CN104940287A - 一种具有抗肿瘤转移作用的中药有效成分组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药有效成分组合物及其在制备抗肿瘤转移药物中的应用。所述的中药有效成分组合物包括有效量的丹参总酚酸、人参总皂苷和人参多糖，以及药学上可接受的载体。本发明的重要之处是发现了所述的组合物能有效抑制肿瘤细胞侵袭、迁移，并显著降低肿瘤细胞ERK1/2磷酸化水平，在本发明的配比范围制备制剂能获得更佳的疗效，克服了传统中药配伍有效成分不清楚、质量无法控制而导致治疗效果不明确的缺陷。因此，该中药有效成分组合物具有制备抗肿瘤转移药物的应用前景。

Description

一种具有抗肿瘤转移作用的中药有效成分组合物

技术领域

本发明属于医药领域，具体的，本发明涉及中药有效成分组合物及其在制备抗肿瘤转移药物中的应用。

背景技术

恶性肿瘤是当前危害人类健康的重要疾病，自20世纪70年代以来，我国恶性肿瘤的发病率和死亡率一直呈上升趋势。转移是肿瘤恶性生物学行为的特征性表现，也是恶性肿瘤治疗失败和患者死亡的主要原因。因此，抗肿瘤转移是肿瘤综合治疗的重点。

肿瘤转移是一个多步骤、多途径、涉及多基因变化的一系列复杂过程，其中，丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedpro-tein kinase，MAPK)家族的异常激活与肿瘤转移相关，细胞外信号调节激酶1/2(extracellular regulatedkinase 1/2，ERK1/2)是MAPK家族的主要成员之一，是细胞信号传导的重要途径，能将多种细胞外信号(如生长因子、细胞因子、肿瘤启动因子等)通过磷酸化活化逐级传递至细胞核，并激活多种核转录因子，参与细胞增殖与分化、细胞形态维持、细胞骨架的构建、细胞凋亡和细胞的恶变等多种生物学反应，研究表明，ERK1/2及其磷酸化状态(p-ERK1/2)的表达异常与肿瘤的发生、发展、侵袭、转移密切相关。

肿瘤治疗药物发展至今，虽然取得了很大成就，但由于非特异毒性、缺乏肿瘤选择性以及肿瘤的多药耐药性等，大多数抗肿瘤药物并不像预期那样有效，其对正常组织的毒副作用更是困扰药物治疗的主要问题。目前仍缺少确能达到高效低毒目标的药物，其中能抑制肿瘤转移的更少。因此，开发高效低毒、特异选择性、有明确靶向的抗肿瘤转移药物意义重大。

我国的中医药资源是一个宝库，为新型抗肿瘤药物提供了丰富的物质基础，从中药中发现抗肿瘤有效药物具有独特的优势和广宽的前景。然而，由于传统中药及复方成分不明，机制不清，质量难以控制，临床疗效无法评价等诸多不足与局限，制约了中医药在肿瘤治疗中作用的发挥。中药有效成分的组分配伍是传统中药配合伍创新，具有较高的安全性、临床适应证明确且针对性好、成分及作用机理相对清楚、质量稳定可控的优势。

我们前期研究中发现了丹参与人参有效成分的组分配伍，与传统丹参一人参药对配伍比较，具有疗效优越、组分成分清楚的特点，对肿瘤细胞具广泛的生物学作用；在与部分临床一线抗肿瘤药物的比较研究中，发现丹参与人参组分配伍在安全有效和肿瘤细胞特异选择性方面具有优势，尤其能明显抑制肿瘤细胞转移，对弥补目前抗肿瘤药物欠缺有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的问题是克服已有技术的不足之处，提出一种具有抗肿瘤转移作用的中药有效成分组合物，及其在制备抗肿瘤转移药物中的应用，具体涉及有效量的丹参总酚酸、人参总皂苷和人参多糖，以及药学上可接受的载体在制备抗肿瘤转移药物中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

1)上述中药有效成分组合物在制备抗肿瘤转移药物中的应用。

2)上述肿瘤包括但不限于肺癌。

3)上述中药有效成分组合物配伍剂量重量比，丹参总酚酸、人参总皂苷和人参多糖分别为0.5-2∶2-4∶1-3，更佳的为1∶2∶1。

4)上述中药有效成分组合物，其制剂形式为液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、缓释剂、滴丸剂、口崩制剂、注射剂。

本发明的有益效果：

1)上述中药有效成分组合物能抑制肿瘤细胞侵袭。

2)上述中药有效成分组合物能抑制肿瘤细胞迁移。

3)上述中药有效成分组合物能显著降低肿瘤细胞ERK1/2磷酸化水平，是一种潜在的具有靶向性的抗肿瘤转移药。

附图说明

图1中药有效成分组合物对肺癌A549细胞划痕实验的影响。

图2中药有效成分组合物对肺癌A549细胞划痕实验影响的柱状图。

图3中药有效成分组合物对肺癌A549细胞迁移的影响。

图4中药有效成分组合物对肺癌A549细胞迁移影响的柱状图。

图5中药有效成分组合物对肺癌A549细胞侵袭的影响。

图6中药有效成分组合物对肺癌A549细胞侵袭影响的柱状图。

图7中药有效成分组合物对肺癌A549细胞ERK1/2磷酸化水平的影响。

图8中药有效成分组合物对肺癌A549细胞ERK1/2磷酸化水平影响的柱状图。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步阐述，但不对本发明作任何限制。

以下实施例所用的丹参总酚酸(80％，批号ZL20130112)、人参总皂苷(80％，批号ZL20130211)和人参总多糖(60％，批号ZL20130203)均购于南京泽朗医药科技有限公司，人肺癌细胞株A549购自于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。

实施例1：细胞迁移划痕实验取培养至对数期的A549细胞，用0.25％胰酶消化，用滴管吹打至单细胞悬液，调整细胞密度为1×105个/mL，接种于6孔板上，每孔1mL，置于37℃，5％CO2及饱和湿度条件下细胞培养箱中培养24h至细胞基本融合。用100μL微量移液头在6孔板内垂直划痕，PBS液冲洗两次后加入组分配伍溶液，每孔1mL，阴性对照组加入等体积的细胞培养液。将培养板置入37℃，5％CO2培养箱中培养24h和48h分别用倒置相差显微镜观察并拍照，采用Image J软件随机选取3个并计算100×视野内划痕空白区域的距离。

结果：组分配伍对肺癌A549细胞划痕实验结果见附图1和2所示，与阴性对照组比较，组分配伍显著增加划痕空白区域的距离(P＜0.01)，提示，组分配伍能够显著抑制肺癌A549的迁移，且呈一定的时间依赖性。

实施例2：高内涵细胞成像系统细胞迁移实验取蓝色荧光微球混悬液到96孔板中，于37℃避光孵育1h。用200μL 1×Wash Buffer清洗5次，将细胞消化悬浮于含无血清的培养液中，吹打均匀调整细胞密度为1×104个/mL，接种每孔50μL细胞悬液，然后置于37℃，5％CO2及饱和湿度条件下细胞培养箱中培养24h后给药，阴性对照组加入等体积的细胞培养液，给药加入组分配伍供试品溶液，每孔100μL，每组设3个复孔。将培养板置入37℃，5％CO2培养箱中培养48h。取培养48h的96孔板，弃去细胞培养上清，每孔加入200μL的5.5％预热的固定液，于室温孵育60min，然后加入穿透液室温孵育30min，清洗后加入罗丹明-鬼笔环肽染色液，室温孵育30min后清洗3遍，于高内涵细胞成像系统检测。

结果：组分配伍对肺癌A549细胞迁移实验结果见附图3和4所示，与阴性对照组比较，组分配伍显著降低细胞迁移的面积(P＜0.01)，提示，组分配伍能够显著抑制肺癌A549的迁移，且呈一定的剂量依赖性。

实施例3：实时细胞传感电阻仪Transwell实验在CIM-plate细胞迁移浸润检测板上室中加入一层Matrigel凝胶，下室加入含胎牛血清的培养液600μL。然后在上室中加入细胞悬液，调整细胞密度为1×106个/mL，每孔200μL，置于37℃，5％CO2及饱和湿度条件下细胞培养箱中培养24h。设组分配伍组和阴性对照组，每组3个复孔，在细胞传感电阻仪动态检测48h。

结果：组分配伍对肺癌A549细胞侵袭实验结果见图5和6所示，与阴性对照组比较，组分配伍显著降低细胞侵袭的数目(P＜0.01)，提示，组分配伍能够显著抑制肺癌A549的侵袭，且呈一定的时间依赖性。

实施例4：纳米级超微量蛋白质分析系统检测ERK1/2磷酸化将细胞消化悬浮培养液中，吹打均匀接种到培养皿中培养24h，分为阴性对照组和组分配伍组，阴性对照组加入等体积的细胞培养液，给药加入组分有效配伍供试品溶液，作用12h后去除培养上清，用5mL cell wash buffer清洗细胞3次，每孔加入100μL的裂解液(含蛋白磷酸酶和磷酸酶抑制剂)，用细胞刮破碎细胞裂解30min，收集裂解液置于1.5mL离心管中，于1,2000rpm 4℃离心20min，收集裂解上清，定量后按照Nanopro试剂盒说明书操作，用Nanopro 1000纳米级超微量蛋白质分析系统检测ERK1/2磷酸化。

结果：组分配伍对肺癌A549细胞ERK1/2磷酸化的影响结果见图7和8所示，与阴性对照组比较，组分配伍显著降低A549细胞pp-ERK1、p-ERK1、pp-ERK2和p-ERK2的峰面积(P＜0.01)，并且显著增加非磷酸化ERK1和ERK2的峰面积(P＜0.01)，提示，组分配伍能够显著降低肺癌A549细胞ERK1/2磷酸化水平。

Claims (7)

1.一种中药有效成分组合物，其特征在于，所述的组合物包括丹参总酚酸、人参总皂苷和人参多糖，以及药学上可接受的载体制备成制剂。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，丹参总酚酸、人参总皂苷和人参多糖配伍剂量重量比为0.5-2∶2-4∶1-3，更佳的为1∶2∶1。

3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于丹参总酚酸含量大于80％、人参总皂苷含量大于80％、人参总多糖含量大于60％。

4.如权利要求1所述的中药有效成分组合物在制备抑制肿瘤转移药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于该组合物能有效抑制肿瘤细胞侵袭、迁移，并显著降低肿瘤细胞ERK1/2磷酸化水平。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述肿瘤为肺癌。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述的抑制肿瘤转移药物的制剂形式为液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、缓释剂、滴丸剂、口崩制剂或注射剂。