CN1896255A - 微生物转化虎杖材料提取高纯白藜芦醇的工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种微生物转化虎杖材料提取高纯白藜芦醇的工艺，其采用专用微生物对虎杖材料进行生物转化，使虎杖白藜芦醇类似物转化为白藜芦醇，利用微波低温、快速提取技术进行白藜芦醇提取。本发明可提高虎杖材料中白黎芦醇含量10－20倍。同时大大缩短了提取时间，且提取效率高，避免了常规溶剂提取中白藜芦醇易分解的不足，同时采用层析、结晶等分离、精制技术，获得大于95％的白藜芦醇和一定纯度副产物大黄素两种产品。
Description
技术领域 本发明涉及生物转化技术及植物有效成份提取领域，特别是提供一种利用微生物转化虎杖材料来提取高纯白藜芦醇的工艺
背景技术 虎杖(Polygonum cuspidatum Sie bet Zucc)为蓼科蓼属小灌木，为我国传统中药，现代药学研究证明其白藜芦醇(Resveratrol)(3，4’，5-三羟基二苯乙烯)具有多种药理作用，主要表现在抗癌和治疗心血管疾病等方面。
查新发现，国内外关于“从虎杖中提取白藜芦醇”方面的文献和专利已有报道。如中国专利CN1251361与法国专利FR2795964的提取工艺为：在粉末状虎杖原料中加入复合酶在恒温下进行酶解反应，48-72小时获得酶解原料，再用溶剂萃取、浓缩获得含白藜芦醇的半成品，置24-120d时，并搅拌，然后用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，再经进一步纯化处理，制得白藜芦醇和白藜芦醇甙。《天津药学》(1999.11.07)发表的“虎杖的化学成份、药理作用与提取分离”是将虎杖根粗粉用乙醇回流提取，回收乙醇至浸膏状，加水溶解、过滤，水液浓缩，浓缩液用聚酰胺层析，再用20％乙醇洗脱得到白藜芦醇甙。《天津轻工业学院学报》(1999。04)发表的姚宝书等人的论文，介绍了从葡萄皮渣中提取白藜芦醇的研究；中国专利CN1239141公开了一种从葡萄茎根叶提取白藜芦醇产品。
以上可知，现有的提取白藜芦醇的工艺方法较多，但总的来说，现有工艺均技术相对陈旧，生产周期长，成本高，产品得率和质量不高，操作繁琐。
发明内容 为克服上述缺点，本发明提供一种从虎杖中提取白藜芦醇的工艺，其利用生物转化技术提高虎杖白藜芦醇含量，利用微波低温、快速提取技术，简化了工艺和操作程序，缩短了生产周期，降低了生产成本，提高了产品质量。
为达到上述目的，本发明的工艺步骤包括：
(1)先将干燥虎杖根茎粉碎，过80目筛，加入重量为虎杖重量4-5倍的水，用专用微生物在15℃-45℃下培养时间为24-84小时，使虎杖白藜芦醇类似物转化为白藜芦醇，专用微生物为酵母或酵母+青霉素产黄青霉种或酵母+短小芽孢杆菌。
(2)用40％乙醇与烃基醇混合溶剂微波萃取，40％乙醇∶烃基醇＝95∶5，微波频率为3000-2000MHz，萃取时间30-60分钟，温度40℃-60℃。
(3)离心过滤，然后在45℃-60℃，真空度小于65cmHg进行浓缩。
(4)柱层析分离，浓缩，结品，最后得纯度大于95％的白藜芦醇和一定纯度的副产物大黄索。
步骤(1)中，所述专用微生物最好为酵母时，加入量为虎杖和水混合液的1-5％。
步骤(1)中，所述专用微生物为酵母+青霉素产黄青霉种时，酵母∶青霉素产黄青霉种＝5-10∶1，酵母+青霉素产黄青霉种的加入量为虎杖和水混合液的1-5％。
步骤(1)中，所述专用微生物为酵母+短小芽孢杆菌时，酵母∶短小芽孢杆菌＝5-10∶1，酵母+短小芽孢杆菌的加入量为为虎杖和水混合液的1-5％。
步骤(2)中，所述烃基醇为5％4-甲基-2-戊醇。
本发明采用高效生物转化技术，提高虎杖材料中白黎芦醇含量10-20倍。同时，采用微波萃取法，与常规溶剂提取法相比，大大缩短了提取时间，且提取效率高，避免了常规溶剂提取中白藜芦醇易分解的不足，同时采用层析、结晶等分离、精制技术，获得大于95％的白藜芦醇和一定纯度副产物大黄素二种产品。
具体实施方式
实施例1：一种微生物转化虎杖材料提取高纯白藜芦醇的工艺，具体步骤为：
(1)将阴干虎杖根茎粉碎，过80目筛，称500g虎杖粉末，加入2000克水，混匀；
(2)在虎杖粉和水混合液中100克酵母，在温度30℃下培养28小时，使虎杖白藜芦醇类似物转化为白藜芦醇；
(3)用40％乙醇∶5％4-甲基-2-戊醇＝95∶5作为提取溶剂，用微波萃取，萃取时间1次/min×5次，每次中间间隔10min左右，并搅拌；
(4)离心过滤，过滤液在45℃-50℃温度、65cmHg真空度下进行浓缩。
(5)柱层折分离，浓缩、结晶、冷冻干燥，最后分别得纯度95.1％的白葬芦醇2.51g，一定纯度副产品大黄索3.03g。
实施例2：生物转化专用微生物采用酵母+青霉素产黄青霉种，酵母∶青霉素产黄青霉种＝5-10∶1，酵母+青霉素产黄青霉种的加入量为虎杖和水混合液的1-5％，其它步骤同实施例1。
实施例3：生物转化专用微生物采用酵母+短小芽孢杆菌，酵母∶短小芽孢杆菌＝5-10∶1，酵母+短小芽孢杆菌的加入量为为虎杖和水混合液的1-5％，其它步骤同实施例1。
Claims (5)
1、一种微生3物转化虎杖材料提取高纯白藜芦醇的工艺，其特征在于，工艺步骤包括：
(1)先将干燥虎杖根茎粉碎，过80目筛，加入重量为虎杖重量4-5倍的水，用专用微生物在15℃-45℃下培养时间为24-84小时，使虎杖白藜芦醇类似物转化为白藜芦醇，专用微生物为酵母或酵母+青霉素产黄青霉种或酵母+短小芽孢杆菌。
(2)用40％乙醇与烃基醇混合溶剂微波萃取，40％乙醇∶烃基醇＝95∶5，微波频率为3000-2000MHz，萃取时间30-60分钟，温度40℃-60℃。
(3)离心过滤，然后在45℃-60℃，真空度小于65cmHg进行浓缩。
(4)柱层析分离，浓缩，结品，最后得纯度大于95％的白藜芦醇和一定纯度的副产物大黄索。
2、根据权利要求1所述的微生物转化虎杖材料提取高纯白藜芦醇的工艺，其特征在于，步骤(1)中，所述专用微生物为酵母时，加入量为虎杖和水混合液的1-5％。
3、根据权利要求1所述的微生物转化虎杖材料提取高纯白藜芦醇的工艺，其特征在于，所述专用微生物为酵母+青霉素产黄青霉种时，酵母∶青霉素产黄青霉种＝5-10∶1，酵母+青霉素产黄青霉种的加入量为虎杖和水混合液的1-5％。
4、根据权利要求1所述的微生物转化虎杖材料提取高纯白藜芦醇的工艺，其特征在于，所述专用微生物为酵母+短小芽孢杆菌时，酵母∶短小芽孢杆菌＝5-10∶1，酵母+短小芽孢杆菌的加入量为为虎杖和水混合液的1-5％。
5、根据权利要求1所述的微生物转化虎杖材料提取高纯白藜芦醇的工艺，其特征在于，步骤(2)中，所述烃基醇为5％4-甲基-2-戊醇。
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