CN1749283A - 贻贝多糖及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于水产品深加工领域，特别涉及一种贻贝多糖及制备方法，是以贻贝为原料制备而成的多糖粉末，粗多糖得率为6％～15％，纯化后多糖得率1％～4％，经苯酚－硫酸法测定贻贝多糖质量含量为70％～90％。生产工艺包括浸提，分离，沉降，提纯，干燥等步骤。本发明提供的产品贻贝多糖具有保健功效，本发明提供的生产工艺简单，易操作，多糖提取率高、纯度高。
Description
技术领域
本发明涉及水产品深加工领域，特别涉及一种贻贝多糖及制备方法。
背景技术
贻贝，北方俗称“海红”，南方称“淡菜”等，其味道鲜美，营养丰富，是一种集营养、保健、防病于一体的食品。贻贝科的种类很多，仅我国沿海就有30多种，其中经济价值较高的有10多种。紫贻贝、翡翠贻贝和厚壳贻贝是我国目前主要的养殖品种，其具有适应性强、生长快、产量高等特点。据文献报道，新西兰、俄罗斯科学家分别从贻贝中提取了治疗风湿关节炎和骨关节炎的药物，并生产了一种防止动脉粥样硬化的食品(宋广磊.贻贝的加工利用与开发。渔业现代化，2003，(2)：30-31)。仲燕、张建鹏等对贻贝抗菌肽的研究进展进行了综述性的报道(生命的化学，2004，24(2)：118-120)。易杨华、马明华等人鉴定了贻贝中的多糖MF4具有增强免疫和抗肿瘤的活性(专利号为200410024958.0)。贻贝之所以具有很好的保健功能，与其所含有的多种生物活性成分有着密切的关系，其中贻贝多糖起着非常重要的作用。贻贝多糖具有提高机体免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳以及预防各种心脑血管疾病等多种功效，因此贻贝多糖在保健品市场中具有广阔的发展前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有调节免疫功能、抗癌、抑制肿瘤作用的贻贝多糖。
本发明的另一个目的是提供了从贻贝中制备贻贝多糖的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种贻贝多糖的制备方法，包括如下步骤：
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，打碎成匀浆液，均质；或者将去壳的新鲜贻贝，清洗干净，真空冷冻干燥或鼓风干燥后，粉碎，过40目筛，得贻贝干粉；
b、提取：在匀浆液或者干粉中加入4～12倍体积的水，调节pH值为2～12，在30～60℃浸提2～36小时，同时辅助超声波振荡或/和紫外线照射0～3小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为0.05～10％的胰蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶或复合蛋白酶中的一种，进行酶解1～8小时，酶解完成后在80℃～100℃条件下灭酶8～10分钟；
d、离心：将酶解液低速离心15～30分钟，然后高速冷冻离心10～15分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用sevage法脱蛋白：在上清液中加入五分之一体积的氯仿，然后再加入氯仿体积五分之一的正丁醇，混合，剧烈振荡20分钟，离心，分去水层与溶剂层交界处的变性蛋白质即可，此操作需反复进行2～5次，取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；或采用三氯醋酸法脱蛋白：将上述所得离心上清液用草酸调节pH至7，然后再加适量3％三氯醋酸，静置过夜，弃沉淀；取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入4～16倍体积的60％～90％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，然后低速离心15～30分钟、高速冷冻离心10～15分钟，得到的离心沉降物即为贻贝粗多糖，粗多糖得率为6％～15％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于1～4倍体积的水，用分子量为10000～50000Da的超滤膜在0.1～0.5MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
h、浓缩干燥：将收集液浓缩干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，多糖得率1％～4％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为70％～90％；
其中，步骤a的真空冷冻干燥条件为：真空度为60～80Pa，板温为45℃～80℃；鼓风干燥温度为：30℃～60℃。在步骤b、c中用盐酸或柠檬酸调节2≤pH值＜7；用氢氧化钠或碳酸氢钠调节7＜pH值≤12；超声波振荡条件为：超声波功率为50w～500w，时间为0.5～3.0小时；紫外线照射条件为：紫外线波长为240nm～360nm，时间为0.5～1.5小时。步骤c中各种酶的酶解条件为：
酶用量％(质量) 温度℃ pH值 酶解时间 底物浓度％(质量)胰蛋
白酶： 1～3 30～60 7～9 1～6小时 0.1～3.0
中性蛋白酶：1～3 30～50 7～8 1～8小时， 0.1～10
菠萝蛋白酶：0.05～1 40～60 5～8 1～8小时 0.1～10
木瓜蛋白酶：1～4 30～60 3～6 1～8小时， 0.1～10
复合蛋白酶：0.1～3 30～60 7～9 1～8小时 0.1～10。
步骤d和f中低速离心时离心转数为1000～4000rpm，高速冷冻离心时离心转数为12000～20000rpm。步骤h中浓缩干燥为冷冻干燥：真空度为60～80Pa，板温为45℃～80℃；或者为鼓风干燥：温度为30℃～70℃；或者为喷雾干燥：进口温度为130℃～180℃，出口温度为30℃～90℃。
本发明方法与其他现有技术相比，具有如下优点：
1、利用水提或酸提或碱提法提取多糖时辅助以超声波振荡或/和紫外线照射，增加了细胞破碎程度，既可以杀灭微生物，也可以提高贻贝体内酶的活性提高了多糖得率；
2、采用均质的方法对原料进行预处理，使细胞破碎程度提高，有利于细胞内有效成分的流出，从而提高了多糖得率；
3、在采用sevage法或三氯醋酸法脱蛋白之前，先采用外源酶酶解，使蛋白质脱除的更加彻底，从而提高了多糖的纯度；
4、采用超滤法和葡聚糖凝胶柱层析的方法对多糖进行分离纯化，同时也起到脱盐的作用，提高了多糖的纯度；
5、采用冷冻干燥或鼓风干燥或喷雾干燥技术，避免了对贻贝有效成分的破坏，所得多糖产品较好的保持了贻贝的原有活性成分。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
下面的实施例可以帮助本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1.
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，打碎成匀浆液，均质；
b、提取：在匀浆液中加入12倍体积的水，在60℃浸提12小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为1％的胰蛋白酶，在30℃、pH为7的条件下进行酶解6小时，酶解完成后在80℃条件下灭酶10分钟；
d、离心：将酶解液于4000rpm下低速离心15分钟，然后于12000rpm下高速冷冻离心15分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用sevage法脱蛋白：在上清液中加入五分之一体积的氯仿，然后再加入氯仿体积五分之一的正丁醇，混合，剧烈振荡20分钟，离心，分去水层与溶剂层交界处的变性蛋白质即可，此操作需反复进行2次，取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入4倍体积的90％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，于4000rpm下低速离心15分钟，然后于12000rpm下高速冷冻离心15分钟，得离心沉降物为贻贝粗多糖，多糖得率为6％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于1倍体积的水，用分子量为10000Da的超滤膜在0.1MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
h、浓缩干燥：将收集液在真空度为60Pa，板温度为45℃的条件下浓缩干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，多糖得率2％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为80％。
实施例2.
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，打碎成匀浆液，均质；
b、提取：在匀浆液中加入4倍体积的水，在30℃浸提36小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为3％的胰蛋白酶，在60℃、并用氢氧化钠调节pH为9的条件下进行酶解1小时，酶解完成后在100℃条件下灭酶8分钟；
d、离心：将酶解液于2500rpm下低速离心30分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用sevage法脱蛋白：在上清液中加入五分之一体积的氯仿，然后再加入氯仿体积五分之一的正丁醇，混合，剧烈振荡20分钟，离心，分去水层与溶剂层交界处的变性蛋白质即可，此操作需反复进行3次，取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入16倍体积的75％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，于2500rpm下低速离心30分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，得到离心沉降物即为贻贝粗多糖，多糖得率为10％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于4倍体积的水，用分子量为25000Da的超滤膜在0.3MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
h、浓缩干燥：将收集液在真空度为80Pa，板温度为80℃的条件下浓缩干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，多糖得率4％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为85％。
实施例3.
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，打碎成匀浆液，均质；
b、提取：在匀浆液中加入8倍体积的水，在45℃浸提24小时，同时辅以波长为240nm的紫外线照射1.5小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为1％的中性蛋白酶，在30℃、pH为7的条件下进行酶解8小时，酶解完成后在80℃条件下灭酶10分钟；
d、离心：将酶解液于1000rpm下低速离心20分钟，然后于16000rpm下高速冷冻离心12分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用sevage法脱蛋白：在上清液中加入五分之一体积的氯仿，然后再加入氯仿体积五分之一的正丁醇，混合，剧烈振荡20分钟，离心，分去水层与溶剂层交界处的变性蛋白质即可，此操作需反复进行5次，取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入10倍体积的60％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，于1000rpm下低速离心20分钟，然后于16000rpm下高速冷冻离心12分钟，得离心沉降物即为贻贝粗多糖，多糖得率为15％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于2.5倍体积的水，用分子量为50000Da的超滤膜在0.5MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
i、浓缩干燥：将收集液在真空度为70Pa，温度为60℃的条件下浓缩干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，多糖得率3％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为90％。
实施例4.
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，在温度为50℃的条件下进行鼓风干燥后，粉碎，过40目筛，得贻贝干粉；
b、提取：加入干粉6倍体积的水，在50℃浸提18小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为0.05％的菠萝蛋白酶，在45℃、并用柠檬酸调节pH为6的条件下进行酶解5小时，酶解完成后在100℃条件下灭酶9分钟；
d、离心：将酶解液于4000rpm下低速离心20分钟，然后于18000rpm下高速冷冻离心12分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用三氯醋酸法脱蛋白：将上述所得离心上清液用草酸调节pH至7，然后再加适量3％三氯醋酸，静置过夜，弃沉淀；取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入8倍体积的75％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，于1000rpm下低速离心20分钟，然后于16000rpm下高速冷冻离心12分钟，得离心沉降物即为贻贝粗多糖，多糖得率为8％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于2倍体积的水，用分子量为30000Da的超滤膜在0.1MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
h、浓缩干燥：将收集液在真空度为75Pa，温度为70℃的条件下真空冷冻浓缩干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，多糖得率1％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为85％。
实施例5.
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，在温度为45℃的条件下进行鼓风干燥后，粉碎，过40目筛，得贻贝干粉；
b、提取：加入干粉10倍体积的水，在40℃、并用盐酸调节pH为3的条件下浸提20小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为1％的木瓜蛋白酶，在45℃、并用盐酸调节pH为3的条件下进行酶解4小时，酶解完成后在90℃条件下灭酶9分钟；
d、离心：将酶解液于4000rpm下低速离心15分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用三氯醋酸法脱蛋白：将上述所得离心上清液用草酸调节pH至7，然后再加适量3％三氯醋酸，静置过夜，弃沉淀；取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入6倍体积的75％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，于4000rpm下低速离心15分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，得离心沉降物即为贻贝粗多糖，多糖得率为10％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于3倍体积的水，用分子量为10000Da的超滤膜在0.4MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
h、浓缩干燥：将收集液在真空度为80Pa，温度为75℃的条件下真空冷冻浓缩干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，产品得率2％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为75％。
实施例6.
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，在真空度为65Pa、温度为80℃的条件下进行真空冷冻干燥后，粉碎，过40目筛，得贻贝干粉；
b、提取：加入干粉10倍体积的水，在40℃浸提20小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为3％的复合蛋白酶，在45℃、并用柠檬酸调节pH为2的条件下进行酶解4小时，酶解完成后在100℃条件下灭酶9分钟；
d、离心：将酶解液于4000rpm下低速离心15分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用三氯醋酸法脱蛋白：将上述所得离心上清液用草酸调节pH至7，然后再加适量3％三氯醋酸，静置过夜，弃沉淀；取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入10倍体积的65％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，于4000rpm下低速离心15分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，得离心沉降物即为贻贝粗多糖，多糖得率为13％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于3倍体积的水，用分子量为50000Da的超滤膜在0.1MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
h、浓缩干燥：将收集液在真空度为60Pa，温度为45℃的条件下真空冷冻浓缩干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，多糖得率3％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为85％。
实施例7.
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，打碎成匀浆液，均质；
b、提取：在匀浆液中加入12倍体积的水，在40℃、并用氢氧化钠调节pH为12的条件下浸提36小时，同时辅以功率为50W的超声波振荡3.0小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为3％的中性蛋白酶，在35℃、并用碳酸氢钠调节pH为12的条件下进行酶解2小时，酶解完成后在80℃条件下灭酶8分钟；
d、离心：将酶解液于4000rpm下低速离心15分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用三氯醋酸法脱蛋白：将上述所得离心上清液用草酸调节pH至7，然后再加适量3％三氯醋酸，静置过夜，弃沉淀；取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入6倍体积的85％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，于4000rpm下低速离心15分钟，然后于12000rpm下高速冷冻离心12分钟，得离心沉降物即为贻贝粗多糖，多糖得率为14％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于1倍体积的水，用分子量为20000Da的超滤膜在0.3MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
h、浓缩干燥：将收集液在进口温度为130℃、出口温度为30℃的条件下进行喷雾干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，多糖得率4％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为90％。
实施例8.
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，打碎成匀浆液，均质；
b、提取：在匀浆液中加入12倍体积的水，在30℃、用盐酸调节pH为6的条件下浸提2小时，同时辅以功率为500W的超声波振荡0.5小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为0.1％的复合蛋白酶，在55℃、并用碳酸氢钠调节pH为9的条件下进行酶解3小时，酶解完成后在100℃条件下灭酶8分钟；
d、离心：将酶解液于4000rpm下低速离心20分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用三氯醋酸法脱蛋白：将上述所得离心上清液用草酸调节pH至7，然后再加适量3％三氯醋酸，静置过夜，弃沉淀；取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入10倍体积的70％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，于4000rpm下低速离心20分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，得离心沉降物即为贻贝粗多糖，多糖得率为7％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于3倍体积的水，用分子量为30000Da的超滤膜在0.4MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
h、浓缩干燥：将收集液在温度为180℃、出口温度为90℃的条件下进行喷雾干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，产品得率2.5％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为80％。
实施例9.
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，打碎成匀浆液，均质；
b、提取：在匀浆液中加入10倍体积的水，在40℃、并用碳酸氢钠调节pH为9的条件下浸提3小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为1％的菠萝蛋白酶，在50℃、并用碳酸氢钠调节pH为8的条件下进行酶解3小时，酶解完成后在80℃条件下灭酶8分钟；
d、离心：将酶解液于4000rpm下低速离心15分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用三氯醋酸法脱蛋白：将上述所得离心上清液用草酸调节pH至7，然后再加适量3％三氯醋酸，静置过夜，弃沉淀；取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入8倍体积的85％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，于4000rpm下低速离心15分钟，然后于12000rpm下高速冷冻离心12分钟，得离心沉降物即为贻贝粗多糖，多糖得率为12％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于1倍体积的水，用分子量为20000Da的超滤膜在0.3MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
h、浓缩干燥：将收集液在温度为60℃的条件下进行鼓风干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，产品得率3％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为90％。
实施例10.
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，打碎成匀浆液，均质；
b、提取：在匀浆液中加入8倍体积的水，在60℃、并用碳酸氢钠调节pH为8的条件下浸提5小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为0.1％的菠萝蛋白酶，在60℃、并用碳酸氢钠调节pH为8的条件下进行酶解3小时，酶解完成后在80℃条件下灭酶10分钟；
d、离心：将酶解液于4000rpm下低速离心15分钟，然后于20000rpm下高速冷冻离心10分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用三氯醋酸法脱蛋白：将上述所得离心上清液用草酸调节pH至7，然后再加适量3％三氯醋酸，静置过夜，弃沉淀；取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入10倍体积的80％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，于4000rpm下低速离心15分钟，然后于12000rpm下高速冷冻离心12分钟，得离心沉降物即为贻贝粗多糖，粗多糖得率为10％。
Claims (8)
1、一种贻贝多糖的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
a、原料处理：将新鲜贻贝清洗干净，去壳，打碎成匀浆液，均质；或者将新鲜贻贝清洗干净，去壳，真空冷冻干燥或鼓风干燥后，粉碎，过40目筛，得贻贝干粉；
b、提取：在匀浆液或者干粉中加入4～12倍体积的水，调节pH值为2～12，在30～60℃浸提2～36小时，同时辅助超声波振荡或/和紫外线照射0～3小时；
c、酶解及灭酶：在浸提后的混合物中，添加质量比为0.05～10％的胰蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶或复合蛋白酶中的一种，进行酶解1～8小时，酶解完成后在80℃～100℃条件下灭酶8～10分钟；
d、离心：将酶解液低速离心15～30分钟，然后高速冷冻离心10～15分钟，弃沉淀，取上清液；
e、脱蛋白：采用sevage法脱蛋白：在上清液中加入五分之一体积的氯仿，然后再加入氯仿体积五分之一的正丁醇，混合，剧烈振荡20分钟，离心，分去水层与溶剂层交界处的变性蛋白质即可，此操作需反复进行2～5次，取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；或采用三氯醋酸法脱蛋白：将上述所得离心上清液用草酸调节pH至7，然后再加适量3％三氯醋酸，静置过夜，弃沉淀；取上清液，然后进行减压浓缩，得浓缩液；
f、醇沉：在上述所得浓缩液中加入4～16倍体积的60％～90％(重量)的酒精作为沉降介质，进行沉降分离，然后低速离心15～30分钟、高速冷冻离心10～15分钟，得到的离心沉降物即为贻贝粗多糖，粗多糖得率为6％～15％；
g、纯化：首先将贻贝粗多糖溶于1～4倍体积的水，用分子量为10000～50000Da的超滤膜在0.1～0.5MP的条件下进行超滤，将小分子物质分离掉；然后将上述经过超滤处理的溶液经过葡聚糖凝胶柱层析分离，得到有多糖吸收峰的收集液，合并收集液；
h、浓缩干燥：将收集液浓缩干燥，得淡黄色贻贝多糖成品，多糖得率1％～4％，经苯酚-硫酸法测定贻贝多糖质量含量为70％～90％。
2、根据权利要求1所述的贻贝多糖的制备方法，其特征在于步骤a的真空冷冻干燥条件为：真空度为60～80Pa，板温为45℃～80℃；鼓风干燥温度为：30℃～60℃。
3、根据权利要求1所述的贻贝多糖的制备方法，其特征在于在步骤b、c中用盐酸或柠檬酸调节2≤pH值＜7；用氢氧化钠或碳酸氢钠调节7＜pH值≤12。
4、根据权利要求1所述的贻贝多糖的制备方法，其特征在于步骤b中超声波振荡条件为：超声波功率为50w～500w，时间为0.5～3.0小时；紫外线照射条件为：紫外线波长为240nm～360nm，时间为0.5～1.5小时。
5、根据权利要求1所述的贻贝多糖的制备方法，其特征在于步骤c中各种酶的酶解条件为：
酶用量％(质量) 温度℃ pH 值酶解时间 底物浓度％(质量)
胰蛋白酶： 1～3 30～60 7～9 1～6小时 0.1～3.0
中性蛋白酶：1～3 30～50 7～8 1～8小时， 0.1～10
菠萝蛋白酶：0.05～1 40～60 5～8 1～8小时 0.1～10
木瓜蛋白酶：1～4 30～60 3～6 1～8小时， 0.1～10
复合蛋白酶：0.1～3 30～60 7～9 1～8小时 0.1～10。
6、根据权利要求1所述的贻贝多糖的制备方法，其特征在于步骤d和f中低速离心时离心转数为1000～4000rpm，高速冷冻离心时离心转数为12000～20000rpm。
7、根据权利要求1所述的贻贝多糖的制备方法，其特征在于步骤h中浓缩干燥为冷冻干燥：真空度为60～80Pa，板温为45℃～80℃；或者为鼓风干燥：温度为30℃～70℃；或者为喷雾干燥：进口温度为130℃～180℃，出口温度为30℃～90℃。
8、一种由权利要求1～7任意一项所述的贻贝多糖的制备方法制得的贻贝多糖。
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