CN104490961A - 一种罗布麻叶提取物的制备方法及应用 - Google Patents

一种罗布麻叶提取物的制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

一种罗布麻叶提取物的制备方法及应用，属于医药领域。本发明的目的是在罗布麻叶中提高槲皮素–3– O –β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷和槲皮素–3– O –β–D–葡萄糖醛酸苷0.5~10%提取含量并在抑郁症药物中应用的罗布麻叶提取物的制备方法及应用。本发明提取物总黄酮含量为58~78%；其中所含黄酮成分包括：槲皮素–3– O –β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷5.0~25%、槲皮素–3– O –β–D–葡萄糖醛酸苷0.5~10%、芦丁0.5~20%、金丝桃苷5.0~25%、异槲皮素5.0~20%、槲皮素2.0~10%和山奈酚2.0~10%，其他黄酮类成分余量。本发明方便、高效、易于操作，且成本低廉，可满足医药、食品领域的开发和利用，应用、开发价值极大。

Description

一种罗布麻叶提取物的制备方法及应用
技术领域
本发明属于医药领域。
背景技术
中药罗布麻叶是一味传统的平肝息风药，具有平肝安神、养血调经、敛阴止汗的作用，现代药理研究发现其还具有降血脂、抗动脉粥样硬化和肝保护等广泛的药理作用。近年来，“罗布麻茶”等商品在市场上大量出现，临床上常用于治疗高血压或辅助降血压等，其有效部位为黄酮类化合物。由于常用提取方法诸如“醇提—水沉”或“水提—醇沉”等提取罗布麻叶时，由于受到植物细胞壁的阻挡，细胞内的化学成分较难被水或乙醇溶液提取出，此外，由于常用提取方法中芦丁的含量很高，而槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷、萹蓄苷、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮素、槲皮素和山奈酚等成分含量很低。因此，找到一种方便、且能提高槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮素、槲皮素和山奈酚的提取方法具有重要研究价值和广泛的应用前景。
目前常采用的制备罗布麻叶总黄酮的方法均为直接提取罗布麻叶，再经纯化制得罗布麻叶总黄酮。李青山在发明专利《一种罗布麻提取物的提取方法》（申请号200410064551.0）；《罗布麻有效部位的提取分离方法》（申请号02110431.X）提出的罗布麻有效部位即总黄酮的提取分离方法；在上述专利中，应用常规提取纯化方法对罗布麻叶中的总黄酮进行分离提取，具有方便快速等优势。在应用上，周亚球和王先荣在发明专利《罗布麻属植物罗布麻叶总黄酮提取物、其制备及应用》（申请号200510123187）提出的罗布麻属植物罗布麻叶总黄酮提取物、其制备及应用；杨新波在发明专利《一种罗布麻提取物的制备方法及其药物制剂与肝病用途》（申请号200610083809.0）和发明专利《一种罗布麻提取物的制备方法及其药物制剂与应用》（申请号 200610083809）提出的一种罗布麻提取物的制备方法及其药物制剂与治疗肝病、抗衰老、抗脑缺血、促进四氧嘧啶小鼠血糖及肾功能的用途。中国专利《一种罗布麻叶提取物的制备方法》（申请号：200910067196.5），涉及罗布麻叶的酸化乙醇提取方法，用硫酸或磷酸或盐酸或醋酸调节提取液的酸度，可以提高抗抑郁化合物的含量。其提取液的pH范围为3~6；高效液相色谱的检测波长为350nm；没有对化学成分进行系统的定量分析。
发明内容
本发明的目的是在罗布麻叶中提高槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷和槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷0.5~10%提取含量并在抑郁症药物中应用的罗布麻叶提取物的制备方法及应用。
本发明提取物总黄酮含量为58~78%；其中所含黄酮成分包括：槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷5.0~25%、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷0.5~10%、芦丁0.5~20%、金丝桃苷5.0~25%、异槲皮素5.0~20%、槲皮素2.0~10%和山奈酚2.0~10%，其他黄酮类成分余量。
本发明的制备方法是：
a、将干燥的罗布麻叶粉碎过20~50目筛成药粉，用5~20倍量的20～70%乙醇水溶液提取，在提取液中加入硫酸或盐酸，使上述酸的pH值为2.5至3.8，提取温度为50~300 oC，每次提取时间为0.5~2小时，同法提取1~3次，合并提取液，滤过，回收乙醇后将合并后的提取溶液浓缩至原来体积的1/4~1/10，得到浓缩液，在提取过程中罗布麻叶与乙醇水溶液的料液比为1：10~1：20；
b、将步骤a浓缩液静止3~24小时，过滤，滤液以10000转/分离心分离，取离心后所得上清液上大孔树脂柱，所述的干燥的大孔树脂质量与罗布麻叶的质量比为1：0.5~2，先用水洗脱，洗脱至大孔树脂柱的流出液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比为40%~60%的乙醇水溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明；
c、收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥, 得到干浸膏状的罗布麻叶总黄酮含量58~78%。
本发明步骤a中溶液浸湿酸化，时间为3~6小时。
本发明步骤b中提取液采用真空旋转蒸发仪，温度40~80 oC。
本发明步骤b中大孔树脂是指D101或D130或AB8或NKA。
本发明以罗布麻叶总黄酮提取物为药物有效成分的中药制剂，加入药用辅料后制成的片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、混悬剂。
本发明的罗布麻叶总黄酮提取物作为药物在治疗抗抑郁疾病的应用。
本发明的有益效果是：
1、本发明提供了一种罗布麻提取物的制备方法，得到干浸膏状的一种药材提取物。提取物的重量为提取用罗布麻重量的6.0~6.8%，经过紫外-可见分光光度计检测得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物中总黄酮含量占提取物的58~78%。经高效液相色谱检测证明，该提取方法获得的罗布麻叶总黄酮中槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷的含量比一般提取方法中增加了5~30倍。此方法方便、高效、易于操作，且成本低廉，可满足医药、食品领域的开发和利用，应用、开发价值极大。
2、本发明罗布麻叶提取物以总黄酮含量、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷的含量对其进行确切的表征，以这一方式进行表征的黄酮类物质以及罗布麻叶总黄酮提取物具有显著的抗抑郁作用。
3、本发明采用液质联用技术和高效液相色谱法，对提取物中槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷的黄酮成分进行明确定性和定量。
4、本发明罗布麻叶提取物是以酸性乙醇的提取方法从罗布麻叶中提取所得，经动物实验证明，本发明所得提取物可以缩短悬尾实验中小鼠的不动时间及强迫游泳实验中小鼠的不动时间；经动物体外活性评价试验证明，本发明所得提取物可以有效地保护皮质酮损伤的PC12细胞，表明其对于抑郁症有可靠的疗效，其抗抑郁效果可以与目前抗抑郁效果较好的盐酸氟西汀相媲美，由于本发明所得罗布麻叶总黄酮为中药提取物，其副作用小，具有广阔的应用前景。可应用于制备及开发抗抑郁制剂。
附图说明
图1是罗布麻叶提取物对小鼠强迫游泳行为的影响；
图2是罗布麻叶提取物对小鼠悬尾实验的影响；
图3是罗布麻叶提取物对大鼠强迫游泳行为的影响；
图4是实施例1常规方法提取所得到的罗布麻叶黄酮类化合物的色谱图；
图5是本发明实施例2提取得到罗布麻叶总黄酮的色谱图；
图6是本发明实施例3提取得到罗布麻叶总黄酮的色谱图。
具体实施方式
本发明提取物总黄酮含量为58~78%；其中所含黄酮成分包括：槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷5.0~25%、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷0.5~10%、芦丁0.5~20%、金丝桃苷5.0~25%、异槲皮素5.0~20%、槲皮素2.0~10%和山奈酚2.0~10%，其他黄酮类成分余量。
本发明的制备方法是：
a、将干燥的罗布麻叶粉碎过20~50目筛成药粉，用5~20倍量的20～70%乙醇水溶液提取，在提取液中加入硫酸或盐酸，使上述酸的pH值为2.5至3.8，提取温度为50~300 oC，每次提取时间为0.5~2小时，同法提取1~3次，合并提取液，滤过，回收乙醇后将合并后的提取溶液浓缩至原来体积的1/4~1/10，得到浓缩液，在提取过程中罗布麻叶与乙醇水溶液的料液比为1：10~1：20；
b、将步骤a浓缩液静止3~24小时，过滤，滤液以10000转/分离心分离，取离心后所得上清液上大孔树脂柱，所述的干燥的大孔树脂质量与罗布麻叶的质量比为1：0.5~2，先用水洗脱，洗脱至大孔树脂柱的流出液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比为40%~60%的乙醇水溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明；
c、收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥, 得到干浸膏状的罗布麻叶总黄酮含量58~78%。
本发明步骤a中溶液浸湿酸化，时间为3~6小时。
本发明步骤b中提取液采用真空旋转蒸发仪，温度40~80 oC。
本发明步骤b中大孔树脂是指D101或D130或AB8或NKA。
本发明以罗布麻叶总黄酮提取物为药物有效成分的中药制剂，加入药用辅料后制成的片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、混悬剂。
本发明的罗布麻叶总黄酮提取物作为药物在治疗抗抑郁疾病的应用。
现有技术采用试剂对原材料的固有成分进行提取，并不能增加槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷的含量。应用常规提取法提取罗布麻叶时，上述成分含量相对较低。
(一) 利用本发明工艺得到的罗布麻叶总黄酮提取物的总黄酮含量及各组成成分含量测定方法为：
1、罗布麻叶总黄酮提取物干燥后，总黄酮含量的测定采用NaNO2–Al(NO2)3–NaOH络合比色法进行测定，本品含总黄酮（以金丝桃苷计）为58~78%。
2、干浸膏状罗布麻叶总黄酮提取物，组成成分：槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮素、槲皮素和山奈酚的成分鉴别采用液质联用技术；含量测定采用高效液相色谱法。
(二) 选用皮质酮损伤的PC12细胞模型和小鼠行为绝望模型，评价罗布麻叶总黄酮及各组分的抗抑郁活性。经实验证实的有效组分可应用于制备及开发抗抑郁制剂。
本发明选取1种经典的细胞筛选实验和3种经典的动物抑郁行为实验，分别是皮质酮损伤的PC12细胞实验、小鼠强迫游泳试验、小鼠悬尾试验和大鼠强迫游泳试验，结合排除抗抑郁药假阳性的小鼠开场活动试验，从而综合评价罗布麻叶总黄酮的抗抑郁作用。
其中，小鼠强迫游泳试验是将小鼠放入透明圆柱玻璃水缸中，小鼠会在水里挣扎试图逃脱，努力无效之后会放弃挣扎而漂浮在水面上呈不动的“绝望”状态，而抗抑郁药物可以减少小鼠的不动时间，进而提高对应激的耐受性。
由小鼠强迫游泳试验而衍生出小鼠悬尾试验指的是将小鼠尾部悬挂，此时小鼠会努力挣扎试图逃脱，努力无效后会放弃挣扎呈不动的“绝望”状态，而抗抑郁药物可以减少小鼠的不动时间，进而提高对应激的耐受性。
实施例１（现有方法提取）
将罗布麻叶药材粉碎，称取100 g，置提取容器中，加入1000ml体积比为60%乙醇水溶液，用100 oC的温度提取，提取3次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至原来体积的1/5，浓缩液静止10小时，上清液上100 g干燥的大孔树脂柱，先用水洗脱，洗脱至大孔树脂柱的流出液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比为50%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱至乙醇溶液无色澄清透明，约5倍柱体积，收集乙醇水溶液的洗脱液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物。提取物的重量为提取用罗布麻重量的6.5%，经过紫外-可见分光光度计检测得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物总黄酮含量为61%。
图4为一般提取方法即实施例1所得到的罗布麻叶黄酮类化合物的色谱图，该色谱图中峰1为槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷，峰2为槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷，峰3为芦丁，峰4为金丝桃苷，峰5为异槲皮素，峰6为槲皮素，峰7为山奈酚。色谱图中芦丁的含量相对较高；异槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷和槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷的含量很低。
实施例2
将罗布麻叶药材粉碎，称取200g，置提取容器中，加入2000ml体积比为60%乙醇水溶液，在提取液中加入盐酸，使盐酸pH值为2.5，用150oC的温度提取，提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至原来体积的1/5，浓缩液静止12小时，上清液上200g干燥的大孔树脂柱，先用水洗脱，洗脱至大孔树脂柱的流出液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比为60%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱至乙醇溶液无色澄清透明，约5倍柱体积，收集乙醇水溶液的洗脱液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物。提取物的重量为提取用罗布麻重量的6.8%，经过紫外-可见分光光度计检测得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物总黄酮含量为64%。
图5为本发明提供的提取方法实施例2提取得到罗布麻叶总黄酮的色谱图。色谱图中峰1～7的成分同图1。从图2可以看出色谱峰3芦丁含量降低，槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷，槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷，金丝桃苷，异槲皮素，槲皮素和山奈酚的含量显著提高。
实施例3
将罗布麻叶药材粉碎，称取100g，置提取容器中，加入1000ml体积比为60%乙醇水溶液，在提取液中加入盐酸，使盐酸pH值为2.7，用150oC的温度提取，提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至原来体积的1/5，浓缩液静止12小时，上清液上100g干燥的大孔树脂柱，先用水洗脱，洗脱至大孔树脂柱的流出液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比为60%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱至乙醇溶液无色澄清透明，约5倍柱体积，收集乙醇水溶液的洗脱液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物。提取物的重量为提取用罗布麻重量的6.8%，经过紫外-可见分光光度计检测得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物总黄酮含量为63%。
图6为本发明提供的提取方法实施例3提取得到罗布麻叶总黄酮的色谱图。色谱图中峰1～7的成分同图1。此外，峰8为萹蓄苷。从图3可以看出芦丁含量进一步降低，槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷的含量显著升高；并且生成了萹蓄苷。但是，与图2相比，槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷的含量有所下降。
实施例4
将罗布麻叶药材粉碎，称取150 g，置提取容器中，加入2000ml体积比为70%乙醇水溶液，在提取液中加入硫酸，使硫酸pH值为2.9，用140 oC的温度提取，提取3次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至原来体积的1/4，浓缩液静止12小时，上清液上150 g干燥的大孔树脂柱，先用水洗脱，洗脱至大孔树脂柱的流出液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比为50%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱至乙醇溶液无色澄清透明，约5倍柱体积，收集乙醇水溶液的洗脱液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物。提取物的重量为提取用罗布麻重量的6.3%，经过紫外-可见分光光度计检测得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物总黄酮含量为62%。
实施例5
将罗布麻叶药材粉碎，称取150 g，置提取容器中，加入2000ml体积比为70%乙醇水溶液，在提取液中加入硫酸，使硫酸pH值为3.8，用140 oC的温度提取，提取3次，每次1小时，合并提取液，回收乙醇，浓缩至原来体积的1/4，浓缩液静止12小时，上清液上150 g干燥的大孔树脂柱，先用水洗脱，洗脱至大孔树脂柱的流出液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比为50%的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱至乙醇溶液无色澄清透明，约5倍柱体积，收集乙醇水溶液的洗脱液，回收乙醇，干燥，得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物。提取物的重量为提取用罗布麻重量的6.3%，经过紫外-可见分光光度计检测得到干浸膏状的一种罗布麻叶提取物总黄酮含量为62%。
活性试验：
1. 在96孔板上培养嗜铬细胞瘤株PC12细胞，待细胞长满孔底后，吸去细胞液，换上含有相应浓度药物及2×10-4mol·L-1皮质酮的DMEM(对照组不含任何药品), 37 oC 5% CO2 培养48 h。吸去培养液，用D-Hanks 液洗2遍,每孔加入含0. 5 g·L-1 MTT 的无血清DMEM培养4h后吸去培养液，每孔加入10%十二烷基硫酸钠100μL，待蓝色颗粒完全溶解(约12～16 h)，用紫外可见分光光度计测定标本在570 nm 波长处的吸光度值(A570 nm)，用于定量反映活细胞数，计算细胞相对增值率(RGR)，RGR=(A570 nm样品组)/ (A570 nm对照组)。
2.总黄酮及各单体化合物的抗抑郁活性评价：采用pc12细胞抗抑郁实验，对罗布麻叶总黄酮及各单体化合物和两个混合物组分的抗抑郁活性进行了比较研究，本研究对各待测样品均设置三个剂量组，分别为10μmol·L-1, 50μmol·L-1和120μmol·L-1，阴性对照组的细胞相对增值率(RGR)为100%，皮质酮组作为阳性对照，结果表明，皮质酮组的RGR为30.33%，对pc12细胞呈现较明显的损伤行为。用本发明方法所获得的罗布麻叶总黄酮及各单体化合物和混合组分对高浓度皮质酮损伤的pc12细胞均有较明显的保护作用。结果如表1所示：
表1 罗布麻叶黄酮及各单体化合物对皮质酮损伤的pc12细胞的保护作用(                                                ±s , n= 6 )
 结果表明，常规提取法所获得的提取物对皮质酮损伤的PC12细胞保护能力较弱，PC12细胞在三个浓度提取物下的相对增殖率为54.32%、63.69%和69.25%。而本发明方法所获得的提取物对皮质酮损伤的PC12细胞具有良好的保护作用。PC12细胞在三个浓度提取物下的相对增殖率为65.44%、91.01%和95.22%。单体成分的测试结果表明，槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷和金丝桃苷的活性较强。PC12细胞在三个浓度的单体化合物下相对增殖率分别为71.69%、95.17%和110.06%；68.26%、101.69%和105.05%；66.85%、93.82%和100.56%。
试验：
1、动物分组和给药方法：将小鼠50只随机分为五组，分别为空白对照组，阳性药盐酸氟西汀胶囊5 mg/kg给药组，罗布麻叶提取物100、50、25 mg/kg三个剂量给药组，每天给药一次，连续给药十天，空白对照组同时给以同体积的1%羧甲基纤维素钠水溶液20 mL/kg。末次给药后1小时，开始检测。
大鼠分组方法、给药方法同上，每组动物数为8只，共40只，随机分为五组：空白对照组，阳性药盐酸氟西汀胶囊3.5 mg/kg给药组，罗布麻提取物70、35、17.5 mg/kg三个剂量给药组。每天给药一次，连续给药十天，空白对照组同时给以同体积的1%羧甲基纤维素钠水溶液20 mL/kg。末次给药前一天于给药后1小时，
2、小鼠强迫游泳试验：根据Porsolt建立的方法，加以改进。末次给药后1小时，将小鼠分别置于温度25±1oC、深度10 cm的水中强迫游泳6 min。先适应2 min，记录后4 min内小鼠累计不动时间。判定不动的标准是动物在水中停止挣扎，呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面，结果见表2。
3、小鼠悬尾试验：根据Lucien Steru等建立的方法，加以改进。末次给药后1小时，分别将小鼠尾部2 cm处的部分固定于自制的悬尾支架上，使小鼠呈倒挂状态，其头部离台面约5 cm，每只动物两侧用板隔开，遮挡动物视线，使之互相不干扰。观察各组动物在6 min之内后5 min的累计不动时间。判定不动的标准是动物在停止挣扎，身体呈垂直倒悬状态，静止不动，结果见表3。
4、大鼠强迫游泳试验：根据Porsolt建立的方法，试验分两天进行。第一天上午将大鼠置于盛有的自来水的玻璃缸（直径18cm，高40cm）中，水深23 cm，水温28 oC，游泳15 min后取出置于电热取暖器旁，用干布将动物身体上的水擦拭后烤干。第二天上午给药后1 h（其中FLU给药后30 min），再次将大鼠放入上述同等条件的水缸中，观察大鼠在5 min内的累计不动时间。判定不动的标准是大鼠在水中停止挣扎，呈直立漂浮状态，仅有偶尔的肢体运动以保持头部浮在水面。
5、开场试验：根据小鼠置于高40 cm、直径80 cm、周壁为黑色、底面积由面积相等的25块组成的圆柱形敞箱内，光照度约60Lux，室内隔音，记录动物行为，每次测试时间3 min，以穿越低面块数为水平活动（Crossing）得分，每只动物仅进行一次行为测定。
6、数据处理：所有数据以±SD表示，组间比较采用单因素方差分析。实验结果：罗布麻叶提取物对小鼠强迫游泳行为的影响；
表2：罗布麻叶提取物对小鼠强迫游泳行为的影响（±S）
 表2和图1结果表明，阳性药盐酸氟西汀胶囊、试药罗布麻叶提取物100、50、25 mg/kg三个剂量给药组均能明显缩短小鼠强迫游泳累积不动时间。
7、罗布麻叶提取物对小鼠悬尾实验的影响
表3：罗布麻叶提取物对小鼠悬尾实验的影响（±S）
注：与对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01，*** p＜0.001
表3和图2结果表明，阳性药盐酸氟西汀胶囊、试药罗布麻叶提取物100、50 mg/kg二个剂量给药组均能明显缩短悬尾小鼠累计不动时间。
8、罗布麻叶提取物对大鼠强迫游泳行为的影响
由表4及图3结果可见，阳性药盐酸氟西汀胶囊、试药罗布麻叶提取物25 mg/kg组均能明显缩短大鼠强迫游泳累计不动时间。
表4：罗布麻叶提取物对大鼠强迫游泳行为的影响（±S）
注：与对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01，*** p＜0.001
9、结果：阳性药盐酸氟西汀、试药罗布麻叶总黄酮提取物100、50、25 mg/kg三个剂量给药组均能明显缩短小鼠强迫游泳累计不动时间；阳性药盐酸氟西汀、试药罗布麻叶总黄酮提取物100、50 mg/kg二个剂量给药组均能明显缩短悬尾小鼠累计不动时间；阳性药盐酸氟西汀、试药罗布麻叶总黄酮提取物17.5 mg/kg组均能明显缩短大鼠强迫游泳累计不动时间。
以上实验结果表明：本发明制备所得罗布麻叶总黄酮提取物可以缩短悬尾实验中小鼠的不动时间及强迫游泳实验中小鼠的不动时间。表明罗布麻叶经酸性乙醇溶液提取方法制备的有效组分，具有较好的抗抑郁作用，其抗抑郁效果可以与目前抗抑郁效果良好的盐酸氟西汀相媲美，可应用于制备及开发抗抑郁制剂。

Claims (7)

1.一种罗布麻叶提取物，其特征在于：提取物总黄酮含量为58~78%；其中所含黄酮成分包括：槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖基–β–D–葡萄糖苷5.0~25%、槲皮素–3–O–β–D–葡萄糖醛酸苷0.5~10%、芦丁0.5~20%、金丝桃苷5.0~25%、异槲皮素5.0~20%、槲皮素2.0~10%和山奈酚2.0~10%，其他黄酮类成分余量。
2.权利要求1所述的罗布麻叶提取物的制备方法，其特征在于：
a、将干燥的罗布麻叶粉碎过20~50目筛成药粉，用5~20倍量的20～70%乙醇水溶液提取，在提取液中加入硫酸或盐酸，使上述酸的pH值为2.5至3.8，提取温度为50~300 oC，每次提取时间为0.5~2小时，同法提取1~3次，合并提取液，滤过，回收乙醇后将合并后的提取溶液浓缩至原来体积的1/4~1/10，得到浓缩液，在提取过程中罗布麻叶与乙醇水溶液的料液比为1：10~1：20；
b、将步骤a浓缩液静止3~24小时，过滤，滤液以10000转/分离心分离，取离心后所得上清液上大孔树脂柱，所述的干燥的大孔树脂质量与罗布麻叶的质量比为1：0.5~2，先用水洗脱，洗脱至大孔树脂柱的流出液无色澄清透明，pH值为7，再用体积比为40%~60%的乙醇水溶液洗脱，洗脱至乙醇洗脱液无色澄清透明；
c、收集步骤b的乙醇洗脱液，真空干燥, 得到干浸膏状的罗布麻叶总黄酮含量58~78%。
3.权利要求2所述的罗布麻叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤a中溶液浸湿酸化，时间为3~6小时。
4.权利要求2所述的罗布麻叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤b中提取液采用真空旋转蒸发仪，温度40~80 oC。
5.权利要求2所述的罗布麻叶提取物的制备方法，其特征在于：步骤b中大孔树脂是指D101或D130或AB8或NKA。
6.权利要求1所述的罗布麻叶提取物，其特征在于：以罗布麻叶总黄酮提取物为药物有效成分的中药制剂，加入药用辅料后制成的片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、混悬剂。
7.权利要求1所述罗布麻叶提取物作为药物在治疗抗抑郁疾病的应用。
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