CN100336832C - 虾夷扇贝多糖提取工艺 - Google Patents
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Abstract
一种虾夷扇贝多糖的提取方法，包括原料处理、匀浆、超声、酶解、分离、浓缩、醇沉、干燥的工艺步骤。其中所述原料处理是将虾夷扇贝肉组织直接加水匀浆或将其烘干或冻干后加水匀浆；所述酶解是用胰蛋白酶、胃蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶中的一或两种进行酶解。所述肉组织是扇贝柱、除扇贝柱外的下脚料、部分下脚料、扇贝柱和部分下脚料或除壳以外的全部肉组织。本发明提供了一条从虾夷扇贝中提取多糖的工艺路线，特别是可以从虾夷扇贝下脚料中提取多糖，充分利用废弃物。其所得产品纯度高、得率高。提取到的虾夷扇贝多糖，既可单独作为一种产品，还可以作为基料，辅以其它食品开发多种功能食品。
Description
技术领域
本发明涉及的是多糖的提取技术，特别是以贝类为原料提取多糖的技术。
背景技术
近年来，对多糖的研究进入迅速发展与空前活跃阶段，张倩等人的研究(多糖功能的研究进展《食品研究与开发》1998，9(19))证明多糖具有多方面的生物活性，它能激活免疫细胞，提高机体的免疫功能，能够与病毒形成复合物，干扰其与细胞受体的接合，而对正常细胞没有副作用。其抗肿瘤、增强免疫功能、降血糖、降血脂、解毒、抗病毒、抗细菌、抗辐射等生理功能已为世界医药界所瞩目。
多糖广泛存在于植物、微生物(细菌和真菌)和海藻中，其中对食用菌多糖研究较多，特别是对香菇多糖的研究较清楚。随着对多糖研究的深入，人们逐渐把目光转向动物体多糖，特别是水生动物体多糖。目前关于贝类多糖的研究仅有关于淡水河蚌肉(《云南大学学报(自然科学版)1998，20(3)：187～189》)及海湾扇贝裙边(《中国水产科学》第1卷第2期)的报导。
虾夷扇贝是一种低温海产双壳贝类，原产自日本，于80年代初期引入我国。虾夷扇贝味道鲜美、营养丰富，富含钙、磷、锌、硒等微量元素和人体必需的氨基酸。新鲜虾夷扇贝蛋白质含量为14.5％，干贝中高达63.7％。蛋白质中含有十几种氨基酸，呈鲜味的谷氨酸含量是水产品中最高的，占7.15％。近代科学研究发现，虾夷扇贝中除含丰富的蛋白质外，还含有丰富的多糖，但一直未被重视和研究。关于虾夷扇贝养殖技术方面的研究及报道很多，但有关其营养价值方面的研究及报道甚少。对于虾夷扇贝多糖的提取方法和工艺尚未见报道。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种以虾夷扇贝为原料，利用酶法结合相关工艺，避免高温处理，既能保持多糖原有生物活性，又能最大限度提高多糖提取率的提取活性多糖的新工艺。
本发明的技术方案是将虾夷扇贝进行原料处理，经提取和纯化得到其多糖产品。另外，提取过程中的残渣可依据以往的技术发明制备虾夷扇贝多肽产品。
一、原料及处理
本发明使用的原料可以是虾夷扇贝去壳的全部肉体组织(包括扇贝柱、腮、性腺、内脏、裙边等)，也可以是扇贝柱、“下脚料”(腮、性腺、内脏、裙边等的全部或部分)或扇贝柱和部分“下脚料”。
1.将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出肉组织，直接待用。
或2.将按不同部位取出肉组织，于20～60℃烘干或真空冷冻干燥至含水分小于4％，再粉碎至50～200目，得到干粉，待用。
二、匀浆
1.按虾夷扇贝的全部肉组织(也可以是扇贝柱或/和部分“下脚料”，或全部“下脚料”)质量加入0.5～5倍的水，用组织捣碎机匀浆，得到均匀的浆液。
或2.按虾夷扇贝的全部肉组织(也可以是扇贝柱或/和部分“下脚料”，或全部“下脚料”)的干粉质量加入10～50倍的水，用组织捣碎机匀浆，得到均匀的浆液。
三、超声波处理
浆液经超声波处理0.3～1小时，作用温度30～60℃，功率为50～600W，从而提高下一步酶解的效果。
四、酶解
提取虾夷扇贝多糖可以采用酶解的方法，在所用酶适宜的pH值和温度等条件下进行酶解，所用酶可以是单一酶，也可以是复合酶；还可以在酶解前进行碱解或是运用自溶酶技术进行预处理从而达到提高提取率的目的。
1.碱解：在经超声波处理后的浆液中加入0.1～1.0％研碎的固体碳酸钾或碳酸钠，于30～60℃搅拌碱解1～5小时。
或2.自溶酶技术：将经超声波处理后的浆液经紫外线照射10～60分钟后，于40～60℃水解2～6小时。
3.单酶酶解
①胰蛋白酶酶解：将经超声波处理后的浆液用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7～9，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入浆液质量分数为0.1～2.0％酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持温度在40～60℃，搅拌酶解1～8小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。
或②胃蛋白酶酶解：将经超声波处理后的浆液用6mol/L盐酸调pH值为1～5，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入浆液质量分数为0.1～2.0％酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持温度在40～60℃，搅拌酶解1～10小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。
或③枯草杆菌中性蛋白酶酶解：将经超声波处理后的浆液用6mol/L盐酸调pH值为6～7，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入浆液质量分数为0.1～2.0％酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持温度在45～55℃，搅拌酶解1～6小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。
4.双酶酶解
①枯草杆菌中性蛋白酶和胃蛋白酶进行酶解：将经超声波处理后的浆液用6mol/L盐酸调pH值为6～7，加入浆液质量分数为0.05～1.5％酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于45～55℃搅拌酶解1～3小时。然后用6mol/L盐酸调pH值为1～5，加入浆液质量分数为0.05～1.5％酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于40～60℃搅拌酶解1～5小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。
或②枯草杆菌中性蛋白酶和胰蛋白酶进行酶解：将经超声波处理后的浆液用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7～8，加入浆液质量分数为0.05～1.5％酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于45～55℃搅拌酶解1～3小时。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7～9，加入浆液质量分数为0.05～1.5％酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持pH值在此范围，于40～60℃，搅拌酶解1～4小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。
或③胃蛋白酶和胰蛋白酶进行酶解：将经超声波处理后的浆液用6mol/L盐酸调pH值为1～5，加入浆液质量分数为0.05～1.5％酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于40～60℃搅拌酶解1～5小时。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7～9，加入浆液质量分数为0.05～1.5％酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持pH值在此范围，于40～60℃，搅拌酶解1～4小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。
五、分离
1.离心：将虾夷扇贝酶解液于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，即为多糖母液。
或2.过滤：将虾夷扇贝酶解液经200目筛网过滤，得到多糖母液。
六、浓缩
将得到的多糖母液置于真空浓缩设备中，控制真空度85～98KPa，温度30～60℃浓缩至原体积的1/5～1/3。
七、醇沉
向多糖母液中边搅拌边缓慢加入2～5倍95％乙醇，于2～6℃醇沉2～18小时后，离心收集多糖沉淀。
八、干燥
1.将多糖沉淀直接于20～60℃烘干，得到产物即为虾夷扇贝多糖。
或2.置于真空冷冻干燥设备中，于真空度70～150Pa，板温30～60℃，冷冻干燥6～15小时，得到虾夷扇贝多糖，可作为一种产品，还可进一步加工成胶囊、冲剂、片剂等产品形式。
本发明的优点是：
1.本发明的提取工艺合理有效，开创了从虾夷扇贝体内(壳除外)提取多糖的工艺路线，极大限度地将虾夷扇贝多糖提取出来；
2.本发明相关工艺温度都控制在60℃以下，尤其是采用低温抑活的方法替代以往高温灭酶，从而确保提取出多糖的生物活性，使得最终产品多糖营养性与功能性兼具；
3.本发明的工艺路线不仅能用虾夷扇贝价格较高的扇贝柱为原料提取多糖，而且能用虾夷扇贝除壳外的全部组织，甚至于下脚料为原料提取多糖，为降低成本、提高经济效益提供技术保证；
4.本发明确立了碱解与酶解相结合的方法使原料能更多地分解出多糖；
5.本发明确立了自溶酶技术与酶解相结合的方法不仅充分利用虾夷扇贝原料自身酶体系，还将提高多糖得率；
6.本发明提取过程中的残渣可依据以往的技术发明制备虾夷扇贝多肽产品；
7.本发明提取到的虾夷扇贝多糖，既可单独作为一种产品，进一步加工成胶囊、冲剂、片剂等产品形式，还可以作为基料，辅以其它食品开发多种功能食品，使保健食品的功能性日益多元化。
具体实施方式：
例1
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取虾夷扇贝全部组织1千克，加入2千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.3小时，温度60℃，功率为600W。然后用6mol/L盐酸调pH值为6，加入1.5克(0.05％)酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于45℃搅拌酶解3小时。然后用6mol/L盐酸调pH值为1，加入45克(1.5％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于40℃搅拌酶解5小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，置于真空浓缩设备中，控制真空度85KPa，温度30℃浓缩至1升，边搅拌边缓慢加入2升95％乙醇，于2℃醇沉2小时后，离心收集多糖沉淀，直接于20℃烘干，得到多糖干粉24.2克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为17.1％。
例2
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取扇贝柱1千克，加入5千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.5小时，温度55℃，功率为300W。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入120克(2.0％)酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持温度在40℃，搅拌酶解1小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。经200目筛网过滤，得到滤液置于真空浓缩设备中，控制真空度92KPa，温度55℃浓缩至1.5升，边搅拌边缓慢加入5.25升95％乙醇，于3℃醇沉8小时后，离心收集多糖沉淀，置于真空冷冻干燥设备中，于真空度150Pa，板温30℃，冷冻干燥15小时，得到多糖干粉33.5克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为18.4％。
例3
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取下脚料1千克，加入500克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.5小时，温度50℃，功率为200W。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7，加入22.5克(1.5％)酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于45℃搅拌酶解1小时。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为9，加入0.75克(0.05％)酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持pH值在此范围，于60℃，搅拌酶解4小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，置于真空浓缩设备中，控制真空度90KPa，温度50℃浓缩至0.3升。边搅拌边缓慢加入0.9升95％乙醇，于4℃醇沉10小时后，离心收集多糖沉淀，置于真空冷冻干燥设备中，于真空度90Pa，板温50℃，冷冻干燥10小时，得到多糖干粉18.8克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为10.9％。
例4
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取内脏1千克，加入4千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.5小时，温度50℃，功率为200W。然后用6mol/L盐酸调pH值为1，加入2.5克(0.05％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于60℃搅拌酶解5小时。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为9，加入75克(1.5％)酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持pH值在此范围，于60℃，搅拌酶解1小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。经200目筛网过滤，得到滤液置于真空浓缩设备中，控制真空度90KPa，温度50℃浓缩至1升，边搅拌边缓慢加入4升95％乙醇，于3℃醇沉10小时后，离心收集多糖沉淀，直接于45℃烘干，得到多糖干粉12.6克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为11.7％。
例5
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取裙边1千克，加入3千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.5小时，温度40℃，功率为100W。然后用6mol/L盐酸调pH值为1，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入4克(0.1％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持温度在40℃，搅拌酶解10小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，置于真空浓缩设备中，控制真空度90KPa，温度40℃浓缩至0.8升，边搅拌边缓慢加入3.2升95％乙醇，于4℃醇沉14小时后，离心收集多糖沉淀，直接于30℃烘干，得到多糖干粉23.7克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为6.8％。
例6
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取去除内脏后的所有组织1千克，加入4千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.5小时，温度40℃，功率为200W。然后用6mol/L盐酸调pH值为6，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入4克(0.1％)酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持温度在45℃，搅拌酶解6小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。经200目筛网过滤，得到滤液置于真空浓缩设备中，控制真空度90KPa，温度50℃浓缩至1升，边搅拌边缓慢加入3升95％乙醇，于5℃醇沉15小时后，离心收集多糖沉淀，置于真空冷冻干燥设备中，于真空度90Pa，板温50℃，冷冻干燥10小时，得到多糖干粉26.4克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为10.2％。
例7
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织，于60℃烘干至含水分小于4％，再粉碎至200目，得到干粉。取虾夷扇贝全部组织干粉100克，加入5千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.6小时，温度35℃，功率为80W。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为9，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入5.1克(0.1％)酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持温度在60℃，搅拌酶解8小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。经200目筛网过滤，得到滤液置于真空浓缩设备中，控制真空度92KPa，温度45℃浓缩至1.5升，边搅拌边缓慢加入3.75升95％乙醇，于4℃醇沉14小时后，离心收集多糖沉淀，置于真空冷冻干燥设备中，于真空度70Pa，板温60℃，冷冻干燥6小时，得到多糖干粉12.1克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为17.6％。
例8
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织，于20℃烘干至含水分小于4％，再粉碎至50目，得到干粉。取扇贝柱干粉100克，加入1千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理1小时，温度30℃，功率为50W。然后用6mol/L盐酸调pH值为7，加入16.5克(1.5％)酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于55℃搅拌酶解1小时。然后用6mol/L盐酸调pH值为5，加入0.55克(0.05％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于60℃搅拌酶解1小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，置于真空浓缩设备中，控制真空度98KPa，温度60℃浓缩至0.3升，边搅拌边缓慢加入1.5升95％乙醇，于6℃醇沉18小时后，离心收集多糖沉淀，直接于60℃烘干，得到多糖干粉13.4克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为18.1％。
例9
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织，真空冷冻干燥至含水分小于4％，再粉碎至150目，得到干粉。取下脚料干粉100克，加入4千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.5小时，温度40℃，功率为100W。然后用6mol/L盐酸调pH值为5，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入82克(2.0％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持温度在60℃，搅拌酶解1小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，置于真空浓缩设备中，控制真空度90KPa，温度40℃浓缩至1升，边搅拌边缓慢加入4升95％乙醇，于4℃醇沉14小时后，离心收集多糖沉淀，直接于30℃烘干，得到多糖干粉9.8克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为11.3％。
例10
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织，于30℃烘干至含水分小于4％，再粉碎至100目，得到干粉。取内脏干粉100克，加入2千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.5小时，温度40℃，功率为200W。然后用6mol/L盐酸调pH值为7，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入42克(2.0％)酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持温度在55℃，搅拌酶解1小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。经200目筛网过滤，得到滤液置于真空浓缩设备中，控制真空度90KPa，温度50℃浓缩至0.5升，边搅拌边缓慢加入1.5升95％乙醇，于5℃醇沉15小时后，离心收集多糖沉淀，置于真空冷冻干燥设备中，于真空度90Pa，板温50℃，冷冻干燥10小时，得到多糖干粉7.4克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为12.8％。
例11
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织，真空冷冻干燥至含水分小于4％，再粉碎至120目，得到干粉。取裙边干粉100克，加入3千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.6小时，温度50℃，功率为200W。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为8，加入1.55克(0.05％)酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于55℃搅拌酶解3小时。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7，加入46.5克(1.5％)酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持pH值在此范围，于40℃，搅拌酶解1小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，置于真空浓缩设备中，控制真空度90KPa，温度50℃浓缩至0.8升，边搅拌边缓慢加入2.4升95％乙醇，于4℃醇沉10小时后，离心收集多糖沉淀，置于真空冷冻干燥设备中，于真空度90Pa，板温50℃，冷冻干燥10小时，得到多糖干粉10.8克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为6.4％。
例12
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织，于40℃烘干至含水分小于4％，再粉碎至150目，得到干粉。取除内脏外的所有组织干粉100克，加入2千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.5小时，温度50℃，功率为200W。然后用6mol/L盐酸调pH值为5，加入31.5克(1.5％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于40℃搅拌酶解1小时。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7，加入1.05克(0.05％)酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持pH值在此范围，于40℃，搅拌酶解4小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。经200目筛网过滤，得到滤液置于真空浓缩设备中，控制真空度90KPa，温度50℃浓缩至0.5升，边搅拌边缓慢加入2升95％乙醇，于3℃醇沉10小时后，离心收集多糖沉淀，直接于45℃烘干，得到多糖干粉12.8克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为10.7％。
例13
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取下脚料1千克，加入4千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.5小时，温度30℃，功率为100W。然后加入50克(1.0％)研碎的固体碳酸钾，于30℃搅拌碱解1小时。用6mol/L盐酸调pH值为6.5，加入50克(1.0％)酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于50℃搅拌酶解2小时。然后用6mol/L盐酸调pH值为4，加入50克(1.0％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于50℃搅拌酶解3小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，置于真空浓缩设备中，控制真空度90KPa，温度50℃浓缩至1.25升，边搅拌边缓慢加入3.75升95％乙醇，于3℃醇沉10小时后，离心收集多糖沉淀，直接于50℃烘干，得到多糖干粉19.7克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为10.4％。
例14
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织，真空冷冻干燥至含水分小于4％，再粉碎至180目，得到干粉。取内脏干粉100克，加入3千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.8小时，温度40℃，功率为200W。然后加入3.1克(0.1％)研碎的固体碳酸钾，于60℃搅拌碱解5小时。用6mol/L盐酸调pH值为6.5，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入46.5克(1.5％)酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持温度在50℃，搅拌酶解5小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。经200目筛网过滤，得到滤液置于真空浓缩设备中，控制真空度95KPa，温度40℃浓缩至1升，边搅拌边缓慢加入4升95％乙醇，于5℃醇沉15小时后，离心收集多糖沉淀，置于真空冷冻干燥设备中，于真空度85Pa，板温45℃，冷冻干燥8小时，得到多糖干粉7.9克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为12.3％。
例15
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取内脏1千克，加入3千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.6小时，温度45℃，功率为400W。然后加入4克(0.1％)研碎的固体碳酸钠，于30℃搅拌碱解5小时。用6mol/L盐酸调pH值为4，加入48克(1.2％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于45℃搅拌酶解2小时。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为8，加入20克(0.5％)酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持pH值在此范围，于50℃，搅拌酶解2小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。经200目筛网过滤，得到滤液置于真空浓缩设备中，控制真空度95KPa，温度45℃浓缩至1升，边搅拌边缓慢加入3升95％乙醇，于5℃醇沉16小时后，离心收集多糖沉淀，直接于40℃烘干，得到多糖干粉26.3克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为11.0％。
例16
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取虾夷扇贝全部组织1千克，加入4千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.8小时，温度40℃，功率为500W。然后加入50克(1.0％)研碎的固体碳酸钠，于60℃搅拌碱解1小时。用6mol/L盐酸调pH值为6.7，加入10克(0.2％)酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于50℃搅拌酶解2小时。然后用6mol/L盐酸调pH值为4，加入15克(0.3％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于50℃搅拌酶解3小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，置于真空浓缩设备中，控制真空度90KPa，温度40℃浓缩至1升，边搅拌边缓慢加入3升95％乙醇，于4℃醇沉12小时后，离心收集多糖沉淀，直接于30℃烘干，得到多糖干粉24.1克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为15.7％。
例17
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取虾夷扇贝全部组织1千克，加入2千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.3小时，温度60℃，功率为600W。经紫外线照射60分钟后，于60℃水解2小时。然后用6mol/L盐酸调pH值为6，加入1.5克(0.05％)酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于45℃搅拌酶解3小时。然后用6mol/L盐酸调pH值为1，加入30克(1.0％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于40℃搅拌酶解4小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，置于真空浓缩设备中，控制真空度85KPa，温度30℃浓缩至1升，边搅拌边缓慢加入2升95％乙醇，于2℃醇沉2小时后，离心收集多糖沉淀，直接于20℃烘干，得到多糖干粉25.6克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为17.4％。
例18
将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部组织。称取内脏1千克，加入3千克的水，用组织捣碎机匀浆后，用超声波处理0.6小时，温度45℃，功率为400W。经紫外线照射10分钟后，于40℃水解6小时。用6mol/L盐酸调pH值为4，加入48克(1.2％)酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于45℃搅拌酶解2小时。然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为8，加入20克(0.5％)酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持pH值在此范围，于50℃，搅拌酶解2小时。之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应。用6mol/L盐酸调pH至中性。经200目筛网过滤，得到滤液置于真空浓缩设备中，控制真空度95KPa，温度45℃浓缩至1升，边搅拌边缓慢加入3升95％乙醇，于5℃醇沉16小时后，离心收集多糖沉淀，直接于40℃烘干，得到多糖干粉26.3克，经苯酚-硫酸法测定，多糖含量为11.0％。
Claims (12)
1、一种虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于：
(1)原料及处理：将新鲜带壳虾夷扇贝用水冲洗干净，沥干后，用刀具将其剖开，去壳，按不同部位取出全部肉组织，
(2)匀浆：按虾夷扇贝肉组织质量加入0.5～5倍的水，用组织捣碎机匀浆，得到均匀的浆液，
(3)超声波处理：浆液经超声波处理0.3～1小时，作用温度30～60℃，功率为50～600W，
(4)酶解：将经超声波处理后的浆液用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7～9，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入质量分数为0.1～2.0％酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持温度在40～60℃，搅拌酶解1～8小时，之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应，用6mol/L盐酸调pH至中性，
(5)分离：将虾夷扇贝酶解液于6000转/分钟离心20分钟，收集上清液，即为多糖母液，
(6)浓缩：将得到的多糖母液置于真空浓缩设备中，控制真空度85～98KPa，温度30～60℃浓缩至原体积的1/5～1/3，
(7)醇沉：向多糖母液中边搅拌边缓慢加入2～5倍95％乙醇，于2～6℃醇沉2～18小时后，离心收集多糖沉淀，
(8)干燥：多糖沉淀直接于20～60℃烘干，得到产物即为虾夷扇贝多糖。
2、根据权利要求1所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述原料处理中的虾夷扇贝肉组织是扇贝柱、除扇贝柱外的下脚料、部分下脚料、扇贝柱和部分下脚料或除壳以外包括扇贝柱和下脚料在内的全部肉组织。
3、根据权利要求1或2所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述原料处理是将虾夷扇贝按不同部位取出的全部组织，于20～60℃烘干或真空冷冻干燥至含水分小于4％，再粉碎至50～200目，得到干粉；所述匀浆是按虾夷扇贝肉组织干粉质量加入10～50倍的水，用组织捣碎机匀浆，得到均匀的浆液。
4、根据权利要求1所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述酶解是将经超声波处理后的浆液用6mol/L盐酸调pH值为1～5，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入质量分数为0.1～2.0％酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持温度在40～60℃，搅拌酶解1～10小时；之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应；用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。
5、根据权利要求1所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述酶解是将经超声波处理后的浆液用6mol/L盐酸调pH值为6～7，并在酶解过程中保持pH值在此范围，加入质量分数为0.1～2.0％酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持温度在45～55℃，搅拌酶解1～6小时；之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应；用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。
6、根据权利要求1所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述酶解是双酶酶解：将经超声波处理后的浆液用6mol/L盐酸调pH值为6～7，加入质量分数为0.05～1.5％酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于45～55℃搅拌酶解1～3小时；然后用6mol/L盐酸调pH值为1～5，加入质量分数为0.05～1.5％酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于40～60℃搅拌酶解1～5小时；之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应；用0.5mol/L氢氧化钾调pH至中性。
7、根据权利要求1所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述酶解是双酶酶解：将经超声波处理后的浆液用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7～8，加入质量分数为0.05～1.5％酶活5.0×104u/g的枯草杆菌中性蛋白酶，保持pH值在此范围，于45～55℃搅拌酶解1～3小时；然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7～9，加入质量分数为0.05～1.5％酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持pH值在此范围，于40～60℃，搅拌酶解1～4小时；之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应；用6mol/L盐酸调pH至中性。
8、根据权利要求1所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述酶解是双酶酶解：将经超声波处理后的浆液用6mol/L盐酸调pH值为1～5，加入质量分数为0.05～1.5％酶活7.8×105u/g的胃蛋白酶，保持pH值在此范围，于40～60℃搅拌酶解1～5小时；然后用0.5mol/L氢氧化钾调pH值为7～9，加入质量分数为0.05～1.5％酶活5×104u/g的胰蛋白酶，保持pH值在此范围，于40～60℃，搅拌酶解1～4小时；之后，迅速冷却至30℃以下，保持30分钟以终止反应；用6mol/L盐酸调pH至中性。
9、根据权利要求1、4～8中任一项权利要求所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述酶解，是在酶解之前先进行碱解：在经超声波处理后的浆液中加入0.1～1.0％研碎的固体碳酸钾或碳酸钠，于30～60℃搅拌碱解1～5小时。
10、根据权利要求1、4～8中任一项权利要求所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述酶解，是在酶解之前先利用自溶酶技术进行自溶：将经超声波处理后的浆液经紫外线照射10～60分钟后，于40～60℃水解2～6小时。
11、根据权利要求1所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述分离是采用200目筛网过滤，得到多糖母液。
12、根据权利要求1所述的虾夷扇贝多糖提取方法，其特征在于所述干燥是采用真空冷冻干燥：控制真空度70～150Pa，板温30～60℃，冷冻干燥6～15小时。
Priority Applications (3)
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