CN101433607B - 一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物 - Google Patents

Abstract

一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物，是黄芩、黄连、黄芪的提取物的组合物，具体是黄芩总黄酮，黄连总生物碱和黄芪总多糖按照重量百分比为20-40％∶30-50％∶20-40％，较优比为40％∶40％∶20％，以及25％∶50％∶25％，和1∶1∶1。其中以黄芩苷为标准品，UV法测定黄芩总黄酮含量为80-89％，HPLC法测定黄芩苷含量为15-23％。以盐酸小檗碱为对照品，UV法测定黄连总生物碱含量为70-90％，HPLC法测定药根碱、巴马亭和小檗碱的含量之和为50-68％。以无水葡萄糖为标品，采用苯酚硫酸法UV测定黄芪多糖的含量在30-60％。

Description

一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物

技术领域

本发明是涉及一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物，具体说，是由黄芩、黄连、黄芪的有效部位组成的组合物，属于医药技术领域。

背景技术

糖尿病(diabetes mellitus)是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床代谢性疾病，因胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶组织细胞对胰岛素敏感性降低，引起糖、蛋白、脂肪、水和电介质等一系列代谢紊乱。临床以高血糖为主要共同标志，久病可引起多个系统损害，病情严重和应激时可产生急性代谢紊乱如酮症酸中毒等。糖尿病分为I型糖尿病(胰岛素依赖型糖尿病，IDDM)和II型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病，NIDDM)，其中90％以上是属于II型糖尿病患者。II型糖尿病多发于成年人和老年人，病因可概括为胰岛素分泌相对不足和胰岛素抵抗。II型糖尿病有很强的遗传性和环境因素，并呈显著的异质性，发病机制多样而复杂，各病人之间存在较大差异。目前应用于II型糖尿病及并发症的治疗药物根据其作用机制，主要分为以下六个类型：磺脲类药物、双胍类药物、噻啶烷二酮类药物、α-糖苷酶抑制剂类药物、GLP-1类似物和胰岛素类似物。

黄芪、黄芩和黄连三味中药分别具有良好的治疗糖尿病和并发症的基础，其中黄芩中所含黄酮类化合物(主要有黄芩苷、黄芩黄素、汉黄芩素和汉黄芩黄素等)具有抗氧化、抑制醛糖还原酶、抑制脂氧合酶等作用，并能够改善肾脏的血液循环，防止肾小球硬化，达到防治糖尿病肾病的目的；黄连中生物碱对实验性糖尿病大小鼠模型和II型糖尿病患者都有明显降低血糖作用，促进胰岛β细胞修复，其中小檗碱的降糖和改善胰岛素抵抗的功效，已经越来越广泛的被我国的临床医生和糖尿病患者所接受，兼有磺脲类和双胍类化合物的特点，目前也有大量研究人员投入对其降糖机制和结构改造的研究中。

虽然中药治疗糖尿病有上述研究基础，但是目前市场上还没有治疗糖尿病的中药特效药物，文献有报道黄芩和黄连联合使用未发现出人意料的效果。

发明内容

针对目前技术上和市场上的不足，本发明的目的在于提供一种治疗糖尿病的新药。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

该治疗糖尿病的中药提取物的组合物，是由黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖组成，其中黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖组合物的重量百分比为20-40％∶30-50％∶20-40％。

进一步地，上述治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其中黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖组合物的重量百分比较优为40％∶40％∶20％。

进一步地，上述治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其中黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖组合物的重量百分比较优为25％∶50％∶25％。

更进一步地，上述治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其中黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖组合物的重量比最佳为1∶1∶1。

上述治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其中黄芩总黄酮以黄芩苷为对照品，UV法测定黄芩总黄酮含量为80-89％，HPLC法测定黄芩苷含量为15-23％；黄连总生物碱以盐酸小檗碱为对照品，UV法测定黄连总生物碱含量为70-90％，HPLC法测定药根碱、巴马亭和小檗碱的含量之和为50-68％；黄芪总多糖以无水葡萄糖为对照，采用苯酚硫酸法UV法测定黄芪多糖的含量在30-60％。

上述的治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其中黄芩总黄酮是用如下方法制备得到的：黄芩粉碎成粗粉，加入6～10倍量75％的乙醇，回流提取1-2小时，滤过；药渣再加入5倍量75％乙醇，回流提取、滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/6，上D101大孔树脂，用6倍柱体积水洗脱后，改用90％乙醇洗脱至流出液为浅色；收集醇洗脱液，减压回收溶剂，用无水乙醇洗涤所得固体物，得到黄色粉末状物，60℃干燥，即黄芩总黄酮；

黄连总生物碱是用如下方法制备得到的：黄连粉碎成粗粉，加入6～10倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取0.5-2小时，滤过；药渣再加入5倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/2，加入食盐至饱和，用盐酸调节PH至1-2，放置，析出黄色沉淀物，滤过；取沉淀物慢慢加入热水使其刚好溶解，煮沸，加入碳酸氢钙调节PH至9.0，冷却，滤过除去不溶物，放置4℃冰箱过夜，有黄色沉淀析出，滤过，60℃干燥，即得到黄连总生物碱；

黄芪总多糖是用如下方法制备得到的：黄芪粉碎成粗粉，先加入6倍量95％乙醇回流脱脂1.5h，然后在脱脂后药材残渣中加入8-12倍的水，回流提取0.5-1.5h，趁热用脱脂棉过滤，药渣再用6倍量水提取2次，合并水提取液，浓缩至原体积的1/4，加入95％乙醇至醇度大于80％，4℃静置过夜，取出，于3000转/min离心5min，收集沉淀，无水乙醇、丙酮交替洗涤两次，60℃减压干燥，即得棕黄色粉末状粗黄芪多糖。

所述药材粗粉为40-200目的粉末。

本发明的优点：

1.黄芩、黄连是常见药对，适用于糖尿病，症见燥热者。二者具有降糖效果的物质基础总黄酮、总生物碱，并在一定比例下组合，在自发性糖尿病小鼠上，有明显的降低血糖效果。该组合物的给药剂量明显小于传统金芪降糖方的给药剂量。

2.黄芪具有益气养阴功能，按照中医理论，为黄芩、黄连、黄芪三味药的组方提供了依据，能够针对糖尿病常见病型——气阴两虚型进行治疗；三味药同时使用，秉承了中医学对消渴清热益气的治则。

3.本发明的组合物通过现代提取技术，对黄芩黄连黄芪三味中药进行提取分离，得到其中主要的降血糖化学成分，首次把黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖配伍来治疗糖尿病，能够较好的体现出降血糖功效。组合物中并且较传统的三味药材组合(金芪降糖方)更加明确其中的化学物质基础、质量可控，能更有效的发挥治疗糖尿病作用。

具体实施方式

实施例1

黄芩267g粉碎成粗粉，加入6倍量75％的乙醇，回流提取1小时，滤过；药渣再加入5倍量75％乙醇，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/6，上D101大孔树脂，用6倍柱体积的水洗脱后，改用90％乙醇洗脱至流出液为浅色；收集醇洗脱液，减压回收溶剂，用无水乙醇洗涤所得固体物，得到黄色粉末状物，60℃干燥，即得黄芩总黄酮40g。

黄连2259g粉碎成粗粉，加入6倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取0.5小时，滤过；药渣再加入5倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/2，加入食盐至饱和，用盐酸调节PH至1，放置，析出黄色沉淀物，滤过；取沉淀物慢慢加入热水使其刚好溶解，煮沸，加入碳酸氢钙调节PH至9.0，冷却，滤过除去不溶物，放置4℃冰箱过夜，有黄色沉淀析出，滤过，60℃干燥，即得黄连总生物碱40g。

黄芪266g粉碎成粗粉，先加入6倍量95％乙醇回流脱脂1.5h，然后在脱脂后药材残渣中加入8倍的水，回流提取0.5h，趁热用脱脂棉过滤，药渣再用8倍量水提取2次，合并水提取液，浓缩至原体积的1/4，加入95％乙醇至醇度至80％，4℃静置过夜，取出，于3000转/min离心5min，收集沉淀，无水乙醇、丙酮交替洗涤两次，60℃减压干燥，即得棕黄色粉末状粗黄芪多糖40g。

实施效果：UV含量测定黄芩总黄酮为80％，HPLC检测黄芩苷含量为15％。UV法测定黄连总生物碱含量70％，HPLC法测定药根碱、巴马亭和小檗碱的含量之和为50％。苯酚硫酸法UV测定黄芪多糖的含量在30％。

将上述所得黄芩总黄酮40g、黄连总生物碱40g和黄芪多糖40g，三种提取物粉末混合均匀，即得到组合物。

实施例2

黄芩267g粉碎成粗粉，加入8倍量75％的乙醇，回流提取1.5小时，滤过；药渣再加入5倍量75％乙醇，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/6，上D101大孔树脂，用6倍柱体积水洗脱后，改用90％乙醇洗脱至流出液为浅色；收集醇洗脱液，减压回收溶剂，用无水乙醇洗涤所得固体物，得到黄色粉末状物，60℃干燥，即得黄芩总黄酮40g。

黄连2260g粉碎成粗粉，加入8倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取1小时，滤过；药渣再加入5倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/2，加入食盐至饱和，用盐酸调节PH至2，放置，析出黄色沉淀物，滤过；取沉淀物慢慢加入热水使其刚好溶解，煮沸，加入碳酸氢钙调节PH至9.0，冷却，滤过除去不溶物，放置4℃冰箱过夜，有黄色沉淀析出，滤过，60℃干燥，即黄连总生物碱40g。

黄芪133g粉碎成粗粉，先加入6倍量95％乙醇回流脱脂1.5h，然后在脱脂后药材残渣中加入10倍的水，回流提取1h，趁热用脱脂棉过滤，药渣再用6倍量水提取2次，合并水提取液，浓缩至原体积的1/4，加入95％乙醇至醇度至85％，4℃静置过夜，取出，于3000转/min离心5min，收集沉淀，无水乙醇、丙酮交替洗涤两次，60℃减压干燥，即得棕黄色粉末状粗黄芪多糖20g。

实施效果：UV含量测定黄芩总黄酮为85％，HPLC检测黄芩苷含量为21％。UV法测定黄连总生物碱含量80％，HPLC法测定药根碱、巴马亭和小檗碱的含量之和为58％。苯酚硫酸法UV测定黄芪多糖的含量在45％。

将上述所得黄芩总黄酮40g、黄连总生物碱40g和黄芪多糖20g，三种提取物粉末混合均匀，即得到组合物。

实施例3

黄芩135g粉碎成粗粉，加入10倍量75％的乙醇，回流提取2小时，滤过；药渣再加入5倍量75％乙醇，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/6，上D101大孔树脂，用6倍柱体积水洗脱后，改用90％乙醇洗脱至流出液为浅色；收集醇洗脱液，减压回收溶剂，用无水乙醇洗涤所得固体物，得到黄色粉末状物，60℃干燥，即得黄芩总黄酮20g。

黄连2260g粉碎成粗粉，加入10倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取1.5小时，滤过；药渣再加入5倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/2，加入食盐至饱和，用盐酸调节PH至1，放置，析出黄色沉淀物，滤过；取沉淀物慢慢加入热水使其刚好溶解，煮沸，加入碳酸氢钙调节PH至9.0，冷却，滤过除去不溶物，放置4℃冰箱过夜，有黄色沉淀析出，滤过，60℃干燥，即得总生物碱40g。

黄芪133g粉碎成粗粉，先加入6倍量95％乙醇回流脱脂1.5h，然后在脱脂后药材残渣中加入12倍的水，回流提取1.5h，趁热用脱脂棉过滤，药渣再用6倍量水提取2次，合并水提取液，浓缩至原体积的1/4，加入95％乙醇至醇度至90％，4℃静置过夜，取出，于3000转/min离心5min，收集沉淀，无水乙醇、丙酮交替洗涤两次，60℃减压干燥，即得棕黄色粉末状粗黄芪多糖20g。

实施效果：UV含量测定黄芩总黄酮为89％，HPLC检测黄芩苷含量为23％。UV法测定黄连总生物碱含量90％，HPLC法测定药根碱、巴马亭和小檗碱的含量之和为68％。苯酚硫酸法UV测定黄芪多糖的含量为60％。

将上述所得黄芩总黄酮20g、黄连总生物碱40g和黄芪多糖20g，三种提取物粉末混合均匀，即得到组合物。

实施例4

黄芩234g粉碎成粗粉，加入10倍量75％的乙醇，回流提取2小时，滤过；药渣再加入5倍量75％乙醇，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/6，上D101大孔树脂，用6倍柱体积水洗脱后，改用90％乙醇洗脱至流出液为浅色；收集醇洗脱液，减压回收溶剂，用无水乙醇洗涤所得固体物，得到黄色粉末状物，60℃干燥，即得黄芩总黄酮35g。

黄连2852g粉碎成粗粉，加入10倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取1小时，滤过；药渣再加入5倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/2，加入食盐至饱和，用盐酸调节PH至2，放置，析出黄色沉淀物，滤过；取沉淀物慢慢加入热水使其刚好溶解，煮沸，加入碳酸氢钙调节PH至9.0，冷却，滤过除去不溶物，放置4℃冰箱过夜，有黄色沉淀析出，滤过，60℃干燥，即得总生物碱50g。

黄芪266g粉碎成粗粉，先加入6倍量95％乙醇回流脱脂1.5h，然后在脱脂后药材残渣中加入10倍的水，回流提取1h，趁热用脱脂棉过滤，药渣再用6倍量水提取2次，合并水提取液，浓缩至原体积的1/4，加入95％乙醇至醇度至90％，4℃静置过夜，取出，于3000转/min离心5min，收集沉淀，无水乙醇、丙酮交替洗涤两次，60℃减压干燥，即得棕黄色粉末状粗黄芪多糖40g。

实施效果：UV含量测定黄芩总黄酮为87％，HPLC检测黄芩苷含量为22％。UV法测定黄连总生物碱含量87％，HPLC法测定药根碱、巴马亭和小檗碱的含量之和为67％。苯酚硫酸法UV测定黄芪多糖的含量为58％。

将上述所得黄芩总黄酮35g、黄连总生物碱50g和黄芪多糖40g，三种提取物粉末混合均匀，即得到组合物。

实施例5

黄芩203g粉碎成粗粉，加入10倍量75％的乙醇，回流提取2小时，滤过；药渣再加入5倍量75％乙醇，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/6，上D101大孔树脂，用6倍柱体积水洗脱后，改用90％乙醇洗脱至流出液为浅色；收集醇洗脱液，减压回收溶剂，用无水乙醇洗涤所得固体物，得到黄色粉末状物，60℃干燥，即得黄芩总黄酮30g。

黄连1710g粉碎成粗粉，加入10倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取2小时，滤过；药渣再加入5倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/2，加入食盐至饱和，用盐酸调节PH至2，放置，析出黄色沉淀物，滤过；取沉淀物慢慢加入热水使其刚好溶解，煮沸，加入碳酸氢钙调节PH至9.0，冷却，滤过除去不溶物，放置4℃冰箱过夜，有黄色沉淀析出，滤过，60℃干燥，即得总生物碱30g。

黄芪233g粉碎成粗粉，先加入6倍量95％乙醇回流脱脂1.5h，然后在脱脂后药材残渣中加入10倍的水，回流提取1h，趁热用脱脂棉过滤，药渣再用6倍量水提取2次，合并水提取液，浓缩至原体积的1/4，加入95％乙醇至醇度至90％，4℃静置过夜，取出，于3000转/min离心5min，收集沉淀，无水乙醇、丙酮交替洗涤两次，60℃减压干燥，即得棕黄色粉末状粗黄芪多糖35g。

实施效果：UV含量测定黄芩总黄酮为89％，HPLC检测黄芩苷含量为20％。UV法测定黄连总生物碱含量88％，HPLC法测定药根碱、巴马亭和小檗碱的含量之和为68％。苯酚硫酸法UV测定黄芪多糖的含量在55％。

将上述所得黄芩总黄酮30g、黄连总生物碱30g和黄芪多糖35g，三种提取物粉末混合均匀，即得到组合物。

试验例

1实验目的

动物实验验证黄芩总黄酮、黄连总生物碱、黄芪多糖组合物的降血糖作用

2实验材料

2.1实验动物：SPF级，自发性肥胖型糖尿病小鼠(db/db小鼠)50只，6周龄，体重38±2g，随机分组。由中科院动物实验中心提供。

2.2实验药物：黄芩总黄酮、黄连总生物碱、黄芪多糖；阳性对照药为马来酸罗格列酮(葛兰素史克天津药业有限公司)，one touch II血糖仪(强生公司)。

3实验方法

3.1动物分组

模型对照组：10只。给等量水。

阳性对照组：10只。给阳性药。

实验药物组：30只，共分为三组，分别给黄芩总黄酮、黄连总生物碱、黄芪多糖不同比例组成的组合物(1∶1∶1或2∶2∶1或1∶2∶1)

3.2给药

分组后适应一周开始给药，连续给药2周，给药途径为灌胃。

三种提取物的给药量换算为小鼠后为400mg/kg体重或者200mg/kg体重。三种组合物的给药量分别为：黄芩总黄酮、黄连总生物碱、黄芪多糖均为400mg/kg(1∶1∶1)，黄芩总黄酮、黄连总生物碱、黄芪多糖分别为400mg/kg、400mg/kg、200mg/kg(2∶2∶1)，黄芩总黄酮、黄连总生物碱、黄芪多糖分别为200mg/kg、400mg/kg、200mg/kg(1∶2∶1)。

罗格列酮的给药量为5mg/kg体重。

3.3血糖测定

第7、14天给药1小时后，尾静脉取血用one touch II血糖仪测定动物随即血糖。

4实验结果

表1中，分别为模型对照组，阳性对照组，各实验药物组。如表1所示，阳性对照组小鼠血糖浓度达到最低(t检验，*p＜0.05vs模型组)，结果提示实验动物模型可靠。而各比例组合物组动物血糖浓度较模型组都有显著的降低(t检验，*p＜0.05vs模型组)。表明各比例组合物对db/db小鼠具有显著的降血糖作用。其中比例为1∶1∶1时，降血糖效果最好。

Claims (6)

1.一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其特征为该组合物是由黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖组成，其中黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖组合物的重量百分比为20-40％∶30-50％∶20-40％。

2.如权利要求1所述一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其特征为黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖组合物的重量百分比为40％∶40％∶20％。

3.如权利要求1所述一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其特征为黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖组合物的重量百分比为25％∶50％∶25％。

4.如权利要求1所述一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其特征为黄芩总黄酮、黄连总生物碱和黄芪总多糖组合物的重量比为1∶1∶1。

5.如权利要求1或2或3或4所述的一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其特征为：黄芩总黄酮以黄芩苷为对照品UV法测定黄芩总黄酮含量为80-89％，HPLC法测定黄芩苷含量为15-23％；黄连总生物碱以盐酸小檗碱为对照品，UV法测定黄连总生物碱含量为70-90％，HPLC法测定药根碱、巴马亭和小檗碱的含量之和为50-68％；黄芪总多糖以无水葡萄糖为对照，采用苯酚硫酸法UV法测定黄芪多糖的含量在30-60％。

6.如权利要求1或2或3或4所述的一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其特征是黄芩总黄酮是用如下方法制备得到的：黄芩粉碎成粗粉，加入6～10倍量75％的乙醇，回流提取1-2小时，滤过；药渣再加入5倍量75％乙醇，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/6，上D101大孔树脂，用6倍柱体积水洗脱后，改用90％乙醇洗脱至流出液为浅色；收集醇洗脱液，减压回收溶剂，用无水乙醇洗涤所得固体物，得到黄色粉末状物，60℃干燥，即黄芩总黄酮；

黄连总生物碱是用如下方法制备得到的：黄连粉碎成粗粉，加入6～10倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取0.5-2小时，滤过；药渣再加入5倍量0.5％的硫酸水溶液，回流提取，滤过，进行两次；合并三次滤液，减压浓缩至原体积的1/2，加入食盐至饱和，用盐酸调节PH至1-2，放置，析出黄色沉淀物，滤过，取沉淀物慢慢加入热水使其刚好溶解，煮沸，加入碳酸氢钙调节PH至9.0，冷却，滤过除去不溶物，放置4℃冰箱过夜，有黄色沉淀析出，滤过，60℃干燥，即得到黄连总生物碱；

黄芪总多糖是用如下方法制备得到的：黄芪粉碎成粗粉，先加入6倍量95％乙醇回流脱脂1.5h，然后在脱脂后药材残渣中加入8-12倍的水，回流提取0.5-1.5h，趁热用脱脂棉过滤，药渣再用6倍量水提取2次，合并水提取液，浓缩至原体积的1/4，加入95％乙醇至醇度大于80％，4℃静置过夜，取出，于3000转/min离心5min，收集沉淀，无水乙醇、丙酮交替洗涤两次，60℃减压干燥，即得棕黄色粉末状粗黄芪多糖。