CN102875689A - 一种麦冬多糖的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种麦冬多糖及其制备方法。该方法为选取麦冬经醇提、水提、醇沉后,离心取沉淀得麦冬粗多糖,取粗多糖用水溶、加活性炭煮沸、膜分离、再醇沉,离心,取沉淀,干燥,得麦冬多糖,本工艺生产具有技术可靠、操作步骤简单、条件易于控制的特点,适用于大规模生产;所制得的麦冬多糖分子量分布范围固定,重均分子量小于5000道尔顿,总多糖含量>90%;用其制备麦冬多糖注射液具有增强免疫及抑瘤作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种麦冬多糖及其制备方法,属于中药制剂领域。
背景技术
麦冬为百合科植物Ophiopogon japonicus(L.f)Ker-gawl.的干燥块根。麦冬在我国有着悠久的药用历史,主要含有麦冬主要化学成分为甾体皂苷、多糖,还有高异黄酮类、氨基酸等,这些成分共同起作用使麦冬具有广泛的药理作用,主要表现为抗心肌缺血和心肌梗塞作用;免疫调节作用;降低血糖作用;抗肿瘤作用等。而大部分研究表明起主要作用的是麦冬皂苷和多糖,国内外对麦冬的活性成分的提取工艺和药效研究始终非常活跃,特别是对于麦冬皂苷的报道多见,但是今年来随着分离、分析手段的提高,对于麦冬多糖的研究也取得了较大的进展。
麦冬多糖为麦冬的活性成分。研究表明麦冬多糖具有增强机体免疫调节功能及增强化疗药物抗肿瘤作用,对肿瘤有明显的抑制作用。
实验表明,麦冬多糖能诱生肿瘤坏死因子和干扰素-γ,对肿瘤细胞有杀伤和抑制作用。肿瘤坏死因子是由激活的巨噬细胞/单核细胞系统产生的多功能蛋白分子,在机体内起着重要的生理作用。在体内肿瘤坏死因子可以通过三种途径发挥抗肿瘤作用:直接杀伤肿瘤细胞;作用于肿瘤血循环,导致肿瘤组织血供减少,从而影响肿瘤的生长;激活机体免疫系统的抗肿瘤作用。同时,肿瘤坏死因子还可介导炎性过程,减少网膜组织间皮细胞溶纤维蛋白活性,进而使网膜表面纤维蛋白增多,减少组织外渗。干扰素是细胞在受到刺激物作用后合成并释放出的蛋白性淋巴因子,其作用为:直接抗病毒作用;增强主要组织相容性抗原和肿瘤相关抗原的表达;增强自然杀伤细胞(NK)的细胞毒作用;增强抗体依赖性细胞的细胞毒作用;直接的抗细胞增值作用和抗血管生成作用。同时麦冬多糖能增强T淋巴细胞及NK细胞活性,提高了机体的免疫调节功能,而有利于抗肿瘤作用的发挥。
其次,麦冬多糖具有免疫调节作用,可以用于糖尿病等。
麦冬多糖具有显著增强单核吞噬细胞系的功能,麦冬多糖可明显增加巨噬细胞的吞噬指数。麦冬多糖能促进抗体和补体的形成,可以显著增加血清补体和血清IgG的含量。
专利200710040543.6公开了一种麦冬多糖的制备方法,其提纯方法为:
A)取干燥麦冬块根,压扁,用8-12倍量水提3次,合并水提液,并将其减压浓缩至0.5-1g/ml,加入75%-95%乙醇至含醇量达60%-80%,静置过夜,倾去上清液,沉淀重复醇沉1次,冷冻干燥,得淡黄色麦冬粗多糖粉末;
B)将麦冬粗多糖粉末用15倍水溶解,采用超滤方法分离,其中:超滤膜的材料选自醋酸纤维膜、聚砜、聚酰胺或磺化聚砜;超滤膜的形状采用平板式、中空纤维式、管式或卷式;超滤压力为0.1-0.3Mpa,超滤膜的截留分子量指标为10000;
C)麦冬多糖的纯化,超滤后的浓缩液通过型号为D-301、D-355、D-315或D-345的大孔弱碱性阴离子交换树脂,用水洗脱,收集4-8倍柱体积的洗脱部分,合并,干燥,即得麦冬多糖MDG-1。
此提纯方法仅采用了多次水煮醇沉、冷冻干燥、制备粗多糖,超滤膜的截留分子量为10000,纯化采用阴离子交换树脂,与本专利采用截留分子量5kd膜不同。
专利申请 201110326803.2公开了一种麦冬多糖的制备方法:
A)该麦冬多糖为包含阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖的杂多糖,其中半乳糖和葡萄糖的比例为1:1-3,阿拉伯糖含量为1-10%,重均分子量为2-10万。
B)该多糖制备方法为水提取,浓缩,去蛋白,醇沉,离子交换层析,冷冻干燥;
此专利申请在水提的基础上采用了离子交换层析的分离纯化,但所含杂质仍然比较多,麦冬多糖的分子量分布未确定。
上述授权或公开的专利所采用的麦冬多糖提取工艺,麦冬多糖含量均未达到《中药、天然药物注射剂基本技术要求》(国食药监注[2007]743号)关于“有效陈份制成的注射剂,主成分含量应不少于90%。多成份制成的注射剂,所测成分应大于总固体量的80%”的质量标准。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,提供了一种过程简单、操作方便的麦冬多糖提取、分离纯化方法,所制得的麦冬多糖纯度高、溶解性好、分子量分布均一,可用于制备麦冬多糖注射剂。为临床提供一种新的药用物质。
本发明的麦冬多糖提取工艺,采用膜分离工艺,用5kDa膜包,去除高分子、难溶性多糖及杂质,,得到高纯度均一麦冬多糖。
本发明所述的麦冬多糖的分离、纯化方法,包括以下步骤:
(1)醇提:使用75%~95%的乙醇,加热回流提取2~4次,每次提取2~4小时,乙醇与麦冬的重量比为1:4~8,滤过,将麦冬晾干;
(2)水提:向上述晾干的麦冬中加入其6~10倍重量的纯化水,加热,回流提取2~5次,每次2~4小时,得水提液;
(3)醇沉:将上述过柱流出液减压浓缩至相对密度1.02~1.1的液体,加入乙醇使含醇量达85%以上,室温放置10~24小时,离心,取沉淀,沉淀用无水乙醇或丙酮洗涤,减压干燥,得粗多糖提取物;
(4)膜分离:将上述粗多糖用注射用水20~50倍溶解,加入活性炭0.1%~3%,加热煮沸,保持微沸30分钟,离心,滤过,滤过液用5kDa膜包超滤,收集透过液,浓缩,加乙醇沉淀,沉淀用乙醇洗涤,减压干燥,得麦冬多糖;
本发明所具有的技术优势为:
1.麦冬多糖分离、纯化技术可靠,操作步骤简单,条件易于控制,适用于大规模生产。
2.本发明所得麦冬多糖分子量分布范围固定,重均分子量小于5000道尔顿,重复性好。
3.所制得的麦冬多糖纯度高、安全性好,为首次发明制备分子量小于5000的均一麦冬多糖。
具体实施方式
实施例1:
(1)醇提:使用85%的乙醇,加热回流提取2次,每次提取2小时,乙醇与麦冬的重量比为1:6,滤过,将麦冬晾干;
(2)水提:向上述晾干的麦冬中加入其8倍重量的纯化水,加热,回流提取4次,每次
3小时,得水提液;
(3)醇沉:将上述水提液减压浓缩至相对密度1.02~1.1的液体,加入乙醇使含醇量达85%以上,室温放置12小时,离心,取沉淀,沉淀用无水乙醇洗涤,减压干燥,得粗多糖提取物;
(4)膜分离:将上述粗多糖用注射用水30倍溶解,加入活性炭1%,加热煮沸,保持微沸30分钟,离心,滤过,滤液用5kDa膜包超滤,将截留液加乙醇沉淀,沉淀用乙醇洗涤,减压干燥,得麦冬多糖;
上述麦冬多糖,苯酚硫酸法测定,麦冬多糖纯度95.2%,分子量分布小于5000道尔顿。
实施例2:
(1)醇提:使用75%的乙醇,加热回流提取3次,每次提取3小时,乙醇与麦冬的重量比为1:4,滤过,将麦冬晾干;
(2)水提:向上述晾干的麦冬中加入其6倍重量的纯化水,加热,回流提取2次,每次
2小时,得水提液;
(3)醇沉:将上述水提液减压浓缩至相对密度1.02~1.1的液体,加入乙醇使含醇量达85%以上,室温放置10小时,离心,取沉淀,沉淀用无水丙酮洗涤,减压干燥,得粗多糖提取物;
(4)膜分离:将上述粗多糖用注射用水20倍溶解,加入活性炭0.1%,加热煮沸,保持微沸30分钟,离心,滤过,滤液用5kDa膜包超滤,收集透过液,浓缩,加乙醇沉淀,沉淀用乙醇洗涤,减压干燥,得麦冬多糖;
上述麦冬多糖,经测定,苯酚硫酸法测定,麦冬多糖纯度96.2%,分子量分布小于5000道尔顿,淀粉、蛋白含量检测为阴性。
实施例3:
(1)醇提:使用95%的乙醇,加热回流提取4次,每次提取4小时,乙醇与麦冬的重量比为1: 8,滤过,将麦冬晾干;
(2)水提:向上述晾干的麦冬中加入其10倍重量的纯化水,加热,回流提取5次,每次
4小时,得水提液;
(3)醇沉:将上述水提液减压浓缩至相对密度1.02~1.1的液体,加入乙醇使含醇量达85%以上,室温放置24小时,离心,取沉淀,沉淀用无水乙醇或丙酮洗涤,减压干燥,得粗多糖提取物;
(4)膜分离:将上述粗多糖用注射用水50倍溶解,加入活性炭3%,加热煮沸,保持微沸30分钟,离心,滤过,滤液用5kDa膜包超滤,收集透过液,浓缩,加乙醇沉淀,沉淀用乙醇洗涤,减压干燥,得麦冬多糖;
上述麦冬多糖,经测定,苯酚硫酸法测定麦冬多糖纯度96.8%,分子量分布小于5000道尔顿,淀粉、蛋白含量检测为阴性。
实施例4:苯酚硫酸法测定麦冬多糖中总糖的含量
实验方法:精密称取标准单糖或单糖混合物100mg,配制成浓度为0.1mg/ml的溶液,分别取0.2ml,0.4ml,0.6ml,0.8ml,1.0ml,依次补加蒸馏水至1ml。以蒸馏水为对照,分别向其中加入6%的苯酚0.5ml,浓硫酸2.5ml,充分振荡摇匀后,冷却至室温,490nm处测定吸光度值,以浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,做标准曲线,得标准曲线方程式。准确称取适量麦冬多糖样品配成浓度为0.1mg/ml的溶液,按同法处理后,根据多糖样品的吸光度值,代入标准曲线方程计算出麦冬多糖样品的总糖含量。
实验结果:以标准葡萄糖为对照品
样品 | 麦冬多糖含量(重量百分比%) |
实施例1所的样品 | 95.2 |
实施例2所的样品 | 96.2 |
实施例3所的样品 | 96.8 |
实施例6:分子量分布范围检测
试验方法:采用高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤH 方法二)测定。
仪器与试药 岛津LC-10AVP高效液相色谱仪(手动进样);检测器:示差折光检测器SHODEX RI-201H,检测器温度35 ℃; GPC专用软件:大连依利特EC2000。供分子量测定用右旋糖酐分子量标准对照品(中国药品生物制品检定所购买, D3、D4、D5、D6、D7、D8、D2000,分子量依次为7100、10000、21400、41100、84110、133800、2000000,批号分别为140640-2000-01、140641-2000-01、140642-2000-01、140643-2000-01、140644-2000-01、140645-2000-01、140646-2000-01);水为娃哈哈纯净水
色谱条件
色谱柱 为测多糖专用色谱柱,Shodex KS-805;流动相:水;柱温:45 ℃;流速:
1.0ml/min, 检测器温度:35℃。
方法试验
供试品溶液的制备 取提取的多糖原料适量,加水制成每1 ml中约含2 mg的溶液,振摇,室温放置过夜,作为供试品溶液。
对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的葡聚糖对照品D3~D8和D2000,各10mg,分置2ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。(每1ml中含各葡聚糖对照品5mg。)
标准曲线的制备及样品测定
取上述右旋糖酐系列对照品溶液分别进样20ul,记录洗脱峰的保留时间,由GPC专用软件绘制标准曲线,以标准分子量的对数值为纵坐标,以相应色谱峰的保留时间为横坐标进行线性回归,得回归方程。该方法的标准校正曲线线性良好,相关系数达0.9994。(标准曲线同前面麦冬药材)
分子量测定法
精密移取供试品溶液20ul,注入高效液相色谱仪,可获得供试品溶液的归一化色谱图,记录洗脱峰的保留时间,根据GPC专用软件绘制的标准曲线及供试品的保留时间,采用GPC专用软件计算样品各组分的重均分子量、数均分子量及其分子量分布,结果三批样品分子量分布范围均小于5000道尔顿。
实施例7:麦冬多糖对肝癌小鼠肿瘤生长及免疫器官的影响
试验材料
1、供试品
麦冬多糖注射液,规格:4ml:12mg,由实施例1、2、3制备的麦冬多糖配制。
2、对照品和试剂
市售人参多糖注射液,规格:2ml:6mg,批号:20090502,由山西普德药业有限公司生产。
注射用环磷酰胺,规格:0.2g,批号:10051521,由江苏恒瑞医药股份有限公司生产。
0.9℅氯化钠注射液,规格:250ml,批号:1003154204,由山东鲁抗辰欣有限公司提供。
3、实验动物和饲养条件
昆明种小鼠115只,SPF级,雌性,用于试验时17-23kg,试验前适应性饲养2d。
动物饲养于SPF级环境,室温19~26℃,湿度40%-70%,日温差≦4℃,换气次数8-10次/h,昼夜明暗交替时间12h/12h,实验动物使用许可证号:SYXK(鲁)20050055。动物用金属兔笼单笼饲养,自由饮水,每日上下午各给予一次颗粒鼠饲料。饲养笼具两周更换一次,料盒和水瓶每周更换一次,更换的笼具、料盒、水瓶需进行消毒处理。鼠饲料:由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,许可证号:沪饲审(2008)04002。
4、主要仪器设备
FA1004N型电子天平,由上海精密科学仪器有限公司生产;
JY2001型电子分析天平,由上海精密科学仪器有限公司提供
HEMAVET-950型全自动血球计数仪,由Drew Scientific公司提供
试验方法:
1、给药剂量及给药频率
麦冬多糖注射液,人参多糖注射剂市售iv,人参多糖注射剂市售im均设高、中、低三个剂量,分别为24、12、6mg/kg。
环磷酰胺阳性对照组剂量为20mg/kg。
模型组给予生理盐水。
本试验小鼠给药时间为9天,每天一次。
2、动物分组
昆明种小鼠115只,按体重随机分为11组:麦冬多糖、人参多糖市售iv、人参多糖市售im均分为高、中、低剂量组,环磷酰胺阳性组,模型对照组。
3、药物配制
麦冬多糖高、中、低剂量:分别取2、1、0.5ml麦冬多糖注射液,加生理盐水各稀释至5ml,浓度分别为1.2、0.6、0.3 mg/ml。
人参多糖市售(iv)高、中、低剂量:分别取2、1、0.5ml市售人参多糖注射液,加生理盐水各稀释至5ml,浓度分别为1.2、0.6、0.3 mg/ml。
人参多糖市售(im)低剂量:取0.6ml市售人参多糖注射液,加生理盐水稀释至1.2ml,浓度为1.5mg/ml。
环磷酰胺阳性对照组:取一支注射用环磷酰胺,加生理盐水稀释至200ml,浓度为1mg/ml。
4、试验过程
取瘤源肝癌小鼠3只,腹部消毒,用无菌消毒注射器抽取肝癌腹水,用生理盐水按1:2.5稀释后备用。
昆明种小鼠115只,逐一腋下碘酒、酒精消毒,腋下皮下接种上述制备的肝癌瘤液0.2ml/只。
接种24h后,小鼠称重,按体重随机分为11组:麦冬多糖注射液、人参多糖市售iv、人参多糖市售im高、中、低剂量组,环磷酰胺阳性组,模型对照组,每组10~11只。
麦冬多糖注射液,人参多糖市售iv高、中、低剂量组,环磷酰胺阳性对照组,模型对照组尾静脉注射相应药物,给药体积均为0.2ml/10g,人参多糖市售im高、中剂量组肌注给予人参多糖注射原液,给药体积分别为0.08、0.04ml/10g,人参多糖市售im低剂量组肌注给予相应药物,给药体积为0.04ml/10g。每日给药1次,连续给药9d。
第9天给药后,禁食不禁水12h,称重,摘眼球取血,解剖,称取瘤重及胸腺、肝、脾重量,计算抑瘤率及对免疫器官重量的影响。
观察对小鼠体重、免疫学指标及肝肾功能的影响,包括:红细胞数目(WBC),红细胞数目(RBC),血小板数目(PLT),中性粒细胞数目(NE),淋巴细胞数目(LY),单核细胞数目(MO),胸腺、脾脏、肝脏相对重量,谷丙转氨酶(ALT),尿素氮(BUN)。
5、统计学处理
各个指标以均数±标准差表示,用spss13.0进行给药组与模型对照组的统计学分析。
试验结果
小鼠皮下接种肝癌细胞,接种后麦冬多糖注射液、人参多糖市售iv连续9天尾静脉注射给予荷瘤小鼠,人参多糖市售im连续9天肌肉注射给予荷瘤小鼠。
麦冬多糖注射液与模型对照组比较,24、6mg/kg能减轻肝癌小鼠瘤重,具有明显的抑瘤作用。与环磷酰胺组比较,各组脾脏系数均增大,白细胞均有明显升高,12、6 mg/kg可增大胸腺系数,24mg/kg可明显升高红细胞。
人参多糖市售与模型对照组比较,iv (24、12、6mg/kg)及 im (24mg/kg)能减轻肝癌小鼠瘤重,具有明显的抑瘤作用。与环磷酰胺组比较,各组胸腺系数均增大,白细胞均有明显升高,iv(6mg/kg)可使脾脏系数增加,iv、im( 24、6mg/kg)可明显升高红细胞。
与人参多糖市售im (24mg/kg)抑瘤率比较,麦冬多糖注射液高(24、6mg/kg)、人参多糖市售iv(24、6mg/kg)抑瘤率明显升高,抑瘤效果明显优于人参多糖市售im(24mg/kg)。
试验结论
麦冬多糖注射液与模型对照组比较,24、6mg/kg能减轻肝癌小鼠瘤重,具有明显的抑瘤作用。与环磷酰胺组比较,各组脾脏系数均增大,白细胞均有明显升高,12、6 mg/kg可增大胸腺系数,24mg/kg可明显升高红细胞。
人参多糖市售与模型对照组比较,iv (24、12、6mg/kg)及 im (24mg/kg)能减轻肝癌小鼠瘤重,具有明显的抑瘤作用。与环磷酰胺组比较,各组胸腺系数均增大,白细胞均有明显升高,iv(6mg/kg)可使脾脏系数增加,iv、im( 24、6mg/kg)可明显升高红细胞。
与人参多糖市售im (24mg/kg)抑瘤率比较,麦冬多糖注射液抑瘤率明显升高,抑瘤效果明显优于人参多糖市售im(24mg/kg)。
麦冬多糖提取物对肝癌荷瘤小鼠瘤重的影响
SPSS 13.0 for WindowsX2检验
与模型组比较,* 表示P ≤0.05,** 表示P ≤0.01;与麦冬多糖市售im(24mg/kg) 比较,Δ表示P ≤0.05,ΔΔ表示P ≤0.01
麦冬多糖提取物对肝癌荷瘤小鼠免疫器官指数的影响
SPSS 13.0 for Windows oneway-LSD检验
与模型组比较,* 表示P ≤0.05,** 表示P ≤0.01;与环磷酰胺组比较,Δ表示P ≤0.05,ΔΔ表示P ≤0.01
麦冬多糖提取物对肝癌荷瘤小鼠血象的影响
SPSS 13.0 for Windows oneway-LSD检验
与模型组比较,* 表示P ≤0.05,** 表示P ≤0.01;与环磷酰胺组比较,Δ表示P ≤0.05,ΔΔ表示P ≤0.01
实施例8 麦冬多糖对环磷酰胺致免疫低下幼鼠的影响
试验材料
1、供试品
麦冬多糖注射液,规格:4ml:12mg,由实施例1、2、3制备的麦冬多糖配制。
2、对照品及试剂
注射用胸腺五肽:规格:每支1mg,生产批号:20090903,有效期至:2011年09月28日,生产日期:2009年09月29日,哈药集团生物工程有限公司生产。
人参多糖注射液:规格:2ml:6mg/支,生产批号:20090502,有效期至:2011年04月,生产日期:2009年05月25日,山西普德药业有限公司生产。
注射用环磷酰胺(CY):规格:0.2mg/支,生产批号:10032821,有效期至:2012年03月27日,生产日期:2010年03月28日,江苏恒瑞医药股份有限公司生产。
3、实验动物和饲养条件
SPF级正常幼鼠,130只,均为雄性,购进体重7-10g,用于试验时8-12g。试验前适应性饲养1d。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,动物合格证号:0188173。
动物饲养于SPF级环境,室温19~26℃,湿度40%~70%,日温差≦4℃,换气次数8~10次/h,昼夜明暗交替时间12h/12h,试验动物使用许可证:SYXK(鲁)20050055。
4、 仪器
JY2001型电子天平,由上海精密科学仪器有限公司生产。
FA1004N型电子天平,由上海精密科学仪器有限公司提供。
HEMAVET-950型全自动血球计数仪,由Drew Scientific公司提供。
试验方法
1、给药剂量、给药频率及设计依据
本试验设置12个试验组:麦冬多糖注射液,麦冬多糖注射液市售iv及im途径各设低、中、高三个组,胸腺五肽组、模型组、正常组。
麦冬多糖注射液,人参多糖市售iv、人参多糖市售im3个剂量组剂量均为6、12、24mg/kg/d。
胸腺五肽组剂量为0.3 mg/kg/d。
模型组、正常组给予等体积的生理盐水,给药体积均为0.2ml/10g。
2、药物配制
麦冬多糖注射液高、中、低剂量:分别取2、1、0.5ml麦冬多糖注射液 (﹥300kd),加生理盐水稀释至5ml,浓度分别为1.2、0.6、0.3mg/ml。
人参多糖注射液市售(iv,im)高、中、低剂量:分别取2、1、0.5ml市售人参多糖注射液,加生理盐水稀释至5 ml,浓度分别为1.2、0.6、0.3mg/ml。
胸腺五肽组:取一支注射用胸腺五肽,加生理盐水稀释至66.7ml,浓度为0.015mg/ml。
造模用药环磷酰胺:取一支注射用环磷酰胺,加生理盐水稀释至50ml,浓度为0.004mg/ml。
3、给药方式
供试品为静脉注射用药,麦冬多糖注射液,人参多糖注射液市售iv组各设低、中、高剂量,胸腺五肽市售共7组均采用小鼠尾静脉注射(iv)给药;人参多糖注射液市售im组低、中、高剂量采用肌肉注射(im)方式给药;造模用药环磷酰胺采用腹腔注射方式(ip)给药;正常组腹腔连续给予生理盐水4d、尾静脉连续给予生理盐水8d。
4、试验过程
SPF级小鼠130只,体重8~12 g,均为雄性,根据体重随机分为12组,即麦冬多糖注射液、人参多糖注射液市售iv、im组各设高、中、低剂量组,胸腺五肽组,模型对照组和正常对照组,每组10~11只。每日给药1次,连续给药8d。给药同时,自给药第3天,除正常组给予生理盐水外,各给药组ip 80mg/kg环磷酰胺造模,连续4d,每日1次。第7天给药后,禁食不禁水12h,末次给药0.5h后摘眼球取血。给药体积为0.2ml/10g。
观察对小鼠体重、免疫学指标及肝的影响,包括:红细胞数目(WBC),红细胞数目(RBC),血小板数目(PLT),中性粒细胞数目(NE),淋巴细胞数目(LY),单核细胞数目(MO),胸腺、脾脏、肝脏相对重量。
5、统计方法
试验结果
1、麦冬多糖注射液对环磷酰胺致免疫低下幼鼠体重的影响
注射环磷酰胺造模4d,可使小鼠体重明显降低。所有10个给药组连续给药8d,均能改善动物体重降低的症状,体重变化率与模型组比较,具有明显差异。结果见表1。
2、对环磷酰胺致免疫低下幼鼠脏器系数的影响
注射环磷酰胺造模4d,可使小鼠胸腺、脾脏的脏器系数明显降低,肝脏系数明显升高。经麦冬多糖注射液12、24mg/kg,胸腺五肽0.3mg/kg,人参多糖注射液市售im途径12、24mg/kg,人参多糖注射液市售im12mg/kg连续给药8d,均能显著升高胸腺系数。
注射环磷酰胺造模4d,可使肝脏系数明显升高。低分子24 mg/kg、高分子6 mg/kg、高分子24 mg/kg、市售iv24mg/kg可明显增加肝脏系数的升高。
结果见表2。
3、麦冬多糖注射液对环磷酰胺致免疫低下幼鼠血液指标的影响
注射环磷酰胺造模4d,小鼠白细胞数目、红细胞数目、血小板数目、中性粒细胞数目、淋巴细胞数目、单核细胞数目均明显降低。经连续给药8d,低分子6 mg/kg、人参多糖注射液市售im 各剂量组以及胸腺五肽组均使血小板数目明显升高。麦冬多糖注射液12mg/kg、人参多糖注射液市售im12、24mg/kg可使淋巴细胞数目明显升高,人参多糖注射液市售im12mg/kg还可使中性粒细胞、单核细胞明显增加。市售im12、24mg/kg可使白细胞数目明显升高。具体结果见表3、4。
表1麦冬多糖注射液对环磷酰胺致免疫低下幼鼠体重的影响
SPSS 13.0 for Windows oneway-LSD检验
与模型组比较,* 表示P ≤0.05,** 表示P ≤0.01
表2、麦冬多糖注射液对环磷酰胺致免疫低下幼鼠脏器系数的影响
SPSS 13.0 for Windows oneway-LSD检验
与模型组比较,* 表示P ≤0.05,** 表示P ≤0.01
表3、麦冬多糖注射液对环磷酰胺致免疫低下幼鼠血液指标的影响
SPSS 13.0 for Windows oneway-LSD检验
与模型组比较,* 表示P ≤0.05,** 表示P ≤0.01
表4、麦冬多糖注射液对环磷酰胺致免疫低下幼鼠血液指标的影响
SPSS 13.0 for Windows oneway-LSD检验
与模型组比较,* 表示P ≤0.05,** 表示P ≤0.01
试验结论
麦冬多糖注射液连续给药8d(6、12、24mg/kg)均可使免疫低下小鼠体重升高、脾脏系数增大。麦冬多糖注射液12mg/kg淋巴细胞数目明显升高,12、24mg/kg组胸腺系数明显增加。
人参多糖注射液市售:体重明显增长,im12、24mg/kg,iv12mg/kg胸腺系数明显增大,im24mg/kg、iv12、24mg/kg脾脏系数明显增大,iv24mg/kg肝脏系数明显增加。im6、12、24mg/kg血小板明显增加,im12、24 mg/kg白细胞数目明显增加,im12mg/kg中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞数目明显增加,im24mg/kg淋巴细胞明显增加。
Claims (5)
1.一种麦冬多糖,特征在于:该麦冬多糖重均分子量小于5000道尔顿。
2.根据权利要求1所述,其特征在于:该麦冬多糖总多糖含量>90%。
3.根据权利要求1所述,其特征在于:该麦冬多糖制备关键步骤在于采用膜分离方法,去除大分子物质。
4.根据权利要求1所述,该麦冬多糖采用以下方式制备:(1)醇提:使用75%~95%的乙醇,加热回流提取2~4次,每次提取2~4小时,乙醇与麦冬的重量比为1:4~8,滤过,将麦冬晾干;(2)水提:向上述晾干的麦冬中加入其6~10倍重量的纯化水,加热,回流提取2~5次,每次2~4小时,得水提液;(3)醇沉:将上述水提液减压浓缩至相对密度1.02~1.1的液体,加入乙醇使含醇量达85%以上,室温放置10~24小时,离心,取沉淀,沉淀用无水乙醇或丙酮洗涤,减压干燥,得粗多糖提取物;(4)膜分离:将上述粗多糖用纯化水20~50倍溶解,加入活性炭0.1%~3%,加热煮沸,保持微沸30分钟,离心,滤过,滤液用5kDa膜包超滤,收集滤过液,浓缩,加乙醇沉淀,沉淀用乙醇洗涤,减压干燥,得麦冬多糖。
5.根据权利要求1所述,由该麦冬多糖制备注射液具有增强免疫能力及抑瘤作用。
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