CN1720035A

CN1720035A - 利用1－氨基环己烷衍生物类和乙酰胆碱酯酶抑制剂类的联合治疗

Info

Publication number: CN1720035A
Application number: CNA200380104613XA
Authority: CN
Inventors: H-J·默比乌斯
Original assignee: Merz Pharma GmbH and Co KGaA
Current assignee: Merz Pharma GmbH and Co KGaA
Priority date: 2002-10-24
Filing date: 2003-10-23
Publication date: 2006-01-11
Anticipated expiration: 2023-10-23
Also published as: NO20052462L; EP2260839A2; CN100339070C; AU2003274353A1; JP2006506378A; UA83645C2; KR100852834B1; PL376476A1; KR100777904B1; TW200418446A; CA2502432A1; EA200500699A1; JP2011246491A; US20040087658A1; HK1085658A1; KR20070087161A; WO2004037234A3; KR20050072770A; US20100227852A1; US20160136144A1

Abstract

本发明涉及用于治疗与中枢神经系统疾病有关的痴呆，例如延迟阿尔兹海默氏病、脑血管疾病或唐氏综合征的发病或进展的药物联合治疗，其包含1－氨基环己烷衍生物如美金刚胺或尼拉密山与乙酰胆碱酯酶抑制剂如加兰他敏、他克林、多奈哌齐或利伐斯的明的组合。

Description

利用1-氨基环己烷衍生物类和乙酰胆碱酯酶抑制剂类的联合治疗

技术领域

本发明涉及1-氨基环己烷衍生物类和乙酰胆碱酯酶抑制剂类的组合及其治疗痴呆的用途。

背景技术

痴呆是影响多达10％的65岁以上及超过24％的85岁以上的个体的严重疾病(Hofman等人的Int.J.Epidemiol.，1991，20：736-748；Jorm和Jolley的Neurology，1998，51：728-733；Lobo等人的Neurology，2000，54(Suppl.5)：S4-S9)。阿尔兹海默氏病(AD)是日益盛行的神经变性形式，其占到在65岁以上老人中约50-60％的痴呆总病例。AD在临床上以渐进式的记忆力、认知、推理力、判断力及情感稳定性丧失为特征，其逐渐造成显著的智力恶化及最终死亡。AD是在出现临床症状至死亡之间平均约8.5年的渐进式疾病。据信AD在美国代表第四种最常见的医学死因及影响约2-3百万的人。AD的患病率在65岁以上每5年倍增(National Institute on Aging：Prevalenceand Costs of Alzheimer′s disease.Progress Report onAlzheimer′s Disease.NIH Publication No.99 3616，November 1998；Polvikoski等人的Neurology，2001，56：1690-1696)。AD目前在全世界影响约一千五百万人(包括所有人种及种族)，由于在人口中相对增加的老年人数，故其患病率有可能在以后的二至三十年增加。AD目前是不可治愈的。没有任何目前已知有效预防AD或逆转其症状及病程的治疗。

AD与锥形神经元的死亡及在与较高的智力功能有关连的脑部区域中神经元突触的丧失有关(Francis等人的1999，J.Neurol.Neurosurg.Psychiatry，66：137-147)。患有AD的个体的脑部展现被称为老年斑(或淀粉样蛋白斑)、淀粉样血管病变(在血管中的淀粉样蛋白沉积)及神经原纤维缠结的特征性病损。在未患有临床上AD的大部分老年人脑中也发现少数以更受限的解剖分布的这些病损。淀粉样蛋白斑及淀粉样血管病变也表征具有21染色体三体(唐氏综合征)及伴荷兰型(Dutch)淀粉样变的遗传性脑出血(HCHWA-D)的个体的脑部。目前明确的AD诊断经常需要观察在患病死亡的患者脑组织中或罕见的是在侵入性神经手术程序期间取得的小块脑组织活检标本中的上述病损。

AD与迈内特氏基底核内的胆碱能神经元的显著丧失有关连(Perry等人的Br.Med.J.，1978，2：1456-1459；在Terry等人编辑的Alzheimer′s Disease.中Geula及Mesulam的Cholinergicsystems and related neuropathological predilection patterns inAlzheimer disease；New York：Raven Press；1994，pp.263-291)。以在细胞外释出的神经递质乙酰胆碱(ACh)介异在这些神经元中的信号传导。认识到Ach信号系统功能障碍在与AD及许多其它的神经及精神疾病(包括帕金森氏病、精神分裂症、癫痫症、抑郁症、强迫症及双相性精神障碍)有关连的认知缺损中的作用已引导药物的开发，其通过抑制胆碱能分解代谢酶乙酰胆碱酯酶(AChE)(其在后者已分泌进入神经突触间隙后破坏Ach)选择性增强胆碱能功能(Goff及Coyle，Am.J.Psychiatry，2001，158：1367-1377)。目前临床上最广泛使用的乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)是他克林(THA；1，2，3，4-四氢-9-氨基吖啶盐酸盐)、DFP(二异丙基氟磷酸)、毒扁豆碱、多奈哌齐、加兰他敏及利伐斯的明。许多AChEI选择性抑制AChE，但是也以丁酰基胆碱酯酰(BuChE)为靶标的药剂可提供附加的裨益，因为AD的进展及Ach的调节作用可能变成逐渐增加对BuChE的依赖性。双重抑制作用还可以有助于减缓生成淀粉样蛋白的化合物的形成(Ballard，Eur.Neurol.，2002，47：64-70)。

多奈哌齐([(R，S)-1-苄基-4-[(5，6-二甲氧基-1-茚满酮)-2-基]-甲基哌啶盐酸盐]；ARICEPT，先前的E-2020)是可逆型非竞争性哌啶型AChEI，其对AChE有选择性而非BuChE(Sugimoto等人的Curr.Med.Chem.，2000，7：303-39)。Dooley等人(Drugs Aging，2000，16：199-226)已证明在以161至818位患有轻度至中度AD的患者的短期试验中(14至30周)以5及10毫克/天的剂量给药的多奈哌齐与安慰剂比较明显改善认知及整体临床功能(也参考Rogers等人的Arch.Int.Med.，1998；158：1021-1031)。在这些研究中所获得的长期药效数据表明，在认知、整体功能或日常作息活动(ADL)方面的改善维持约21至81周，以及多奈哌齐通常具有好的耐受性，其大部份的不良作用事件是轻微及短暂的。

加兰他敏(REMINYL)是可逆型竞争性三级生物碱AChEI，其对AChE具有选择性，而非BuChE。Scott等人(Drugs，2000；60：1095-122)证明接受16或24毫克/天剂量的加兰他敏的285至978位患有轻度至中度AD的患者在持续时间3至6个月的试验中达到相对于安慰剂接受者而言明显改进的认知及整体症状。在这些研究中与加兰他敏有关连的不良事件经常为轻度至中度强度并且短暂。Coyle等人获得了类似的结果(Biol.Psychiatry，2001，49：289-99)。

利伐斯的明(EXELON)是AChE及BuChE的双重抑制剂，已证明其具有跨越AD严重程度谱的益处(Ballard，Eur.Neurol.，2002，47：64-70)。不像被归类成短效型或可逆型药剂的他克林及多奈哌齐，利伐斯的明是中效型或假不可逆型药剂，其抑制AChE多达10小时。临床前生化研究显示利伐斯的明具有超越外周抑制作用的中枢神经系统(CNS)选择性。已证明利伐斯的明会改善患有前脑病损的大鼠的记忆力减弱；并在以6-12毫克/天剂量的两组大的多中心临床试验中(总共1324位患者)，其在三种认知及功能量表上优于安慰剂(Jann，Pharmacotherapy，2000，20：1-12)。

谷氨酸受体的过度或病理性活化作用也与作为AD患者脑中胆碱能细胞退化变性的基础的过程有牵连，特别是那些由N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)选择性活化的受体(Greenamyre等人的Neurobiol.Aging，1989，10：593-602；Francies等人的J.Neurochem.，1993，60：263-291；Li等人的J.Neuropathol.Exp.Neurol.，1997，56：901-911；Wu及Rowan，Neuroreport，1995，6：2409-2413)。已确立NMDA受体对若干生理性神经突触可塑性过程的关键，例如，记忆及学习(Collinridge及Singer，Trends Pharmacol.Sci.，1990，11：290-296)。需要对谷氨酸的激动剂结合位点及由甘氨酸和D-丝氨酸活化的别构共激动剂位点两者的活化作用使NMDA受体起作用(Kleckner及Dingledine，Science，1988，241：835-837；McBain等人的Mol.Pharmacol.，1989，36：556-565；Danysz及Parsons，Pharmacol.Rev.，1998，50：597-664)。已证明在NMDA受体上的D-丝氨酸敏感的调节位点的活化作用是诱发在体外与记忆及学习相关的长期增强作用的前提条件(Bashir等人的Neurosci Lett.，1990，108：261-266)。而且，已证明以D-丝氨酸口服治疗会减轻与精神疾病如精神分裂症有关连的认知缺陷(Tsai等人的Biol Psychiatry，1998，44：1081-1089)。虽然NMDA受体活化作用对于学习是关键所在，但是已发现适度亲和力的非竞争性NMDA受体拮抗剂可纠正/逆转人类AD及阿尔兹海默氏痴呆的动物模型两者的认知缺损。鉴于非常过量的谷氨酸能功能是AD的助长者，则NMDA受体的有效药理拮抗作用(特别是由开放通道阻断剂)可能能够减缓AD的渐进发展(Parsons等人的Neuropharmacol.，1999，38：735-767；Danysz及Mbius，2002，Alzheimer′s Disease Neuroprotection-Therapeutic Potential ofIonotropic Glutamate Receptor Antagonists and Modulators，Lodge等人编辑，2002，in press，F.P.Graham Publishing Co.，NewYork)。

NMDA受体拮抗剂在多种CNS疾病中(如急性神经变性(例如，与中风及创伤有关)、慢性神经变性(例如，与帕金森氏病、AD、亨廷顿氏病及肌萎缩性侧索硬化症[ALS]有关)、癫痫症、药物依赖、抑郁症、焦虑症及慢性疼痛)可能潜在地具有广泛的治疗应用(综述可参考Parsons等人的Drug News Perspect.，1998，11：523-533；Parsons等人在以上1999年的文献；Jentsch及Roth的Neuropsychopharmacology，1999，20：201-205；Doble，Therapie，1995，50：319-337)。可经由在NMDA受体复合物内不同的识别位点上的作用达到NMDA受体的功能性抑制作用，如主要递质位点(竞争性)、位于阳离子通道内的苯环利定位点(非竞争性)、多胺调节位点及士的宁不敏感的共激动性甘氨酸位点(甘氨酸B)(Parsons等人在以上1999年的文献)。因为NMDA受体也在各种神经突触可塑性形式中扮演决定性的生理学角色，如涉及学习及记忆的那些(参考例如Colingridge及Singer，Trends Pharmacol.Sci.，1990，11：290-296)，故对NMDA受体具有高亲和性的神经保护剂有可能伤害正常的神经突触传递，并因此引起许多副作用。事实上许多迄今鉴定的NMDA受体拮抗剂以在其推定的治疗范围内的剂量产生非常不希望的副作用。因此，临床试验未能支持好的医疗应用，由于诸如以下的NMDA受体拮抗剂的许多副作用，如地佐环平((+)MK-801；(+)-5-甲基-10，11-二氢-5H-二苯并环庚烯-5，10-亚胺马来酸盐)、奎瑞斯塔特(Cerestat)(CNS-1102)、利可替奈(ACEA 1021)、赛福太(CGS-19755)及D-CPP-烯(Leppik，Epilepsia，1998，39(Suppl 5)：2-6；Sveinbjornsdottir等人的Epilepsia，1993，34：493-521；SCRIP 2229/30，1997，p.21)。因此在该领域中的挑战为开发出防止NMDA受体的病理活化作用但是允许其生理活性的NMDA受体拮抗剂。

美金刚胺(1-氨基-3，5-二甲基金刚烷)是1-氨基环己烷的类似物(揭示在例如美国专利第4,122,193号、4,273,774号、5,061,703号)。尼拉密山(neramexane)(1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷)也是1-氨基环己烷的衍生物(揭示在例如美国专利第6,034,134号)。美金刚胺、尼拉密山与一些其它的1-氨基烷基环己烷类是对该受体具有适度亲和性的全身活性非竞争性NMDA受体拮抗剂。其表现强电压依赖性特征及快的阻断/去阻断动力学(Parsons等人在以上1999年的文献；Gortelmeyer等人的Arzneim-Forsch/Drug Res.，1992，42：904-913；Winblad等人的Int.J.Geriat.Psychiatry，1999，14：135-146；Rogawski，Amino Acids，2000，19：133-49；Danysz等人的Curr.Pharm.Des.，2002，8：835-43；Jirgensons等人的Eur.J.Med.Chem.，2000，35：555-565)。这些化合物自NMDA受体通道解离的速度比高亲和性NMDA受体拮抗剂(如(+)MK-801)快得多，并有可能通过引起信号噪音比增加而减弱NMDA受体的紧张性过度刺激作用所产生的神经元可塑性崩溃。由于其对受体相对低的亲和性、强电压依赖性及快速的受体去阻断动力学，故这些化合物基本上全无其它NMDA受体拮抗剂在治疗范围内的剂量下的副作用(Kornhuber等人的Eur.J.Pharmacol.，1991，206：297-311)。事实上，美金刚胺已在临床上使用超过15年以上，显示良好的耐受性，治疗病患人数超过200,000位以上(Parsons等人在以上1999年的文献)。

已提出美金刚胺、尼拉密山与其它的1-氨基烷基环己烷类可用于缓解各种渐进式神经变性疾病，如在AD中的痴呆、帕金森氏病及强直(参考例如美国专利第5,061,703号、5,614,560号及第6,034,134号；Parsons等人在以上1999年的文献；Mobius，ADAD，1999，13：S172-178；Danysz等人的Neurotox.Res.，2000，2：85-97；Winblad及Poritis，Int.J.Geriatr.Psychiatry，1999，14：135-146；Gortelmeyer等人在以上1992年的文献；Danysz等人的Curr.Pharm.Des.，2002，8：835-843；Jirgensons等人的Eur.J.Med.Chem.，2000，35：555-565。)。这些疾病起因于谷氨酸能传递的障碍，即经由NMDA受体通道过量流入的钙，造成在特定的脑区域中的脑细胞破坏(Choi，J.Neurobiol.，23：1261-1276，1992；Rothman及Olney，Trends Neurosci.，10：299，1987；Kemp等人的TrendsPharmacol.Sci.，8：414，1987)。已证明以美金刚胺对成年大鼠的长期治疗会促进海马的长期增强作用的形成，增加神经突触可塑性期限，改善空间记忆能力及逆转由NMDA受体激动剂产生的记忆力减弱(Barnes等人的Eur.J.Neurosci.，1996，8：65-571；Zajaczkowski等人的Neuropharm，1997，36：961-971)。也已提出1-氨基环己烷衍生物类尤其是美金刚胺可用于治疗AIDS痴呆(美国专利第5,506,231号)、神经病性疼痛(美国专利第5,334,618号)、脑部缺血(美国专利第5,061,703号)、癫痫症、青光眼、肝性脑病、多发性硬化症、中风及迟发性运动障碍(Parsons等人在以上1999年的文献)。而且，证明比较高剂量的美金刚胺及尼拉密山在一些慢性及神经病性疼痛的模型中选择性阻断温度痛觉过敏及触觉异常疼痛而无明显的对运动反射的影响。也论证1-氨基环己烷衍生物类具有免疫调节、抗疟疾、抗波纳(Borna)病毒及抗丙型肝炎活性(参考例如美国专利第6,034,134号及其中引用的参考文献)。

也已提出1-氨基环己烷衍生物类(如美金刚胺及尼拉密山)(参考例如美国专利申请案第09/597,102号及在2001年12月27日以WO01/98253公布的其对应的国际专利申请案PCT EP 01/06964；美国专利第6,034,134号)经由非NMDA介导的途径起作用。因此，证明美金刚胺会以大致相等的亲和力抑制5HT3介导的电流(在天然的N1E-115及异种的HEK-293细胞中)及NMDA受体介导的电流(在大鼠海马切片中)(Parsons等人在以上1999年的文献；Rammes等人的2001，Neurosci.Lett.，306：81-84)。已知5HT3受体拮抗剂会改善动物的学习及记忆力(Carli等人的1997，Behav.Brain Res.，82：185-194；Reznik及Staubli，1997，J.Neurophysiol.，77：517-521)。

如以上所揭示，作为痴呆各方面的基础的在基底前脑内胆碱能神经元的丧失可能起因于ACh介导的信号作用的中断和/或NMDA受体的过度活化。越来越多的实验证据表明，ACh-及NMDA受体介导的信号系统互相关联，即阻断NMDA受体可以增加ACh的胞外释放。因此，已论证全身给药NMDA受体拮抗剂(+)MK-801会在大鼠的顶部及额部皮质中产生ACh胞外释放的剂量依赖性增加(Hasegawa等人的1993，Neurosci.Lett.，150：53-56；Aquas等人的1998，Neuroscience，85：73-83)。同样已证明脑室内(i.c.v.)给药另一种NMDA受体拮抗剂CPP增加大鼠顶部皮质及海马中的ACh释放(Giovannini等人的1994，Neurochem.Intl.，25：23-26；Giovannini等人的1994，J.Neurosci.，14：1358-1365)。已提出经由在GABA能及去甲肾上腺素能神经元上的NMDA受体起作用的谷氨酸维持对投射剂脑皮质的基底前脑胆碱能神经元的紧张性抑制性控制(Kim等人的1999，Mol.Psychiat.，4：344-352)。以该回路为基础，除了可能阻断NMDA过度活化外，可预期NMDA受体拮抗剂全身给药会降低GABA对ACh神经元上的抑制性控制，引起在皮质中ACh释放增加。

虽然已设计药物治疗法通过抑制AChE(例如，使用加兰他敏、他克林、多奈哌齐或利伐斯的明)，或通过减弱NMDA受体功能(例如，使用1-氨基环己烷衍生物类，如美金刚胺或尼拉密山)来增强胆碱能功能，但是未曾认识或提出这两种疗法的组合可能在减缓痴呆(例如，与AD有关)进展方面甚至更为有益。

相反，许多研究团体发表的证据显示美金刚胺可能潜在损害AChEI提供的有益效应。因此，已报导美金刚胺可以减弱可逆型AChEI卡巴呋喃(Gupta等人的J.Toxicol.Environ.Hlth.，1989，28：111-122)和涕灭威(aldicarb)(Gupta等人的Drug Dev.Res.，1991，24：329-341)及不可逆型AChEI梭曼(Mclean等人的Toxicol.Appl.Fharmacol，1992，112：95-103)产生的对AChE的抑制作用。

本发明者首次构想及论证1-氨基环己烷衍生物(如美金刚胺或尼拉密山)与AChEI(如加兰他敏、他克林、多奈哌齐或利伐斯的明)的临床组合是对痴呆具有意外价值的药理治疗法。本发明者假设及论证在对患有AD的患者联合给药时，1-氨基环己烷衍生物类及AChEI的效应会产生意外的利益，以及至少在一段时间内使症状得到意外的超加性缓解，正如症状逆转为证据，并以该方式对治疗痴呆特别有益。

附图简要说明

图1展示认知重度缺损组合测试(SIB)分析，以论证与单独的多奈哌齐相比，美金刚胺/多奈哌齐联合治疗的优越疗效。自基线至终点的变化(LOCF)：安慰剂组的LS平均变化值(SE)是-2.5(0.69)，美金刚胺组的该值是0.9(0.67)；p值＜0.001。

图2展示阿尔兹海默氏病合作研究-对日常功能的日常作息活动调查表(ADCS-ADL)评估，以论证与单独的多奈哌齐相比，美金刚胺/多奈哌齐联合治疗的优越疗效。自基线至终点的变化(LOCF)：安慰剂组的LS平均变化值(SE)是-3.4(0.51)，美金刚胺组的该值是-2.0(0.50)；p值＜0.028。

图3展示基于临床人员面询的改变印象量表-Plus(CIBIC plus)的整体评价，证实与单独的多奈哌齐相比，美金刚胺/多奈哌齐联合治疗的优越疗效。自基线至终点的变化(LOCF)：安慰剂组的LS平均值(SD)是4.7(1.05)，美金刚胺组的该值是4.4(1.05)；p值＜0.027。

发明概述

本发明提供用于治疗、预防、遏止、延缓哺乳动物中与中枢神经系统(CNS)疾病有关的痴呆的发病和/或降低其发病风险的新药物组合。在另一个方面，本发明提供完成一或多项上述用途的方法，其包括将1-氨基环己烷衍生物及乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)以就该目的有效的量施用于该哺乳动物。在特定的实施方案中，在本发明的联合治疗中有用的1-氨基环己烷衍生物是美金刚胺或尼拉密山，而AChEI是加兰他敏、他克林、多奈哌齐、利伐斯的明、石杉碱甲、萨那皮齐(zanapezil)、更斯的明、苯丁胺、苯乙基去甲希姆丝氨酸(phenethylnorcymserine)(PENC)、希姆丝氨酸(cymserine)、硫杂希姆丝氨酸(thiacymserine)、SPH 1371(加兰他敏plus)、ER 127528、RS 1259或F3796。优选哺乳动物是人类及CNS疾病是阿尔兹海默氏病(AD)、脑血管疾病(VaD)或唐氏综合征。

在更特定的实施方案中，本发明提供延迟认知缺损或痴呆，或降低进一步的认知衰退或缺损的风险，或遏止或逆转或减低由痴呆导致的认知衰退或缺损的方法。

因此，本发明的一个目的是将上述的组合给予尚未出现认知缺损或AD的临床征象，但是处于发生AD的风险的人类对象(例如，由于是载脂蛋白E同种型4的纯合或杂合突变体；也参考在Goate，1991，Nature，349：704-706中所述的基因筛选及临床分析)，或可能已出现轻度的认知缺损的征象或可能处于这种缺损的风险的个体(例如，如以下实施例2所述具有β-淀粉样蛋白肽[βAP]值升高的个体；也参考在其中引用的参考文献)。通过提供包含1-氨基环己烷衍生物及AChEI的组合，本发明提供在这些个体中降低发生AD的风险或延迟AD发病的组合物及方法。此外，如本文所揭示，这种联合治疗将中止或减低进一步认知衰退的速度，并在一段时间内逆转认知衰退，如至少一种标记或方法所测量的。

本发明的另一个目的是将上述的组合提供给已具有认知缺损的临床征象或在临床上表现出AD的患者。通过提供包含施用1-氨基环己烷衍生物及AChEI的联合治疗，本发明提供中止或减缓在这些人中AD进展的组合物及方法，并在一段时间内逆转在这些人中至少一种AD标记或症状的衰退。这些症状或标记的实例是患者的ADL、SIB或CIBIC评分。

如本文所揭示，优选将1-氨基环己烷衍生物及AChEI联合给药，最优选同时给药，甚至更优选在一种组合物中。优选将这些药物以治疗有效剂量给药，每一种药物的剂量是在1-200毫克/天的范围内。最优选将AChEI以1-40毫克/天给药，以及尤其是5-24毫克/天。最优选将1-氨基环己烷衍生物以5-60毫克/天给药，以及尤其是10-40毫克/天。

也在本文提供含有治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物及AChEI与任选地至少一种载体或赋形剂(在药物上可接受的)的药物组合物。进一步提供制备这些组合物的方法，其包含将每一种活性成份与在药物上可接受的载体或赋形剂掺合。也在本文提供包括含有第一种剂量的1-氨基环己烷衍生物的第一种组合物及含有第二种剂量的AChEI的第二种组合物的药盒，所述组合量是治疗与CNS疾病有关连的痴呆治疗有效的剂量。在优选的实施方案中，一种或另一种活性成份或两者的剂量是亚最佳量或亚阈值量。在另一个优选的实施方案中，每一种成份的量在两种活性成份联合给药时足以逆转至少一种症状或标记。

发明详述

本发明的组合

如以上所述，在一个方面，本发明提供用于治疗、预防、遏止、延迟在哺乳动物中与中枢神经系统(CNS)疾病(尤其是阿尔兹海默氏病(AD)、脑血管疾病(VaD)或唐氏综合征)有关连的痴呆的发病和/或降低其发病风险或逆转至少一种症状的新药物组合，其包含将1-氨基环己烷及乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)给予该哺乳动物。优选将1-氨基环己烷衍生物及AChEI以治疗有效的剂量给药，所述剂量和联合时提供有益的效应。

定义

在本文所使用适用于活性成分的术语“组合”是定义含有本发明的两种药物(即1-氨基环己烷衍生物及AChEI)的单一药物组合物(制剂)，或两种欲联合给药的单独的药物组合物(制剂)，其各自包含本发明的单一药物(即1-氨基环己烷衍生物或AChEI)。

在本文的定义范围内，所使用的术语“联合给药”是指1-氨基环己烷衍生物及AChEI的给药是同时在一个组合物中，或同时在不同的组合物中，或序贯给药。但是，为了将序贯给药视为“联合”给药，故必须将1-氨基环己烷衍生物及AChEI以仍允许所导致的治疗、预防、遏止、延迟在哺乳动物中与中枢神经系统(CNS)疾病有关连的痴呆的发病和/或减低其发病风险的有益效应的时间间隔单独分开给药。例如，必须将1-氨基环己烷衍生物及AChEI在同一天给药(即各自每天给药一或两次)，优选在彼此给药1小时之内，最优选同时给药。

本文所使用的术语“治疗”代表减轻或缓解治疗对象的至少一种疾病症状。例如，对于痴呆，“治疗”术语可以代表减轻或缓解认知缺损(如记忆力和/或定向力的缺损)或整体功能的缺损(日常作息活动，ADL)和/或减缓或逆转ADL或认知缺损的渐进式恶化。在本文的定义范围内，术语“治疗”也代表遏止、延迟疾病的发病(即在临床上出现疾病之前的时期)和/或减低疾病发生或恶化的风险。本文所使用的术语“保护”代表预防、延迟或治疗或在适当时预防、延缓及治疗在对象中疾病的发生或持续或加重。在本文的定义范围内，痴呆与CNS疾病有关，包括但不限于神经变性疾病，如阿尔兹海默氏病(AD)、唐氏综合征及脑血管痴呆(VaD)。优选痴呆与阿尔兹海默氏病(AD)有关。

例如，如本文所揭示，与AChEI组合的1-氨基环己烷衍生物的预防给药可以保护处于发生痴呆风险的受体对象(例如，在以下实施例2所述具有β-淀粉样蛋白肽[βAP]值升高的个体；载脂蛋白E同种型4纯合或杂合突变体的个体；也参考在Goate，1991，Nature，349：704-706所述的基因筛选及临床分析)。同样根据本发明，与AChEI联合的1-氨基环己烷衍生物的治疗给药可以导致减缓临床症状的发生或甚至症状消退。

本文所使用的术语“乙酰胆碱酯酶抑制剂”或“AChEI”是指通过抑制分解代谢酶乙酰胆碱酯酶(AChE)而增强胆碱能神经元功能的药物。该术语包含可逆型、假可逆型及不可逆型AChEI以及选择性抑制AChE的AChEI及选择性较低的AChEI(例如，也以丁酰基胆碱酯酶(BuChE)为靶标)。优选在本发明的方法及组合物中有用的AChEI是可逆型或假可逆型。优选在本发明的方法及组合物中有用的AChEI的具体实例包括但不限于他克林(THA；1，2，3，4-四氢-9-氨基吖啶盐酸盐)、多奈哌齐、加兰他敏、利伐斯的明、石杉碱甲、萨那皮齐、更斯的明、苯丁氨、苯乙基去甲希姆丝氨酸(PENC)、希姆丝氨酸、硫杂希姆丝氨酸、SPH 1371(加兰他敏plus)、ER 127528、RS 1259和F 3796。

在本文的定义范围内，所使用的术语“NMDA拮抗剂药物”是指可以抑制正常触发NMDA受体介导的神经元激发的药物。本发明优选的NMDA拮抗剂药物是1-氨基环己烷衍生物类如美金刚胺及尼拉密山。这些化合物也具有5HT₃拮抗剂活性和/或神经元烟碱性受体拮抗剂活性。

在本文以惯用的医药意义所使用的术语“类似物”或“衍生物”是指在结构上类似参照分子(如1-氨基环己烷)的分子，但是已以靶向及受控方式修饰以用替代的取代基置换参照分子的一或多个特定的取代基，借以产生在结构上类似于参照分子的分子。为了确认可具有改进或偏向的性状的已知化合物稍做修饰的型式(如在特定的靶向受体类型上具有较高的效力和/或选择性、穿透哺乳动物血-脑屏障的能力更大、较少的副作用等)合成及筛选类似物(例如，使用结构和/或生化分析)是医药化学领域熟知的药物设计途径。

在本文所使用的术语“1-氨基环己烷衍生物”是描述在用于创建类似但稍微不同的药物的过程中衍生自1-氨基环己烷(或其可得到的衍生物，如尼拉密山或美金刚胺)的化合物。

本发明的1-氨基环己烷衍生物类可由通式(I)代表：

其中：

R^*是-(A)n-(CR¹R²)m-NR³R⁴，

n+m＝0、1或2，

A选自直链或支链低碳烷基(C₁-C₆)、直链或支链低碳链烯基(C₂-C₆)及直链或支链低碳炔基(C₂-C₆)，

R¹及R²独立选自氢、直链或支链低碳烷基(C₁-C₆)、直链或支链低碳链烯基(C₂-C₆)、直链或支链低碳炔基(C₂-C₆)、芳基、取代的芳基及芳烷基，

R³及R⁴独立选自氢、直链或支链低碳烷基(C₁-C₆)、直链或支链低碳链烯基(C₂-C₆)及直链或支链低碳炔基(C₂-C₆)，或一起形成亚烷基(C₂-C₁₀)或亚烯基(C₂-C₁₀)，或与N一起形成3-7元氮杂环烷或氮杂环烯，包括经取代(烷基(C₁-C₆)、链烯基(C₂-C₆))的3-7元氮杂环烷或氮杂环烯；或者独立地R³或R⁴可与R^p、R^q、R^r或R^s结合形成亚烷基链-CH(R⁶)-(CH₂)_t-，其中t＝0或1，亚烷基链的左侧附接于u或Y，而亚烷基链的右侧附接于N，以及R⁶选自氢、直链或支链低碳烷基(C₁-C₆)、直链或支链低碳链烯基(C₂-C₆)、直链或支链低碳炔基(C₂-C₆)、芳基、经取代的芳基及芳烷基；或者独立地R³或R⁴可与R⁵结合形成以式-CH₂-CH₂-CH₂-(CH₂)_t-代表的亚烷基链或以式-CH＝CH-CH₂-(CH₂)_t-、-CH＝C＝CH-(CH₂)_t-或-CH₂-CH＝CH-(CH₂)_t-代表的亚烯基链，其中t＝0或1，并且亚烷基或亚烯基链的左侧附接于W，而亚烷基环的右侧附接于N；

R⁵独立选自氢、直链或支链低碳烷基(C₁-C₆)、直链或支链低碳链烯基(C₂-C₆)及直链或支链低碳炔基(C₂-C₆)，或R⁵和与其附接的碳及下一个相邻的环碳组合形成双键，

R^p、R^q、R^r及R^s独立选自氢、直链或支链低碳烷基(C₁-C₆)、直链或支链低碳链烯基(C₂-C₆)、直链或支链低碳炔基(C₂-C₆)、环烷基(C₃-C₆)和芳基、经取代的芳基及芳烷基，或R^p、R^q、R^r及R^s独立地可与其所附接的u或Y形成双键，或者R^p、R^q、R^r及R^s可组合在一起代表低碳亚烷基-(CH₂)_x-或低碳亚烯基桥，其中x是2-5，包括端值，该亚烷基桥可依次与R⁵组合形成另外的低碳亚烷基-(CH₂)_y-或低碳亚烯基桥，其中y是1-3，包括端值，

符号U、V、W、X、Y、Z代表碳原子，

以及包括旋光异构体、非对映异构体、多晶型物、对映异构体、水合物、在药物上可接受的盐类及在式(I)内的化合物的混合物。

以U-V-W-X-Y-Z定义的环优选选自环己烷、环己-2-烯、环己-3-烯、环己-1，4-二烯、环己-1，5-二烯、环己-2，4-二烯及环己-2，5-二烯。

代表性的C_1-6烷基包括甲基、乙基、丙基和丁基，而代表性的C_2-6链烯基和炔基包括乙烯基、丙烯基、乙炔基和丙炔基。可存在的芳基包括C_6-12基团如苯基或萘基，任选被例如一个或多个选自以下的取代基取代：C_1-6烷基如甲基或乙基，C_1-6烷氧基如甲氧基或乙氧基、羟基和卤素原子如氯或溴。可存在的芳烷基包括C_6-12芳基C_1-4烷基如苄基或苯乙基。

根据本发明所使用的1-氨基环己烷衍生物类的非限制性实例包括选自以下的1-氨基烷基环己烷衍生物类：

1-氨基-1，3，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1(反式)，3(反式)，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1(顺式)，3(顺式)，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1，3，3，5-四甲基环己烷，

1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷(尼拉密山)，

1-氨基-1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-顺式-3-乙基环己烷，

1-氨基-(1S，5S)顺式-3-乙基-1，5，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-反式-3-乙基环己烷，

1-氨基-(1R，5S)反式-3-乙基-1，5，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，

1-氨基-1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，

N-甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

N-乙基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷，

3，3，5，5-四甲基环己基甲基胺，

1-氨基-1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，

1-氨基-1，3，3，5(反式)-四甲基环己烷(轴氨基)，

3-丙基-1，3，5，5-四甲基环己胺半水合物，

1-氨基-1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己烷，

1-氨基-1，3，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1，3-二甲基-3-丙基环己烷，

1-氨基-1，3(反式)，5(反式)-三甲基-3(顺式)-丙基环己烷，

1-氨基-1，3-二甲基-3-乙基环己烷，

1-氨基-1，3，3-三甲基环己烷，

顺式-3-乙基-1(反式)-3(反式)-5-三甲基环己胺，

1-氨基-1，3(反式)-二甲基环己烷，

1，3，3-三甲基-5，5-二丙基环己胺，

1-氨基-1-甲基-3(反式)-丙基环己烷，

1-甲基-3(顺式)-丙基环己胺，

1-氨基-1-甲基-3(反式)-乙基环己烷，

1-氨基-1，3，3-三甲基-5(顺式)乙基环己烷，

1-氨基-1，3，3-三甲基-5(反式)-乙基环己烷，

顺式-3-丙基-1，5，5-三甲基环己胺，

反式-3-丙基-1，5，5-三甲基环己胺，

N-乙基-1，3，3，5，5-五甲基环己胺，

N-甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

1-氨基-1-甲基环己烷，

N，N-二甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

2-(3，3，5，5-四甲基环己基)乙基胺，

2-甲基-1-(3，3，5，5-四甲基环己基)丙基-2-胺，

2-(1，3，3，5，5-五甲基环己基-1)乙基胺半水合物，

N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)-吡咯烷，

1-氨基-1，3(反式)，5(反式)-三甲基环己烷，

1-氨基-1，3(顺式)，5(顺式)-三甲基环己烷，

1-氨基-(1R，SS)反式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己烷，

1-氨基-(1S，SS)顺式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-3(顺式)-异丙基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-3(反式)-异丙基环己烷，

1-氨基-1-甲基-3(顺式)-乙基环己烷，

1-氨基-1-甲基-3(顺式)-甲基环己烷，

1-氨基-5，5-二乙基-1，3，3-三甲基环己烷，

1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己烷，

1-氨基-1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，

N-乙基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

N-(1，3，5-三甲基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-[1，3(反式)，5(反式)-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶，

N-[1，3(顺式)，5(顺式)-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，3，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，3-三甲基-顺式-5-乙基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-[(1S，SS)顺式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，3-三甲基-反式-5-乙基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-[(1R，SS)反式-5-乙基，3，3-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶，

N-(1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷，

其旋光异构体、非对映异构体、对映异构体、水合物、其在药物上可接受的盐类及其混合物。

在例如美国专利申请案第09/597,102号及美国专利第6,034,134号中揭示尼拉密山(1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷)。

某些通式(I)的1-氨基环己烷衍生物类包括这样的情形：其中三个轴烷基取代基(例如，R^p、R^r及R⁵)都在一起形成桥头，以产生以下式IIb和IId所例示的化合物(也称为1-氨基金刚烷类)：

或

由以下的式IIIa-IIIc代表某些特定的式(I)的1-氨基环己烷衍生物类，其中n+m＝0，U、V、W、X、Y及Z形成环己烷环，以及R³及R⁴之一或两者独立地经由通过R^p、R^q、R^r、R^s或R⁵所形成的亚烷基桥与该环烷基环结合：

其中R^q、R^r、R^s、R^r或R⁵是如以上式(I)的定义，R⁶是氢、直链或支链低碳烷基(C₁-C₆)、直链或支链低碳链烯基(C₂-C₆)、直链或支链低碳炔基(C₂-C₆)、芳基、经取代的芳基或芳烷基，Y是饱和的，或可与R⁶组合以形成与其所附接的环碳的碳-氢键，1＝0或1，以及k＝0、1或2，并且-----代表单或双键。

根据本发明所使用的1-氨基环己烷衍生物类的非限制性实例包括选自以下的1-氨基金刚烷及其衍生物类：

1-氨基-3-苯基金刚烷，

1-氨基-甲基金刚烷，

1-氨基-3，5-二甲基金刚烷(美金刚胺)，

1-氨基-3-乙基金刚烷，

1-氨基-3-异丙基金刚烷，

1-氨基-3-正丁基金刚烷，

1-氨基-3，5-二乙基金刚烷，

1-氨基-3，5-二异丙基金刚烷，

1-氨基-3，5-二正丁基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-乙基金刚烷，

1-N-甲基氨基-3，5-二甲基金刚烷，

1-N-乙基氨基-3，5-二甲基金刚烷，

1-N-异丙基-氨基-3，5-二甲基金刚烷，

1-N，N-二甲基-氨基-3，5-二甲基金刚烷，

1-N-甲基-N-异丙基-氨基-3-甲基-5-乙基金刚烷，

1-氨基-3-丁基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3-戊基金刚烷，

1-氨基-3，5-二戊基金刚烷，

1-氨基-3-戊基-5-己基金刚烷，

1-氨基-3-戊基-5-环己基金刚烷，

1-氨基-3-戊基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3-己基金刚烷，

1-氨基-3，5-二己基金刚烷，

1-氨基-3-己基-5-环己基金刚烷，

1-氨基-3-己基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3-环己基金刚烷，

1-氨基-3，5-二环己基金刚烷，

1-氨基-3-环己基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3，5-二苯基金刚烷，

1-氨基-3，5，7-三甲基金刚烷，

1-氨基-3，5-二甲基-7-乙基金刚烷，

1-氨基-3，5-二乙基-7-甲基金刚烷，

1-N-吡咯烷并及1-N-哌啶衍生物，

1-氨基-3-甲基-5-丙基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-丁基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-戊基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-己基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-环己基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3-乙基-5-丙基金刚烷，

1-氨基-3-乙基-5-丁基金刚烷，

1-氨基-3-乙基-5-戊基金刚烷，

1-氨基-3-乙基-5-己基金刚烷

1-氨基-3-乙基-5-环己基金刚烷，

1-氨基-3-乙基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3-丙基-5-丁基金刚烷，

1-氨基-3-丙基-5-戊基金刚烷，

1-氨基-3-丙基-5-己基金刚烷，

1-氨基-3-丙基-5-环己基金刚烷，

1-氨基-3-丙基-5-苯基金刚烷

1-氨基-3-丁基-5-戊基金刚烷，

1-氨基-3-丁基-5-己基金刚烷，

1-氨基-3-丁基-5-环己基金刚烷，

其旋光异构体、非对映异构体、对映异构体、水合物、N-甲基、N，N-二甲基、N-乙基、N-丙基衍生物类、其在药物上可接受的盐类及其混合物。

例如，美金刚胺(1-氨基-3，5-二甲基金刚烷)是美国专利第4,122,193号及第4,273,774号的主题。

通常以卤化金刚烷类(优选溴-或氯金刚烷类)的烷基化作用制备式IIb及IId的1-氨基金刚烷衍生物类，包括美金刚胺。以额外的卤化及烷基化步骤获得经二-或三-取代的金刚烷类。或以三氧化铬的氧化作用及以HBr的溴化作用，或以溴的溴化作用及与甲酰胺反应接着以水解作用，来引入氨基。可将氨基官能团根据一般公认的方法烷基化。例如通过与甲酸氯甲酯反应及接着以还原作用可以完成甲基化作用。通过对分别的乙酰胺的还原作用可以引入乙基。关于更详细的合成说明，参考例如美国专利第5,061,703号及第6,034,134号。可在全部并入以供参考的于2001年11月7日提出申请的临时申请案第60/350,974、在2001年11月8日提出申请的第60/337,858号及在2002年3月21日提出申请的第60/366,386号与以下的合成实施例中发现上述化合物另外的合成技术。

根据本发明，可以使用式(I)的1-氨基环己烷衍生物类的本身或使用其在药物上可接受的盐类形式，包括例如酸加成盐类(如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐或酒石酸盐)或其与富马酸、马来酸、柠檬酸或磷酸的酸加成盐类。

此外，可以使用那些本领域技术人员已知的方法创建本发明化合物的类似物及衍生物类，其在控制痴呆方面具有提高的疗效，即在特定靶向的受体类型具有较高的效力和/或选择性、穿透哺乳动物的血-脑屏障的能力更大或更小(例如，或更高或更低的血-脑屏障穿透速度)、较少的副作用等。

可以使用在本文罗列的药物的各种盐类及异构体类(包括立体异构体类及对映异构体类)。术语“盐类”可以包括游离酸或游离碱的加成盐类。可用于形成在药物上可接受的酸加成盐类的酸实例包括无机酸类(如盐酸、硫酸或磷酸)及有机酸类(如乙酸、马来酸、琥珀酸或柠檬酸等)。可以惯用的方式制备所有的这些盐类(或其它类似的盐类)。盐或异构体的性质并不重要，先决条件是其不具毒性及实质上不干扰预期的药理活性。

适用于剂量或量的术语“治疗有效”是指在投予需要其的哺乳动物时足以引起预期的活性的化合物或药物组合物的量。作为本文关于含有1-氨基环己烷衍生物和/或AChEI的药物组合物所使用的术语“治疗有效量/剂量”可与术语“神经学有效量/剂量”交换使用，并指在投予哺乳动物时足以产生有效的神经学反应的化合物或药物组合物的量/剂量。值得注意的是在以活性成分的组合给药时，则组合的有效量可以包括或可以不包括每种成分各自有效的量。

用于说明活性成分量的术语“亚阈值量”代表不足以产生反应的量，即低于最小有效量的量。在相同的上下文中的术语“亚最佳量”代表产生反应的活性成分量，但不到以更大的量可达到的完全程度。

与本发明的组合物结合使用的语句“在药物上可接受的”是指在给予哺乳动物(例如，人类)时在生理学上可耐受及不常产生不希望的反应的分子实体及这些组合物的其它成分。如本文所使用的“在药物上可接受的”术语优选是代表联邦或美国政府的管理机构所批准或在美国药典或其它一般公认的药典中所列用于哺乳动物，更特别是用于人类。

用于本发明的药物组合物的术语“载体”是指与活性化合物(例如，1-氨基环己烷衍生物和/或AChEI)给药的稀释剂、赋形剂或媒剂。这些药物载体可以是无菌液体(如水、盐水溶液、右旋糖水溶液、甘油水溶液)及油类(包括那些石油、动物、植物或合成来源的油类，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油及诸如此类)。在E.W.Martin的第18版“Remington′s Pharmaceutical Sciences”中说明适合的药物载体。

如本文所使用的术语“对象/实验个体”是指哺乳动物(例如，啮齿类，如小鼠或大鼠)。该术语特别是指人类。

术语“约”或“近似”经常代表在给定值或范围的20％内，优选在10％之内，最优选在5％之内。另一选择是尤其在生物系统中的术语“约”代表在给定值的约一个对数(即一个数量级)的范围内，优选在2倍以内。

药物组合物

也提供与本发明的方法有关连的药物组合物，其包含治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物(如美金刚胺或尼拉密山)和/或治疗有效量的乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)(如加兰他敏、他克林、多奈哌齐或利伐斯的明)与任选地额外的载体或赋形剂(全是在药物上可接受的)。可将所述1-氨基环己烷衍生物及AChEI配制成单一组合物或可以联合给药的两种单独的组成物。优选将它们调配成单一组合物或优选同时给药的两种单独的组合物。可将组合物配制为每天给药一次或每天给药两次。因此，当每一次以一种或两种不同组合物给药时，则可将氨基环己烷衍生物以b-i-d给药及可将AChEI以b-i-d给药。或者可将氨基环己烷衍生物以b-i-d给药及可将AChEI每天给药一次(或反之亦然)。或者可将它们每天以一种或两种不同的组合物各自给药一次。

在揭示的组合物中，优选1-氨基环己烷衍生物及AChEI两者均以治疗有效量存在。应该考虑实际的给药模式、所投予的药物形式、给药针对的适应症、涉及的对象(例如，体重、健康状态、年龄、性别等)及负责的医师或兽医师的偏好和经验，通过实验确定最佳的治疗有效量。如本文所揭示，对于人类给药，1-氨基环己烷衍生物类及AChEI两者均以适合的剂型及每一种药物以每天从约1至200毫克的剂量范围给药。更特定言之，优选将1-氨基环己烷衍生物类以5-60毫克/天的剂量给药，并尤其是10-40毫克/天；优选将AChEI以1-40毫克/天的剂量给药，并尤其是5-24毫克/天。也希望在特定的情况中将一种或另一种活性成分以亚最佳量或亚阈值量给药，这种给药也在本发明的范围内。

本发明也提供制备药物组合物的方法，其包含以治疗有效量的1-氨基环己烷衍生物和/或AChEI与任选地一或多种在生理上可接受的载体和/或赋形剂和/或辅助物质掺合。

给药

可将本发明的活性剂以包含惯用的在药物上可接受的无毒性载体的剂量单位制剂经口服、局部、胃肠外或粘膜(例如，经口含、吸入或直肠)给药。经常希望使用口服途径。可将活性剂以胶囊、片剂或类似剂型经口服给药(参考Remington′s Pharmaceutical Science，Mack 5Publishing Co.，Easton，PA)。可将经口服给药的药物以时间控制释放媒剂的剂型给药，包括以扩散控制的系统、渗透装置、以溶解控制的基质及可侵蚀/可降解的基质。

关于片剂或胶囊剂型的口服给药，可将活性药物组分与在药物上可接受的无毒性赋形剂组合，如粘合剂(例如，预糊化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)、填充剂(例如，乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇及其它的还原性和非还原性糖、微晶纤维素、硫酸钙或磷酸氢钙)、润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或二氧化硅、硬脂酸、硬脂基富马酸钠、山萮酸甘油酯、硬脂酸钙及类似物)、崩解剂(例如，马铃薯淀粉或淀粉乙醇酸钠)或湿润剂(例如，月桂基硫酸钠)，着色剂及调味剂、明胶、甜味剂、天然和合成胶(如阿拉伯胶、黄耆胶或藻酸盐)、缓冲盐、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡及类似物。关于液体剂型的口服给药，可将药物组分与在药物上可接受的无毒惰性载体(例如，乙醇、甘油、水)、悬浮剂(例如，山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化的可食用脂肪)、乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)、非水性媒剂(例如，杏仁油、油性酯、乙醇或分馏的植物油)、防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)及类似物组合。也可以加入稳定剂(如抗氧化剂，BHA、BHT、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、柠檬酸)，以稳定剂型。

可将片剂以本领域熟知的方法包衣。也可将本发明的组合物引入例如以聚乙醇酸/乳酸(PGLA)制成的微球体或微胶囊中(参考例如美国专利第5,814,344号、第5,100,669号及第4,849,222号；PCT公开WO05/11010及WO 93/07861)。用于口服给药的液体制剂可以采用例如溶液、糖浆、乳液或悬浮液剂型，或可将其以与水或其它适合的媒剂在使用之前重组的干产品呈现。可将用于口服给药的制剂经适当地调配，提供活性化合物经控制或延迟释放。在美国专利第5,366,738号中描述了以时间控制释放的口服药物制剂的一个特定实例。

也可以将活性药物以脂质体输送系统的剂型给药，如小单层囊泡、大单层囊泡及多层囊泡。众所周知，可以由多种磷脂形成脂质体，如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。

可将本发明的药物使用作为与化合物分子偶联的个别载体的单克隆抗体输送。也可将活性药物与作为可靶向的药物载体的可溶性聚合物偶联。这些聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-酚、聚羟乙基天冬酰胺-酚或以棕榈酰基残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。而且，也可将活性药物与可用于实现药物控释的类生物可降解聚合物偶联，例如，聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸与聚乙醇酸的共聚物，聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚氢化吡喃、聚氰基丙烯酸酯及水凝胶的交联或两性嵌段共聚物。

关于以吸入给药，可将根据本发明的治疗剂便利地以加压包装或喷雾器使用适合的推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适合的气体)呈现的气雾喷剂形式输送。在加压式气雾剂的情况中，以提供阀的方式可以确定剂量单位，输送经计量的量。可以调配包括化合物与适合的粉基(如乳糖或淀粉)的粉末混合物的供在吸入器或吹入器中使用的例如明胶的胶囊及药筒。

可将本发明的制剂经例如推注或连续输注通过直接注射进行胃肠外输送，即经静脉内(i.v.)、脑室内(i.c.v.)、皮下(s.c.)、腹膜内(i.p.)、肌肉内(i.m.)、皮肤下(s.d.)或皮内(i.d.)给药。可将注射用的制剂以加入防腐剂的单位剂型呈现，例如，在安瓿或多剂量容器中。可将组合物采用如在油性或水性媒剂中的赋形剂、悬浮液、溶液或乳液之类的型式，并可以包括如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂之类的调配剂。另一选择是活性成分可以为在使用之前与适合的媒剂(例如，无菌无致热原的水)重组的粉末型式。

也可将本发明的组合物调配成直肠给药，例如成为栓剂或留滞型灌肠剂(例如，包括惯用的栓剂基底，如可可脂或其它的甘油酯)。

如本文的揭示，可将1-氨基环己烷衍生物及AChEI与在药物上可接受及与活性成分相容的赋形剂混合。此外，若必要时，制剂也可以包括少量的辅助物质，如湿润剂或乳化剂、pH缓冲剂和/或增强药物组合物效力的试剂。可将这些辅助分子经全身或局部输送，作为蛋白质或通过编码分子的载体的表达。也可以使用上述用于1-氨基环己烷衍生物类及AChEI的技术用于输送辅助分子。

虽然可将本发明的活性剂以分开剂量给药，例如，以每天二或三次，但优选1-氨基环己烷衍生物及AChEI各自的单一日剂量，最优选两种药剂的单一日剂量在一个组合物中或在同时给药的两个单独的组合物中。

本发明也包含用于制备药物组合物的方法，其包括合并1-氨基环己烷衍生物和/或AChEI与在药物上可接受的载体和/或赋形剂。

可在本发明的单位剂量中使用的1-氨基环己烷衍生物优选的具体量包括例如5毫克、10毫克、15毫克和20毫克的美金刚胺及5毫克、10毫克、20毫克、30毫克和40毫克的尼拉密山。可在本发明的单位剂量中使用的AChEI优选的具体量包括例如1.5毫克、3毫克、4.5毫克和6毫克的利伐斯的明，4毫克、8毫克和12毫克的加兰他敏及5毫克和10毫克的多奈哌齐。

本发明也提供药物包或药盒，其包括一或多个装有一或多种本发明制剂成分的容器。在相关的具体实施方案中，本发明提供用于准备本发明的药物组合物的药盒，该盒包含在第一个容器中的1-氨基环己烷衍生物及在第二个容器中的AChEI，以及任选地掺合两种药物和/或给药组合物的指示说明。该盒中的每一个容器也可以任选地包括一或多种在生理上可接受的载体和/或赋形剂和/或辅助物质。可以连同这些容器(类)提供由管理医药品或生物产品的制造、使用或销售的政府机构规定形式的通告，该通告反映受到机构批准用于人类给药的制造、使用或销售。

若必要时，可将组合物以包括一或多个含有活性成分的单位剂型的包装或分配器设计呈现。包装可以例如包含金属或塑料箔，如泡孔包装。可将给药指示附加于包装或分配器设计中。也可以制备在可相容的药物载体中调配的本发明组合物，放入适当的容器中及以标签注明用于适应症的治疗。

有效的剂量及安全性评估

根据本发明的方法，将本发明所述的药物组合物以治疗有效剂量(优选最低的毒性)给予患者。以“定义”为标题的章节提供“神经学有效剂量”及“治疗有效剂量”术语的定义。优选1-氨基环己烷衍生物及AChEI各自所用的剂量在组合时提供增强的效应，并最优选提供在单独投予每一种试剂时未观察到的效应。

本发明的1-氨基环己烷衍生物的效力可以如下测定：使用在体外的药理试验，如测量在大鼠或人脑组织中[³H]MK-801结合的置换、在培养的神经元和异种表达系统中阻断NMDA受体通道、在体内的抗惊厥作用、在通道阻断与抗惊厥作用之间的相互关系、对抗脑部缺血的保护作用、对抗NMDA诱发的死亡率的保护作用等(参考例如美国专利第5,061,703号)。

可以使用熟知的方法在体外测定本发明的AChEI的药效，如Ellman等人所述的AChE活性的分光光度测定法(Biochme.Pharmacol.，7：86-95，1996；也参考Wenk等人的Life Sci.，2000，66：1079-1083)。

遵循本领域确立的方法，接着在使用小动物模型(例如小鼠或大鼠)的临床前研究中测定本发明的化合物及组合物(在体外的试验中表现良好)有效的剂量及毒性，其中已发现1-氨基环己烷衍生物类及AChEI两者都是治疗有效的，以及其中可将这些药物以用于人类临床试验所提出的相同途径给药。本发明优选的动物模型是在以下的实施例2所揭示的AD转基因模型。

对于本发明方法中所用的药物组合物，可先自动物模型估计治疗有效剂量，以获得循环血浆浓度范围(包括IC₅₀，即在有关的脑部区域中达到最大的NMDA受体活性和/或AChE酶活性抑制作用的一半的试验化合物浓度)。接着使用衍生自动物系统的剂量反应曲线确定用于在人类的初期临床研究的试验剂量。在每一种组合物的安全性测定中，给药剂量及给药频率应该达到或超过那些用于临床试验中的预期值。

如本文所揭示，确定在本发明的组合物中的组份剂量以确保连续或间断给予的剂量不应该超过在考虑试验动物中的结果及患者的个体状况之后所确定的量。具体的剂量自然是依据给药步骤、患者或动物患者的状况如年龄、体重、性别、敏感性、食料、给药期限、在组合中所使用的药物、疾病的严重性而改变。可通过基于上述的指标的试验测定在特定的情况下适当的剂量及给药次数，但是可以根据从业医师的判断及每一位患者的情况(年龄、一般状况、症状的严重性、性别等)根据标准的临床技术改进或做最后决定。如本文所揭示，适当的1-氨基环己烷衍生物剂量通常是在以每公斤体重计0.05-1.00毫克的范围内，以及适当的AChEI剂量通常是在以每公斤体重计0.015-0.57毫克的范围内。

可在实验动物中以标准的医药步骤测定本发明组合物的毒性及疗效，例如，测定LD₅₀(使50％群体致死的剂量)及ED₅₀(对50％群体治疗有效的剂量)。疗效与毒性效应之间的剂量比是治疗指数，并可将其以ED₅₀/LD₅₀的比表示。展现大的治疗指数的组合物是优选的。

在调配供人类使用的剂量范围时可以使用来自动物研究所获得的数据。1-氨基环己烷衍生物类及AChEI对人类治疗有效的剂量优选位于包括ED₅₀及具有少量或不具任何毒性的循环浓度范围内。例如，美金刚胺的这种治疗有效循环浓度是1μM而他克林(AChEI)是8-30nM(Roberts等人的Eur.J.Clin.Pharmacol.，1998，54：721-724)。依据所使用的剂型及所使用的给药途径，剂量可在此范围内改变。理想的是应该每天使用单一剂量的每一种药物。

本发明的药物组合不仅在比较低的剂量下非常有效，而且还具有低毒性及产生极少的副作用。事实上本发明中所用的AChEI唯一常见的副作用是少许的胃刺激现象(反映为例如恶心、腹泻或呕吐)，而因使用本发明的1-氨基环己烷衍生物类所致的最常见的副作用是轻微的运动及认知受损(反映为例如恶心、呕吐、头晕或意识模糊)。

实施例

A.合成实施例

只以例证方式提供以下的合成实施例，并不是将其解释成限制本发明。

流程：合成实施例1及2

合成实施例1

3，3，5，5-四甲基-1-乙烯基环己胺盐酸盐(5)

a)2-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)乙酸乙酯(2)

将以小份量及同时以冰水冷却的NaH(8.8克，222毫摩尔，在矿物油中的60％悬浮液)加入在氩气下在无水THF(180毫升)中的膦酸乙酸三乙酯(49.32克，222毫摩尔)的搅拌溶液中。在室温下持续搅拌1小时，接着经10分钟加入3，3，5，5-四甲基环己酮(30.85克，200毫摩尔)的溶液，并将所得混合物回流22小时。接着将其倒在冰上(400克)，将产物以二乙醚(4×150毫升)萃取，并将萃取物经MgSO₄干燥。在将溶剂在真空中蒸发之后，将油性残余物在145℃(11毫米Hg)下蒸馏，得到作为油的36.8克(86％)2。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.96及0.98(总计12H，两者均s，3.5-CH₃)；1.27(3H，t，CH₃-乙基)；1.33(2H，m，4-CH₂)；1.95及2.65(总计4H，两者均s，2，6-CH₂)；4.14(2H，q，CH₂-乙基)及5.69ppm(1H，s，＝C-H)。

b)2-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)乙醇(3)

将在乙醚(20毫升)中的乙酸酯2(3.2克，15毫摩尔)的溶液逐滴加入在无水乙醚(60毫升)中的LiAlH₄(1.7克，45毫摩尔)的搅拌溶液中，同时以冰水冷却。持续搅拌1小时，并以水破坏残余的LiAlH₄。将水层分离并用乙醚(30毫升)萃取两次。将合并的萃取物以盐水(50毫升)清洗及经MgSO₄干燥。在真空下浓缩之后，将油性残余物通过Kugelrohr短路蒸馏作用(150-170℃，11毫米Hg)纯化，得到作为油的3(2，3克，89％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.92(6H，s，3，5-CH₃)；1.10(1H，br s，OH)；1.28(2H，s，4-CH₂)；1.87及1.94(总计4H，两者均s，2，6-CH₂)；4.16(2H，d，7Hz，CH₂O)及5.50ppm(1H，t，7Hz，＝C-H)。

c)2，2，2-三氯-N-(3，3，5，5-四甲基-1-乙烯基环己基)乙酰胺(4)

将NaH(0.22克，在矿物油中的55％分散液(0.22毫摩尔))加入在二乙醚(5毫升)中的醇3(0.8克，4.7毫摩尔)的溶液中。将反应混合物冷却至-10℃，并逐滴加入在二乙醚(3毫升)中的三氯乙腈(0.68克，4.7毫摩尔)的溶液。允许溶液温热至室温及将溶剂蒸发。将包括甲醇(0.018毫升)的戊烷(8毫升)加入残余物中。将所得混合物经由C盐垫过滤及蒸发。将残余油溶解在二甲苯(10毫升)中及回流10小时。将主要量的二甲苯在减压下(11毫米Hg)蒸馏掉及将残余物在硅胶上快速色谱(己烷，己烷-乙酸乙酯10∶1)纯化，得到作为油的4(0.98克，66％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.95(6H，s，3，5-CH₃)；1.18(6H，s，3，5-CH₃)；1.1-1.5(2H，m，4-CH₂)；1.32(2H，d，15Hz，2，6-CH₂)；2.15(2H，d，15Hz，2，6-CH₂)；5，08(1H，d，11Hz，＝CH₂)；5.13(1H，d，18Hz，＝CH₂)；5，85(1H，dd，18及11Hz，-HC＝)及6.7ppm(1H，brs，NH)。

d)3，3，5，5-四甲基-1-乙烯基环己胺盐酸盐(5)

将在DMSO(3毫升)中的酰胺4(0.32克，1毫摩尔)与粉状NaOH(0.4克，10毫摩尔)的混合物在室温下搅拌7天。将反应混合物以H₂O(20毫升)稀释及在室温下搅拌过夜。将产物以己烷(3×10毫升)萃取。将合并的萃取物以盐水(20毫升)清洗，经NaOH干燥及经由C盐垫过。将在无水乙醚(0.5毫升)中的4M HCl加入所获得的溶液中，并将溶剂蒸发。将残余物以乙腈(10毫升)处理，并在过滤器上收集沉淀物及在真空中经P₂O₅干燥，得到作为无色固体的5(0.12克，53％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.98及1.01(总计12H，两者均s，3，5-CH₃)；1.19和1.29(总计2H，两者均d，14Hz，4-CH₂)；1.62(2H，d，13.5Hz，2，6-CH₂)；1.72(2H，br s，H₂O)；2.16(2H，d，13.5Hz，2，6-CH₂)；5.46及5.73(2H，两者均d，18及11Hz，＝CH₂)；6.16(1H，dd，18及11Hz，＝CH)及8.24ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

合成实施例2

N，3，3，5，5-五甲基-1-乙烯基环己胺盐酸盐(7)

a)3，3，5，5-四甲基-1-乙烯基环己基氨基甲酸甲酯(6)

将在THF(6毫升)中的胺盐酸盐5(0.25克，1.2毫摩尔)与Na₂CO₃(0.73克，6.9毫摩尔)的混合物在室温下搅拌1小时。加入氯甲酸甲酯(0.27毫升，3.45毫摩尔)，并将反应混合物在室温下搅拌15小时。将混合物以二乙醚(20毫升)稀释，过滤及蒸发至干燥。将粗产物在硅胶上以快速色谱(10∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化，得到作为无色固体的6(0.24克，87％)，具有熔点61-63℃。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.92及1.15(总计12H，两者均s，3，5-CH₃)；1.00-1.40(4H，m，4-CH₂及2，6-CH)；2.00(2H，d，14Hz，2，6-CH)；3.62(3H，s，CH₃N)；4.72(1H，br s，NH)；5.00及5.06(总计2H，两者均d，10.5及17Hz，＝CH₂)及5.83ppm(1H，dd，10.5及17Hz，＝CH)。

b)N，3，3，5，5-五甲基-1-乙烯基环己胺盐酸盐(7)

将在THF(22毫升)中的LiAlH₄(0.28克，7.4毫摩尔)与氨基甲酸酯6(0.22克，0.92毫摩尔)的混合物回流12小时。接着将其在冰浴中冷却，并逐滴加入水(20毫升)。将所得悬浮液用己烷(3×20毫升)萃取，并将合并的萃取物以盐水(20毫升)清洗。将萃取物经NaOH干燥，过滤及以在二乙醚中的2.4M HCl溶液(1毫升)处理。将所得悬浮液蒸发至干燥。将残余物以二乙醚(10毫升)及乙腈(1毫升)处理。在过滤器上收集沉淀物及在真空中经P₂O₅干燥，得到作为无色固体的7(0.11克，52％)。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.00及1.02(总计12H，两者均s，3，5-CH₃)；1.23及1.32(总计2H，两者均d，15Hz，4-CH₂)；1.72(2H，d，13Hz，2，6-CH)；2.15(2H，d，13Hz，2，6-CH)；2.45(3H，t，5Hz，CH₃N)；5.64及5.69(总计2H，两者均d，11及17Hz，＝CH₂)；5.98(1H，dd，11及17Hz，＝CH)及9.30ppm(2H，br s，NH₃ ⁺)。

流程：合成实施例3及4

合成实施例3

1-烯丙基-3，3，5，5-四甲基环己胺盐酸盐(11)

a)1-烯丙基-3，3，5，5-四甲基环己醇(8)

将在无水乙醚(20毫升)中的3，3，5，5-四甲基环己酮(3.86克，25毫摩尔)的溶液逐滴加入搅拌的1M溴化烯丙基镁的醚溶液(60毫升，60毫摩尔)中。将混合物在室温下搅拌1小时及在回流下沸腾10分钟。接着将其以冰水冷却及以饱和NH₄Cl水溶液(40毫升)小心处理。将有机层分离，并以水及盐水清洗。在经无水MgSO₄干燥之后，将溶液在真空中浓缩。将残余物在减压下分馏，得到3.5克(72％)8，具有沸点98-100℃/12毫米Hg。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.88(6H，s，3，5-CH_3eq)；1.20(6H，s，3，5-CH_3ax)；0.95-1.60(6H，m，2，4，6-CH₂)；2.15(2H，d，7.5Hz，CH₂C＝)；4.95-5.30(2H，m，＝CH₂)及5.65-6.20ppm(1H，m，＝CH)。

b)1-烯丙基-1-叠氮基-3，3，5，5-四甲基环己烷(9)及1-甲基-2-(3，3，5，5-四甲基-亚环己基)乙基叠氮化物(10)

将叠氮基三甲基甲硅烷(12毫摩尔)加入在氩气下在无水苯(20毫升)中的环己醇8(1.96克，10毫摩尔)的溶液中。将BF₃*OEt₂(12毫摩尔)经由注射器在20分钟之内缓慢加入该冷却(5℃)溶液中。将混合物搅拌6小时，接着缓慢加入水。将有机层分开，并以饱和NaHCO₃水溶液及以盐水清洗，并经MgSO₄干燥。以过滤作用及温度维持在25℃以下的溶剂蒸发作用得到油，将其在硅胶上以柱色谱(轻石油醚)分离。收集具有Rf 0.85(己烷)的馏份。以溶剂的蒸发作用提供成为无色油的9(0.26克，11.7％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.89(6H，s，3，5-CH_3eq)；0.90(1H，d，14Hz，4-CH_ax)；1.05(2H，d，14Hz，2，6-CH_ax)1.18(6H，s，3，5-CH_3ax)；1.37(1H，d，14Hz，4-CH_eq)；1.60(2H，d，14Hz，2，6-CH_eq)；2.29(2H，d，7Hz，CH₂C＝)；4.95-5.25(2H，m，＝CH₂)及5.65-6.15ppm(1H，m，＝CH)。以另一馏份(Rf 0.65(己烷))的蒸发作用得到0.425克(20.3％)成为无色油的叠氮化物10。¹H HMR(CDCl₃，TMS)δ：0.91(6H，s)，0.94(3H，s)及0.96(3H，s，3′，5′-CH₃)；1.23(3H，d，6.5Hz，1-CH₃)；1.26(2H，s，4′-CH₂)；1.89(2H，s)及1.96(2H，s，2′，6′-CH₂)；4.31(1H，dq，6.5及9.5Hz，1-CH)及5.21ppm(1H，dm，9.5Hz，＝CH)。

c)1-烯丙基-3，3，5，5-四甲基环己胺盐酸盐(11)

将在无水乙醚(4毫升)中的叠氮化物9(0.221克，1.0毫摩尔)的溶液在10分钟之内逐滴加入在乙醚(10毫升)中的氢化锂铝(0.152克，4毫摩尔)的搅拌悬浮液中。将混合物搅拌4小时，接着将其以20％NaOH水溶液(8毫升)处理。将水层分开及以二乙醚(2×15毫升)萃取。将合并的有机萃取物以盐水清洗及经NaOH干燥。将过滤的溶液以在二乙醚中的无水HCl溶液处理及蒸发。将无水二乙醚加入固体残余物中，并在过滤器上收集及以无水乙醚清洗，得到作为无色固体的11(0.105克，47％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.03(6H，s，3，5-CH_3eq)；1.06(6H，s，3，5-CH_3ax)；1.29(2H，s，4-CH₂)；1.63(2H，d，13Hz，2，6-CH_ax)；1.80(2H，d，13Hz，2，6-CH_eq)；2.71(2H，d，7Hz，CH₂C＝)；5.10-5.40(2H，m，＝CH₂)；5.75-6.25(1H，m，＝CH)及8.25ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

合成实施例4

1-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)-2-丙胺盐酸盐(24)

将在无水二乙醚(4毫升)中的1-甲基-2-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)乙基叠氮化物(10)(0.33克，1.5毫摩尔)的溶液在10分钟之内逐滴加入在乙醚(15毫升)中的氢化锂铝(0.152克，4毫摩尔)的搅拌悬浮液中。将混合物搅拌4小时，接着将其以20％NaOH水溶液(8毫升)处理。将水层以乙醚(2×15毫升)萃取。有机萃取物合并，以盐水清洗及经NaOH干燥。将过滤的溶液以在乙醚中的无水HCl溶液处理及在真空中蒸发。将无水乙醚加入固体残余物中，并在过滤器上收集及以无水乙醚清洗，得到作为无色固体的24(0.18克，54％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.89(6H，s)，0.92(3H，s)及0.98(3H，s，3′，5′-CH₃)；1.27(2H，s，4′-CH₂)；1.47(3H，d，6.5Hz，3-CH₃)；1.84(1H，d，13.5Hz，2′-CH)；1.87(2H，s，6′-CH₂)；2.06(1H，d，13.5Hz，2′-CH)；4.17(1H，dq，6.5及9.5Hz，2-CH)；5.35(1H，d，9.5Hz，＝CH)及8.25ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

流程：合成实施例5、6及7

合成实施例5

1-(1-烯丙基-3，3，5，5-四甲基环己基)哌啶盐酸盐(13)

a)1-(3，3，5，5-四甲基-1-环己烯基-1)哌啶(12)

其是以哌啶(1.2当量)与3，3，5，5-四甲基环己酮的缩合作用所制得的，借由在苯中加热，共沸除去水。以在真空蒸馏条件下(100℃/10毫米Hg)除去原料的方式获得粗产物。琥珀色油。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.94(6H，s)及0.97(6H，s，3′，5′-CH₃)；1.25(2H，s，4′-CH₂)；1.40-1.70(6H，m，哌啶3，4，5-CH₂)；1.76(2H，s，6′-CH₂)；2.60-2.85(4H，m，哌啶2，6-CH₂)及4.40ppm(1H，s，＝CH)。

b)1-(1-烯丙基-3，3，5，5-四甲基环己基)哌啶盐酸盐(13)

将乙酸(0.675克，11.25毫摩尔)加入在THF(20毫升)中的烯胺12(2.1克，9毫摩尔)的溶液中。将混合物搅拌5分钟，并加入锌粉(0.74克，11.25毫摩尔)。接着逐滴加入在THF(5毫升)中的烯丙基溴(1.63克，13.5毫摩尔)的溶液，并将混合物在室温下搅拌6小时。加入Na₂CO₃水溶液，并将所得混合物以乙醚萃取。将萃取物以盐水清洗，经无水MgSO₄干燥及在真空中浓缩。将残余物在硅胶上以柱色谱(己烷，在己烷中的5％EtOAc)分开。收集具有Rf 0.85(13∶2的己烷-EtOAc)的馏份，蒸发及用在乙醚中的无水HCl溶液处理。收集沉淀物及以己烷-EtOAc混合物清洗，得到作为无色固体的13(0.79克，29％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.07(6H，s，3′5′-CH_3eq)；1.10(6H，s，3′，5′-CH_3ax)；1.34(1H，d，12.2Hz)及1.45(1H，d，12.2Hz，4′-CH₂)；1.70-1.95(6H，m，2′，6′-CH_ax及哌啶3，5-CH，4-CH₂)；2.37(2H，d，13.4Hz，2′，6′-CH_eq)；2.40-2.70(2H，m，哌啶3，5-CH)；2.76(2H，d，7.2Hz，CH₂C＝)；2.75-3.00(2H，m，哌啶2，6-CH)；3.64(2H，d，11.6Hz，哌啶2，6-CH)；5.13(1H，d，9.6Hz)及5.24(1H，d，17.8Hz，＝CH₂)；5.85-6.15(1H，m，＝CH)及10.72ppm(1H，br s，NH)。

合成实施例6

1-[3，3，5，5-四甲基-1-(3-甲基-2-丁烯基)环己基]哌啶盐酸盐(14)

其是根据用于化合物13的步骤(合成实施例5，b)自哌啶12所制得的，使用4-溴-2-甲基-2-丁烯代替烯丙基溴。产量：20％。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.07及1.08(总计12H，两者均s，3′，5′-CH₃)；1.32及1.44(2H，两者均d，14.2Hz，4′-CH₂)；1.69及1.76(6H，两者均s，＝(CH₃)₂)；1.68-1.96(4H，m，3，5-CH及4-CH₂)；1.84(2H，d，13.4Hz，2′，6′-CH_ax)；2.31(2H，d，13.4Hz，2′，6′-CH_eq)；2.40-2.80(4H，m，N(CH)₂，3，5-CH)；2.60(2H，d，7.2Hz，CH₂C＝)；3.63(2H，d，10.4Hz，N(CH)₂)；5.31(1H，t，6.8Hz，＝CH)及10.55ppm(1H，br s，NH)。

合成实施例7

1-[3，3，5，5-四甲基-1-(2-丙炔基)环己基]哌啶盐酸盐(15)

其是根据用于化合物13的步骤(合成实施例5，b)自哌啶12制得的，使用3-溴丙炔代替烯丙基溴。产量：6％。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.07(6H，s，3′，5′-CH_3eq)；1.11(6H，s，3′5′-CH_3ax)；1.23及1.44(总计2H，两者均d，14.3Hz，4′-CH₂)；1.75-2.00(4H，m，哌啶3，5-CH，4-CH₂)；1.91(2H，d，13.2Hz，2′6′-CH_eq)；2.28(1H，s，HCC)；2.34(2H，d，13.2H₂，2′，b′-CHeq)；2.40-2.70(2H，m，哌啶3，5-CH)；2.81(2H，s，CH₂CC)；2.85-3.10(2H，m，哌啶2，6-CH)；3.69(2H，d，10.2Hz，哌啶2，6-CH)及11.12ppm(1H，br s，NH)。

流程：合成实施例8及9

合成实施例8

2-(3，3，5，5-四甲基-1-乙烯基环己基)乙胺盐酸盐(19)

a)2-(3，3，5，5-四甲基-1-乙烯基环己基)乙酸乙酯(16)

将原乙酸三乙酯(18.6毫升，102毫摩尔)、2-(3，3，5，5-四甲基-亚环己基)乙醇(3)(4.65克，25.4毫摩尔)与丙酸(0.19毫升，2.5毫摩尔)的混合物在145℃下加热10小时。将乙醇在反应过程中自混合物蒸馏掉。将反应混合物冷却及倒入水(100毫升)中。将水相以己烷(2×50毫升)萃取，并将合并的有机相以5％KHSO₄水溶液(50毫升)及盐水(50毫升)清洗。将萃取物经MgSO₄干燥，过滤及蒸发。将残余物在硅胶上以快速色谱(轻石油醚及100∶2的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化，得到作为油的16(4.64克，73％)。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.91(6H，s，3，5-CH₃)；1.01(6H，s，3，5-CH₃)；1.23(3H，t，7Hz，乙基CH₃)；1.00-1.30(4H，m，4-CH₂及2，6-CH)；1.86(2H，d，13Hz，2，6-CH)；2.22(2H，s，CH₂C＝O)；4.08(2H，q，7Hz，乙基CH₂)；5.06及5.07(总计2H，两者均d，11及17.5Hz，＝CH₂)及5.95ppm(1H，dd，11及17.5Hz，-CH＝)。

b)2-(3，3，5，5-四甲基-1-乙烯基环己基)乙酸(17)

将在甲醇(26毫升)中的NaOH(1.03克，25.8毫摩尔)及乙酸酯16(1.3克，5.15毫摩尔)的溶液回流3小时。将混合物冷却至室温及倒入水(10毫升)中。将水相以浓缩HCl水溶液酸化及以己烷(3×30毫升)萃取。将合并的有机相以盐水清洗及经CaCl₂干燥，过滤及蒸发。将残余物在硅胶上以快速色谱(10∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化，得到作为无色固体的17(0.7克，71％)，具有熔点92-94℃。¹H-HMR(CDCl₃，TMS)δ：0.92(6H，s，3，5-CH₃)；1.02(6H，s，3，5-CH₃)；1.00-1.30(4H，m，4-CH₂及2，6-CH)；1.90(2H，d，14Hz，2，6-CH)；2.27(2H，s，CH₂C＝O)；5.11及5.13(总计2H，均d，11及18Hz，＝CH₂)；5.99(1H，dd，18及11Hz，＝CH)及10.80ppm(1H，br s，COOH)。

c)2-(3，3，5，5-四甲基-1-乙烯基环己基)乙酰胺(18)

将N-羟基琥珀酰亚胺(0.25克，2.2毫摩尔)及N，N′-二环己基碳二亚胺(0.45，2.2毫摩尔)加入在THF(5毫升)中的环己基乙酸17(0.45克，2毫摩尔)的溶液中。将混合物在室温下搅拌18小时及在冰浴中冷却。-次性加入25％NH₄OH水溶液(2毫升)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将沉淀物滤出及以二乙醚(30毫升)清洗。将滤液的有机相分开，并以5％KHSO₄水溶液(10毫升)及盐水清洗。将萃取物经MgSO₄干燥，过滤及蒸发。将残余物在硅胶上以快速色谱(4∶1至1∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化，得到作为无色固体的18(0.34克，76％)，具有熔点44-46℃。¹H-HMR(CDCl₃，TMS)δ：0.91(6H，s，3，5-CH₃)；1.02(6H，s，3，5-CH₃)；1.00-1.30(4H，m，4-CH₂及2，6-CH)；1.85(2H，d，14Hz，2，6-CH)；2.13(2H，s，CH₂C＝O)；5.18及5.19(总计2H，两者均d，18及11Hz，＝CH₂)；5.40及5.60(总计2H，均br s，NH₂)及6.03ppm(1H，dd，18及11Hz，＝CH)。

d)2-(3，3，5，5-四甲基-1-乙烯基环己基)乙胺盐酸盐(19)

将在THF(18毫升)中的LiAlH₄(0.41克，11毫摩尔)与酰胺18(0.30克，1.4毫摩尔)的混合物回流17小时。接着将其在冰浴中冷却，并逐滴加入水(30毫升)。将所得悬浮液以己烷(3×30毫升)萃取，并将合并的有机相以盐水清洗。将萃取物经NaOH干燥，过滤及浓缩成～10毫升体积。加入在二乙醚中的4.8M HCl溶液(1毫升)，并将所得悬浮液蒸发至干燥。将残余物以乙腈(5毫升)处理，在过滤器上收集沉淀物及在真空中经NaOH干燥，得到作为无色固体的19(0.16克，50％)。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.89(6H，s，3，5-CH₃)；1.02(6H，s，3，5-CH₃)；0.90-1.80(8H，m，环质子及乙胺-2-CH₂)；2.92(2H，br s，CH₂N)；5.05及5.15(2H，两者均d，18及11Hz，＝CH₂)；5.77(1H，dd，18及11Hz，＝CH)及8.10ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

合成实施例9

3-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)丙胺盐酸盐(32)

将三乙胺(0.25毫升，1.76毫摩尔)及二苯磷酰基叠氮化物(0.38毫升，1.76毫摩尔)加入在苯(6毫升)中的酸17(0.36克，1.6毫摩尔)的溶液中。将混合物回流2小时，冷却至室温及蒸发至干燥。将冷的(～5℃)浓HCl水溶液(3毫升)加入残余物中。将所得混合物在室温下搅拌18小时及通过加入10％NaOH水溶液而成强碱性。将己烷(20毫升)加入混合物中及将两相过滤。将沉淀物以己烷(2×5毫升)及水(2×5毫升)清洗。将滤液的有机相分开。将水相以己烷(2×10毫升)清洗。将合并的有机相以盐水(10毫升)清洗，经NaOH干燥及过滤。加入在二乙醚中的4.8M HCl溶液(1毫升)，并将所得悬浮液蒸发。将残余物自乙腈再结晶及在真空中经P₂O₅干燥，得到作为无色固体的32(0.1克，43％)。¹H-NMR：(CDCl₃，TMS)δ：0.90及0.92(总计12H，两者均s，c-Hex-3，5-CH₃)；1.23(2H，s，c-Hex-4-CH₂)；1.86及1.92(总计4H，两者均s，c-Hex-2，6-CH₂)；2.49(2H，q，7Hz，丙胺-2-CH₂)；2.98(2H，t，7Hz，丙胺-1-CH₂)；5.15(1Hz，t，7Hz，＝CH-)及8.30ppm(3H，brs，NH₃ ⁺)。

流程：合成实施例10及11

合成实施例10

2-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)乙胺盐酸盐(22)

a)3，3，5，5-四甲基亚环己基乙腈(20)

将在矿物油中的60％NaH分散液(0.96克，24毫摩尔)加入在THF(30毫升)中的氰甲基膦酸二乙酯(4.25克，24毫摩尔)的溶液中，同时以冰水冷却。将混合物搅拌30分钟，并逐滴加入在THF(10毫升)中的3，3，5，5-四甲基环己酮(3.08克，20毫摩尔)的溶液。移开冷却浴及将混合物在室温下搅拌72小时。将其倒入冰水(100毫升)中及以二乙醚(3×50毫升)萃取。将合并的有机相以盐水清洗，经MgSO₄干燥，过滤及蒸发。将粗产物在硅胶上以快速色谱(10∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化，得到作为无色油的20(2.38克，71％)。¹H-HMR(CDCl₃，TMS)δ：0.97及1.01(总计12H，两者均s，3′，5′-CH₃)；1.36(2H，s，4′-CH₂)；2.01(2H，s，2′-CH₂)；2.26(2H，s，6′-CH₂)及5.14ppm(1H，s，＝CH)。

b)2-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)乙胺盐酸盐(22)

将在二乙醚(30毫升)中的LiAlH₄(0.68克，18毫摩尔)的悬浮液在冰浴中冷却及加入在二乙醚中的1M ZnCl₂溶液(9毫升，9毫摩尔)。将所得混合物搅拌15分钟，并逐滴加入在二乙醚(30毫升)中的腈20(1克，6毫摩尔)的溶液，维持温度在0-5℃。接着移开冰浴及将混合物在室温下搅拌24小时。加入水(30毫升)及20％NaOH水溶液(20毫升)，同时以冰浴冷却。将水相以二乙醚(4×50毫升)萃取。将合并的有机相以盐水(50毫升)清洗及经NaOH干燥，过滤及蒸发。将残余物以Kugelrohr短路蒸馏作用(160℃/20毫米Hg)纯化。将蒸馏物以二乙醚稀释，并加入在二乙醚中的4.8M HCl溶液(3毫升)。在过滤器上收集所得沉淀物，以二乙醚(3×5毫升)清洗及在真空中经NaOH干燥，得到作为无色固体的22。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.91及0.92(总计12H，两者均s，3′，5′-CH₃)；1.28(2H，s，4′-CH₂)；1.89及1.93(总计4H，两者均s，2′，6′-CH₂)；3.62(2H，d，7Hz，CH₂N)；5.41(1H，t，7Hz，-C＝CH)及8.3ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

合成实施例11

2-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)丙胺盐酸盐(23)

a)2-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)丙腈(21)

其是根据用于化合物20的步骤(合成实施例10，a)使用(1-氰乙基)膦酸二乙酯所制得的。获得作为无色油的腈21，具有41％产量。¹H-NMR：(CDCl₃，TMS)δ：0.96及1.00(总计12H，两者均s，c-Hex-3，5-CH₃)；1.34(2H，s，c-Hex-4-CH₂)；1.91(3H，s，丙腈-3-CH₃)；2.04及2.28ppm(总计4H，两者均s，c-Hex-2，6-CH₂)。

b)2-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)丙胺盐酸盐(23)

其是根据用于化合物22的步骤(合成实施例10，b)自腈21所制得的。获得作为无色固体的胺盐酸盐23。¹H-NMR：(CDCl₃，TMS)δ：0.92及0.93(总计12H，两者均s，c-Hex-3，5-CH₃)；1.27(2H，s，c-Hex-4-CH₂)；1.89(3H，s，丙胺-3-CH₃)；1.99及2.01(总计4H，两者均s，c-Hex-2，6-CH₂)；3.64(2H，br s，丙胺-1-CH₂)及8.40ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

流程：合成实施例12

合成实施例12

(E，Z)-1-(3，3-二乙基-5，5-二甲基亚环己基)-2-丙胺盐酸盐(28)

a)1-烯丙基-3，3-二乙基-5，5-二甲基环己醇将在无水乙醚(5毫升)中的3，3-二乙基-5，5-二甲基环己酮(25)(1.47克，8.06毫摩尔)的溶液逐滴加入搅拌的1M烯丙基溴化镁的醚溶液(20毫升，20毫摩尔)中。将混合物在室温下搅拌1小时及在回流下沸腾10分钟。接着将其以冰水冷却及以饱和NH₄Cl水溶液(40毫升)处理。将有机层分开，并以水及盐水清洗。在经无水MgSO₄干燥之后，将溶液在真空中浓缩。将残余物在硅胶上以柱色谱(轻石油醚)纯化。收集具有Rf 0.7(13∶2的己烷：EtOAc)的馏份。以溶剂的蒸发作用供给成为无色油的26(1.35克，74％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.74(6H，t，7Hz，乙基的2CH₃)；0.88(3H，s，5-CH_3eq)；1.19(3H，s，5-CH_3ax)；0.80-2.05(10H，m，2，4，6-CH₂及乙基的2CH₂)；2.14(2H，d，7Hz，CH₂C＝)；4.95-5.30(2H，m，＝CH₂)及5.65-6.20ppm(1H，m，＝CH)。

b)(E，Z)-1-甲基-2-(3，3-二乙基-5，5-二甲基亚环己基)乙基叠氮化物(27)

其是根据用于化合物9及10的步骤(合成实施例3，b)自环己醇26所制得的。获得作为无色油的叠氮化物27，具有15％产量。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.73及0.74(总计6H，两者均t，7Hz，2CH₃乙基)；0.91，0.94及0.97(总计6H，全部都是s，5′5′-CH₃)；1.10-1.45(4H，m，2CH₂乙基)；1.22(3H，d，6.5Hz，1-CH₃)；1.26(2H，s，4′-CH₂)；1.89(2H，s)及1.97(2H，m，2′，6′-CH₂)；4.08-4.48(1H，m，1-CH)及5.18ppm(1H，dm，9.5Hz，＝CH)。

c)(E，Z)-1-(3，3-二乙基-5，5-二甲基亚环己基)-2-丙胺盐酸盐(28)

其是根据用于化合物24的步骤(合成实施例4)自叠氮化物27所制得的。获得作为无色固体的胺盐酸盐28，具有16％产量。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.72(6H，br t，7Hz，2CH₃乙基)；0.90，0.92及0.98(总计6H，全部是s，5′5′-CH₃)；1.25(6H，m，4′-CH₂及2CH₂乙基)；1.47(3H，d，6.5Hz，2-CH₃)；1.70-2.25(2H，br ABq，13Hz，2′-CH₂)；1.87(2H，s，6′-CH₂)；4.18(1H，m，2-CH)；5.34(1H，br d，9.5Hz，＝CH)及8.38ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

流程：合成实施例13

合成实施例13

2-甲基-1-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)-2-丙胺盐酸盐(31)

a)2-甲基-1-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)-2-丙醇(29)

将在二乙醚(20毫升)中的乙酸酯2(2.14克，10毫摩尔)的溶液加入在二乙醚中的1.6M MeLi溶液(26毫升，40毫摩尔)中，同时在冰浴中冷却。将反应混合物在室温下搅拌1小时。接着将其在冰浴中冷却，并逐滴加入饱和NH₄Cl水溶液(20毫升)。将水相以二乙醚(2×30毫升)萃取。将合并的有机相以盐水(30毫升)清洗，经MgSO₄干燥，过滤及蒸发。将残余物以Kugelrohr短路蒸馏作用(100℃/4毫米Hg)纯化，得到作为无色油的29(1.86克，86％)。¹H-HMR：(CDCl₃，TMS)δ：0.91及0.96(总计12H，两者均s，c-Hex-3，5-CH₃)；1.25(2H，s，c-Hex-4-CH₂)；1.38(6H，s，-C(CH₃)₂O)；1.79及2.23(均2H，两者均s，c-Hex-2，6-CH₂)及5.39ppm(1H，s，＝CH-)。

b)2-叠氮基-2-甲基-1-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)丙烷(30)

将BF₃Et₂O(0.3毫升，2.4毫摩尔)以3分钟的期限加入在苯(4.5毫升)中的醇29(0.42克，2毫摩尔)及TMSN₃(0.31毫升，2.4毫摩尔)的溶液中，同时以冰浴冷却。将反应混合物在5-10℃下搅拌1小时及经由短硅胶柱过滤。将溶液蒸发，并将残余物在硅胶上以快速色谱(轻石油醚)纯化，得到作为无色油的30(0.30克，64％)。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.92及0.98(总计12H，两者均s，c-Hex-3，5-CH₃)；1.27(2H，s，c-Hex-4-CH₂)；1.40(6H，s，-C(CH₃)₂N₃)；1.85及2.23(均2H，两者均s，c-Hex-2，6-CH₂)及5.27ppm(1H，s，＝CH-)。

c)2-甲基-1-(3，3，5，5-四甲基亚环己基)-2-丙胺盐酸盐(31)

其是以用于胺24相同的步骤(合成实施例4)自叠氮化物30所制得的。获得作为无色固体的胺盐酸盐31，具有69％产量。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.91及0.98(总计12H，两者均s，c-Hex-3，5-CH₃)；1.26(2H，s，c-Hex-4-CH₂)；1.68(6H，s，-C(CH₃)₂N)；1.84及2.10(均2H，两者均s，c-Hex-2，6-CH₂)；5.15(1H，s，＝CH-)及8.5ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

流程：合成实施例14及15

合成实施例14

3，3，5-三甲基-2-环己烯-1-胺盐酸盐(35)

a)3-叠氮基-1，5，5-三甲基-1-环己烯(34)

将53％H₂SO₄水溶液(8毫升)逐滴加入在CH₂Cl₂(5毫升)中的叠氮化钠(0.81克，12.5毫摩尔)的冷却(0℃)的悬浮液中。将混合物搅拌10分钟，接着加入在CH₂Cl₂(8毫升)中的3，5，5-三甲基-2-环己醇(33)(0.70克，5毫摩尔)的溶液。将混合物搅拌20小时，倒入冰水中，以NH₄OH水溶液中和及以CH₂Cl₂萃取。将萃取物以盐水清洗及经MgSO₄干燥。温度维持在25℃以下以过滤作用及溶剂蒸发作用得到油，将其在硅胶上以柱色谱(轻石油醚)分开。收集具有Rf 0.8(己烷)的馏份。以溶剂的蒸发作用得到作为无色油的34(0.365克，44％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.89及1.01(总计6H，两者均s，5，5-CH₃)；1.34(1H，m，c-4-CH)；1.55-1.95(3H，m，4-CH，6-CH₂)；1.71(3H，s，1-CH₃)；3.90(1H，m，3-CH)及5.39ppm(1H，s，C＝CH)。

b)3，5，5-三甲基-2-环己烯-1-胺盐酸盐(35)

其是根据用于化合物11的步骤(合成实施例3，c)自叠氮化物34所制得的。获得作为无色固体的胺盐酸盐35，具有57％产量。¹HNMR(CDCl₃，TMS)δ：0.89及1.03(总计6H，两者均s，5，5-CH₃)；1.25-2.15(4H，m，4，6-CH₂)；1.72(3H，s，3-CH₃)；3.88(1H，m，1-CH)；5.41(1H，s，C＝CH)及8.40ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

合成实施例15

1，3，5，5-四甲基-2-环己烯-1-胺盐酸盐(40)

a)1，3，5，5-四甲基-1，3-环己二烯(37)与1，5，5-三甲基-3-亚甲基-1-环己烯(38)的混合物

将在无水乙醚(15毫升)中的3，5，5-三甲基-2-环己烯-1-酮(36)(1.38克，10毫摩尔)的溶液逐滴加入搅拌的2M碘化甲基镁的醚溶液(15毫升，30毫摩尔)中。将混合物搅拌1小时，以冰水冷却及以15％CH₃COOH水溶液(15毫升)小心处理。将混合物再搅拌1小时。将有机层分开，并以水及饱和NaHCO₃水溶液清洗。在经MgSO₄干燥之后，将溶液在真空中浓缩。将残余物以快速色谱(轻石油醚，Rf 0.95(己烷))纯化，得到作为油的37与38的混合物(0.955克，70％)(以GC为基准计7∶10)。¹H HMR(CDCl₃，TMS)δ：0.89，0.98及1.03(总计10.2H，全部是s，5，5-CH₃)；1.55-2.20(总计12.6H，m，CH₂C＝及CH₃C＝)；4.69(2H，dm，4Hz，＝CH₂)；5.06(0.7H，m，＝CH)；5.50(0.7H，sept，1.5Hz，＝CH)及5.92ppm(1H，m，＝CH)。

b)3-叠氮基-1，5，5，5-四甲基-1-环己烯(39)

其是根据用于化合物34的步骤(合成实施例14，a)自37与38的混合物所制得的。获得作为无色油的叠氮化物39，具有43％产量。¹HNMR(CDCl₃，TMS)δ：0.93及0.99(总计6H，两者均s，5，5-CH₃)；1.31(3H，s，1-CH₃)；1.36及1.62(总计2H，两者均d，13Hz，4-CH₂)；1.72(5H，s，1-CH₃，6-CH₂)；5.32(1H，s，C＝CH)。

c)1，3，5，5-四甲基-2-环己烯-1-胺盐酸盐(40)

其是根据用于化合物11的步骤(合成实施例3，c)自叠氮化物39所制得的。获得作为无色固体的胺盐酸盐40，具有60％产量。¹HNMR(CDCl₃，TMS)δ：0.96及1.07(总计6H，两者均s，5，5-CH₃)；1.56(3H，s，1-CH₃)；1.73(3H，s，3-CH₃)；1.60-2.05(4H，m，4，6-CH₂)；5.49(1H，s，C＝CH)及8.27ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

流程：合成实施例16

合成实施例16

1，3，反式-5-三甲基-顺式-3-乙烯基环己胺盐酸盐(45)

a)3，5-二甲基-3-乙烯基环己酮(42)

将在THF中的1M溴化乙烯基镁溶液(90毫升，90毫摩尔)在惰性气氛中的干冰-丙酮浴中冷却至-20℃，并一次性加入CuCl(4.45克，45毫摩尔)。将混合物搅拌30分钟，并逐滴加入在THF(40毫升)中的3，5-二甲基-2-环己烯-1-酮(41)(3.73克，30毫摩尔)的溶液，使反应温度维持在-20℃。移开冷却浴，并允许反应混合物达到室温2小时。彻底加入饱和NH₄Cl水溶液(50毫升)，同时以冰浴冷却。接着加入己烷(150毫升)，并将水层分开及以己烷(2×100毫升)萃取。将合并的有机萃取物以20％乙酸水溶液(100毫升)及饱和NaHCO₃水溶液(3×200毫升)清洗。将萃取物经MgSO₄干燥，过滤及蒸发。将粗产物在硅胶上以快速色谱(20∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化，得到作为无色油的42(2.4克，52％)。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.99(3H，d，6Hz，5-CH₃)；1.11(3H，s，3-CH₃)；1.2-2.6(7H，m，环质子)；4.94及5.01(总计2H，两者均d，17及10.5Hz，CH₂＝)及5.64ppm(1H，dd，17及11Hz，＝CH)。

b)1，3，反式-5-三甲基-顺式-3-乙烯基环己醇(43)

将在二乙醚(10毫升)中的酮42(1克，6.6毫摩尔)的溶液加入在二乙醚中的1.6M甲基锂溶液(12毫升，19.6毫摩尔)中，同时以冰浴冷却。将所得混合物在0-5℃下搅拌1小时，并彻底加入饱和NH₄Cl水溶液(10毫升)。将水层分开及以二乙醚(2×15毫升)萃取。将合并的有机相以盐水(20毫升)清洗及经MgSO₄干燥。将萃取物过滤及蒸发。将粗产物在硅胶上以快速色谱(在轻石油醚中的3％乙酸乙酯)纯化。获得作为无色油的环己醇43(0.82克，74％)，不经表征用于下一步骤。

c)1-叠氮基-1，3，反式-5-三甲基-顺式-3-乙烯基环己烷(44)

其是根据用于化合物9(合成实施例3，b)的步骤自环己醇43所制得的。获得作为无色油的叠氮化物44，具有17％产量。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.94(3H，d，6.5Hz，5-CH₃)；0.97(3H，s，3-CH₃)；1.27(3H，s，1-CH₃)；0.7-2.0(7H，m，环质子)；4.95及4.97(总计2H，两者均d，18及11Hz，＝CH₂)及5.77ppm(1H，dd，18及11Hz，＝CH)。

d)1，3，反式-5-三甲基-顺式-3-乙烯基环己胺盐酸盐(45)

其是根据用于化合物11(合成实施例3，c)的步骤自叠氮化物44所制得的。获得作为无色固体的胺盐酸盐45，具有32％产量。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.92(3H，d，6.5Hz，5-CH₃)；0.96(3H，s，3-CH₃)；1.45(3H，s，1-CH₃)；0.8-2.1(9H，m，2，4，6-CH₂，5-CH及H₂O)；4.94及4.97(2H，两者均d，18及11Hz，＝CH₂)及5.76(1H，dd，18及11Hz，＝CH)及8.26ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

流程：合成实施例17

合成实施例17

2-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)-4-戊烯胺盐酸盐(49)

a)2-氰基-2-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)乙酸乙酯(47)

将氯化铜(I)(0.05克，0.5毫摩尔)加入在氩气氛下冷却(-10℃)的在乙醚中的1M碘化甲基镁溶液(15毫升，15毫摩尔)中及搅拌5分钟。接着在20分钟之内使温度维持在0℃以下逐滴加入在THF(25毫升)中的乙酸酯46(2.5克，10毫摩尔)的溶液。将混合物搅拌1小时，以饱和NH₄Cl水溶液中止及以二乙醚萃取。将萃取物以盐水清洗，经无水MgSO₄干燥，过滤及蒸发。将残余物在硅胶上以快速色谱(20∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化，得到作为无色油的47(1.5克，56.5％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.01，1.07及1.09(总计12H，s，3′，5′-CH₃)；1.00-1.85(6H，m，环CH)；1.30(3H，s，1′-CH₃)；1.33(3H，t，7Hz，CH₃-乙基)；3.44(1H，s，2-CH)及4.27ppm(2H，q，7Hz，OCH₂)。

b)2-氰基-2-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)-4-戊烯酸乙酯(48)

将氢化钠(0.284克，7.09毫摩尔，在矿物油中的60％分散液)加入在无水DMSO(10毫升)中的氰基乙酸酯47(1.25克，4.71毫摩尔)的溶液中。将混合物在50℃下搅拌30分钟及冷却至20℃。将烯丙基溴(0.86克，7.1毫摩尔)加入其中，并将混合物在室温下搅拌3小时，接着在50℃下搅拌30分钟。将混合物冷却，以水处理及以二乙醚萃取。将萃取物以水及盐水清洗，经无水MgSO₄干燥，过滤及蒸发。将残余物在硅胶上以快速色谱(20∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化，得到作为无色油的48(0.92克，63.7％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.98(6H，s，3′，5′-CH_3eq)；1.11(6H，s，3′，5′-CH_3ax)，1.00-1.85(6H，m，环CH)；1.31(3H，t，7Hz，CH₃-乙基)；1.33(3H，s，1′-CH₃)；2.42及2.86(总计2H，两者均dd，13及7Hz，3-CH₃)；4.02(2H，q，7Hz，OCH₂)；5.05-5.37(2H，m，＝CH₂)及5.55-6.05ppm(1H，m，＝CH)。

c)2-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)-4-戊烯胺盐酸盐(49)

将水(0.53毫升，2.95毫摩尔)及氯化锂(0.25克，5.9毫摩尔)加入在DMSO(10毫升)中的酯48(0.9克，2.95毫摩尔)的溶液中。将混合物在175-180℃下搅拌3小时，接着将其冷却，并加入水(30毫升)。将混合物以二乙醚萃取。将萃取物以水及盐水清洗，经无水MgSO₄干燥，过滤及浓缩成10毫升体积。将所获得的溶液逐滴加入在二乙醚(15毫升)中的氢化锂铝(0.25克，6.6毫摩尔)的悬浮液中及在回流下搅拌3小时。将混合物冷却及以20％NaOH水溶液处理，并以二乙醚萃取。将萃取物以盐水清洗，经NaOH干燥，过滤及以在二乙醚中的无水HCl溶液处理。在将溶剂蒸发之后，将残余物在硅胶上以色谱(20∶1的氯仿-甲醇)纯化，得到作为无色固体的49(0.245克，31％)。¹HNMR(DMSO-D₆，TMS)δ：0.92，0.96及1.04(总计15H，全部是s，3′，5′-CH₃及1-CH₃)；1.00-1.65(总计6H，m，环-CH₂)；1.85-2.40(3H，m，3-CH₂，4-CH)；2.60-3.10(2H，m，CH₂N)；4.90-5.25(2H，m，＝CH₂)；5.62-6.10(1H，m，＝CH)及7.92ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

合成实施例18

1，外-3，5-三甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-1)

a)1，外-3，5-三甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛-6-烯(5-1)

将在无水苯(125毫升)中的1，3，3，反式-5-四甲基环己胺(4-1)(3.88克，25毫摩尔)、K₂CO₃(28克，0.2摩尔)与四乙酸铅(22.2克，50毫摩尔)的混合物搅拌3小时，同时在回流下沸腾。接着将其以冰水冷却及过滤。将沉淀物以二乙醚清洗及将滤液在减压下蒸发。将油性残余物在硅胶上以柱色谱(20∶1，10∶1的二氯甲烷-异丙醇)分开。收集具有Rf 0.7(EtOAc)的馏份，在减压下浓缩之后得到作为琥珀色油的1.0克(26％)亚胺5-1。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.86(3H，d，6Hz，3-CH₃)；0.90-1.80(7H，m，环CH)；1.12(3H，s，1-CH₃)；1.34(3H，s，5-CH₃)及7.36ppm(1H，s，HC＝)。

b)1，外-3，5-三甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-1)

将在MeOH(2毫升)中的亚胺5-1(0.8克，5.3毫摩尔)的溶液逐滴加入在MeOH(6毫升)中的硼氢化钠(0.4克，10.6摩尔)的悬浮液中。将混合物在室温下搅拌24小时，接着加入10毫升的5％NaOH水溶液。将混合物以二乙醚萃取。将有机相以饱和NaCl水溶液清洗及经NaOH小丸干燥。将经过滤的溶液以在二乙醚中的无水HCl溶液处理，在减压下蒸发，并将残余物自无水CH₃CH再结晶，得到作为无色固体的化合物1-1(0.33克，35％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.96(3H，d，6Hz，3-CH₃)；0.90-1.15(1H，m，2-CH)；1.11(3H，s，1-CH₃)；1.41(1H，d，12.4Hz，8-CH)；1.55-1.70(1H，m，2-CH)；1.57(3H，s，5-CH₃)；1.70-1.90(2H，m，4-CH及8-CH)；2.00-2.30(2H，m，3-CH及4-CH)；3.00-3.25(2H，m，7-CH₂)及9.30-9.85ppm(2H，br s，NH₂ ⁺)。

合成实施例19

5-乙基-1，外-3-二甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-2)

a)1-叠氮基-1-乙基-3，3，反式-5-三甲基环己烷(7)

将在氯仿(50毫升)中的1-乙基-3，3，反式-5-三甲基环已醇(6)(3.3克，18.1毫摩尔)、叠氮化钠(2.36克，36.3毫摩尔)与三氟乙酸(10.7毫升)的冷却(～0℃)的混合物搅拌24小时，接着通过加入稀氨水使其成碱性。将有机相分开，以水清洗及经K₂CO₃干燥。以过滤作用及在减压下的溶剂蒸发作用得到油性残余物，将其在以轻石油醚洗脱的硅胶上以快速色谱分开，得到作为轻无色油的叠氮化物7(2.0克，56％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.64(1H，d，14Hz，环CH)；0.85-2.15(8H，m，环CH及Et-CH₂)；0.90(3H，d，7Hz，5-CH₃)；0.92(3H，s，3-CH_3eq)；0.97(3H，t，7.5Hz，Et-CH₃)及1.10ppm(3H，s，3-CH_3ax)。

b)1-乙基-3，3，反式-5-三甲基环己胺(4-2)

将在二乙醚(10毫升)中的叠氮化物7(1.97克，10毫摩尔)的溶液逐滴加入在二乙醚(30毫升)中的氢化锂铝(1.13克，30毫摩尔)的悬浮液中。将混合物在室温下搅拌20小时。接着将其以10％NaOH水溶液小心中止。将有机相分开，并将水相以二乙醚萃取。将合并的有机相以饱和NaCl水溶液清洗及经NaOH干燥。以过滤作用及在减压下的溶剂蒸发作用得到作为油的胺4-2(1.36克，80％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.55-2.15(9H，m，环CH及Et-CH₂)；0.88(3H，s，3-CH_3eq)；0.89(3H，d，6.5Hz，5-CH₃)；0.89(3H，t，7Hz，Et-CH₃)及1.12ppm(3H，s，3-CH_3ax)。

c)5-乙基-1，外-3-二甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-2)

其是根据实施例18b所述的步骤自亚胺5-2所制得的，具有30％产量。无色固体。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.95-1.15(7H，m，环CH，3-CH₃及CH₃-Et)；1.12(3H，s，1-CH₃)；1.48(1H，d，13.6Hz，8-CH)；1.55-1.76(3H，m，环CH及CH₂-Et)；1.84-2.04(2H，m，环CH)及2.04-2.28(2H，m，4，8-CH)；3.14(2H，m，7-CH₂)及9.40ppm(2H，brs，NH₂ ⁺)。

d)5-乙基-1，外-3-二甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛-6-烯(5-2)

其是根据实施例18a所述的步骤自胺4-2所制得的，具有32％产量。油。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.82-0.95(1H，m，环CH)；0.91(3H，d，6Hz，3-CH₃)；0.94(3H，t，7.5Hz，Et-CH₃)；1.15-1.75(6H，m，环CH)；1.15(3H，s，1-CH₃)；1.71(2H，q，7.5Hz，Et-CH₂)及7.38ppm(1H，s，HC＝)。

合成实施例20

外-3-乙基-1，5-二甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-3)

a)反式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己基氨基甲酸叔丁酯(8-1)

将Na₂CO₃(3.18克，30毫摩尔)加入在THF(20毫升)中的1，3，3-三甲基-反式-5-乙基环己胺盐酸盐(4-3)(1.54克，7.5毫摩尔)的溶液中，并将混合物搅拌30分钟。接着将其以冰水冷却，加入二碳酸二叔丁酯(1.7克，7.65毫摩尔)及继续搅拌20小时。加入水，并将混合物以二乙醚萃取两次。将合并的萃取物以饱和NaCl水溶液清洗，经MgSO₄干燥及蒸发。将固体残余物以己烷处理，过滤及以己烷清洗，得到氨基甲酸酯8-1。在将滤液蒸发及以乙腈处理之后分离出额外量的8-1。获得作为无色固体的氨基甲酸酯8-1(1.18克，57％)，具有熔点70-71℃。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.65-1.65(7H，m，CH₂-Et及环CH)；0.88(3H，t，6.5Hz，CH₃-Et)；0.88及0.99(两者均3H，s，3，3-CH₃)；1.42(9H，s，t-Bu)；1.85(1H，dq，13.5及2.5Hz，6-CH_eq)；2.24(1H，d，14Hz，2-CH_eq)及4.30ppm(1H，br s，NH)。

b)外-3-乙基-1，5-二甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷-6-甲酸叔丁酯(9-1)

一次性将四乙酸铅(3.92克，8.85毫摩尔)加入在无水苯(35毫升)中的氨基甲酸酯8-1(1.05克，3.85毫摩尔)与碘(1.95克，7.7毫摩尔)的混合物中。将混合物搅拌及同时在回流下沸腾4小时，接着以冰水冷却及过滤。将沉淀物以二乙醚清洗，并将滤液以饱和偏亚硫酸氢钾水溶液及接着以饱和NaHCO₃水溶液仔细清洗。将有机相以饱和NaCl水溶液清洗，经MgSO₄干燥及蒸发。将残余物在硅胶上以快速色谱(20∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化，得到作为无色油的化合物9-1(0.76克，73％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.86(3H，t，6.5Hz，CH₃-Et)；1.00(3H，s，1-CH₃)；1.00-1.80(7H，m，CH₂-Et及环CH)；1.46(12H，s，t-Bu及5-CH₃)；1.95-2.45(2H，m，环-CH)；3.06及3.36ppm(两者均1H，d，11Hz，7-CH₂)。

c)外-3-乙基-1，5-二甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-3)

将氨基甲酸酯9-1(0.73克，2.7毫摩尔)加入在二氯甲烷(15毫升)中的三氟乙酸(3毫升)的溶液中，并将混合物在室温下搅拌10小时。将溶液在减压下蒸发，并将残余物以10％NaOH水溶液(5毫升)处理及以二乙醚萃取。将萃取物以饱和NaCl水溶液清洗及经NaOH干燥。将过滤的溶液以在二乙醚中的无水HCl溶液处理。将溶剂在减压下蒸发，并将残余物以无水乙腈处理，得到作为无色固体的胺盐酸盐1-3(0.34克，62％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.85-2.45(9H，m，2，4，8-CH₂，3-CH及CH₂-Et)；0.90(3H，t，7Hz，CH₃-Et)；1.12(3H，s，1-CH₃)；1.59(3H，s，5-CH₃)；3.13(2H，t，6Hz，7-CH₂)及9.55ppm(2H，br s，NH₂ ⁺)。

合成实施例21

1，3，3，5-四甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-4)

a)1，3，3，5，5-五甲基环己基氨基甲酸叔丁酯(8-2)

其是根据实施例20a所述的步骤自1，3，3，5，5-五甲基环己胺盐酸盐(4-4)所制得的，具有70％产量。在硅胶上以快速色谱(20∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化。无色油。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.87(6H，s，3，5-CH_3eq)；0.90-1.45(4H，m，4-CH₂及2，6-CH_ax)；1.12(6H，s，3，5-CH_3ax)；1.27(3H，s，1-CH₃)；1.42(9H，s，t-Bu)；2.24(2H，d，15Hz，2，6-CH_eq)及4.30ppm(1H，br s，NH)。

b)1，3，3，5-四甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷-6-甲酸叔丁酯(9-2)

其是根据实施例20b所述的步骤自氨基甲酸酯8-2所制得的，具有48％产量。无色油。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.91，0.94及0.99(总计9H，全部是s，1，3，3-CH₃)；0.80-1.75(5H，m，环CH)；1.34及1.52(总计3H，两者均s，5-CH₃)；1.41及1.44(总计9H，两者均s，t-Bu)；1.91及2.09(总计2H，两者均d，14.5Hz，6-CH)；3.00及3.28(一种旋转异构体)；和3.03及3.33(另一种旋转异构体；总计2H，全部是dd，11及2Hz，7-CH₂)。

c)1，3，3，5-四甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-4)

其是根据实施例20c所述的步骤自氨基甲酸酯9-2所制得的，具有68％产量。无色油。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.00，1.13及1.29(总计9H，s，1，3，3-CH₃)；1.25-1.65(4H，m，2-CH₂及4，8-CH)；1.64(3H，s，5-CH₃)；1.81(1H，dt，12.4及2.3Hz，4-CH)；2.21(1H，d，14.5Hz，8-CH)；3.10-3.40(2H，m，7-CH₂)；9.10及9.90ppm(总计2H，两者均br s，NH₂ ⁺)。

合成实施例22

1，3，3，5，6-五甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-5)

a)1，3，3，5-四甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷-6-甲酸甲酯(11)

其是根据实施例20b所述的步骤自1，3，3，5，5-五甲基环己基氨基甲酸甲酯(10)所制得的，具有50％产量。无色油。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.87及0.96(总计9H，两者均s，1，3，3-CH₃)；1.00-1.70(4H，m，2-CH₂及4，8-CH)；1.33及1.46(总计3H，两者均s，1-CH₃)；1.70-1.20(2H，m，4，8-CH)；3.04及3.34(主要的旋转异构体)和3.10及3.39(次要的旋转异构体；总计2H，全部是dd，11.5及1.5Hz，7-CH₂)；3.59(主要)及3.64(总计3H，两者均s，OCH₃)。

b)1，3，3，5，6-五甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-5)

将在二乙醚(10毫升)中的氨基甲酸酯11(1.0克，4.44毫摩尔)的溶液加入在二乙醚(25毫升)中的氢化锂铝(0.34克，9毫摩尔)的悬浮液中。将混合物在室温下搅拌20小时。接着将其以冰水冷却，并以10％NaOH水溶液小心中止。将有机相分开，并将水相以二乙醚萃取。将合并的有机相以饱和NaCl水溶液清洗及经NaOH干燥。将过滤的溶液以过量的在二乙醚中的无水HCl溶液处理。将溶剂在减压下蒸发，并将残余物以无水乙腈及二乙醚(2∶1)处理，并在冷藏器中冷却24小时。将沉淀物过滤及以二乙醚清洗，得到作为无色固体的胺盐酸盐1-5(0.25克，26％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.03，1.09，1.16及1.22(总计9H，全部是s，1，3，3-CH₃)；1.44(3H，s，5-CH₃)；1.50-2.50(6H，m，2，4，8-CH₂)；2.73(d，5Hz)及2.80(总计3H，d，5.5Hz，N-CH₃)；2.55(m)及2.94(总计1H，dd，12及6Hz，7-CH)；3.73(dd，12及8.5Hz)和4.07(总计1H，dd，13及7Hz，7-CH)；9.50及10.80ppm(总计1H，br s，NH⁺)。

合成实施例23

5-乙基-1，3，3-三甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-6)

a)5-乙基-1，3，3-三甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛-6-烯(5-3)

其是根据实施例18a所述的步骤自1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己胺(4-5)所制得的，具有28％产量。油。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.93(3H，s，3-CH₃)；0.94(3H，t，7.4Hz，Et-CH₃)；0.98(3H，s，3-CH₃)；1.15(3H，s，1-CH₃)；1.20-1.50(5H，m，环CH)；1.57(1H，dt，12.4及2Hz，环CH)；1.69(2H，dq，7.5及2.8Hz，Et-CH₂)及7.47ppm(1H，s，HC＝)。

b)5-乙基-1，3，3-三甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-6)

其是根据实施例18b所述的步骤自亚胺5-3所制得的，具有33％产量。无色固体。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.01(3H，s，3-CH₃)；1.03(3H，t，7.5Hz，CH₃-Et)；1.13及1.31(两者均3H，s，1，3-CH₃)；1.25-1.35(1H，m，环CH)；1.35-1.65(4H，m，CH₂-Et及环CH)；1.69(1H，d，12Hz，2-CH)；1.92-2.12(2H，m，4，8-CH)；3.05-3.45(2H，m，7-CH₂)；9.05及9.65ppm(两者均1H，br s，NH₂ ⁺)。

合成实施例24

1，外-3，5，外，内-7-四甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-7)

a)顺式-3-乙基-1，3，反式-5-三甲基环己基氨基甲酸叔丁酯(8-3)

其是根据实施例20a所述的步骤自1，3，5-三甲基-顺式-4-乙基环己胺盐酸盐(4-6)所制得的，具有81％产量。在硅胶上以快速色谱(20∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)纯化。无色油。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.63(1H，d，12.5Hz，环CH)；0.70-0.90(1H，m，环CH)；0.79(3H，t，7.5Hz，CH₃-Et)；0.86(3H，d，6.4Hz，5-CH₃)；1.28(3H，s，3-CH₃)；1.25-1.85(6H，m，环CH及CH₂-Et)；1.41(9H，s，t-Bu)；1.52(3H，s，1-CH₃)；2.35(1H，d，12.5Hz，2-CH)及4.31ppm(1H，br s，NH)。

b)1，外-3，5，外，内-7-四甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷-6-甲酸叔丁酯(9-3)

其是根据实施例20b所述的步骤自氨基甲酸酯8-3所制得的，具有57％产量。无色油。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.60-1.85(6H，m，环CH)；0.85-1.15(6H，m，1，3-CH₃)；1.35-1.55(6H，m，5，7-CH₃)；1.45(9H，s，t-Bu)；2.06及2.27(总计1H，m，环CH)；3.36及3.51ppm(总计1H，m，7-CH)。

c)1，外-3，5，外，内-7-四甲基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-7)

其是根据实施例20c所述的步骤自氨基甲酸酯9-3所制得的，具有70％产量。无色固体。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.96(3H，d，5.8Hz，3-CH₃)；1.00(3H，s，1-CH₃)；1.00-1.15(1H，m，2-CH)；1.36(1H，d，12Hz，8-CH)；1.43(3H，d，7.4Hz，7-CH₃)；1.55-1.75(2H，m，2-CH及4-CH)；1.62(3H，s，5-CH₃)；1.90(1H，d，12.6Hz，8-CH)；2.15-2.35(2H，m，3-CH及4-CH)；3.65(1H，m，7-CH)；9.00及9.95ppm(总计2H，两者均br s，NH₂ ⁺)。

合成实施例25

1，外-3，5-三甲基-外，内-7-苯基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-8)

a)3-苄基-3，5-二甲基环己酮(13)

将CuCl(0.52克，5.3毫摩尔)加入在氩气下冷却(-20℃)的在二乙醚中的1M溴化苄基镁溶液(50毫升)中，并将混合物搅拌5分钟。接着使温度维持在-10℃以下逐滴加入在二乙醚(15毫升)中的3，5-二甲基-2-环己烯-1-酮(12)(4.4克，35.1毫摩尔)的溶液。将混合物搅拌2小时及以10％乙酸水溶液(40毫升)中止。将有机层分开，以水、饱和NaHCO₃水溶液及饱和NaCl水溶液清洗，并经MgSO₄干燥。以过滤作用及在真空中的浓缩作用供给油性残余物，将其在硅胶上以快速色谱(10∶1的轻石油醚-乙酸乙酯)分开。获得作为无色油的环己酮13(4.0克，53％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.92(3H，s，3-CH₃)；1.06(3H，d，6Hz，5-CH₃)；1.10-2.45(7H，m，环CH)，2.42及2.56(总计2H，两者均d，13Hz，CH₂Ph)及7.05-7.35ppm(5H，m，Ph)。

b)顺式-3-苄基-1，3，反式-5-三甲基环己醇(14)

将在二乙醚(10毫升)中的酮13(3.9克，18.1毫摩尔)的溶液逐滴加入在二乙醚中的1M MeMgI(40毫升)中。将混合物在室温下搅拌1小时。将在对Grignard反应的常规处理之后所获得的醚萃取物经Na₂SO₄干燥，过滤及蒸发，得到油性残余物，将其在硅胶上以快速色谱(轻石油醚-乙酸乙酯)纯化。获得作为无色油的环己醇14(3.2克，76％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.75(3H，s，3-CH₃)；0.95-1.25(3H，m，环CH)；0.92(3H，d，6.6Hz，5-CH₃)；1.23(3H，s，1-CH₃)；1.45-1.75(3H，m，环CH)；2.05-2.25(1H，m，5-CH)；2.77及3.04(两者均1H，d，13Hz，CH₂Ph)及7.05-7.35ppm(5H，m，芳基CH)。

c)N-(顺式-3-苄基-1，3，反式-5-三甲基环己基)-2-氯乙酰胺(15)

将硫酸(2.1毫升，3.83克，39毫摩尔)逐滴加入在乙酸(2.1毫升)中的环己醇14(3.0克，13毫摩尔)及氯乙腈(4.0克，52毫摩尔)的搅拌溶液中，同时以冰水冷却。将混合物在室温下搅拌24小时，接着倒入冰水(10毫升)中。将混合物以20％NaOH水溶液中和及以二乙醚(3×15毫升)萃取。将合并的有机相以饱和NaCl水溶液清洗及经MgSO₄干燥。将萃取物过滤及将溶剂蒸发。将残余物在以轻石油醚与乙酸乙酯的混合物(10∶1)洗脱的硅胶上以快速色谱纯化，得到作为无色油的酰胺15(1.32克，33％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.73(3H，s，3-CH₃)；0.90-1.40(3H，m，环CH)；0.98(3H，d，6.6Hz，5-CH₃)；1.42(3H，s，1-CH₃)；1.63(1H，m，环CH)；1.80-2.05(1H，m，5-CH)；2.12(1H，dq，13.8及3Hz，6-CH)；2.33(1H，d，12.7Hz，CH₂Ph)；2.51(1H，dt，15及2.2Hz，2-CH)；3.17(1H，d，12.7Hz，CH₂Ph)3.95及3.96(总计2H，两者均s，CH₂CO)；6.52(1H，br s，NH)及7.00-7.35ppm(5H，m，芳基CH)。

d)顺式-3-苄基-1，3，反式-5-三甲基环己胺盐酸盐(4-7)

将在乙醇(5毫升)与乙酸(1毫升)的混合物中的酰胺15(0.62克，2毫摩尔)及硫脲(0.18克，2.4毫摩尔)的溶液回流10小时。将反应混合物冷却至室温，并加入20毫升的10％NaOH水溶液，同时搅拌。将所得混合物以二乙醚(3×10毫升)萃取。将合并的萃取物以饱和NaCl水溶液清洗，经NaOH干燥，过滤及用在二乙醚中的无水HCl溶液处理。将溶剂在减压下蒸发及将残余物以无水二乙醚处理，得到作为无色固体的胺盐酸盐4-7(0.33克，35％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.68(3H，d，6.5Hz，5-CH₃)；0.70-1.30(3H，m，环CH)；0.73(3H，s，3-CH₃)；1.28(3H，s，1-CH₃)；1.50(1H，d，15.4Hz，环CH)；1.60-1.85(1H，m，环CH)；2.05(1H，d，16Hz，环CH)；2.15-2.50(1H，m，5-CH)；2.47及3.33(两者均1H，d，12.8Hz，CH₂Ph)；7.00-7.35(5H，m，芳基CH)及8.42ppm(3H，br s，NH₃ ⁺)。

e)1，外-3，5-三甲基-7-苯基-6-氮杂双环[3.2.1]辛-6-烯(5-4)

其是根据实施例18a所述的步骤自游离胺4-7所制得的，具有40％产量。油。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.94(3H，d，6.6Hz，3-CH₃)；0.90-1.15(2H，m，环CH)；1.26(3H，s，1-CH₃)；1.30-1.90(5H，m，环CH)；1.43(3H，s，5-CH₃)及7.30-7.65ppm(5H，m，芳基CH)。

f)1，外-3，5-三甲基-外，内-7-苯基-6-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(1-8)

其是根据实施例18b所述的步骤自亚胺5-4所制得的，具有33％产量。无色固体。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.75-1.95(4H，m，环CH)；0.86(3H，d，5.8Hz，3-CH₃)；1.20(3H，s，1-CH₃)；1.56(3H，s，5-CH₃)；1.99(1H，d，14.4Hz，8-CH)；2.05-2.15(1H，m，环CH)；2.20-2.30(1H，m，环CH)；4.57(1H，m，7-CH)；7.24及7.65(总计5H，两者均br s，Ph)；9.15及10.40ppm(总计2H，两者均br s，NH₂ ⁺)。

合成实施例26

1，5，外-7-三甲基-2-氮杂双环[3.3.1]壬烷盐酸盐(1-9)

a)2-{顺式-3-[(2-氯乙酰基)氨基]-1，3，反式-5-三甲基环己基}乙酸(16)

将高碘酸钠(10.5克，49毫摩尔)及二氧化钌(7毫克，0.06毫摩尔)加入在乙腈(16毫升)、四氯甲烷(16毫升)与水(23毫升)的混合物中的1.5克(4.9毫摩尔)N-(顺式-3-苄基-1，3，反式-5-三甲基环己基)-2-氯乙酰胺(从在实施例25c化合物15的合成之后分离的具有Rf0.7-0.8(2∶1的己烷-EtOAc)的馏份所获得的)的溶液中。将混合物在室温下搅拌72小时，接着将其过滤及将滤饼以二氯甲烷清洗。将滤液的有机相分开，并将水相以二氯甲烷萃取。将合并的有机相经CaCl₂干燥，过滤及蒸发。将残余物在以氯仿洗脱的硅胶上以快速色谱纯化，得到作为油的酸16(0.55克，41％)。¹H NMR(DMSO-d₆，TMS)δ：0.8-2.6(7H，m，环CH)；0.84及0.85(总计3H，d，6Hz，5-CH₃)；0.92及1.01(总计3H，s，1-CH₃)；1.21及1.22(总计3H，s，3-CH₃)；2.19及2.39(总计2H，两者均d，13.5Hz，CH₂CO)；3.97ppm(2H，s，CH₂Cl)；7.57及7.70(总计1H，两者均br s，NH)及12.05ppm(1H，br s，COOH)。

b)2-{顺式-3-[(2-氯乙酰基)氨基]-1，3，反式-5-三甲基环己基}乙酸乙酯(17)

将亚硫酰氯(0.73毫升，10毫摩尔)逐滴加入在无水乙醇(5毫升)中的酸16(0.55克，1.99毫摩尔)的溶液中，同时以冰水冷却。将所得溶液在室温下搅拌15小时，接着在减压下蒸发。将残余物在以轻石油醚与乙酸乙酯的混合物(6∶1)洗脱的硅胶上以快速色谱纯化，得到作为油的乙酯17(0.32克，54％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.7-1.6(4H，m，环CH)；0.88-0.94(3H，m，5-CH₃)；1.04及1.14(总计3H，s，1-CH₃)；1.25(2H，t，7Hz，CH₃-乙基)；1.35及1.36(总计3H，s，3-CH₃)；1.6-1.8(1H，m，5-CH)；2.05-2.35(2H，m，环CH)；2.16及2.79(总计2H，d，13Hz，CH₂CO)；3.92及3.95(总计2H，s，CH₂Cl)；4.12(2H，q，7Hz，CH₂O)；6.42及7.28ppm(总计1H，br s，NH)。

c)1，5，外-7-三甲基-2-氮杂双环[3.3.1]壬-3-酮(18)

将在乙醇(5毫升)与乙酸(1.2毫升)的混合物中的乙酯17(0.32克，1.07毫摩尔)及硫脲(0.098克，1.3毫摩尔)的溶液回流20小时。将反应混合物冷却至室温及将溶剂蒸发。加入10％NaOH水溶液，并将混合物以氯仿(3×10毫升)萃取。将合并的有机萃取物经CaCl₂干燥，过滤及蒸发。将残余物在以轻石油醚与乙酸乙酯的混合物(6∶1，3∶1)洗脱的硅胶上以快速色谱纯化。收集具有Rf 0.4(2∶1的己烷-EtOAc)的馏份，得到作为无色固体的内酰胺18(0.12克，39％)，具有熔点176-177℃。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.89(3H，d，5.8Hz，7-CH₃)；0.75-1.05(3H，m，环CH)；0.99(3H，s，5-CH₃)；1.20(3H，s，1-CH₃)；1.24-1.36(1H，m，环CH)；1.45-1.60(2H，m，环CH)；1.60-1.84(1H，m，7-CH)；2.14(2H，s，4-CH₂)及5.40ppm(1H，br s，NH)。

d)1，5，7-三甲基-2-氮杂双环[3.3.1]壬烷盐酸盐(1-9)

将在四氢呋喃中的1M硼烷溶液(2毫升，2毫摩尔)加入在四氢呋喃(2毫升)中的内酰胺18(0.07克，0.385毫摩尔)的溶液中及回流15小时。将混合物冷却至室温及通过加入浓HCl水溶液使之成酸性。将溶剂在减压下蒸发，并向残余物中加入己烷(10ml)和20％NaOH水溶液(10ml)。分离有机相，水相用己烷(2×5ml)萃取。将合并的有机相用饱和NaCl水溶液(10ml)清洗及经NaOH干燥。将萃取物过滤，并加入在二乙醚中的无水HCl溶液。将溶剂蒸发及将残余物以二乙醚(5毫升)处理。在过滤器上收集沉淀物，得到作为无色固体的胺盐酸盐1-9(0.02克，25％)。¹H NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.80-1.85(7H，m，环CH)；0.88(3H，d，6.5Hz，7-CH₃)；0.96(3H，s，5-CH₃)；1.50(3H，s，1-CH₃)；2.10-2.40(2H，m，7-CH及8-CH)；3.15-3.35及3.30-3.55(两者均1H，m，3-CH₂)；9.15及9.55ppm(两者均1H，br s，NH₂ ⁺)。

合成实施例27

7，7，9，9-四甲基-1-氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐(3-1)

a)3，3，5，5-四甲基-1-(2-苯基乙基)环己醇(20-1)

将在二乙醚(10毫升)中的3，3，5，5-五甲基环己酮(19)(1.54克，10毫摩尔)的溶液加入在二乙醚中的0.85M溴化苯基乙基镁溶液(25毫升，20毫摩尔)中，同时以冰浴冷却。将所得混合物搅拌0.5小时及彻底加入饱和NH₄Cl水溶液(30毫升)。将有机相分开，并将水相以二乙醚(2×20毫升)清洗。将合并的有机相以饱和NaCl水溶液(20毫升)清洗及经MgSO₄干燥。以过滤作用及溶液的蒸发作用得到残余物，将其在以轻石油醚与乙酸乙酯的混合物(10∶1)洗脱的硅胶上以快速色谱纯化，得到作为油的环己醇20-1(2.1克，82％)。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.91(6H，s，3，5-CH₃)；1.23(6H，s，3，5-CH₃)；1.0-1.6(7H，m环质子及OH)；1.6-1.8(2H，m，PhCH₂CH₂)；2.6-2.8(2H，m，PhCH₂CH₂)及7.0-7.4ppm(5H，m，Ph)。

b)2-氯-N-[3，3，5，5-四甲基-1-(2-苯基乙基)环己基]乙酰胺(21-1)

其是根据实施例25c所述的步骤自环己醇20-1所制得的，具有96％产量。无色油。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.93(6H，s，3，5-CH₃)；1.17(6H，s，3，5-CH₃)；1.0-1.5(4H，m，4-CH₂，2，6-CH)；2.0-2.2(2H，m，PhCH₂CH₂)；2.24(2H，d，14Hz，2，6-CH)；2.5-2.6(2H，m，PhCH₂CH₂)；3.90(2H，s，CH₂Cl)；6.60(1H，br s，NH)及7.1-7.3ppm(5H，m，Ph)。

c)3-{1-[(2-氯乙酰基)氨基]-3，3，5，5-四甲基环己基}丙酸(22-1)

其是根据实施例26a所述的步骤自酰胺21-1所制得的，具有53％产量。具有130-131℃熔点的无色晶体。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.92(6H，s，3，5-CH₃)；1.17(6H，s，3，5-CH₃)；1.0-1.5(4H，m，4-CH₂，2，6-CH)；2.0-2.4(6H，m，OCCH₂CH₂，2，6-CH)；3.97(2H，s，CH₂Cl)及6.6ppm(1H，br s，NH)。

d)3-{1-[(2-氯乙酰基)氨基]-3，3，5，5-四甲基环己基}丙酸乙酯(23-1)

其是根据实施例26b所述的步骤自酸22-1所制得的，具有82％产量。油。¹H-HMR(CDCl₃，TMS)δ：0.91(6H，s，3，5-CH₃)；1.14(6H，s，3，5-CH₃)；1.25(3H，t，7Hz，CH₃CH₂O)；0.8-1.6(4H，m，4-CH2，2，6-CH)；2.0-2.4(6H，m，OCCH₂CH₂，2，6-CH)；3.95(2H，s，CH₂Cl)，4.11(2H，q，7Hz，CH₃CH₂O)及6.50ppm(1H，br s，NH)。

e)7，7，9，9-四甲基-1-氮杂螺[4.5]癸-2-酮(24-1)

其是根据实施例26c所述的步骤自酯23-1所制得的，具有54％产量。具有熔点158-160℃的无色固体。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.01(12H，s，7，9-CH₃)；1.19(1H，d，14Hz，8-CH)，1.27(1H，d，14Hz，8-CH)；1.45(4H，s，6，10-CH₂)；2.02(2H，t，7.5Hz，4-CH₂)；2.36(2H，t，7.5Hz，3-CH₂)及5.8ppm(1H，br s，NH)。

f)7，7，9，9-四甲基-1-氮杂螺[4.5]癸烷盐酸盐(3-1)

其是根据实施例26d所述的步骤自螺内酰胺24-1所制得的，具有76％产量。无色固体。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.01(6H，s，7，9-CH₃)；1.08(6H，s，7，9-CH₃)；1.23(1H，d，14Hz，8-CH)，1.35(1H，d，14Hz，8-CH)；1.8(4H，br s，6，10-CH₂)；2.0-2.2(4H，m，3，4-CH₂)；3.3(2H，br s，2-CH₂)及9.4ppm(2H，br s，NH₂ ⁺)。

合成实施例28

8，8，10，10-四甲基-1-氮杂螺[5.5]十一烷盐酸盐(3-2)

a)3，3，5，5-四甲基-1-(3-苯基丙基)环己醇(20-2)

其是根据实施例27a所述的步骤自酮19所制得的，具有90％产量。无色油。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.86(6H，s，3，5-CH₃)；1.19(6H，s，3，5-CH₃)；1.0-1.8(11H，m，环质子，OH及PhCH₂CH₂CH₂)；2.60(2H，t，7.5Hz，PhCH₂CH₂CH₂)及7.1-7.4ppm(5H，m，Ph)。

b)2-氯-N-[3，3，5，5-四甲基-1-(3-苯基丙基)环己基]乙酰胺(21-2)

其是根据实施例25c所述的步骤自环己醇20-2所制得的，具有37％产量。具有熔点83-85℃的无色固体。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.89(6H，s，3，5-CH₃)；1.13(6H，s，3，5-CH₃)；0.9-1.9(8H，m，4-CH₂，2，6-CH及PhCH₂CH₂CH₂)；2.15(2H，d，14.5Hz，2，6-CH)；2.56(2H，t，8Hz，PhCH₂CH₂CH₂)；3.93(2H，s，CH₂Cl)；6.5(1H，br s，NH)及7.1-7.4ppm(5H，m，Ph)。

c)4-{1-[(2-氯乙酰基)氨基]-3，3，5，5-四甲基环己基}丁酸(22-2)

其是根据实施例26a所述的步骤自酰胺21-2所制得的，具有74％产量。具有熔点140-141℃的无色固体。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.91(6H，s，3，5-CH₃)；1.15(6H，s，3，5-CH₃)；0.9-1.8(8H，m，4-CH₂，2，6-CH，OCCH₂CH₂CH₂)；2.17(2H，d，14.2Hz，2，6-CH)；2.33(2H，t，7.2Hz，OCCH₂CH₂CH₂)；3.97(2H，s，CH₂Cl)及6.6ppm(1H，br s，NH)。

d)4-{1-[(2-氯乙酰基)氨基]-3，3，5，5-四甲基环己基}丁酸乙酯(23-2)

其是根据实施例26b所述的步骤自酸22-2所制得的，具有98％产量。无色油。1H-NMR(CDCl₃ TMS)δ：0.91(6H，s，3，5-CH₃)；1.14(6H，s，3，5-CH₃)；1.25(3H，t，7Hz，CH₃CH₂O)；0.9-1.8(4H，m，4-CH₂，2，6-CH，OCCH₂CH₂CH₂)；2.18(2H，d，15Hz，2，6-CH)；2.26(2H，t，8.4Hz，OCCH₂CH₂CH₂)；3.95(2H，s，CH₂Cl)；4.13(2H，q，7Hz，CH₃CH₂O)及6.52ppm(1H，br s，NH)。

e)8，8，10，10-四甲基-1-氮杂螺[5.5]十一烷-2-酮(24-2)

其是根据实施例26c所述的步骤自酯23-2所制得的，具有76％产量。具有熔点126-128℃的无色固体。1H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.01(6H，s，8，10-CH₃)；1.09(6H，s，8，10-CH₃)；1.19及1.30(两者均1H，d，14Hz，9-CH₂)；1.39及1.46(两者均2H，d，14Hz，7，11-CH₂)；1.63-1.90(4H，m，4，5-CH₂)；2.33(2H，t，6H，3-CH₂)及5.8ppm(1H，br s，NH)。

f)8，8，10，10-四甲基-1-氮杂螺[5.5]十一烷盐酸盐(3-2)

其是根据实施例26d所述的步骤自螺内酰胺24-2所制得的，具有45％产量。无色固体。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：1.01(6H，s，8，10-CH₃)；1.09(6H，s，8，10-CH₃)；1.0-2.1(12H，m，3，4，5，7，9，11-CH₂)；3.1(2H，br s，2-CH₂)及9.1ppm(2H，br s，NH₂ ⁺)。

合成实施例29

8，10，10-三甲基-6-氮杂三环[6.3.1.0^1，6]十二烷盐酸盐(2)

a)8，10，10-三甲基-6-氮杂三环[6.3.1.0^1，6]十二烷-5-酮(25)

其是根据实施例20b所述的步骤自螺内酰胺24-2所制得的，具有20％产量。油。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.95(3H，s，10-CH₃)；1.00(3H，s，10-CH₃)；1.08(3H，s，8-CH₃)；1.20(1H，d，12Hz)；1.25-1.70(5H，m，9，11，12-CH₂)；1.75-1.90(4H，m，2，3-CH₂)；2.25-2.40(2H，m，4-CH₂)；3.14及3.43(两者均1H，d，12.0HZ，7-CH₂)。

b)8，10，10-三甲基-6-氮杂三环[6.3.1.0^1，6]十二烷盐酸盐(2)

其是根据实施例26d所述的步骤自内酰胺25所制得的，具有36％产量。无色固体。¹H-NMR(CDCl₃，TMS)δ：0.85-2.45(12H，m，2，3，4，9，11，12-CH₂)；0.99(3H，s，10-CH₃)；1.05(3H，s，10-CH₃)；1.19(3H，s，8-CH₃)；3.12(2H，m，5-CH₂)；3.20-3.75(2H，m，7-CH₂)及9.05ppm(1H，br s，NH⁺)。

B.治疗实施例

以下的治疗实施例例示本发明，而不是限制其范围。

治疗实施例1：美金刚胺与乙酰胆碱酯酶抑制剂组合在大规模的人类临床试验中具有好的耐受性并且有效

本发明者在德国医师之中进行研究。该研究选取158位平均74岁的痴呆患者，以美金刚胺与AChEI联合治疗。将美金刚胺以广泛的日剂量(5-60毫克/天，平均20毫克/天)处方及与AChEI组合(在84％的情况中是多奈哌齐)。在平均4个月的观察期内以稳定剂量的组合疗法对几乎所有的患者(98％)都被很好地耐受。大部分的患者未经历任何严重不良事件或血液化学上的变化(分别是96％及80％)；报导的所有6起不良事件已解决了，没有后遗症也未间断任何一种药物。大部分患者的整体临床状态得以改善(54％)或维持稳定(39％)。这些数据显示美金刚胺与AChEI的共同药物治疗是安全的、有好的耐受性并且有效。

方法

在研究中使用以下的药物：美金刚胺(AXURA，德国法兰克福的Merz Pharmaceuticals GmbH，从前的品牌名称是AKATINOL)；多奈哌齐(ARICEPT，德国法兰克福的Eisai GmbH及卡斯鲁赫的PfizerGmbH)；利伐斯的明(EXELON，德国纽伦堡的Novartis Pharma GmbH)；他克林(COGNEX，法国巴黎的OTL Pharma)。

该研究根据德国的适用管理法律进行。该研究是经由德国的私人执业医师及记忆门诊执行的。要求的资料包括基本的人口统计学、给药、整体的临床分级、耐受性、实验室化学及相伴的药物治疗的改变。只收集对两种药物调整直至达到其各自最佳剂量及保持至少4周稳定日剂量的患者的数据。以共同的药物治疗开始对大部分患者为期4个月的观察期。以分析临床印象及变化之前/之后评价的方式做统计评估在观察间期开始及结束时收集的变量。

在调查的158位患者之中，81位(51％)是女性及69位(44％)是男性；8位患者没有性别资料。年龄范围从26至100岁，平均74岁。对26岁的患者治疗未进一步指明的器质性认知缺损。诊断[也以ICD10代号表示]包括阿尔兹海默氏病(AD)[F 00及G 30](121位患者，77％)、血管性痴呆[F 01](14位患者，9％)、未指明的痴呆[F 03](14位患者，9％)、退化性神经系统疾病[G 31](2位患者，1％)及继发于其它疾病的痴呆[F 02及G 04](2位患者，1％)；未指明5位患者的诊断(3％)。许多患者未表现出任何并存的疾病(43位患者，27％)，但是普通报导有循环系统的疾病(58位患者，37％)。

美金刚胺的日剂量是以从5至60毫克为范围；中值剂量是如建议的20毫克/天(72位，46％)。显然最多的患者(132位，84％)同时接受多奈哌齐；利伐斯的明及他克林是给药的其它AChEI；当时加兰他敏未完全上市，执业医师未指明2位患者的AChEI(表1)。

表1：美金刚胺及AChEI的日剂量

美金刚胺(毫克/天)	n(％)	AChEI	n(％)	剂量(毫克/天)/范围
美金刚胺(毫克/天)	n(％)	AChEI	n(％)	剂量(毫克/天)/范围	5	7(4)	多奈哌齐	132(84)	10.0/2.5-10
10	47(30)	利伐斯的明	23(15)	4.5/1.5-12	5	7(4)	多奈哌齐	132(84)	10.0/2.5-10
10	47(30)	利伐斯的明	23(15)	4.5/1.5-12	15	13(8)	未指明	2(1)	10.0/10-10
20	72(46)	他克林	1(＜1)	160.0/160-160	15	13(8)	未指明	2(1)	10.0/10-10
20	72(46)	他克林	1(＜1)	160.0/160-160	30	12(8)
40	6(4)				30	12(8)
40	6(4)				60	1(＜1)

AChEI的剂量是中值。缩写n＝患者数目

在固定做统计分析的参考日期，以中值计算治疗期；美金刚胺已给药0.5年中值(0.09-7.27，n＝157)及AChEI的中值为0.6年(0.1-4.99，n＝141)。提供140位患者以美金刚胺及AChEI治疗的开始顺序(表2)。

表2：治疗顺序

治疗顺序	n(N＝140)	％
治疗顺序	n(N＝140)	％	美金刚胺在AChEI之后	70	50
同时开始美金刚胺及AChEI	11	8	美金刚胺在AChEI之后	70	50
同时开始美金刚胺及AChEI	11	8	美金刚胺在AChEI之前	59	42

结果

医师对共同的药物治疗的耐受性的评价是：对大部分的患者而言“非常好”(89位，56％)及对大部分其余的患者而言“好”(66位，42％)。有2位没有耐受性评价及1位患者的耐受性被判断为“差”。在158位接受联合治疗的患者之中，有6位经历不良事件，所有的不良事件已解决，没有后遗症及未间断药物。6起不良事件中有5起在美金刚胺与多奈哌齐的联合治疗期间报导，而一起发生在美金刚胺与利伐斯的明的共同药物治疗之后。在这6起不良事件之中，2起被视为可能与美金刚胺有关(严重程度轻)，1起被视为可能与多奈哌齐有关(中等严重程度)，未提供其余的原因评价。没有任何一起不良事件被评为严重或非预期的。

为了测定联合疗法的药效，记录表格包括供医师进行整体临床印象评价的4点分类等级(非常好/好/差/非常差)。对155位患者进行这种评价。大部分的患者被评为改善(84位，54％)，或稳定(60位，39％)。其余11位患者的临床状态恶化(9位，6％)或未指明其状态(2位，＞1％)。在该观察表格的非操作自由注释部分，医师常会加入关于改善的沟通能力及情绪振奋的描述。

讨论

目前有两种认可的可用于AD的治疗原则：AChE抑制作用或NMDA受体拮抗作用。鉴于影响各种神经递质系统的AD本性及来自该研究的支持数据，本发明者假设以几种方法的组合可以增强适宜的药物治疗及临床药效。在该研究之前，不知道涉及两种治疗剂的组合干预在人类中的有效性、安全性及耐受性。

AChEI促进胆碱能传递，并有数种被批准用于轻度至中度AD(Farlow等人的Arch.Neurol.，2001，58：417-422；Knapp等人的JAMA，1994，271：985-991；Mohs等人的Neurology，2001，14：481-488；Zurad，Drug Benefit Trends，2001，13：27-40)。设想美金刚胺会减低谷氨酸诱发的神经元兴奋中毒，并也在进展的AD中在症状方面有效(Winbdlad及Poritis在以上1999年的文献)。其最近获得了CPMP的肯定意见以在欧盟获得批准。先前已在德国市场以美金刚胺用于所谓的“痴呆综合征”的适应症多年，其包括阿尔兹海默氏病及其它痴呆

本发明的研究提供了对AD的第一个合物组合药物疗法，首次证明以AChEI与美金刚胺组合的有利效应。超过一半以上的调查患者由其医师评为有临床上的改进。以前从未曾发现该类型的结果。先前的治疗法只达到减缓恶化而已。本发明的疗法在某些特定的症状方面达到明显减缓的进展及在其它症状方面得以改善(即使恶化逆转)。此外，在本文提出的临床数据显示没有任何严重的不良事件或药物反应：大部分比例的患者对该组合有好的耐受性。与受控制的实验设定比较，本发明的发现是基于实际生活情况，具有显著宽的美金刚胺给药范围，在一些情况下，大大超过建议的20毫克的日剂量；另一方面，实际处方的AChEI日剂量则表现出在这些物质的剂量范围的下限端，特别是利伐斯的明。

以这些结果为激励，本发明者推论借由提供免于兴奋毒性的神经保护作用美金刚胺与AChEI组合的疗法可以减缓疾病的进展，以及通过改善谷氨酸能及胆碱能神经传递使认知表现增强(Jacobson，Evidence Based Mental Health，1999，2：112-113；Parsons等人在以上1999年的文献；Danysz等人在以上2000年的文献)。

治疗实施例2：使用细胞培养物及阿尔兹海默氏病的动物模型评估1-氨基环己烷衍生物/AChEI的组合疗法的各种参数

在人类中AD临床征象起因于对记忆、认知性能及性格关键性的脑部区域中的神经元选择性变性退化。这些神经元的机能障碍及死亡造成在其靶区域中神经突触标记数减少；神经突触联系的中断表现为智能受损，以及最终出现重度痴呆。

在脑中发现的两种蛋白质聚集体类型是AD的病理学标志：细胞内神经原纤维缠结及细胞外淀粉样蛋白斑(最新的综述参考Wong等人的Nature Neurosci.，2002，5：633-639)。缠结及蛋白斑两者均优先定位局限于皮质、海马及杏仁体。神经原纤维缠结是位于细胞体及近端树突内，以及在末梢轴突及神经突触末梢中的丝状肿胀内的包含体。微管相关蛋白τ的超磷酸化同型物(组装成可溶性差的成对螺旋状纤丝)是这些神经原纤维缠结的主要特征(Goedert等的人Curr.Opin.Neurobiol.，1998，8：619-632)。细胞外蛋白斑起因于以β-淀粉样肽(βAP)或有时以Aβ、AβP或β/A4命名的约39-43个氨基酸约4.2千道尔顿(kD)蛋白质的水平升高(参考例如Glenner及Wong，Biochem.Res.Commun.，120：885-890，1984；美国专利第4,666,829号)。分子生物及蛋白质化学分析证明βAP是更大的前体蛋白(称为β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP))的小片段。APP是一般在许多不同的细胞类型中表达的I型跨膜蛋白质，但在神经元中特别丰富。βAP单体形成寡聚物及多聚物，其组装成原纤丝及接着组装成原纤维。最终βAP原纤维沉积成神经炎或老年斑(淀粉样变)的淀粉样蛋白核心，其是还包括营养不良的轴突、星状细胞及小神经胶质细胞的复合结构。

经由三种不同的蛋白酶(称为α-、β-及γ分泌酶)切割APP产生致病的βAP肽。α-分泌酶在A β之内切割APP，产生分泌的衍生物sAPPα，其排除Aβ的形成。相对之下，β-及γ-分泌酶对APP的切割引起βAP的产生，造成淀粉样蛋白沉积作用(参考Wong等人在以上2002年的文献)。

在一些患有早发型AD的个体中，可能以常染色体显性遗传该疾病(即引起该病只需单一拷贝的突变基因)。在至少三种不同的基因中鉴定出这些突变：APP、早老素1(PSI)及早老素2(PS2)(Price等人的Annu.Rev.Genet.，1998，32：461-493；Hardy等人的Science，1998，282：1075-1079；Tanzi，Neuron，2001，32：181-184；Selkoe，ibid.，pp.177-180；Sherrington等人的Nature，1995，375：754-760；Levy-Lahad等人的Science，1995，269：973-977；Rogaev等人的Nature，1995，376：775-778)。

在FAD(家族性AD)的情况中报道的各种APP突变靠近涉及βAP形成的切割位点(参考例如Goate等人的1991，Nature，349：704-706；Harlan等人的Nature，353：844-846；Murrel等人的1991，Science，254：97-99及Mullan等人的1992，Nature Genet.，1：345-347)。APP717突变是位于近βAP的C-末端处及促进β-分泌酶活性，造成增加更长及更毒的βAP肽-βAP₄₂的分泌。认为该更长βAP₄₂肽会促使βAP聚集体及淀粉样蛋白斑的形成。APPswe突变(在βAP的N末端的双突变)会增强BACE1切割，并与βAP肽(包括βAP₄₂)水平升高有关。相对之下，在βAP肽结构域内的APP突变(例如，APP-E693Q、A692G或E693G)不会使βAP值上升，但是可能通过增加βAP寡聚物或原纤维的形成而造成淀粉样变。

PS1及PS2编码高度同源的43-至50-kD多道跨膜蛋白质，其被加工处理成稳定的N-末端及C-末端片段，其在中枢神经系统中广泛表达但丰度低)。PSI影响APP的加工(Borchelt等人Neuron，1997，19：939-945；Wong等人在以上2002年的文献)。已提出PSI基因会容纳超过80种以上不同的FAD突变(参考AD突变数据库，http：//molgen-www.uia.ac.be)，但是在以PS2-关联的家族中只发现少量的突变。PS基因中的绝大部分异常是错义突变，其引起单一氨基酸置换，通常发现其会影响分泌酶活性及增加βAP₄₂肽的产生。

其中一种目前AD的治疗策略是减低毒性βAP的水平。

有累积证据支持AChEI可以影响APP加工处理的。例如，已证明他克林会在没有任何可检测的细胞损伤或毒性的存在下减低在人类神经母细胞瘤细胞中释放分泌型式的APP、sAPPα及总βAP、βAP₄₀与βAP₄₂(Lahiri等人的Mol.Brain Res.1998，62：131-140)。

NMDA受体也与影响APP处理或受APP处理影响的信号传递级联有牵连。因此，在培养的海马神经元中，已证明sAPPα选择性抑制以NMDA介导的电流(Furukawa及Mattson，neurscience，1998，83：429-438)。本发明者及共同的研究员研究了美金刚胺(NMDA受体拮抗剂)在培养的人类神经母细胞瘤细胞SK-N-SH中对APP处理的效应。将细胞以美金刚胺(1-4μM)或媒剂处理，并使用特异性抗体通过Western免疫印迹法或ELISA测量在调理的培养基中的sAPP和βAP₄₀值及总细胞内APP值。结果显示以治疗浓度的美金刚胺(1-4μM)处理人类神经母细胞瘤细胞会引起在调理的培养基中sAPP和βAP₄₀值降低，但不会影响总细胞内APP的值。以MTT及LDH检定测定的细胞存活率及毒性不受以上浓度的美金刚胺影响。所观察到的美金刚胺所致的sAPP和βAP₄₀值的降低而不同时增加细胞的APP值提示，美金刚胺可以潜在抑制淀粉样蛋白生成(淀粉样蛋白形成)途径。因此，显示美金刚胺具有降低脑中生成原纤维的Aβ肽沉积的潜能。

本发明者还决定检测各种浓度的1-氨基环己烷衍生物(例如，美金刚胺或尼拉密山)与AChEI(例如，加兰他敏、他克林、多奈哌齐或利伐斯的明)的组合的给药对在体外的细胞培养中的各种APP衍生物(sAPPα及总βAP、βAP₄₀与βAP₄₂)的分泌及加工的影响。

适合的细胞系包括人类及动物细胞系，如人类神经母细胞瘤细胞系(例如，SK-N-SH)、人类神经胶质瘤细胞系、人类HeLa细胞、人类肾细胞系HEK-293、原代人类内皮细胞(例如，HUVEC细胞)、原代人类纤维母细胞或淋巴母细胞、原代人类混合型脑细胞(包括神经元、星状细胞及神经胶质细胞)、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞及类似细胞。根据本发明，优选使用表达APP变体或过度产生βAP的人类细胞系，例如，具有一或多个直接在βAP切割位点的N-末端的氨基酸置换的APP变体(例如，表达摧带在Swedish FAD家族中发现的双重突变[Lys⁵⁹⁵→Asn⁵⁹⁵及Met⁵⁹⁶→Leu⁵⁹⁶]的APP DNA的K293细胞，其产生比表达正常APP的细胞多约6至8倍的βAP，如在美国专利第6,284,221号所揭示)。

在体内进一步测试引起细胞培养中生成淀粉样蛋白的βAP的加工和/或分泌在治疗上有意义的减少的1-氨基环己烷衍生物及AChEI浓度，借由监控AD的转基因动物模型中的βAP值，如表达编码FAD关联的APP突变体的APP微基因的小鼠动物模型(例如，swe或717，如在例如美国专利第5,912,401号所揭示)或Borchelt等人所述的双重突变的小鼠模型(Neuron，19：939-945，1997)。后一转基因小鼠共同表达早发型家族AD(FAD)关联的人早老素1(PS1)变体(A246E)及包含与Swedish FAD血缘关联的突变的嵌合小鼠/人类APP(APPswe)。这些小鼠发生许多淀粉样蛋白沉积比表达APPSWE及野生型人类PS1的年龄匹配的小鼠早得多。编码FAD关联的APP突变的APP微基因的表达及特别是突变的人类PSI A246E与APPswe的共同表达使脑中的βAP水平上升，并且这些小鼠在海马及皮质中发生许多弥漫性βAP沉积物及蛋白斑(Calhoun等人的Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1999，96：14088-14093)。这些蛋白斑包含轴突(一些展示超磷酸化τ免疫反应性)、星状细胞及小神经胶质细胞，但是没有神经原纤维缠结的存在。为了获得具有蛋白斑及缠结两者的小鼠，可将突变的APP转基因小鼠交配表达P301Lτ突变的小鼠(Lewis等人的Science，2001，293：1487-1491)，该突变与具有帕金森氏现象的家族性额颞叶型痴呆(FTDP)关联。这些及其它的AD转基因动物模型特征为各种认知缺陷(如神经元的丧失)、学习力缺陷、在目标识别记忆方面的问题及具有交替-空间参照与工作记忆的问题(Chen等人的Nature，2000，408：975-979)。也使用这些缺陷的改善评价本发明的组合疗法的有效性(包括加合及协同效应的测定)。

特别以四组转基因动物做研究：对照组I未接受任何治疗，对照组II接受1-氨基环己烷衍生物(如美金刚胺或尼拉密山)，对照组III接受AChEI(如加兰他敏、他克林、多奈哌齐或利伐斯的明)及实验组IV接受1-氨基环己烷衍生物与AChEI的联合治疗。以限定的时间期限进行药物给药及接着进行测试，例如，(i)学习能力，(ii)记忆力，(iii)在体液中的βAP₄₀或βAP₄₂片段的水平，(iv)在脑内的β-淀粉样蛋白斑的量及(v)在脑内的超磷酸化τ免疫反应性。在实验组IV中前两项指标的任一项的改善及后三项指标的任一项的降低(与对照组比较)作为本发明的组合疗法有效性的衡量指标。进一步使用转基因动物模型测定最适的给药剂量、效力、毒性及与本发明的组合疗法有关的副作用。

治疗实施例3：在健康年轻的实验对象引入中美金刚胺与ARICEPT的药物动力相互作用的研究

在人类口服之后，已显示美金刚胺会完全吸收(约100％的绝对生物利用率)。在投予¹⁴C美金刚胺之后，回收84％的剂量，主要是在尿中。在口服10至40毫克美金刚胺的剂量之后，达到最大的血浆浓度的时间(T_max)是在介于3至8小时之间的范围内。在单一的20毫克口服剂量之后，峰值血浆浓度(C_max)是在介于22至46毫微克/毫升之间的范围内。美金刚胺的AUC及C_max值在5至40毫克的剂量范围内随剂量而成比例增加。美金刚胺的半衰期是约60-80小时。在体外的研究证明在美金刚胺与经由细胞色素P450系统代谢的药物间低的药物相互作用潜在可能性。

多奈哌齐HCl(ARICEPT)是基于哌啶的特异性乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂，其目前在美国在其它地方批准用于治疗轻度至中度阿尔兹海默氏病(AD)的药物。在口服给药之后多奈哌齐的药物动力学与剂量成线性比例。在健康的试验个体服用5毫克/天剂量的多奈哌齐28天之后，约3小时获得峰值血浆浓度(Cmax＝34.1毫微克/毫升)(Tiseo等人的Br.J.Clin.Pharmacol.，46(Suppl.1)：13-18，1998)。多奈哌齐具有约70小时的半衰期。

本发明者测定(i)美金刚胺与多奈哌齐之间在体内是否有药物动力学相互作用，及(ii)共同给药美金刚胺是否影响多奈哌齐抑制AChE活性的能力。

研究设计

试验群体：

在书面知情同意之后进行该试验。登记24位健康年轻的试验个体(16位男性及8位女性)。平均年龄、体重及身高分别是27.6岁(18-35岁)、73.6公斤及171.4公分。6位白种人及18位非白种人(黑人)。登记及完成需要一般的体检、生命征象(舒张压及收缩压、脉搏速度、呼吸速度、体温及体重)、血清化学、血液分析、尿分析、阴性抗HIV1及2、HbsAg、抗HCV及VDRL/RPR。女性必须在研究开始之前呈阴性血清验孕试验及在第1天呈阴性尿验孕试验，并在筛选之前使用医学上接受的生育控制方法(不包括口服避孕药)至少30天及必须在整个研究期间持续使用。试验个体不抽烟(在过去2年内不吸烟)。

19位完成研究。第8、12及21位退回同意书，第9位因不依从而排除，以及第22位未能随访。

研究步骤

试验个体在研究的第1天接受一片10毫克美金刚胺片剂。在第1天开始获得美金刚胺的血液取样分布，然后经14天的洗除期。试验个体在第15天开始每天一次服用1片5毫克ARICEPT药片，服用7天。试验个体在第22天开始每天一次服用2片5毫克ARICEPT药片(10毫克多奈哌齐)，服用22天。在第42天，在多奈哌齐剂量之前，先抽取试验个体的血液。获得用于多奈哌齐浓度的药物动力学分布及红细胞(RBC)的AChE活性的血液样品。在第43天，试验个体在早上与最后的10毫克多奈哌齐剂量一同接受10毫克美金刚胺。在第43天开始获得用于多奈哌齐和美金刚胺浓度的药物动力学分布及RBC的AChE活性的药效学测定血液样品。

血液样品的收集及处理

在药物动力学及药效学分析的研究期间收集43个血浆样品。在第1天给药之后收集为了测定美金刚胺浓度的血液样品，于0时(剂量前)以及给药后的1、2、3、4、6、8、12、24、48、72、96、120、144、168及192小时。在第15、40及41天的0时自每一位收集为了测定剂量前的多奈哌齐浓度的血液样品。在第42天的0时(剂量前)、在剂量后1、2、3、4、6、8及12小时收集了为了测定多奈哌齐浓度的血液样品。在第43天的0时(剂量前)与在剂量后1、2、3、4、6、8、12及24小时收集了为测定多奈哌齐和美金刚胺浓度的血液样品。在第43天给药后，在剂量后48、72、96、120、144、168及192小时收集为了测定美金刚胺浓度的额外的血液样品。也使用在第15天(0时)、第42天(0、1、2、3、4、6、8及12小时)及第43天(0、1、2、3、4、6、8、12及24小时)抽取的血液样品测定在RBC中的AChE活性。

对美金刚胺和多奈哌齐的血液样品的处理：将约7毫升血液直接收集在预冷的7毫升或10毫升绿盖Vacutainer试管中(包含肝素钠)。自抽取时间起30分钟之内将血液样品在4℃下以2,500g离心10分钟，并收获血浆及转移至预冷的编号的聚丙烯试管中。接着将样品在异丙醇/干冰浴中急速冷冻及贮存在-70℃的冷冻器中。

对RBC的AChE活性的血液样品的处理：自第15天、第42天及第43天收获血浆之后留存的血液残余物取出血沉棕黄层部分(留存在RBC与血浆之间的离心血液的上层部分)并弃去。将留存的RBC放入带螺旋帽的聚丙烯试管中，在异丙烯醇浴中急速冷冻及贮存在-70℃的冷冻器中。必须将RBC样品在血液抽取20分钟之内冷冻。

分析步骤

美金刚胺

使用高效液相色谱分离作用使用质谱检测法(LC/MS/MS)测量美金刚胺血浆浓度。使用[²H₆]美金刚胺内标。将血浆样品以70微升的0.01N盐酸酸化。加入0.5M碳酸氢钠缓冲液，并将化合物以乙酸乙酯萃取。将有机层在真空下及室温下蒸发。在流动相中重组之后分析干残余物。将重组的样品的组分在Zorbax SBC8柱(4.6×150微米，3，5克)上分开及以具有阳离子模式的选择的反应监控(SRM)的大气压化学电离法(APCI)检测。SRM分别使用m/z 180→163及m/z 186→169的前体阳产物离子监测美金刚胺及其内标。美金刚胺及[²H₆]美金刚胺的质子化分子离子是用于SRM模式的前体离子。美金刚胺产物离子与其内标准的峰高度比是用于定量的反应。对人类血浆中的美金刚胺质量控制样品的精密度及准确度分别是在7.7％之内及在介于0.4至6.9％之间的范围内。定量分析的下限是0.5毫微克/毫升。

多奈哌齐

用于测定在人类血浆中的多奈哌齐的分析方法包含液体/液体萃取作用及LC/MS/MS。

乙酰胆碱酯酶抑制测定

使用放射酶学测定法测定在红细胞(RBC)中的AChE活性及测定在RBC中多奈哌齐对AChE活性的抑制。将等份的对照及研究样品RBC匀浆液与[³H]乙酰胆碱碘化物培育，其被RBC样品中的AChE水解。加入氯乙酸终止酶反应，并将水解产物[³H]乙酸盐萃取至液体闪烁混合液中及计数。以每分钟的计数为基准计算AChE活性(每分钟水解的乙酰胆碱毫微摩尔数)。将在第15天(在第一次服用多奈哌齐之前)测量的活性设定成100％活性。

药物动力学及药效学数据分析

药物动力学分析

在单独投予单一剂量的美金刚胺及与多奈哌齐组合给药之后，自美金刚胺的血浆浓度测定以下的参数：在血浆浓度对时间曲线下的面积(AUC_0-t及AUC_0-∞)，最大的血浆浓度(C_max)，最大的血浆浓度的时间(T_max)，消除半衰期(T_1/2)，平均停留时间(MRT)，口服清除(CL/F)及表观分布体积(Vz/F)。

在单独的多次多奈哌齐剂量及与美金刚胺组合给药之后，自血浆多奈哌齐浓度数据测定以下的参数：C_max，T_max，AUC_0-24及CL/F。

以观察确定美金刚胺及多奈哌齐的最大血浆浓度(C_max)及最大浓度的时间(T_max)。

药效学分析

在基线(在多奈哌齐之前)及在单独的多奈哌齐(第42天)和与美金刚胺(第43天)给药之后测定RBC的AChE活性。自AChE活性数据测定以下的药效学参数：A_max，A_min，AUC_A，抑制％，I_max及AUC_I。

在第一次的多奈哌齐剂量之前，在第15天测量的AChE活性代表基线活性值并设定成100％活性。

A_max是最大的AChE活性，表示为占在第42和43天的0-24期间观察到的基线(对照)的百分比。

A_min是最小的AChE活性，表示为占在第42天及第43天的0-24小时间隔期间观察的基线的百分比。

AUC_A是从0-24小时在AChE活性(基线的％)对时间的曲线下的面积。

抑制％是多奈哌齐对AChE活性的抑制，以自剂量前值的改变的百分比表示。

I_max是在第42天及第43天的0-24小时间隔期间观察的最大的抑制百分比。

AUC_I是使用线性梯形法则计算的在抑制％对时间曲线下的面积。

统计评估

未完成研究的实验个体不纳入药物动力学及药效学参数的评估中。

使用方差分析(ANOVA)进行在治疗之间(组合药物对单独的药物)关于所有的药物动力学及药效学参数的统计比较，除了T_max之外。T_max参数用Wilcoxon检验进行比较。

对以下的原始的药物动力学及药效学参数构建两个单向90％置信区间，评估在美金刚胺与多奈哌齐之间的药物动力学及药效学相互作用的可能性：

在美金刚胺与多奈哌齐伴随给药对单独的美金刚胺给药之后的美金刚胺的C_max、AUC_0-t及AUC_0-∞参数。

在多奈哌齐与美金刚胺伴随给药对单独的多奈哌齐给药之后的多奈哌齐的C_max及AUC_0-24参数。

在多奈哌齐与美金刚胺伴随给药对单独的多奈哌齐给药之后的AChE I_max及AUC_I参数。

PK及PD参数的统计推论是以对数变换值为基准。T_1/2MRT与T_max的比较是以原始数据为基准。

如果对数变换的原始PK及PD参数的90％置信区间是在80％-125％的范围内，则断定在单一剂量美金刚胺与多次剂量多奈哌齐之间没有药物动力学及药效学相互作用。

以在第40天、第41天及第42天的剂量前多奈哌齐浓度的线性回归进行对多奈哌齐稳态的评估。如果回归线斜率的p值大于0.05，则断定达到稳态。

结果

暴露于美金刚胺及多奈哌齐的程度

药物	实验个体数	总实验对象天数	平均天数
药物	实验个体数	总实验对象天数	平均天数	美金刚胺	24	43	1.8
多奈哌齐	22	601	27.3	美金刚胺	24	43	1.8

不良事件

没有任何实验个体由于不良事件而中断研究。没有任何严重的不良事件的报导。24位实验个体中有20位(83.3％)提出总计27项不良事件。大部分的不良事件是发生在实验个体单独接受多奈哌齐时。事件的严重程度通常是轻度至中度。最常见的不良事件(即发生在3或更多位实验个体中)是头痛、恶心、疲劳、虚弱、眩晕、腹泻、呕吐及头晕。

美金刚胺药物动力学参数

在以10毫克口服药片的单一剂量给药之后美金刚胺的吸收速度是在6.5小时达到峰值血浆浓度的适当速度，与或不与多奈哌齐一起均如此。当美金刚胺单独给药时(12.8毫微克/毫升)及在与多奈哌齐共同给药期间(13.0毫微克/毫升)，美金刚胺的最大浓度(C_max)相似。在单独或与多奈哌齐一起投予美金刚胺之后，终半衰期、MRT及分布体积值相似。在美金刚胺与多奈哌齐共同给药期间平均口服美金刚胺清除率降低5.6％。比较对数变换的C_max、AUC_0-t及AUC_0-∞的90％置信区间是在80-125％的范围内，表明10毫克多奈哌齐的多次日给药不明显改变单一10毫克美金刚胺剂量的吸收速度或程度。

多奈哌齐药物动力学参数

以在第40天、第41天及第42天的剂量前的多奈哌齐浓度的线性回归分析评估在多次的多奈哌齐剂量给药之后稳态的达到。以回归线斜率的p值为基准，在总共15位实验个体达到稳态(p＞0.05)，但是有4位完成研究的实验个体未达到(p＜0.05)。实验个体1、5、6及17具有明显的非零斜率(p＜0.05)。在每日一次10毫克多奈哌齐的多次给药之后多奈哌齐的吸收速度是不与或与美金刚胺分别在3.4小时及3.3小时达到峰血浆浓度的适当速度。与单独的多奈哌齐相比，在多奈哌齐与美金刚胺一起给药之后多奈哌齐的平均最大浓度(C_max)增高13％。当多奈哌齐与美金刚胺一起给药时，平均AUC_0-24比其单独给药时增加9％及CL/F降低15％。

对数变换的AUC_0-24的90％置信区间是在80-125％的范围内，显示10毫克美金刚胺的单一剂量给药不改变多次剂量多奈哌齐的吸收程度。以对数变换的C_max的90％置信区间稍微超出80-125％的范围(104.2-126.5％)。

在从统计比较中删除4位(实验个体1、5、6及17)未达到稳态(p＜0.05)的多奈哌齐药物动力学参数数据之后，比较对数变换的C_max及AUC_0-24的90％置信区间是在80-125％的范围内。

AChE测量

距离基线值的AChE活性的最大抑制百分比(I_max)分别平均是77.8％(单独的多奈哌齐)及81.1％(多奈哌齐与美金刚胺一起)。以对数变换的I_max及AUC_I的90％置信区间是在80-125％的范围内，显示与单独的多奈哌齐给药相比，多奈哌齐与美金刚胺的共同给药不使对RBC的AChE活性的抑制作用发生明显的改变。

结论

在该研究中发现单独及与10毫克多奈哌齐的多次日剂量组合的10毫克美金刚胺的单一剂量是安全的并被较好地耐受。在美金刚胺与多奈哌齐之间未发现任何药物动力学或药效学相互作用，提示这两种药物可安全地共同给药。

治疗实施例4：评估包含美金刚胺与多奈哌齐(ARICEPT)的组合疗法治疗阿尔兹海默氏病的治疗潜能

对患有阿尔兹海默氏病(AD)的患者的治疗目标为改善或至少减缓记忆力和认知的丧失及维持独立的功能。对AD的症状治疗集中于增加胆碱能神经传递，因为胆碱能途径的恶化发生较早并与记忆力减弱有相互关系。目前推准的用于轻度-中度AD的药物治疗法包括多种AChEI(他克林、多奈哌齐、利伐斯的明及加兰他敏)，其通过抑制AChE对乙酰胆碱的代谢作用而增加胆碱能神经传递。但是，目前在美国没有任何经批准用于更重度的AD患者的治疗。对更进展阶段的AD有效的药物疗法(减缓与疾病有关的认知、功能性及整体恶化的速度)不仅可改善患者状况及提高生活质量，还可以使照顾者得到改进的生活品质及通过延迟安置到疗养院而降低疾病的经济冲击。

美金刚胺是先前在德国及41个其它国家市场上销售用于治疗痴呆、肌强直及帕金森氏病的药物，并于最近在所有的欧盟国家被批准用于治疗中重度至重度AD。目前在美国唯一批准可用于轻度至中度AD的治疗是以AChEI的单一疗法。美金刚胺(一种适度亲和的非竞争性NMDA受体拮抗剂)提供用于该疾病治疗的额外治疗选择。

研究设计

本研究旨在评估包含美金刚胺及多奈哌齐(ARICEPT)的联合疗法治疗AD的医疗潜能。具体而言，对可能患有中度至重度的阿尔兹海默氏型痴呆及也接受同时以稳定剂量的多奈哌齐治疗的门诊患者评价美金刚胺的安全性及药效(相对于安慰剂)。

该研究是多中心、随机、双盲、平行臂及设安慰剂对照的研究。入选的标准是：以NINCDS-ADRDA标准诊断可能的AD，5至14的迷你心智状态测量表评分(MMSE)，符合可能的AD诊断的MRI或CT扫描及过去6个月的每日多奈哌齐疗法(以稳定的剂量用于过去3个月)。

该研究是由1周的单盲安慰剂筛选期及接着24周的双盲治疗所组成的。除了其多奈哌齐疗法之外，将患者随机以每天20毫克的美金刚胺(10毫克b.i.d.；经4周滴定)或安慰剂治疗6个月。为了评估治疗痴呆认知的效应，对患者进行重度缺损组合测验(SIB)(Schmitt等人的Alzheimer Dis.Assoc.Dis.，11[Suppl.2]：S51-S56，1997)，这是一种具有确立的敏感性及有效性的基于表现的客观认知评价手段；及测量日常功能的经修改的阿尔兹海默氏病合作研究表单-日常作息活动(ADCS-ADL)(Galasko等人的Alzheimer Dis.Assoc.Dis.，11[Suppl.2]：S33-S39，1997)。也进行医师的整体评价-基于临床人员面询的印象改变量表Plus(CIBIC-Plus))(Schneider等人的Alzheimer Dis.Assoc.Dis.，11[Suppl.2]：S22-S32，1997)。

研究群体

在该研究中登记403位患者，双盲治疗组中的每一组(美金刚胺或安慰剂)包括约200位患者。研究群体是由至少50岁的男性及女性门诊患者所组成的。AD的严重度是以迷你心智状态测量表评分(MMSE)(≥5及≤14)为基准评价为中度至重度的范围。在筛选就诊期间，合格的患者具有正常的体检结果、实验室评估及ECG(或者不正常的发现可判定成不具临床意义)。所有合格的患者在至少过去6个月每日接受多奈哌齐(ARICEPT)治疗并且过去3个月接受稳定的剂量(5-10毫克/天)。

研究步骤

药效评价

以基线开始在每一次临床就诊时进行重度缺损组合(SIB)测试。SIB测试评估认知，即记忆力、语言、行为、定向力及注意力。试验以0-100分评分(100分是最差的结果)。

使用AD合作研究-日常作息活动(ADCS-ADL)调查表衡量研究的实验个体的功能能力。其是由适合于患有中度至重度痴呆患者的选自完整42项的调查表中的19项所组成。Galasko等人的AlzheimerDisease and Associated Disorders 11[Suppl.2]：S33，1997。以基线开始在每一次临床就诊时进行ADCS-ADL。

基于临床人员面询的改变印象量表-Plus版本(CIBIC-Plus)是经由不了解作试验方案的一部分所进行的所有其它的心理测验分数的临床人员对患者及照顾者进行独立、综合面询而得到的整体活动评判分级。使用来自基线的结果做参考，临床人员在第4周、第8周、第12周、第18周及第24周结束时(或在早期终止时)面询患者及照顾者，获得“改变印象”评级。该量表格式是来自阿尔兹海默氏病合作研究-临床人员整体改变印象(ADCS-CGIC)(Schneider等人的Alzheimer′sDisease and Associated Disorders，1997，Vol.11(2)：S22-S32)。

设计痴呆资源利用(RUD)评价负责来评估AD患者的照顾者的照顾负担(Wimo等人在以伦敦的Wiley出版社由Wimo等人编辑的TheHealth Economics of Dementia中的评估在抗痴呆药物试验中的健康看护者的资源利用及照顾者时间)。该评价是由对患者的照顾者的结构式面询所组成的。RUD具有两部分：A部分是在基线进行的问卷及B部分是随访后续的问卷。除了基本的人口统计学资料之外，RUD询问照顾者回想自先前的问卷以后曾发生的重大健康事件。也探究对患者所花费时间的变化，照顾者工作状态的变化及健康护理成本的变化。以基线及在第24周结束时(或在早期终止时)进行RUD。

设计功能评价分期(FAST)评价患有AD的患者的渐进式功能恶化(Reisberg，Psychopharmacol.Bull.，24：653-659，1988)。其评估患者进行必要的日常作息活动的能力。将FAST分成从“正常”(阶段1)至“严重”(阶段7)的7个主要的阶段。进一步将阶段6及7再分成11个亚阶段(6a至6e及7a至7f)。每一个阶段基于功能性能力的特定缺陷。以基线及在第24周结束时(或在早期终止时)进行FAST。

老年患者的行为分级量表(BGP)是由照顾者完成的观察者分级的量表。该量表改编自Stockton Geriatric Scale，并证明是衡量患有痴呆的老年患者的功能及行为紊乱的可信赖及有效的方法(Diesfeldt，Gerontologie，11：205-212，1980)。该量表是由35项所组成的。以基线及在第24周结束时(或在早期终止时)进行BGP。

研究用药物治疗及给药方案

以外观相同的膜包衣片供给美金刚胺(5毫克药片)及安慰剂药物治疗。在基线分发给合格患者双盲的药物治疗。在第1周的治疗期间，对患者随机进行积极治疗，接受5毫克/天的美金刚胺，接着在第2周期间接受10毫克/天的美金刚胺及在第3周期间接受15毫克/天的美金刚胺。在第4周开始，每日的药物治疗由4个安慰剂药片或4个美金刚胺药片所组成。以第4周的双盲治疗开始，给予20毫克/天的靶剂量(10毫克一天两次)及持续整个研究期间。在整个双盲治疗期间，患者继续每日服4个药片的药物治疗。

统计评估

主要的药效参数是在第24周SIB及ADCS-ADL调查表分数自基线的改变。

二级药效目标是比较美金刚胺相对于安慰剂的药效。参数是在第24周的CIBIC-plus等级。

使用协方差的双向分析(ANCOVA)以主要的药效参数进行在美金刚胺与安慰剂组之间的比较。主要的药效分析集中于在第24周结束时所获得的分数，检查SIB及ADCS-ADL自基线的改变。至于CIBIC-Plus分数，将使用经修改的ridit分数的Cochran-Mantel-Haenszel统计(van Elteren检验)用于比较在美金刚胺与安慰剂组之间的分布。

所有的药效分析是基于接受至少一种研究用药物治疗剂量及具有至少一种基线后主要疗效评价的随机患者。所有的统计检验是双边的，并将p值≤0.05视为具有统计意义。在第24周使用末次观察推进法(Last Observation Carried Forward)(LOCF)对ITT群体进行主要分析。在这些分析中，在漏测值之前的末次观察值向前归咎于漏测值。使用观察实例(OC)法进行支持分析，其中只将每一次就诊时观察到的值用于分析。也在每一次就诊时使用LOCF法用于支持分析。

关于在第24周点SIB及ADCS-ADL调查表分数自基线的改变，使用协方差的双向分析(ANCOVA)进行在美金刚胺与安慰剂之间的比较，以治疗组及中心作为两个因素，并将基线分数作为共变。以就诊计算描述统计。对研究中心设对照，使用CMH检验分析CIBIC-plus分级。以就诊计算描述统计。

使用在UNIX操作系统下的SAS(6.12或更新版)进行统计分析。

结果

研究组

在37个中心除了其背景多奈哌齐(ARICEPT)治疗方案之外以10毫克b.i.d.美金刚胺(n＝202)或安慰剂(n＝201)随机分配及治疗的403位患有中度至重度AD的患者中，85％以美金刚胺治疗的患者及75％以安慰剂治疗的患者完成试验。不良事件是最常见的退出理由，接着是退回同意书。

在入选时的平均MMSE是10。在随机治疗组之间患者人口统计学特征没有任何在临床上重要的差异。

表6患者人口统计学及基线特征

	安慰剂(N＝201)	美金刚胺(N＝202)	总计(N＝403)
	安慰剂(N＝201)	美金刚胺(N＝202)	总计(N＝403)	平均年龄，岁数(SD)	75.5(8.7)	75.5(8.5)	75.5(8.6)
性别				平均年龄，岁数(SD)	75.5(8.7)	75.5(8.5)	75.5(8.6)
性别				男性人数(％)	67(33.3)	74(36.6)	141(35.0)
女性人数(％)	134(66.7)	128(63.4)	262(65.0)	男性人数(％)	67(33.3)	74(36.6)	141(35.0)
女性人数(％)	134(66.7)	128(63.4)	262(65.0)	人种
白种人数(％)	186(92.5)	182(90.1)	368(91.3)	人种
白种人数(％)	186(92.5)	182(90.1)	368(91.3)	非白种人数(％)	15(7.5)	20(9.9)	35(8.7)
基线MMSE，平均值(SD)	10.2(3.0)	9.9(3.1)	10.1(3.1)	非白种人数(％)	15(7.5)	20(9.9)	35(8.7)

药效

在第24周时，在所有三个主要的研究终点均证实与单独的多奈哌齐相比，美金刚胺/多奈哌齐的联合治疗具有在临床上及统计学上明显卓越的药效。因此，与以多奈哌齐及安慰剂治疗的患者比较，以美金刚胺及多奈哌齐治疗的患者显示在临床上及在统计学上明显改善的认知功能(SIB)(p＜0.001)(图1)，并显示日常功能(ADCS-ADL)的衰退明显较小(p＝0.028)(图2)。还在整体评价(CIBIC-Plus)上看出有利于美金刚胺/多奈哌齐的明显差异(p＝0.027)(图3)。

安全性

20毫克/天的美金刚胺(10毫克b.i.d.)与多奈哌齐的联合疗法是安全的且被较好耐受。通常治疗引出的不良事件的发生率在以美金刚胺/多奈哌齐或安慰剂/多奈哌齐治疗的患者中相似。

表7.不良事件(与美金刚胺＞3％)。5-10毫克的多奈哌齐及5-20毫克的美金刚胺的日剂量范围。每天20毫克的美金刚胺维持剂量

不良事件	多奈哌齐+美金刚胺，n＝202n ％		多奈哌齐+安慰剂，n＝201n ％
不良事件	多奈哌齐+美金刚胺，n＝202n ％		多奈哌齐+安慰剂，n＝201n ％		患有任何AE的患者	158	(78.2)	144	(71.6)
精神激动	19	(9.4)	24	(11.9)	患有任何AE的患者	158	(78.2)	144	(71.6)
精神激动	19	(9.4)	24	(11.9)	意识模糊	16	(7.9)	4	(2.0)
跌倒	15	(7.4)	14	(7.0)	意识模糊	16	(7.9)	4	(2.0)
跌倒	15	(7.4)	14	(7.0)	流感样症状	15	(7.4)	13	(6.5)
头晕	14	(6.9)	16	(8.0)	流感样症状	15	(7.4)	13	(6.5)
头晕	14	(6.9)	16	(8.0)	头痛	13	(6.4)	5	(2.5)
尿道感染	12	(5.9)	10	(5.0)	头痛	13	(6.4)	5	(2.5)
尿道感染	12	(5.9)	10	(5.0)	尿失禁	11	(5.4)	6	(3.0)
遭受的伤害	10	(5.0)	16	(8.0)	尿失禁	11	(5.4)	6	(3.0)
遭受的伤害	10	(5.0)	16	(8.0)	外周性水肿	10	(5.0)	8	(4.0)
上呼吸道感染	10	(5.0)	13	(6.5)	外周性水肿	10	(5.0)	8	(4.0)
上呼吸道感染	10	(5.0)	13	(6.5)	腹泻	9	(4.5)	17	(8.5)
高血压	9	(4.5)	3	(1.5)	腹泻	9	(4.5)	17	(8.5)
高血压	9	(4.5)	3	(1.5)	抑郁症	8	(4.0)	6	(3.0)
嗜睡	7	(3.5)	7	(3.5)	抑郁症	8	(4.0)	6	(3.0)
嗜睡	7	(3.5)	7	(3.5)	呕吐	7	(3.5)	6	(3.0)
疲劳	6	(3.0)	7	(3.5)	呕吐	7	(3.5)	6	(3.0)
疲劳	6	(3.0)	7	(3.5)	疼痛	6	(3.0)	1	(0.5)
步态异常	6	(3.0)	2	(1.0)	疼痛	6	(3.0)	1	(0.5)
步态异常	6	(3.0)	2	(1.0)	便秘	6	(3.0)	3	(1.5)
咳嗽	6	(3.0)	2	(1.0)	便秘	6	(3.0)	3	(1.5)

表8.在患有中度至重度阿尔兹海默氏病的患者中最常见的不良事件，多奈哌齐+美金刚胺相对于多奈哌齐+安慰剂的差异≥3％，与和研究的药物治疗的关系无关。5-10毫克的多奈哌齐及5-20毫克的美金刚胺的日剂量范围。每天20毫克的美金刚胺维持剂量

不良事件	多奈哌齐+美金刚胺，n＝202n ％		多奈哌齐+安慰剂，n＝201n ％
不良事件	多奈哌齐+美金刚胺，n＝202n ％		多奈哌齐+安慰剂，n＝201n ％		意识模糊	16	(7.9)	4	(2.0)
头痛	13	(6.4)	5	(2.5)	意识模糊	16	(7.9)	4	(2.0)
头痛	13	(6.4)	5	(2.5)	遭受的伤害	10	(5.0)	16	(8.0)
腹泻	9	(4.5)	17	(8.5)	遭受的伤害	10	(5.0)	16	(8.0)
腹泻	9	(4.5)	17	(8.5)	高血压	9	(4.5)	3	(1.5)

基于在服用美金刚胺及多奈哌齐的患者对服用多奈哌齐及安慰剂的患者的百分比之间一般最小3％差异，只有5种类型式的不良事件(意识模糊、头痛、遭受的伤害、腹泻及高血压)在组合疗法与多奈哌齐及安慰剂组之间具有≥3％的发生率差异。

在这些中只有3种类型的不良事件(意识模糊、头痛及高血压)，与单独的多奈哌齐比较，加入美金刚胺观察到更高的频率。这些是已知及预期的美金刚胺副作用，在＜10％范围内。至于两种不良事件(遭受的伤害及腹泻)，与多奈哌齐-美金刚胺的组合比较，多奈哌齐加上安慰剂观察到更高的频率。

整体而言，联合治疗表现出不使两种药物单独考虑时任何已知的副作用增加。此外，与美金刚胺的组合似乎降低在非常多的患者中所确立的胆碱能药物多奈哌齐典型的胃肠道副作用。已知腹泻及有时引起的大便失禁使这些严重的患者必需转送到疗养院。

因此，本发明的结果显示，基于单独投予的每一种药物的已知不良事件分布，没有发生成比例增加的不良事件的证据。相对之下，反而是AChEI的不良事件受到调制，而已知的美金刚胺不良事件基本上维持相同的性质及发生率。此外，在本实施例中所揭示的结果表明对AChEI突出的胃肠道副作用的耐受性改善，可将其归因于与美金刚胺的组合。此外，认知受益的性质及效应是新颖且意外的，并支持组合法的治疗优越性。

讨论

以上提出的结果支持对患有中度至重度AD的患者的美金刚胺疗法的安全性及药效，并论证以美金刚胺与多奈哌齐联合的治疗优于单独的多奈哌齐。在认知、日常功能及临床上的整体状态的衡量方面观察到将美金刚胺加入多奈哌齐方案的有益效应。早至随机化之后4周就会发现联合治疗的优越性，并在研究就诊的6个月结束时对所有衡量指标都很显著。以20毫克/天的剂量并与多奈哌齐伴随给予的美金刚胺在患有中度至重度AD的患者中具有安全性及好的耐受性。

结论

以美金刚胺/多奈哌齐的治疗得到相对于基线改善的认知性能，而以单独的多奈哌齐治疗则伴随持续的认知衰退。换言之，与目前使用的AD治疗(证实所有的治疗最多会减缓预期的认知衰退)比较，在本发明的研究中所揭示的联合治疗显示，美金刚胺与AChEI组合已在6个月的研究期之内产生认知的改善。对美金刚胺单一疗法也未曾观察到这些结果。因此，它们是令人惊讶及意外的。

本发明的范围不受本文所述的具体实施方案所限制。事实上，那些本领域技术人员将自以上的说明明白除了那些本文所述的之外本发明的各种修改。这些修改预期落在所附的权利要求范围内。

将本文所引用的所有专利、申请、公开出版物、试验方法、文献及其它材料并入本文以供参考。

Claims

1.一种用于治疗与中枢神经系统疾病有关的痴呆的药物产品，所述产品包含治疗有效剂量的1-氨基环己烷衍生物和乙酰胆碱酯酶抑制剂。

2.根据权利要求1的产品，其中所述的1-氨基环己烷衍生物和乙酰胆碱酯酶抑制剂的剂量各自在1至200毫克的范围内。

3.根据权利要求2的产品，其中所述的1-氨基环己烷衍生物的剂量是在10至40毫克的范围内且乙酰胆碱酯酶抑制剂的剂量是在5至24毫克的范围内。

4.根据前述权利要求中任一项的产品，其中1-氨基环己烷衍生物是通式(I)的化合物：

其中：

R^*是-(A)_n-(CR¹R²)_m-NR³R⁴，

其中，n+m＝0、1或2，

A选自直链或支链C_1-6亚烷基、直链或支链C_2-6亚链烯基及直链或支链C_2-6亚炔基，

R¹和R²独立选自氢、直链或支链C_1-6烷基、直链或支链C_2-6链烯基、直链或支链C_2-6炔基、芳基、取代的芳基及芳烷基，

R³和R⁴独立选自氢、直链或支链C_1-6烷基、直链或支链C_2-6链烯基及直链或支链C_2-6炔基，或一起形成C_2-10亚烷基或C_2-10亚烯基，或与N一起形成任选被C_1-6烷基或C_2-6链烯基取代的3-7元氮杂环烷或氮杂环烯；或者独立地R³或R⁴可与R^p、R^q、R^r或R⁸结合形成亚烷基链-CH(R⁶)-(CH₂)_t-，其中t＝0或1，亚烷基链的左侧附接于U或Y，而亚烷基链的右侧附接于N，并且R⁶选自氢、直链或支链C_1-6烷基、直链或支链C_2-6链烯基、直链或支链C_2-6炔基、芳基、取代的芳基及芳烷基；或者独立地R³或R⁴可与R⁵结合形成以式-CH₂-CH₂-CH₂-(CH₂)_t-代表的亚烷基链或以式-CH＝CH-CH₂-(CH₂)_t、-CH＝C＝CH-(CH₂)_t-或-CH₂-CH＝CH-(CH₂)_t-代表的亚烯基链，其中t＝0或1，亚烷基或亚烯基链的左侧附接于W，而亚烷基环的右侧附接于N；

R⁵独立选自氢、直链或支链C_1-6烷基、直链或支链C_2-6链烯基及直链或支链C_2-6炔基，或R⁵与其所附接的碳及相邻的环碳组合形成双键，

R^p、R^q、R^r及R⁸独立选自氢、直链或支链C_1-6烷基、直链或支链C_2-6链烯基、直链或支链C_2-6炔基、C_3-6环烷基、芳基、取代的芳基及芳烷基，或R^p、R^q、R^r与R⁸独立地可与其所附接的U或Y形成双键，或者R^p、R^q、R^r与R⁸可组合在一起代表C_2-5亚烷基或亚烯基桥，该桥可依次与R⁵组合形成另外的C_1-3亚烷基或亚烯基桥；并且

符号U、V、W、X、Y和Z代表碳原子；

或其旋光异构体、非对映异构体、多晶型物、对映异构体、水合物、在药物上可接受的盐类或上述任何物质的混合物。

5.根据权利要求4的产品，其中1-氨基环己烷衍生物选自：

1-氨基-3-苯基金刚烷，

1-氨基-甲基金刚烷，

1-氨基-3，5-二甲基金刚烷(美金刚胺)，

1-氨基-3-乙基金刚烷，

1-氨基-3-异丙基金刚烷，

1-氨基-3-正丁基金刚烷，

1-氨基-3，5-二乙基金刚烷，

1-氨基-3，5-二异丙基金刚烷，

1-氨基-3，5-二正丁基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-乙基金刚烷，

1-N-甲基氨基-3，5-二甲基金刚烷，

1-N-乙基氨基-3，5-二甲基金刚烷，

1-N-异丙基-氨基-3，5-二甲基金刚烷，

1-N，N-二甲基-氨基-3，5-二甲基金刚烷，

1-N-甲基-N-异丙基-氨基-3-甲基-5-乙基金刚烷，

1-氨基-3-丁基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3-戊基金刚烷，

1-氨基-3，5-二戊基金刚烷，

1-氨基-3-戊基-5-己基金刚烷，

1-氨基-3-戊基-5-环己基金刚烷，

1-氨基-3-戊基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3-己基金刚烷，

1-氨基-3，5-二己基金刚烷，

1-氨基-3-己基-5-环己基金刚烷，

1-氨基-3-己基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3-环己基金刚烷，

1-氨基-3，5-二环己基金刚烷，

1-氨基-3-环己基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3，5-二苯基金刚烷，

1-氨基-3，5，7-三甲基金刚烷，

1-氨基-3，5-二甲基-7-乙基金刚烷，

1-氨基-3，5-二乙基-7-甲基金刚烷，

1-N-吡咯烷并和1-N-哌啶衍生物，

1-氨基-3-甲基-5-丙基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-丁基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-戊基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-己基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-环己基金刚烷，

1-氨基-3-甲基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3-乙基-5-丙基金刚烷，

1-氨基-3-乙基-5-丁基金刚烷，

1-氨基-3-乙基-5-戊基金刚烷，

1-氨基-3-乙基-5-己基金刚烷

1-氨基-3-乙基-5-环己基金刚烷，

1-氨基-3-乙基-5-苯基金刚烷，

1-氨基-3-丙基-5-丁基金刚烷，

1-氨基-3-丙基-5-戊基金刚烷，

1-氨基-3-丙基-5-己基金刚烷，

1-氨基-3-丙基-5-环己基金刚烷，

1-氨基-3-丙基-5-苯基金刚烷

1-氨基-3-丁基-5-戊基金刚烷，

1-氨基-3-丁基-5-己基金刚烷，

1-氨基-3-丁基-5-环己基金刚烷，

其旋光异构体、非对映异构体、对映异构体、水合物、N-甲基、N，N-二甲基、N-乙基和N-丙基衍生物类及其在药物上可接受的盐类以及上述任何物质的混合物。

6.根据权利要求1-3中任一项的产品，其中1-氨基环己烷衍生物选自美金刚胺及其前药、盐类、异构体、类似物及衍生物。

7.根据权利要求1-3中任一项的产品，其中1-氨基环己烷衍生物是美金刚胺。

8.根据权利要求4的产品，其中1-氨基环己烷衍生物选自：

1-氨基-1，3，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1(反式)，3(反式)，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1(顺式)，3(顺式)，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1，3，3，5-四甲基环己烷，

1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷(尼拉密山)，

1-氨基-1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-顺式-3-乙基环己烷，

1-氨基-(1S，5S)顺式-3-乙基-1，5，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-反式-3-乙基环己烷，

1-氨基-(1R，5S)反式-3-乙基-1，5，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，

1-氨基-1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，

N-甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

N-乙基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷，

3，3，5，5-四甲基环己基甲基胺，

1-氨基-1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，

1-氨基-1，3，3，5(反式)-四甲基环己烷(轴氨基)，

3-丙基-1，3，5，5-四甲基环己胺半水合物，

1-氨基-1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己烷，

1-氨基-1，3，5-三甲基环己烷，

1-氨基-1，3-二甲基-3-丙基环己烷，

1-氨基-1，3(反式)，5(反式)-三甲基-3(顺式)-丙基环己烷，

1-氨基-1，3-二甲基-3-乙基环己烷，

1-氨基-1，3，3-三甲基环己烷，

顺式-3-乙基-1(反式)-3(反式)-5-三甲基环己胺，

1-氨基-1，3(反式)-二甲基环己烷，

1，3，3-三甲基-5，5-二丙基环己胺，

1-氨基-1-甲基-3(反式)-丙基环己烷，

1-甲基-3(顺式)-丙基环己胺，

1-氨基-1-甲基-3(反式)-乙基环己烷，

1-氨基-1，3，3-三甲基-5(顺式)-乙基环己烷，

1-氨基-1，3，3-三甲基-5(反式)-乙基环己烷，

顺式-3-丙基-1，5，5-三甲基环己胺，

反式-3-丙基-1，5，5-三甲基环己胺，

N-乙基-1，3，3，5，5-五甲基环己胺，

N-甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

1-氨基-1-甲基环己烷，

N，N-二甲基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

2-(3，3，5，5-四甲基环己基)乙基胺，

2-甲基-1-(3，3，5，5-四甲基环己基)丙基-2-胺，

2-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)乙基胺半水合物，

N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)-吡咯烷，

1-氨基-1，3(反式)，5(反式)-三甲基环己烷，

1-氨基-1，3(顺式)，5(顺式)-三甲基环己烷，

1-氨基-(1R，SS)反式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己烷，

1-氨基-(1S，SS)顺式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-3(顺式)-异丙基-环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-3(反式)-异丙基-环己烷，

1-氨基-1-甲基-3(顺式)-乙基-环己烷，

1-氨基-1-甲基-3(顺式)-甲基-环己烷，

1-氨基-5，5-二乙基-1，3，3-三甲基-环己烷，

1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

1-氨基-1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己烷，

1-氨基-1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己烷，

N-乙基-1-氨基-1，3，3，5，5-五甲基环己烷，

N-(1，3，5-三甲基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-[1，3(反式)，5(反式)-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶，

N-[1，3(顺式)，5(顺式)-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，3，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，5，5-四甲基-3-乙基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1，5，5-三甲基-3，3-二乙基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，3-三甲基-顺式-5-乙基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-[(1S，SS)顺式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，3-三甲基-反式-5-乙基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-[(1R，SS)反式-5-乙基-1，3，3-三甲基环己基]吡咯烷或哌啶，

N-(1-乙基-3，3，5，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1-丙基-3，3，5，5-四甲基环己基)吡咯烷或哌啶，

N-(1，3，3，5，5-五甲基环己基)吡咯烷，

其旋光异构体、非对映异构体、对映异构体、水合物、在药物上可接受的盐类及上述任何物质的混合物。

9.根据权利要求1-3中任一项的产品，其中1-氨基环己烷衍生物选自尼拉密山及其前药、盐类、异构体、类似物及衍生物。

10.根据权利要求1-3中任一项的产品，其中1-氨基环己烷衍生物是尼拉密山。

11.根据前述权利要求中任一项的产品，其中乙酰胆碱酯酶抑制剂是可逆型或假可逆型。

12.根据前述权利要求中任一项的产品，其中乙酰胆碱酯酶抑制剂选自加兰他敏、他克林、多奈哌齐和利伐斯的明。

13.根据前述权利要求中任一项的产品，其为单一制剂的形式。

14.根据权利要求13的产品，其中1-氨基环己烷衍生物和乙酰胆碱酯酶抑制剂与至少一种药物上可接受的载体或赋形剂组合在一起。

15.根据权利要求13或14的产品，其是用于口服给药的固体剂型。

16.1-氨基环己烷衍生物与乙酰胆碱酯酶抑制剂在制备用以延迟与中枢神经系统疾病有关的痴呆的发病或进展的药物中的用途。

17.根据权利要求16的用途，其中所述疾病是脑血管疾病或唐氏综合征。

18.根据权利要求16的用途，其中所述疾病是阿尔兹海默氏病。

19.根据权利要求16-18中任一项的用途，其中所述药物制备成用于所述1-氨基环己烷衍生物和所述乙酰胆碱酯酶抑制剂的联合给药。

20.根据权利要求16-18中任一项的用途，其中所述药物制备成用于所述1-氨基环己烷衍生物和所述乙酰胆碱酯酶抑制剂作为单一组合物的联合给药，所述组合物任选还含有至少一种药物上可接受的载体或赋形剂。

21.用于延迟与中枢神经系统疾病有关的痴呆的发病或进展的方法，包括向需要这种治疗的患者给予权利要求1-15中任一项的药物产品。

22.根据权利要求21的方法，其中所述疾病是脑血管疾病或唐氏综合征。

23.根据权利要求21的方法，其中所述疾病是阿尔兹海默氏病。

24.根据要求要求23的方法，其中1-氨基环己烷衍生物和乙酰胆碱酯酶抑制剂的量联合起来有效改善至少一项选自以下的评估：重度缺损组合测试，AD合作研究-日常作息活动调查表和基于临床人员面询的改变印象量表-Plus版本。