CN102100737B - 包含人参总皂苷与丹参总酚酸的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种包含人参总皂苷与丹参总酚酸的药物组合物及其制备方法,该制备方法包括将人参用60%(体积/体积)乙醇水溶液加热回流,提取液回收乙醇后过大孔吸附树脂,分别用水、20%(体积/体积)和60%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱,收集60%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱的部分,除去溶剂即得人参总皂苷提取物;将丹参用水加热提取,提取液中加入乙醇至乙醇体积为提取液体积的80%,静置后滤过,滤液回收乙醇后通过大孔吸附树脂,分别用水和40%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱,收集40%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱的部分,除去溶剂即得丹参总酚酸提取物;将人参总皂苷提取物与丹参总酚酸提取物按照重量比为0.1~10∶0.1~10混合。
Description
技术领域
本发明涉及一种包含中药提取物的药物组合物及其制备方法,具体涉及一种包含人参总皂苷与丹参总酚酸的药物组合物及其制备方法。
背景技术
高血压是我国常见的心血管疾病,其患病率高,心、脑、肾、四肢等血管并发症导致的死亡率和病残率又位列各类疾病之首,对人类健康危害极大。目前,高血压及其相关的血管并发症的治疗主要依赖于西药,以中药为主进行高血压治疗尚未取得突破性进展。因此,如何发展祖国传统医学,利用我国特有资源开发中医药在高血压等心脑血管疾病治疗上的应用已经势在必行。
丹参和人参均是我国的常用中药,它们作为治疗心脑血管疾病的药物具有广泛的临床用药基础和悠久的临床用药历史,且疗效显著。现代药理学研究表明丹参总酚酸具有改善心肌收缩功能、扩张血管、降低血压、提高冠状动脉和脑动脉血流量、抑制血小板聚集、提高细胞耐缺氧能力等作用;人参总皂苷具有活血化淤、降低心肌耗氧量、提高大脑供氧量、促进大脑神经发育等多种重要生理活性。但是,迄今为止,尚没有对由丹参和人参制成的药物组合物对血管的药理作用及其机制进行过系统的研究。
发明内容
因此,本发明人在已知的人参和丹参治疗心脑血管疾病的作用的基础上,对包含人参提取物和丹参提取物的组合物在制备扩张血管药物中的应用及其制备方法进行了研究。
本发明提供了一种包含人参总皂苷与丹参总酚酸的药物组合物的制备方法,其包括以下步骤:
(1)将人参用60%(体积/体积)乙醇水溶液加热回流,提取液回收乙醇后过大孔吸附树脂,分别用水、20%(体积/体积)和60%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱,收集60%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱的部分,除去溶剂即得人参总皂苷提取物;
(2)将丹参用水加热提取,提取液中加入乙醇至乙醇体积为提取液体积的80%,静置后滤过,滤液回收乙醇后通过大孔吸附树脂,分别用水和40%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱,收集40%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱的部分,除去溶剂即得丹参总酚酸提取物;
(3)将人参总皂苷提取物与丹参总酚酸提取物按照重量比为0.1~10∶0.1~10混合。
在上述制备方法中,优选地,将人参用60%(体积/体积)乙醇水溶液加热回流提取4次,每次的60%(体积/体积)乙醇水溶液的重量分别为人参重量的6、4、4和4倍,提取时间每次均为0.5小时。优选地,60%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱的部分经浓缩、喷雾干燥得到人参总皂苷提取物。
在上述制备方法中,优选地,将丹参用去离子水在80℃下加热提取3次,水的重量分别为丹参重量的8、6和6倍,提取时间分别为1小时、0.5小时和0.5小时。优选地,丹参提取液在60℃以下减压浓缩,冷却后加95%(体积/体积)乙醇水溶液至乙醇体积为提取液体积的80%。
在上述制备方法中,步骤(1)中使用的大孔吸附树脂可以为非极性或弱极性大孔吸附树脂,优选为HPD-100型大孔吸附树脂。步骤(2)中使用的大孔吸附树脂可以为非极性或弱极性大孔吸附树脂,优选为AB-8型大孔吸附树脂。
本发明还提供了上述制备方法制备的药物组合物。药物组合物还可以包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。所述药物组合物优选为口服制剂。
本发明还提供了上述药物组合物在制备扩张血管的药物中的用途。其中,上述药物组合物具有实现四乙胺(tetraethylammonium,TEA)敏感的钾离子通道开放的功能。
包含人参总皂苷与丹参总酚酸的药物组合物对血管具有直接的调节作用。本发明采用血管离体灌流技术,以排除活体实验中各种神经、体液因素对其扩张血管作用的影响。结果发现,丹参总酚酸、人参总皂苷及它们组合物对大鼠离体胸主动脉血管环均具有舒张作用,而且该组合物对KCl预收缩的血管环的舒张作用显著优于丹参总酚酸和人参总皂苷两个单味药组,该协同作用与包含丹参总酚酸和人参总皂苷的药物组合物能够开放TEA敏感的钾离子通道有关。根据上述结果可知,包含人参总皂苷与丹参总酚酸的药物组合物具有钾离子通道开放剂的药理作用特点,因此可以松弛平滑肌,特别是血管平滑肌,适用于降低血压、抗心绞痛等血管性疾病。
本发明的有益效果如下:
(1)对传统中药人参和丹参进行了深度开发,拓展了人参和丹参的药用范围;
(2)阐明了TEA敏感的钾离子通道的开放是包含人参总皂苷与丹参总酚酸的药物组合物扩张血管的重要作用机理之一,同时也是人参总皂苷与丹参总酚酸配伍产生协同作用的重要体现;
(3)利用包含人参总皂苷与丹参总酚酸的药物组合物扩张血管的作用,将其用于各类血管性疾病的治疗。
附图说明
以下,结合附图来详细说明本发明,其中:
图1显示了人参总皂苷(EPG)、丹参总酚酸(ESM)及它们的组合物对氯化钾预收缩的内皮完整的大鼠离体胸主动脉环张力的影响;
图2显示了人参总皂苷(EPG)、丹参总酚酸(ESM)及它们的组合物对氯化钾预收缩的内皮去除的大鼠离体胸主动脉环张力的影响;
图3显示了四乙胺(tetraethylammonium,TEA)、格列本脲(glibenclamide,Gli)预处理后对人参总皂苷(EPG)使氯化钾预收缩的内皮去除的大鼠离体胸主动脉环产生的舒张效应的影响;
图4显示了四乙胺(tetraethylammonium,TEA)、格列本脲(glibenclamide,Gli)预处理后对丹参总酚酸(ESM)使氯化钾预收缩的内皮去除的大鼠离体胸主动脉环产生的舒张效应的影响;
图5显示了四乙胺(tetraethylammonium,TEA)、格列本脲(glibenclamide,Gli)预处理后对包含人参总皂苷和丹参总酚酸(EPG+ESM)的组合物使氯化钾预收缩的内皮去除的大鼠离体胸主动脉环产生的舒张效应的影响;
图6显示了无钙液处理后对人参总皂苷(EPG)、丹参总酚酸(ESM)及它们的组合物(EPG+ESM)对苯肾上腺素(Phenylephrine,PE)预收缩的内皮去除的大鼠离体胸主动脉环产生的舒张效应的影响;
图7显示了无钙液处理后对人参总皂苷(EPG)、丹参总酚酸(ESM)及它们的组合物(EPG+ESM)对氯化钾预收缩的内皮去除的大鼠离体胸主动脉环产生的舒张效应的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例详细描述本发明,但这些实施例仅是示例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1:包含人参总皂苷与丹参总酚酸的药物组合物的制备
向人参饮片中加入60%(体积/体积)乙醇水溶液加热回流提取4次,加醇溶液的重量依次为人参饮片重量的6、4、4和4倍,提取时间每次均为0.5小时。合并提取液,回收乙醇后过HPD-100型大孔吸附树脂,先用6倍柱体积量的水洗脱后,继而依次用8倍柱体积量的20%(体积/体积)和6倍柱体积量的60%(体积/体积)乙醇水溶液分别进行洗脱,收集60%(体积/体积)乙醇水溶液的洗脱液,浓缩,喷雾干燥,即得人参总皂苷提取物。
向丹参饮片中加入去离子水,80℃加热提取3次,其加水重量依次为丹参饮片重量的8、6和6倍,提取时间每次分别为1小时、0.5小时和0.5小时。合并滤液,60℃以下减压浓缩,冷却后加95%(体积/体积)乙醇水溶液至含醇量达终溶液体积的80%,静置12小时,滤过,回收乙醇并浓缩,通过AB-8型大孔吸附树脂,用约药材重量5倍体积的去离子水洗至流出液无糖反应,继而用约药材重量的8倍体积的40%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱,收集40%(体积/体积)乙醇水溶液的洗脱液,从色带下来开始收集洗脱液,直至洗脱液加三氯化铁、铁氰化钾试剂不变绿并无沉淀为止。减压回收乙醇,喷雾干燥,即得丹参总酚酸提取物。
以1∶1的重量比将制得的人参总皂苷和丹参总酚酸混合即可。
实施例2:人参总皂苷的含量测定
实施例1中制备的人参总皂苷提取物中的8种主要活性成分的含量测定方法如下:
混合对照品溶液的制备:分别精密称定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3和人参皂苷Rd对照品适量,加甲醇制成浓度分别为Rg1(0.488mg/ml),Re(0.260mg/ml),Rg2(0.163mg/ml),Rb1(0.656mg/ml),Rb2(0.310mg/ml),Rc(0.454mg/ml),Rb3(0.101mg/ml)和Rd(0.164mg/ml)的混合对照品溶液。同法制成人参皂苷Rh1(0.406mg/ml)对照品溶液。
供试品溶液的制备:取人参总皂苷12.5mg,精密加入50%(体积/体积)甲醇水溶液20ml,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再次称定重量,用50%(体积/体积)甲醇水溶液补足减失的重量,0.22μm膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以水为流动相B进行梯度洗脱;流速为1ml/min;柱温:30℃;蒸发光散射检测器;理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计,应不低于3000。
测定法:采用Waters symmetry C18色谱柱,乙腈(A)-水(B)梯度洗脱:0-32min,19-23%(体积/体积)B;33-50min,23-29%(体积/体积)B;50-70min,29-30%(体积/体积)B;70-95min,30-39%(体积/体积)B,温度:30℃,流速:1.0ml/min。进样量10μl,采用电雾室检测器(CAD)进行检测,计算结果见表1。
表1人参总皂苷中8种主要活性成分的含量测定
实施例3:丹参总酚酸提取物的含量测定
实施例1中制备的丹参总酚酸提取物中5种主要活性成分的含量测定方法如下:
混合对照品溶液的制备:分别精密称取丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B对照品适量,加甲醇制成浓度分别为0.079、0.0228、0.0294、0.0378和1.12mg/ml的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备:取丹参总酚酸提取物12.5mg,精密加入50%(体积/体积)甲醇水溶液20ml,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再次称定重量,用甲醇补足减失的重量,0.22μm膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。
检测方法:采用Agilent Zorbax Extend C18色谱柱,乙腈-0.1%(体积/体积)磷酸水溶液梯度洗脱,梯度洗脱程序如下:0-50min,乙腈5-35%(体积/体积);50-60min,乙腈35-5%(体积/体积)。温度:25℃,流速:1.0ml/min,进样量:5μl,紫外检测器(UV)288 nm检测,计算结果见表2。
表2丹参总酚酸中5种主要活性成分的含量测定
实施例4:大鼠离体胸主动脉环的制备
取SPF级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,体重240~260g。迅速游离大鼠胸主动脉,置于4℃下用含95%(体积/体积)O2和5%(体积/体积)CO2混合气体预饱和的K-H液中,剔除周围结缔组织,剪成4-5mm的血管环,期间注意保护血管环内膜不受破坏。根据实验需要,采用棉签磨擦血管环内表面的方法,将部分血管环制备成去除内皮的模型。而后将血管环悬挂于预置的10ml K-H液浴槽内,一端固定,一端通过张力换能器连接BIOPAC生物信号采集系统(Biopac公司,美国)。在持续通95%(体积/体积)O2-5%(体积/体积)CO2混合气体的状态下,调节其基础张力至2.0g,并在37℃下稳定60min。用KCl(60mmol/L)重复刺激3次,以诱发血管的最大收缩幅度。待血管环重新稳定后,用PE(1μmol/L)收缩血管环达峰值,加入乙酰胆碱(Ach)(10μmol/L)检验血管内皮完整性。若加入Ach后使PE预收缩的血管环舒张70%以上,可认为内皮完整;在20%以下,则认为内皮去除。以PE(1μmol/L)或KCl(60mmol/L)诱发最大收缩幅度为100%,以加入药物后的血管张力幅度与PE或KCl诱发最大收缩幅度之间的比率反映血管张力的变化。
实施例5:人参总皂苷、丹参总酚酸及其组合物对大鼠离体胸主动脉环舒缩功能的作用
1.观察人参总皂苷、丹参总酚酸及其组合物对基础状态血管环张力的影响
人参总皂苷以及丹参总酚酸提取物的来源同实施例1。采用累积加药法,每8~10min分别加入人参总皂苷、丹参总酚酸及其组合物1次,观察累积给予0.001~1.0g/L的人参总皂苷、0.001~1.0g/L的丹参总酚酸以及0.001~1.0g/L的人参总皂苷和丹参总酚酸组合物对内皮完整和内皮去除血管环的作用;对照组以K-H液代替药物等容加入。
2.观察人参总皂苷、丹参总酚酸及其组合物对KCl预收缩血管环张力的影响
以KCl(60mmol/L)预收缩内皮完整或内皮去除的血管环,每8~10min分别加入人参总皂苷、丹参总酚酸及其组合物1次,观察累积给予0.001~1.0g/L的人参总皂苷、0.001~1.0g/L的丹参总酚酸以及0.001~1.0g/L的人参总皂苷和丹参总酚酸组合物对内皮完整和内皮去除血管环的作用;对照组以K-H液代替药物等容加入。
3.结果
累积给予0.001~1.0g/L的人参总皂苷、0.001~1.0g/L的丹参总酚酸以及0.001~1.0g/L的人参总皂苷和丹参总酚酸组合物对内皮完整或去除的血管环的基础张力均无显著影响。对于KCl诱导收缩的内皮完整或去除的血管环,各浓度人参总皂苷、丹参总酚酸及其组合物均表现为浓度依赖性舒张作用,且组合物的舒张作用显著优于人参总皂苷和丹参总酚酸单味药组,其中,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001(参见图1、图2)。
实施例6:人参总皂苷、丹参总酚酸及其组合物对不同预处理大鼠离体胸主动脉环舒缩功能的作用
鉴于人参总皂苷和丹参总酚酸组合物对KCl预收缩的胸主动脉血管环的舒张作用显著优于人参总皂苷和丹参总酚酸两个单味药组,为阐明其配伍协同作用的机理进行了以下实验,观察钙离子通道和钾离子通道对其舒张作用的影响。
1.丹参总酚酸、人参总皂苷及其组合物对血管平滑肌K+通道的影响
参见图3、图4和图5,在去内皮血管实验中,用K+通道阻滞剂TEA(5mmol/L)孵浴30min后,可以显著的抑制组合物组的血管舒张作用,但对丹参总酚酸组和人参总皂苷组无明显的抑制作用。而Gli(10μmol/L)对丹参总酚酸、人参总皂苷及其组合物的舒血管作用均无明显抑制作用。
2.丹参总酚酸、人参总皂苷及其组合物对血管平滑肌Ca2+通道影响
(1)在无钙K-H液中对PE引起血管环收缩的作用:
如图6所示,丹参总酚酸组、人参总皂苷组和组合物组孵浴的血管环对1μmol/L浓度的PE引起血管环收缩无明显的抑制作用。
(2)在无钙预加KCl的K-H液中对氯化钙引起血管环收缩的作用:
如图7所示,丹参总酚酸组、人参总皂苷组和组合物组孵浴的血管环对加入不同浓度的氯化钙所引起的收缩均具有明显的抑制作用(P<0.001),组合物组的抑制作用明显优于人参总皂苷组,但比丹参总酚酸的作用小。
Claims (1)
1.一种由人参总皂苷与丹参总酚酸组成的药物组合物的制备方法,其制备步骤如下:
(1)将人参用60%(体积/体积)乙醇水溶液加热回流提取4次,每次的60%(体积/体积)乙醇水溶液的重量分别为人参重量的6、4、4和4倍,提取时间每次均为0.5小时,提取液回收乙醇后过HPD-100型大孔吸附树脂,分别用水、20%(体积/体积)和60%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱,收集60%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱的部分,经浓缩、喷雾干燥得到人参总皂苷提取物;
(2)将丹参用去离子水在80℃下加热提取3次,水的重量分别为丹参重量的8、6和6倍,提取时间分别为1小时、0.5小时和0.5小时,提取液在60℃以下减压浓缩,冷却后加95%(体积/体积)乙醇水溶液至乙醇体积为提取液体积的80%,静置后滤过,滤液回收乙醇后通过AB-8型大孔吸附树脂,分别用水和40%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱,收集40%(体积/体积)乙醇水溶液洗脱的部分,除去溶剂即得丹参总酚酸提取物;
(3)将人参总皂苷提取物与丹参总酚酸提取物按照重量比为0.1~10:0.1~10混合。
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