CN1477130A - 香菇菌多糖的分离纯化工艺 - Google Patents
香菇菌多糖的分离纯化工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1477130A CN1477130A CNA021389624A CN02138962A CN1477130A CN 1477130 A CN1477130 A CN 1477130A CN A021389624 A CNA021389624 A CN A021389624A CN 02138962 A CN02138962 A CN 02138962A CN 1477130 A CN1477130 A CN 1477130A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lentinan
- filtration
- molecular weight
- gained
- extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种香菇菌多糖的分离纯化工艺，主要解决现有香菇菌多糖含量低、难溶于水、分子量不确定而导致其不能充分发挥医疗效果的不足。该工艺以深层发酵获得的香菇菌多糖粗品为原料，经过热水抽提、微米级过滤器预滤、分子量截留值为5～10万道尔顿的超滤膜级分、分子量截留值为0.6～5万道尔顿的超滤膜浓缩、常规过滤器终滤、乙醇沉淀以及干燥等步骤，而获得质量稳定、有效成份含量高、易溶于水、且平均分子量被严格控制在4～9万道尔顿的香菇菌多糖粉，而该平均分子量正是临床所需要的。所制得的香菇菌多糖粉可直接用作口服制剂，也可作为肌肉注射制剂的原料。
Description
技术领域
本发明涉及香菇多糖的提取技术，具体地指一种从深层发酵获得的香菇菌多糖粗品中分离纯化香菇菌多糖的工艺。
背景技术
目前，香菇菌多糖由于其具有增强人体T淋巴细胞活性、调节人体体液免疫功能、激活人体抗肿瘤因子等特点，而被作为一种生物反应调节剂广泛应用于病毒性肝炎、免疫功能低下、以及恶性肿瘤等的治疗和辅助治疗中。但现有用于临床上的香菇菌多糖制剂特别是口服制剂大都存在着如下的不足：制剂中香菇菌多糖的含量太低，一般是在15～28％的范围内，其中的杂质成份过高，使得其有效成份既不纯也不稳定，从而影响治疗效果；同时，制剂中香菇菌多糖的专属性太差，分子量未严格控制，从1万至100万道尔顿不等，其中相当一部分香菇菌多糖的分子量在10万道尔顿之上，与临床治疗需要平均4～9万道尔顿的分子量相差甚远，其分子量过小则代谢太快不利于在人体内驻留吸收，其分子量过大则水溶性变差也不易于为人体吸收，这些均使得其治病防病的疗效大打折扣。为了解决上述问题，授权公告号为CN1032428C的中国发明专利说明书公开了一种香菇多糖或香菇菌多糖的提取新工艺，该工艺采用单级超滤器截留、乙醇沉淀来提取香菇多糖，虽然可以提高香菇菌多糖的含量，但其收率仅为1～1.5％，且香菇多糖的分子量特别是大分子量的香菇多糖未加控制，其中的无效成份和杂质均较多，其质量和疗效仍不理想。公开号为CN1140202A的中国发明专利申请公开说明书提供了一种从深层发酵获得的香菇多糖粗品中提取注射用香菇多糖的方法，该方法采用不同浓度的醇析、醇沉步骤来制得水溶性香菇多糖，虽然也能提高香菇多糖的含量，但该方法所用设备体积大，溶剂回收量大，所得香菇多糖的分子量也未加控制，同样会影响其质量和疗效。
发明内容
本发明的目的就是要提供一种香菇菌多糖的分离纯化工艺，使采用该工艺制得的香菇菌多糖质量稳定、有效成份含量高、且分子量被严格控制在临床治疗需要范围内。
为实现上述目的，本发明所提出香菇菌多糖的分离纯化工艺，包括以下步骤：
1)取经深层发酵获得的重量含量为15～28％的香菇菌多糖干粉，用热水抽提，然后静置分层，去除下层沉淀物，得到茶色的上层抽提液。在此步骤中，含量偏低、平均分子量未控制的香菇菌多糖干粉内的大部分不溶于水的杂质被清除出去。
2)用滤膜孔径为5～15微米的过滤器对所得上层抽提液进行预先过滤，进一步去除不溶于水的杂质，得到澄清的预滤抽提液。在此步骤中，残留在上层抽提液内的极少量不溶于水的杂质被彻底去掉，有利于香菇菌多糖的纯化，也可以防止这些残存杂质对后续步骤中的超滤膜产生损害，延长超滤膜的使用寿命。
3)用分子量截留值为5～10万道尔顿的超滤膜对所得预滤抽提液进行级分，去除截留液，得到绝大部分香菇菌多糖分子量在10万道尔顿以下的超滤级分液。在此步骤中，预滤抽提液内大部分分子量在10万道尔顿以上、水溶性差的香菇菌多糖及其他杂质被截留掉了。
4)用分子量截留值为0.6～5万道尔顿的超滤膜对所得超滤级分液进行浓缩，去除超滤液，得到绝大部分香菇菌多糖分子量在0.6～10万道尔顿之间的截留浓缩液。在此步骤中，超滤级分液内大部分分子量在0.6万道尔顿以下、在人体内驻留时间太短的香菇菌多糖也被过滤掉了。
5)将所得截留浓缩液静置一段时间，再用常规过滤器作最后的过滤，去除残留在其中的极少数大分子量香菇菌多糖混浊物，得到透明浓缩液。由于一般超滤膜的截留率在85～90％之间，经过上面超滤级分和浓缩的截留浓缩液内仍然会残存少量大分子量的混浊物，若不除去，会使最终产品的平均分子量偏高，水溶性变差，防治疾病的效果降低。而在此步骤中，截留浓缩液内的大分子量杂质可被彻底清除干净。
6)将所得透明浓缩液用浓度为20～50％的乙醇进行醇析，醇析的沉淀物再用浓度为80～99.5％的乙醇进行洗涤，最后经过干燥即得平均分子量控制在4～9万道尔顿之间、完全满足临床需要的纯化香菇菌多糖粉。经测定其香菇菌多糖的重量含量在50～80％之间，收得率为5～8％，溶于水中清澈透明。
本发明的优点在于：采用级分和浓缩两级特殊膜径的超滤膜处理工艺对原料香菇菌多糖干粉水提液进行处理后，所得纯化香菇菌多糖的平均分子量可稳定地控制在临床治疗需要的范围内，而在这两级超滤膜处理工艺前后采用的预先过滤和最后过滤处理工艺则可以将其中不溶于水的杂质和大分子量的香菇多糖混浊物彻底清除干净。从而使所得成品纯度高、质量好、易溶于水，经薄层色谱法检测与标准品甘露糖、葡萄糖显相同颜色斑点，按中国药典2000年版二部附录VII测定其平均分子量为4～9万道尔顿，而这正是临床需要的分子量。同时本发明还具有分离纯化工艺简短、有机溶媒单一、无公害污染、收得率高等特点，可直接用作口服制剂，也可作为肌肉注射制剂的原料。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明：
本发明所述的香菇菌多糖的分离纯化工艺，包括以下步骤：
1)取经深层发酵获得的重量含量为15～28％的香菇菌多糖干粉，与蒸馏水混合，香菇菌多糖干粉与蒸馏水的重量比为1∶20～100，较好的重量比为1∶30～50，蒸馏水的温度控制在60～70℃，在搅拌状态下提取4～5小时，这样可使香菇菌多糖充分溶解在水中，提高原料的提取效率。停止搅拌将混合液先置于室温，然后移入1～10℃的温度条件下静置分层，这样可快速去除下层沉淀物，而得到茶色的上层抽提液。
2)用滤膜孔径为5～15微米的过滤器对所得上层抽提液进行预先过滤。此过滤器可选用蜂房式过滤器，滤膜孔径取10微米为佳，过滤面积为0.1平方米，透水量为每小时20升。这样可进一步去除不溶于水的杂质，得到澄清的预滤抽提液。
3)用分子量截留值为5～10万道尔顿的超滤膜组件对所得预滤抽提液进行级分。级分用超滤膜组件的过滤面积为0.1平方米，透水量为每小时10升。预滤抽提液的温度控制在10～45℃，压力控制在0.1～0.2Mpa。去除截留液，就可得到绝大部分香菇菌多糖分子量在10万道尔顿以下的超滤级分液。
4)用分子量截留值为0.6～5万道尔顿的超滤膜组件对所得超滤级分液进行浓缩。浓缩用超滤膜组件的过滤面积为0.1平方米，透水量为每小时10升。超滤级分液的温度控制在10～45℃，压力控制在0.1～0.2Mpa。去除超滤液，就可得到绝大部分香菇菌多糖分子量在0.6～10万道尔顿之间的截留浓缩液。保持上述适宜的超滤级分和超滤浓缩参数，可稳定滤速，确保得到满足平均分子量最佳要求的香菇菌多糖。
5)将所得截留浓缩液在温度为1～10℃的条件下静置一段时间，再用常规的中速滤纸作最后的过滤，即可彻底去除残留在其中的极少数大分子量香菇菌多糖混浊物，得到透明浓缩液。
6)将所得透明浓缩液在搅拌状态下用浓度为40％的乙醇进行醇析，使其充分沉淀，过滤醇析沉淀物并抽干，然后用浓度为99％的乙醇进行浸泡洗涤，再行过滤并抽干，最后经过30～50℃干燥，即得平均分子量控制在4～9万道尔顿之间的香菇菌多糖粉成品。
Claims (6)
1.一种香菇菌多糖的分离纯化工艺，包括以下步骤：
1)取经深层发酵获得的重量含量为15～28％的香菇菌多糖干粉，用热水抽提，然后静置分层，去除下层沉淀物，得到茶色的上层抽提液；
2)用滤膜孔径为5～15微米的过滤器对所得上层抽提液进行预先过滤，进一步去除不溶于水的杂质，得到澄清的预滤抽提液；
3)用分子量截留值为5～10万道尔顿的超滤膜对所得预滤抽提液进行级分，去除截留液，得到绝大部分香菇菌多糖分子量在10万道尔顿以下的超滤级分液；
4)用分子量截留值为0.6～5万道尔顿的超滤膜对所得超滤级分液进行浓缩，去除超滤液，得到绝大部分香菇菌多糖分子量在0.6～10万道尔顿之间的截留浓缩液；
5)将所得截留浓缩液静置一段时间，再用常规过滤器作最后的过滤，去除残留在其中的极少数大分子量香菇菌多糖混浊物，得到透明浓缩液；
6)将所得透明浓缩液用浓度为20～50％的乙醇进行醇析，醇析的沉淀物再用浓度为80～99.5％的乙醇进行洗涤，最后经过干燥即得平均分子量控制在4～9万道尔顿之间的香菇菌多糖粉。
2.根据权利要求1所述的香菇菌多糖的分离纯化工艺，其特征在于：所说的步骤1)中香菇菌多糖干粉与水的重量比为1∶20～100，水温控制在60～70℃，在搅拌状态下提取4～5小时，在1～10℃静置分层。
3.根据权利要求1所述的香菇菌多糖的分离纯化工艺，其特征在于：所说的步骤2)中选用滤膜孔径为10微米的蜂房式过滤器，过滤面积为0.1平方米，透水量为每小时20升。
4.根据权利要求1所述的香菇菌多糖的分离纯化工艺，其特征在于：所说的步骤3)中级分用超滤膜的过滤面积为0.1平方米，透水量为每小时10升；预滤抽提液的温度为10～45℃，压力为0.1～0.2Mpa。
5.根据权利要求1所述的香菇菌多糖的分离纯化工艺，其特征在于：所说的步骤4)中浓缩用超滤膜的过滤面积为0.1平方米，透水量为每小时10升；超滤级分液的温度为10～45℃，压力为0.1～0.2Mpa。
6.根据权利要求1所述的香菇菌多糖的分离纯化工艺，其特征在于：所说的步骤5)中将截留浓缩液在温度为1～10℃的条件下静置一段时间，再用中速滤纸过滤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02138962 CN1204148C (zh) | 2002-08-22 | 2002-08-22 | 香菇菌多糖的分离纯化工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02138962 CN1204148C (zh) | 2002-08-22 | 2002-08-22 | 香菇菌多糖的分离纯化工艺 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1477130A true CN1477130A (zh) | 2004-02-25 |
| CN1204148C CN1204148C (zh) | 2005-06-01 |
Family
ID=34147321
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 02138962 Expired - Fee Related CN1204148C (zh) | 2002-08-22 | 2002-08-22 | 香菇菌多糖的分离纯化工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1204148C (zh) |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100453559C (zh) * | 2005-11-04 | 2009-01-21 | 杨勇杰 | 一种提取香菇多糖的方法 |
| US7514085B2 (en) | 2004-07-16 | 2009-04-07 | Medimush A/S | Immune modulating compounds from fungi |
| CN101265303B (zh) * | 2008-04-24 | 2010-06-02 | 吉林大学 | 一种以废弃香菇培养基为原料提取香菇多糖的方法 |
| CN101921346A (zh) * | 2010-08-31 | 2010-12-22 | 浙江省林业科学研究院 | 一种香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法 |
| CN101991091A (zh) * | 2010-09-30 | 2011-03-30 | 福建省宏顺食品饮料有限公司 | 香菇浓缩汁生产工艺 |
| CN101161112B (zh) * | 2006-10-10 | 2011-11-23 | 上海慈瑞医药科技有限公司 | 一种香菇多糖分离纯化的方法 |
| CN101775422B (zh) * | 2010-02-05 | 2012-04-04 | 武汉迪奥药业有限公司 | 一种香菇菌多糖及制备方法 |
| CN102086234B (zh) * | 2009-12-07 | 2012-10-03 | 北大国际医院集团重庆大新药业股份有限公司 | 一种提高中分子量羟乙基淀粉质量的制备方法 |
| CN102863547A (zh) * | 2012-09-25 | 2013-01-09 | 福建惠泽生物科技有限公司 | 一种从杏鲍菇中提取活性多糖及制备其功能饮料的方法 |
| US8758768B2 (en) | 2001-09-03 | 2014-06-24 | Glycanova As | Process for production of fungal extracellular immune stimulating compounds |
| CN104119456A (zh) * | 2014-07-04 | 2014-10-29 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种利用多级膜过程分离提纯食（药）用菌活性组分的方法 |
| US9072776B2 (en) | 2005-06-15 | 2015-07-07 | Glycanova As | Anti-cancer combination treatment and kit-of-parts |
| CN105861590A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-08-17 | 洛阳伊龙药业有限公司 | 一种香菇菌多糖原料药的生产工艺 |
| CN110483653A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-11-22 | 南昌大学 | 一种具有免疫活性的香菇多糖组分的制备方法及产品和应用 |
| CN112074196A (zh) * | 2018-05-07 | 2020-12-11 | 詹尼温生物技术有限责任公司 | 从微生物发酵获得的碳水化合物中纯化乳-N-新四糖(LNnT)的简单方法 |
-
2002
- 2002-08-22 CN CN 02138962 patent/CN1204148C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10471135B2 (en) | 2001-09-03 | 2019-11-12 | Glycanova As | Production of fungal extracellular immune stimulating compounds |
| US8758768B2 (en) | 2001-09-03 | 2014-06-24 | Glycanova As | Process for production of fungal extracellular immune stimulating compounds |
| US9249438B2 (en) | 2001-09-03 | 2016-02-02 | Glycanova As | Production of fungal extracellular immune stimulating compounds |
| US7514085B2 (en) | 2004-07-16 | 2009-04-07 | Medimush A/S | Immune modulating compounds from fungi |
| US7682615B2 (en) | 2004-07-16 | 2010-03-23 | Beka Holding As | Immune modulating compounds from fungi |
| US9072776B2 (en) | 2005-06-15 | 2015-07-07 | Glycanova As | Anti-cancer combination treatment and kit-of-parts |
| CN100453559C (zh) * | 2005-11-04 | 2009-01-21 | 杨勇杰 | 一种提取香菇多糖的方法 |
| CN101161112B (zh) * | 2006-10-10 | 2011-11-23 | 上海慈瑞医药科技有限公司 | 一种香菇多糖分离纯化的方法 |
| CN101265303B (zh) * | 2008-04-24 | 2010-06-02 | 吉林大学 | 一种以废弃香菇培养基为原料提取香菇多糖的方法 |
| CN102086234B (zh) * | 2009-12-07 | 2012-10-03 | 北大国际医院集团重庆大新药业股份有限公司 | 一种提高中分子量羟乙基淀粉质量的制备方法 |
| CN101775422B (zh) * | 2010-02-05 | 2012-04-04 | 武汉迪奥药业有限公司 | 一种香菇菌多糖及制备方法 |
| CN101921346B (zh) * | 2010-08-31 | 2011-12-21 | 浙江省林业科学研究院 | 一种香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法 |
| CN101921346A (zh) * | 2010-08-31 | 2010-12-22 | 浙江省林业科学研究院 | 一种香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法 |
| CN101991091A (zh) * | 2010-09-30 | 2011-03-30 | 福建省宏顺食品饮料有限公司 | 香菇浓缩汁生产工艺 |
| CN101991091B (zh) * | 2010-09-30 | 2012-10-17 | 福建省宏顺食品饮料有限公司 | 香菇浓缩汁生产工艺 |
| CN102863547A (zh) * | 2012-09-25 | 2013-01-09 | 福建惠泽生物科技有限公司 | 一种从杏鲍菇中提取活性多糖及制备其功能饮料的方法 |
| CN104119456A (zh) * | 2014-07-04 | 2014-10-29 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种利用多级膜过程分离提纯食（药）用菌活性组分的方法 |
| CN105861590A (zh) * | 2016-06-23 | 2016-08-17 | 洛阳伊龙药业有限公司 | 一种香菇菌多糖原料药的生产工艺 |
| CN112074196A (zh) * | 2018-05-07 | 2020-12-11 | 詹尼温生物技术有限责任公司 | 从微生物发酵获得的碳水化合物中纯化乳-N-新四糖(LNnT)的简单方法 |
| CN110483653A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-11-22 | 南昌大学 | 一种具有免疫活性的香菇多糖组分的制备方法及产品和应用 |
| CN110483653B (zh) * | 2019-07-16 | 2022-03-18 | 南昌大学 | 一种具有免疫活性的香菇多糖组分的制备方法及产品和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1204148C (zh) | 2005-06-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1204148C (zh) | 香菇菌多糖的分离纯化工艺 | |
| CN101095724B (zh) | 一种提取荷叶黄酮的工艺 | |
| CN100424098C (zh) | 一种灵芝孢子多糖的精制工艺 | |
| JP3532817B2 (ja) | 海洋生物由来コラーゲンの製造方法 | |
| CN102351956B (zh) | 一种巴戟天多糖的提取方法 | |
| CN101798355A (zh) | 一种综合分离提取茶多糖、茶氨酸、茶多酚和咖啡因的方法 | |
| CN101747446A (zh) | 一种抗疲劳人参酸性多糖的提取方法 | |
| CN103923201A (zh) | 一种海马活性糖蛋白的制备方法 | |
| CN101709094A (zh) | 一种超滤膜分离甜茶多糖的方法 | |
| CN111233658A (zh) | 一种提取银杏叶中莽草酸和奎宁酸的方法 | |
| CN102477104A (zh) | 拐枣多糖的分离纯化方法 | |
| JPH0633396B2 (ja) | 甘蔗脂質成分の抽出法 | |
| CN101450091A (zh) | 一种三七总皂苷的提纯方法 | |
| CN113801013B (zh) | 一种从银杏叶中提取莽草酸和/或银杏多糖的生产工艺 | |
| CN102018835B (zh) | 利用膜分离法分离中药仙茅有效成分的方法 | |
| CN109527147A (zh) | 一种茶叶深加工的膜分离技术 | |
| CN101089017A (zh) | 蜂毒肽的分离提纯方法 | |
| CN113061199A (zh) | 一种纳滤膜浓缩提取粗品肝素钠的工艺 | |
| CN100396298C (zh) | 应用膜分离技术对夏桑菊提取液精制的新工艺 | |
| CN1473822A (zh) | 浮萍中黄酮和多糖的提取工艺 | |
| CN101792394B (zh) | 一种萃取分离l-辛弗林的方法 | |
| CN1178957C (zh) | 一种用菇根为原料提取香菇多糖的方法 | |
| CN103655655A (zh) | 一种膜技术分离药材中有效成分的方法 | |
| CN105294873A (zh) | 一种海带多糖的提取方法 | |
| CN207614488U (zh) | 用于皂苷提纯的超滤膜分离装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20050601 |