CN101156915B

CN101156915B - 预防及治疗糖尿病的中药有效部位组合物及其制备和应用

Info

Publication number: CN101156915B
Application number: CN2007100466016A
Authority: CN
Inventors: 谢家骏; 朱国琴; 张国明; 宋英; 宋崎; 成苗; 乔正东
Original assignee: SHANGHAI CHINESE MEDICINE INST; SHANGHAI LEIYUNSHANG TECHNOLOGIES DEVELOPMENT Co Ltd
Current assignee: Shanghai Chinese Medicine Inst.; Shanghai Leiyun Pharmaceutical Industry Co., Ltd.
Priority date: 2007-09-28
Filing date: 2007-09-28
Publication date: 2010-12-08
Anticipated expiration: 2027-09-28
Also published as: CN101156915A

Abstract

本发明涉及中药和天然药物技术领域。公开了一种预防及治疗糖尿病的中药有效部位组合物，包括葛根总黄酮与黄柏总生物碱，以组合物的总重量为基础计，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的实际含量之和的重量百分比为30％～99％，其中，葛根素占组合物重量的5～44％，小檗碱占组合物重量的3～50％。此外，还公开了这种预防及治疗糖尿病的中药有效部位组合物的制备和应用。药效和毒理研究结果表明，本发明的组合物具有明显的降糖作用，其药效活性明显优于组合物中各单味药材提取物，且安全无明显毒副反应。

Description

预防及治疗糖尿病的中药有效部位组合物及其制备和应用

技术领域

本发明属于中药和天然药物技术领域，具体涉及一种预防及治疗糖尿病的中药有效部位组合物及其制备和应用。

背景技术

糖尿病是一组由于遗传和环境因素相互作用，胰岛素相对或绝对缺乏以及靶组织对胰岛素敏感性降低(胰岛素抵抗)引起的碳水化合物、脂肪及蛋白质代谢紊乱的综合征，是一种以持续高血糖为特征的、慢性、全身性代谢性疾病。起病后若未得到有效治疗，随着病程的延长，可出现广泛的微血管及大血管病变，出现神经、泌尿、循环等多系统的病理改变。糖尿病主要分I型和II型两种。前者亦称胰岛素依赖型糖尿病，其病理特征为胰岛β细胞被破坏，临床上通常表现为胰岛素的绝对缺乏，这类糖尿病患者必须用胰岛素治疗；后者则称非胰岛素依赖型糖尿病，临床上则表现为胰岛素抵抗为主伴胰岛素相对缺乏，或胰岛素分泌不足为主伴有胰岛素抵抗，这类患者一般不需用胰岛素治疗，仅用饮食调节加用口服降糖药物即可控制血糖。在我国糖尿病患者中，I型仅占糖尿病患者的5.6％，II型则占93.7％。

糖尿病属中医“消渴”范畴。目前，全球已诊断为糖尿病患者已达2亿人，其并发症引起的死亡率在世界发达国家中居心脑血管病、癌症之后的第三位，引起了世界各国的高度重视。近年来，随着我国城市化进程的加速，食物结构的改变，生活节奏的加快，糖尿病发病率亦呈快速增长，极大影响了人们的正常生活，严重威胁着人们的身心健康。据权威部门抽查报道，我国的糖尿病发病人群已超过3800万人，为总人口的3％左右。由于其病因尚未阐明，目前仍无根治药物。现市场上虽已有多种治疗糖尿病的药物，如磺酰脲类、双胍类药物和α-葡萄糖苷酶抑制剂等合成药，消渴丸等中西合用药，金芪降糖片，降糖舒胶囊等纯中药制剂，但均因为存在明显的毒副作用或疗效有限而未达到令临床医生和患者都满意的疗效。我们认为，糖尿病作为一种内分泌代谢紊乱性慢性疾病，更适合按照中医的理念，采用中医中药方法进行治疗。祖国医学在治疗糖尿病方面有着悠久的历史，在众多的医书和民间中隐藏着不少疗效确切、表本兼治的宝贵处方，虽然受限于当时的科学技术水平，其中有不尽完善之处，但随着现代科学的高速发展、研究手段的不断提高，从中药或民间草药中整理、发掘疗效确切、安全性好的防治糖尿病的处方，并在此基础上将其研发成为现代药物制剂已成为可能。所以，研究注重治本、标本兼治、或以调节机体整体平衡为特色的预防和治疗糖尿病及其并发症的中药验方或民间秘方，并在此基础上，采用现代技术和手段，提取其中各个活性部位进行药效活性筛选和安全性评估，根据不同活性部位对疗效的协同作用进行科学组方，进而开发成具有鲜明疗效特点、以中药有效部位群为物质基础的现代中药复方制剂，已成为现代中药复方制剂研发的方向之一。

发明内容

本发明的目的是提供对糖尿病及其并发症的发生与发展具有明显的治疗和预防作用的中药有效部位组合物及其制备和应用。

本发明针对影响糖尿病发生、发展以及诱导其并发症产生的诸多因素，以显示有确切疗效的中医专家的临床核心处方(该处方并未公开)为对象，用现代实验药理为手段进行主要药效学验证，在此基础上，通过对组方成分分析，活性组分提取，同时对各组分的药效活性、配伍特点进行多轮次的实验分析和综合评估，筛选出一组符合中医临床实际、显示有显著疗效的由中药有效部位群按一定比例组合的组合物。

本发明一方面提供了一种中药有效部位组合物，该组合物包括葛根总黄酮与黄柏总生物碱，以组合物的总重量为基础计，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的实际含量之和的重量百分比为30％～99％，其中，葛根素占组合物重量的5～44％，小檗碱占组合物重量的3～50％。优选，以组合物的总重量为基础计，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的实际含量之和的重量百分比为33％～80％，其中，葛根素占组合物重量的6％～25％，小檗碱占组合物重量的3％～26％。该组合物对糖尿病及其并发症的发生与发展具有明显的治疗和预防作用。相对单用葛根总黄酮或黄柏总生物碱而言，其活性作用更强。

较佳的，上述组合物中，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的重量比为1∶0.1～10。在一优选例中，总黄酮与总生物碱的重量比例为1∶0.1～4，更佳的为1∶0.3～2.7，最佳的为1∶0.3～1。

上述中药有效部位组合物即可仅由葛根总黄酮提取物与黄柏总生物碱提取物组成，也可包括其它具有预防或治疗II型糖尿病或其并发症效果的活性物质，活性物质包括从其它中药和天然植物中提取得到的具有预防或治疗II型糖尿病或其并发症效果的有效部位和/或有效成分，如：鬼箭羽提取物，匙羹藤提取物，苦瓜提取物，南瓜提取物，魔芋提取物，黄芪提取物，石斛提取物，或者还包括具有预防或治疗II型糖尿病或其并发症效果的化学合成品、半合成品以及稀有元素，如有机铬。

在另一优选例中，组合物中还含有鬼箭羽水溶性提取物，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的重量之和与鬼箭羽水溶性提取物的重量比为1∶0.1～5，更佳的1∶0.2～1，最佳的1∶0.3～0.5。

本发明的第二个方面，提供了一种上述中药有效部位组合物的制备方法，包括如下步骤：

取药材葛根和黄柏，将药材破碎或切成块状或丝状并按葛根和黄柏的重量比为1∶0.2～4混合，用20～95％乙醇液提取1～3次，提取液分别上大孔树脂，以20～95％的乙醇水溶液洗脱，收集、合并洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得成品葛根总黄酮与黄柏总生物碱的组合物

本发明的第三方面，提供了另一种上述中药有效部位组合物的制备方法，包括如下步骤：

a)将药材葛根破碎或切成块状或丝状，分别用20～95％乙醇液提取1～3次。

b)将步骤a所得的葛根提取液浓缩，浓缩液上大孔树脂，预吸附1～2小时，用3～8倍柱体积的水洗脱，弃去，再用4～7倍柱体积的20～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得成品葛根总黄酮，以葛根提取物的总重量为基础计，葛根总黄酮的重量百分比为50％～99％，其中葛根素的重量百分比为7％～70％。

c)将药材黄柏破碎或切成块状或丝状，用酸水浸泡8～20小时，或用20％或40％或70％乙醇液分次提取。

d)将步骤c所得的黄柏提取液浓缩，选用d1、d2、d3、d4方法中的一种进行纯化。以黄柏提取物的总重量为基础计，所得的黄柏总生物碱的重量百分比为50％～99％，其中小檗碱的重量百分比为4％～60％。

d1)盐析纯化法：在黄柏提取液浓缩液中加入Ca(OH)₂使其pH至8～11，静置，过滤后滤液调pH至1～2(可用HCl调节)，加入NaCl，放置，抽滤，沉淀用水洗至pH为5，重结晶，干燥得成品黄柏总生物碱。较佳的，本步骤开始时将黄柏提取液浓缩至相当于生药量的10～20％时再加入Ca(OH)₂。

d2)大孔树脂吸附纯化法：将黄柏提取液浓缩液上大孔树脂，预吸附1～2小时，用3～8倍柱体积水洗脱，弃去，再用5～7倍柱体积20～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得成品黄柏总生物碱。

d3)乙醇沉淀纯化法：将黄柏提取液浓缩至膏状，膏体相对密度为1.05～1.25，再加入乙醇沉淀，过滤，干燥得成品黄柏总生物碱。

d4)离子交换树脂纯化法：在黄柏提取液浓缩液内加入盐酸，使其pH至1～3，过强酸性阳离子交换树脂柱，用水洗至流出液近无色，弃水洗液，用1.5～2.5ml/l氨水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得成品黄柏总生物碱；

e)将步骤b获得的葛根总黄酮与步骤d获得的黄柏总生物碱重量比1∶0.1～4混合均匀，即获得由葛根总黄酮与黄柏总生物碱组成的组合物。

上述步骤中，酸水即指用无机酸或有机酸调配制成的酸性水溶液，如0.2％～1％硫酸水或盐酸水，或0.5％～1.5％酒石酸水或柠檬酸水。

本发明的第四个方面，提供了上述中药有效部位组合物的用途，即该组合物可用于制备预防和治疗II型糖尿病的药用制剂或功能食品添加剂。

本发明的组合物可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式，包括口服制剂，也包括胃肠外给药制剂。优选的是片剂，胶囊剂，颗粒剂，糖浆剂，透皮吸收剂以及喷雾剂。

本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的前述中药有效部位组合物及药学上可接受载体，所述中药有效部位组合物与药学上可接受载体的总重量比例为1∶0.1～10。

药学上可接受的载体为各种药学上常用的辅料和/或赋形剂，包括(但不限于)糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖，淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉，纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素，黄蓍胶粉末，麦芽，明胶，滑石，固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁，硫酸钙，植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油，多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇，海藻酸，乳化剂，如Tween；润湿剂，如月桂基硫酸钠，着色剂，调味剂，压片剂、稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水，等渗盐溶液和磷酸盐缓冲液等，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。

除另有说明外，本发明的部分术语的定义如下：

葛根：葛根或其原药材，是指豆科多年生落叶藤本植物葛根Pueraria lobata(Willd.)Ohwi.或甘葛藤Pueraria thomsonii Benth.的干燥根，或由豆科植物葛根的干燥树皮制作的中药饮片。葛根亦名干葛(《阎氏小儿方论》)、甘葛(《滇南本草》)、粉葛(《草木便方》)等。葛根味甘、辛，性平。入脾、胃经。具有发表解肌、升阳透疹、解热生津、除烦止渴等功能，主治温热、烦热消渴、泄泻、痢疾、高血压、心绞痛等症。本发明在使用时可以将其破碎或切成块状或丝状，以便于提取。

黄柏：黄柏或其原药材，是指芸香科落叶乔木植物黄皮树(川黄柏)Phellodendronchinense Schneid.或黄檗Phellodendron amurense Rupr.的干燥树皮，或由芸香科植物黄皮树或黄檗的干燥树皮制作的中药饮片。前者习称“川黄柏”，后者习称“关黄柏”。黄柏亦名檗木(《本经》)、檗皮(《伤寒论》)、黄檗(《本草经集注》)等。黄柏味苦，性寒。入肾、膀胱经。具有清热燥湿、泻火解毒、退虚热等功能，主治热痢、泄泻、消渴、黄疸等症。本发明在使用时可以将其破碎或切成块状或丝状，以便于提取。

葛根总黄酮：即指从葛根原药材中提取纯化而获得的黄酮类物质的总和。葛根中的黄酮类物质包括葛根素(puerarin)、大豆甙(daidin)、大豆甙元(daidzein)、葛根素木糖甙(Puerarin-xyloside)、大豆黄酮(Daidzein)、大豆黄酮甙(Daidzin)及尿囊素(Allantoin)、β-谷甾醇(β-Sitosterol)、胡萝卜甙(Daucosterol)、6，7-二甲氧基香豆素(6，7-Dime-thoxy coumarin)、5-甲基海因(5-Methyl hydan-toin)、花生酸(Arachi dic acid)、葛根醇(Puerarol)、葛根藤素(Kakkouein)及异黄酮甙等多种，葛根总黄酮中各种黄酮类成分的组成比例因药材产地及提取或纯化条件参数的选择差异略有不同。本发明中葛根总黄酮提取物包含葛根总黄酮，葛根总黄酮含量以重量百分比表示不低于总提取物的30％。

黄柏总生物碱：即指从黄柏原药材中提取纯化而获得的生物碱类物质的总和。黄柏中的生物碱类物质包括小檗碱(berberine)、药根碱(jatrorrhizine)、黄柏碱(phellodedrine)、木兰花碱(Magnoflorine)、掌叶防己碱(巴马亭，Palmatine)、N-甲基大麦芽碱(Candicine)、蝙蝠葛碱(Menisperine)等多种，黄柏总生物碱中各种生物碱类成分的组成比例因药材产地及提取或纯化条件参数的选择差异略有不同。本发明中黄柏总生物碱提取物包括黄柏总生物碱，黄柏总生物碱含量以重量百分比表示不低于总提取物的30％。

本发明中，乙醇的百分含量均为体积百分含量(V/V)。

本发明的组合物可以按常规方法在临床上使用，例如口服。在使用组合物时，按黄柏总生物碱与葛根总黄酮的总重量计，通常每人每天给药量至少0.8g，而且在大多数情况下不超过20g，较佳的该剂量约1.2～10g，最佳的是1.8～7.2g。当然，具体剂量还得考虑给药途径、病人个体状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

药效和毒理研究结果表明，本发明的组合物具有明显的降糖作用，其药效活性明显优于组合物中各单味药材提取物使用者，且安全无明显毒副反应。根据该组合物的作用机理及其活性强度，有望将其研发成新型的II型糖尿病的防治药。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

本发明各测定方法如下：

小檗碱的高效液相色谱含量测定

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛-0.1％磷酸溶液(50∶50)(每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g)为流动相；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备：精密称取在100℃干燥5小时的盐酸小檗碱对照品适量，加流动相制成每ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取待测样品适量，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相80ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)40分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定方法：分别精密吸取对照品溶液5ul与供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

总生物碱含量测定-酸碱滴定法

测定方法：精密称取样品3mg，加1mol/l氢氧化钠溶液0.5ml，置分液漏斗中，用氯仿10ml、10ml、5ml、5ml提取4次，合并氯仿液，置具塞锥形瓶中，精密加0.01mol/l硫酸滴定液10ml及新沸过的冷水10ml，充分振摇，加茜素磺酸钠指示液1～2滴，用0.02mol/l氢氧化钠滴定液滴定至淡黄色，并将滴定结果用空白试验校正。

葛根素的高效液相色谱含量测定

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(25∶75)为流动相；检测波长为250nm。理论塔板数按葛根素计算应不低于4000。

对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品10mg，置25ml量瓶中，加30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加30％乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含葛根素80ug)。

供试品溶液的制备：取待测样品适量，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30％乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

总黄酮含量测定-分光光度法

对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品20mg，置100ml容量瓶中，加70％乙醇70ml，于水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含无水芦丁0.2mg)。

标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml分别置于10ml量瓶中，各加水至3ml，加pH4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液2ml，0.1mol/L三氯化铝溶液2ml，摇匀，加70％乙醇至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白，在270nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定方法：取组合物250mg，于50℃减压干燥2小时，精密称定，置50ml容量瓶中，加70％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取0.5ml，置10ml容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至3ml”起依法测定吸收度。从标准曲线上读出供试品溶液中相当于芦丁的总黄酮重量(mg)，计算，即得。

实施例1：葛根提取物的制备

提取：将药材葛根100kg粉碎或切成块状后置于提取罐中，用7～9倍量的40％乙醇液分别提取3次，每次1小时，合并提取液，并行浓缩；

纯化：加热水(80℃以上)将葛根浓缩液溶解，离心，取澄清液上已处理符合要求的大孔树脂，预吸附2小时，用5倍柱体积量的水洗脱，弃洗脱液，用6.5倍柱体积量的50％乙醇洗脱，再用4倍柱体积量的95％乙醇洗脱，收集、合并两次洗脱液。

浓缩与干燥：减压回收乙醇，减压浓缩、真空干燥、粉碎得干浸膏粉6.3kg，其中，葛根总黄酮的重量占提取物干浸膏粉重量的94.3％，葛根素的重量占提取物干浸膏粉重量的27.8％。

实施例2：黄柏提取物1的制备

提取：将药材黄柏100kg切丝，加10倍药材体积量的70％乙醇提取1.5小时，药渣加8倍药材体积量的70％乙醇再提取1小时，合并提取液。

纯化：采用大孔树脂吸附纯化法。减压回收乙醇，提取液浓缩至150升，离心，上清液上大孔树脂，预吸附2小时，先用5倍柱体积量水洗脱，弃洗脱液，再用6.5倍柱体积量的50％乙醇洗脱，再用4倍柱体积量的95％乙醇洗脱，收集、合并两次洗脱液。

浓缩与干燥：将洗脱液减压回收乙醇，减压浓缩、真空干燥、粉碎得干浸膏粉5.8kg，其中，黄柏总生物碱的重量占提取物干浸膏粉重量的90.7％，小檗碱的重量占提取物干浸膏粉重量的32.9％。

实施例3：黄柏提取物2的制备

纯化：采用盐析纯化法，减压回收乙醇，在提取浓缩液中加入Ca(OH)₂使其pH至9～11，静置，过滤后滤液用HCl调pH至2，加入NaCl，放置24h，抽滤、收集析出部分(总生物碱)。

干燥：析出部分(滤饼)真空干燥，粉碎，得干浸膏粉2.7kg，其中，黄柏总生物碱的重量占提取物干浸膏粉重量的91.3％，小檗碱的重量占提取物干浸膏粉重量的34.9％。

实施例4：黄柏提取物3的制备

纯化：采用乙醇沉淀纯化法。减压回收乙醇，浓缩提取液至膏状，加入95％乙醇，使得乙醇含量达到80％。搅拌，沉淀，过滤，

浓缩与干燥：将过滤液减压浓缩，真空干燥，粉碎，得干浸膏粉2.7kg，其中，黄柏总生物碱的重量占提取物干浸膏粉重量的84.1％，小檗碱的重量占提取物干浸膏粉重量的23.3％。

实施例5：葛根和黄柏合提提取物1的制备

提取：将药材葛根20kg和黄柏80kg破碎或切成丝状，用10倍药材体积量的70％乙醇液分三次提取，每次1小时，合并提取液。

纯化：减压回收乙醇，减压浓缩提取液至150升，离心，上清液上大孔树脂。预吸附2小时，先用5倍柱体积量水洗脱，弃洗脱液，再用6.5倍柱体积量的50％乙醇洗脱，再用4倍柱体积量的95％乙醇洗脱，收集、合并两次洗脱液。

浓缩与干燥：将洗脱液减压浓缩，真空干燥，粉碎，得干浸膏粉4.3kg，其中，葛根总黄酮的重量占提取物干浸膏粉重量的21.8％，黄柏总生物碱的重量占提取物干浸膏粉重量的58.8％，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的重量比为1∶2.7。

实施例6：葛根和黄柏合提提取物2的制备

提取：将药材葛根56kg和黄柏44kg破碎或切成丝状，用10倍药材体积量的40％乙醇液分三次提取，每次1.5小时，合并提取液。

浓缩与干燥：将洗脱液减压浓缩，真空干燥，粉碎，得干浸膏粉14.5kg，其中，葛根总黄酮重量占提取物干浸膏粉重量的29.5％，黄柏总生物碱重量占提取物干浸膏粉重量的21.6％，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的重量比为1∶0.73。

实施例7：葛根和黄柏合提提取物3的制备

提取：将药材葛根80kg和黄柏20kg破碎或切成丝状，用10倍药材体积量的20％乙醇液分三次提取，每次1.5小时，合并提取液。

浓缩与干燥：将提取液减压浓缩，真空干燥，粉碎，得干浸膏粉21.2kg，其中，葛根总黄酮重量占提取物干浸膏粉重量的26.0％，黄柏总生物碱重量占提取物干浸膏粉重量的6.5％，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的重量比为1∶0.25。

实施例8：鬼箭羽提取物的制备

将药材鬼箭羽100kg破碎或切成块状，先后用10倍、8倍药材体积量的水煎煮两次，首次1.5小时，再次1小时，合并两次煎出液，减压浓缩、真空干燥、粉碎，得干浸膏粉6.6kg。

实施例9：药物组合物片剂的制备

处方(1000片量)

成分	重量(g)
		葛根总黄酮提取物(实施例1制得)	65
黄柏总生物碱提取物(实施例2制得)	55
		包衣辅料PVP	10
淀粉	20
		微晶纤维素	50
硫酸钙	37.5
		L-羟丙纤维素	10

硬脂酸镁	2.5
		总计	250

按照通常片剂的操作，提取物与其他辅料采用等量递加混合法混合均匀，采用湿法制粒，烘干后整粒，加入硬脂酸镁混合均匀后，压片，包衣，制成250mg/片。

实施例10：药物组合物胶囊的制备

处方(1000粒量)

成分	重量(g)
		葛根总黄酮提取物(实施例1制得)	65
黄柏总生物碱提取物(实施例3制得)	55
		淀粉	65
糊精	63.5
		硬脂酸镁	1.5
总计	250

按照通常胶囊的操作，以等量递加混合法将提取物与玉米淀粉和糊精等辅料混合均匀，制粒，以硬脂酸镁作为润滑剂，选用1号胶囊，将药物填充、封口即得。

实施例11：药物组合物颗粒的制备

处方(1000袋量)

成分	重量(g)
		葛根总黄酮提取物(实施例1制得)	390

黄柏总生物碱提取物(实施例4制得)	330
		糊精	1280
总计	2000

按照通常颗粒的操作进行。将提取物、糊精分别过筛，混匀，用乙醇-水制成软材，然后筛网制粒，干燥，过筛整粒即得。

实施例12：药物组合物滴鼻液体制剂制备

处方(1000瓶量)

成分	重量(g)
		葛根总黄酮提取物(实施例1制得)	27
黄柏总生物碱提取物(实施例2制得)	23
		2，4-二甲基-β-环糊精	148
山犁糖醇	50
		EDTA钠盐	1
苯扎氯胺	1
		总计	250

上述剂量配置的药粉，待使用时加蒸馏水5000ml混匀即得。

实施例13：药物组合物气雾剂制备

处方(1000瓶量)

成分	重量(g)
		葛根总黄酮提取物(实施例1制得)	54
黄柏总生物碱提取物(实施例3制得)	46
		乙醇	600
维生素C	1
		二氯二氟甲烷(F<sub>12</sub>)	适量
月桂醇	适量

按照通常气雾剂的操作进行。首先用乙醇和蒸馏水将提取物制成溶液，分装于气雾剂容器，安装阀们，轧紧封帽后，冲装抛射剂F₁₂，摇匀，即得。

实施例14：葛根或黄柏有效部位提取物对糖尿病模型动物血糖的影响

1.受试物

提取物1：实施例1的葛根总黄酮提取物；

提取物2：实施例2的黄柏总生物碱提取物。

将实施例1的葛根总黄酮提取物和实施例2的黄柏总生物碱提取物分别置研钵中研细研匀，加0.5％CMC(羧甲基纤维素钠)溶液配制成所需浓度的药液，备用。

阳性对照药：盐酸苯乙双胍片(降糖灵)：白色片剂，100片/瓶，25mg/片，山东省莒南制药厂产品，批号：030405。

2.实验动物

ICR小鼠，雄性，体重24～25g，由中外合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2003-0002。实验用动物分笼饲养。饲养温度为22±2℃，湿度为60～70％，试验前禁食12小时，不禁水。

3.测试仪器

MediSense Optium^TM“安妥”血糖/血酮仪：美国雅培制药有限公司产品；检测试纸：同公司产品，批号52949。

4.试验方法

ICR小鼠，腹腔注射链脲酶素150mg/kg制备高血糖模型，72小时后，于眼眶静脉处取血，测定血糖，然后从模型构建成功的小鼠中选取64只，按血糖值及体重将其均匀分成8组，每组8只。其中，受试物用药组分别以低、中、高三种剂量灌服提取物1或提取物2，阳性对照组灌服盐酸苯乙双胍片75mg/kg，模型对照组灌服同容积蒸馏水20ml/kg。给药后1、3hr时，同前法取血，检测并比较各组模型动物的血糖值。

5.试验结果

灌胃给小鼠葛根总黄酮提取物4000mg/kg、黄柏总生物碱提取物400mg/kg、盐酸苯乙双胍片75mg/kg，对模型动物的高血糖均具有明显的降低作用(P＜0.05或P＜0.01)。见表1。

6.试验小结

给小鼠灌服葛根总黄酮提取物4000mg/kg或黄柏总生物碱提取物400mg/kg，结果对链尿霉素模型动物的高血糖均具有明显的降低作用。

7.试验结论

葛根总黄酮提取物或黄柏总生物碱提取物均具有一定的治疗高血糖的作用。

表1 口服不同剂量葛根或黄柏有效部位提取物对糖尿病模型动物血糖的影响

(Mean±SD，N＝8)

*P＜0.05，**P＜0.01，与模型对照比

实施例15：葛根和黄柏有效部位提取物组合物对糖尿病模型动物血糖的影响

1.受试物

组合物1：由实施例1的葛根总黄酮提取物与实施例2的黄柏总生物碱提取物组合而成，两者的重量比为1∶4。

组合物2：由实施例1的葛根总黄酮提取物与实施例2的黄柏总生物碱提取物组合而成，两者的重量比为3∶2。

组合物3：由实施例1的葛根总黄酮提取物与实施例2的黄柏总生物碱提取物组合而成，两者的重量比为4∶1。

组合物4：由实施例1的葛根总黄酮提取物与实施例2的黄柏总生物碱提取物组合而成，两者的重量比为9∶1。

组合物5：由实施例1的葛根总黄酮提取物与实施例2的黄柏总生物碱提取物组合而成，两者的重量比为19∶1。

将实施例1的葛根总黄酮提取物和实施例2的黄柏总生物碱提取物按上述比例混合，置研钵中研细研匀，加0.5％CMC溶液配制成所需浓度的药液，备用。

2.实验动物

ICR小鼠，雄性，体重23～28g，由中外合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2003-0002。实验用动物分笼饲养。饲养温度为22±2℃，湿度为60～70％，试验前禁食12小时，不禁水。

3.测试仪器

4.试验方法

ICR小鼠，腹腔注射链脲酶素150mg/kg制备高血糖模型，72小时后，于眼眶静脉处取血，测定血糖，然后从模型构建成功的小鼠中选取56只，按血糖值及体重将其均匀分成7组，每组8只。其中，受试物用药组分别按表1灌服组合物药方，阳性对照组灌服盐酸苯乙双胍片75mg/kg，模型对照组灌服同容积蒸馏水20ml/kg。给药后1、3hr时，同前法取血，检测并比较各组模型动物的血糖值。

5.试验结果

灌胃给小鼠组合物1、2、3、4方1000mg/kg、盐酸苯乙双胍片75mg/kg，对模型动物的高血糖均具有明显的降低作用(P＜0.05或P＜0.01)。见表2。

6.试验小结

给小鼠灌服葛根总黄酮提取物与黄柏总生物碱提取物的组合物，两者的重量比为1∶4-0.05，结果表明，在相同剂量范围内，葛根总黄酮提取物与黄柏总生物碱提取物两者的重量比在1∶4-0.1范围内时，其各剂量配比的组合物对链尿霉素模型动物的高血糖均具有明显的降低作用。

7.试验结论

葛根总黄酮提取物与黄柏总生物碱提取物的组合物具有一定的治疗高血糖的作用，与单一的葛根总黄酮提取物或黄柏总生物碱提取物相比，两者的组合物在降血糖上表现出协同作用，在相同剂量范围内，葛根总黄酮与黄柏总生物碱合适的重量比约为1∶0.1～4。

表2口服葛根与黄柏有效部位提取物不同配比之组合物对糖尿病模型动物血糖的影响 (Mean±SD，N＝8)

*P＜0.05，**P＜0.01，与模型对照比

实验例16：葛根、黄柏合提提取物对糖尿病模型动物血糖的影响

1.受试物

受试物1：实施例5的葛根与黄柏合提提取物，其得率为4.3％，即1g提取物相当生药葛根4.7g，黄柏18.6g(葛根与黄柏的比例为1∶4)。在该提取物中，葛根总黄酮为21.8％，黄柏总生物碱为58.8％，两者比例为1∶2.7。

受试物2：实施例6的葛根与黄柏提取物，其得率为14.5％，即1g提取物相当生药葛根3.9g，黄柏3.0g(葛根与黄柏的比例为1∶0.79)。在该提取物中，葛根总黄酮为29.5％，黄柏总生物碱为21.6％，两者比例为1∶0.73。

受试物3：实施例7的葛根与黄柏提取物，其得率为21.2％，即1g提取物相当生药葛根3.77g，黄柏0.94g(葛根与黄柏的比例为1∶0.25)。在该提取物中，葛根总黄酮为26.0％，黄柏总生物碱为6.5％，两者比例为1∶0.25。

2.实验动物

ICR小鼠，雄性，体重22～27g，由中外合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2003-0002。实验用动物分笼饲养。饲养温度为22±2℃，湿度为60～70％，试验前禁食12小时，不禁水。

3.测试仪器

4.试验方法

ICR小鼠，腹腔注射链脲酶素150mg/kg制备高血糖模型，72hr后，于眼眶静脉处取血，测定血糖，然后从模型构建成功的小鼠中选取64只，按血糖值及体重将其均匀分成8组，每组8只。其中，受试物用药组分别灌服受试物1方1000、300mg/kg、受试物2方1000、300mg/kg、受试物3方6000、2000mg/kg、阳性对照组灌服盐酸苯乙双胍片75mg/kg，模型对照组灌服同容积蒸馏水20ml/kg。给药后1、3hr时，同前法取血，检测并比较各组模型动物的血糖值。

5.试验结果

灌胃给小鼠受试物1、2方1000mg/kg、受试物3方6000mg/kg、盐酸苯乙双胍片75mg/kg，对模型动物的高血糖均具有明显的降低作用(P＜0.05或P＜0.01)。见表3。

6.试验小结

给小鼠灌服葛根与黄柏以生药材1∶0.25～4配比合提的提取物，该提取物中总黄酮与总生物碱含量比为1∶0.25～2.7，结果对链尿霉素模型动物的高血糖均具有明显的降低作用。

7.试验结论

葛根与黄柏合提提取物在其总黄酮与总生物碱含量比为1∶0.25～2.7时具有一定的对抗高血糖的作用。

表3 口服葛根与黄柏合提提取物对糖尿病模型动物血糖的影响

(Mean±SD，N＝8)

*P＜0.05，**P＜0.01，与模型对照比

实验例17：葛根、黄柏、鬼箭羽提取物的混合物(组合物)

对糖尿病模型动物血糖的影响

1.受试物

混合物：由实施例1的葛根总黄酮提取物、实施例2的黄柏总生物碱提取物、实施例8的鬼箭羽提取物组合而成，三者的重量比为5∶4∶3。

2.实验动物

ICR小鼠，雄性，体重22～26g，由中外合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2003-0002。实验用动物分笼饲养。饲养温度为22±2℃，湿度为60～70％，试验前禁食12小时，不禁水。

3.测试仪器

4.试验方法

ICR小鼠，腹腔注射链脲酶素150mg/kg制备高血糖模型，72hr后，于眼眶静脉处取血，测定血糖，然后从模型复制成功的小鼠中选取40只，按血糖值及体重将其均匀分成5组，每组8只。其中，受试物用药组分别灌服混合物600、300、150mg/kg、阳性对照组灌服盐酸苯乙双胍片75mg/kg，模型对照组灌服同容积蒸馏水20ml/kg。给药后1、3hr时，同前法取血，检测并比较各组模型动物的血糖值。

5.试验结果

灌胃给小鼠混合物600、300mg/kg盐酸苯乙双胍片75mg/kg，对模型动物的高血糖均具有明显的降低作用(P＜0.05或P＜0.01)。见表4。

6.试验小结

葛根总黄酮提取物、黄柏总生物碱提取物与鬼箭羽提取物按一定比例配制而成的混合物(组合物)具有一定的治疗高血糖的作用，三者合适的重量比为5∶4∶3。

表4 口服葛根、黄柏、鬼箭羽提取物混合物(组合物)对糖尿病模型动物血糖的影响

(Mean±SD，N＝8)

*P＜0.05，**P＜0.01，与模型对照比

实验例18：葛根、黄柏合提提取物、或葛根、黄柏、

鬼箭羽提取物的混合物(组合物)对正常动物空腹淀粉耐量的影响

1.受试物

阳性对照药：阿卡波糖片(拜糖苹)：铝塑水泡眼包装，15片/板，2板/盒，内容物为白色或淡黄色片剂，50mg/片，拜耳医药保健有限公司产品，批号：104732。

2.实验动物

SD大鼠，雄性，体重140～150g，由中外合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2003-0002。实验用动物分笼饲养。饲养温度为22±2℃，湿度为60～70％，试验前禁食12小时，不禁水。

3.测试仪器

4.试验方法

SD大鼠，空腹12hr，于眼眶静脉处取血，测定血糖，然后从符合标准的动物中选取48只，按血糖值及体重将其均匀分成6组，每组8只。受试物用药组分别灌服受试物1或混合物400、1200mg/kg、阳性对照组灌服阿卡波糖片200mg/kg，空白对照组灌服同容积0.5％CMC蒸馏水溶液10ml/kg。在灌胃给药的同时，每只动物分别灌服可溶性淀粉2g/kg。在灌服可溶性淀粉后0.5、1、2、6hr时，同前法取血，检测并比较各组模型动物的血糖值。

5.试验结果

灌胃给SD大鼠受试物1或混合物1200mg/kg、阿卡波糖片200mg/kg，对空腹灌服淀粉的动物血糖升高均具有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01)。见表5。

6.试验小结

葛根、黄柏合提提取物、或葛根、黄柏、鬼箭羽提取物按一定比例配制而成的混合物对正常动物空腹淀粉负荷后的血糖均具有一定的降低作用。

表5 口服葛根、黄柏合提提取物、或葛根、黄柏、鬼箭羽提取物的混合物对正常动物空腹

淀粉负荷糖耐量的影响

(Mean±SD，N＝8)

*P＜0.05，**P＜0.01，与空白对照比

实验例19：葛根总黄酮提取物、黄柏总生物碱提取物

及其不同配比组合物的动物急性毒性试验

1 实验材料

1.1受试物

提取物1：实施例1的葛根总黄酮提取物。

提取物2：实施例2的黄柏总生物碱提取物。

将上述葛根总黄酮提取物、黄柏总生物碱提取物、或二者按一定的比例混合，置研钵中研细研匀，加0.5％CMC溶液配制成浓度为25％(25g/100ml)的药液，备用。

1.2实验动物

ICR小鼠，雌雄兼用，体重18～22g，由中外合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2003-0002。实验用动物分笼饲养。饲养温度为22±2℃，湿度为60～70％，试验前禁食12小时，不禁水。

2试验方法

2.1预试验

以25％的药液10、20、40ml/kg剂量分别灌服小鼠各10只，雌雄各半，结果未见动物死亡。

2.2最大给药量试验

取小鼠20只，雌雄各半，禁食12小时后先后灌胃给25％的受试药液40ml/kg，给药后自由饮食，即时及以后每天上、下午各观察1次，连续7天，第8天后，每天观察1次，记录14天内动物的死亡状况及毒性反应。

3实验结果

25％的提取物1、2或25％组合物1、2、3、4、5药液以40ml/kg剂量给小鼠灌服，在观察的14天内，受试动物无一死亡，且毛色、体重、行为活动、食耗量、粪便性状及分泌物等，均未发现明显的异常反应。

4试验结论

葛根总黄酮提取物、黄柏总生物碱提取物、以及两者以重量比1∶0.05、1∶0.1、1∶0.25、1∶0.67、1∶4配制而成的组合物灌胃对小鼠的最大给药量均为10000mg/kg。

实验例20：葛根与黄柏合提提取物对动物急性毒性的影响

1实验材料

1.1受试物

受试物2：实施例6的葛根与黄柏合提提取物，其得率为14.5％，即1g提取物相当生药葛根3.9g，黄柏3.0g(葛根与黄柏的比例为1∶0.8)。在该提取物中，葛根总黄酮为29.5％，黄柏总生物碱为21.6％，两者比例为1∶0.73。

受试物3：实施例7的葛根与黄柏提取物，其得率为21.2％，即1g提取物相当生药葛根3.8g，黄柏0.9g(葛根与黄柏的比例为1∶0.25)。在该提取物中，葛根总黄酮为26.0％，黄柏总生物碱为6.5％，两者比例为1∶0.25。

将受试物1、2、3置研钵中研细研匀，加0.5％CMC溶液配制成浓度为25％(25g/100ml)的药液，备用。

1.2实验动物

同实施例19的1.2。

2试验方法

同实施例19的2。

3实验结果

25％的受试物1、2、3药液以40ml/kg剂量给小鼠灌服，在观察的14d内，受试动物无一死亡，且毛色、体重、行为活动、食耗量、粪便性状及分泌物等，均未发现明显的异常反应。

4试验结论

葛根与黄柏合提提取物在其总黄酮与总生物碱含量比为1∶0.25、1∶0.73、1∶2.7时灌胃对小鼠的最大给药量均为10000mg/kg。

实验例21：葛根、黄柏、鬼箭羽提取物的混合物(组合物)灌服给药对动物急性毒性的影响

1实验材料

1.1受试物

混合物：由实施例1的葛根总黄酮提取物、实施例2的黄柏总生物碱提取物、实施例58的鬼箭羽提取物组合而成，三者的重量比为5∶4∶3。实验前，将该混合物置研钵中研细研匀，加0.5％CMC溶液配制成浓度为25％(25g/100ml)的药液，备用。

1.2实验动物

同实施例19的1.2。

2试验方法

同实施例19的2。

3实验结果

25％的混合物药液以40ml/kg剂量给小鼠灌服，在观察的14d内，受试动物无一死亡，且毛色、体重、行为活动、食耗量、粪便性状及分泌物等，均未发现明显的异常反应。

4试验结论

葛根、黄柏、鬼箭羽提取物以重量比5∶4∶3配制而成的混合物(组合物)灌胃对小鼠的最大给药量为10000mg/kg。

Claims

1.一种预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物，其特征在于，组合物包括葛根总黄酮与黄柏总生物碱，以组合物的总重量为基础计，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的实际含量之和的重量百分比为30％～99％，其中，葛根素占组合物重量的5～44％，小檗碱占组合物重量的3～50％。

2.如权利要求1所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物，其特征在于，以组合物的总重量为基础计，所述葛根总黄酮与黄柏总生物碱的实际含量之和的重量百分比为33％～80％，其中，葛根素占组合物重量的6～25％，小檗碱占组合物重量的3～26％。

3.如权利要求1所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物，其特征在于，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的重量比为1∶0.1～10。

4.如权利要求3所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物，其特征在于，所述葛根总黄酮与黄柏总生物碱的重量比为1∶0.1～4。

5.如权利要求1～4中任一权利要求所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物，其特征在于，所述组合物由葛根总黄酮提取物与黄柏总生物碱提取物组成。

6.如权利要求1～4中任一权利要求所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物，其特征在于，所述组合物由葛根总黄酮提取物、黄柏总生物碱提取物和鬼箭羽水溶性提取物组成，葛根总黄酮与黄柏总生物碱的重量之和与鬼箭羽水溶性提取物的重量比为1∶0.1～5。

7.如权利要求6所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物，其特征在于，所述葛根总黄酮与黄柏总生物碱的重量之和与鬼箭羽水溶性提取物的重量比为1∶0.2～2。

8.一种制备权利要求1～7中任一权利要求所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物的制备方法，包括如下步骤：

取药材葛根和黄柏，将药材破碎或切成块状或丝状并按葛根和黄柏的重量比为1∶0.2～5混合，用20～95％乙醇液提取1～3次，提取液分别上大孔树脂，以20～95％的乙醇水溶液洗脱，收集、合并洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得成品葛根总黄酮与黄柏总生物碱的组合物。

9.一种制备权利要求1～7中任一权利要求所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物的制备方法，包括如下步骤：

a)将药材葛根破碎或切成块状或丝状，分别用20～95％乙醇液提取1～3次；

b)将步骤a所得的葛根提取液浓缩，浓缩液上大孔树脂，预吸附1～2小时，用3～8倍柱体积的水洗脱，弃去，再用4～7倍柱体积的20～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得成品葛根总黄酮，以葛根提取物的总重量为基础计，葛根总黄酮的重量百分比为50％～99％，其中葛根素的重量百分比为7％～70％；

c)将药材黄柏破碎或切成块状或丝状，用酸水浸泡8～20小时，或者用20％或40％或70％乙醇液分次提取；

d)将步骤c所得的黄柏提取液浓缩，选用d1、d2、d3、d4方法中的一种进行纯化。以黄柏提取物的总重量为基础计，所得的黄柏总生物碱的重量百分比为50％～99％，其中小檗碱的重量百分比为4％～60％；

d1)盐析纯化法：在黄柏提取液浓缩液中加入Ca(OH)₂使其pH至8～11，静置，过滤后滤液调pH至1～2，加入NaCl，放置，抽滤，沉淀用水洗至pH为5，重结晶，干燥得成品黄柏总生物碱；

d2)大孔树脂吸附纯化法：将黄柏提取液浓缩液上大孔树脂，预吸附1～2小时，用3～8倍柱体积水洗脱，弃去，再用5～7倍柱体积20～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥，得成品黄柏总生物碱；

d3)乙醇沉淀纯化法：将黄柏提取液浓缩至膏状，膏体相对密度为1.05～1.25，再加入乙醇沉淀，过滤，干燥得成品黄柏总生物碱；

e)将步骤b获得的葛根总黄酮与步骤d获得的黄柏总生物碱按重量比1∶0.1～4混合均匀，即获得由葛根总黄酮与黄柏总生物碱组成的组合物。

10.权利要求1～7中任一权利要求所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物在制备预防和治疗II型糖尿病的药用制剂或功能食品添加剂中的用途。

11.如权利要求10所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物的用途，其特征在于，所述药用制剂选自口服制剂或胃肠外给药制剂。

12.如权利要求10所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物的用途，其特征在于，所述药用制剂选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂或喷雾剂。

13.如权利要求10所述中药有效部位组合物的用途，其特征在于，所述药用制剂为透皮吸收剂。

14.一种预防及治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于，药物组合物含有安全有效量的权利要求1～7中任一权利要求所述的预防和治疗糖尿病的中药有效部位组合物及药学上可接受的载体，其中，中药有效部位组合物与药学上可接受载体的总重量比例为1∶0.1～10。