CN1314417A - 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺 - Google Patents

一种分离纯化香菇菌多糖的工艺 Download PDF

Info

Publication number
CN1314417A
CN1314417A CN 00114433 CN00114433A CN1314417A CN 1314417 A CN1314417 A CN 1314417A CN 00114433 CN00114433 CN 00114433 CN 00114433 A CN00114433 A CN 00114433A CN 1314417 A CN1314417 A CN 1314417A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peak
purification
lentinan
molecular weight
column chromatography
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN 00114433
Other languages
English (en)
Other versions
CN1143866C (zh
Inventor
王春生
吴晶
程汉强
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DIPU BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd WUHAN
Original Assignee
DIPU BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd WUHAN
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DIPU BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd WUHAN filed Critical DIPU BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd WUHAN
Priority to CNB001144332A priority Critical patent/CN1143866C/zh
Publication of CN1314417A publication Critical patent/CN1314417A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1143866C publication Critical patent/CN1143866C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

一种分离纯化香菇菌多糖的工艺,本发明涉及生物纯化技术,具体地说是关于香菇菌多糖分离纯化技术。本发明主要解决传统的分离纯化香菇菌多糖的方法只采取脱蛋白的方法,没有针对性地去除色素和小分子物质,因此纯度低。本发明技术方法是用氯仿:正丁醇萃取,去除杂蛋白后,采用超滤、离子交换柱层析和分子筛柱层析,进行多步骤分离纯化,其获取的香菇菌多糖为单一多糖,纯度达90%以上。

Description

一种分离纯化香菇菌多糖的工艺
本发明涉及生物分离纯化技术，具体地说是关于香菇菌多糖分离纯化的工艺。
在本发明提出之前，传统的分离纯化香菇菌多糖的方法，只在工艺上采取脱蛋白方法，没有针对性地去除色素及小分子物质，因而纯化后其纯度一般只能达到30％-40％，最多也只能达到70％左右，仅能制成一般口服制剂产品。
本发明的目的是对香菇菌粗多糖进行“三脱”(脱蛋白，脱色，脱盐)处理，并进行分子量截留超滤和柱层析纯化，以达到提高香菇菌多糖的纯度，使其能用于制备香菇菌多糖片剂、胶囊剂、针剂等多种制剂的原料药。
实现本发明的具体工艺方法，是从香菇菌深层培养的菌丝体中，提取生物活性成份香菇菌粗多糖，对其进行脱蛋白，脱盐，脱色素处理和柱层析纯化。具体工艺步骤：1．脱蛋白：取香菇菌粗多糖1份，加水2000ml于90～100℃加热30min后，3000rpm离心收取上清，加入等量氯仿∶正丁醇(1∶0.2～1∶0.25)，萃取杂蛋白5～10次，3000rpm离心取上层，大部分杂蛋白被去除。2．分子量截留超滤：(1)脱盐，用截留分子量(MW50,000)的超滤膜超滤脱盐及去除小分子杂质。(2)去除大分子杂质，用截留分子量(MW100,000)的超滤膜超滤去除大分子杂质，调节PH5.8～PH6.5.3．柱层析三步法纯化：(1)阴离子交换柱层析(DE-52)，用PH5.8～PH6.5,0.01MPBS缓冲液平衡DE52柱，上样量40ML～80ML，流速1～3ml/min，测总糖，流出峰为多糖峰，色素及部分杂质吸附于交换柱中被分离去除；(2)阳离子交换柱层析，用PH4.8～PH5.5,0.01MPBS缓冲液平衡CM52柱进一步分离，流速0.1～0.3ml/min，测总糖，得到6个峰，峰6为所需多糖峰；(3)分子筛柱层析，将峰6浓缩5～10后倍后，上Sephedax柱，流速0.1～0.3ml/min，测总糖，得到2个峰，峰1即为分离纯化后的香菇菌多糖峰，经高效液相检测为单一峰；4．干燥，将过sephedax G-100柱层析后的峰1经冷冻干燥后，即为香菇菌多糖精制纯品的干燥粉末。经高效液相检测，其为单一多糖成份，纯度达90％以上。
本发明与传统的分离纯化香菇菌多糖只单一脱蛋白相比较，充分地体现了其工艺的优越性及可操作性。其工艺实践证明，此方法获取的香菇菌多糖，主要成份为甘露聚糖肽，其多糖部分主要以甘露糖为主，具有抗病毒、抗肿瘤、抗细菌感染、诱生干扰素及增强机体免疫等作用。
下面结合附图及实施例，进一步描述本发明：
本发明附图1是分离纯化香菇菌多糖的工艺流程图，附图2是阴离子交换柱层析图谱，附图3是阳离子交换柱层析图谱，附图4是分子筛柱析图谱，附图5是高效液相检测图谱。
实施例实施操作步骤(见附图1)1．脱蛋白
香菇菌粗多糖10g，加水2000ml于90℃加热30min后，3000rpm离心收取上清，加等量氯仿∶正丁醇(1∶0.22)萃取杂蛋白7次，3000rpm离心收取上层，大部分杂蛋白被去除。2．超滤
①脱盐(及去除小分子杂质)
用截留分子量(MW50,000)的超滤膜超滤脱盐及去除小分子杂质。
②去除大分子杂质
用截留分子(MW100,000)的超滤膜超滤去除大分子杂质，调节PH6.0。3． 柱层析纯化(三步法)
①阴离子交换柱层析(DE-52)
用PH6.0,0.01MPBS缓冲液平衡DE52柱(4×20cm)，上样量50ml，流速2ml/min，测总糖，流出峰为多糖峰，色素及部分杂质吸附于交换柱中被分离去除(图2)
②阳离子交换柱层析
用PH5.0,0.01MPBS缓冲液平衡CM52柱(2×100cm)进一步分离，流速0.2ml/min，测总糖，得到6个峰，峰6为所需的多糖峰(图3)
③分子筛柱层析
将峰6浓缩5倍后，上Sephedax G-100(2×100cm)，流速0.1ml/min，测总糖，得到2个峰，峰1即为分离纯化后的香菇菌多糖峰(图4)，经高效液相检测为单一峰(图5)。
4．干燥
将过Sephedax G-100柱层析后的峰1经冷冻干燥后，即为香菇菌多糖精制纯品的干燥粉末。经高效液相检测，其为单一多糖成份，纯度达90％以上。
总之，本发明提供了一种分离纯化香菇菌多糖的新工艺方法，通过本发明制备得到的香菇菌多糖可作为多种制剂的原料药使用。

Claims (3)

1．一种分离纯化香菇菌多糖的工艺，它至少包括：对香菇菌粗多糖进行脱蛋白、脱色、脱盐处理及将其分子量截留超滤和柱层析纯化，最后干燥。
2．根据权利要求1所述的一种分离纯化香菇菌多糖的工艺，其特征是：(1)脱蛋白：取香菇菌粗多糖1份，加水2000ml于90～100℃加热30min后，3000rpm离心收取上清，加入等量氯仿∶正丁醇(1∶0.2～1∶0.25)，萃取杂蛋白5～10次，3000rpm离心取上层，大部分杂蛋白被去除。(2)分子量截留超滤：a．脱盐，用截留分子量(MW50,000)的超滤膜超滤脱盐及去除小分子杂质。b．去除大分子杂质，用截留分子量(MW100,000)的超滤膜超滤去除大分子杂质，调节PH5.8～PH6.5。
3．根据权利要求1所述的一种分离纯化香菇菌多糖的工艺，其特征是柱层析三步法纯化：(1)阴离子交换柱层析(DE-52)，用PH5.8～PH6.5,0.01MPBS缓冲液平衡DE52柱，上样量40ML～80ML，流速1～3ml/min，测总糖，流出峰为多糖峰，色素及部分杂质吸附于交换柱中被分离去除；(2)阳离子交换柱层析，用PH4.8～PH5.5,0.01MPBS缓冲液平衡CM52柱进一步分离，流速0.1～0.3ml/min，测总糖，得到6个峰，峰6为所需多糖峰；(3)分子筛柱层析，将峰6浓缩5～10倍后，上sephedax柱，流速0.1～0.3ml/min，测总糖，得到2个峰，峰1即为分离纯化后的香菇菌多糖峰，经高效液相检测为单一峰。
CNB001144332A 2000-03-20 2000-03-20 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺 Expired - Fee Related CN1143866C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB001144332A CN1143866C (zh) 2000-03-20 2000-03-20 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB001144332A CN1143866C (zh) 2000-03-20 2000-03-20 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1314417A true CN1314417A (zh) 2001-09-26
CN1143866C CN1143866C (zh) 2004-03-31

Family

ID=4584117

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB001144332A Expired - Fee Related CN1143866C (zh) 2000-03-20 2000-03-20 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN1143866C (zh)

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1296389C (zh) * 2004-09-14 2007-01-24 武汉大学 一种具有抗肿瘤活性的三螺旋香菇多糖及其制法和用途
CN1314711C (zh) * 2004-03-27 2007-05-09 中国科学院水生生物研究所 一种葛仙米多糖的提取方法
CN1322015C (zh) * 2004-03-27 2007-06-20 中国科学院水生生物研究所 一种提取荒漠藻多糖的方法
CN100354310C (zh) * 2005-10-11 2007-12-12 大连轻工业学院 贻贝多糖及其制备方法
US7514085B2 (en) 2004-07-16 2009-04-07 Medimush A/S Immune modulating compounds from fungi
CN101265303B (zh) * 2008-04-24 2010-06-02 吉林大学 一种以废弃香菇培养基为原料提取香菇多糖的方法
CN101278724B (zh) * 2008-01-08 2010-11-10 山西大学 从红枣中分级提取有效成分的方法
CN102070723A (zh) * 2010-12-03 2011-05-25 曹庸 一种具有免疫活性双孢蘑菇多糖、制备方法及用途
CN101161112B (zh) * 2006-10-10 2011-11-23 上海慈瑞医药科技有限公司 一种香菇多糖分离纯化的方法
CN101724088B (zh) * 2009-11-24 2012-01-25 浙江工业大学 一种脱除灵芝粗多糖中蛋白质和色素的方法
US8758768B2 (en) 2001-09-03 2014-06-24 Glycanova As Process for production of fungal extracellular immune stimulating compounds
US9072776B2 (en) 2005-06-15 2015-07-07 Glycanova As Anti-cancer combination treatment and kit-of-parts
CN109001198A (zh) * 2018-09-03 2018-12-14 艾美卫信生物药业（浙江）有限公司 脱氧胆酸钠沉淀法检测Hib结合疫苗中游离多糖的方法
CN110483653A (zh) * 2019-07-16 2019-11-22 南昌大学 一种具有免疫活性的香菇多糖组分的制备方法及产品和应用
CN110551230A (zh) * 2019-09-21 2019-12-10 天津赛诺制药有限公司 一种黄芪多糖的制备方法

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8758768B2 (en) 2001-09-03 2014-06-24 Glycanova As Process for production of fungal extracellular immune stimulating compounds
US10471135B2 (en) 2001-09-03 2019-11-12 Glycanova As Production of fungal extracellular immune stimulating compounds
US9249438B2 (en) 2001-09-03 2016-02-02 Glycanova As Production of fungal extracellular immune stimulating compounds
CN1314711C (zh) * 2004-03-27 2007-05-09 中国科学院水生生物研究所 一种葛仙米多糖的提取方法
CN1322015C (zh) * 2004-03-27 2007-06-20 中国科学院水生生物研究所 一种提取荒漠藻多糖的方法
US7514085B2 (en) 2004-07-16 2009-04-07 Medimush A/S Immune modulating compounds from fungi
US7682615B2 (en) 2004-07-16 2010-03-23 Beka Holding As Immune modulating compounds from fungi
CN1296389C (zh) * 2004-09-14 2007-01-24 武汉大学 一种具有抗肿瘤活性的三螺旋香菇多糖及其制法和用途
US9072776B2 (en) 2005-06-15 2015-07-07 Glycanova As Anti-cancer combination treatment and kit-of-parts
CN100354310C (zh) * 2005-10-11 2007-12-12 大连轻工业学院 贻贝多糖及其制备方法
CN101161112B (zh) * 2006-10-10 2011-11-23 上海慈瑞医药科技有限公司 一种香菇多糖分离纯化的方法
CN101278724B (zh) * 2008-01-08 2010-11-10 山西大学 从红枣中分级提取有效成分的方法
CN101265303B (zh) * 2008-04-24 2010-06-02 吉林大学 一种以废弃香菇培养基为原料提取香菇多糖的方法
CN101724088B (zh) * 2009-11-24 2012-01-25 浙江工业大学 一种脱除灵芝粗多糖中蛋白质和色素的方法
CN102070723A (zh) * 2010-12-03 2011-05-25 曹庸 一种具有免疫活性双孢蘑菇多糖、制备方法及用途
CN109001198A (zh) * 2018-09-03 2018-12-14 艾美卫信生物药业（浙江）有限公司 脱氧胆酸钠沉淀法检测Hib结合疫苗中游离多糖的方法
CN110483653A (zh) * 2019-07-16 2019-11-22 南昌大学 一种具有免疫活性的香菇多糖组分的制备方法及产品和应用
CN110483653B (zh) * 2019-07-16 2022-03-18 南昌大学 一种具有免疫活性的香菇多糖组分的制备方法及产品和应用
CN110551230A (zh) * 2019-09-21 2019-12-10 天津赛诺制药有限公司 一种黄芪多糖的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN1143866C (zh) 2004-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1143866C (zh) 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺
CN100424098C (zh) 一种灵芝孢子多糖的精制工艺
CN101307112B (zh) 一种冬虫夏草发酵菌丝体多糖的提取方法
CN104861082B (zh) 一种利用胆碱离子液双水相体系分离多糖和蛋白质的方法
CN102532254A (zh) 一种从水稻种子中分离纯化重组人血清白蛋白的方法
WO2015103974A1 (zh) 麦角硫因的提取及纯化方法
CN101029077B (zh) 基因重组胰岛素前体纯化方法
CN102351917A (zh) 一种从棉籽粕中提取棉籽糖的方法
CN103509133B (zh) 一种香菇多糖快速分离的方法
CN107698691B (zh) 一种从白花蛇舌草中分离纯化黄酮、多糖的系统及方法
CN101455287A (zh) 蜂毒肽的提纯方法
CN1477130A (zh) 香菇菌多糖的分离纯化工艺
CN101089017A (zh) 蜂毒肽的分离提纯方法
CN102477094A (zh) 一种合成胸腺肽α1的分离纯化方法
CN110256597B (zh) 一种膜法降低灵芝多糖中重金属残留的方法
CN1473822A (zh) 浮萍中黄酮和多糖的提取工艺
CN101143904A (zh) 一种制备高纯度阿拉伯半乳聚糖的方法
CN1170836C (zh) 一种制备高纯度阿卡波糖的方法
CN107056913A (zh) 一种制备蜂毒肽的方法
CN1207310C (zh) 一种半乳甘露聚糖肽的制取方法及产品
CN107033236A (zh) 一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法
CN107298711A (zh) 一种柱层析方法分离牛初乳中过敏因子β‑乳球蛋白
CN1250567C (zh) 钙离子结合蛋白的提纯方法
CN105037451B (zh) 一种超滤处理黄霉素发酵液的方法
CN101914165B (zh) 一种生物多糖的径向流色谱分离纯化方法

Legal Events

Date Code Title Description
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C06 Publication
PB01 Publication
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C19 Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee