CN1794999A - 神经损伤治疗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明目的是提供由脊髓损伤、神经创伤等引起的神经损伤的治疗剂，其中包含作为活性成分的低分子量糖类，所述低分子量糖类至少有葡萄糖醛酸和/或N－乙酰葡萄糖胺作为组成糖或其可药用盐。优选的，神经损伤治疗剂中包含低分子量透明质酸(进一步优选透明质酸二糖到透明质酸2500糖，进一步优选透明质酸二糖到透明质酸50糖，特别优选透明质酸四糖)或者其可药用盐作为活性成分。

Description

神经损伤治疗剂
技术领域
本发明涉及神经损伤的治疗剂，其中含有作为活性成分的低分子量糖类，所述低分子量糖类的组成中至少有葡萄糖醛酸和/或N-乙酰葡萄糖胺(特别的，低分子量透明质酸)或其可药用盐。
背景技术
JP11-140103A披露包含透明质酸(HA)或其可药用盐的水溶液，用于脊髓灌注，其中描述所述灌注溶液可用于脊髓损伤的脊髓灌注治疗。另外，平均分子量500,000到4,000,000的HA在文件中举例说明。
然而，没有披露或提示有关由至少由葡萄糖醛酸(GlcA)和/或N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)组成的低分子量糖类(特别是低分子量HA)的用途，因此没有披露或提示这种低分子量糖类带来更优秀的作用。
                        发明内容
首先将描述用于本发明的缩写。
GlcNAc：N-乙酰葡萄糖胺
GlcA：葡萄糖醛酸
HA：透明质酸
DMSO：二甲基亚砜
PBS：磷酸盐缓冲液
SCEP：脊髓诱发电位
本发明的目标是提供安全有用的神经损伤治疗剂，其中含有作为活性成分的至少由GlcA和/或GlcNAc(特别是低分子量HA)组成的低分子量糖类或其可药用盐。
本发明的发明人已经做了大量研究以解决上述问题，并发现至少由GlcA和/或GlcNAc(特别是低分子量HA)组成的低分子量糖类对神经损伤特别是脊髓损伤具有极其优秀的作用。因而它们已经提供可以解决上述问题的神经损伤治疗剂并已完成本发明。
也即，本发明提供神经损伤治疗剂(以下称为本发明的治疗剂)，其中含有作为活性成分的至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐。
此处所用的“至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类”优选是低分子量HA。同时，“低分子量HA”优选是HA二糖到HA2,500糖，更优选是HA二糖到HA 50糖，特别优选是HA四糖。
本发明的治疗剂优选是脊髓损伤或神经创伤的治疗剂。
本发明也提供治疗神经损伤的方法，包括将有效量的至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐给予患有神经损伤的动物(特别是包括人在内的哺乳动物)。
本发明也提供至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐用于制造神经损伤治疗剂的用途。
附图说明
图1是药理学测试方法的示意图。
图2是举例说明轻微损伤模型(A)和严重损伤模型(I)(B)的损伤程度的图解(照片)。
图3表示给予HA4的轻微损伤模型中SCEP测量结果。图中的符号“*”代表与给予生理盐水组比较的p＜0.05的显著性差异(Dunnett′s多重比较检验)。
图4表示给予HA4的严重损伤模型(I)中SCEP测量结果。MPSS表示给予甲基强的松龙琥珀酸钠组。图中的符号“*”、“**”、“***”分别代表与给予生理盐水组比较的p＜0.05、p＜0.01、p＜0.0001的显著性差异(Dunnett′s多重比较检验)。
图5表示严重损伤模型(II)中SCEP测量结果。图中的符号“*”代表与给予生理盐水组比较的p＜0.05的显著性差异(Tukey′s多重比较检验)。
图6是举例说明轻微损伤模型的给予PBS组中损伤位点的观察结果的图解(照片)。照片中的箭头“b”表示髓鞘损失。
图7是举例说明轻微损伤模型的给予HA4组中损伤位点的观察结果的图解(照片)。椭圆表示损伤位点。
图8表示损伤区域的测量方法。
图9表示给予HA4的轻微损伤模型中“损伤区域”的测量结果。
图10是从白质到灰质交界部分的观察结果的图解(照片)。照片(A)和(B)分别表示给予生理盐水组和给予HA4组。箭头表示跨白质到灰质的轴突。
图11表示轻微损伤模型中跨白质到灰质的轴突(横切)数目的测量结果。
图12表示严重损伤模型(II)中脊髓损伤7天后后肢中滑倒数目的测量结果。图(A)和(B)分别表示通过平衡木和通过金属的结果。图中的符号“***”代表与给予生理盐水组比较的p＜0.0001的显著性差异(Tukey′s多重比较检验)。
图13表示严重损伤模型(II)中脊髓损伤7天后后肢运动功能测试的测量结果(BBB规范)。图中的符号“***”代表与给予生理盐水组比较的p＜0.0001的显著性差异(Tukey′s多重比较检验)。
                    具体实施方式
本发明将在下面详细描述。
<1>本发明治疗剂中的活性成分
(1)至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐
本发明中，“至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类”包括“至少由GlcA组成的低分子量糖类”、“至少由GlcNAc组成的低分子量糖类”、和“至少由GlcA和GlcNAc组成的低分子量糖类”。“至少由GlcA组成的低分子量糖类”包括作为单糖的“GlcA”，而“至少由GlcNAc组成的低分子量糖类”包括作为单糖的“GlcNAc”。
GlcA优选是D-葡萄糖醛酸，而GlcNAc优选是N-乙酰-D-葡萄糖胺。
这样的“至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类”优选是低分子量HA。此外，这种低分子量糖类优选的没有硫酸基。
在本描述中，“低分子量HA”是低分子量糖链，其组成与HA的二糖组成相似。具体的，它表示低分子量糖链，其中GlcA和GlcNAc可选的通过糖苷键连接。
如果低分子量HA是这样的低分子量糖链，此处使用的“低分子量HA”包括具有GlcA非还原末端的糖链以及具有GlcNAc非还原末端的糖链。其中优选具有GlcA作为位于非还原末端的单糖的糖链。同样，优选具有GLcNAc作为位于还原末端的单糖的糖链。
位于非还原末端的单糖可以是饱和糖(不含碳-碳双键的单糖)或不饱和糖(含碳-碳双键的单糖)。其中优选具有饱和糖作为位于非还原末端的单糖的糖链。
在本描述中，“低分子量”表示由本领域(特别是涉及糖胺聚糖的技术领域)普通技术人员识别为低分子量的分子量。平均分子量超过1,000kD的分子在本领域不被认为是具有“低分子量”的分子。
“低分子量HA”优选是HA二糖到HA 2,500糖，更优选是HA二糖到HA 2,000糖，还优选的是HA二糖到HA 1,500糖，非常更优选的是HA二糖到HA 1,000糖，特别优选的是HA二糖到HA 500糖，非常特别优选的是HA二糖到HA 250糖，极其优选的是HA二糖到HA 100糖。其中HA寡糖是极其优选的。
此处，“寡糖”表示由本领域普通技术人员识别为寡糖的糖链。“HA寡糖”的实例包括HA二糖到HA 50糖。HA寡糖优选是HA二糖到HA 30糖，更优选是HA二糖到HA 20糖，还优选的是HA二糖到HA 10糖，非常更优选的是HA四糖。
低分子量HA可以是具有不同分子量的糖的混合物。因此，上述HA四糖不仅包括HA四糖，也包括含HA四糖作为主要成分的HA寡糖的混合物。此处所用的HA寡糖包括上面举例的HA寡糖混合物。
GlcA和GlcNAc之间的糖苷键优选是β1→3键，而GlcNAc和GlcA之间的糖苷键优选是β1→4键。
不特别限制用于本发明治疗剂的“至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐”的来源。例如，在低分子量HA用作这种糖链的情况下，可以通过降解从公鸡冠、脐带、产生HA的微生物等中分离和纯化的HA的方法(例如酶促降解方法、化学降解方法、热处理方法、超声处理方法等)或通过合成方法(例如化学合成方法或酶促合成方法)来生产。
酶促降解方法的实例包括用可降解HA的酶如透明质酸酶(源自睾丸)、透明质酸酶(源自链霉菌)、透明质酸酶SD、软骨素酶ACI、软骨素酶ACI、软骨素酶ACII、软骨素酶ACIII、或软骨素酶ABC降解HA的方法(见Shin Seikagaku Jikken Koza(New BiochemicalExperiment Course)″Sugars II-Proteoglycan andGlycosaminoglycan-″p244-248，1991年出版，Tokyo Kagaku Dozin Co.，Ltd.，或Glycobiology，12，p421-426，2002)。为获得低分子量HA，HA水解酶优选用作可降解HA的酶。
化学降解方法的实例包括碱降解方法和DMSO方法或其它类似方法。碱降解方法的实施可通过加碱如约1N氢氧化钠到HA溶液中，加热混合物几小时以产生低分子量的HA，并加入酸如盐酸以中和所述溶液。DMSO方法的实例包括Nagasawa等人描述的方法(Carbohyd.Res.，141，p99-110，1985)。超声处理方法的实例包括Biochem.，33，p6503-6507(1994)中描述的方法或其它类似方法。
合成方法的实例包括Glycoconjugate J.，p453-439(1993)、WO93/20827中描述的方法或类似方法。
通过如上述的方法获得含低分子量HA的组分，且组分还可以通过分离纯化糖链的一般方法进一步纯化。例如，可通过吸附层析、阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤方法、凝胶渗透层析、纸电泳方法、纸层析、透析、有机溶剂分级分离、所述方法的组合或其它类似方法(Glycobiology，12，p421-426，2002)，但纯化方法不限于这些方法。
这些方法使增加低分子量HA在组分中的含量并避免医学不期望的物质污染成为可能。
由此获得的低分子量HA优选是高度纯化的HA，其中基本不合医学不期望的物质。
例如，作为至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类的可药用盐，可以使用的可药用盐选自碱金属盐(如钠盐、锂盐和钾盐)、碱土金属盐、无机盐如铵盐或有机盐如二乙醇胺盐、环己基铵盐和氨基酸盐。其中优选使用钠盐。
当使用上述至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐时，可以获得具有极佳药物作用的神经损伤治疗剂。
在本发明的治疗剂是液体制剂的情况下，用于本发明治疗剂的至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐中的内毒素浓度优选是0.3EU/mL或更低。在本发明的治疗剂不是液体制剂的情况下，内毒素浓度优选不超过相当于上述液体制剂中的内毒素含量的量。用本领域技术人员熟知且常用的内毒素测定方法，但优选是可通过使用鲎变形细胞裂解液成分而实施的鲎测试方法，可以确定本发明治疗剂中的内毒素浓度。根据日本工业标准(JIS K8008)中的生化试剂一般规则可以测定并计算EU(内毒素单位)。同时，铁含量优选是20ppm或更低。
(2)本发明的治疗剂的剂量形式等
只要本发明治疗剂可以发挥对神经损伤的作用，不具体限制本发明治疗剂的给药方法。给药途径的实例包括注射(硬膜内、静脉内、肌内、皮下、皮内、腹膜内等)、经鼻、口服、经皮和吸入。根据疾病或给予位点适当选择给药方法如通过注射到某个位点直接给药或点滴给药。如果经硬膜内给药或类似方法，供药物灌注的可植入泵可植入体内以进行连续给药。
根据这样的给药途径或给药方法，适当配制上述低分子量糖类或其可药用盐以制备本发明的治疗剂。剂型的实例包括注射剂(如溶液、悬剂、乳液和使用前溶解的固体制剂)、片剂、胶囊、液体制剂、颗粒、粉、脂制剂、软膏、橡皮膏、洗剂、糊剂、贴膏、凝胶、栓剂、外用粉、喷雾剂和吸入粉剂。优选一种形式的液体制剂如注射剂。
例如，通过将至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐溶解于适当的水性溶剂或常用于药物的溶剂，可以制造所述液体制剂。这种溶剂的实例包括蒸馏水、缓冲液、生理盐水和含可与水互溶的有机溶剂的水或类似溶剂。
如果本发明的治疗剂以注射剂提供，其形式可以是溶液、冷冻产品或冻干品。所述治疗剂装入并密封于适当的容器如安瓿、管形瓶或注射针中，供分销或保存，且可以作为注射剂给药。
为配制本发明的治疗剂，可使用已知方法。配制治疗剂时，可以使用其它活性成分(如抗炎药、止痛剂、维生素制剂、抗茵剂、生长因子和粘附分子)或通常用于医药的成分如常规稳定剂、乳化剂、渗透调节剂、pH调节剂、缓冲剂、张力调节剂、防腐剂、soothing agents、着色剂、稀释剂、粘合剂、润滑剂和崩解剂，只要这些成分对上述糖类或其可药用盐没有不利影响且对本发明的作用没有影响。
本发明的治疗剂含有至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐作为活性成分，使得治疗剂只需包含至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐，还可进一步包含其它分子大小的糖类或其它种的糖类。
(3)待给予本发明治疗剂的对象
本发明治疗剂目的是治疗神经损伤，这样它可用于处于需要治疗神经损伤的状况的动物，也即经受神经损伤的动物。
不具体限制“处于需要治疗神经损伤的状况”，但其实例包括脊髓损伤或神经创伤如头部创伤、脑(婴幼儿)瘫、脊髓血管损害、颈椎强直、老年性痴呆、阿尔茨海默病、帕金森病和脊髓小脑退化(遗传性痉挛性下肢轻瘫)。其中所述治疗剂优选用于脊髓损伤或神经创伤、更优选用于脊髓损伤。所述脊髓损伤的实例包括创伤性脊髓损伤、脊椎退行性疾病(椎关节强直等)、脊椎炎性疾病(脊椎炎、慢性类风湿性关节炎等)、肿瘤(脊髓肿瘤、脊柱肿瘤等)、血管疾病(脊髓出血、脑栓塞、由髓外血管损伤导致的脊髓瘫痪等)、脊髓炎(蛛网膜炎、病毒性脊髓炎、细菌性脊髓炎等)、多发性硬化症、和肌萎缩性侧索硬化症。特别的，所述治疗剂可有效用于创伤性脊髓损伤。
也就是说，本发明的治疗剂优选是脊髓损伤或神经创伤的治疗剂，更优选是脊髓损伤的治疗剂，特别优选是创伤性脊髓损伤的治疗剂。
如果本发明治疗剂给予动物，待给予治疗剂的动物优选是脊椎动物，特别优选是包括人在内的哺乳动物。通过本发明治疗剂实施的“治疗”目的不特别限制，但目标可以是抑制进展(预防恶化)、改善症状或使神经损伤愈合等。
本发明治疗剂中至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐的混合量、每次给药剂量、给药间隔等不特别限制，例如，并根据给药方法、给药形式和使用本发明治疗剂的意图、患者的具体症状、年龄、性别和体重来单独确定。至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐的临床剂量的实例可以是100μg到1000mg/成人/次。
本发明治疗剂的给药间隔可以是约每天一次，或所述药剂可每天两次到三次给药。同时，也可使用如上所述的供药物灌注的可植入泵连续给予所述药剂。
除了本发明的治疗剂以外，本发明也包括治疗神经损害的方法，包括将至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类或其可药用盐给予要求神经损害治疗的对象(动物)。
实施例
以下将具体说明本发明的实施例。然而，本发明的范围并不受此限制。
<材料等>
首先，将描述用于这些实施例中的物质等。
试剂等
低分子量HA用作至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类。
来自Seikagaku公司的HA用作所述低分子量HA。所述低分子量HA有以下结构并有以下特性(用于本实施例的缩写表示于下面括号中。以下式子中，符号“-”代表糖苷键。)。
饱和HA四糖(以下称为“HA4”)。
GlcA-GlcNAc-GlcA-GlcNAc
根据Nagasawa等人描述的方法(Carbohyd.Res.，141，p99-110，1985)，通过用阴离子交换层析进行降解产物的大小分级分离获得HA4，所述降解产物由用含盐酸(HCl)的DMSO处理HA而获得。
将HA4溶于PBS，以达到根据以下药理试验预定的浓度并使用。HA4溶于PBS中后，所有内毒素浓度是0.3EU/mL或更低，而所有铁含量是20ppm或更低。
<药理学试验＞HA4对脊髓损伤的作用
(1)制备脊髓损伤模型并给予HA4(图1和2)
图1表示本实验的示意图。
Wister大鼠(SPF，雄性)用作动物，在戊巴比妥(50mg/kg)麻醉下用电动剪毛器从颈到臀部剃每只大鼠身体并用70％乙醇和Isodine(由Meiji Seika Kaisha，Ltd.制造)清洁。切开背部皮肤以暴露T5到T10胸椎，并对第6胸椎(T6胸椎)行偏侧椎板切除术，在硬膜上制造一个小切口，随后用利多卡因(由Astra Zeneca制造)进行局部麻醉。接着按如下制备两个模型：从背部插入压舌板(尖端已加工到0.3mm)到T6位置直至尖端达到腹侧中心并维持10分钟以损伤脊髓(轻微损伤模型)；另外插入小钳子(尖端已加工到0.3mm)直到尖端达到腹侧中心，并从两侧夹住锥体部分维持10秒以损伤脊髓(严重损伤模型)。仅当测量到脊髓诱发电位时使用呼吸器。在1.0到2.0％氟烷麻醉下将呼吸器插入气管并用肌肉松弛剂稳定。每个模型的损伤程度表示于图2。
损伤后，立即用微注射器(25μl；由Seisakusyo Co.，Ltd.制造)将HA4(6μl)给予到硬膜内。随后，填充入HA4并与渗透泵(1002型，由Alzet制造)连接的管子尖端(OD：0.3mm)放置在损伤部位中尾侧(rostral)的硬膜下，并连续给予HA47天。同时，在损伤后5分钟、2小时、4小时和6小时，将30mg/kg甲基强的松龙琥珀酸钠(MPSS，Parmacia制造)给予尾静脉作为阳性对照。为了从周围组织中分离损伤部位，放置明胶海绵(Gelform；Pharmacia制造)，伤口缝合后将大鼠放回饲养器中。
本测试的组结构如下。
1.轻微损伤模型：
(1)无损伤/未处理组
(2)给予PBS组(给予生理盐水组)
(3)给予HA4(60μg/动物/天)组
2.严重损伤模型(I)
(1)无损伤/未处理组
(2)给予PBS组(给予生理盐水组)
(3)给予甲基强的松龙(MPSS；30mg/kg体重/天x4次)组
(4)给予HA4(0.6μg/动物/天)组
(5)给予HA4(6.0μg/动物/天)组
3.严重损伤模型(II)
(1)通过在硬膜上制造小切口制备的假手术组(假)
(2)给予PBS组(给予生理盐水组)
(3)给予HA4(6.0μg/动物/天)组
(2)效果状态评价
给予测试物质后，观察效果状态。对于给予PBS组，结果观察到甚至在给药7天后仍行走困难，而对给予HA4组，观察到与正常大鼠大体相似的行走。
(3)HA4对脊髓诱发电位(SCEP)的影响
脊髓损伤7天后测定脊髓诱发电位。在氟烷麻醉(初始时间4.0％，维持时间1.0)下将管子插入气管并用肌肉松弛剂稳定。然后，固定头部在俯卧位并用呼吸器维持大鼠。将导管电极插入第二/三颈椎骨之间和第十三胸椎骨/第一腰椎骨之间并使用肌电图仪(Powerpoint；DANTEC DYNAMICS制造)施加超大刺激(刺激频率：1Hz，时间：0.05msec)。然后测量脊髓诱发电位(SCEP)并计算“平均值士SD”。用第一电位的振幅作为指标评价得到的电位。图3和4分别表示轻微损伤模型的结果和严重损伤模型的结果。图中的符号“*”表示与给予生理盐水组比较的p＜0.05的显著差异(Dunnett′s多重比较检验)。
作为结果，在轻微损伤模型中，与给予生理盐水组相比，给予HA4(60μg/动物/天)组中的SCEP振幅降低显著减弱或SCEP振幅恢复(p＜0.05)。水平与正常水平相同(无损伤-未处理组)(图3)。在严重损伤模型中，与给予PBS组相比，给予HA4(0.6μg/动物/天)组和给予HA4(6μg/动物/天)组中的SCEP振幅降低显著减弱或SCEP振幅恢复(分别p＜0.05和0＜0.001；与正常水平相同的水平)，同时发现给予HA4(6μg/动物/天)组有比MPSS组更强的作用(图4)。同时在严重损伤模型(II)中，以上述相同的方式测量SCEP。结果表示于图5。作为结果，与给予生理盐水组相比，给予HA4(6.0μg/动物/天)组中的SCEP幅度显著恢复(p＜0.05)(图5)。图中的符号“*”表示与给予生理盐水组比较的p＜0.05的显著差异(Tukey’s多重比较检验)。
(4)从组织病理学观点评价(轻微损伤模型)
用中性缓冲福尔马林固定并用石蜡包埋损伤位点周围约2cm长的脊髓部分。从背部制备冠状平面的系列切片，并进行Kluver-Barrera染色，其中髓鞘被染成蓝色。在包括中央管的位置的组织样品中，观察(a)损伤位点区和(b)跨白质到灰质的轴突(轴突进入并离开第六胸椎脊髓)。图6和7分别表示给予PBS组和给予HA组的结果。
作为结果，在给予PBS组的组织损伤区中不仅在损伤位点(损伤位点)而且在远离开损伤位点1cm或更多的白质中观察到水肿和髓鞘损失(图6)。连续或分散的模式代表白质中的组织损伤(图6)。对于给予HA4组，组织损伤仅仅出现在损伤位点附近，并且在白质中很少观察到水肿和髓鞘损失(图7)。
如图8所示，在冠状面中包括中央管的平面，包括头侧点和尾侧点的在两侧和远侧的四个损伤点范围内的正方形区域(图8中的实框)被定义为“损伤区”，并确定损伤面积。作为结果，给予HA4组的面积显著小于给予PBS组的面积(图9)。
同时，测定跨白质到灰质的轴突(横切)(在损伤位点头/尾方向5mm范围)的数目。并作为结果，给予HA4组的轴突数显著大于给予生理盐水组(图10和11)。
(5)从行为学观点评价(严重损伤模型II)
在造成脊髓损伤前，通过用平衡木(3cm×100cm)和金属网(20cm×100cm)进行横跨测验训练动物5到7天。训练完成后以和以上(1)-(3)所述相同的方式对每个动物制备脊髓严重损伤模型(II)。随后腹膜内连续给予PBS或HA47天，并且每个动物允许跨过两个障碍物四次。然后记录后肢的滑倒次数，并评价其平均值(图12)。对于通过在硬膜上制造小切口制备的假手术组，也测定后肢滑倒次数。
同时，脊髓损伤后，对给予PBS或HA4组和假手术组，每天进行后肢运动功能测试连续7天。根据Basso等人描述的方法，两个测试实施人用Basso-Beeattie-Bresn(BBB)规范单独用盲法评价，并定义平均值为最终结果(图13)。
在平衡木或金属网跨越中，由于两个障碍引起的后肢滑倒次数显著很低(p＜0.0001)(图12)，而在用BBB规范的后肢运动功能测试中，与给予生理盐水组比较，发现脊髓损伤后1到7天给予HA4(6μg/天)组的后肢运动功能显著恢复(p＜0.0001)(图13)。图中的符号“***”表示与给予生理盐水组比较的p＜0.0001的显著差异(Tukey’s多重比较检验)。
上述结果显示给予HA4抑制脊髓诱发电位的降低或恢复脊髓诱发电位。结果显示HA4对由脊髓损伤引起的神经功能降低有抑制作用或对神经功能有恢复作用。实际上，已经确认给予HA4组的后肢运动功能显著恢复。
在组织病理学评价中，给予HA4组中组织损伤受到抑制，同时还提示HA4对神经功能的作用与组织损伤抑制有关。特别的，已经显示由HA4引起的髓鞘损失抑制(继发损伤中的脱髓鞘)和轴突数目减少(由于损伤引起的神经细胞或少突胶质细胞凋亡，认为轴突消失)抑制是与由HA4引起的神经功能降低的抑制紧密相关的。
同时，上述使用动物的测试结果支持本发明治疗剂的安全性。
上述结果显示“低分子量HA”(特别是HA4)，它是“至少由GlcA和/或GlcNAc组成的低分子量糖类”或其可药用盐，对治疗神经损伤(特别是神经创伤或脊髓损伤)极为有用且非常安全。
工业实用性
本发明的治疗剂是非常有用的，因为它对神经损伤，特别是脊髓损伤或神经创伤引起的神经损伤，具有极佳的作用，且使用安全。

Claims (8)

1.神经损伤治疗剂，其中含有至少由葡萄糖醛酸和/或N-乙酰葡萄糖胺组成的低分子量糖类或其可药用盐作为活性成分。
2.根据权利要求1的治疗剂，其中至少由葡萄糖醛酸和/或N-乙酰葡萄糖胺组成的低分子量糖类是低分子量透明质酸。
3.根据权利要求2的治疗剂，其中低分子量透明质酸是透明质酸二糖到透明质酸2,500糖。
4.根据权利要求3的治疗剂，其中低分子量透明质酸是透明质酸二糖到透明质酸50糖。
5.根据权利要求4的治疗剂，其中低分子量透明质酸是透明质酸四糖。
6.根据权利要求1到5任意一项的治疗剂，其中神经损伤由脊髓损伤或神经创伤引起。
7.治疗神经损伤的方法，包括向患有神经损伤的动物给予至少由葡萄糖醛酸和/或N-乙酰葡萄糖胺组成的低分子量糖类或其可药用盐。
8.至少由葡萄糖醛酸和/或N-乙酰葡萄糖胺组成的低分子量糖类或其可药用盐用于制造神经损伤治疗剂的用途。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108603115A (zh) * 2016-02-12 2018-09-28 来姆有限公司 神经生长促进剂及其制造方法、内服剂、培养基用添加剂、细胞稀释液用添加剂、培养基、细胞稀释液、抗氧化剂及其制造方法、外用剂、以及伤口治疗剂及其制造方法
WO2022184091A1 (zh) * 2021-03-04 2022-09-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 透明质酸在用于制备预防或治疗铁死亡相关疾病的药物中的应用

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE453655T1 (de) * 2000-07-07 2010-01-15 Seikagaku Kogyo Co Ltd Hyaluronsäure oligosaccharid fraktionen und medikamente, die diese enthalten
WO2005016285A2 (en) * 2003-08-13 2005-02-24 New York University Compositions and methods for inhibiting slit protein and glypican interactions
JP4576583B2 (ja) * 2005-03-22 2010-11-10 キユーピー株式会社 ヒアルロン酸またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物
US20070099867A1 (en) * 2005-05-24 2007-05-03 Glycoscience Laboratories, Inc. Pharmaceutical agent containing hyaluronan as an active ingredient
JP2007153761A (ja) * 2005-12-01 2007-06-21 Toshitsu Kagaku Kenkyusho:Kk シナプス伝達促進剤及びシナプス保護剤
WO2007026996A1 (en) * 2005-08-03 2007-03-08 National Cancer Center Glucosamine and derivatives thereof useful as tg inhibitors
RU2342148C2 (ru) * 2005-09-26 2008-12-27 Гликосайенс Лабораториз, Инк. Фармацевтическое средство, содержащее гиалуронан в качестве активного ингредиента
JP2009091248A (ja) * 2006-01-17 2009-04-30 Toshitsu Kagaku Kenkyusho:Kk 外傷性神経障害および／または運動機能障害の治療薬
WO2007099830A1 (ja) * 2006-02-24 2007-09-07 Q.P. Corporation 新規な低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、ならびにこれを用いた化粧料、医薬組成物および食品組成物
WO2008068854A1 (ja) * 2006-12-05 2008-06-12 Glycoscience Laboratories, Inc. 変形性関節症の治療剤
JP2009292767A (ja) * 2008-06-05 2009-12-17 Toshitsu Kagaku Kenkyusho:Kk 神経細胞分化誘導剤
US20150018305A1 (en) * 2012-02-22 2015-01-15 Hyaluronan Research Institute, Inc. Sirtuin inducer, tissue repairing agent, hepatocyte growth factor inducer, tissue homeostasis maintenance agent, and tlr4 agonist, having hyaluronic acid fragment as active ingredient
EP2698636A1 (en) * 2012-08-13 2014-02-19 Fundació Institut d'Investigació Biomèdica de Bellvitge Methods and reagents for prevention and/or treatment of transplant rejection
IT201600079773A1 (it) * 2016-07-29 2018-01-29 Matteo Bevilacqua Composizioni contenenti oligosaccaridi di acido ialuronico (HA4), condroitin solfato (CS2-4) ed eparan solfato (HS2-4), triterpeni pentaciclici e derivati per uso medico curativo e metodo per la preparazione di tali composizioni.

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0493533A4 (en) 1989-10-27 1992-10-28 Case Western Reserve University Inhibition of cell growth by keratan sulfate, chondroitin sulfate, dermatan sulfate and other glycans
IT1264530B (it) 1992-07-31 1996-10-02 Crinos Industria Farmaco Impiego dei polisaccaridi nelle neuropatie atrofico degenerative
JP3942205B2 (ja) 1995-07-24 2007-07-11 生化学工業株式会社 神経疾患の治療剤
JP4195107B2 (ja) 1996-02-16 2008-12-10 生化学工業株式会社 ストレス蛋白質発現増強剤
FR2763848B1 (fr) 1997-05-28 2000-01-28 Rhone Poulenc Rorer Sa Utilisation des heparines de bas poids moleculaire pour la prevention et le traitement du trauma du systeme nerveux central
JP4073986B2 (ja) 1997-11-06 2008-04-09 生化学工業株式会社 脊髄潅流液
JP4412756B2 (ja) 1998-02-26 2010-02-10 生化学工業株式会社 新規多糖誘導体、その製造法及びそれを有効成分とする医薬組成物
DE69931038T2 (de) 1998-02-26 2006-11-23 Seikagaku Corp. Neue polysaccharidderivate, verfahren zu ihrer herstellung und medizinische zusammensetzungen die diese als aktives bestandteil enthalten
JP4531887B2 (ja) 1998-10-27 2010-08-25 株式会社クラレ 神経再生用材料
FR2787329B1 (fr) 1998-12-17 2001-02-09 Aventis Pharma Sa Nouvelle application therapeutique des heparines de bas poids moleculaire
EP1165097B1 (en) * 1999-02-01 2007-05-02 Dermal Research Laboratories, Inc. A pharmaceutical composition of complex carbohydrates and their use
FR2800074B1 (fr) 1999-10-22 2001-12-21 Aventis Pharma Sa Nouveaux oligosaccharides, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant
IL150628A0 (en) 2000-01-10 2003-02-12 Yissum Res Dev Co Use of lipid conjugates in the treatment of disease
FR2807043B1 (fr) 2000-03-28 2002-11-22 Aventis Pharma Sa Composition pharmaceutique contenant des oligosaccharides, les nouveaux oligosaccharides et leur preparation
ATE453655T1 (de) 2000-07-07 2010-01-15 Seikagaku Kogyo Co Ltd Hyaluronsäure oligosaccharid fraktionen und medikamente, die diese enthalten
JP4676048B2 (ja) 2000-07-10 2011-04-27 生化学工業株式会社 脱髄性疾患処置剤
EP1311276A4 (en) 2000-07-31 2007-09-12 Dermal Res Lab Inc METHODS FOR THE PREVENTION OR TREATMENT OF DISEASES AND CONDITIONS USING COMPLEX CARBOHYDRATES
JP4732604B2 (ja) 2001-03-07 2011-07-27 生化学工業株式会社 増殖因子活性増強剤
JP4035629B2 (ja) 2001-10-09 2008-01-23 生化学工業株式会社 ギャップ機能抑制剤
JP4422392B2 (ja) 2002-08-20 2010-02-24 焼津水産化学工業株式会社 記憶学習能改善剤
JP2004075616A (ja) 2002-08-20 2004-03-11 Asahi Glass Co Ltd ４−ハロゲノ−２−（４−フルオロフェニルアミノ）−５，６−ジメチルピリミジンの製造方法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108603115A (zh) * 2016-02-12 2018-09-28 来姆有限公司 神经生长促进剂及其制造方法、内服剂、培养基用添加剂、细胞稀释液用添加剂、培养基、细胞稀释液、抗氧化剂及其制造方法、外用剂、以及伤口治疗剂及其制造方法
US10973858B2 (en) 2016-02-12 2021-04-13 Laimu Corporation Nerve growth promoter and method for producing same, internal preparation, medium additive, cell dilution additive, medium, cell dilution, antioxidant and method for producing same, external preparation, and wound treatment agent and method for producing same
US11911417B2 (en) 2016-02-12 2024-02-27 Laimu Corporation Nerve growth promoter and method for producing same, internal preparation, medium additive, cell dilution additive, medium, cell dilution, antioxidant and method for producing same, external preparation, and wound treatment agent and method for producing same
WO2022184091A1 (zh) * 2021-03-04 2022-09-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 透明质酸在用于制备预防或治疗铁死亡相关疾病的药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
US7511026B2 (en) 2009-03-31
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