CN1962592A - 一种从中药虎杖中分离纯化白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从中药虎杖中分离纯化白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法，其中包括下述三个步骤：一、乙醇提取：将粉碎好的虎杖药材，采用浸泡法、超声提取等方法用乙醇提取，分离出提取液和药渣，备用；将药渣再用乙醇提取，所得提取液与第一次提取液合并，分离除去其中的固体杂质，备用；二、大孔吸附树脂柱预分离：将上述乙醇提取法所得提取物加至大孔吸附树脂柱上，分别用不同浓度的乙醇洗脱，得到提取物I和提取物II；三、高速逆流色谱法纯化：将上述得到的提取物I和提取物II分别用高速逆流色谱法进行纯化，即得到高纯度的白藜芦醇苷和白藜芦醇。本发明的方法与现有技术相比具有，工艺过程不需要使用卤代烃为溶剂，绿色环保，对环境无严重危害；操作简单快速，所制备白藜芦醇苷和白藜芦醇的纯度高等特点，具有很好的推广使用价值。

Description

一种从中药虎杖中分离纯化白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法

1、技术领域

本发明涉及一种中药制剂及其制备方法，具体地说是一种从中药虎杖中分离纯化白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法。

2、背景技术

白藜芦醇苷和白藜芦醇具有抗肿瘤、抗衰老、降低胆固醇、抑制血小板聚集、抗菌等多种有益于人体的生物学作用。

虎杖中富含白藜芦醇苷和白藜芦醇，已有文献报道从虎杖中提取分离白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法。

朱立贤[虎杖中白藜芦醇提取分离工艺的研究，安徽农业科学，2005年01期]利用单因素和正交试验对虎杖中白藜芦醇的提取条件，即乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取温度及次数进行了优化；同时，比较了大孔吸附树脂吸附法与有机溶剂萃取法富集分离提取液中白藜芦醇的效果。以料液比1∶20，加入浓度80％的乙醇，在60℃下提取5h为最佳提取条件。

苏文强[碱提取法从虎杖中分离白藜芦醇的研究，林产化工通讯，2004年01期]对虎杖中的白藜芦醇采用碱性水溶液提取、调节溶液pH沉降的方法加以分离。确立了白藜芦醇碱提酸沉的最佳提取条件：提取溶剂用氢氧化钠调节pH值为10，恒速、均匀搅拌下，加热煮沸1h，滤液用1mol/L的盐酸调pH值为3，放置沉淀，真空过滤或离心分离。

张敏[虎杖白藜芦醇提取工艺的初步研究，林产化工通讯，2004年03期]采用正交试验考察了溶剂种类、溶剂浓度、pH值、浸提时间4个因素的影响，研究了虎杖白藜芦醇粗品提取工艺的优化条件。选出的最佳提取工艺条件为：提取温度20℃，料液比(g∶mL)为1∶10，pH值为8，用80％乙醇提取24h。

向海艳[酶法提取虎杖中白藜芦醇新工艺研究，林产化学与工业，2004年04期]采用纤维素酶解法新工艺提取虎杖中白藜芦醇。即在乙醇提取前，先用纤维素酶处理虎杖粗粉。通过实验确定最佳的提取工艺条件为：提取温度50℃，酶解pH值5.0，酶解时间90min，纤维素酶与虎杖粗粉配比为1∶500。

刘树兴[白藜芦醇提取工艺的研究，食品与发酵工业，2004年12期]采用有机溶剂提取虎杖中白藜芦醇，通过对5种不同提取工艺的比较，得出以超声波提取与回流提取效果最好。进一步采用正交试验得出了各自的最适条件，分别为超声提取温度40℃，时间30min；回流提取温度75℃，时间6h，其他条件相同，溶剂为体积分数80％的乙醇+丙酮(两者体积比1∶1)，pH为4，料液比为1∶20(g∶mL)，分2次提取。

张建超[虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究，时珍国医国药，2003年04期]采用正交设计实验优选提取分离条件，醇提工艺的最优条件为：95％乙醇15倍量，回流提取3次，2h/次；水提工艺的最优条件为：水10倍量，回流提取3次，2h/次。

苏文强[中压柱层析法分离白藜芦醇的研究，林产化学与工业，2004年01期]对虎杖中的白藜芦醇进行了提取分离和含量测定，采用中压硅胶柱层析法分离白藜芦醇。确立了白藜芦醇最佳提取条件为：浸提液体积分数为95％，浸提温度60℃，料液比11∶1，回流提取3次，每次60min。

近年来也出现了与制备白藜芦醇苷和白藜芦醇有关的专利文献。

《白藜芦醇和白藜芦醇甙的制备方法》(中国专利，申请号01118461.2)用卤代烃硅胶柱层析进行第一步分离，然后用高速逆流色谱进行第二次分离得到目标产物。

《白藜芦醇和白藜芦醇甙分离方法及其应用》(中国专利，申请号00121100.5)对初提物进行乙酸乙酯萃取，然后进行硅胶柱层析，再以甲醇-氯仿为溶剂进行重结晶得到白藜芦醇苷，并通过第二次层析和重结晶得到白藜芦醇。

《虎杖苷和白藜芦醇的新制备方法》(中国专利，申请号200310112538.3)用聚酰胺层析法分离制备了虎杖苷和白藜芦醇。

上述方法或需要使用卤代烃为溶剂，对环境有严重危害，或需要多次反复柱层析，操作比较麻烦。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种对环境无害、操作简便、快速制备高纯度白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法。本发明一种从中药虎杖中分离纯化白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法，其工艺步骤如下：

1)提取液的制备：①取粉碎好的虎杖药材，加3-15倍量的50-95％的乙醇，常温浸泡0-24小时，加热回流0.5-3小时，分离出提取液备用；②加入药渣量1-10倍的提取溶剂，加热回流0.5-2小时，分离提取液备用；③合并提取液备用；

2)提取液的洗脱预提纯：①将提取物上大孔吸附树脂柱；②第一次使用0-5％的乙醇洗脱，洗脱液弃去；③第二次使用5-15％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙乙醇，得白藜芦醇粗提取物。

3)粗提取物的纯化：①采用体积比1∶5∶5的石油醚-乙酸乙酯-水的高速逆流色谱两相溶剂分离纯化白藜芦醇苷粗提取物，得到高纯度白藜芦醇苷，纯度在99％；②采用体积比为3∶5∶4∶6的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水高速逆流色谱的两相溶剂分离纯化白藜芦醇粗提取物，得到高纯度白藜芦醇，纯度在99.5％。

本发明的方法与现有制备白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法相比，具有如下优势：

1、本发明以大孔吸附树脂为载体、以乙醇为洗脱溶剂，以高速逆流色谱进行进一步纯化，工艺过程不需要使用卤代烃为溶剂，绿色环保，对环境无严重危害。

2、本发明不需要进行反复多次柱层析操作，操作简单快速，所制备白藜芦醇苷和白藜芦醇的纯度高。

附图说明

图1是大孔吸附树脂预分离得到的提取物I的高效液相色谱图；

图2是大孔吸附树脂预分离得到的提取物II的高效液相色谱图；

图3是采用石油醚-乙酸乙酯-水(1∶5∶5，v/v)为高速逆流色谱的两相溶剂系统分离纯化提取物I的高速逆流色谱图；

图4是方法采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶4∶6，v/v)为高速逆流色谱的两相溶剂系统分离纯化提取物II的高速逆流色谱图。

具体实施方式：

1、乙醇提取：取粉碎好的虎杖药材，加3-15倍量的50-95％的乙醇，常温浸泡0-24小时，加热回流0.5-3小时，分离出药液。加入药渣量1-10倍的提取溶剂，加热回流0.5-2小时，分离出药液。合并提取的药液，采用过滤、离心等方法除去提取液中的杂质。采用蒸馏或减压蒸馏的方法回收提取溶剂，得到虎杖的乙醇提取物。

大孔吸附树脂柱预分离：采用以下方法实现，即①将提取物上大孔吸附树脂柱；②第一次使用0-5％的乙醇洗脱，洗脱液弃去；③第二次使用5-15％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收醇，得提取物I；④第三次用15-95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收醇，得提取物II。

高速逆流色谱纯化：采用以下方法实现，即①采用石油醚-乙酸乙酯-水(1∶5∶5，v/v)为高速逆流色谱的两相溶剂系统分离纯化提取物I，得到高纯度白藜芦醇苷；②采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶4∶6，v/v)为高速逆流色谱的两相溶剂系统分离纯化提取物II，得到高纯度白藜芦醇。

实施例1：

取粉碎好的虎杖药材100g，加1.5L95％的乙醇，常温浸泡24小时，加热回流3小时，分离出药液。加入1L95％乙醇，加热回流2小时，分离出药液。合并提取的药液，采用过滤的方法除去提取液中的杂质。采用减压蒸馏的方法回收提取溶剂，得到虎杖的乙醇提取物。

将上述得到的乙醇提取物上D101大孔吸附树脂柱，以水冲先至无色，以15％乙醇洗脱至无色，收集15％乙醇洗脱液，减压蒸馏回收溶剂，得到提取物I。再以20％乙醇洗脱至无色，收集20％乙醇洗脱液，减压蒸馏回收溶剂，得到提取物II。

采用石油醚-乙酸乙酯-水(1∶5∶5，v/v)为高速逆流色谱的两相溶剂系统，以上相为固定相，以下相为流动相，对提取物I进行分离纯化，得到高纯度白藜芦醇苷；采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶4∶6，v/v)为高速逆流色谱的两相溶剂系统，以上相为固定相，下相为流动相，对提取物II进行分离纯化，得到高纯度白藜芦醇。

实施例2：

取粉碎好的虎杖药材100g，加1L95％的乙醇，常温浸泡10小时，超声波处理60min，分离出药液。加入1L95％乙醇，超声处理30min。合并提取的药液，过滤除去提取液中的杂质。采用减压蒸馏的方法回收提取溶剂，得到虎杖的乙醇提取物。

将上述得到的乙醇提取物上D101大孔吸附树脂柱，以水冲先至无色，以15％乙醇洗脱至无色，收集15％乙醇洗脱液，减压蒸馏回收溶剂，得到提取物I。再以20％乙醇洗脱至无色，收集20％乙醇洗脱液，减压蒸馏回收溶剂，得到提取物II。

采用石油醚-乙酸乙酯-水(1∶5∶5，v/v)为高速逆流色谱的两相溶剂系统，以上相为固定相，以下相为流动相，对提取物I进行分离纯化，得到高纯度白藜芦醇苷；采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶4∶6，v/v)为高速逆流色谱的两相溶剂系统，以上相为固定相，以下相为流动相，对提取物II进行分离纯化，得到高纯度白藜芦醇。

Claims (2)

1、一种从中药虎杖中分离纯化白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法，其特征在于工艺步骤为：

1)提取液的制备：①取粉碎好的虎杖药材，加3-15倍量的50-95％的乙醇，常温浸泡0-24小时，加热回流0.5-3小时，分离出提取液备用；②加入药渣量1-10倍的提取溶剂，加热回流0.5-2小时，分离提取液备用；③合并提取液备用；

2)提取液的洗脱预提纯：①将提取物上大孔吸附树脂柱；②第一次使用0-5％的乙醇洗脱，洗脱液弃去；③第二次使用5-15％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得白藜芦醇苷粗提取物；④第三次用15-95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得白藜芦醇粗提取物。

3)粗提取物的纯化：①采用体积比1∶5∶5的石油醚-乙酸乙酯-水的高速逆流色谱两相溶剂分离纯化白藜芦醇苷粗提取物，得到高纯度白藜芦醇苷，纯度在99％；②采用体积比为3∶5∶4∶6的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水高速逆流色谱的两相溶剂分离纯化白藜芦醇粗提取物，得到高纯度白藜芦醇，纯度在99.5％。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤一中的醇提取还包括了超声波提取法。