CN1790012A - 一种用液相色谱法分离测定匹伐他汀及其光学异构体的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属分析化学领域，涉及匹伐他汀钙及其光学异构体(杂质)的分离测定。本发明用高效液相色谱法或高效液相色谱－质谱法，在一定的色谱条件下分离测定匹伐他汀钙光学异构体，通过该方法能快速准确地的分离和测定匹伐他汀钙及含匹伐他汀钙制剂的光学异构体杂质。

Description

一种用液相色谱法分离测定匹伐他汀及其光学异构体的方法

技术领域

本发明属分析化学领域，具体涉及用液相色谱法分离测定匹伐他汀钙及其光学异构体的方法。

背景技术

匹伐他汀钙是一种降血酯药，由日本公司开发上市，分子式为C₅₀H₄₆CaF₂N₂O₈，其化学名为：双-[(3R，5S，6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸]钙盐，即匹伐他汀钙为药效成分。匹伐他汀钙分子中含有2个手性碳原子，在化学合成中会同时生成四种立体构型不同的光学异构体。除匹伐他汀钙外，其它三个光学异构体被列为匹伐他汀钙的杂质；匹伐他汀钙的光学异构体杂质的化学名分别为：双-[(3S，5R，6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸]钙盐(本发明简称为P1)、双-[(3R，5R，6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸]钙盐(本发明简称为P2)和双-[(3S，5S，6E)-7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)-3-喹啉基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸]钙盐(本发明简称为P3)。

对于匹伐他汀钙的三种光学异构体为杂质，在生产匹伐他汀钙过程中需要进行质量控制。含多个手性碳原子的化合物的光学异构体的分离一直是手性药物质量控制的难点，因此，实现匹伐他汀钙与其它三种光学异构体的分离测定在匹伐他汀钙质量控制方面具有现实意义。

根据文献(Mikio等，Bioorgananic & Medicinal Chemistry Letters 9(1999)2977～2982)报道，用ULTRON ES-OVM(150mm×4.6mm)手性色谱柱为分离柱，以0.02mol/L K₂HPO₄-乙腈-甲醇(100∶5∶10)为流动相，可以分离匹伐他汀钙的光学异构体，我们以匹伐他汀钙消旋体(含四种匹伐他汀钙光学异构体)进行了验证试验，结果表明，该方法不能将四种匹伐他汀钙光学异构体有效分离。经过反复试验，流动相调整为0.01mol/L K₂HPO₄(5％H₃PO₄调pH至6.0)-乙腈-异丙醇(100∶30∶4)，也只能分离成2个色谱峰(每一个峰包含一对对映体)。因此，用ULTRON ES-OVM(150mm×4.6mm)手性色谱柱测定的结果是不可靠的，因而无法对匹伐他汀钙进行可靠和有效的质量控制。

经反复试验发现，用CHIRALPAK-AD手性色谱柱(250mm×4.6mm)为分离柱，以正己烷∶乙醇(含1.0％三氟乙酸)＝92∶8为流动相，可以将匹伐他汀钙与其它三个光学异构体进行有效分离，从而可以准确控制匹伐他汀钙的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分离、检测出匹伐他汀钙及其它三个光学异构体杂质。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用手性色谱柱分离测定匹伐他汀或其钙盐及其光学异构体杂质的高效液相色谱方法，从而实现匹伐他汀钙与其光学异构体杂质(P1、P2、P3)的分离和测定。

本发明所说的用液相色谱法分离测定匹伐他汀或其钙盐及其光学异构体(杂质)的方法，是以三(3，5-二甲基苯基)-氨基甲酸酯直链淀粉[Amylose tris(3，5-dimethylphenylcarbamate)]为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇溶液为流动相，其中低级醇溶液中包含有机酸。这里所说的液相色谱法包括高效液相色谱法或高效液相色谱法-质谱法联用。

上述所说的手性色谱柱选自牌号为CHIRALPAK AD和CHIRALPAK AD-H的色谱柱。

本发明的低级醇选自以下化合物：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇，优选为乙醇或异丙醇。

本发明的方法，其流动相正己烷-低级醇溶液的体积比为96∶4～88∶12。

上述所说的低级醇溶液中包含的有机酸选自甲酸、乙酸和三氟乙酸，有机酸的浓度(V/V)占低级醇溶液的体积百分比为0.1～5％。

本发明所述的分离测定方法，可按以下方法实现：

1)取匹伐他汀钙或含匹伐他汀钙的制剂样品适量，用乙二醇二甲醚或含乙二醇二甲醚的有机溶剂溶解样品，并配制成每1ml含匹伐他汀钙0.2～10mg的样品溶液；

2)设置流动相的流速为0.5～1.5ml/min，流动相的流速优选为1ml/min，检测波长为235～260nm，最佳检测波长为245nm，色谱柱柱箱温度为20～50℃；柱箱温度最佳为40℃

3)取1)的样品溶液2～40μl，注入高效液相色谱仪，完成匹伐他汀钙与光学异构体的分离测定。

其中：

高效液相色谱仪：Agilent 1100型高效液相色谱仪

色谱柱：CHIRALPAK-AD手性色谱柱(250mm×4.6mm)

柱温：40℃

流动相：正己烷∶乙醇(含1.0％三氟乙酸)＝92∶8

流量：1ml/min

检测波长：245nm

进样体积：10μl

本发明采用CHIRALPAK-AD手性色谱柱，能够有效分离测定匹伐他汀钙的光学异构体；选用乙二醇二甲醚溶解样品，确保了溶液的稳定性；选用进样体积为10μl，柱温为40℃，提高了色谱峰的对称性。本发明解决了分离测定匹伐他汀钙及含匹伐他汀钙制剂的光学异构体的测定问题，从而保证了匹伐他汀钙及其制剂的质量可控。

附图说明

图1空白溶剂的高效液相色谱图

图2匹伐他汀钙消旋体的高效液相色谱图

图3匹伐他汀钙的高效液相色谱图

图4辅料空白的高效液相色谱图

图5匹伐他汀钙片的高效液相色谱图

具体实施方式：

实施例1

仪器与条件

美国Agilent 1100型高效液相色谱系统及工作站；自动进样；以CHIRALPAK-AD手性色谱柱(250mm×4.6mm)为分离柱；紫外检测波长：245nm；流动相：正己烷-乙醇溶液(含1.0％三氟乙酸)(92∶8)为流动相；柱温40℃。进样体积为10μl。

实验步骤

取匹伐他汀钙消旋体约25mg，置50ml量瓶中，加乙二醇二甲醚溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2。

图2中保留时间17.222分钟的色谱峰为匹伐他汀钙的色谱峰；13.610分钟的色谱峰为匹伐他汀钙对映体；14.749分钟和20.311分钟的两个色谱峰为匹伐他汀钙的另外两个光学异构体，它们互为对映体。

实施例2

取匹伐他汀钙约25mg，置50ml量瓶中，加乙二醇二甲醚溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

取供试品溶液，照实施例1的条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3。

图3证明，匹伐他汀钙的光学纯度达到原料药要求，本法可以用于匹伐他汀钙的质量监测。

实施例3

取匹伐他汀钙片适量，约相当于匹伐他汀钙25mg，置50ml量瓶中，加乙二醇二甲醚适量，振摇使溶解，并用乙二醇二甲醚稀释至刻度，摇匀，过滤，滤液作为供试品溶液。取供试品溶液，照实施例1的条件进行高效液相色谱分析，并同法进行辅料空白试验，结果见图4、图5。

图4证明，辅料空白不干扰测定，图5表明本法可以用于含匹伐他汀钙制剂的质量监测。

Claims (10)

1、一种用液相色谱法分离测定匹伐他汀或其钙盐或/和其光学异构体的方法，其特征在于：以三(3，5-二甲基苯基)-氨基甲酸酯直链淀粉为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇溶液为流动相，其中低级醇溶液中包含有机酸。

2、根据权利要求1所述的分离测定方法，手性色谱柱选自牌号为CHIRALPAK AD和CHIRALPAKAD-H的色谱柱。

3、根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的低级醇选自以下化合物：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇。

4、根据权利要求3所述的分离测定方法，所说的低级醇优选为乙醇或异丙醇。

5、根据权利要求1所述的分离测定方法，正己烷-低级醇溶液体积比为96∶4～88∶12。

6、根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的低级醇溶液中包含的有机酸选自甲酸、乙酸和三氟乙酸。

7、根据权利要求6所述的分离测定方法，低级醇溶液中的有机酸的浓度(V/V)为0.1～5％。

8、根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于：所说的方法包含以下步骤：

1)取匹伐他汀钙或含匹伐他汀钙的制剂样品适量，用乙二醇二甲醚或含乙二醇二甲醚的有机溶剂溶解样品，并配制成每1ml含匹伐他汀钙0.2～10mg的样品溶液；

2)设置流动相的流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为235～260nm，最佳检测波长为245nm，色谱柱柱箱温度为20～50℃；

3)取1)的样品溶液2～40μl，注入高效液相色谱仪，完成匹伐他汀钙与光学异构体的分离测定。

9、根据权利要求8所述的分离测定方法，流动相的流速优选为1ml/min。

10、根据权利要求8所述的分离测定方法，色谱柱柱箱温度优选为40℃。

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