CN101301374A

CN101301374A - 一种枇杷叶总黄酮的制备方法及其降血糖和降血脂功能

Info

Publication number: CN101301374A
Application number: CNA2008100244123A
Authority: CN
Inventors: 李维林; 吕寒; 陈剑; 吴菊兰; 任冰如
Original assignee: Institute of Botany of CAS
Current assignee: Institute of Botany of CAS
Priority date: 2008-03-21
Filing date: 2008-03-21
Publication date: 2008-11-12

Abstract

本发明涉及一种枇杷叶总黄酮的制备方法及其降血糖和降血脂功能，提供了一种从枇杷叶中提取、制备总黄酮的方法以及根据该方法所制备得到的总黄酮的功能和用途，包括：(1)枇杷叶总黄酮的制备方法：枇杷叶药材经乙醇或甲醇回流提取，或浸渍提取，或渗漉提取，提取液减压浓缩，加水沉淀后离心，上清液上大孔树脂或聚酰胺柱，水洗脱杂质后，用乙醇梯度洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩干燥，粉碎后得到枇杷叶总黄酮提取物；(2)枇杷叶总黄酮的质量标准：以紫外分光光度法测定，以NaNO₂－Al(NO₃)₃－NaOH显色，以芦丁计，黄酮类化合物总含量不低于50％；(3)枇杷叶总黄酮的功能：功能在于降血糖和降血脂，用途在于治疗糖尿病和糖尿病引起的血脂代谢紊乱。

Description

一种枇杷叶总黄酮的制备方法及其降血糖和降血脂功能

技术领域：

本发明涉及从中药枇杷叶中提取制备总黄酮的方法，以及该提取物的降血糖、降血脂功能，和在治疗糖尿病及改善糖尿病引起的血脂代谢紊乱方面的应用。

背景技术：

糖尿病是一种常见的内分泌代谢性疾病，在中医学中属消渴症范畴，是继心血管疾病及癌症之后危害人类健康的第三大疾患。据世界卫生组织报告全球范围内糖尿病患者高达1.25亿，预计这一数字到2025年将增加到2.99亿。由于人口基数大，现在我国的糖尿病患者约3000万以上，绝对患病人数居世界首位。由于糖尿病具有患病率、致残率及并发症高的特点，因此已成为医学界颇为重视的一种疾病。

在糖尿病的治疗中，主要是通过药物控制血糖升高和防治并发症。在治疗糖尿病的药物中，西药在降血糖方面表现突出，中药在治疗并发症方面独具特色，二者各有所长。从目前临床所用药物来看，西药都有一定的局限性和不良反应，甚至是很严重的不良反应，如导致低血糖、乳酸中毒等。因此，国内外一直很重视从天然产物尤其是药用植物中发掘和开发降血糖效果好、副作用小、对并发症有效的药物制剂。

枇杷叶是蔷薇科枇杷属植物枇杷Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.的干燥叶，是一味常用传统中药，收载于历版中国药典供中医临床使用。枇杷叶归肺、胃经，具清肺止咳、降逆止呕作用，用于治疗肺热咳嗽、气逆喘气、胃热呕逆、烦热口渴等症状。据报道枇杷叶中含有多种黄酮类成分，但尚未有针对枇杷叶总黄酮的制备工艺、总黄酮的降血糖、降血脂功能以及用于治疗糖尿病和改善糖尿病引起的血脂代谢紊乱方面的报道。

发明内容：

本发明提供了一种从枇杷叶中提取、制备总黄酮的方法，以及根据该技术所得总黄酮提取物的降血糖降血脂功能和在治疗糖尿病、改善糖尿病引起的血脂代谢紊乱方面的应用。

1.枇杷叶总黄酮的制备方法

(1)将枇杷叶干燥粉碎；

(2)用乙醇或甲醇回流提取，浸渍提取或渗漉提取，合并提取液，减压浓缩；

(3)浓缩液加水沉淀后离心，上清液备用；

(4)将(3)得到的上清液上大孔吸附树脂或聚酰胺柱；

(5)用水洗脱去杂后，用乙醇梯度洗脱；

(6)收集乙醇洗脱液减压浓缩干燥，粉碎后得到枇杷叶总黄酮提取物。

上述制备方法的条件范围为：步骤(2)中乙醇或甲醇的浓度为10％-90％，提取方法为回流提取或渗漉提取；步骤(5)中乙醇梯度洗脱范围为20％-80％。

2.枇杷叶总黄酮的含量测定方法及其质量要求

本发明中枇杷叶总黄酮提取物的含量测定采用紫外分光光度法，以NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH显色，以芦丁计，黄酮类化合物总含量不低于50％。

3.枇杷叶总黄酮的降血糖、降血脂活性

试验一、枇杷叶总黄酮对正常小鼠空腹血糖的影响

取正常小鼠30只，随机分为3组，分别按10ml/kg体重经口给予枇杷叶总黄酮300mg/kg，格列齐特50mg/kg以及等体积的0.5％CMC-Na，每天给药1次，连续7d。末次给药时，各组禁食4h后给药，再继续禁食2h。小鼠眼眶后静脉丛取血，分离血清，测定血糖。

试验结果如表1所示，与正常组相比，枇杷叶总黄酮300mg/kg可显著降低正常小鼠的空腹血糖水平。

表1 枇杷叶总黄酮对正常小鼠空腹血糖的影响(X±SD)

^*P＜0.05，^**P＜0.01，vs正常组

试验二、枇杷叶总黄酮对四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖、血清胰岛素、甘油三脂、总胆固醇的影响

随机取出小鼠10只作为正常组，其余小鼠禁食16-17h后，静脉注射四氧嘧啶65mg/kg，注射后72小时眼眶后静脉丛取血，分离血清，预测血糖，选空腹血糖＞11.12mmol/L的小鼠30只，随机分为3组，分别按10ml/kg体重经口给予枇杷叶总黄酮300mg/kg、格列齐特50mg/kg以及等体积的0.5％CMC-Na，每日一次，连续给药14天。其中，第7次给药前各组禁食4h，给药后继续禁食2h，然后小鼠眼眶后静脉丛取血，分离血清，测定血糖。末次给药前禁食4h，给药后2h，小鼠摘眼球取血，分离血清，以试剂盒方法测定血糖、血清胰岛素、甘油三脂、总胆固醇。

试验结果如表2所示，与正常组相比，四氧嘧啶糖尿病小鼠的空腹血糖极显著升高，同时血清胰岛素水平显著降低。与模型组相比，枇杷叶总黄酮300mg/kg在给药后第7天，显著地降低了糖尿病小鼠的空腹血糖；给药后第14天，极显著地降低了糖尿病小鼠的空腹血糖，显著地回升了糖尿病小鼠的血清胰岛素水平。

表2 枇杷叶总黄酮对四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖和血清胰岛素的影响(X±SD)

^##P＜0.01，vs正常组；^*P＜0.05，^**P＜0.01，vs模型组

如表3所示，与正常组相比，四氧嘧啶糖尿病小鼠的血清总胆固醇和甘油三酯含量均极显著升高。与模型组相比，枇杷叶总黄酮300mg/kg显著地降低了糖尿病小鼠的血清总胆固醇和甘油三酯含量。

表3 枇杷叶总黄酮对四氧嘧啶糖尿病小鼠血脂的影响(X±SD)

^##P＜0.01，vs正常组；^*P＜0.05，^**P＜0.01，vs模型组

试验三、枇杷叶总黄酮对链脲佐菌素糖尿病小鼠的血糖、血清胰岛素、甘油三脂、总胆固醇的影响

随机取出小鼠10只作为正常组，其余小鼠禁食16-17h后，尾静脉注射链脲佐菌素160mg/kg，注射后72小时眼眶后静脉丛取血，分离血清，预测血糖，选空腹血糖＞12mmol/L的小鼠30只，随机分为3组，分别按10ml/kg体重经口给予枇杷叶总黄酮300mg/kg、格列齐特50mg/kg以及等体积的0.5％CMC-Na，每日一次，连续14日给药。其中，第7次给药前各组禁食4h，给药后继续禁食2h，然后小鼠眼眶后静脉丛取血，分离血清，测定血糖。末次给药前禁食4h，给药后2h，小鼠摘眼球取血，分离血清，以试剂盒方法测定血糖、胰岛素、甘油三脂和总胆固醇。

试验结果见表4，与正常组相比，链脲佐菌素糖尿病小鼠的空腹血糖极显著升高，胰岛素水平极显著降低。与模型组相比，枇杷叶总黄酮300mg/kg在给药后第7天，显著地降低了糖尿病小鼠的空腹血糖；给药后第14天，极显著地降低了糖尿病小鼠的空腹血糖，同时极显著地回升了糖尿病小鼠的血清胰岛素水平。

表4 枇杷叶总黄酮对链脲佐菌素糖尿病小鼠的血糖和胰岛素的影响(X±SD)

^##P＜0.01，vs正常组；^*P＜0.05，^**P＜0.01，vs模型组

如表5所示，与正常组相比，链脲佐菌素糖尿病小鼠的血清总胆固醇和甘油三酯含量均极显著升高。与模型组相比，枇杷叶总黄酮300mg/kg极显著地降低了糖尿病小鼠的血清总胆固醇和甘油三酯含量。

表5 枇杷叶总黄酮对链脲佐菌素糖尿病小鼠血脂的影响(X±SD)

^##P＜0.01，vs正常组；^*P＜0.05，^**P＜0.01，vs模型组

对正常小鼠、四氧嘧啶糖尿病小鼠和链脲佐菌素糖尿病小鼠模型的药理实验结果表明：本发明中所述枇杷叶总黄酮具有降血糖和降血脂的功能，提示其可用于治疗糖尿病及由糖尿病引起的血脂代谢紊乱。

具体实施方式：

下面结合实例对本发明进行详细描述。但是，本发明不局限于所给出的这些实例。

实施例1：干燥枇杷叶1.0kg粉碎成粗粉，用80％乙醇冷浸两次，每次15天，合并浸渍液，减压浓缩呈稠膏，加水搅拌，冷沉。置离心机沉降离心，取上清液备用。

取大孔吸附树脂，按与生药重量比1∶2的比例装柱，将上述备用的上清液上样，先用去离子水洗脱，再用20％-60％乙醇进行梯度洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得枇杷叶总黄酮提取物，得率为1.4％。

实施例2：干燥枇杷叶1.0kg粉碎成粗粉，用80％乙醇加热回流提取2次，合并提取液，减压浓缩呈稠膏，加水搅拌，冷沉。置离心机沉降离心，取上清液备用。

取大孔吸附树脂，按与生药重量比1∶1的比例装柱，将上述备用的上清液上样，先用去离子水洗脱，再用20％-70％醇进行梯度洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得枇杷叶总黄酮提取物，得率为1.5％。

实施例3：干燥枇杷叶1.0kg粉碎成粗粉，用60％乙醇浸渍48小时后，渗漉提取，渗漉至流出液色浅，黄酮反应不明显为止，减压浓缩呈稠膏，加搅拌，冷沉。置离心机沉降离心，取上清液备用。

取大孔吸附树脂，按与生药重量比1∶1的比例装柱，将上述备用的上清液上样，先用去离子水洗脱，再用30％-80％乙醇进行梯度洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得枇杷叶总黄酮提取物，得率为1.6％。

实施例4：干燥枇杷叶1.0kg粉碎成粗粉，用80％甲醇冷浸两次，每次15天，合并浸渍液，减压浓缩呈稠膏，加水搅拌，冷沉。置离心机沉降离心，取上清液备用。

取聚酰胺，按与生药重量比1∶1的比例装柱，将上述备用的上清液上样，先用去离子水洗脱，再用20％-80％乙醇进行梯度洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得枇杷叶总黄酮提取物，得率为1.9％。

Claims

1.一种从枇杷叶中提取和制备总黄酮的方法，根据该方法所得总黄酮提取物中黄酮类化合物的总含量不低于50％，具有显著的降血糖和降血脂作用。

2.根据权利要求1所述的枇杷叶总黄酮的制备方法，其特征在于包括以下步骤：干燥枇杷叶粉碎，乙醇或甲醇回流提取，或浸渍提取，或渗漉提取，提取液减压浓缩，加水沉淀后离心，上清液上大孔树脂或聚酰胺柱，水洗脱杂质后，乙醇梯度洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩干燥，得总黄酮。

3.根据权利要求2所述的枇杷叶总黄酮的制备步骤，其特征在于：

(1)提取溶剂为10％-90％乙醇或甲醇；

(2)提取方法为回流、浸渍或渗漉；

(3)纯化的柱材料为大孔树脂，或聚酰胺，乙醇梯度洗脱范围为20-80％。

4.根据权利要求1所述的枇杷叶总黄酮，其特征在于：采用紫外分光光度法，以NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH显色测定总黄酮含量，以芦丁计，黄酮类化合物的总含量不低于50％。

5.根据权利要求2和3所述的枇杷叶总黄酮的制备方法，所得总黄酮的特征在于：能显著回升胰岛素水平、降低血糖，同时降低血清甘油三酯和胆固醇含量。

6.根据权利要求5所述的枇杷叶总黄酮的作用，其用途在于治疗糖尿病和糖尿病引起的血脂代谢紊乱。