CN1143866C - 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺 - Google Patents
一种分离纯化香菇菌多糖的工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1143866C CN1143866C CNB001144332A CN00114433A CN1143866C CN 1143866 C CN1143866 C CN 1143866C CN B001144332 A CNB001144332 A CN B001144332A CN 00114433 A CN00114433 A CN 00114433A CN 1143866 C CN1143866 C CN 1143866C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- purification
- lentinan
- peak
- molecular weight
- column chromatography
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
一种分离纯化香菇菌多糖的工艺，本发明涉及生物纯化技术，具体地说是关于香菇菌多糖分离纯化技术。本发明主要解决传统的分离纯化香菇菌多糖的方法只采取脱蛋白的方法，没有针对性地去除色素和小分子物质，因此纯度低。本发明技术方法是用氯仿：正丁醇萃取，去除杂蛋白后，采用超滤、离子交换柱层析和分子筛柱层析，进行多步骤分离纯化，其获取的香菇菌多糖为单一多糖，纯度达90%以上。
Description
本发明涉及生物分离纯化技术，具体地说是关于香菇菌多糖分离纯化的工艺。
在本发明提出之前，传统的分离纯化香菇菌多糖的方法，只在工艺上采取脱蛋白方法，没有针对性地去除色素及小分子物质，因而纯化后其纯度一般只能达到30％--40％，最多也只能达到70％左右，仅能制成一般口服制剂产品。
本发明的目的是对香菇菌粗多糖进行“三脱”(脱蛋白，脱色，脱盐)处理，并进行分子量截留超滤和柱层析纯化，以达到提高香菇菌多糖的纯度，使其能用于制备香菇菌多糖片剂、胶囊剂、针剂等多种制剂的原料药。
实现本发明的具体工艺方法，是从香菇菌深层培养的菌丝体中，提取生物活性成份香菇菌粗多糖，对其进行脱蛋白，脱盐，脱色素处理和柱层析纯化。具体工艺步骤：1.脱蛋白：取香菇菌粗多糖1份，加水2000ml于90～100℃加热30min后，3000rpm离心收取上清，加入等量氯仿∶正丁醇(1∶0.2～1∶0.25)，萃取杂蛋白5～10次，3000rpm离心取上层，大部分杂蛋白被去除。2.分子量截留超滤：(1)脱盐，用截留分子量(MW50,000)的超滤膜超滤脱盐及去除小分子杂质。(2)去除大分子杂质，用截留分子量(MW100,000)的超滤膜超滤去除大分子杂质，调节PH5.8～PH6.5. 3.柱层析三步法纯化：(1)阴离子交换柱DE-52柱层析，用PH5.8～PH6.5，0.01MPBS缓冲液(即磷酸缓冲液)平衡DE52柱，上样量40ML～80ML，流速1～3ml/min，测总糖，流出峰为多糖峰，色素及部分杂质吸附于交换柱中被分离去除；(2)阳离子交换柱CM52柱层析，用PH4.8～PH5.5，0.01M磷酸缓冲液平衡CM52柱进一步分离，流速0.1～0.3ml/min，测总糖，得到6个峰，峰6为所需多糖峰；(3)分子筛柱sephedax(葡聚糖凝胶)柱层析，将峰6浓缩5～10后倍后，上sephedax柱，流速0.1～0.3ml/min，测总糖，得到2个峰，峰1即为分离纯化后的香菇菌多糖峰，经高效液相检测为单一峰；4.干燥，将过sephedax G-100柱层析后的峰1经冷冻干燥后，即为香菇菌多糖精制纯品的干燥粉末。经高效液相检测，其为单一多糖成份，纯度达90％以上。
本发明与传统的分离纯化香菇菌多糖只单一脱蛋白相比较，充分地体现了其工艺的优越性及可操作性。其工艺实践证明，此方法获取的香菇菌多糖，主要成份为甘露聚糖肽，其多糖部分主要以甘露糖为主，具有抗病毒、抗肿瘤、抗细菌感染、诱生干扰素及增强机体免疫等作用。
下面结合附图及实施例，进一步描述本发明：
本发明附图1是分离纯化香菇菌多糖的工艺流程图，附图2是阴离子交换柱层析图谱，附图3是阳离子交换柱层析图谱，附图4是分子筛柱析图谱，附图5是高效液相检测图谱。
实施例实施操作步骤(见附图1)
1.脱蛋白
香菇菌粗多糖10g，加水2000ml于90℃加热30min后，3000rpm离心收取上清，加等量氯仿∶正丁醇(1∶0.22)萃取杂蛋白7次，3000rpm离心收取上层，大部分杂蛋白被去除。
2.超滤
①脱盐(及去除小分子杂质)
用截留分子量(MW50,000)的超滤膜超滤脱盐及去除小分子杂质。
②去除大分子杂质
用截留分子(MW100,000)的超滤膜超滤去除大分子杂质，调节PH6.0。
3.柱层析纯化(三步法)
①阴离子交换柱层析(DE-52)
用PH6.0，0.01MPBS缓冲液平衡DE52柱(4×20cm)，上样量50ml，流速2ml/min，测总糖，流出峰为多糖峰，色素及部分杂质吸附于交换柱中被分离去除(图2)
②阳离子交换柱层析
用PH5.0，0.01MPBS缓冲液平衡CM52柱(2×100cm)进一步分离，流速0.2ml/min，测总糖，得到6个峰，峰6为所需的多糖峰(图3)
③分子筛柱层析
将峰6浓缩5倍后，上Sephedax G-100(2×100cm)，流速0.1ml/min，测总糖，得到2个峰，峰1即为分离纯化后的香菇菌多糖峰(图4)，经高效液相检测为单一峰(图5)。
4.干燥
将过Sephedax G-100柱层析后的峰1经冷冻干燥后，即为香菇菌多糖精制纯品的干燥粉末。经高效液相检测，其为单一多糖成份，纯度达90％以上。
总之，本发明提供了一种分离纯化香菇菌多糖的新工艺方法，通过本发明制备得到的香菇菌多糖可作为多种制剂的原料药使用。
Claims (3)
1.一种分离纯化香菇菌多糖的工艺，它至少包括：对香菇菌粗多糖进行脱蛋白、脱色、脱盐处理及将其分子量截留超滤去除大小分子杂质和柱层析纯化，最后干燥；分子量截留超滤所截留的分子量范围为MW50,000-MW100,000，柱层析纯化所用分离柱为阴离子交换柱DE-52、阳离子交换柱CM52和葡聚糖凝胶柱。
2.根据权利要求1所述的一种分离纯化香菇菌多糖的工艺，其特征是：(1)脱蛋白：取香菇菌粗多糖1重量份，加水2000ml于90～100℃加热30min后，3000rpm离心收取上清，加入与收取上清等体积的氯仿∶正丁醇混合物氯仿∶正丁醇＝1∶0.2～1∶0.25，萃取杂蛋白5～10次，3000rpm离心取上层，大部分杂蛋白被去除；(2)分子量截留超滤：a.脱盐，用截留分子量MW50,000的超滤膜超滤脱盐及去除小分子杂质；b.去除大分子杂质，用截留分子量MW100,000的超滤膜超滤去除大分子杂质，调节PH5.8～PH6.5。
3.根据权利要求1所述的一种分离纯化香菇菌多糖的工艺，其特征是柱层析三步法纯化：(1)阴离子交换柱DE-52柱层析，用PH5.8～PH6.5，0.01M磷酸缓冲液平衡DE52柱，上样量40ML～80ML，流速1～3ml/min，测总糖，流出峰为多糖峰，色素及部分杂质吸附于交换柱中被分离去除；(2)阳离子交换柱CM52柱层析，用PH4.8～PH5.5，0.01M磷酸缓冲液平衡CM52柱进一步分离，流速0.1～0.3ml/min，测总糖，得到6个峰，峰6为所需多糖峰；(3)葡聚糖凝胶柱层析，将峰6浓缩5～10倍后，上葡聚糖凝胶柱，流速0.1～0.3ml/min，测总糖，得到2个峰，峰1即为分离纯化后的香菇菌多糖峰，经高效液相检测为单一峰。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB001144332A CN1143866C (zh) | 2000-03-20 | 2000-03-20 | 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB001144332A CN1143866C (zh) | 2000-03-20 | 2000-03-20 | 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1314417A CN1314417A (zh) | 2001-09-26 |
| CN1143866C true CN1143866C (zh) | 2004-03-31 |
Family
ID=4584117
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB001144332A Expired - Fee Related CN1143866C (zh) | 2000-03-20 | 2000-03-20 | 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1143866C (zh) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NO20014256D0 (no) | 2001-09-03 | 2001-09-03 | Bjoern Kristiansen | Fremstilling av immunstimulerende forbindelse |
| CN1322015C (zh) * | 2004-03-27 | 2007-06-20 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种提取荒漠藻多糖的方法 |
| CN1314711C (zh) * | 2004-03-27 | 2007-05-09 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种葛仙米多糖的提取方法 |
| US7514085B2 (en) | 2004-07-16 | 2009-04-07 | Medimush A/S | Immune modulating compounds from fungi |
| CN1296389C (zh) * | 2004-09-14 | 2007-01-24 | 武汉大学 | 一种具有抗肿瘤活性的三螺旋香菇多糖及其制法和用途 |
| WO2006133707A2 (en) | 2005-06-15 | 2006-12-21 | Medimush A/S | Anti-cancer combination treatment and kit-of-part |
| CN100354310C (zh) * | 2005-10-11 | 2007-12-12 | 大连轻工业学院 | 贻贝多糖及其制备方法 |
| CN101161112B (zh) * | 2006-10-10 | 2011-11-23 | 上海慈瑞医药科技有限公司 | 一种香菇多糖分离纯化的方法 |
| CN101278724B (zh) * | 2008-01-08 | 2010-11-10 | 山西大学 | 从红枣中分级提取有效成分的方法 |
| CN101265303B (zh) * | 2008-04-24 | 2010-06-02 | 吉林大学 | 一种以废弃香菇培养基为原料提取香菇多糖的方法 |
| CN101724088B (zh) * | 2009-11-24 | 2012-01-25 | 浙江工业大学 | 一种脱除灵芝粗多糖中蛋白质和色素的方法 |
| CN102070723A (zh) * | 2010-12-03 | 2011-05-25 | 曹庸 | 一种具有免疫活性双孢蘑菇多糖、制备方法及用途 |
| CN109001198A (zh) * | 2018-09-03 | 2018-12-14 | 艾美卫信生物药业（浙江）有限公司 | 脱氧胆酸钠沉淀法检测Hib结合疫苗中游离多糖的方法 |
| CN110483653B (zh) * | 2019-07-16 | 2022-03-18 | 南昌大学 | 一种具有免疫活性的香菇多糖组分的制备方法及产品和应用 |
| CN110551230B (zh) * | 2019-09-21 | 2022-02-15 | 天津赛诺制药有限公司 | 一种黄芪多糖的制备方法 |
-
2000
- 2000-03-20 CN CNB001144332A patent/CN1143866C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1314417A (zh) | 2001-09-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1143866C (zh) | 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺 | |
| CN101418327B (zh) | 高纯度5'核苷酸的生产新工艺 | |
| CN104861082B (zh) | 一种利用胆碱离子液双水相体系分离多糖和蛋白质的方法 | |
| WO2015103974A1 (zh) | 麦角硫因的提取及纯化方法 | |
| CN101029077B (zh) | 基因重组胰岛素前体纯化方法 | |
| CN106146652A (zh) | 一种发菜中藻蓝蛋白的提取纯化方法 | |
| CN103509133B (zh) | 一种香菇多糖快速分离的方法 | |
| CN101638427A (zh) | 一种病毒抗原的纯化方法 | |
| CN101455287A (zh) | 蜂毒肽的提纯方法 | |
| CN1962592A (zh) | 一种从中药虎杖中分离纯化白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法 | |
| CN108689849B (zh) | 山楂叶粗提物中同时分离黄酮类和绿原酸类化合物的方法 | |
| CN101089017A (zh) | 蜂毒肽的分离提纯方法 | |
| CN110256597B (zh) | 一种膜法降低灵芝多糖中重金属残留的方法 | |
| CN102477094A (zh) | 一种合成胸腺肽α1的分离纯化方法 | |
| CN107698691B (zh) | 一种从白花蛇舌草中分离纯化黄酮、多糖的系统及方法 | |
| CN1170836C (zh) | 一种制备高纯度阿卡波糖的方法 | |
| CN1473822A (zh) | 浮萍中黄酮和多糖的提取工艺 | |
| CN101143904A (zh) | 一种制备高纯度阿拉伯半乳聚糖的方法 | |
| CN107056913A (zh) | 一种制备蜂毒肽的方法 | |
| CN102190688A (zh) | 一种制备寡聚半乳糖醛酸的方法 | |
| CN1207310C (zh) | 一种半乳甘露聚糖肽的制取方法及产品 | |
| CN103642794B (zh) | 一种大量制备BCG-CpG-DNA的方法 | |
| CN101921346B (zh) | 一种香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法 | |
| CN1250567C (zh) | 钙离子结合蛋白的提纯方法 | |
| CN107033236A (zh) | 一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |