CN102250969A - 从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的工艺 - Google Patents

Abstract

一种从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法，是将干燥虎杖粉碎到通过80目筛≥90％，在加水浸润后的虎杖粉中加入专用微生物，在35～60℃下恒温发酵12～30小时，然后加入低温酵母，使温度降低到20-30℃，恒温发酵30-48小时；然后经乙醇提取，提取液浓缩，浓缩液用乙酸乙酯或乙酸丁酯1:1萃取，；再将所得有机层进氧化铝层析柱，再用80-90％乙醇洗脱，洗脱液浓缩至醇浓度至40-60%进行结晶与重结晶，静置5-8小时，然后过滤，重结晶，直至结晶颜色洁白为止。本发明其可以将白藜芦醇的纯度提高到99％以上，将产品收率从0.3％-0.5％提高到0.8％以上，并将白藜芦醇产品的颜色做白且无杂色，提高产品质量，并可缩短生产周期，提高生产效率。

Description

从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的工艺

技术领域

本发明涉及植物有效成分提取领域，具体地说，是提供一种从虎杖中制备白藜芦醇的工艺。

    背景技术

目前国内生产企业生产白藜芦醇的经典工艺路线是：虎杖药材—发酵—醇提浓缩—干柱柱层析(硅胶或氧化铝)—活性炭脱色—结晶与重结晶。此工艺路线的最终产品白藜芦醇的收率一般只有0.3-0.5％，颜色略带米黄或灰白色，白藜芦醇的纯度均在95-98%，其价格与纯度为99%的白藜芦醇有较大的差距。现有的提取方法所得白藜芦醇的纯度与虎杖白藜芦醇含量有较大的差别，如何提高收率，同时把产品颜色做白，提高产品质量是本领域技术人员期待解决的问题。中国专利 “一种从虎杖中提取纯化白藜芦醇的新方法”（ZL200510019788．1）公开的是采用大孔吸附树脂分离纯化白藜芦醇，中国专利“虎杖苷和白藜芦醇的新制备方法”（ZL200310112538．3）公开的是采用聚酰胺层析法分离纯化白藜芦醇，中国专利“从虎杖中提取纯度98%以上的白藜芦醇的工艺 ”（ZL 200810032067.8）是将虎杖药材经粉碎后由乙醇提取，浓缩回收乙醇后经虎杖专用酶在45℃~50℃恒温酶解4~5天；升温至85-100℃，维持2分钟，将虎杖专用酶灭活；过滤，滤渣即为经过转化的粗品白藜芦醇；再用虎杖专用絮凝剂絮凝沉淀，过滤，清液经氧化铝层析精制，洗脱液再经醇—纯化水结晶与重结晶和真空干燥得成品，可以将白藜芦醇的纯度提高到98％以上。目前99%以上白藜芦醇的生产技术还未见文献报道，

    发明内容

    本发明的目的就是提供一种从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法，其可以将白藜芦醇的纯度提高到99％以上，将产品收率从0.3％-0.5％提高到0.8％以上，并将白藜芦醇产品的颜色做白且无杂色，提高产品质量，真正应用于工业生产，可缩短生产周期，提高生产效率。

    本发明的技术方案包括以下步骤：

1) 干燥虎杖药材粉碎到通过80目筛≥90％；

     2)加水浸润虎杖粉，在浸润后的虎杖粉中加入专用微生物，置于温度控制在35～60℃的容器内，恒温发酵12～30小时，使白藜芦醇的类似物转化成虎杖甙或白藜芦醇，所述专用微生物为高温酵母+糖化酶；

3）加入低温酵母，调节发酵的温度，使温度降低到20-30℃，恒温发酵30-48小时，使虎杖甙转化成白藜芦醇；

4）加入虎杖重量4～5倍的80％乙醇，提取三次，每次1.5小时；

    5）将3次虎杖提取液浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩液体积：虎杖重量=1kg:2L；

    6）将浓缩液采用乙酸乙酯或乙酸丁酯 1:1萃取三次，得有机层即含白藜芦醇层；

    7）将有机层进氧化铝层析柱，自有液体流出时开始分段收集，自流出红至黑色液体时更换氧化铝柱，待全部液体进完氧化铝柱以后，再用用80-90％乙醇洗脱，至检测没有白藜芦醇时为止；

    8）将氧化铝柱上的洗脱液浓缩至醇浓度至40-60%进行结晶与重结晶，静置5-8小时，然后过滤，重结晶，直至结晶颜色洁白为止；

9)将结晶低温真空干燥得成品，白藜芦醇≥99％。

步骤2）中，专用微生物的加入量与虎杖的重量比为：专用微生物:虎杖=3:100。专用微生物为高温酵母+糖化酶，重量配比为：高温酵母:糖化酶=1:2。

步骤3）中，低温低温酵母的加入量与虎杖的重量比为：低温低温酵母:虎杖=1:100

本发明的优点：(1)提高了成品98％白藜芦醇的产量，将产量从0.3％～0.5％提高到0.8%以上，相比提高0.3～0.5％，即每吨同等原料可多得99％白藜芦醇3～5kg，创造新的价值7500元～12500元。(2)提高了99％白藜芦醇产品的色泽，去除了普通品种所带的米黄色至灰白色，进一步改善了产品颜色，使最终产品成为白色无杂色的高品质白藜芦醇。(3)不再使用三氯化碳等对人体有害的有机溶剂，取而代之以乙酸乙酯或乙酸丁酯萃取，非常容易操作，简化了生产操作与生产环节，使得大生产容易控制和实现，提高了劳动安全与保护。

 具体实施方式

  实施例1：

1) 取干燥虎杖400kg，粉碎到通过80目筛≥90％；

    2) 转化：加水320kg浸润虎杖粉；加入4kg高温酵母+8kg糖化酶至浸润后的虎杖粉中，搅拌均匀，置于温度控制在55℃的容器内，恒温发酵25小时。加入4kg低温酵母，调节发酵的温度，使温度降低到25℃，恒温发酵40小时醇；

3）乙醇提取：加入80％乙醇2000L；提取三次，每次1.5小时；

    4) 浓缩与回收乙醇：将3次虎杖提取液浓缩回收乙醇至无醇味，即浓缩液体积为200L。

    5）萃取：加入乙酸乙酯 200L萃取三次，得乙酸乙酯层；

    6)层析：将乙酸乙酯层加入氧化铝层析柱，自有液体流出时开始分段收集，自流出红至黑色液体时更换氧化铝柱；待全部液体进完氧化铝柱以后，再用用85％乙醇洗脱，至检测没有白藜芦醇时为止；

    (7)结晶与重结晶：将氧化铝柱上的洗脱液浓缩至醇浓度至48%进行结晶与重结晶，静置5-8小时，然后过滤，重结晶，直至结晶颜色洁白为止；

(8)将结晶低温真空干燥得产品3.215kg，经检测白藜芦醇含量为99.5％。

  实施例2：

  本实施例与实施例1不同的是加入萃取剂为乙酸丁酯200L。得产品3.17kg，含量为99.2%。

Claims (4)

1.一种从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1) 干燥虎杖药材粉碎到通过80目筛≥90％；

     2)加水浸润虎杖粉，在浸润后的虎杖粉中加入专用微生物，置于温度控制在35～60℃的容器内，恒温发酵12～30小时，使白藜芦醇的类似物转化成虎杖甙或白藜芦醇，所述专用微生物为高温酵母+糖化酶；

3）加入低温酵母，调节发酵的温度，使温度降低到20-30℃，恒温发酵30-48小时，使虎杖甙转化成白藜芦醇；

4）加入虎杖重量4～5倍的80％乙醇，提取三次，每次1.5小时；

    5）将3次虎杖提取液浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩液体积：虎杖重量=1kg:2L；

    6）将浓缩液采用乙酸乙酯或乙酸丁酯 1:1萃取三次，得有机层即含白藜芦醇层；

    7）将有机层进氧化铝层析柱，自有液体流出时开始分段收集，自流出红至黑色液体时更换氧化铝柱，待全部液体进完氧化铝柱以后，再用用80-90％乙醇洗脱，至检测没有白藜芦醇时为止；

    8）将氧化铝柱上的洗脱液浓缩至醇浓度至40-60%进行结晶与重结晶，静置5-8小时，然后过滤，重结晶，直至结晶颜色洁白为止；

9)将结晶低温真空干燥得成品，白藜芦醇≥99％。

2.根据权利要求1所述的从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法，其特征在于，步骤2）中，专用微生物的加入量与虎杖的重量比为：专用微生物:虎杖:=3:100。

3.根据权利要求1或2所述的从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法，其特征在于，专用微生物为高温酵母+糖化酶，重量配比为：高温酵母:糖化酶=1:2。

4.根据权利要求1所述的从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法，其特征在于，步骤3）中，低温低温酵母的加入量与虎杖的重量比为：低温低温酵母:虎杖=1:100。