CN104491835A - 含有稠李多糖的辅助降血糖保健品 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含有稠李多糖的辅助降血糖保健品。按重量百分比组成为：稠李多糖40％-60％，稠李花色苷10％-30％，高粱米多肽5％-10％，板栗多肽5％-10％，枸杞提取物5％-10％、葛根提取物5％-10％、当归提取物5％-10％、山药提取物5％-10％。本发明具开创性的技术是将稠李多糖的组合物作为降血糖的核心功能性原料，根据现代营养学模型合理搭配、科学组合应用，形成具有显著降血糖功效的多糖、花色苷、多肽类的保健品。

Description

含有稠李多糖的辅助降血糖保健品

技术领域

本发明属于保健品领域，具体的涉及一种具有辅助降血糖功能的含有稠李多糖的保健品。

背景技术

糖尿病是一组以血糖升高及多种代谢紊乱为特征的症状群，是代谢性疾病。在中国传统医学中称为“消渴病”，早在公元2000多年前的《黄帝内经》中已有描述。在临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多饮、多食、多尿、消瘦等表现，即“三多一少”症状。目前，我国糖尿病患病人数居世界第二位，在糖尿病患病人群中，2型糖尿病占90％以上，1型糖尿病约5％，妊娠糖尿病接近5％，其他类型仅0.7％，世界卫生组织(WHO)预测到2025年全球糖尿病人数将突破3.00亿。并且，如果不采取有效的措施进行治疗，糖尿病还会带来一系列的并发症，如：足病(足部坏疽、截肢)、眼病(模糊不清、失明)、肾病(肾功能衰竭、尿毒症)、脑病(脑血管病变)、心脏病等。

目前，市场上降血糖的药物有很多，如磺脲类的甲磺丁脲(D860)、优降糖、甲磺吡脲(达美康)、克糖利、糖适平，双胍类的降糖灵、降糖片，α-葡萄糖苷酶抑制剂类的拜糖平等，但是，这些药物都有一定的副作用；因此，从天然产物中提取无副作用的降血糖活性成分是目前功能食品研发的重要方面。

发明内容

本发明的目的是以东北地区观赏性植物稠李出发，制备稠李多糖、稠李花色苷，与高粱米多肽、板栗多肽、枸杞、葛根、当归和山药混合，提供一种降血糖的保健品。

以稠李花色苷、稠李多糖、高粱米多肽、板栗多肽、枸杞提取物、葛根提取物、当归提取物、山药提取物混合使用作为辅助降血糖天然保健品，按重量百分比各组成如下：稠李多糖40％-60％、稠李花色苷10％-30％、高粱米多肽5％-10％、板栗多肽5％-10％、枸杞提取物5％-10％、葛根提取物5％-10％、当归提取物5％-10％、山药提取物5％-10％。

本发明涉及的稠李花色苷是由稠李提取的，采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李花色苷。稠李多糖也是由稠李提取的，采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖。高粱米多肽、板栗多肽是酶解高粱米蛋白、板栗蛋白制备的。

采用复合酶酶解-微波-超声波分步法的工艺组合提取稠李花色苷并用AB-8大孔树脂进行静态纯化的步骤如下：

1)复合酶酶解提取：将稠李果实去柄，破碎，去核，放入零下80℃冰箱冷冻过夜，在冷冻干燥机中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。料液比按质量比1:10-1:50，将稠李冻干粉溶于水，复合酶加入量为稠李冻干粉的总重量的1.0％-5.0％，进行热水浸提，控制温度为30-70℃，pH范围值3.0-6.0酶解时间为30min-60min，离心，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行微波提取；所用的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.5～2的混合；

2)微波辅助提取：料液比按质量比1:10-1:15，将酶解后的沉淀物溶于水，微波功率300W-500W，微波时间为20min-60min，离心，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行超声浸提；

3)超声浸提：料液比按质量比1:10-1:15，将微波后的沉淀物溶于乙醇中，超声波功率为100W-500W，超声时间为10min-50min，pH值为2-6，抽滤，提取液备用；

4)合并复合酶酶解的提取液、微波辅助的提取液和超声浸提的提取液，提取液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉；

5)大孔树脂静态纯化：粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液，静态吸附条件是：温度20℃，树脂的添加量为0.16g/ml；解析条件是：解吸剂70％乙醇，pH值为3，温度为60℃，得稠李花色苷干粉。

采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖并通过Sephadex G-200层析纯化的步骤如下：

1)超声浸提：将稠李果实去柄，破碎，去核，放入零下80℃冰箱冷冻过夜，在冷冻干燥机中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。将稠李冻干粉溶于水中，料液比按质量比1:10-1:50，控制温度为50-90℃，pH值5.0-9.0，超声波功率为100W-500W，超声时间为10min-50min，离心，收集提取液继续进行微波提取；

2)微波辅助提取：取提取液，微波功率300W-500W，微波时间为20min-60min，离心，收集提取液继续进行复合酶酶解；

3)复合酶酶解提取：取提取液，加入提取液重量1.0％-5.0％的复合酶，控制温度为30-60℃，pH 3.0-6.0，酶解时间为30min-60min，离心，抽滤，取滤液，滤液旋转蒸发浓缩，加入4倍体积的95％乙醇沉淀多糖，3000r/min离心后去除上清液，沉淀冷冻干燥，得稠李粗多糖。所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.5～2的混合；

4)将冷冻干燥的稠李粗多糖加入适量蒸馏水重新溶解，Sephadex G-200层析进行分离纯化，用蒸馏水洗脱，流速为1ml/min，每2ml收集一试管，用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖，收集含量最多的多糖组分在蒸馏水中透析24h，冷冻干燥，进行后续实验。用DEAE-32进一步纯化，磷酸盐缓冲液-水作为流动相，梯度模式进行洗脱，流速为0.8ml/min，每2ml收集一试管，用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖，收集含量最多的多糖组分。

本发明具开创性的技术是将稠李多糖的组合物作为降血糖的核心功能性原料，根据现代营养学模型合理搭配、科学组合应用，形成具有显著降血糖功效的多糖、花色苷、多肽类的复合保健品。

具体实施方式

为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。

实施例1 含有稠李多糖的辅助降血糖保健品

(一)稠李花色苷的制备

本实施例采用超声波-微波-混合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李花色苷并用AB-8大孔树脂进行静态纯化，步骤如下：

1)复合酶酶解提取：将稠李果实去柄，破碎，去核，放入零下80℃冰箱冷冻过夜，在冷冻干燥机中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。将稠李冻干粉溶于水，料液比按质量比1:30，所用的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:1的混合，复合酶加入量为稠李冻干粉的总重量的3.0％，进行热水浸提，控制温度为50℃，pH范围值5.0酶解时间为50min，6000r/min进行离心10min，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行微波提取；

2)微波辅助提取：料液比按质量比1:10，将酶解后的沉淀物溶于水中，微波功率400W，微波时间为40min，6000r/min进行离心10min，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行超声浸提；

3)超声浸提：料液比按质量比1:10，将微波后的沉淀物溶于60％乙醇中，超声波功率为400W，超声时间为30min，pH值为4，抽滤，提取液备用；

4)合并复合酶酶解的提取液、微波辅助的提取液和超声浸提的提取液，提取液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉；

5)大孔树脂静态纯化：粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液，静态吸附条件是：温度20℃，树脂的添加量为0.16g/ml；解析条件是：解吸剂70％乙醇，pH值为3，温度为60℃，得稠李花色苷干粉。

(二)稠李多糖的制备

采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖并通过Sephadex G-200层析纯化的步骤如下：

1)超声浸提：将稠李果实去柄，破碎，去核，放入零下80℃冰箱冷冻过夜，在冷冻干燥机中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。将稠李冻干粉溶于水中，料液比按质量比1:30，控制温度为60℃，pH值7.0，超声波功率为400W，超声时间为40min，3000r/min进行离心15min，收集提取液继续进行微波提取；

2)微波辅助提取：取超声后的提取液，微波功率400W，微波时间为40min，3000r/min进行离心15min，收集提取液继续进行复合酶酶解；

3)复合酶酶解提取：取微波后的提取液，加入其总重量4.0％的复合酶，控制温度为50℃，pH 4.0，酶解时间为40min，3000r/min进行离心15min，抽滤，滤液旋转蒸发浓缩，加入4倍体积的95％乙醇沉淀多糖，3000r/min离心后去除上清液，冷冻干燥，得稠李粗多糖。所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:1的混合；

4)将冷冻干燥的稠李粗多糖加入适量蒸馏水重新溶解，Sephadex G-200层析进行分离纯化，用蒸馏水洗脱，流速为1ml/min，每2ml收集一试管，用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖，收集含量最多的多糖组分在蒸馏水中透析24h，冷冻干燥，进行后续实验。用DEAE-32进一步纯化，磷酸盐缓冲液-水作为流动相，梯度模式进行洗脱，流速为0.8ml/min，每2ml收集一试管，用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖，收集含量最多的多糖组分。

(三)高粱米多肽的制备

采用木瓜蛋白酶提取高粱米多肽，具体操作步骤如下：

1)将高粱米粉碎，按料液比为1:15，在pH为10的氢氧化钠溶液中浸泡3h，提取温度为50℃，5000r/min离心20min，取上清液，用90％硫酸铵进行沉淀，再次离心，分离得到沉淀，进行冷冻干燥得到高粱米蛋白；

2)将高粱米蛋白配成8％的水溶液，pH调节为6.5，酶活添加量为6000u/g料，温度为60℃，提取时间为3h，然后沸水浴10min灭酶，3500r/min离心15min，取上清，纯净水透析、采用截留分子量为l0kDa超滤板超滤后进行冷冻干燥，得到高粱米多肽粉末。

(四)制备板栗多肽

采用复合酶提取板栗多肽，具体操作步骤如下：

1)板栗去皮干燥后，用粉碎机粉碎，按料液比为1:10，加入pH 11的NaOH，提取温度为50℃，时间为3h，离心收集沉淀，冷冻干燥制备板栗蛋白。

2)复合酶分步水解：首先，复合风味蛋白酶进行水解，然后再以碱性蛋白酶进行水解制备板栗多肽，复合风味蛋白酶酶解条件为：pH6，酶活添加量为6000u/g料，时间1h，温度55℃，碱性蛋白酶酶解条件为：pH 8，酶活添加量为6000u/g料，时间3h，温度50℃；将水解液加热到100℃，保持10min杀灭酶的活力；采用截留分子量为l0kDa超滤板超滤得到的酶解液，收集分子量为10kDa以下的酶解液；将酶解液用低温冷冻干燥机制得板栗多肽粉末。

(五)枸杞提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的枸杞固体粉末；按质量比1:10比例称取枸杞固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得枸杞提取物。

(六)葛根提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的葛根固体粉末；按质量比1:10比例称取葛根固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得葛根提取物。

(七)当归提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的当归固体粉末；按质量比1:10比例称取当归固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得当归提取物。

(八)山药提取物的制备

在室温条件下，称量粉碎成200目的山药固体粉末；按质量比1:10比例称取山药固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得山药提取物。

(九)含有稠李多糖的辅助降血糖保健品组合物

按重量百分比组成如下：

稠李多糖40％、稠李花色苷20％、高粱米多肽10％、板栗多肽10％、

枸杞提取物5％、葛根提取物5％、当归提取物5％、山药提取物5％。

(十)含有稠李多糖的辅助降血糖保健品组合物在体外促进大鼠胰岛样细胞生长分化作用

选用大鼠胰岛样(INS-1)细胞系，采用MTT法测定了稠李多糖组合物体外促进细胞增殖的活性，测定浓度为0-100μg/ml，处理时间为72小时。稠李多糖组合物对于胰岛样具有明显的促进生长、分化作用。T-test进行统计学分析，p<0.05具有显著性差异，结果见表1。

表1 稠李多糖对大鼠胰岛样细胞的生长促进作用(％)(M±SE)

由表1可见：稠李多糖组合物对大鼠胰岛样细胞的增值具有明显的促进作用，与空白组比较**p＜0.01。

(十一)动物功能试验

依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》规定进行动物功能试验。

购买4周龄的雄性昆明小鼠80只，在动物饲养房中正常喂养1周适应环境后，测小鼠体重、血糖量。将其中10只小鼠作为空白对照组，正常喂养，始终给予普通饲料，将其余的70只小鼠按照70mg/kg的剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)，72小时后测定血糖值，以血糖值为10-25mmol/l的小鼠为成模动物，成模动物始终给予高糖饲料。选取其中的50只成模小鼠，根据血糖值将其分为5组，并使每组平均血糖值接近，每组10只，在加上作为空白对照组的小鼠，总共6组，6组分别为：空白对照组，模型组：给糖尿病小鼠灌胃生理盐水0.3ml/d；阳性对照组(二甲双胍组150mg/kg/d)：稠李多糖组合物实验组给糖尿病小鼠灌胃本实施例的组合物，低剂量组：给糖尿病小鼠灌胃本实施例的组合物25mg/kg/d；中剂量组：给糖尿病小鼠灌胃本实施例的组合物50mg/kg/d；高剂量组：给糖尿病小鼠灌胃本实施例的组合物100mg/kg/d。每天灌胃给药1次，连续14天，禁食后测血糖值，结果见表2。

表2 稠李多糖组合物对链脲佐菌素(STZ)引起小鼠糖尿病模型的影响

与空白对照组比较,^▲p＜0.05；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01

由表2显示，糖尿病小鼠在建模成功之后，模型组在食用高糖饲料之后血糖升高，阳性对照组在给予阳性药二甲双胍之后血糖值下降，而饲喂稠李多糖、稠李花色苷、高粱米多肽、板栗多肽、枸杞提取物、葛根提取物、当归提取物、山药提取物的组合物糖尿病小鼠血糖值下降，说明组合物对链脲佐菌素(STZ)引起的血糖升高具有明显的降低作用，且存在一定的剂量效应关系。

实施例2 含有稠李多糖的辅助降血糖保健品

含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，由以下原料按重量百分比组成：

稠李多糖 30％，稠李花色苷 20％，高粱米多肽 5％，板栗多肽 5％，

枸杞提取物 10％，葛根提取物 10％，当归提取物 10％，山药提取物 10％。

实施例3 含有稠李多糖的辅助降血糖保健品

含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，由以下原料按重量百分比组成：

稠李多糖 50％，稠李花色苷 20％，高粱米多肽 5％，板栗多肽 5％，

枸杞提取物 5％，葛根提取物 5％，当归提取物 5％，山药提取物 5％。

Claims (9)

1.含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，其特征在于由以下原料按重量百分比组成：

稠李多糖40％-60％、稠李花色苷10％-30％、高粱米多肽5％-10％、板栗多肽5％-10％、

枸杞提取物5％-10％、葛根提取物5％-10％、当归提取物5％-10％、山药提取物5％-10％。

2.如权利要求1所述的含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，其特征在于：所述的稠李多糖的制备方法如下：

1)超声浸提：料液比按质量比1:10-1:50，将稠李冻干粉溶于水中，控制温度为50-90℃，pH值5.0-9.0，超声波功率为100W-500W，超声时间为10min-50min，离心，取提取液继续进行微波提取；

2)微波辅助提取：取提取液，微波功率300W-500W，微波时间为20min-60min，离心，取提取液继续进行复合酶酶解；

3)复合酶酶解提取：取提取液，复合酶加入量为提取液重量的1.0％-5.0％，控制温度为30-60℃，pH 3.0-6.0，酶解时间为30min-60min；抽滤，滤液旋转蒸发浓缩，加入4倍体积的95％乙醇沉淀多糖，离心，去除上清液，冷冻干燥。

3.按照权利要求2所述的含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，其特征在于：所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.5～2的混合。

4.如权利要求1所述的含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，其特征在于：所述的稠李花色苷的制备方法如下：

1)复合酶酶解提取：料液比按质量比1:10-1:50，将稠李冻干粉溶于水，复合酶加入量为稠李冻干粉的总重量的1.0％-5.0％，进行热水浸提，控制温度为30-70℃，pH范围值3.0-6.0，酶解时间为30min-60min，离心，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行微波提取；

2)微波辅助提取：料液比按质量比1:10-1:15，将沉淀物溶于水，微波功率300W-500W，微波时间为20min-60min，离心，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行超声浸提；

3)超声浸提：料液比按质量比1:10-1:15，将沉淀物溶于乙醇中，超声波功率为100W-500W，超声时间为10min-50min，pH值为2-6，抽滤，提取液备用；

4)合并复合酶酶解的提取液、微波辅助的提取液和超声浸提的提取液，提取液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉；

5)大孔树脂静态纯化：粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液，静态吸附条件是：温度20℃，树脂的添加量为0.16g/ml；解析条件是：解吸剂70％乙醇，pH值为3，温度为60℃，得稠李花色苷干粉。

5.如权利要求4所述的含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，其特征在于：所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.5～2的混合。

6.如权利要求1所述的含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，其特征在于：所述的枸杞提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的枸杞固体粉末；按质量比1:10比例称取枸杞固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得枸杞提取物。

7.如权利要求1所述的含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，其特征在于：所述的葛根提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的葛根固体粉末；按质量比1:10比例称取葛根固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得葛根提取物。

8.如权利要求1所述的含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，其特征在于：所述的当归提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的当归固体粉末；按质量比1:10比例称取当归固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得当归提取物。

9.如权利要求1所述的含有稠李多糖的辅助降血糖保健品，其特征在于：所述的山药提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的山药固体粉末；按质量比1:10比例称取山药固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得山药提取物。