CN101757073B - 含有苍术提取物的药物组合物 - Google Patents

Abstract

一种含有苍术提取物的药物组合物，可由苍术提取物、知母皂苷B-II和小檗碱组成，还可由苍术提取物、知母提取物和黄柏提取物组合而成，或从苍术、知母和黄柏中直接提取而获得。本发明组合物具有显著的降低血糖作用，有效成分含量高，质量容易控制，制备工艺易于产业化，可应用于预防和治疗糖尿病药物。

Description

含有苍术提取物的药物组合物

技术领域

本发明涉及一种由多种植物提取物相混合而成的组合物，尤其涉及一种含有苍术提取物的药物组合物，用于糖尿病的预防和治疗。

背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一种因体内胰岛素绝对或者相对不足所导致的一系列临床综合症。糖尿病患者中，II型糖尿病(Diabetes type II，non-Insulin DependentDiabetes Mellitus，NIDDM)患者占绝大多数。由于糖代谢的紊乱，在该病的发展进程中还会引起一些并发症，如：低血糖症(Hypoglycemia)、酮症酸中毒(Ketoacidosis)、非酮高渗性昏迷(Nonketotic Hyperosmolar Coma)、心血管疾病、慢性肾衰竭、视网膜病变、神经病变及微血管病变等。II型糖尿病治疗常用的药物主要有三大类：生物药类，如：胰岛素(Insulin)；化学药，如：磺酰脲类(Sulfonylurea)、双胍类(Biguanide)、格列酮类(Glitazone)和中成药类。限于目前尚没有较为成熟的胰岛素非注射给药技术，其使用仍以注射为主，且注射过程也存在安全性风险。化学类药物虽具有较强的降血糖作用，但对肝、肾等毒副作用大，还容易导致心血管并发症加重。此外，还有一些药物，如：胰高血糖素类多肽(Glucagon-like peptide 1，GLP-1)、脂酰基化胰高血糖素类多肽(NN2211，Novo Nordisk)、Exendin-4(

Amylin)和聚乙二醇修饰的Exendin-4(中国发明专利申请00809516.7)等，长期给药后虽能有效控制血糖、降低糖化血红蛋白(HbAlc)数值和改善β胰岛细胞功能，但由于这些分子还同样作用于中枢神经受体，所以给药后呕吐和眩晕的症状较难避免，且给药方式仍以注射为主。另一类DPPIV酶抑制剂，虽能口服，但其将对生物体内的一大类酶均产生抑制作用，从而会使体内脂肪分布发生变化，且给药的实际效果也相对较差。

知母为百合科(Liliaceae)植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge)的根茎，具有滋阴降火、润燥滑肠的功效，中医临床多用于消渴症。知母药用以单位知母饮片或与其它中药配伍后煎煮或熬煮为主。中药材知母中含知母皂甙(苷)(timosaponin)A-I、A-II、A-III、A-IV、B-I、B-II和B-III等成分，其中，知母皂甙A-II、A-IV结构尚不明。还包括知母皂甙(amemarsaponin)A2，即马尔考皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙B(marlogenin-3-O-β-D-glucopyranosy(1→2)-β-D-galactopyranosideB)、去半乳糖替告皂甙(desgalactotigonin)、F-芰脱皂甙(F-gitonin)和异菝葜皂甙(smilageninoside)等。此外，还含有知母多糖(anemaran)A/B/C/D、顺-扁柏树脂酚(cis-hinokiresinol)、单甲基-顺-扁柏树脂酚(monomethyl-cis-hinokiresinol)、氧化-顺-扁柏树脂酚(oxy-cis-himokiresinol)、2，6，4′-三羟基-4-甲氧基二苯甲酮(2，6，4′-trihydroxy-4-methoxy benzophenone)、对-羟苯基巴豆油酸(p-hydroxyphenyl crotonic acid)、二十五烷酸乙烯脂(pentacosyl vinyl ester)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、芒果甙(mangiferin)、烟酸(nicotinic acid)、烟酰胺(nicotinamide)及泛酸(pantothenic acid)等。

黄柏来源于芸香科(Rutaceae)植物黄皮树(Phellodendron chinense Schneid.)或黄檗(Phellodendronamurense Rupr.)的干燥树皮，前者习称“川黄柏”，后者习称“关黄柏”。黄柏始载于《神农本草经》，原名“檗术”，列上品。为清热燥湿、泻火解毒、退虚热的常用中药材，化学成分以生物碱——小檗碱为主。小檗碱对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、淋球菌，以及弗氏、志贺氏痢疾杆菌均有抗菌作用，并有增强白血球吞噬作用。小檗碱的盐酸盐(俗称盐酸黄连素)已广泛用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等，对肺结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定疗效。

关黄柏为黄檗树(Phyllodendron amurense Rupr.)的树皮，黄檗树皮含小檗碱(berberine)约1.6％，并含少量黄柏碱(phellodendrine)、木兰碱(magnoflorine)、药根碱(jatrorrhizine)、掌叶防己碱(palmatine)和白栝楼碱(candicine)等，其根皮可分离出的小檗碱约9％，尚有药根碱、黄柏碱和白栝楼碱等。川黄柏为黄皮树(Phyllodendron Chinense Schneid)和秃叶黄皮树(P.ChinenseSchneid.var.Glabriusculum Schneid)的树皮，其中含小檗碱3-8％，是提取小檗碱的重要来源之一。黄皮树树皮含小檗碱达3％。秃叶黄皮树树皮含小檗碱达6.5％，并含少量掌叶防己碱、药根碱、黄柏碱和木兰碱。

苍术(Rhizoma Atractylodis)来源于菊科植物茅苍术(Atractylodes lancea(Thunb.)DC.)或北苍术(Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.)的干燥根茎。此外，还有关苍术(Rhizoma Atractylodis Japonicae)、鄂西苍术(Atractylodes carlinoides(Hand.-Mazz.)Kitam.)和朝鲜苍术(Atractylodes coreana(Nakai)Kitam.)等。其性温，味辛、苦，用于燥湿健脾、祛风、散寒和明目，主治脘腹胀满、泄泻、水肿、脚气、痿辟、风湿痹痛、风寒感冒、雀目夜盲。化学成分主要为挥发油、萜醇类化合物、苍术苷类化合物、苍术多糖等成分。其中苍术油中主要含苍术素(atractylodin)、β-桉油醇(β-eudesmol)、茅术醇(hinesol)、羟基苍术酮(hydroxy-atractylon)等。苍术苷类为倍半萜苷类化合物，如：苍术苷A。苍术提取物有抗菌、保肝、抗氧化、抗病毒和抗癌等多种药理活性。

近年来，已有一些关于黄柏、知母、苍术单味药材或其组合用于治疗糖尿病的研究。已经有研究表明知母黄酮类成分具有防治糖尿病的作用(国外医学中医中药分册，2002，24，353；中国发明专利ZL03115509.X)。现代研究发现，知母总皂苷(中药药理与临床，2005，21，22-23)、知母皂苷A-III、B-II、B-III和芒果苷等(Wakan IyakugaknZasshi，1995，5，404-405；中国生化药物杂志，2005，26，332)具有降低血糖的功效。据报道，知母醇提物可刺激糖尿病大鼠分泌胰岛素而起到降血糖作用(Exp.Clin.Endocrinol.Diabetes，2004，112，520-525)；知母中的多糖类成分可显著降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖及肝糖元(中草药，1996，17，605-606)。研究表明，黄柏中的主要成分小檗碱具有能促进胰岛素分泌，调节脂质代谢和抗糖尿病的功效(ActaPharmacologica Sinica，2004，25，496-502；中国发明专利ZL01118320.9)。进一步临床研究证实，黄连素，即小檗碱，对II型糖尿病(Non-Insulin-Dependent Diabetes Mellitus，NIDDM)患者的临床有效率为63.3％，且不良反应小(新中医，1997，29，33-34)。

苍术苷是苍术中一系列倍半萜苷化合物的总称(Chem.Pharm.Bull.2003，51，152-157)，在“苍术的化学药理研究进展”一文中(中国中医药信息杂志，2002，9，79-82)，提及了苍术提取物中的苍术苷具有降血糖活性。而事实上，该文章所引用的原文献记载的是从关苍术中提取的多糖成分Atractans A、B和C，表现出降血糖的活性(Planta.Medica，1985，Apr，(2)：102)，并非“苍术的化学药理研究进展”一文中(中国中医药信息杂志，2002，9，79-82)所说的“苍术苷”。迄今为止，尚无公开的文献报道苍术苷具有降血糖活性。

中国发明专利申请93100485.3公开了一种荞麦保健食品，以苦荞麦粉为基料，辅以大豆蛋白粉，再添加枸杞、人参、知母和活性钙等中草药天然成分，其配方重量百分组成为：苦荞麦面粉60-80％、大豆蛋白粉15-30％、枸杞多糖0.5-2.5％、知母皂甙0.2-0.5％、人参多糖0.5-1.5％、活性钙1.2-4.3％。所制成的食品对糖尿病具有治疗作用。该保健食品以荞麦为主，能对糖尿病患者的饮食起到一定作用。

中国发明专利ZL95116521.6公开了一种双补降糖胶囊及其制作方法，使用熟地、黄芪、枸杞子、丹参、黄柏、知母和肉桂等20味原料药，经特殊炮制和加工而成。该降糖胶囊由中药材粉碎后制成，由于含有的纤维素含量多，而能减缓糖的吸收，加入附子和肉桂二药材后使得药物降糖效果更为显著，是该发明的重点所在。

中国发明专利申请99126988.8公开了一种专治糖尿病降糖胶囊，以生地、天花粉、玄参、知母、黄柏、黄连、鹿茸、边桂、山药、石膏和干藕粉等药材为主要组分，治疗由糖尿病引起的上消、中消、下消和多食多尿等病症。

中国发明专利申请02107203.5公开了一种治疗2型糖尿病的复方中药制剂，以葛根、天花粉、苍术、玄参、生黄芪、山药、生石膏、肉桂、熟附片、鬼箭羽、地鳖虫、桑寄生、蚕茧、炮山甲、水蛭、血竭、菝葜、知母、绞股蓝、生地、麦冬、赤芍、地骨皮和制大黄等天然中药材为原料，通过粉碎、煎煮、烘干、灭菌等工序制成，用于II型糖尿病及其并发症的治疗。

中国发明专利申请200310110332.7公开了一种治疗糖尿病的药物参芪山药膏及其制备方法，由“君”药：山药和人参；“臣”药：海龙、海马、阿魏、乳香、没药、红花、肉桂、珍珠、人工麝香、天花粉、黄柏、黄芪、芒果叶和番石榴叶；以及“使”药：冰片等药材共同配伍而成。将山药、人参、天花粉、黄柏、黄芪、芒果叶和番石榴叶等药材的碎段混匀，浸泡于麻油中，三天后经加热，过滤，在滤油中加入红丹，再搅匀，收膏；将药膏加入冷水中，不断搅拌，挤压换水；取药膏用文火熔化，加入珍珠层粉、冰片粉、人工麝香、海龙、海马、阿魏、乳香、没药、红花和肉桂等药材的细粉，搅匀，分摊在无纺布上制成膏药。所制得的药膏益气养阴、生津止渴，具有治疗II型糖尿病的功效。

中国发明专利申请200510025208.X公开了一种治疗非胰岛素依赖型糖尿病的中药组合物，主要由1-5重量份的苍术总糖苷和1-10份的玄参总萜苷组成，还含有10-30重量份的生地粉末和10-30重量份的山药粉末。中药组合物对四氧嘧啶糖尿病模型动物连续给药4周后，使得动物血糖得到改善。

现有技术中的多种治疗糖尿病的药物组合物，虽然分别出现知母、黄柏和苍术三种药材，但尚无由知母、黄柏和苍术三种药材为主配伍的药物组合物，更无由这三种药材提取物和有效成分配伍、药效显著的药物组合物用于预防和治疗糖尿病。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种含有苍术提取物的药物组合物，包括知母皂苷B-II、小檗碱和苍术提取物，苍术提取物含有苍术苷A或苍术多糖或其组合。还包括知母皂苷A-III、知母皂苷B-III和/或芒果苷，能有效治疗糖尿病，对糖尿病，尤其是II型糖尿病的发生和发展也有预防作用。

本发明的另一个目的在于提供一种含有苍术提取物的药物组合物，包括知母皂苷B-II提取物、小檗碱提取物和苍术提取物，还包括知母皂苷A-III提取物、芒果苷提取物和/或B-III提取物，能有效治疗糖尿病，对糖尿病，尤其是II型糖尿病的发生和发展也有预防作用。

本发明的又一个目的在于提供一种含有苍术提取物的药物组合物，由知母提取物、黄柏提取物和苍术提取物组成，能有效治疗糖尿病，还对糖尿病，尤其是II型糖尿病的发生和发展有预防作用。

本发明的再一个目的在于提供一种含有苍术提取物的药物组合物，在苍术提取物、知母提取物、黄柏提取物及其药学上可接受的盐或其混合物中加入各种药物辅料制成的制剂，该制剂可用于预防和治疗糖尿病，尤其是II型糖尿病。

知母皂苷A-III，化学名称：萨尔萨皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷，是一种甾体皂苷，其结构式如式I所示。

式I

知母皂苷A-III可以通过化学合成制得，从植物或中药材中提取是最主要的制取方式。将知母置于索氏提取器中，加入乙醇，并回流浓缩，然后浓缩液萃取3次并脱脂，再经萃取得到知母总皂苷，其中就含有知母皂苷A-III(郑州大学学报，2008，43，167-168)。知母药材经乙醇回流、减压回收、溶解再萃取和分离等步骤就能得到知母皂苷A-III纯化合物(中国发明专利ZL02160151.8)。

知母皂苷B-II，化学名称：25(S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5β-呋甾-22-羟基-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷，是一种甾体皂苷，其结构式如式II所示。

式II

知母皂苷B-II可以通过化学合成制得，从植物或中药材中提取是最主要的制取方式。根据中国发明专利申请200810032324.8公开的各种提取方法，所得到的提取物中的知母皂苷B-II含量为30％-70％，也可以得到纯度高于90％的知母皂苷B-II。知母药材采用溶剂提取法、树脂吸附法、聚酰胺层析法、反相层析法和Sephadex LH-20层析法等分离方法，结合减压干燥、冷冻干燥和/或喷雾干燥等方法能制得纯度高于90％的知母皂苷B-II(中国发明专利申请200510059467.4)。

知母皂苷B-III，化学名称：25(S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷，是一种甾体皂苷，其结构式如式III所示。

式III

知母皂苷B-III可以通过化学合成制得，从植物或中药材中提取是最主要的制取方式。根据中国发明专利申请200810032324.8公开的各种提取方法，能得到含有知母皂苷B-III的提取物。知母药材先经C6-C30的脂肪烃渗漉，再使用低级醇回流并萃取后，经层析分离和重结晶后能制得纯度大于90％的知母皂苷B-III(中国发明专利申请200710040730.4)。

芒果苷，又称知母宁，化学名称：2-β-D-吡喃葡萄糖基-1，3，6，7-四羟基口山酮，是一种黄酮类化合物，其结构式如式IV所示。

式IV

芒果苷略溶于甲醇、乙醇和水，可溶于热稀甲醇、热稀乙醇，不溶于非极性溶剂。可以通过化学方法直接合成制得，一般从含有芒果苷的植物或中药材(如：知母)中提取。这类药材经溶媒，如：但不仅限于，水、乙醇、甲醇、丙醇、丁醇或纯的水溶液，经高温提取并浓缩后，再通过分离等步骤得到纯度大于60％的芒果苷(中国发明专利申请200710066354.6)。这类药材依次经醇提、脱色、去溶剂、稀醇溶解和去溶剂等步骤能得到芒果苷纯度大于90％的提取物(中国发明专利申请200610079234.5)。这些含有芒果苷的药材如：但不仅限于，芒果叶、扁桃叶、知母和石韦等。

小檗碱，化学名称：5，6-二氢-9，10-二甲氧基苯并-1，3-二苯并间二氧杂环戊烯-5，6α-喹嗪，是一种异喹啉生物碱，也是一种季铵生物碱，存在于小檗科(Berberidaceae)等4科10属的植物中，其结构式如式V所示。

式V

小檗碱的熔点145℃，能溶于水和乙醇，在冷乙醇中的溶解度为1∶100，易溶于热水或热乙醇；难溶于苯、乙醚和氯仿。其从乙醚中可析出黄色针状晶体；从水或稀乙醇中析出的晶体带有5.5分子结晶水；若从氯仿、丙酮或苯中结晶，也带有相应的结晶溶剂分子。小檗碱主要以氢氧化季铵的形式存在，在季铵式小檗碱的水溶液中加入过量的碱则生成醇式(叔胺)和醛式(仲胺)小檗碱的沉淀，由此可得到季铵式、醛式和醇式等三种不同形式的小檗碱，其中以季铵式最稳定。小檗碱的盐类在水中的溶解度都比较小，如：其盐酸盐溶解度为1∶500，其硫酸盐溶解度为1∶30。

小檗碱及其盐可以通过化学合成的方式获得。如：以胡椒乙胺和3，4-二甲氧基苯乙酸为起始原料，通过缩合、还原和氧化等多个步骤得到小檗碱(Ber.，1912，44，2980-2985)。又如：以儿茶酚为起始原料，经成环反应得胡椒环，经氯氰化反应得胡椒乙腈，再经缩合、催化和氢化步骤得缩合物盐酸盐，又经环合反应得小檗碱粗品，经碱化和成盐可制得小檗碱盐酸盐、小檗碱硫酸盐或小檗碱鞣酸盐(中国发明专利ZL01106089.1)。还有如：以2，3-二甲氧基苯甲醇和胡椒乙胺为原料，经过烷基化、氯甲基化、氰化、醇解、缩合和环合六步制得盐酸小檗碱(中国发明专利申请200710020332.6)。

本领域技术人员根据现有技术能够从含有小檗碱的天然植物或药材中提取得到纯度大于90％的小檗碱，经过条件的优化能进一步得到纯度大于95％的小檗碱。

小檗碱及其盐还可以从天然植物/中药材(如：三颗针、黄连和黄柏)提取的提取物中获得。酸水法是目前提取小檗碱常用的方法，从三颗针中提取小檗碱，常用多倍量的0.3％硫酸水溶液浸泡24小时，过滤后滤液用石灰乳调pH值至12，经过滤的滤液用盐酸将pH值调至2-3，再加入6％左右的精制食盐，使食盐完全溶解，放置过夜，抽滤得盐酸小檗碱(中药化学，山东科学技术出版社，1997)；或用0.5％的硫酸水溶液冷浸提取，将提取液pH值调至7，滤液浓缩后pH值再调至2-3，再加入6％左右的食盐并过滤，将沉淀溶于热水，将pH值调至8.5-9后过滤，滤液pH值再调至2-3，放冷过滤得盐酸小檗碱(天然药物化学，人民卫生出版社，2003)。在小檗碱提取过程中，提取工艺的条件，如：pH值、酸用量、水用量和温度等，对提高产物的提取率有一定影响(天然产物研究与开发，1998，10，62；广东药学院学报，1996，12，261；怀化医专学报，2004，3，26；海峡药学，1999，11，100；时珍国医国药，2001，12，982)。廖自基等人采用硫酸液浸泡，加入氯化钠、氯化锌沉降浓集后，再用石灰、强碱除去碱性杂质，用硫化铵除锌及胶体杂质的方法从“十大功劳”中提取黄连素，制得的成品小檗碱含量98.1％，提取率65-69％(中国发明专利申请91105606.8)。

乙醇法是另一种小檗碱常用的提取方法，一般包括：投料→提取→蒸发→溶解→洗涤→精制→成品等多个步骤。将中药材(如：黄连或黄柏)用热乙醇浸泡后，将乙醇浓缩液经过滤、加酸、沉淀、放置和过滤等步骤制得盐酸小檗碱。或于乙醇中回流30分钟后静置，反复多次后合并滤液，减压除去乙醇，加酸液后过滤冷却制得盐酸小檗碱。黄连用9倍体积50％乙醇，60℃提取两次，能使小檗碱的提取率达到91％以上，平均回收率为97.38％(山东农业生物学报，2004，6，502-505)。当提取工艺采用：6倍量80％乙醇，乙醇中硫酸加入量为0.25％，提取时间为1.5小时/次，提取次数为3次时，制备所得盐酸小檗碱精制品含量在90％以上(中国药房，2004，15，18)。

小檗碱的碱提取法中，最常用的是石灰乳法，如：黄柏粗粉中加入石灰乳搅拌均匀，常法装渗漉桶，加入饱和石灰水浸泡6小时后渗漉(pH值在10以上)，收集渗漉液，加入渗漉体积7％(质量浓度)的固体食盐，搅拌后放置过夜，经过滤、沉淀、用热水溶解再过滤。滤液加酸调pH值至2，放置过夜，过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，抽干后于80℃下干燥，即得盐酸小檗碱。在比较几种提取方法如：酸水法、石灰乳法和乙醇提取法等，并加以改进后，证明石灰乳法提取效率优于其他方法(基层中药杂志，2000，14，27-29)。

当单独使用超声波(海峡药学，1999，11，100-101；中医药学报，2004，32，29-30；中成药，2004，26，186-189；时珍国医国药，2005，16，374-375)、微波(数理医药学杂志，2002，15，88-89；化工进展，2003，22，1338-1341；光谱实验室，2006，23，526-529)和酶法(中草药，1994，25，123；应用化工，2006，35，373-374)等方法提取小檗碱；或与酸水法、碱提法和醇提法等方法相结合提取小檗碱时，能大大缩短提取的时间并显著提高小檗碱的提取率。

苍术苷A，化学名：[1S，4S，5R，7R，10R-4，10，11，14-tetrahydroxyguai-3-one-11-O-β-D-glucopyranoside]，分子式为C₂₁H₃₆O₁₀，分子量为448，其结构式如式IV所示：

式IV

苍术苷A可通过如下方法制得：苍术用乙醇溶液提取后，所得提取物减压回收乙醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，弃去萃取液，水溶液经非离子型大孔树脂(如：XAD-2)吸附，水洗除杂，10％-50％(v/v)乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥即得。(Chem.Pharm.Bull.，2003，51，152-157)

苍术多糖采用水提法，将苍术或经有机溶剂提取后的苍术沉淀物，经水浸泡或溶解后，所得的水溶液经去蛋白、透析、过滤、浓缩、乙醇沉淀和干燥等步骤后得到。在用水浸泡或溶解过程中，可以单独或联合使用加热和pH调节等方式使多糖溶解入水。本领域普通技术人员所公知的，有多种方式可以除去所得水溶液中的蛋白，如：但不仅限于，三氯乙酸法、三氟乙酸法、三氟三氯乙烷法、酶解法和Sevage法等。

本发明提供的含有苍术提取物的药物组合物，至少含有知母皂苷B-II、小檗碱和苍术提取物，知母皂苷B-II和小檗碱两种组分总量占组合物的重量百分比为5％-95％，苍术提取物中苍术苷A含量大于重量百分比0.2％。苍术提取物中还包括苍术多糖。必要的，本发明组合物中还包括各种与所含化合物相适应的药物辅料，以制成制剂，如：但不仅限于，水溶液注射剂、粉针剂、丸剂、散剂、片剂、贴剂、栓剂、乳剂、霜剂、凝胶剂、颗粒剂、胶囊剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、缓释剂和控释剂等。这些药用辅料既可以是各种制剂中常规使用的，如：但不仅限于，等渗剂、缓冲液、矫味剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂等；也可以是为了与所述物质相适应而选择使用的，如：乳化剂、增溶剂、抑菌剂、止痛剂和抗氧剂等，这类辅料能有效提高组合物所含化合物的稳定性和溶解性或改变化合物的释放速率和吸收速率等，如：使用环糊精增加芒果苷的溶解性(中国发明专利申请200710088853.5)，从而改善各种化合物在生物体内的代谢，进而增强组合物的给药效果。此外，还可以为实现特定的给药目的或方式，如：缓释给药、控释给药和脉冲给药等，而使用的辅料，如：但不仅限于，明胶、白蛋白、壳聚糖、聚醚和聚酯类高分子材料，如：但不仅限于，聚乙二醇、聚氨酯、聚碳酸酯及其共聚物等。

口服液体制剂，除本发明组合物各种主要组分外，辅料一般包括溶剂，以及必要的矫味剂(如：蔗糖)、抑菌剂、乳化剂和着色剂等。

片剂，除本发明组合物各种主要组分外，辅料一般包括填充剂(如：但不仅限于，淀粉、糖粉、糊精、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙和甘露醇等)、粘合剂(如：但不仅限于，乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、明胶溶液、蔗糖溶液和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液或醇溶液等)、崩解剂(如：但不仅限于，干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和交联羧甲基纤维素钠)和润滑剂(如：但不仅限于，硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇4,000、聚乙二醇6,000和月桂醇硫酸镁等)等。

乳剂，除本发明组合物各种主要组分外，辅料一般为水、油(如：脂肪酸)、乳化剂，以及必要的防腐剂和矫味剂等。

颗粒剂，除本发明组合物各种主要组分外，其它辅料与片剂类似，但造粒过程不同。根据需要，将制得的颗粒剂与助流剂混合后装入胶囊即得胶囊剂。

一种本发明提供的含有苍术提取物的药物组合物，主要包含知母皂苷B-II、小檗碱和苍术提取物，知母皂苷B-II和小檗碱两种组分总量占组合物的重量百分比为5％-95％，苍术提取物中含有苍术多糖、苍术苷A或其组合，苍术苷A占组合物总量的重量百分比大于0.2％，苍术多糖占组合物总量的重量百分比大于2％。根据需要可以增加各种组分在组合物中的比例，如：为了实现在预防和治疗糖尿病方面更好的效果，所述组合物中，小檗碱占组合物的重量百分比为2％-60％；知母皂苷B-II占组合物的重量百分比为5％-80％；苍术苷A占组合物总量的重量百分比0.2％-10％。出于实现预防和治疗糖尿病更好疗效的目的，三种组分的含量可以单独增加，也可以互相配合，以增加或减少其中的1个或几个组分。

相应的，小檗碱还包括其药学上可接受的盐如：但不仅限于，盐酸小檗碱和硫酸小檗碱。

在预防和治疗糖尿病方面，为使生物体糖代谢能力得以更显著的改善，血糖水平为更为稳定，还可以在组合物中同时或单独添加占组合物的重量百分比大于1％的知母皂苷A-III、占组合物的重量百分比大于1％的知母皂苷B-III和占组合物的重量百分比大于1.5％的芒果苷三种组分。芒果苷占组合物的重量百分比优先选择2％-30％。

本发明组合物中，还可以使用含有知母皂苷A-III、知母皂苷B-II、知母皂苷B-III、小檗碱、芒果苷和苍术苷A等几种组分的提取物，再根据各个组分的重量百分比含量进行配伍后获得。

知母皂苷A-III提取物从植物或中药材的总知母皂苷中提取获得，提取物中知母皂苷A-III含量大于15％(w/w)。根据需要可以增加知母皂苷A-III的含量，如：增强预防和治疗糖尿病的效果、减少给药剂量和减少给药次数等，知母皂苷A-III提取物中知母皂苷A-III含量一般大于50％(w/w)，优先选择大于90％(w/w)。

知母皂苷B-II提取物从植物或中药材的总知母皂苷中提取获得，提取物中知母皂苷B-II含量大于15％(w/w)。根据需要可以增加知母皂苷B-II的含量，如：增强预防和治疗糖尿病的效果，减少给药剂量和减少给药次数等，知母皂苷B-II提取物中知母皂苷B-II含量一般大于50％(w/w)，优先选择大于90％(w/w)。

知母皂苷B-III提取物从植物或中药材的总知母皂苷中提取获得，提取物中知母皂苷B-III含量大于15％(w/w)。根据需要可以增加知母皂苷B-III的含量，如：增强预防和治疗糖尿病的效果，减少给药剂量和减少给药次数等，知母皂苷B-III提取物中知母皂苷B-III含量一般大于50％(w/w)，优先选择大于90％(w/w)。

知母皂苷A-III、B-II和B-III既可以从植物或中药材的总知母皂苷中分别提取，也可以从植物或中药材的总知母皂苷中共同提取，还可以从植物或中药材的总知母皂苷中提取知母皂苷A-III、B-II和B-III之一种或两种，再与其它相应组分的提取物混合而成。本领域技术人员单独或联合使用现有的各种提取技术就能从含有知母皂苷的植物或中药材的总皂苷部位中提取得到能实现预防和治疗糖尿病的效果所需的各种知母皂苷含量的知母皂苷A-III提取物、知母皂苷B-II提取物、知母皂苷B-III提取物以及知母总皂苷提取物。

知母皂苷A-III、B-II和B-III是从植物或中药材的总知母皂苷中共同提取的，知母提取物中知母皂苷A-III、B-II和B-III三个组分的总含量大于50％(w/w)，三个组分的总含量优先选择大于90％(w/w)以增强预防和治疗糖尿病的效果，减少给药剂量和减少给药次数等。

芒果苷存在于漆树科植物芒果(Mangifera indica L.)的果实、叶和树皮，以及知母的根茎，以及地上部分，鸢尾科植物射干(Belamcanda chinensis(L.)DC.)的花和叶等植物中。芒果苷提取物从植物或中药材的总黄酮中提取获得，提取物中芒果苷含量大于60％(w/w)，优选大于90％(w/w)。本领域技术人员单独或联合使用现有的各种提取技术就能从含有芒果苷的植物或中药材的总黄酮部位中提取得到能实现预防和治疗糖尿病的效果所需的各种芒果苷含量的芒果苷提取物。

小檗碱提取物从植物或中药材的总生物碱中提取获得，提取物中小檗碱含量大于15％(w/w)。根据需要可以增加小檗碱的含量，如：增强预防和治疗糖尿病的效果，减少给药剂量和减少给药次数等，小檗碱提取物中小檗碱含量一般大于50％(w/w)，优先选择大于90％(w/w)。

可用于提取小檗碱的中药材可以为黄柏及其相应植物的部位。此外，还可以选择黄连和三颗针。黄连为毛茛科植物黄连(Coptis chinensis Franch.)、三角叶黄连(Coptisdeltoidea C.Y.Chenget Hsiao)或云连(Coptis teeta Wall.)的根茎。根茎中小檗碱含量5-8％，并含少量的黄连碱、甲基黄连碱、巴马亭、药根碱和木兰花碱等；须根含小檗碱可达5％；黄连叶含小檗碱1.4％-2.9％。因此，黄连是另一种提取小檗碱的重要来源。本领域技术人员单独或联合使用现有的各种提取技术就能从含有小檗碱的植物或中药材的总生物碱部位中提取得到能实现预防和治疗糖尿病的效果所需的各种小檗碱含量的小檗碱提取物。

本发明苍术提取物中含有苍术苷A，含量大于0.5％(w/w)。根据需要可以增加苍术苷A的含量，如：增强预防和治疗糖尿病的效果，减少给药剂量和减少给药次数等，苍术提取物中苍术苷A含量一般为2％-10％(w/w)，优先选择大于10％(w/w)。

本发明苍术提取物中含有苍术多糖，含量大于15％(w/w)。根据需要可以增加苍术多糖的含量，如：增强预防和治疗糖尿病的效果，减少给药剂量和减少给药次数等，苍术提取物中苍术多糖含量一般为15％-30％(w/w)，优先选择大于30％(w/w)。

另一种本发明提供的含有苍术提取物的药物组合物，包括小檗碱提取物、知母皂苷B-II提取物和苍术提取物。提取物中，小檗碱和知母皂苷B-II的总量占组合物的重量百分比为5％-95％；苍术提取物中含有苍术多糖或苍术苷A，苍术苷A占组合物总量的重量百分比大于0.2％，如：但不仅限于，大于1％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％或大于10％。苍术多糖占组合物总量的重量百分比大于2％。

另一种本发明提供的含有苍术提取物的药物组合物，主要包括小檗碱提取物、知母皂苷B-II提取物和苍术提取物。提取物中，小檗碱和知母皂苷B-II的总量占组合物的重量百分比为5％-95％，苍术提取物中含有苍术多糖和苍术苷A，苍术苷A占组合物总量的重量百分比大于0.2％，如：但不仅限于，大于1％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％或大于10％。苍术多糖占组合物总量的重量百分比大于2％。

在这些组合物中，优选的，小檗碱占组合物的重量百分比为2％-60％；知母皂苷B-II占组合物的重量百分比为5％-80％；苍术苷A占组合物总量的重量百分比0.2-10％。出于实现预防和治疗糖尿病更好疗效的目的，三种组分的含量可以单独增加，也可以互相配合，以增加或减少其中的1个或几个组分。必要的，组合物中还包括各种药用辅料。为了实现在预防和治疗糖尿病更好的效果、减少给药剂量和减少给药次数等目的，小檗碱和知母皂苷B-II两种组分总量占组合物的重量百分比进一步选择20％-95％，优先选择50-95％；苍术苷A占组合物总量的重量百分比进一步选择大于10％。

在预防和治疗糖尿病方面，为使生物体糖代谢能力得以更显著的改善，血糖水平为更为稳定，还可以在本发明组合中同时或单独添加知母皂苷A-III提取物、知母皂苷B-III提取物和芒果苷提取物，提取物中所含的知母皂苷A-III占组合物的重量百分比大于1％，所含的知母皂苷B-III占组合物的重量百分比大于1％，所含的芒果苷占组合物的重量百分比大于1.5％。所含芒果苷占组合物的重量百分比优先选择2％-30％。

本发明提供的含有苍术提取物的药物组合物还可以是从一定重量份的相应植物/中药材中直接提取后制得。

另一种本发明提供的含有苍术提取物的药物组合物，由知母提取物、黄柏提取物和苍术提取物。其中，知母提取物占组合物的重量百分比为1％-90％；黄柏提取物占组合物的重量百分比为1％-90％；苍术提取物中含有苍术多糖或苍术苷A或其组合，苍术苷A占组合物总量的重量百分比大于0.2％，苍术多糖占组合物总量的重量百分比大于2％。组合物中，含有的知母皂苷B-II和小檗碱两种组分总量为5％-95％。优选的，本发明组合物，知母皂苷B-II占组合物的重量百分比为5％-80％；小檗碱占组合物的重量百分比为2％-60％；苍术苷A占组合物总量的重量百分比0.2％-10％，苍术多糖占组合物总量的重量百分比2％-10％。出于实现预防和治疗糖尿病更好疗效的目的，几种组分的含量可以单独增加，也可以互相配合，增加或减少其中的1个或几个组分。

为使生物体糖代谢能力得以更显著的改善，血糖水平为更为稳定，本发明组合物中，还含有占组合物的重量百分比大于1％的知母皂苷A-III、占组合物的重量百分比大于1％的知母皂苷B-III和占组合物的重量百分比大于1.5％的芒果苷三种组分。

知母提取物由0.5-9重量份的知母先用10％-95％(v/v)的乙醇提取后，将提取液去乙醇，于大孔树脂上样，用20％-95％(v/v)乙醇洗脱并收集，浓缩洗脱液并去乙醇，调节pH至4-10，以水饱和正丁醇反复萃取后得知母总皂苷提取物，再将萃取后水溶液(母液)的pH值调至中性，再以水饱和正丁醇反复萃取后得知母总黄酮提取物。

所得知母总皂苷提取物中，知母皂苷B-II的含量为10％-90％(w/w)，通常含有20％-50％(w/w)，通过后续分离可以大于90％(w/w)。优先选择pH9-10以提取知母总皂苷。

知母总黄酮提取物中，芒果苷的含量为5％-90％(w/w)，通常含有5％-30％(w/w)，通过后续分离可以大于90％(w/w)。

黄柏提取物由1重量份的黄柏先用10％-90％(v/v)的乙醇提取后，将提取液浓缩并去乙醇，于大孔树脂上样，再用20％-95％(v/v)的乙醇洗脱并收集，浓缩后即得总生物碱提取物，其中所含小檗碱≥15％(w/w)，通常为15％-90％(w/w)。经离子交换、硅胶、Sephadex LH-20和ODS反相色谱之一或几种方法能得到小檗碱含量≥50％(w/w)的总生物碱提取物。纯化所用的大孔树脂，优先选择离子交换与吸附树脂为填料，用含有H⁺、Na⁺、K⁺和Ca⁺离子的C1-C5醇(如：乙醇)及其溶液洗脱，洗脱液除醇浓缩后即得。

所述含有苍术苷A的苍术提取物由0.5-9重量份的苍术用50v/v％-95v/v％乙醇溶液提取后，所得提取物减压除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，弃去萃取液，水液经非离子型大孔树脂吸附，水洗除杂，10v/v％-50v/v％乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥得含有苍术苷A的提取物；

所述含有苍术多糖的苍术提取物由0.5-9重量份的苍术于水中加热提取，水液合并后离心，浓缩，除去蛋白后，水液经减压蒸馏、透析、浓缩、离心和干燥得含有苍术多糖的提取物；

含有苍术苷A和苍术多糖的苍术提取物由0.5-9重量份的苍术用50％-95％(v/v)乙醇溶液提取后，所得提取物减压除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，弃去萃取液，水液经非离子型大孔树脂(如：XAD-2)吸附，水洗除杂，10％-50％(v/v)乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥即得。所含苍术苷A占组合物总量的重量百分比大于0.2％，一般为0.2％-10％。经乙醇提取后的苍术于水中加热回流提取，水提取液合并后离心，低温浓缩，除去蛋白后，水液经减压蒸馏、透析、浓缩和干燥，得苍术多糖，苍术多糖占组合物总量的重量百分比大于2％。

本领域普通技术人员可以了解，苍术苷A和苍术多糖的提取使用不同的提取介质。既可以将苍术先于醇中提取苍术苷A，再将残留固体用于提取苍术多糖；也可以将苍术先于水中提取，水提取液可分别制备出苍术多糖和苍术苷A。使用同一重量份(如：0.5-9)苍术药材，既可以单独提取含有苍术苷A或苍术多糖的本发明提取物，也可以通过先由醇提取再由水提取得到含有苍术苷A和苍术多糖的本发明提取物。通过单味的苍术药材提取苍术苷A和苍术多糖的先后顺序不得限定本发明。

本发明中，还可以将知母和黄柏混合后共同提取获得所需的提取物。将1重量份的黄柏和0.5-9重量份的知母混合，用10％-95％(v/v)乙醇提取，提取液除醇后于大孔树脂上样，再用20％-95％(v/v)乙醇洗脱，所得洗脱液经除醇、浓缩和干燥后即为本发明组合物，含有的知母皂苷A-III、B-II、B-III、芒果苷和小檗碱五种组分，知母皂苷B-II和小檗碱总量占组合物的重量百分数为5％-95％。经离子交换树脂、硅胶、Sephadex LH-20和ODS反相色谱之一或几种方法可以将知母皂苷A-III和B-III除去。

知母、黄柏和苍术的提取物组合物中，优选的，知母皂苷B-II和小檗碱总量占组合物的重量百分数为5％-95％。

必要的，本发明各个组合物中还包括将所述组合物制成各种制剂所需的药用辅料。根据制成各种制剂的实际需要，如：各种组分与辅料的配伍关系、组分之间的配伍关系，以及改善药代动力学和药效学等，对组合物中各个组分的配伍关系进行个例适当调整。

本发明技术方案实现的有益效果：

本发明提供的含有苍术提取物的药物组合物，包括知母皂苷B-II、小檗碱和苍术提取物三种组分。苍术提取物含有苍术苷A或苍术多糖或其组合，苍术苷A占组合物的重量百分比大于0.2％，苍术多糖占组合物总量的重量百分比大于2％。本发明还提供的含有苍术提取物的药物组合物，包括知母总皂苷、黄柏总生物碱和苍术提取物三种组分。苍术提取物含有苍术苷A、苍术多糖或其组合，苍术苷A占组合物的重量百分比大于0.2％，苍术多糖占组合物总量的重量百分比大于2％。本发明药物组合物可显著改善机体的葡萄糖耐受水平，提高机体对葡萄糖的处置能力，降低糖化血红蛋白，降低随机血糖和空腹血糖。不同的组分组合都有明显的降糖效果，可以适应不同的需要。

此外，在小檗碱、知母皂苷B-II和苍术提取物的基础上，增加芒果苷、知母皂苷A-III和知母皂苷B-III之一种或几种组分后，所得组合物的各个单体之间互相协同，从而在预防和治疗糖尿病方面取得更好的综合效果，如：除降低血糖外，还可改善患者的综合机能等。本发明不同的组分组合，可根据预防或治疗的不同阶段和不同目的需要，综合考虑预防和治疗效果、性价比、成本和药材利用等因素取舍。

本发明所涉及的术语与其一般概念相同。

所述的“预防”是指在未被临床标准认定的疾病前，各种用于防止疾病发生或发展的手段或措施，包括医学、物理或化学的方法，以阻止和降低疾病各种症状的发生或发展。

所述的“预防糖尿病”是指将本发明组合物用于还未符合“糖尿病”临床指标的，随着时间的延续将慢慢发展成为临床上定义为“糖尿病”的潜在患者，从而改善这些患者对葡萄糖的耐受，促进肌体对糖代谢的能力，增加肌体对胰岛素的敏感性。这类潜在的患者通常患有“代谢综合症(Metabolic Syndrome)”(Annnu.Rev.Nutri.，2005，25，391-406；Annnu.Rev.Med.，2005，56，45-62；Nat.Rev.Drug.Disc.，2006，5，295-309；Nat.Rev.Endocri.，2006，2，335-348)，如：肥胖、胰岛素抵制、葡萄糖不耐受、高血压、动脉硬化症(antherosclerosis)、血脂异常症(dyslipidemia)(即血液中的甘油三酯水平偏高，高密度脂蛋白同时偏低)等。通常情况下，这类患者是II型糖尿病患者。

所述“治疗”是指为了阻止和降低疾病的发生或发展，使疾病病程的发展或加重得以抑制、遏制、减轻、改善、减缓、停止、延迟或反转，所描述的保持和/或用药时的疾病的、紊乱的或病理学状态的各种指标包括减轻或减少症状或并发症，或治愈或消除疾病、紊乱或状况。

所述的“治疗糖尿病”是指将本发明组合物用于临床诊断为“糖尿病”的患者，改善这些患者对葡萄糖的耐受，促进肌体对糖代谢的能力，增加肌体对胰岛素的敏感性，进而使得患者的餐后和空腹血糖得以控制在正常的水平。由于对葡萄糖代谢的能力得以提高，从而减缓了因长期高血糖而产生的各种心血管疾病、慢性肾衰竭、视网膜病变、神经病变及微血管病变的发生和发展。通常情况下，这类患者是II型糖尿病患者。

所述的“增强预防和治疗糖尿病的效果、减少给药剂量和减少给药次数”是指在有效治疗剂量的前提下，将本发明组合物基于不同的患者的需要而使用不同的用药量，如：本领域技术人员所熟知的实验用小鼠、实验用大鼠和人之间的给药倍数关系；实验用兔和人之间的给药倍数关系；以及实验用狗和人之间的给药倍数关系等。本发明组合物在多种组分含量较低的情况下，如：苍术苷A含量0.2％-1％(w/w)，一天多次(3次以上)或长期给药后，患者仍能表现出对随机血糖和空腹血糖显著下降，机体对葡萄糖的代谢能力显著提高。根据患者重量换算关系而确定给药量，当给药对象从实验动物转换到人时，本组合物的实际用量将显著增加，因此需要将组合物中的各种组分含量略微增加减少服药的数量，如：1-10％(w/w)亦或更高。或因为缓释、控释或脉冲给药的需要，单剂量药物组合物中，需要将本发明所含有的多种组合物含量提高，如：1-10％(w/w)亦或更高。

所述的“有效治疗剂量”指能减缓各种病理学意义上的症状而使用本发明组合物的量。本发明组合物的特定剂量需要根据具体的情况加以确定，如：给药的方式、给药途径、给药时患者的状态以及在治疗时的病理学状况等。

所述的“患者”指人、野生动物和家畜(Livestock)。野生动物为自然状态下未经人工驯化的动物。家畜是为了提供食物来源而人工饲养的动物，如：狗、鼠、仓鼠、猪、兔、奶牛、水牛、公牛、绵羊、山羊、鹅和鸡等。给予治疗的“患者”优先选择哺乳动物，尤其是人。

所述的“本发明组合物各种主要组分”指知母皂苷B-II、小檗碱和苍术提取物，还包括知母皂苷A-III、知母皂苷B-III和芒果苷之一中或几种。苍术提取物中含有苍术苷，以及苍术多糖。

所述的“C1-C5醇”指直连或支链的饱和一元醇，如：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇或正丁醇等；或直连或支链的不饱和一元醇，如：丙烯醇；或直连或支链的饱和多元醇，如：乙二醇、1，3-丙二醇或丙三醇等。其中，字母C表示碳原子，其后数字为正整数，如：1、2、3、4或5等，表示基团所含的碳原子个数。

附图说明

图1表示知母黄柏苍术提取物对GK糖尿病大鼠葡萄糖耐量的影响；与正常组比：##p＜0.01；与模型组比：^*p＜0.05，^**p＜0.01。

具体实施方式

以下结合附图详细描述本发明的技术方案。本发明实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

本发明所用的试剂若未明确指明，则均购自于西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)。

本发明实施例中，知母黄柏苍术给药动物组(简称：知母黄柏苍术组)各组分相应含量如下：知母皂苷A-III含量为4％(w/w)，知母皂苷B-II含量为28％(w/w)，知母皂苷B-III含量为8％(w/w)，芒果苷含量为9％(w/w)，小檗碱含量为18％(w/w)。苍术苷A含量为0.5％(w/w)，苍术多糖含量为5％(w/w)。

实施例1知母皂苷A-III、B-II和B-III含量测定

色谱柱：Diamonsil^TM C₁₈(200mm×4.6mm，5μm)。柱温：25℃，流速1.0ml/min。ELSD检测器，漂移管温度70℃，雾化气体流速1.8SPLM。进样量20μl。

流动相A：乙腈；流动相B：0.2％甲酸水溶液；以30％流动相B平衡，30分钟线性梯度洗脱，90％流动相B终止。

分别精密称取知母皂苷A-III、B-II和B-III标准品各20.0mg置10ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再配置成0.2mg/ml知母皂苷B-II、B-III、A-III对照品溶液，备用。

精密称取知母总皂苷提取物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再稀释至适当浓度，则为知母总皂苷样品溶液，备用。

精密称取知母、黄柏、苍术提取物组合物50mg，置25ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，再稀释至适当浓度，摇匀，则为样品溶液，备用。

分别取样品和对照品溶液20ml。注入高效液相色谱仪，根据各个物质的标准曲线，按相应的计算方法计算样品中三个皂苷的含量。

为了确定知母总皂苷提取物的结构，可以收集相应洗脱液后通过质谱确定，或直接通过液质连用确定分子量，配合核磁检测具体化合物结构。

实施例2芒果苷含量测定

色谱柱：迪马公司Diamonsil^RC₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)；柱温为20℃。

流动相：乙腈-水(15∶85，v/v)，(磷酸调pH＝3.0)；流速：1ml/min；进样量20μL。

检测波长：254nm。

精密称取芒果苷对照品5.2mg，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配置成0.208mg/ml芒果苷对照品溶液，备用。

精密称取知母总黄酮提取物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再稀释至适当浓度，则为知母总黄酮样品溶液，备用。

精密称取知母、黄柏、苍术提取物组合物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再稀释至适当浓度，则为组合物样品溶液，备用。

分别取样品和对照品溶液20ml。注入高效液相色谱仪，根据各个物质的标准曲线，按相应的计算方法计算样品中芒果苷的含量。

为了确定芒果苷提取物的结构，可以收集相应洗脱液后通过质谱确定，或直接通过液质连用确定分子量，配合核磁检测具体化合物结构。

实施例3小檗碱含量测定

高效液相色谱仪：Agilent 1100系统；杭州英谱色谱工作站。

色谱柱：Diamonsil^TM C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)；柱温为20℃；进样量20μl。

流动相：水-乙腈-冰醋酸-三乙胺(67∶33∶0.3∶0.8，v/v)，检测波长：345nm；流速：1ml/min。

精密称取盐酸小檗碱10.0mg置25ml量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，配置成0.4mg/ml储备液，精密吸取小檗碱储备液1.0ml，加甲醇溶解并定容至20ml，制成1ml含小檗碱20μg的对照品溶液。

精密称取黄柏提取物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再稀释至适当浓度，则为黄柏提取物样品溶液，备用。

精密称取知母、黄柏、苍术提取物组合物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，再稀释至适当浓度，摇匀，则为组合物样品溶液，备用。

分别取样品和对照品溶液20ml。注入高效液相色谱仪，根据各个物质的标准曲线，按相应的计算方法计算样品中小檗碱的含量。

为了确定小檗碱提取物的结构，可以收集相应洗脱液后通过质谱确定，或直接通过液质连用确定分子量，配合核磁检测具体化合物结构。

实施例4苍术苷A含量测定

高效液相色谱仪：Agilent 1100系统；杭州英谱色谱工作站；色谱柱Diamonsil TM C18(250mm×4.6mm，5μm)。流动相：水-乙腈-甲酸(60∶40∶0.1，v/v)，流速：1mL·min^-1；柱温为20℃；ELSD检测器：漂移管温度70℃，雾化气体流速1.8SPLM。进样量20μl。

精密称取10.0mg苍术苷A置25ml量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，配置成400μg/ml储备液，精密吸取苍术苷A储备液0.5ml，加甲醇溶解并定容至5ml，制成1ml含40μg苍术苷A的对照品溶液。

精密称取20mg苍术提取物，置25ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再稀释至适当浓度，则为苍术提取物样品溶液，备用。精密称取40mg知母、黄柏、苍术提取物组合物，置25ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，再稀释至适当浓度，摇匀，则为组合物样品溶液，备用。

分别取样品和对照品溶液20ml。注入高效液相色谱仪，按相应的计算方法计算样品中小檗碱的含量。

实施例5苍术多糖含量测定

UV-2401紫外分光光度计，石英比色皿，检测波长：490nm。

精密称取无水葡萄糖对照品10mg，置50ml容量瓶中，加水适量，超声使溶解，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品的溶液。

精密称取苍术多糖15mg，置50ml容量瓶中，加水适量，超声使溶解，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0.2mg的溶液，作为供试品的溶液。

精密吸取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml，分别置试管中，加水至1.5ml，再加5％苯酚溶液2ml，混匀，迅速加入浓硫酸6.5ml，摇匀，置沸水浴中，加热15分钟，立即冰水浴冷却至常温，以相应试剂为空白测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。

取供试品溶液0.4ml，按标准曲线的测定步骤测定，按相应计算方法计算苍术多糖含量。

实施例6知母提取物的制备

100公斤知母药材，经粉碎后，投入提取罐中，在80-90℃条件下依次用80％(v/v)乙醇800升加热提取3次，每次提取时间为90分钟，合并三次提取液，浓缩至80升，过滤。将所得滤液用蒸馏水调节至160升，缓缓通过有150升AB-8型大孔树脂的吸附柱，然后用200升蒸馏水淋洗除去杂质，再用400升30％(v/v)乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇后再浓缩至50升，以NaOH调节pH至4，以水饱和的正丁醇35升萃取3次，合并萃取液，浓缩至干。将浓缩所得固体粉碎后得浅黄色粉末，作为提取物1；再用400升80％(v/v)乙醇洗脱大孔树脂，收集洗脱液，浓缩除醇，加水至50升，以水饱和正丁醇35升萃取3次，合并萃取液，浓缩至干。将浓缩所得固体粉碎后得浅黄色粉末，作为提取物2。

合并提取物1与提取物2混合均匀，即为知母提取物。采用正、反相硅胶、Sephadex等手段分离并经核磁鉴定为知母皂苷A-III、B-II和B-III，具体数据见表1：

表1：知母皂苷A-III、B-II和B-III¹³C-NMR数据(100MHz，in C₅D₅N，ppm)

采用正、反相硅胶、Sephadex等手段分离并经核磁鉴定为芒果苷，具体数据如下：

¹³C-NMR{(CD₃)SO，100MHz，ppm}：甙元：179.2(羰基)，161.8(C-1)，107.9(C-2)，163.9(C-3)，93.4(C-4)，156.3(C-4a)，150.8(C-4b)，102.7(C-5)，154.1(C-6)，143.8(C-7)，108.2(C-8)，111.6(C-8a)，101.4(C-8b)；Glu：81.5(C-1)，73.2(C-2)，70.7(C-3)，70.4(C-4)，79.1(C-5)，61.6(C-6)。

经HPLC检测，知母提取物中知母皂苷A-III含量为3％(w/w)，B-II含量为45％(w/w)，知母皂苷B-III含量为6％(w/w)，芒果苷含量为15％(w/w)。

实施例7知母提取物的制备

100公斤知母药材，粉碎，投入提取罐中，用50％(v/v)乙醇1000升加热回流提取2次，每次提取时间为120分钟，合并两次提取液，浓缩至120升，过滤。将所得滤液用蒸馏水调节至200升，缓缓通过有200升D₁₀₁型大孔树脂的吸附柱，用400升蒸馏水淋洗除去杂质；再用600升80％(v/v)乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇后再浓缩至50升，以NaOH调节pH至11-12，以水饱和正丁醇50升萃取2次，合并萃取液，浓缩至干。将浓缩所得固体粉碎后得浅黄色粉末，作为提取物1。母液用HCl调pH值至中性，以水饱和正丁醇50升萃取3次，合并萃取液，浓缩至干。将浓缩所得固体粉碎后得浅黄色粉末，为提取物2。

合并提取物1与提取物2混合均匀，即为知母提取物。经HPLC检测，知母提取物中知母皂苷A-III含量为4％(w/w)，知母皂苷B-II含量为40％(w/w)，知母皂苷B-III含量为8％(w/w)，芒果苷含量为16％(w/w)。

实施例8黄柏提取物制备

100公斤粉碎后的黄柏药材，以70％(v/v)乙醇600升在80-90℃下提取1.5小时，提取3次，合并提取液，离心，上清液即为上柱样品液。将样品液通入装有2*117型强酸型离子树脂50Kg于色谱柱中，依次用蒸馏水和500升含0.4M NaOH的70％(v/v)乙醇洗脱，收集70％(v/v)乙醇洗脱液，用HCl调节pH值至4，减压回收乙醇，加水定容至200升，加入内装已处理的D₁₀₁大孔吸附树脂100升的吸附柱上，水洗除杂，400升80％(v/v)乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至干。将所得固体粉碎得黄色粉末，即为本发明的黄柏提取物。采用正、反相硅胶、Sephadex等手段分离并经核磁鉴定为盐酸小檗碱，具体数据如下：

¹³C-NMR{DMSO-d6，100MHz，ppm}：150.5，149.9，147.8，145.6，143.8，137.6，133.2，130.8，126.9，123.7，121.5，120.6，120.4，108.6，105.6，102.2，62.1，57.2，55.3，26.5。

经HPLC检测，黄柏提取物中小檗碱含量为55％(w/w)。

实施例9黄柏提取物制备

100公斤粉碎后的黄柏药材，以用量5∶1(溶剂体积∶药材重量)60％(v/v)的乙醇浸润24小时后渗滤提取，收集20倍量渗滤液，即为提取液。提取液减压回收乙醇，浓缩液离心，用离心所得的上清液上柱。将样品液通入装有D₁₁₃树脂(西安电力树脂厂生产)的色谱柱中，依次用蒸馏水、20倍量柱体积的70％(v/v)酸性乙醇洗脱，洗脱液低温减压浓缩至干燥，粉碎得黄色粉末，即为本发明的黄柏提取物。经HPLC检测，黄柏提取物中盐酸小檗碱含量为50％(w/w)。

实施例10知母、黄柏提取物组合物制备

取100Kg知母按实施例4所得的知母总皂苷和知母总黄酮，两者混合，再加入100Kg黄柏药材按实施例6所得的黄柏总生物碱，合并后的粉末打粉，过筛，即得知母、黄柏提取物组合物。经HPLC检测，其中知母皂苷A-III含量为3％(w/w)，知母皂苷B-II含量为35％(w/w)，知母皂苷B-III含量为5％(w/w)，芒果苷含量为12％(w/w)，小檗碱含量为22％(w/w)。

实施例11知母、黄柏提取物组合物制备

50公斤知母、50公斤黄柏药材，粉碎，投入提取罐中，在80-90℃条件下用70％(v/v)乙醇1000升加热提取3次，每次提取时间为90分钟，合并三次提取液，浓缩至100升，过滤，将滤液用蒸馏水调节至150升。再缓缓通过装有150升D₁₀₁型大孔树脂的吸附柱，用300升蒸馏水淋洗除去杂质；再用300升70％(v/v)乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇后再浓缩至50升，以水饱和正丁醇50升萃取3次，合并正丁醇萃取液，浓缩至干，粉碎后得浅黄色粉末9公斤，为知母黄柏提取物。经HPLC检测，提取物中知母皂苷A-III含量为5％(w/w)，知母皂苷B-II含量为28％(w/w)，知母皂苷B-III含量为10％(w/w)，芒果苷含量为12％(w/w)，小檗碱含量为18％(w/w)。

实施例12知母、黄柏提取物组合物制备

60公斤粉碎后的知母、40公斤粉碎后的黄柏药材，混合，以80％(v/v)乙醇500升浸润24小时后渗滤提取，收集2000升渗滤液，即为提取液。提取液减压回收乙醇后，加水定容至500升，过滤，滤液即为上柱样品液。将样品液通入装有200升D₁₁₃树脂的色谱柱中，用200升蒸馏水洗涤树脂，同前面的吸附后残液合并，缓缓通过100升D₁₀₁型大孔树脂吸附。D₁₁₃树脂以70％的酸性乙醇洗脱，浓缩干燥，得提取物1。D₁₀₁型大孔树脂柱，水洗除杂，60％(v/v)乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，干燥粉碎得淡黄色粉末，得提取物2。合并提取物1、2，即得知母黄柏提取物。经HPLC检测，提取物中知母皂苷A-III含量为4％(w/w)，知母皂苷B-II含量为30％(w/w)，知母皂苷B-III含量为8％(w/w)，芒果苷含量为10％(w/w)，小檗碱含量为20％(w/w)。

实施例13苍术提取物的制备

苍术饮片100公斤，用水加热提取，提取液离心，弃去沉淀。上清液浓缩至100L，以95％(v/v)乙醇调节至混合液乙醇浓度为70％(v/v)，放置过夜冷藏沉淀，离心，分别取上清液和沉淀备用。上清液浓缩至80L，以等体积乙酸乙酯萃取3次，萃取液弃去。母液以80L水饱和正丁醇萃取3次，合并萃取液，浓缩干燥正丁醇萃取液即得含苍术苷A的提取物。沉淀以100L水溶解，以Savage法去除蛋白8次，水液透析，过滤，浓缩，干燥，得苍术多糖；苍术总苷和苍术多糖混合，即为本发明的苍术提取物之一。经正反向硅胶、Sephadex等方式分离，核磁鉴定为苍术苷A，经HPLC含量测定，确定苍术苷A含量≥0.2％。核磁鉴定数据见表2：

表2：苍术苷A核磁数据                in(CD)₃SO

实施例14苍术提取物的制备

苍术饮片100公斤，用800L 90％(v/v)乙醇浸泡提取三次，每次24小时，合并提取液，提取液离心后，上清液减压回收乙醇，以3倍量水沉淀，离心除去沉淀杂质。上清液上AB-8大孔树脂吸附，水洗除杂，30％(v/v)乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥，得苍术苷A提取物。经HPLC检测，苍术提取物中苍术苷A含量≥0.2％。

实施例15苍术提取物的制备

实施例14提取后的苍术药材，挥干乙醇，药材以800L水加热回流提取2次，水液合并后离心，低温浓缩至100L，三氯乙酸法除蛋白3次，水液减压蒸馏至20L，透析，浓缩，醇沉，离心，干燥，得苍术多糖提取物。

将实施例14和实施例15分别制得的提取物混合，即得含有苍术苷A和苍术多糖的苍术提取物。

实施例16知母、黄柏、苍术提取物的制备

取100Kg知母按实施例4所得的知母总皂苷和知母总黄酮，两者混合，加入100Kg黄柏药材按实施例8所得的黄柏总生物碱，再加入100Kg苍术药材按实施例13所得的苍术提取物，合并后的粉末打粉，过筛，即得知母、黄柏提取物组合物。经HPLC检测，其中知母皂苷A-III含量为2.5％(w/w)，知母皂苷B-II含量为30％(w/w)，知母皂苷B-III含量为4％(w/w)，芒果苷含量为10％(w/w)，小檗碱含量为20％(w/w)，苍术苷A的含量为0.2％(w/w)，苍术多糖的含量为3％(w/w)。

实施例17：知母黄柏苍术提取物对GK糖尿病大鼠随机血糖的影响

GK糖尿病大鼠随机分为模型组，罗格列酮组，知母黄柏苍术组。正常组为Wistar大鼠。试验期间，知母黄柏苍术组灌胃给予知母黄柏苍术提取物，每日一次，剂量为200mg/kg。每周测定随机血糖，试验结果见表3。

表3知母黄柏苍术对GK糖尿病大鼠随机血糖的影响

与正常组比：##p＜0.01；与模型组比：^*p＜0.05，^**p＜0.01。

试验结果表明：知母黄柏苍术提取物能有效降低GK大鼠的随机血糖。连续给予2周后，知母黄柏苍术组GK大鼠的随机血糖明显下降，与模型组相比呈显著性差异(p＜0.05，p＜0.01)。

实施例18：知母黄柏苍术提取物对GK糖尿病大鼠空腹血糖的影响

GK糖尿病大鼠随机分为模型组，罗格列酮组，知母黄柏苍术组。正常组为Wistar大鼠。试验期间，知母黄柏苍术组灌胃给予知母黄柏苍术提取物，每日一次，剂量为200mg/kg。每周测定空腹血糖，试验结果见表4。

表4知母黄柏苍术对GK糖尿病大鼠空腹血糖的影响

与正常组比：##p＜0.01；与模型组比：^*p＜0.05，^**p＜0.01

试验结果表明：知母黄柏苍术提取物能有效降低GK大鼠的空腹血糖，知母黄柏苍术组给药第3、4周血糖明显降低，与模型组相比有显著差异(P＜0.01)。

实施例19：知母黄柏苍术提取物对GK糖尿病大鼠葡萄糖耐量的影响

GK糖尿病大鼠随机分为模型组，罗格列酮组，知母黄柏苍术组。正常组为Wistar大鼠。试验期间，知母黄柏苍术组灌胃给予知母黄柏苍术提取物，每日一次，剂量为200mg/kg。给药四周后进行口服葡萄糖耐量试验，结果见图1。

试验结果表明：知母黄柏苍术能有效改善GK糖尿病大鼠的葡萄糖不耐受，提高机体对葡萄糖的处置能力。知母黄柏苍术组在糖负荷60、90和120min后，显著降低GK糖尿病大鼠血糖，与模型组相比，具有显著性差异(p＜0.05)

实施例20：知母黄柏苍术提取物对GK大鼠糖化血红蛋白的影响

表5是GK糖尿病大鼠糖化血红蛋白的测定结果。表中数据显示，GK糖尿病大鼠(模型组)的糖化血红蛋白水平明显高于正常组。知母黄柏苍术提取物治疗4周后，GK糖尿病大鼠血中的糖化血红蛋白水平明显降低，与模型组相比具有显著性差异(p＜0.05)。

表5知母黄柏苍术提取物对GK大鼠糖化血红蛋白的影响

与正常对照组比：^△△p＜0.01，与模型组比：^*p＜0.05。

Claims (5)

1.一种含有苍术提取物的用于预防和治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于由0.5-9重量份的知母、1重量份的黄柏和0.5-9重量份的苍术制得，其中，

0.5-9重量份的知母先用10v/v％-95v/v％乙醇提取后，将提取液去乙醇，于大孔树脂上样，用20v/v％-95v/v％乙醇洗脱并收集，浓缩洗脱液并去乙醇，调节pH至4-10，以水饱和正丁醇反复萃取后得知母皂苷B-II的知母总皂苷提取物；

1重量份的黄柏先用10v/v％-90v/v％乙醇提取后，将提取液浓缩并去乙醇，于大孔树脂上样，再用20v/v％-95v/v％乙醇洗脱并收集，浓缩后制得，其中所含小檗碱的黄柏提取物；

0.5-9重量份的苍术用50v/v％-95v/v％乙醇溶液提取后，所得提取物减压除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，弃去萃取液，水液经非离子型大孔树脂吸附，水洗除杂，10v/v％-50v/v％乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥得含有苍术苷A的提取物；或

0.5-9重量份的苍术于水中加热提取，水液合并后离心，浓缩，除去蛋白后，水液经减压蒸馏、透析、浓缩、离心和干燥得含有苍术多糖的提取物；或

0.5-9重量份的苍术用50v/v％-95v/v％乙醇溶液提取后，所得提取物减压除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，弃去萃取液，水液经非离子型大孔树脂吸附，水洗除杂，10v/v％-50v/v％乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥得含有苍术苷A的提取物；经乙醇提取后的苍术于水中加热提取，水液合并后离心，浓缩，除去蛋白后，水液经减压蒸馏、透析、浓缩、离心和干燥得含有苍术多糖的提取物，将含有苍术苷A的提取物与含有苍术多糖的提取物混合，即得所述的含有苍术苷A和苍术多糖的苍术提取物。

2.根据权利要求1所述的含有苍术提取物的用于预防和治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于所述组合物还包括芒果苷提取物；其中，

所述知母提取物由0.5-9重量份的知母先用10v/v％-95v/v％的乙醇提取后，将提取液去乙醇，于大孔树脂上样，用20v/v％-95v/v％乙醇洗脱并收集，浓缩洗脱液并去乙醇，调节pH至4-10，以水饱和正丁醇反复萃取后得知母皂苷B-II重量百分比为10％-90％知母总皂苷提取物，再将萃取后水溶液的pH值调至中性，再以水饱和正丁醇反复萃取后得芒果苷重量百分比为5％-90％知母总黄酮提取物。

3.根据权利要求2所述的含有苍术提取物的用于预防和治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于所述组合物含有的芒果苷占组合物的重量百分比为2％-30％。

4.根据权利要求1或2所述的含有苍术提取物的用于预防和治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于所述黄柏提取物中使用的大孔树脂为离子交换与吸附树脂。

5.一种制剂，包含权利要求1-4之一所述的药物组合物。

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