。

信号1:VWD1A，Wavelength＝202nm

送样检测的样品中人参皂苷Rh2的含量为98％。

上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims

1.一种人参皂苷Rh2的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的人参皂苷Rh2的提取方法，其特征在于，所述步骤S1中，含有人参皂苷类成分的药材选自人参、人参茎叶、西洋参、西洋参茎叶、三七或者三七茎叶中的一种或两种以上任意比例的混合物。

3.根据权利要求1所述的人参皂苷Rh2的提取方法，其特征在于，所述步骤S2中的无机酸溶液的浓度为1～1.2mol/L。

4.根据权利要求3所述的人参皂苷Rh2的提取方法，其特征在于，述步骤S2中的无机酸溶液选自盐酸溶液、硫酸溶液、硝酸溶液、硼酸溶液、偏铝酸溶液、高氯酸溶液、次氯酸溶液或者磷酸溶液。

5.根据权利要求1所述的人参皂苷Rh2的提取方法，其特征在于，所述步骤S3中，超声处理中的超声频率为40赫兹。

6.根据权利要求1所述的人参皂苷Rh2的提取方法，其特征在于，所述步骤S4中，不锈钢柱中所使用的洗脱剂为由纯化水与乙醇所形成的乙醇溶液，所述洗脱剂中乙醇的浓度为50wt％。