CN105646728A - 一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法，制备方法包括：将蜜蜂巢脾冷冻，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚得到巢脾干燥粉末；在巢脾干燥粉末中加入蒸馏水及木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；将酶解液过滤，取上清液；在滤渣中加入蒸馏水及木瓜蛋白酶，重复酶解及过滤1-2次；将上清液合并得到蜜蜂巢脾多糖提取液A；将蜜蜂巢脾多糖提取液A进行浓缩，离心后弃去沉淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B；往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入由氯仿和正丁醇配制成的混合液，抽提后离心，取上清液，获得蜜蜂巢脾多糖提取液C；往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入无水乙醇醇析后离心，弃上清液并干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。本发明适用于蜜蜂巢脾中多糖的提取。

Description

一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种蜂产品领域，尤其涉及一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法。

背景技术

蜜蜂巢脾是蜜蜂生活、贮存食物、繁衍育子的场所，是一种天然的产物。它含有树脂、油脂、生物碱、鞣质、有机酸、氨基酸、蛋白质、酶类、昆虫激素、多糖以及苷类等多种生物活性成分。作为我国传统的动物中药，根据近年来的研究表明蜜蜂巢脾具有治疗鼻炎、急性乳腺炎、乙型肝炎等疾病的效果。

巢脾随着繁育蜜蜂世代的增加，成分也变得相当复杂。老巢脾含有大量蜜蜂生产和代谢的各种产物，如茧衣、蜂胶、蜂王浆、花粉、蜂蜜等物质。蜜蜂老巢脾的化学成份也较为复杂，研究发现蜜蜂巢脾水浸膏中含有多糖、生物碱、酶类、生物激素等成分。近年来，多糖所具有的各种生理功能逐渐为人们所重视，如增强免疫力、降低血糖浓度、降血脂、抗肿瘤、抗疲劳及抗衰老等种生理功能，在医药和食品领域显示了很好的应用前景，因而受到人们的广泛关注。而蜜蜂巢脾多糖的提取及应用尚处于空白。

发明内容

有鉴于此，本发明实施例提供一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法，能够增加蜜蜂巢脾的利用价值。

为达到上述目的，本发明的实施例采用如下技术方案：

一方面，本发明实施例提供一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，包括：

一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，包括步骤：

步骤1、将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末；

步骤2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后，加入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加7.2-12万U，酶解温度为40-60℃，酶解时间0.5-1.5h；

步骤3、将所述酶解液通过120目纱布过滤，取上清液；

步骤4、在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入10倍以上的蒸馏水后，加入7.2-12万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重复上述酶解及过滤操作1-2次；将取得的上清液合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A；

步骤5、将所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在80-100℃下进行浓缩1-3h，离心后弃去沉淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B；

步骤6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其体积1/4的由氯仿和正丁醇配制成的混合液，充分抽提20min后，进行4000r-10000r/min的离心操作5-20min，取上清液；其中，在制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的体积比为4∶1；对获取的所述上清液再重复本步骤的操作3次，获得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C；

步骤7、往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积3-5倍的无水乙醇，在0-26℃下醇析4-24h后，进行4000r-10000r/min的离心操作10-30min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。

可选地，所述将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末，包括：将西方蜜蜂ApismelliferaL.的三年以上的巢脾，-20℃冷冻4h以上，粉碎后过筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末。

可选地，所述将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末，包括：将西方蜜蜂ApismelliferaL.的三年以上的巢脾，-20℃冷冻4h以上，粉碎后过筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡；

采用乙醚回流脱脂后使用80％v/v乙醇进行脱脂脱单糖处理；

鼓风烘干，得到巢脾干燥粉末。

可选地，步骤1中的所述过筛具体为：过50-120目筛。

可选地，所述在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后，加入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加7.2-12万U，酶解温度为40-60℃，加热时间0.5-1.5h，包括：

在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量15倍的蒸馏水后，加入食品级的木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加9.6万U，酶解温度为50℃，加热时间1.5h；

所述在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入10倍以上的蒸馏水后，加入7.2-12万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶重复上述酶解及过滤操作1-2次，包括：在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入15倍的蒸馏水后，加入9.6万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重复上述酶解及过滤操作2次。

可选地，所述往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积3-5倍的无水乙醇，在0-26℃下醇析4-24h后，进行4000r-10000r/min的离心操作10-30min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖，包括：往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积4倍的无水乙醇，在4℃下醇析12h，进行8000r/min的离心操作20min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。

另一方面，本发明实施例提供一种蜜蜂巢脾多糖提取物，包括：所述蜜蜂巢脾多糖提取物根据前述任一所述制备方法获得，所述蜜蜂巢脾多糖提取物中包括多糖，且多糖的含量大于50％。

可选地，所述蜜蜂巢脾多糖提取物中，总多糖含量为20-80％。

本发明实施例提供的一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法，能够从蜜蜂巢脾中提取多糖提取物，能够增加蜜蜂巢脾的利用价值，且生产工艺简单，成本较低。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1为本发明的实施例蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法的流程示意图；

图2为酶解温度对提取蜜蜂巢脾多糖的影响曲线图；

图3为酶解时间对提取蜜蜂巢脾多糖的影响曲线；

图4为酶添加量对提取蜜蜂巢脾多糖的影响曲线图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明实施例一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法进行详细描述。

应当明确，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

图1为本发明的实施例蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法的流程示意图。参看图1，本发明一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法实施方式，包括步骤：

步骤1、将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛、使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末；

步骤2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后，加入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加7.2-12万U(unit，即″单位″)，酶解温度为40-60℃，酶解时间0.5-1.5h；

步骤3、将所述酶解液通过120目纱布过滤，取上清液；

步骤4、在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入10倍以上的蒸馏水后，加入7.2-12万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重复上述酶解及过滤操作1-2次；将取得的上清液合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A；

步骤5、将所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在80-100℃下进行浓缩1-3h，离心后弃去沉淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B；

步骤6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其体积1/4的由氯仿和正丁醇配制成的混合液，充分抽提20min后，进行4000r-10000r/min的离心操作5-20min，取上清液；其中，在制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的体积比为4∶1；对获取的所述上清液再重复本步骤的操作3次，获得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C；

步骤7、往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积3-5倍的无水乙醇，在0-26℃下醇析4-24h后，进行4000r-10000r/min的离心操作10-30min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。

本发明提供的一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法实施方式，能够从蜜蜂巢脾中提取多糖提取物，能够增加蜜蜂巢脾的利用价值，且生产工艺简单，成本较低。

实施例1

本实施例一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，包括步骤：

步骤1、将西方蜜蜂ApismelliferaL.(ApismelliferaLinnaeus)的三年以上的巢脾，-20℃冷冻4h以上，粉碎后过50目筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末。

本实施中，西方蜜蜂(ApismelliferaLinnaeus)，为蜜蜂属中型体中等的一种，产于西方，简称西蜂。主要的西方蜜蜂亚种有：意大利蜜蜂(A.m.ligustica)、卡尼鄂拉蜂(A.m.carnica)、高加索蜜蜂(A.m.caucasica)、欧洲黑蜂(A.m.mellifera)、突尼斯蜜蜂(A.m.intermissa)、东非蜜蜂(A.m.scutelata)和安纳托利亚蜜蜂(A.m.anatolica)等。

步骤2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后，加入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加7.2万U，酶解温度为40℃，酶解时间0.5h；

步骤3、将所述酶解液通过120目纱布过滤，取上清液；

步骤4、在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入10倍以上的蒸馏水后，加入7.2万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶重复上述酶解及过滤操作1次；将取得的上清液合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A；

步骤5、将所述蜜蜂巢脾多糖提取液A利用旋转蒸发仪在80℃下进行浓缩1h，离心后弃去沉淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B；

步骤6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其体积1/4的由氯仿和正丁醇配制成的混合液，充分抽提20min后，进行4000r/min的离心操作10min，取上清液；其中，在制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的体积比为4∶1；对获取的所述上清液再重复本步骤的操作3次，获得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C；

步骤7、往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积3倍的无水乙醇，在室温下醇析24h后，进行4000r/min的离心操作5min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。

本实施例制备的蜜蜂巢脾多糖提取物为浅褐色粉末，易吸湿，易溶于水，得率为10.26％，多糖质量含量为33.14％。

实施例2

本实施例一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，包括步骤：

步骤1、将意大利蜜蜂的三年以上的巢脾，-20℃冷冻4h以上，粉碎后过100目筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末。

步骤2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量15倍以上的蒸馏水后，加入食品级的木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加9.6万U，酶解温度为50℃，酶解时间1.5h；

步骤3、将所述酶解液通过120目纱布过滤，取上清液；

步骤4、在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入15倍以上的蒸馏水后，加入9.6万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶重复上述酶解及过滤操作2次；将取得的上清液合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A；

步骤5、将所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在90℃下进行浓缩2h，离心后弃去沉淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B；

步骤6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其体积1/4的由氯仿和正丁醇配制成的混合液，充分抽提20min后，进行8000r/min的离心操作10min，取上清液；其中，在制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的体积比为4∶1；对获取的所述上清液再重复本步骤的操作3次，获得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C；

步骤7、往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积4倍的无水乙醇，在4℃下醇析12h后，进行8000r/min的离心操作20min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。

本实施例制备的蜜蜂巢脾多糖提取物为浅褐色粉末，易吸湿，易溶于水，得率为21.46％，多糖质量含量为78.02％。

实施例3

本实施例一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，包括步骤：

步骤1、将意大利蜜蜂的三年以上的巢脾，-20℃冷冻4h以上，粉碎后过120目筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡，除蜡后使用80％v/v乙醇进行脱脂脱单糖处理；进行脱脂脱单糖处理后，鼓风烘干，得到巢脾干燥粉末；

步骤2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量20倍以上的蒸馏水后，加入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加12万U，酶解温度为60℃，酶解时间1h；

步骤3、将所述酶解液通过120目纱布过滤，取上清液；

步骤4、在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入20倍以上的蒸馏水后，加入12万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重复上述酶解及过滤操作1次；将取得的上清液合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A；

步骤5、将所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在100℃下进行浓缩3h，离心后弃去沉淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B；

步骤6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其体积1/4的由氯仿和正丁醇配制成的混合液，充分抽提20min后，进行10000r/min的离心操作10min，取上清液；其中，在制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的体积比为4∶1；对获取的所述上清液再重复本步骤的操作3次，获得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C；

步骤7、往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积5倍的无水乙醇，在0℃下醇析4h后，进行10000r/min的离心操作10min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。

本实施例制备的蜜蜂巢脾多糖提取物为浅褐色粉末，易吸湿，易溶于水，得率为13.57％，多糖质量含量为64.01％。

本发明实施例还提供一种蜜蜂巢脾多糖提取物，所述蜜蜂巢脾多糖提取物中包括多糖，且多糖的含量大于50％。

进一步地，所述蜜蜂巢脾多糖提取物中，总多糖含量为20-80％。

本发明实施例提供的一种蜜蜂巢脾多糖提取物，可采用前述任一实施例所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法获得。

本发明实施例提供的一种蜜蜂巢脾多糖提取物，能够从蜜蜂巢脾中提取，从而能够增加蜜蜂巢脾的利用价值，且生产工艺简单，成本较低。

下面结合实验，对本发明实施例进行说明。

1、木瓜蛋白酶提取蜜蜂巢脾多糖的单因素实验如下：

精确称取一定量的粉料，在其他条件都相同的情况下，分别考虑水浴时间(0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h)、水浴温度(30℃、40℃、50℃、60℃)和酶添加量(2.4、4.8、7.2、9.6、12万U/100g)这三个单因素对蜜蜂巢脾多糖提取率的影响。

1.1温度对蜜蜂巢脾多糖提取的影响

固定7.2万U/100g木瓜蛋白酶添加量，酶解2h，于30℃，40℃，50℃，60℃水浴酶解，研究温度对提取蜜蜂巢脾多糖的影响。

在酶催化反应中，温度是重要参数之一。图2为酶解温度对提取蜜蜂巢脾多糖的影响曲线图。

由图2可以看出，随着酶解温度的升高，蜜蜂巢脾多糖得率亦随之增加，在60℃时提取率最高，几乎是30℃的四倍。当温度超过60℃后，酶就会失活，因此采用60℃热水浸提是最佳的选择。

1.2水浴时间对蜜蜂巢脾多糖提取的影响

固定7.2万U/g木瓜蛋白酶添加量，酶解温度50℃，酶解0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h，研究酶解时间对提取蜜蜂巢脾多糖的影响。

酶解时间和酶解进行程度有着密切的关系，提取时间太短，酶解进行的不充分，而当多糖溶解达到平衡时，酶解时间的延长并不能显著增加其得率。图3为酶解时间对提取蜜蜂巢脾多糖的影响曲线。由图3可以看出，随着水浴时间的延长，多糖提取率增加，但当时间超过1.5h时，多糖提取率开始下降。这可能是由于某些糖苷键因提取时间过久在蛋白酶的催化作用下被分解了，或者是浸提时间太长引起多糖结构发生变化甚至使碳环裂解导致的。因此当酶解时间为1.5h时，多糖提取比较稳定，所以初步确定最佳提取时间为1.5h。

1.3添加量对蜜蜂巢脾多糖提取的影响

固定酶解温度50℃，酶解时间1.5h，研究木瓜蛋白酶的添加量酶(2.4、4.8、7.2、9.6、12万U/100g)对提取蜜蜂巢脾多糖的影响。

图4为酶添加量对提取蜜蜂巢脾多糖的影响曲线图。由图4可以看出，在酶添加量为2.4、4.8、7.2万U/100g的时候，多糖提取率在稳步增加，而当添加量为9.6万U/100g后，多糖提取率开始下降。其原因可能是由于木瓜蛋白酶分子已饱和，再增加酶用量，增加的酶分子也没有机会与底物结合，多糖得率不会有显著增加。因此，选择7.2万U/100g作为木瓜蛋白酶用量的较优值。

2酶法提取蜜蜂巢脾多糖的正交实验分析

在上述单因素实验的基础上，运用正交表，由水浴温度、水浴时间、酶添加量三因素做正交实验。

表1：酶法提取蜜蜂巢脾多糖正交实验结果与分析

正交实验根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了″均匀分散，齐整可比″的特点。根据表1显示，影响蜜蜂巢脾多糖提取率的诸因素的主次顺序为A＞C＞B，即酶添加量＞水浴时间＞提取温度。而采用木瓜蛋白酶法提取蜜蜂巢脾多糖的最佳工艺为：酶添加量7.2万U/100g，温度50℃，时间1.5h。在此条件下木瓜蛋白酶提取蜜蜂巢脾多糖的提取率为21.46％。

木瓜蛋白酶是一种含巯基(-SH)肽链的内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，在蜜蜂巢脾多糖提取过程中可使蜜蜂巢脾中的游离蛋白质发生水解，并进一步水解糖蛋白等结合蛋白中的蛋白质，减小它们与蜜蜂巢脾中多糖的结合力，有利于蜜蜂巢脾多糖的溶出，同时也提高了蜜蜂巢脾多糖的纯度，简化了蜜蜂巢脾多糖的提取工艺。

本实验采用木瓜蛋白酶提取蜜蜂巢脾多糖，在单因素实验的基础上，设计了三因素三水平正交实验。综合各种因素及实验结果，得到木瓜蛋白酶提取蜜蜂巢脾多糖的最佳工艺条件为：料液比为1∶15，酶添加量为7.2万U/100g，水浴时间为1.5h，提取温度为50℃，在此条件下蜜蜂巢脾多糖的提取率为21.46％。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求的保护范围为准。

Claims (8)

1.一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，其特征在于，包括步骤：

步骤1、将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末；

步骤2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后，加入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加7.2-12万U，酶解温度为40-60℃，酶解时间0.5-1.5h；

步骤3、将所述酶解液通过120目纱布过滤，取上清液；

步骤4、在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入10倍以上的蒸馏水后，加入7.2-12万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重复上述酶解及过滤操作1-2次；将取得的上清液合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A；

步骤5、将所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在80-100℃下进行浓缩1-3h，离心后弃去沉淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B；

步骤6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其体积1/4的由氯仿和正丁醇配制成的混合液，充分抽提20min后，进行4000r-10000r/min的离心操作5-20min，取上清液；其中，在制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的体积比为4∶1；对获取的所述上清液再重复本步骤的操作3次，获得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C；

步骤7、往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积3-5倍的无水乙醇，在0-26℃下醇析4-24h后，进行4000r-10000r/min的离心操作10-30min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。

2.根据权利要求1所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末，包括：

将西方蜜蜂ApismelliferaL.的三年以上的巢脾，-20℃冷冻4h以上，粉碎后过筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末。

3.根据权利要求1所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末，包括：

将西方蜜蜂ApismelliferaL.的三年以上的巢脾，-20℃冷冻4h以上，粉碎后过筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡；

采用乙醚回流脱脂后使用80％v/v乙醇进行脱脂脱单糖处理；

鼓风烘干，得到巢脾干燥粉末。

4.根据权利要求1所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，其特征在于，步骤1中的所述过筛具体为：过50-120目筛。

5.根据权利要求1所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后，加入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加7.2-12万U，酶解温度为40-60℃，加热时间0.5-1.5h，包括：

在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量15倍的蒸馏水后，加入食品级的木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液；其中，木瓜蛋白酶添加量为每100g巢脾干燥粉末添加9.6万U，酶解温度为50℃，加热时间1.5h；

所述在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入10倍以上的蒸馏水后，加入7.2-12万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶重复上述酶解及过滤操作1-2次，包括：

在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入15倍的蒸馏水后，加入9.6万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重复上述酶解及过滤操作2次。

6.根据权利要求5所述的蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积3-5倍的无水乙醇，在0-26℃下醇析4-24h后，进行4000r-10000r/min的离心操作10-30min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖，包括：

往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积4倍的无水乙醇，在4℃下醇析12h，进行8000r/min的离心操作20min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。

7.一种根据权利要求1-6任一项所述制备方法获得的蜜蜂巢脾多糖提取物，其特征在于，

所述蜜蜂巢脾多糖提取物中包括多糖、蛋白质、糖醛酸及单糖，且多糖的含量大于50％。

8.根据权利要求7所述的蜜蜂巢脾多糖提取物，其特征在于：所述蜜蜂巢脾多糖提取物中，总多糖含量为20-80％。