CN104107187B - 一种罗布麻酸性多糖在治疗糖尿病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种罗布麻酸性多糖在治疗糖尿病药物方面的应用，以罗布麻叶为原材料，经过提取，纯化，精制，制备出具有改善beta胰岛细胞功能和促进胰岛素分泌作用的罗布麻酸性多糖。本发明涉及的罗布麻酸性多糖可制备具有降血糖作用罗布麻酸性多糖的各种制剂。

Description

一种罗布麻酸性多糖在治疗糖尿病药物中的应用

技术领域

本发明属于中药植物多糖的生物活性领域，具体涉及一种罗布麻酸性多糖的降血糖的应用。

背景技术

罗布麻（ApocynumvenetumL.，AV.，又名野麻、红麻）为夹竹桃科罗布麻属植物，是1952年董正钧先生在新疆最初发现的，并证明其纤维具有优良品质，进而根据其生长极盛的罗布平原而定名。深入研究发现，中国拥有3种罗布麻即罗布麻（红麻，ApocynumvenetumLinn）；白麻（中花罗布麻，PoacynumpictumBaill）和白麻（大花罗布麻，PoacynumhendersoniiWoodson）。罗布麻广泛分布在北方广大盐碱沙漠地区如新疆、甘肃、青海、宁夏、山东、内蒙、江苏、安徽、辽宁、吉林等省、区。其适应性强、资源丰富，是西北地区最重要最具特色的一种纤维植物资源。罗布麻纤维细长、柔软而有光泽、韧性强。其秆可作造纸原料，叶汁可作饮料，根茎枝叶所含乳胶液可提炼橡胶，是一种良好的植物资源。罗布麻适合于低温、盐碱及干旱沙荒地区种植，对于绿化大量荒地有积极意义。现代研究认为，罗布麻可预防和治疗感冒、老年高血糖和高血压，对增强肌体抗病能力有一定作用，是可用于延年益寿、养生之药。

随着社会的日益发展，人们的生活水平日益提高，我国糖尿病的发病率也在逐年上升。20年来，我国糖尿病患病率显著增加。1980年全国14省市30万人的流行病学调查结果显示，糖尿病患病率0.67%。1994年全国19省市21万人的调查，25～64岁年龄段糖尿病的患病率为2.5%（人口标化率为2.28%），糖耐量减低（IGT）为3.2%（人口标化率为2.12%）。这一数字与同等发展水平国家的数据相近，比1980年增加了近3倍。中国中医科学院糖尿病研究总院调查资料显示，我国的糖尿病患者人数已达4000万左右，占世界糖尿病人群总数的五分之一，患病率居世界第二位，并且以每天至少3000人的速度增加，每年增加超过120万人，预测至2010年我国糖尿病人口总数将猛增至8000万至1亿人。根据《中国糖尿病控制现状》报告表明，我国已成为糖尿病发病的“重灾区”，是全球糖尿病第二大国，更让人忧心的是,越来越多的孩子也成了糖尿病患者。据《中国糖尿病及用药市场分析》披露，中国目前服用糖尿病治疗药物的人数为800万人，其中长期服用中高价日消费在3-4.10元和高价日消费4.90-13.6元，占服用糖尿病药物的患者比例近6成。根据这组数字可以推算出，目前中国的糖尿病用药市场规模为130亿人民币。

糖尿病分1型糖尿病（type1diabetes）和2型糖尿病(type2diabetes)，1型糖尿病和2型糖尿病均有不同程度的beta胰岛细胞损伤。现有的降血糖药物，比如胰岛素，格列本脲，罗格列酮，阿卡波糖等，均具有不同程度的副作用，并且不能从根本上改善胰腺功能。

发明内容

本发明以改善beta胰岛细胞活力为模型，旨在研究无毒副作用的罗布麻酸性多糖在治疗糖尿病方面的应用。

本发明可以通过以下步骤实现：

1.罗布麻总多糖的提取：100℃条件下用蒸馏水煮提罗布麻叶4小时。提取物经4层纱布过滤。过滤得到的残渣在相同条件下重复提取两次。合并三次提取所得滤液，离心去除其中的不溶物，上清液加入6倍体积的95%乙醇沉淀过夜，离心，收集沉淀，常规干燥后得到罗布麻总多糖。

2.Sevag法脱蛋白：向10%的罗布麻多糖水溶液中加入1/4体积的Sevag试剂，充分震荡两个小时，离心去除蛋白层和氯仿层，水层重复操作至不再出现蛋白层为止，所得水溶液经乙醇沉淀和常规干燥得到脱蛋白级分罗布麻多糖。

3.罗布麻酸性糖的分离：将10%的脱蛋白级分罗布麻多糖经DEAE-纤维素离子交换柱（Cl^-型）分级，用两倍柱体积的蒸馏水洗脱，去除未结合的中性糖级分，收集由两倍柱体积的0.5M氯化钠水溶液洗脱得到的酸性糖级分，经蒸馏水透析、冰冻干燥得到氯化钠洗脱的结合级分罗布麻酸性多糖。

4.多糖样本经苯酚-硫酸法测得其总糖含量，间羟基联苯法测得糖醛酸含量，采用HPLC测定单糖组成和分子量范围。

罗布麻各级分总糖和糖醛酸含量，单糖组成如表1所示：

表1-罗布麻多糖总糖和糖醛酸含量，单糖组成

本发明方法制备得到的罗布麻酸性多糖ALPA，其分子量分布范围1.1×10⁴～6.1×10⁴Da。

罗布麻酸性多糖可以制成针剂、粘膜吸收、透皮吸收等剂型。

罗布麻酸性多糖改善beta胰岛细胞活力实验

培养胰岛Beta细胞RIN-m5F，培养基RPMI1640，10%胎牛血清。铺96孔板，10000个/孔，24小时后，加不同浓度罗布麻糖样。48小时后，MTT法检测细胞活力（OD570）。应用SPSS统计软件，进行Dunnett'sMultipleComparisonTest，检验实验组与阴性对照组统计显著性。结果如表2：

表2-罗布麻多糖对RIN-m5F细胞活力的影响（mean±SD）

与阴性对照组对比，*表示P<0.05。

ALPA具有很好的改善beta胰岛细胞活力的活性，有效浓度达到0.04mg/ml。

具体实施方式：

取干燥的罗布麻叶600g，10L水浸泡过夜，经热水煮提6h。残渣再分别用蒸馏水5L、3L煮提，合并滤液，水浴浓缩后分别经两次80%乙醇精制，常规干燥得罗布麻叶水溶性粗多糖TALP（47g），Sevag法脱蛋白三次，精制干燥得脱蛋白多糖ALP（35.3g），其收率为5.8%。

将罗布麻多糖ALP（5克）溶于蒸馏水（50毫升）中，用DEAE-纤维素离子交换柱（8.0×20cm，Cl-）分离。依次用2升蒸馏水和2升0.5M氯化钠洗脱，洗脱液流速为25毫升/分钟，每50毫升洗脱液收集1管，经由苯酚硫酸法检测，收集适当级分，经蒸馏水透析24小时后，冰冻干燥分别得到水洗脱的未结合级分罗布麻中性多糖ALPN(1.04克)和氯化钠洗脱的结合级分罗布麻酸性多糖ALPA(1.98克)。

Claims (1)

1.罗布麻酸性多糖在制备降血糖药物中的应用，其特征在于罗布麻酸性多糖通过以下步骤制备：

a)罗布麻总多糖的提取：100℃条件下用蒸馏水煮提罗布麻叶4小时，提取物经4层纱布过滤，过滤得到的残渣在相同条件下重复提取两次，合并三次提取所得滤液，离心去除其中的不溶物，上清液加入6倍体积的95%乙醇沉淀过夜，离心，收集沉淀，常规干燥后得到罗布麻总多糖；

b)Sevag法脱蛋白：向10%的罗布麻多糖水溶液中加入1/4体积的Sevag试剂，充分震荡两个小时，离心去除蛋白层和氯仿层，水层重复操作至不再出现蛋白层为止，所得水溶液经乙醇沉淀和常规干燥得到脱蛋白级分罗布麻多糖；

c)罗布麻酸性糖的分离：将10%的脱蛋白级分罗布麻多糖经Cl-型DEAE-纤维素离子交换柱分级，用两倍柱体积的蒸馏水洗脱，去除未结合的中性糖级分，收集由两倍柱体积的0.5M氯化钠水溶液洗脱得到的酸性糖级分，经蒸馏水透析、冰冻干燥得到氯化钠洗脱的结合级分罗布麻酸性多糖。