CN101108197B

CN101108197B - 来自旋覆花的总多糖,及其调节或治疗糖尿病及并发症和免疫调节用途

Info

Publication number: CN101108197B
Application number: CN200610103454A
Authority: CN
Inventors: 单俊杰; 赵毅民
Original assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Current assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Priority date: 2006-07-21
Filing date: 2006-07-21
Publication date: 2012-09-05
Anticipated expiration: 2026-07-21
Also published as: CN101108197A

Abstract

本发明涉及旋覆花植物总多糖，及其用于糖尿病及并发症的治疗和免疫调节之用途。

Description

来自旋覆花的总多糖,及其调节或治疗糖尿病及并发症和免疫调节用途

技术领域

本发明涉及来自植物旋覆花的总多糖，及其用于糖尿病及并发症的调节或治疗和免疫调节之用途。

技术背景

旋覆花(包括Inula japinica和Inula britannica)属菊科植物。具有消痰、下气、软坚和行水之功效。文献报道旋覆花地上部分含旋覆花内酯、天人菊内酯、槲皮素、槲皮黄甙、咖啡酸、绿原酸等多种成分(黄泰康，常用中药成分与药理手册，p1608，1994)。TakaoKobayashi等发现服用500mg/kg/天的欧亚旋覆花(Inula BritanniaL.)水提物能显著降低由多次低剂量链脲霉素诱导的自身免疫性糖尿病小鼠的血糖，减轻β细胞损伤，减少分泌γ-干扰素的细胞数量(phytotherapy research，16：377-382)。旋覆花(Inula japinica)水提物具有显著降血糖和降血脂作用(Biol.Pharm.Bull，2006，29(3)：455-459)，并申请发明专利(专利申请号200510069547.8)；“香附旋覆花汤”加味方(12味中药)治疗II型糖尿病一例报道(张秀云，山东中医杂志，1996，15(6)：255)。

发明内容

本发明人在研究中发现采用水或含有机溶剂的水溶液提取旋覆花(包括Inula japinica和Inula britannica)植物(包括花序、茎和叶)获得水提物，该水提物再经有机溶剂沉淀获得旋覆花总多糖。旋覆花总多糖无毒，具有明显的降血糖和降血脂功效，提高糖尿病动物葡萄糖耐受能力，而且能提高免疫功能低下动物的T细胞和B细胞的增殖能力。本发明在上述发现的基础上现以完成。

因此，本发明第一方面涉及一种来自旋覆花的总多糖，其中所述总多糖具有附图1或2所示的特征。

本发明再一方面涉及一种来自旋覆花的总多糖，其中所述总多糖是如下得到的：用选自水、甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或它们的至少两种混合物提取旋覆花，所得上述旋覆花提取物进一步用选自甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮、乙酸乙酯或它们的至少两种混合物沉淀。

本发明还涉及一种产品，其包括来自旋覆花的总多糖及糖复合物及至少一种食用或药物载体。

本发明进一步涉及旋覆花总多糖在制备用于调节或治疗糖尿病、糖尿病并发症及免疫调节产品中的用途。

根据本发明，术语“总多糖”是指寡糖，多糖，及糖复合物。

根据本发明，术语“糖复合物”是指含有糖成分的复合分子，如糖和肽链共价结合形成的糖蛋白、蛋白聚糖和肽聚糖，糖与脂类共价结合形成的糖脂和脂多糖等。

根据本发明，术语“产品”指功能性食品，保健品或药品。

附图说明

图1为实施例2旋覆花总多糖DEAE-纤维素柱层析图

-●-曲线表示收集的洗脱液用苯酚-硫酸法显色后，在490nm波长处检测含有糖的吸收峰；

-○-曲线表示收集的洗脱液在280nm波长处检测的吸收峰。

其中A处代表用水进行洗脱得到的吸收峰；

B1和B2代表用0.25mol/L碳酸氢钠进行洗脱得到的吸收峰；

C代表用0.50mol/L碳酸氢钠进行洗脱得到的吸收峰；

D代表用0.10mol/L氢氧化钠进行洗脱得到的吸收峰。

图2为图1的局部放大图。

具体实施方案

下面的实施例用于进一步说明本发明，但其不意味着对本发明的任何限制。

实施例1

旋覆花1公斤用10升水室温浸泡48小时，过滤。残渣再用5升水继续浸泡24小时，过滤，合并滤液，60℃减压浓缩至2-4升。然后用95％的乙醇沉淀，乙醇终浓度为80％，醇沉24小时。离心，沉淀用2.5升水溶解，离心，无离子水透析48-72小时。60℃减压浓缩后冷冻干燥，即获得旋覆花总多糖7.33克(得率0.733％)。

实施例2

旋覆花1公斤，加入10升95％乙醇室温浸泡72小时，过滤，残渣再用6升95％乙醇继续浸泡48小时，过滤。残渣自然凉干或50℃烘干后，用10升水室温浸泡48小时，过滤。残渣再用5升水继续浸泡24小时，过滤，合并滤液，60℃减压浓缩至2-4升。然后用95％的乙醇沉淀，乙醇终浓度为80％，醇沉24小时。离心，沉淀用2.5升水溶解，离心，无离子水透析48-72小时。60℃减压浓缩后冷冻干燥，即获得旋覆花总多糖5.51克(得率0.551％)。

实施例3

称取实施例2得到的旋覆花总多糖1克，用10毫升水溶解，上DEAE-纤维素柱(4.5×32cm)，依次采用水、0.1M NaHCO₃、0.25MNaHCO₃、0.5M NaHCO₃和0.1MNaOH洗脱液进行洗脱，流速为10ml/min，同时采用苯酚-硫酸法和280nm紫外吸收法检测总多糖馏份。收集洗脱峰，用蒸馏水透析，分别在60℃减压浓缩，冷冻干燥。柱层析图谱见附图1和2。

实施例4

昆明种小鼠随机分为正常对照组和待造模组。待造模组小鼠禁食16小时后(不禁水)，尾静脉快速注射四氧嘧啶生理盐水溶液，剂量为60mg/kg。96h后尾尖取血测定小鼠血糖，血糖值＞20.0mmol/L的小鼠，同时伴有多饮、多尿症状，被选为糖尿病小鼠。实验分为正常对照组、模型对照组、实施例2旋覆花、总多糖组和二甲双胍组。采用灌胃方式，旋覆花总多糖组给药剂量为250mg/kg，二甲双胍组剂量为250mg/kg，均连续给药20天。给药7天和20天测定血糖。小鼠给药20天后，眼眶取血，处死。取出肝脏、肾脏和脾脏，称重，计算重量指数(器官重量/体重)。血样离心10min(2000r/min)，取出血清，进行旋覆花多糖和糖复合物对糖尿病小鼠血糖及血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、HDL-C和LDL-C的影响(见表1和2)。实验数据显示旋覆花总多糖具有显著降血糖和降血脂作用，同时能降低糖尿病小鼠血浆LDL-C的水平。

表1旋覆花总多糖对糖尿病小鼠血糖得影响

注：与模型组相比，**P＜0.01，n＝10.

表2旋覆花总多糖对糖尿病小鼠生化指标得影响

注：与模型组相比，*p＜0.05.n＝10，**P＜0.01，n＝10。

实施例5

Balb/c雄性小鼠腹腔注射环磷酰胺，造成免疫损伤同时给与实施例2旋覆花总多糖(200mg/kg)，左旋咪唑为阳性药(50mg/kg)，连续灌胃1周。断头处死，无菌取脾脏和胸腺，称重后，计算重量指数。脾脏细胞分别与ConA和LPS培养，研究药物对脾脏T细胞和B细胞增殖能力的影响，结果见表3和4。结果表明旋覆花总多糖对ConA和LPS诱导的T细胞和B细胞有促进增殖作用，能改善环磷酰胺引起小鼠的体液免疫和细胞免疫功能低下症状。

表3旋覆花总多糖对环磷酰胺引起免疫功能低下的影响1

注：与正常组相比，^△△△p＜0.001；

与模型组相比，*p＜0.05，**p＜0.01.n＝9.

表4旋覆花总多糖对环磷酰胺引起免疫功能低下的影响2

注：与正常组相比，^△△△p＜0.001；

与模型组相比，*p＜0.05，***p＜0.001.n＝9.

Claims

1.旋覆花总多糖在制备用于调节或治疗糖尿病或高血脂症的产品中的用途，其中

所述的旋覆花总多糖是如下制备的：旋覆花1公斤用10升水室温浸泡48小时，过滤，残渣再用5升水继续浸泡24小时，过滤，合并滤液，60℃减压浓缩至2-4升，然后用95％的乙醇沉淀，乙醇终浓度为80％，醇沉24小时，离心，沉淀用2.5升水溶解，离心，无离子水透析48-72小时，60℃减压浓缩后冷冻干燥；或者

旋覆花1公斤，加入10升95％乙醇室温浸泡72小时，过滤，残渣再用6升95％乙醇继续浸泡48小时，过滤，残渣自然凉干或50℃烘干后，用10升水室温浸泡48小时，过滤，残渣再用5升水继续浸泡24小时，过滤，合并滤液，60℃减压浓缩至2-4升，然后用95％的乙醇沉淀，乙醇终浓度为80％，醇沉24小时，离心，沉淀用2.5升水溶解，离心，无离子水透析48-72小时，60℃减压浓缩后冷冻干燥。

2.权利要求1的用途，其中所述的总多糖是指寡糖，多糖，及糖复合物。

3.权利要求2的用途，其中所述的糖复合物是指含有糖成分的复合分子。

4.权利要求3的用途，其中所述的复合分子包括糖和肽链共价结合形成的糖蛋白、蛋白聚糖和肽聚糖，糖与脂类共价结合形成的糖脂和脂多糖。

5.权利要求1的用途，其中所述的产品指功能性食品、保健品或药品。