CN102526154B - 一种制备抗肿瘤药物牛蒡根提取物的方法 - Google Patents
一种制备抗肿瘤药物牛蒡根提取物的方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种制备抗肿瘤药物牛蒡根提取物的方法，牛蒡的研究目前主要集中在牛蒡子部位，本发明的目的在于，研究开发牛蒡根中具有生物活性的有效成分和有效部位，制成有效制剂，其另一个目的在于利用现代提取分离手段寻找到最佳的制备制剂的方法，将中药材牛蒡根粉碎后，用95%乙醇提取，浓缩成浸膏，加水混悬，再用石油醚和氯仿萃取后，将获得的石油醚（60-90℃）部分和氯仿部分，再经柱层析分离获得石-1、石-2、石-3和氯-1、氯-2、氯-3、氯-4等有效部位，经体外抗肿瘤活性测试，氯-1和氯-2具有较强的细胞毒活性，可以采用制药的方法制备成口服抗癌制剂。
Description
技术领域
本发明涉及药物制备的方法，具体说，是涉及一种制备抗肿瘤药物牛蒡根提取物的方法。本发明所述的方法是指牛蒡根用乙醇提取后，经有机溶剂萃取，再经柱层析分离获得的有效部位，具有较强的细胞毒活性，可以采用制药的方法，制备成有效的抗癌制剂。
背景技术
牛蒡(Arctium lappa L.)为菊科牛蒡属植物。原产于我国，以野生为主，分布从东北至西南。日本人把牛蒡根奉为营养和保健价值极佳的高档营养保健品。
牛蒡的研究目前主要集中在牛蒡子部位。自1929年日本人田·川越等从牛蒡子中获得牛蒡苷以来，关于牛蒡化学活性物质的研究取得了重要进展。分离得到的天然化合物主要是木脂素类，包括牛蒡子苷，牛蒡子苷元，罗汉松脂素，牛蒡酚A、B、C、D、E、F、H，新牛蒡素甲、乙等，此外牛蒡子中还含有挥发油及胡萝卜苷等。木脂素一直被认为是牛蒡子中的主要活性成分，大量体外和体内试验显示牛蒡子苷和牛蒡子苷元对肺癌、皮肤癌、乳腺癌、结肠癌等均具有治疗作用。牛蒡子苷元还有免疫调节，抗HIV-1、抗甲1流感病毒的活性。此外，牛蒡子的醇提物体外也显示出具有抑制人体结肠癌细胞、直肠癌细胞、肝癌细胞的生长的作用。还能显著降低四氧嘧啶型糖尿病小鼠血糖水平。
牛蒡根尚未列为药用部位，但所含的营养成分较丰富，除含有苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸等多种人体必需的氨基酸外，还含有天门冬氨酸和精氨酸等十余种氨基酸。此外报道新鲜牛蒡根的醇提物具有明确的抗突变作用，该提取物中含有多酚类物质达3.65％，牛蒡根中含有酯、酸、醛、烯四类物质，牛蒡根有报道含有丰富的糖类成分，有较强的调节小鼠体液免疫功能和小鼠巨噬细胞吞噬功能的作用。
牛蒡的研究主要集中于其法定的药用部位牛蒡子，但对其根部的抗肿瘤活性的研究则未见报道。
发明内容
本发明的目的在于，研究开发牛蒡根中具有抗肿瘤活性的有效部位或有效成分，制成有效口服制剂。其另一个目的在于利用现代提取分离手段寻找最佳的制备提取分离纯化的方法，达到制备有效药物的目的。
本发明的目的是这样实现的：
一种制备抗肿瘤药物牛蒡根提取物的方法，其特征在于，将中药材牛蒡根粉碎后，用95％乙醇提取，浓缩成浸膏，加水混悬，依次用石油醚(60-90℃)、氯仿萃取后，分别减压回收溶剂，得石油醚(60-90℃)部分、氯仿部分。经体外抗肿瘤活性测试，石油醚部分、氯仿部分经层析柱分离获得的有效部位，具有较强的细胞毒活性。
将以上获得的石油醚(60-90℃)萃取部分，经硅胶柱层析，依次采用氯仿、氯仿∶甲醇＝9∶1；氯仿∶甲醇＝8∶2；氯仿∶甲醇＝7∶3依次加大极性洗脱，最后用甲醇洗脱，按照薄层层析的Rf值的不同斑点，获得三个样品，即石-1样品：677.4mg，黄色澄清油状物；石-2样品：908.9mg，褐色粘稠物；石-3样品：766.4mg，深棕色粘稠物。
将以上获得的氯仿萃取部分经硅胶柱层析，依次用氯仿∶甲醇＝8∶2；氯仿∶甲醇＝7∶3；氯仿∶甲醇＝6∶4逐步加大溶剂极性洗脱，最后用甲醇洗脱，减压回收溶剂，按照薄层层析的Rf值的不同斑点，获得四个样品，即氯-1：138mg，浅棕色粘稠状物质；氯-2：160mg，浅棕色粉末；氯-3：660mg，浅棕色粉末；氯-4：309mg，浅棕色粉末，均具有较强的细胞毒活性。
将以上所获得的石-1、石-2、石-3、和氯-1、氯-2、氯-3、氯-4等有效部位群，进行细胞毒活性试验，其中氯-1和氯-2具有较强的细胞毒活性，可以采用制药的方法，制备成口服抗癌制剂。
本发明的优点和有益效果：
通过使用本发明的方法，(1)工艺简单，易操作，(2)可以减少提取的时间，(3)可以减少提取的溶剂和前处理的步骤，(4)所获得的有效部位具有较强的细胞毒活性，有进一步深入研究和开发的余地。是一种较为经济实用的提取、分离的制药方法。
具体实施方式
实施例1、牛蒡根提取物的前处理
采集新鲜牛蒡根(Arctium lappa L.)洗净，切制成片，自然干燥后用8倍量的95％乙醇加热回流提取2h，过滤，再加入6倍量乙醇提取两次，每次1.5h，合并3次提取液，减压浓缩后的醇浸膏，加水使混悬，依次用石油醚(60-90℃)、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取后，分别减压回收溶剂，获得石油醚萃取部分、氯仿萃取部分、乙酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分。经体外细胞毒活性测试，筛选出两个活性较强的部位：石油醚和氯仿提取物。进一步硅胶柱层析。
实施例2、石油醚(60-90℃)萃取部分的柱层析分离试验
称(100-200目)硅胶300g装柱，称取实施例1获得的石油醚层萃取部分样品3g氯仿溶解，上样(上样时注意要均匀缓慢)，上样完毕，缓慢加入氯仿，避免将硅胶层溅起，分别用氯仿、氯仿∶甲醇9∶1、氯仿∶甲醇8∶2、氯仿∶甲醇7∶3依次加大溶剂极性，洗脱过柱，最后用甲醇冲柱。在柱层析过程中依据薄层色谱鉴别，采用每10ml试管接取洗脱样品，得到1-35号试管。再依据薄层色谱的Rf值鉴别，进行分别处理。
薄层色谱鉴别条件，采用硅胶G板，点样，溶剂系统为：氯仿∶甲醇(9∶1)为展开剂，磷钼酸显色。依据Rf值的不同，选取斑点集中的合并为1-11号试管为“石-1样品”；12-26号试管为“石-2样品”；27-35号试管为“石-3样品”；减压回收溶剂，将浓缩物再低温真空干燥后，称得样品重分别为：石-1样品：677.4mg，黄色澄清油状物；石-2样品：908.9mg，褐色粘稠物；石-3样品：766.4mg，深棕色粘稠物。依此获得的样品，再进行生物学药理药效学试验研究。
实施例3、氯仿萃取部分的柱层析分离试验
称(100-200目)硅胶300g装柱，称取实施例1获得的氯仿层样品2g氯仿溶解，上样(上样时注意要均匀缓慢)，上样完毕，缓慢加入石油醚，避免将硅胶层溅起。分别用氯仿∶甲醇8∶2、氯仿∶甲醇7∶3、氯仿∶甲醇6∶4洗脱，依次加大溶剂极性，洗脱过柱，最后甲醇冲柱。试验过程中用10ml试管接取洗脱样品，得到1-37号试管。进行薄层色谱。
薄层色谱鉴别条件，采用硅胶G板，点样：溶剂系统为：石油醚∶乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，磷钼酸显色，依据Rf值，选取斑点集中的合并1号试管(氯-1)；2-3号试管(氯-2)；4-19号试管(氯-3)；20-37号试管(氯-4)；减压回收溶剂，将浓缩物再低温真空干燥后，称得样品重分别为氯-1样品：138mg，浅棕色粘稠状物质；氯-2样品：160mg，浅棕色粉末，氯-3样品：660mg，浅棕色粉末；氯-4样品：309mg，浅棕色粉末。依此获得的样品，再进行生物学药理药效学试验研究。
实施例4
将实施例2和实施例3所获得的石-1样品、石-2样品、石-3样品和氯-1、氯-2、氯-3、氯-4试验样品进行体外抗肿瘤细胞活性的评价试验研究，所有样品均选用人的乳腺癌细胞株MCF-7及小鼠肉瘤细胞S180和肝癌细胞Hep A进行生长抑制的试验，采用MTT法测定。
表1 牛蒡根提取物对MCF-7细胞生长的影响
表2 牛蒡根提取物对Hep A细胞毒作用的结果
表3 牛蒡根提取物对S180细胞毒作用结果
表4 牛蒡根石油醚精制物对MCF细胞毒作用的结果
表5 牛蒡根石油醚精制物对Hep A细胞毒作用的结果
表6 牛蒡根石油醚精制物对S180细胞毒作用的结果
表7 牛蒡根氯仿精制物对MCF-7细胞毒作用的结果
表8 牛蒡根氯仿精制物对Hep A细胞毒作用的结果
表9 牛蒡根氯仿精制物对S180细胞毒作用的结果
牛蒡根提取物氯-1和氯-2对三种细胞的具有明确的细胞毒活性，尤其对HepA好S180，细胞的活性尤为明显，基本符合《现代药理实验方法》中细胞毒类药物研究中，植物粗提物的IC50＜20μg/mL即可判断样品在体外对肿瘤细胞有杀伤作用的评价标准。
实施例5
将实施例4所获的牛蒡根提取物氯-1和氯-2对三种细胞的具有明确的细胞毒活性的结果显示，可以按照实施例2和3的方法和条件，进行提取分离；特别是按照实施例3的方法，进行提取分离，即可获得牛蒡根提取物氯-1和氯-2有效部位，再进一步纯化，即可按照常规制备口服药物制剂的方法，制成口服制剂，用于治疗抗肿瘤疾病的药物。
Claims (3)
1.一种制备抗肿瘤药物牛蒡根提取物的方法，其特征在于，将中药材牛蒡根粉碎后，用95%乙醇提取，浓缩成浸膏，加水混悬，依次用沸程为60-90℃的石油醚和氯仿萃取后，分别减压回收溶剂，得沸程为60-90℃的石油醚部分和氯仿部分；经体外抗肿瘤活性测试，石油醚部分、氯仿部分经层析柱分离获得的有效部位，具有较强的细胞毒活性；
其中，用沸程为60-90℃的石油醚萃取部分，经硅胶柱层析，依次采用氯仿、氯仿：甲醇=9：1；氯仿：甲醇=8：2；氯仿：甲醇=7：3依次加大极性洗脱，最后用甲醇洗脱，按照薄层层析的Rf值的不同获得三个部分，即石-1样品：677.4mg，黄色澄清油状物；石-2样品：908.9mg，褐色粘稠物；石-3样品：766.4mg，深棕色粘稠物，均具有较强的细胞毒活性。
2.根据权利要求1所述的一种制备抗肿瘤药物牛蒡根提取物的方法，其特征在于氯仿萃取部分经硅胶柱层析，依次用氯仿：甲醇=8：2；氯仿：甲醇=7：3；氯仿：甲醇=6：4加大溶剂极性洗脱，最后用甲醇洗脱；减压回收溶剂，按照薄层层析的Rf值的不同获得四个样品：即氯-1：138mg，浅棕色粘稠状物质；氯-2：160mg，浅棕色粉末；氯-3：660mg，浅棕色粉末；氯-4：309mg，浅棕色粉末，均具有较强的细胞毒活性。
3.根据权利要求1或2所述的一种制备抗肿瘤药物牛蒡根提取物的方法，所获得的沸程为60-90℃的石油醚萃取部分和氯仿萃取部分，其特征在于，采用硅胶柱层析，用依次加大溶剂极性的方法，获得的石-1、石-2、石-3、和氯-1、氯-2、氯-3、氯-4有效部位，经体外抗肿瘤活性测试，氯-1和氯-2具有较强的细胞毒活性，可以采用制药的方法，制备成口服抗癌制剂。
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| 赵秀梅.牛蒡根提取物防治肿瘤作用的初步评价.《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》.2012,(第3期),第7页第3段及第13页第1-4段. |
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