CN110711244A - 一种神经导向因子Sema在制备治疗骨关节炎搽剂中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种神经导向因子Sema在制备治疗骨关节炎搽剂中的应用，所述神经导向因子Sema选自Sema 3a蛋白，Sema 3a蛋白可以选自天然蛋白或重组蛋白。另一方面，本发明公开了一种基于神经导向因子Sema的搽剂及其制备方法，所述搽剂包括：神经导向因子Sema和溶剂，所述神经导向因子Sema在溶剂中的浓度为50‑100μg/mL。

Description

一种神经导向因子Sema在制备治疗骨关节炎搽剂中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种神经导向因子Sema大分子蛋白在制备治疗骨关节炎搽剂中的用途。

背景技术

骨关节炎(OA)是指以软骨丢失及伴有关节周围骨反应为特点的一种滑膜关节病，又称骨关节病、退行性骨关节病、肥大性或增生性关节炎等，是全球范围内最常见的风湿性疾病。骨关节炎是由于增龄、肥胖、劳损、创伤、关节先天性异常、关节畸形等诸多因素引起的关节软骨退化损伤、关节边缘和软骨下骨反应性增生。骨关节炎是中老年人群中最常见的关节疾病，调查研究显示，60岁以上的人群中患病率可达50％，75岁以上人群中则达80％，该病致残率高达53％，调查显示，骨关节炎已成为老年人致残头号杀手。

骨关节炎病症大多起病隐袭，进展缓慢，受累关节可间断出现轻中度钝痛，且所述病症可因过度活动、气候变化等原因诱发或加重，严重者症状体征明显且持续不缓解，甚至出现关节畸形、功能障碍。

骨关节炎的治疗目的是减轻症状，延缓关节结构改变，维持关节功能，提高生活质量。2000年ACR制定的OA治疗指南以及欧洲风湿病学会联盟(EULAR)对膝OA治疗的建议基本都是三个方面，即非药物治疗、药物治疗、手术治疗。其中，在药物治疗中非甾体抗炎药(NSAIDs)是一类化学结构不同的具有抗炎、止痛、解热等功能的非类固醇药物，常用于骨关节炎的治疗。值得注意的是，一些试验观察到某些NSAIDs抑制软骨合成，加速软骨退化，此外，口服非甾体抗炎药经常会导致胃肠道问题(尤其是对于老年患者)，长期使用通常伴有肾脏、肝脏和其他功能异常。除了NSAIDs，类固醇类药物由于可迅速改善症状而经常应用于骨关节炎治疗，但频繁使用类固醇药物可能损害关节，所以应慎重考虑类固醇注射治疗。其次，使用透明质酸注射液关节腔内注射，即粘弹性补充疗法在治疗骨关节炎病症中越来越普遍，在中国销售的关节腔内注射制剂含鸡冠花来源的透明质酸钠，平均分子量为800,000道尔顿。其虽然具有缓解疼痛、抗炎特性、改善关节活动度、暂无严重药物不良反应等效应，但却无法抑制骨关节炎进程且仅对早期骨关节炎有效。

Semaphorin蛋白家族是一类以半胱氨酸富集区域为特征的一组分泌型或膜相关的蛋白家族,最初作为影响神经发育的神经轴突导向因子而被发现，Semaphorin是一大类分泌型或跨膜型糖蛋白分子，参与机体多项重要生理过程的调节，包括调控神经系统的轴突发育、血管形成、骨分化、心血管发育等。根据其组成特点将其分为8型，其中有部分家族蛋白分子参与免疫功能的调节从而将其命名为Immune Semaphorin，如Semaphorin 4D(Sema4D，又名CD100)、Semaphorin 3A(Sema3A)、和Semaphorin 7A(Sema7A)等。其中，Sema3A最早被发现，也是最经典的Sema家族成员之一，可调控和引导神经轴突的生长。近年来研究发现Sema3A除发挥神经轴突导向作用外，还与细胞迁移、肿瘤生长、血管生成、骨代谢及免疫调节等多种机体的病理生理现象密切相关。

非专利文献“Semaphorin 3A在类风湿关节炎患者血清及外周血单个核细胞中的表达及意义”中提到Semaphorin3A(Sema3A)在类风湿关节炎(RA)患者外周血及血清中的表达水平，探讨Sema3A在RA发病机制中的作用。结果显示RA患者血清Sema3A水平显著高于健康人，且血清Sema3A水平与血小板计数、ESR、IgM、类风湿因子、HRF-IgG呈正相关。

非专利文献“骨改建中潜在的作用靶点-信号素Sema3A的研究进展”中研究证明Sema3A具有促进成骨细胞生成以及同时抑制破骨细胞生成的功能，且骨折愈合与神经纤维长入骨痂密切相关，神经生长导向因子Sema3A可通过调控感觉神经纤维长入调节骨量代谢。

专利文献“一种采用Sema3A基因促进脂肪干细胞成骨分化、抑制成脂分化的方法”公开了一种采用Sema3A基因促进脂肪干细胞成骨分化、抑制成脂分化的方法。所述发明构建了含有Sema3A基因序列的重组质粒，通过将Sema3A重组质粒和辅助包装质粒转染进入293T细胞获得Sema3A慢病毒载体，慢病毒载体在polybrene的协助下将Sema3A基因导入脂肪干细胞，显著地促进了脂肪干细胞的成骨分化，同时也抑制了脂肪干细胞向成脂方向的分化，导入Sema3A基因可以更好地将脂肪干细胞应用于促进骨缺损愈合和种植体骨结合。

虽然现有技术公开了Sema3A用于治疗骨相关疾病的应用，而且仅是针对骨的治疗，而未涉及软骨，本发明所述的骨关节炎是由于增龄、肥胖、劳损、创伤、关节先天性异常、关节畸形等诸多因素引起的关节软骨退化损伤。因此，本发明所述的药物制剂与现有制剂应用的疾病病种不同，且现有技术未曾公开由Sema大分子蛋白作为有效成分制备的搽剂在治疗骨关节中的应用。

发明内容

为了改善现有技术的缺陷，本发明提供一种神经导向因子Sema在制备治疗骨关节炎搽剂中的应用，另外，本发明提供一种基于神经导向因子Sema的搽剂及其制备方法。

第一方面，本发明提供一种神经导向因子Sema在制备治疗骨关节炎搽剂中的应用，所述神经导向因子Sema的序列选自下列氨基酸序列中的一种：

1)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为如SEQ ID NO:1所示序列的全部或部分；

2)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为与SEQ ID NO:1具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性程度的序列；

3)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示序列的差异不超过5、4、3、2或1个氨基酸；

4)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为SEQ ID NO:1的变体，其中所述变体与SEQ ID NO:1的差异包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的序列或至少一个N-/C-末端延伸。

优选的，所述神经导向因子Sema选自Sema 3a蛋白，所述Sema 3a蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明中SEQ ID NO:1的氨基酸序列如下所示：

第二方面，本发明提供一种基于神经导向因子Sema的搽剂，所述搽剂包括：神经导向因子Sema和溶剂，所述神经导向因子Sema在溶剂中的浓度为50-100μg/mL。

优选的，所述神经导向因子Sema在溶剂中的浓度为50-70μg/mL。

在本发明的优选实施方式中，所述神经导向因子Sema在溶剂中的浓度为50μg/mL。

所述神经导向因子Sema的序列选自下列氨基酸序列中的一种：

1)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为如SEQ ID NO:1所示序列的全部或部分；

2)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为与SEQ ID NO:1具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性程度的序列；

3)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示序列的差异不超过5、4、3、2或1个氨基酸；

4)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为SEQ ID NO:1的变体，其中所述变体与SEQ ID NO:1的差异包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的序列或至少一个N-/C-末端延伸。

优选的，所述神经导向因子Sema选自Sema 3a蛋白，所述Sema 3a蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

所述溶剂选自乙醇、聚乙二醇-400、聚乙二醇-600中的一种或两种以上的组合。

在本发明的最优选实施方式中，所述溶剂为聚乙二醇-400。

所述搽剂中还包括助透剂，所述助透剂选自甘油、丙二醇、异丙醇、乙醇、液体石蜡中的一种或两种以上的组合。

第三方面，本发明提供一种基于神经导向因子Sema的搽剂的制备方法，所述方法是按照比例将神经导向因子Sema溶于溶剂中，混匀，即得搽剂。

优选的，所述制备的搽剂为单位剂型，每1ml药液中含有50-70μg神经导向因子Sema。

更优选的，每1ml药液中含有50μg神经导向因子Sema。

所述神经导向因子Sema的序列选自下列氨基酸序列中的一种：

1)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为如SEQ ID NO:1所示序列的全部或部分；

2)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为与SEQ ID NO:1具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性程度的序列；

3)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示序列的差异不超过5、4、3、2或1个氨基酸；

4)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为SEQ ID NO:1的变体，其中所述变体与SEQ ID NO:1的差异包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的序列或至少一个N-/C-末端延伸。

优选的，所述神经导向因子Sema选自Sema 3a蛋白，所述Sema 3a蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

在本发明中，所述Sema 3a蛋白可以选自天然蛋白或重组蛋白，优选的，所述Sema3a蛋白为人源重组蛋白。

所述溶剂选自乙醇、聚乙二醇-400、聚乙二醇-600中的一种或两种以上的组合。

在本发明的最优选实施方式中，所述溶剂为聚乙二醇-400。

所述搽剂中还包括助透剂，所述助透剂选自甘油、丙二醇、异丙醇、乙醇、液体石蜡中的一种或两种以上的组合。

在本发明最优选实施方式中，所述基于神经导向因子Sema 3a蛋白的搽剂的制备方法包括如下步骤：

(1)将助透剂溶于溶剂中，充分溶解；

(2)将神经导向因子Sema 3a蛋白溶于含有助透剂的溶剂中，混匀，形成Sema 3a蛋白浓度为50-60μg/mL的搽剂。

本发明的有益效果为：现有的治疗技术手段仅能缓解骨关节炎症状，而目前FDA及中国均仍还没有批准用于预防或减缓疾病进展的药物，本发明提供的一种基于神经导向因子Sema的搽剂能预防和减缓骨关节炎进展。另外，搽剂使用方便，涂抹在患处经皮吸收直接作用病灶，无附着物，关节活动不受限，无贴附过敏反应，无创，肠胃无负担，患者依从性较好。

附图说明

图1 Sema 3a蛋白搽剂小鼠热板实验散点图

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1搽剂的制备

取100μg Sema 3a人源重组蛋白溶于2mL乙醇中，涡旋混匀，得到药物浓度为50μg/mL的搽剂。

实施例2搽剂的制备

取100μg Sema 3a人源重组蛋白溶于2mL聚乙二醇-400中，涡旋混匀，得到药物浓度为50μg/mL的搽剂。

实施例3搽剂的制备

取100μg Sema 3a人源重组蛋白溶于2mL聚乙二醇-600中，涡旋混匀，得到药物浓度为50μg/mL的搽剂。

实施例4搽剂的制备

取120μg Sema 3a人源重组蛋白溶于2mL聚乙二醇-400中，涡旋混匀，得到药物浓度为60μg/mL的搽剂。

实施例5搽剂的制备

取140μg Sema 3a人源重组蛋白溶于2mL聚乙二醇-400中，涡旋混匀，得到药物浓度为70μg/mL的搽剂。

实施例6搽剂的制备

取200μL丙二醇加入2mL聚乙二醇-400中，吹打均匀，取100μg Sema3a人源重组蛋白溶于溶剂中，涡旋混匀，得到药物浓度为50μg/mL的搽剂。

实施例7搽剂的制备

取150μL甘油加入1.5mL聚乙二醇-400和0.5mL乙醇混合溶剂中，吹打均匀，取100μg Sema 3a人源重组蛋白溶于溶剂中，涡旋混匀，得到药物浓度为50μg/mL的搽剂。

效果例1搽剂皮肤刺激试验

采用实施例1-7制备的搽剂进行皮肤刺激试验，具体过程如下：选取体重为2.0-2.5kg的家兔作为实验动物，于实验前24h用剪刀及电动剃毛刀在家兔背部脊柱一侧剃出一块区域，尺寸约为10cm×5cm，涂实验药物，涂药量为1.0mL，每天给药1次，连续给药30天，在给药后的0、3、10、30天观察涂药处皮肤有无红斑和水肿现象，若有明显损伤，取皮肤作病理组织学检查。

参照表1实验动物皮肤刺激反应评分表对本试验中各组小鼠皮肤刺激程度进行评分，结果如表2所示。

表1皮肤刺激反应评分

表2皮肤刺激试验结果

	0d(红斑/水肿)	3d(红斑/水肿)	10d(红斑/水肿)	30d(红斑/水肿)
					实施例1	0/0	0/1	1/1	1/2
实施例2	0/0	0/0	0/0	0/0
					实施例3	0/0	0/0	0/0	1/0
实施例4	0/0	0/0	0/0	0/1
					实施例5	0/0	0/0	0/0	0/1
实施例6	0/0	0/0	0/0	0/0
					实施例7	0/0	0/0	0/1	1/1

由上表试验结果可以看出，本发明制备的搽剂当溶剂为聚乙二醇时，在给药10天后对家兔的皮肤刺激反应为阴性(即无刺激性)，而此时，当搽剂溶剂为乙醇或含有乙醇时，药物对皮肤会产生轻度刺激。在给药后30天的家兔皮肤刺激反应来看，选聚乙二醇400作为溶剂时，药物对皮肤刺激性最小，聚乙二醇600作为溶剂的搽剂在长时间作用于皮肤后悔产生轻微水肿现象。另外，我们还发现促透剂丙二醇和甘油的加入基本不会产生皮肤刺激作用。

效果例2搽剂药效试验

1、试验目的：以C57小鼠为模型，评价本发明制备的基于Sema 3a蛋白的搽剂对小鼠关节炎模型的治疗效果。

2、试验过程如下：

①膝关节炎模型建立：

动物：8周龄C57小鼠40只，随机分为8组，右腿ACLT：前十字交叉韧带切断术造模。

实验器材及试剂：动物实验用手术器械(眼科剪、镊子等)，动物实验板，1％戊巴比妥钠，碘伏，生理盐水，75％酒精，纱布。实验原理：模拟创伤性膝关节炎。

实验步骤：按0.3-0.6ml/100g的剂量对小鼠腹腔注射戊巴比妥钠麻醉小鼠，安抚小鼠后放回笼位，待其失去知觉后(刺激足底无反应)，将小鼠前后脚固定在实验平板上，右腿不固定，在右腿膝关节处碘伏消毒后，小心剪开并暴露出关节处，于髌韧带下方找到前十字交叉韧带，用剪刀剪断，碘伏消毒，仔细处理伤口流血较多位置，缝合伤口，术后将小鼠放置在保温台上，待其苏醒后放回笼位。

②膝关节炎治疗

待①所述模型长至12周龄，1-7组小鼠右腿膝关节处涂抹实施例1-7制备的搽剂，第8组为空白对照组，小鼠右腿膝关节处涂抹聚乙二醇-400溶剂，1日2次，连续治疗4周。

③治疗前后(12周龄与16-17周龄)分别对小鼠进行热板实验：待热板仪温度到达设定的55℃后，将小鼠放置于热板上，观察其反映，记录小鼠从放置于热板仪上到舔后肢的时间。

④实验结果如下表所示：

表3 Sema 3a蛋白搽剂对膝关节炎治疗效果

小鼠关节炎程度越高，疼痛越重，对外部热刺激越不敏感，在热板上的停留时间越长，因此，热板时间越长表明小鼠关节炎越严重。根据上表数据及图1所示的散点图可以看出，本发明制备的含有Sema 3a蛋白的搽剂与空白对照组相比对小鼠膝关节炎具有明显的治疗效果。组1-3比较可以看出，当搽剂的溶剂为聚乙二醇-400时，治疗效果优于乙醇和聚乙二醇-600，且当溶剂中含有助透剂时，治疗效果最优。组2、4和5中搽剂对小鼠膝关节炎的治疗效果相当，且当药物浓度为50μg/mL时，在药物用量最小的情况下即能达到较佳的治疗效果，制备成本低，因此，本发明制备的搽剂中Sema 3a人源重组蛋白的浓度优选为50μg/mL。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

序列表

<110> 四川大学华西医院

<120> 一种神经导向因子Sema在制备治疗骨关节炎搽剂中的应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 771

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Met Gly Trp Leu Thr Arg Ile Val Cys Leu Phe Trp Gly Val Leu Leu

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ala Asn Tyr Gln Asn Gly Lys Asn Asn Val Pro Arg Leu

20 25 30

Lys Leu Ser Tyr Lys Glu Met Leu Glu Ser Asn Asn Val Ile Thr Phe

35 40 45

Asn Gly Leu Ala Asn Ser Ser Ser Tyr His Thr Phe Leu Leu Asp Glu

50 55 60

Glu Arg Ser Arg Leu Tyr Val Gly Ala Lys Asp His Ile Phe Ser Phe

65 70 75 80

Asp Leu Val Asn Ile Lys Asp Phe Gln Lys Ile Val Trp Pro Val Ser

85 90 95

Tyr Thr Arg Arg Asp Glu Cys Lys Trp Ala Gly Lys Asp Ile Leu Lys

100 105 110

Glu Cys Ala Asn Phe Ile Lys Val Leu Lys Ala Tyr Asn Gln Thr His

115 120 125

Leu Tyr Ala Cys Gly Thr Gly Ala Phe His Pro Ile Cys Thr Tyr Ile

130 135 140

Glu Ile Gly His His Pro Glu Asp Asn Ile Phe Lys Leu Glu Asn Ser

145 150 155 160

His Phe Glu Asn Gly Arg Gly Lys Ser Pro Tyr Asp Pro Lys Leu Leu

165 170 175

Thr Ala Ser Leu Leu Ile Asp Gly Glu Leu Tyr Ser Gly Thr Ala Ala

180 185 190

Asp Phe Met Gly Arg Asp Phe Ala Ile Phe Arg Thr Leu Gly His His

195 200 205

His Pro Ile Arg Thr Glu Gln His Asp Ser Arg Trp Leu Asn Asp Pro

210 215 220

Lys Phe Ile Ser Ala His Leu Ile Ser Glu Ser Asp Asn Pro Glu Asp

225 230 235 240

Asp Lys Val Tyr Phe Phe Phe Arg Glu Asn Ala Ile Asp Gly Glu His

245 250 255

Ser Gly Lys Ala Thr His Ala Arg Ile Gly Gln Ile Cys Lys Asn Asp

260 265 270

Phe Gly Gly His Arg Ser Leu Val Asn Lys Trp Thr Thr Phe Leu Lys

275 280 285

Ala Arg Leu Ile Cys Ser Val Pro Gly Pro Asn Gly Ile Asp Thr His

290 295 300

Phe Asp Glu Leu Gln Asp Val Phe Leu Met Asn Phe Lys Asp Pro Lys

305 310 315 320

Asn Pro Val Val Tyr Gly Val Phe Thr Thr Ser Ser Asn Ile Phe Lys

325 330 335

Gly Ser Ala Val Cys Met Tyr Ser Met Ser Asp Val Arg Arg Val Phe

340 345 350

Leu Gly Pro Tyr Ala His Arg Asp Gly Pro Asn Tyr Gln Trp Val Pro

355 360 365

Tyr Gln Gly Arg Val Pro Tyr Pro Arg Pro Gly Thr Cys Pro Ser Lys

370 375 380

Thr Phe Gly Gly Phe Asp Ser Thr Lys Asp Leu Pro Asp Asp Val Ile

385 390 395 400

Thr Phe Ala Arg Ser His Pro Ala Met Tyr Asn Pro Val Phe Pro Met

405 410 415

Asn Asn Arg Pro Ile Val Ile Lys Thr Asp Val Asn Tyr Gln Phe Thr

420 425 430

Gln Ile Val Val Asp Arg Val Asp Ala Glu Asp Gly Gln Tyr Asp Val

435 440 445

Met Phe Ile Gly Thr Asp Val Gly Thr Val Leu Lys Val Val Ser Ile

450 455 460

Pro Lys Glu Thr Trp Tyr Asp Leu Glu Glu Val Leu Leu Glu Glu Met

465 470 475 480

Thr Val Phe Arg Glu Pro Thr Ala Ile Ser Ala Met Glu Leu Ser Thr

485 490 495

Lys Gln Gln Gln Leu Tyr Ile Gly Ser Thr Ala Gly Val Ala Gln Leu

500 505 510

Pro Leu His Arg Cys Asp Ile Tyr Gly Lys Ala Cys Ala Glu Cys Cys

515 520 525

Leu Ala Arg Asp Pro Tyr Cys Ala Trp Asp Gly Ser Ala Cys Ser Arg

530 535 540

Tyr Phe Pro Thr Ala Lys Arg Arg Thr Arg Arg Gln Asp Ile Arg Asn

545 550 555 560

Gly Asp Pro Leu Thr His Cys Ser Asp Leu His His Asp Asn His His

565 570 575

Gly His Ser Pro Glu Glu Arg Ile Ile Tyr Gly Val Glu Asn Ser Ser

580 585 590

Thr Phe Leu Glu Cys Ser Pro Lys Ser Gln Arg Ala Leu Val Tyr Trp

595 600 605

Gln Phe Gln Arg Arg Asn Glu Glu Arg Lys Glu Glu Ile Arg Val Asp

610 615 620

Asp His Ile Ile Arg Thr Asp Gln Gly Leu Leu Leu Arg Ser Leu Gln

625 630 635 640

Gln Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Leu Cys His Ala Val Glu His Gly Phe

645 650 655

Ile Gln Thr Leu Leu Lys Val Thr Leu Glu Val Ile Asp Thr Glu His

660 665 670

Leu Glu Glu Leu Leu His Lys Asp Asp Asp Gly Asp Gly Ser Lys Thr

675 680 685

Lys Glu Met Ser Asn Ser Met Thr Pro Ser Gln Lys Val Trp Tyr Arg

690 695 700

Asp Phe Met Gln Leu Ile Asn His Pro Asn Leu Asn Thr Met Asp Glu

705 710 715 720

Phe Cys Glu Gln Val Trp Lys Arg Asp Arg Lys Gln Arg Arg Gln Arg

725 730 735

Pro Gly His Thr Pro Gly Asn Ser Asn Lys Trp Lys His Leu Gln Glu

740 745 750

Asn Lys Lys Gly Arg Asn Arg Arg Thr His Glu Phe Glu Arg Ala Pro

755 760 765

Arg Ser Val

770

Claims (10)

1.一种神经导向因子Sema在制备治疗骨关节炎搽剂中的应用，所述神经导向因子Sema的序列选自下列氨基酸序列中的一种：

1)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为如SEQ ID NO:1所示序列的全部或部分；

2)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为与SEQ ID NO:1具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性程度的序列；

3)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示序列的差异不超过5、4、3、2或1个氨基酸；

4)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为SEQ ID NO:1的变体，其中所述变体与SEQID NO:1的差异包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的序列或至少一个N-/C-末端延伸。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述神经导向因子Sema选自Sema 3a蛋白，所述Sema 3a蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.一种权利要求1所述的基于神经导向因子Sema的搽剂，所述搽剂包括：神经导向因子Sema和溶剂，所述神经导向因子Sema在溶剂中的浓度为50-100μg/mL。

4.根据权利要求3所述的搽剂，其特征在于，所述神经导向因子Sema在溶剂中的浓度为50-70μg/mL。

5.根据权利要求4所述的搽剂，其特征在于，所述神经导向因子Sema在溶剂中的浓度为50μg/mL。

6.根据权利要求3所述的搽剂，其特征在于，所述神经导向因子Sema的序列选自下列氨基酸序列中的一种：

1)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为如SEQ ID NO:1所示序列的全部或部分；

2)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为与SEQ ID NO:1具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性程度的序列；

3)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示序列的差异不超过5、4、3、2或1个氨基酸；

4)所述神经导向因子Sema的氨基酸序列为SEQ ID NO:1的变体，其中所述变体与SEQID NO:1的差异包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的序列或至少一个N-/C-末端延伸。

7.根据权利要求6所述的搽剂，其特征在于，所述神经导向因子Sema选自Sema 3a蛋白，所述Sema 3a蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述溶剂选自乙醇、聚乙二醇-400、聚乙二醇-600中的一种或两种以上的组合。

8.根据权利要求7所述的搽剂，其特征在于，所述搽剂中还包括助透剂，所述助透剂选自甘油、丙二醇、异丙醇、乙醇、液体石蜡中的一种或两种以上的组合。

9.一种权利要求3-8任一所述的基于神经导向因子Sema的搽剂的制备方法，所述方法是按照比例将神经导向因子Sema溶于溶剂中，混匀，即得搽剂，所述制备的搽剂为单位剂型，每1ml药液中含有50-70μg神经导向因子Sema。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述基于神经导向因子Sema 3a蛋白的搽剂的制备方法包括如下步骤：

(1)将助透剂溶于溶剂中，充分溶解；

(2)将神经导向因子Sema 3a蛋白溶于含有助透剂的溶剂中，混匀，形成Sema 3a蛋白浓度为50-60μg/mL的搽剂。

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